用于检测原发性肾病综合征激素敏感性相关风险基因位点的试剂盒及方法

技术领域

本发明涉及分子生物学分析检测技术领域，具体涉及一种用于检测原发性肾病综合征激素敏感性相关风险基因位点的试剂盒及方法。

背景技术

原发肾病综合征(Primary nephrotic syndrome，PNS)是引起我国儿童慢性肾脏病最为常见的原发性肾小球疾病，口服糖皮质激素(glucocorticosteroid)一直是PNS公认的一线治疗方法。77.6％-91.0％的患儿初始激素治疗敏感，但有80％-90％的患儿复发，其中25％-43％患儿发展成为难治性肾病，其发病隐匿、临床表现多样、糖皮质激素治疗效果不佳,且预后较差。依据激素治疗敏感反应，可以将PNS分成若干疾病类型，其中激素敏感无复发型肾病和激素依赖/频复发型肾病是最具有临床特征的两种类型。激素敏感无复发型NS定义为泼尼松足量2mg/(kg.d)或60mg/(m2.d)治疗≤4周尿蛋白转阴者，且治疗初期治疗2年内无复发；激素依赖/频复发型肾病定义为对激素敏感，但连续两次减量或停药2周内复发者或者指病程中半年内复发≥2次，或1年内复发≥4次。以上两种肾病治疗难度和类型差异大，因此，建立一款检测PNS这两种激素敏感性风险基因位点的临床试剂盒成为医疗行业共同关注的问题。该试剂盒在临床病人的应用开展，可有助于对病人进行治疗或是跟踪随访，可有效减少过度治疗提高生活质量，有利于临床医生早期识别、早期干预，有利于疾病诊治及药物选择，具有一定的社会意义及经济效益。

发明内容

针对上述现有技术的不足，本发明旨在提供一种用于检测原发性肾病综合征激素敏感性相关风险基因位点的试剂盒及方法，以解决现有技术中对PNS分型难以检测，而导致难以对PNS病人进行早期识别、干预和治疗的问题。

为了解决上述问题，本发明采用了如下的技术方案：

早期协助临床医生判断PNS是否进展为激素敏感无复发型肾病或激素依赖/频复发型肾病，试剂盒包含的人类白细胞抗原(HLA)等位基因及单核苷酸多态性(SNP)位点如下：

HLA-DQB1*06:02、HLA-A*11:01、HLA-B*15:02、HLA-A*02:01、chr2:171713702、rs1049123、rs9273471、rs774409792等位基因及位点。

第一方面，本发明提供一种用于检测原发肾病综合征激素敏感性相关风险基因位点的引物组，包括：

HLA-DQB1*06:02-F：5′-CCCAGGAAATGCTTCTCCACAG-3′，

HLA-DQB1*06:02-R：5′-GGATTGGATGGTCCCTCGGAA-3′；

HLA-A*11:01-F：5′-CACTCAGGCACAACTTTTCCGGA-3′，

HLA-A*11:01-R：5′-GCGACGACACTGATTGGCTT-3′；

HLA-B*15:02-F：5′-CTCCCTGGTTTCCACAGACAGA-3′，

HLA-B*15:02-R：5′-TTGTAGATCTGTGTGTTCCGGTCC-3′；

HLA-A*02:01-F：5′-CTTACTCTCTGGCACCAAACTCCA-3′，

HLA-A*02:01-R：5′-AGAGTAGCAGGAGGAGGGTTC-3′；

chr2:171713702-F：5′-GACTGGAGTGCCTTTGAAAGAGG-3′，

chr2:171713702-R：5′-CATGCCCAGCCTGAAAAACAC-3′；

rs1049123-F：5′-TTCACCTTTGCACAGATCTTGGGG-3′，

rs1049123-R：5′-TACACAGCACTCACCAAACCAGAA-3′；

rs9273471-F：5′-CTTGTGAAATGTGGAGCCAGAACC-3′，

rs9273471-R：5′-AAGAATAGAAACAGAAACCCCTTGGG-3′；

rs774409792-F:5′-AGTGGGGATGCTACCACACT-3′,

rs774409792-R:5′-AGCAAAGTCAGTCTGCAGCCA-3′。

第二方面，本发明提供一种用于检测原发肾病综合征激素敏感性相关风险基因位点的试剂盒，包含所述用于检测原发性肾病综合征激素敏感性相关风险基因位点的引物组。

进一步，所述试剂盒还包括PCR预混液和双蒸水。

第三方面，本发明提供一种用于检测原发肾病综合征激素敏感性相关风险基因位点的体系，包括：

2μl检测HLA-DQB1*06:02、HLA-A*11:01、HLA-B*15:02和HLA-A*02:01基因的引物组、25μlPCR聚合酶和22μlddH

第四方面，本发明提供一种用于检测原发肾病综合征激素敏感性相关风险基因位点的方法，包括：

采集待测者外周静脉血，提取DNA；

采用检测HLA-DQB1*06:02、HLA-A*11:01、HLA-B*15:02和HLA-A*02:01基因的引物组对提取的DNA进行PCR扩增；

对PCR扩增后的产物进行电泳鉴定、纯化，在PCR仪上采用检测chr2:171713702、rs1049123、rs9273471和rs774409792位点的引物组确定样本中包含的风险SNPs基因型。

