一种葡萄籽原花青素和α-生育酚复合脂质体及其制备方法

技术领域

本发明属于保健食品加工技术领域，尤其涉及一种葡萄籽原花青素和α-生育酚复合脂质体及其制备方法。

背景技术

原花青素因具有多酚基而形成较高的生物活性，水溶性较好，但其稳定性较差，易受外界光、热、氧气条件的影响，这使其应用受到限制。α-生育酚是脂溶性维生素，具有很强的抗氧化性及抗癌、防衰老、增强免疫力等生理功能，同样易受光、氧气、热等因素的干扰，所以需要寻找理想优质的载体来运载和储存生物活性物质。

脂质体是一种双分子膜，这种双分子膜由亲油、亲水分子组成，不仅可以包裹水溶性芯材，还可以包裹脂溶性芯材。脂质体作为一种递送体系广泛应用于食品、化妆品、药物等领域，虽然其具有非常明确的优点，但也存在着一定缺陷，如在贮藏期间会受到光照、温度等影响，易发生聚团、沉降和芯材泄漏。因此，现有脂质体尚无法满足对原花青素和α-生育酚的稳定高效包载。

发明内容

为解决现有脂质体无法实现对原花青素和α-生育酚稳定高效包载的问题，本发明提供了一种葡萄籽原花青素和α-生育酚复合脂质体及其制备方法。

本发明的技术方案：

一种葡萄籽原花青素和α-生育酚复合脂质体，所述α-生育酚和葡萄籽原花青素的摩尔比为1～5:1～3，α-生育酚和葡萄籽原花青素之和与脂质双分子层材料的质量比为1:5～15。

一种葡萄籽原花青素和α-生育酚复合脂质体的制备方法，步骤如下：

步骤一、将α-生育酚充分溶解于二氯甲烷-乙醇混合溶液中，所得α-生育酚溶液与脂质双分子层材料混合并进行第一次超声处理；将原花青素充分溶解于PBS缓冲溶液中，所得原花青素溶液注入第一次超声处理所得混合溶液中，注入完成后恒温搅拌一定时间得到粗脂质体溶液；

步骤二、减压蒸发去除所得粗脂质体溶液中的二氯甲烷和乙醇得到膜层，用PBS缓冲溶液将所得膜层水化并定容得到水化体系，对水化体系进行第二次超声处理及过膜处理，得到脂质体悬浮液；

步骤三、将油脂体蛋白溶解在PBS缓冲溶液中，再将所得油脂体蛋白溶液加入等体积所述脂质体悬浮液中，恒温搅拌一定时间得到葡萄籽原花青素和α-生育酚复合脂质体。

进一步的，步骤一所述二氯甲烷-乙醇混合溶液中二氯甲烷和乙醇的体积比为1～2:1～2；所述脂质双分子层材料为质量比为7～8:1～2:1～2的卵磷脂、氢化卵磷脂和胆固醇。

进一步的，步骤一所述第一次超声处理的超声温度为40～60℃，超声时间为5～15min，超声功率为100～300W。

进一步的，步骤一所述α-生育酚和葡萄籽原花青素的摩尔比为1～5:1～3；α-生育酚和葡萄籽原花青素之和与脂质双分子层材料的质量比为1:5～15。

进一步的，步骤一所述恒温搅拌的温度为30～50℃，搅拌转速为50～150r/min，搅拌时间为10～20min。

进一步的，步骤二所述水化体系中脂质双分子层材料的质量浓度为0.5～5mg/mL。

进一步的，步骤二所述第二次超声处理为冰浴条件下超声，超声时间为10～30min，超声功率为100～300W；所述过膜处理的过0.45μm滤膜。

进一步的，步骤三所述油脂体蛋白为大豆油脂体蛋白或菜子油脂体蛋白，所述油脂体蛋白溶液中油脂体蛋白的质量浓度为0.2～1.0mg/mL。

进一步的，步骤三所述恒温搅拌的搅拌温度为30～50℃，搅拌转速为50～100r/min，搅拌时间为诶5～15min。

本发明的有益效果：

本发明提供了一种葡萄籽原花青素和α-生育酚复合脂质体，利用脂质体的疏水空腔和亲水空腔同时包载了不同极性的活性物质葡萄籽原花青素和α-生育酚，两种活性物质的协同作用使复合脂质体具有更高的抗氧化活性。本发明以脂质体保护活性成分免受外界环境(光、氧气等)的破坏作用，同时具有缓、控释作用。本发明采用油脂体蛋白对脂质体进行表面修饰，避免脂质体在贮藏期间受到光照、温度等影响，减少聚团、沉降和芯材泄漏的情况发生，从而进一步提高了脂质体的稳定性。本发明采用超声辅助法制备复合脂质体，达到脂质体粒径大小均匀、活性成分包封率高的技术效果，两种活性物质包封率均在95％以上。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明的技术方案做进一步的说明，但并不局限于此，凡是对本发明技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的精神和范围，均应涵盖在本发明的保护范围中。下列实施例中未具体注明的工艺设备或装置均采用本领域内的常规设备或装置，若未特别指明，本发明实施例中所用的原料等均可市售获得；若未具体指明，本发明实施例中所用的技术手段均为本领域技术人员所熟知的常规手段。

