两性霉素B缓释微球及其制备方法

技术领域

本发明涉及药学和药剂学技术领域，特别涉及一种两性霉素B缓释微球及其制备方法。

背景技术

近年来，随着老龄化以及免疫缺陷患者，如恶性肿瘤、血液病、艾滋病、使用免疫抑制药的器官移植和自身免疫性炎性疾病患者的增加，临床真菌感染的发病率急剧增加；同时，随着新的诊断方法和技术的发展，具体包括抗原检测、聚合酶链反应、血清学诊断、CT和PET扫描、支气管镜、纵隔镜检查和电视辅助胸腔镜活检等技术的发展，肺部真菌感染的确诊率有了很大提高。由于现在临床上对于抗真菌治疗的病患需求正在逐步增加，从而寻找以往积极有效的老药(抗生素)，通过采用改变剂型和使用方式的方法，也不失为一个应对当前困境的有效方式。

两性霉素B(amphtericin B)是一种大环内酯多烯类抗真菌抗生素；此类抗生素与真菌细胞膜上的甾醇结合，损伤膜的通透性，导致真菌内钾离子、核苷酸和氨基酸等外漏，破坏正常代谢而发挥其抗菌作用，它是目前抗菌谱最广的抗真菌药物。临床上用于隐球菌、球孢子菌、荚膜组织胞浆菌、芽生菌、孢子丝菌、念珠菌、毛霉和曲霉等引起的内脏或全身感染的治疗中，市场上使用最多的产品为两性霉素B注射剂和两性霉素B脂质体注射剂，它的作用机理是：多烯类通过与真菌细胞膜上的醇结合，形成一个跨膜通道，迫使细胞漏出和死亡；但是，不论是两性霉素B注射剂，还是两性霉素B脂质体，都是通过静脉给药的，其副作用很多，会造成肝肾功能的损伤，治疗需要密切监测血肌酐、尿素氮、电解质(尤其是钾和镁)、全血细胞计数以及肝功能，应至少每周监测1次，有些患者甚至需要每日监测，患者在使用后，常常出现输液引起的发热和寒战反应。

因此，现有两性霉素B在肺部真菌感染的治疗中，存在副作用较多、给药次数较多和药物依从性效果不好的问题。

发明内容

本发明为了解决现有两性霉素B在肺部真菌感染的治疗中所存在的上述技术问题，提供了一种副作用较小、给药次数较少和药物依从性效果较好的两性霉素B缓释微球及其制备方法。

本发明的第一种技术方案：两性霉素B缓释微球，按重量份计，包括以下组分，

两性霉素B 0.1～1份，聚乳酸-羟基乙酸共聚物0.5～2份，二甲基硅油10～30份，有机溶剂10～50份，烷类固化剂500～1500份。

本发明通过添加聚乳酸-羟基乙酸共聚物，由于聚乳酸-羟基乙酸共聚物是一种可降解的功能高分子有机化合物，其既具有良好的生物相容性，还具有良好的成囊和成膜的性能，也无毒，聚乳酸-羟基乙酸共聚物能够将适量份数的两性霉素B进行包裹后成囊或成膜，每一颗被聚乳酸-羟基乙酸共聚物包裹的两性霉素B都是根据研究确定好的合适剂量，从而可以较为准确的确定作用于患者的剂量，无需多次给药，患者的药物依从性将大大增加；本发明中的两性霉素B被聚乳酸-羟基乙酸共聚物被包裹形成微球之后，就可以通过肌肉注射给药了，相比于现有静脉给药的方式，具有副作用较小和对肝肾功能的损伤较小的特点，其对由真菌引起的深层肺部感染的治疗效果较好；二甲基硅油能够增加整个缓释微球的安定性，保证缓释微球进入人体后，能够让两性霉素B以较稳定状态发挥效力；烷类固化剂能够让被聚乳酸-羟基乙酸共聚物包裹的两性霉素B较快的形成为微球状；本发明中的缓释微球由两性霉素、聚乳酸-羟基乙酸共聚物、二甲基硅油、有机溶剂和烷类固化剂按照相应份数的组分制成，保证最终制成的两性霉素B缓释微球对治疗肺部真菌感染具有更佳的药效。