进一步，所述在PCR仪上采用检测chr2:171713702、rs1049123、rs9273471和rs774409792位点的引物组确定样本中包含的风险SNPs基因型中PCR的反应条件为96℃变性2min后进行pcr循环，pcr循环参数为96℃、10s，50℃、10s，60℃、3min，30个循环，扩增结束后设置4℃保温。

第五方面，本发明提供一种用于原发肾病综合征激素敏感性分型的系统，包括采集模块、扩增模块、风险基因位点确定模块、综合评分计算模块和分型模块；

所述采集模块，用于采集待测者外周静脉血，提取DNA；

所述扩增模块，用于采用权利要求1中检测HLA-DQB1*06:02、HLA-A*11:01、HLA-B*15:02和HLA-A*02:01基因的引物组对提取的DNA进行PCR扩增；

所述风险基因位点确定模块，用于对PCR扩增后的产物进行电泳鉴定、纯化，在PCR仪上采用权利要求1中检测chr2:171713702、rs1049123、rs9273471和rs774409792位点的引物组确定样本中包含的风险SNPs基因型；

所述综合评分计算模块，用于根据每种原发性肾病综合征激素敏感性相关风险基因型的分值之和得出综合评分；

所述分型模块，用于根据所述综合评分对原发性肾病综合征激素敏感性进行分型。

进一步，所述每种原发性肾病综合征激素敏感性相关风险基因型的分值为：HLA-DQB1*06:02为-4，HLA-A*11:01为-0.5，HLA-B*15:02为-0.5，HLA-A*02:01为+0.5，chr2:171713702为+3，rs1049123为+1.5，rs9273471为+1，rs774409792为+0.5。

进一步，所述根据所述综合评分对原发性肾病综合征激素敏感性进行分型，包括：若所述综合评分小于-1，则患者激素治疗敏感型且无复发风险，分数越低越支持该结论；若所述综合评分大于等于-1且小于3，,则患者有复发风险；若所述综合评分大于等于3，则患者激素依赖频复发风险程度高且疾病复发率高，分数越高越支持该结论。

第六方法，本发明提供上述的引物组或上述的试剂盒在制备原发性肾病综合征激素敏感性相关风险基因位点检测试剂中的应用。

本发明的有益效果在于：本发明提供用于检测原发性肾病综合征激素敏感性相关风险基因位点的试剂盒及方法，通过在疾病初期对DNA进行检测，有利于肾脏疾病诊治及后续药物选择。从患者外周血提取DNA；对外周血DNA进行大量、纯化、扩增及测序；对扩增后的DNA库进行重要生物学指标风险分析；通过本试剂盒及系列标准化评估，检测覆盖率为90％，符合率可达83.3％，临床敏感度88.9％，临床特异度77.8％，AUC为0.838，可有效减少过度治疗，有利于临床医生早期识别、早期干预，具有积极社会意义及经济效益。

附图说明

图1为本发明实施例2中的ROC曲线图。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明作进一步的详细说明。

需要说明的是，这些实施例仅用于说明本发明，而不是对本发明的限制，在本发明的构思前提下本方法的简单改进，都属于本发明要求保护的范围。

实施例1

本发明可以在早期协助临床医生判断PNS是否进展为激素敏感无复发型肾病或激素依赖/频复发型肾病，试剂盒包含的人类白细胞抗原(HLA)等位基因及单核苷酸多态性(SNP)位点如下：

HLA-DQB1*06:02、HLA-A*11:01、HLA-B*15:02、HLA-A*02:01、chr2:171713702、rs1049123、rs9273471、rs774409792等位基因及位点。

试剂盒包含试剂，见表1：

表1试剂盒的试剂明细表

应用对象：

(1)起病年龄半岁至18岁；

(2)初诊PNS患者，其诊断标准：大量蛋白尿：24h蛋白尿定量≧50mg/kg或晨尿蛋白/肌酐(mg/mg)≧2.0,1周3次晨尿蛋白定性(+++-++++)；低蛋白血症：血清白蛋白低于25g/L；高脂血症：血清胆固醇高于5.7mmol/L；不同程度的水肿。以上4项中以1和2为诊断的必要条件；