实施例1

本实施例提供了一种葡萄籽原花青素和α-生育酚复合脂质体的制备方法，步骤如下：

步骤一、按照卵磷脂、氢化卵磷脂和胆固醇的质量比为8:1:1准确称量得到脂质双分子层材料，将其置于圆底烧瓶中，

按照α-生育酚和葡萄籽原花青素之和与脂质双分子层材料的质量比为1:10、α-生育酚和葡萄籽原花青素的摩尔比为3:1计算并称量α-生育酚和葡萄籽原花青素；

将α-生育酚充分溶解于二氯甲烷-乙醇混合溶液中，本实施例二氯甲烷-乙醇混合溶液中二氯甲烷和乙醇的体积比为1:2；将原花青素充分溶解于PBS缓冲溶液中，本实施例使用的PBS缓冲溶液均为pH7.4，浓度为0.01mol/L的PBS缓冲溶液。

将所得α-生育酚溶液移至圆底烧瓶中与脂质双分子层材料混合并进行第一次超声处理，超声温度为50℃，超声功率200W、超声时间10min；将所得原花青素溶液缓慢注入第一次超声处理所得混合溶液中，注入完成后40℃、100r/min恒温搅拌15min，得到粗脂质体溶液；

步骤二、利用真空旋转蒸发器，减压蒸发去除所得粗脂质体溶液中的二氯甲烷和乙醇得到膜层，用PBS缓冲溶液将所得膜层水化并定容，得到脂质双分子层材料的质量浓度为0.5mg/mL的水化体系，对水化体系进行第二次超声处理，在超声功率200W的条件下，冰浴超声20min，过0.45μm滤膜，得到脂质体悬浮液；脂质体悬浮液的平均粒径为108.35±0.43nm。

步骤三、将大豆油脂体蛋白溶解在PBS缓冲溶液中，得到大豆油脂体蛋白质量浓度为0.6mg/mL的大豆油脂体蛋白溶液，再将所得大豆油脂体蛋白溶液缓慢加入等体积所述脂质体悬浮液中，注入完成后40℃、75r/min恒温搅拌10min得到葡萄籽原花青素和α-生育酚复合脂质体。大豆油脂体蛋白修饰后的脂质体的平均粒径为116.72±0.39nm。

油脂体蛋白是一种新型蛋白，本发明将油脂体蛋白修饰到脂质体的外表面，油脂体蛋白与双分子层直接相互作用，可以提高脂质体在环境中的稳定性，延缓芯材的氧化、泄漏，提高脂质体对渗透压和胃消化的耐受性，从而实现提高脂质体稳定性、缓控释放的技术效果；同时采用非热加工技术的超声辅助法制备脂质体，有利于脂质体粒径大小均匀，提高活性成分的包封率，两种活性物质包封率均在95％以上。

实施例2

本实施例提供了一种葡萄籽原花青素和α-生育酚复合脂质体的制备方法，步骤如下：

步骤一、按照卵磷脂、氢化卵磷脂和胆固醇的质量比为8:1:1准确称量得到脂质双分子层材料，将其置于圆底烧瓶中，

按照α-生育酚和葡萄籽原花青素之和与脂质双分子层材料的质量比为1:10、α-生育酚和葡萄籽原花青素的摩尔比为3:1计算并称量α-生育酚和葡萄籽原花青素；

将α-生育酚充分溶解于二氯甲烷-乙醇混合溶液中，本实施例二氯甲烷-乙醇混合溶液中二氯甲烷和乙醇的体积比为1:2；将原花青素充分溶解于PBS缓冲溶液中，本实施例使用的PBS缓冲溶液均为pH7.4，浓度为0.01mol/L的PBS缓冲溶液。

将所得α-生育酚溶液移至圆底烧瓶中与脂质双分子层材料混合并进行第一次超声处理，超声温度为50℃，超声功率200W、超声时间10min；将所得原花青素溶液缓慢注入第一次超声处理所得混合溶液中，注入完成后40℃、100r/min恒温搅拌15min，得到粗脂质体溶液；

步骤二、利用真空旋转蒸发器，减压蒸发去除所得粗脂质体溶液中的二氯甲烷和乙醇得到膜层，用PBS缓冲溶液将所得膜层水化并定容，得到脂质双分子层材料的质量浓度为0.5mg/mL的水化体系，对水化体系进行第二次超声处理，在超声功率200W的条件下，冰浴超声20min，过0.45μm滤膜，得到脂质体悬浮液；脂质体悬浮液的平均粒径为108.35±0.43nm。