作为优选，按重量份计，包括以下组分，

两性霉素B 0.3～0.8份，聚乳酸-羟基乙酸共聚物0.8～1.6份，二甲基硅油15～25份，有机溶剂15～40份，烷类固化剂800～1300份。

作为优选，按重量份计，包括以下组分，

两性霉素B 0.4～0.6份，聚乳酸-羟基乙酸共聚物1～1.2份，二甲基硅油20～23份，有机溶剂25～33份，烷类固化剂1000～1100份。

作为优选，所述聚乳酸-羟基乙酸共聚物由乳酸和羟基乙酸聚合形成。乳酸和羟基乙酸均为单体，能够较为稳定高效的聚合后制成聚乳酸-羟基乙酸共聚物。

作为优选，所述聚乳酸-羟基乙酸共聚物中乳酸和羟基乙酸的质量比为75:25。也就是聚乳酸-羟基乙酸共聚物中乳酸的占比为75％，所述羟基乙酸的占比为25％；该种质量比的乳酸和羟基乙酸，才能达到最快速和最充分制成聚乳酸-羟基乙酸共聚物的效果。

作为优选，所述烷二甲基硅油的粘度为200cs～5000cs。更优选，所述烷二甲基硅油的粘度为500cs～3000cs。更优选，所述烷二甲基硅油的粘度为1000cs～2000cs。合适粘度范围的二甲基硅油能够更好的保证整个缓释微球的安定性，保证缓释微球进入人体后，能够让两性霉素B以较稳定状态发挥效力。

作为优选，所述烷二甲基硅油的粘度为500cs、1000cs、350cs、200cs或5000cs中的一种。

作为优选，所述有机溶剂为二氯甲烷、乙醇、乙酸乙酯或丙酮中的一种或多种。选定的有机溶剂能够将聚乳酸-羟基乙酸共聚物充分容易，从而让溶解后的聚乳酸-羟基乙酸共聚物能够快速的在两性霉素B表面成囊或成膜。

作为优选，所述烷类固化剂为八甲基环四硅氧烷、正庚烷或花生油中的一种或多种。

本发明的第二种技术方案：两性霉素B缓释微球的制备方法，包括以下步骤，

(S01)称取一定量的聚乳酸-羟基乙酸共聚物，置于有机溶剂中溶解；

(S02)称取一定量的两性霉素B，置于步骤(S01)的溶液中；

(S03)用剪切机在一定速度下将步骤(S02)中的混合液乳化；

(S04)在步骤(S03)乳化后的混合液中加入一定量的二甲基硅油，再进行搅拌；

(S05)将步骤(S04)搅拌后的混合液转入到一定量的烷类固化剂中固化；

(S06)将步骤(S05)中固化后的物质清洗后冻干，即制得两性霉素B缓释微球。

作为优选，所述步骤(S01)溶液中聚乳酸-羟基乙酸共聚物的质量百分数为2％～10％。更优选，所述步骤(S01)溶液中聚乳酸-羟基乙酸共聚物的质量百分数为5％～8％。

作为优选，所述步骤(S01)中的有机溶剂为二氯甲烷、乙醇、乙酸乙酯或丙酮中的一种或多种。

作为优选，所述步骤(S03)中剪切机的剪切速度为2000～15000rpm。更优选，所述步骤(S03)中剪切机的剪切速度为5000～12000rpm。更优选，所述步骤(S03)中剪切机的剪切速度为8000～10000rpm。

作为优选，所述步骤(S03)中的乳化时间为1～10min。更优选，所述步骤(S03)中的乳化时间为3～6min。

作为优选，所述步骤(S04)中的搅拌时间为1～10min。更优选，所述步骤(S04)中的搅拌时间为4～7min。

作为优选，所述步骤(S06)中的冻干时间为1～4h。更优选，所述步骤(S06)中的冻干时间为2～3h。

本发明具有如下有益效果：

(1)通过添加聚乳酸-羟基乙酸共聚物，由于聚乳酸-羟基乙酸共聚物是一种可降解的功能高分子有机化合物，其既具有良好的生物相容性，还具有良好的成囊和成膜的性能，也无毒，聚乳酸-羟基乙酸共聚物能够将适量份数的两性霉素B进行包裹后成囊或成膜，每一颗被聚乳酸-羟基乙酸共聚物包裹的两性霉素B都是根据研究确定好的合适剂量，从而可以较为准确的确定作用于患者的剂量，无需多次给药，患者的药物依从性将大大增加；