步骤三、将菜籽油脂体蛋白溶解在PBS缓冲溶液中，得到菜籽油脂体蛋白质量浓度为0.6mg/mL的菜籽油脂体蛋白溶液，再将所得菜籽油脂体蛋白溶液缓慢加入等体积所述脂质体悬浮液中，注入完成后40℃、75r/min恒温搅拌10min得到葡萄籽原花青素和α-生育酚复合脂质体。菜籽油脂体蛋白修饰后的脂质体的平均粒径为113.49±0.65nm。

实施例1和实施例2制备的经过油脂体蛋白修饰后的脂质体在室温保存7天及14天时，所包封的两种活性物质的保留率比未修饰样品的高15％及10％以上，稳定性增强。原花青素和α-生育酚复合脂质体的DPPH自由基清除率比单独包封原花青素或单独包封α-生育酚分别高10％及50％以上，说明两种活性物质的协同作用使复合脂质体具有更高的抗氧化活性。

实施例3

本实施例提供了一种葡萄籽原花青素和α-生育酚复合脂质体的制备方法，步骤如下：

步骤一、按照卵磷脂、氢化卵磷脂和胆固醇的质量比为7:2:1准确称量得到脂质双分子层材料，将其置于圆底烧瓶中，

按照α-生育酚和葡萄籽原花青素之和与脂质双分子层材料的质量比为1:5、α-生育酚和葡萄籽原花青素的摩尔比为5:1计算并称量α-生育酚和葡萄籽原花青素；

将α-生育酚充分溶解于二氯甲烷-乙醇混合溶液中，本实施例二氯甲烷-乙醇混合溶液中二氯甲烷和乙醇的体积比为1:1；将原花青素充分溶解于PBS缓冲溶液中，本实施例使用的PBS缓冲溶液均为pH7.4，浓度为0.01mol/L的PBS缓冲溶液。

将所得α-生育酚溶液移至圆底烧瓶中与脂质双分子层材料混合并进行第一次超声处理，超声温度为40℃，超声功率100W、超声时间5min；将所得原花青素溶液缓慢注入第一次超声处理所得混合溶液中，注入完成后30℃、50r/min恒温搅拌20min，得到粗脂质体溶液；

步骤二、利用真空旋转蒸发器，减压蒸发去除所得粗脂质体溶液中的二氯甲烷和乙醇得到膜层，用PBS缓冲溶液将所得膜层水化并定容，得到脂质双分子层材料的质量浓度为1.0mg/mL的水化体系，对水化体系进行第二次超声处理，在超声功率100W的条件下，冰浴超声30min，过0.45μm滤膜，得到脂质体悬浮液；

步骤三、将菜籽油脂体蛋白溶解在PBS缓冲溶液中，得到菜籽油脂体蛋白质量浓度为0.2mg/mL的菜籽油脂体蛋白溶液，再将所得菜籽油脂体蛋白溶液缓慢加入等体积所述脂质体悬浮液中，注入完成后30℃、50r/min恒温搅拌15min得到葡萄籽原花青素和α-生育酚复合脂质体。

实施例4

本实施例提供了一种葡萄籽原花青素和α-生育酚复合脂质体的制备方法，步骤如下：

步骤一、按照卵磷脂、氢化卵磷脂和胆固醇的质量比为7:1:2准确称量得到脂质双分子层材料，将其置于圆底烧瓶中，

按照α-生育酚和葡萄籽原花青素之和与脂质双分子层材料的质量比为1:15、α-生育酚和葡萄籽原花青素的摩尔比为1:1计算并称量α-生育酚和葡萄籽原花青素；

将α-生育酚充分溶解于二氯甲烷-乙醇混合溶液中，本实施例二氯甲烷-乙醇混合溶液中二氯甲烷和乙醇的体积比为2:1；将原花青素充分溶解于PBS缓冲溶液中，本实施例使用的PBS缓冲溶液均为pH7.4，浓度为0.01mol/L的PBS缓冲溶液。

将所得α-生育酚溶液移至圆底烧瓶中与脂质双分子层材料混合并进行第一次超声处理，超声温度为60℃，超声功率300W、超声时间5min；将所得原花青素溶液缓慢注入第一次超声处理所得混合溶液中，注入完成后50℃、150r/min恒温搅拌10min，得到粗脂质体溶液；

步骤二、利用真空旋转蒸发器，减压蒸发去除所得粗脂质体溶液中的二氯甲烷和乙醇得到膜层，用PBS缓冲溶液将所得膜层水化并定容，得到脂质双分子层材料的质量浓度为1.5mg/mL的水化体系，对水化体系进行第二次超声处理，在超声功率300W的条件下，冰浴超声10min，过0.45μm滤膜，得到脂质体悬浮液；

步骤三、将菜籽油脂体蛋白溶解在PBS缓冲溶液中，得到菜籽油脂体蛋白质量浓度为1.0mg/mL的菜籽油脂体蛋白溶液，再将所得菜籽油脂体蛋白溶液缓慢加入等体积所述脂质体悬浮液中，注入完成后50℃、100r/min恒温搅拌5min得到葡萄籽原花青素和α-生育酚复合脂质体。

实施例5

本实施例提供了一种葡萄籽原花青素和α-生育酚复合脂质体的制备方法，步骤如下：

步骤一、按照卵磷脂、氢化卵磷脂和胆固醇的质量比为7:21:1准确称量得到脂质双分子层材料，将其置于圆底烧瓶中，

按照α-生育酚和葡萄籽原花青素之和与脂质双分子层材料的质量比为1:12、α-生育酚和葡萄籽原花青素的摩尔比为1:3计算并称量α-生育酚和葡萄籽原花青素；

将α-生育酚充分溶解于二氯甲烷-乙醇混合溶液中，本实施例二氯甲烷-乙醇混合溶液中二氯甲烷和乙醇的体积比为1:2；将原花青素充分溶解于PBS缓冲溶液中，本实施例使用的PBS缓冲溶液均为pH7.4，浓度为0.01mol/L的PBS缓冲溶液。

将所得α-生育酚溶液移至圆底烧瓶中与脂质双分子层材料混合并进行第一次超声处理，超声温度为40℃，超声功率300W、超声时间5min；将所得原花青素溶液缓慢注入第一次超声处理所得混合溶液中，注入完成后50℃、150r/min恒温搅拌10min，得到粗脂质体溶液；

步骤二、利用真空旋转蒸发器，减压蒸发去除所得粗脂质体溶液中的二氯甲烷和乙醇得到膜层，用PBS缓冲溶液将所得膜层水化并定容，得到脂质双分子层材料的质量浓度为1.2mg/mL的水化体系，对水化体系进行第二次超声处理，在超声功率100W的条件下，冰浴超声20min，过0.45μm滤膜，得到脂质体悬浮液；

步骤三、将菜籽油脂体蛋白溶解在PBS缓冲溶液中，得到菜籽油脂体蛋白质量浓度为0.6mg/mL的菜籽油脂体蛋白溶液，再将所得菜籽油脂体蛋白溶液缓慢加入等体积所述脂质体悬浮液中，注入完成后30℃、150r/min恒温搅拌10min得到葡萄籽原花青素和α-生育酚复合脂质体。

实施例6

本实施例提供了一种葡萄籽原花青素和α-生育酚复合脂质体的制备方法，步骤如下：

步骤一、按照卵磷脂、氢化卵磷脂和胆固醇的质量比为7:1:2准确称量得到脂质双分子层材料，将其置于圆底烧瓶中，

按照α-生育酚和葡萄籽原花青素之和与脂质双分子层材料的质量比为1:8、α-生育酚和葡萄籽原花青素的摩尔比为1:2计算并称量α-生育酚和葡萄籽原花青素；

将α-生育酚充分溶解于二氯甲烷-乙醇混合溶液中，本实施例二氯甲烷-乙醇混合溶液中二氯甲烷和乙醇的体积比为1:1；将原花青素充分溶解于PBS缓冲溶液中，本实施例使用的PBS缓冲溶液均为pH7.4，浓度为0.01mol/L的PBS缓冲溶液。

将所得α-生育酚溶液移至圆底烧瓶中与脂质双分子层材料混合并进行第一次超声处理，超声温度为50℃，超声功率200W、超声时间15min；将所得原花青素溶液缓慢注入第一次超声处理所得混合溶液中，注入完成后40℃、100r/min恒温搅拌15min，得到粗脂质体溶液；

步骤二、利用真空旋转蒸发器，减压蒸发去除所得粗脂质体溶液中的二氯甲烷和乙醇得到膜层，用PBS缓冲溶液将所得膜层水化并定容，得到脂质双分子层材料的质量浓度为0.1mg/mL的水化体系，对水化体系进行第二次超声处理，在超声功率200W的条件下，冰浴超声15min，过0.45μm滤膜，得到脂质体悬浮液；

步骤三、将菜籽油脂体蛋白溶解在PBS缓冲溶液中，得到菜籽油脂体蛋白质量浓度为0.8mg/mL的菜籽油脂体蛋白溶液，再将所得菜籽油脂体蛋白溶液缓慢加入等体积所述脂质体悬浮液中，注入完成后40℃、150r/min恒温搅拌15min得到葡萄籽原花青素和α-生育酚复合脂质体。