(2)两性霉素B被聚乳酸-羟基乙酸共聚物被包裹形成微球之后，就可以通过肌肉注射给药了，相比于现有静脉给药的方式，具有副作用较小和对肝肾功能的损伤较小的特点，其对由真菌引起的深层肺部感染的治疗效果较好；二甲基硅油能够增加整个缓释微球的安定性，保证缓释微球进入人体后，能够让两性霉素B以较稳定状态发挥效力；烷类固化剂能够让被聚乳酸-羟基乙酸共聚物包裹的两性霉素B较快的形成为微球状；

(3)缓释微球由两性霉素、聚乳酸-羟基乙酸共聚物、二甲基硅油、有机溶剂和烷类固化剂按照相应份数的组分制成，保证最终制成的两性霉素B缓释微球对治疗肺部真菌感染具有更佳的药效。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步的说明，但并不作为对本发明限制的依据。

实施例1：

两性霉素B缓释微球，按重量份计，包括以下组分，

两性霉素B 0.1份，聚乳酸-羟基乙酸共聚物0.5份，二甲基硅油10份，有机溶剂10份，烷类固化剂500份。聚乳酸-羟基乙酸共聚物由乳酸和羟基乙酸聚合形成。聚乳酸-羟基乙酸共聚物中乳酸和羟基乙酸的质量比为75:25。烷二甲基硅油的粘度为200cs。有机溶剂为二氯甲烷。烷类固化剂为八甲基环四硅氧烷。

实施例2：

两性霉素B缓释微球，按重量份计，包括以下组分，

两性霉素B1份，聚乳酸-羟基乙酸共聚物2份，二甲基硅油30份，有机溶剂50份，烷类固化剂1500份。聚乳酸-羟基乙酸共聚物由乳酸和羟基乙酸聚合形成。聚乳酸-羟基乙酸共聚物中乳酸和羟基乙酸的质量比为75:25。烷二甲基硅油的粘度为350cs。有机溶剂为乙醇。烷类固化剂为正庚烷。

实施例3：

两性霉素B缓释微球，按重量份计，包括以下组分，

两性霉素B 0.3份，聚乳酸-羟基乙酸共聚物0.8份，二甲基硅油15份，有机溶剂15份，烷类固化剂800份。聚乳酸-羟基乙酸共聚物由乳酸和羟基乙酸聚合形成。聚乳酸-羟基乙酸共聚物中乳酸和羟基乙酸的质量比为75:25。烷二甲基硅油的粘度为500cs。有机溶剂为乙酸乙酯。烷类固化剂为花生油。

实施例4：

两性霉素B缓释微球，按重量份计，包括以下组分，

两性霉素B 0.8份，聚乳酸-羟基乙酸共聚物1.6份，二甲基硅油25份，有机溶剂40份，烷类固化剂1300份。聚乳酸-羟基乙酸共聚物由乳酸和羟基乙酸聚合形成。聚乳酸-羟基乙酸共聚物中乳酸和羟基乙酸的质量比为75:25。烷二甲基硅油的粘度为1000cs。有机溶剂为丙酮。烷类固化剂为八甲基环四硅氧烷和正庚烷。

实施例5：

两性霉素B缓释微球，按重量份计，包括以下组分，

两性霉素B 0.4份，聚乳酸-羟基乙酸共聚物1份，二甲基硅油20份，有机溶剂25份，烷类固化剂1000份。聚乳酸-羟基乙酸共聚物由乳酸和羟基乙酸聚合形成。聚乳酸-羟基乙酸共聚物中乳酸和羟基乙酸的质量比为75:25。烷二甲基硅油的粘度为3000cs。有机溶剂为二氯甲烷和乙醇。烷类固化剂为八甲基环四硅氧烷和花生油。

实施例6：

两性霉素B缓释微球，按重量份计，包括以下组分，

两性霉素B 0.6份，聚乳酸-羟基乙酸共聚物1.2份，二甲基硅油23份，有机溶剂33份，烷类固化剂1100份。聚乳酸-羟基乙酸共聚物由乳酸和羟基乙酸聚合形成。聚乳酸-羟基乙酸共聚物中乳酸和羟基乙酸的质量比为75:25。烷二甲基硅油的粘度为5000cs。有机溶剂为乙酸乙酯和丙酮。烷类固化剂为正庚烷和花生油。

实施例7：

两性霉素B缓释微球的制备方法，包括以下步骤，

(S01)称取一定量的聚乳酸-羟基乙酸共聚物，置于有机溶剂中溶解；溶液中聚乳酸-羟基乙酸共聚物的质量百分数为2％。

(S02)称取一定量的两性霉素B，置于步骤(S01)的溶液中；

(S03)用剪切机在一定速度下将步骤(S02)中的混合液乳化；剪切机的剪切速度为2000rpm。乳化时间为1min。

(S04)在步骤(S03)乳化后的混合液中加入一定量的二甲基硅油，再进行搅拌；搅拌时间为1min。

(S05)将步骤(S04)搅拌后的混合液转入到一定量的烷类固化剂中固化；

(S06)将步骤(S05)中固化后的物质清洗后冻干，即制得两性霉素B缓释微球。冻干时间为1h。

实施例8：

两性霉素B缓释微球的制备方法，包括以下步骤，

(S01)称取一定量的聚乳酸-羟基乙酸共聚物，置于有机溶剂中溶解；溶液中聚乳酸-羟基乙酸共聚物的质量百分数为10％。

(S02)称取一定量的两性霉素B，置于步骤(S01)的溶液中；

(S03)用剪切机在一定速度下将步骤(S02)中的混合液乳化；剪切机的剪切速度为15000rpm。乳化时间为10min。

(S04)在步骤(S03)乳化后的混合液中加入一定量的二甲基硅油，再进行搅拌；搅拌时间为10min。

(S05)将步骤(S04)搅拌后的混合液转入到一定量的烷类固化剂中固化；

(S06)将步骤(S05)中固化后的物质清洗后冻干，即制得两性霉素B缓释微球。冻干时间为4h。

实施例9：

两性霉素B缓释微球的制备方法，包括以下步骤，

(S01)称取一定量的聚乳酸-羟基乙酸共聚物，置于有机溶剂中溶解；溶液中聚乳酸-羟基乙酸共聚物的质量百分数为5％。

(S02)称取一定量的两性霉素B，置于步骤(S01)的溶液中；

(S03)用剪切机在一定速度下将步骤(S02)中的混合液乳化；剪切机的剪切速度为10000rpm。乳化时间为5min。

(S04)在步骤(S03)乳化后的混合液中加入一定量的二甲基硅油，再进行搅拌；搅拌时间为5min。

(S05)将步骤(S04)搅拌后的混合液转入到一定量的烷类固化剂中固化；

(S06)将步骤(S05)中固化后的物质清洗后冻干，即制得两性霉素B缓释微球。冻干时间为2.5h。

实施例10：

两性霉素B缓释微球的制备：

处方：

制备工艺：

精密称取PLGA1.2g溶解于25g的二氯甲烷中，将精密称取两性霉素B 300mg加入到上述的PLGA溶液中，在剪切机下以8000rpm转速乳化3min，再加入二甲基硅油20ml搅拌2min，搅拌结束后，将混合物加入到八甲基环四硅氧烷中搅拌3h。去掉液体后将留下的物质冻干，即得两性霉素B缓释微球。

实施例11：

两性霉素B缓释微球的制备：

处方：

制备工艺：

精密称取PLGA 1g溶解于33g的二氯甲烷中，将精密称取两性霉素B(微粉化)300mg加入到上述的PLGA溶液中，在剪切机下以8000rpm转速乳化3min，再加入二甲基硅油20ml搅拌2min，搅拌结束后，将混合物加入到八甲基环四硅氧烷中搅拌3h。去掉液体后将留下的物质冻干，即得两性霉素B缓释微球。

实施例12：

两性霉素B缓释微球的制备：

处方：

制备工艺：

精密称取PLGA 1g溶解于15g的二氯甲烷中，将精密称取两性霉素B(微粉化)300mg加入到上述的PLGA溶液中，在剪切机下以8000rpm转速乳化3min，再加入二甲基硅油20ml搅拌2min，搅拌结束后将混合物加入到八甲基环四硅氧烷中搅拌3h。去掉液体后将留下的物质冻干，即得两性霉素B缓释微球。

聚乳酸-羟基乙酸共聚物(poly(lactic-co-glycolic acid)，PLGA)；随着真菌对于常规咪唑类药物和棘白菌素类耐药性的增加，两性霉素B作为多烯类抗真菌抗生素，其强大而广谱的作用效果，成为了抗真菌治疗的金标准。

两性霉素B微球长效注射剂通过改变药物释放方式，并可以有效降低药物肾毒性，两性霉素B微球长效注射剂型国内尚无上市产品。所以目前是市场上缺一种可以减少毒性并减少给药次数的制剂，可研发一种两性霉素B的缓释微球注射剂，可以减少治疗的不良反应和改善病人的依从性。