(3)排除继发性肾病综合征(过敏性紫癜、狼疮、乙肝、糖尿病、遗传性肾炎、严重感染、肿瘤、药物)等因素引起的慢性肾脏疾病。

操作步骤：

(1)DNA制备

按医疗常规操作采集外周静脉血2ml，加入EDTA抗凝。采用通用DNA提取试剂盒提取血样DNA，DNA溶液在-20℃冰箱中冻存。

(2)DNA质量检测

利用NanoDrop 2000测定样本DNA浓度和OD比值。将无降解、无RNA污染、OD260/OD280比值在1.8-2.0之间，含量在1.5μg以上的DNA样品上机。

(3)目的基因聚合酶链式反应(PCR)扩增

1)目标基因片段扩增序列：

①HLA-DQB1*06:02，见SEQ ID NO：17。

CCCAGGAAATGCTTCTCCACAGGTTTTGTGCTCTCTCTTCAAAACGAAACATGACTGCATCCGAATACTGTAAAATTCTGTGTATTGTGCCTTTGCTGATATCAGATGCATCATTTCATGGTTCAGGGAGGATTTAAACAGCTGAAGAACTTAAAAAAGAAATGTCAACTTAATTAACTTTTCAAATACTTTCACTAGAAGAGCATAAATACAATATGTTCTTGCATAATGAAGAATCATTTACCAGCAGGGGTGGGTATCAATTTTTTTTTTTTGGCTTGTTTTCTTGTTCCACATATTAACCTGATAGTTACACATAACAGTTGAGGAGACTTTTGTAATATTAAACAAGACAAATTAATCTTAAATTTGTACATGTGAAGATCTAGATGTAAAATGCATGAAACATGACCCACATTTTATAAAGAGAAGCCTGGGGCAAAAATAAATTCAGTAATTTGTTGACTCTTCTAAAGCACATTAGTGGTGGAACTGCAACTTACCATTATTTCCTTCTAAGAACTTTGCTCTTCTCCCCAGGACTTAAGGCTCTTCAGCGTGTCTAAGACAACAGCAGTAAAAATTTCTGTGACAGCAATTTTCTCTCCCCTGAAATATGATCCCCACCTAATTTGCTTTATTAAAAATCCCAAGTATAATAACAACTGGTTTTTAACAATATTACAGAGATGTTTACTGTTGAATCGCATTTTTTTCTTTTGCCTCTCAAAATCCCCGAGGCATTCGTTCTTCAGCTCTTCTATAATCGAGAGGAAATTTTCACCTCAGATGTTCATCCAGTACAATTTGAAGACGTCACAGTGCCAGGCACTGGATTGAGAACCTTCACAAAAAAAATGTCTGCCCAGAGACAGATGAGGTCCTTCAGCTCCAGTGCTGATTGGTTCTTTTCCGAGGGACCATCCAATCC

②HLA-A*11:01，见SEQ ID NO：18。

CACTCAGGCACAACTTTTCCGGATTAAAAACAAAAACAACAACAACAAAAATCTACACCTCCATTCCCAGATCAAGCTTACTCTCTGGCACCAAACTCCATGGGGTGATTTTTCTTCTAGAAGAGTCCAGGTGGACAGGTAAGGAGTGGGAGTCAGGGAGTCCAGTTCAGGGACAGAGATAATGGGATGAAAAGTGAAAGGAGAGGGACGGGGCCCATGCCGAGGGTTTCTCCCTTGTTTCTCAGACAGCTCCTGGGCCAAGACTCAGGGAGACATTGAGACAGAGCGCTTCGCACAGGAGCAGAGGGGTCAGGGCGAAGTCCCAGGGCCCCAGGCGTGGCTCTCAGAGTCTCAGGCCCCGAAGGCGGTGTATGGATTGGGGAGTCCCAGCCTTGGGGATTCCCCAACTCCGCAGTTTCTTTTCTCCCTCTCCCAACCTACGTAGGGTCCTTCATCCTGGATACTCACGACGCGGACCCAGTTCTCACTCCCATTGGGTGTCGGGTTTCCAGAGAAGCCAATCAGTGTCGTCGC

③HLA-B*15:02，见SEQ ID NO：19。

CTCCCTGGTTTCCACAGACAGATCCTTGTCCAGGACTCAGGCAGACAGTGTGACAAAGAGGCTTGGTGTAGGAGAAGAGGGATCAGGACGAAGTCCCAGGTCCCGGACGGGGCTCTCAGGGTCTCAGGCTCCGAGGGCCGCGTCTGCAATGGGGAGGCGCAGCGTTGGGGATTCCCCACTCCCCTGAGTTTCACTTCTTCTCCCAACTTGTGTCGGGTCCTTCTTCCAGGATACTCGTGACGCGTCCCCACTTCCCACTCCCATTGGGTATTGGATATCTAGAGAAGCCAATCAGCGTCGCCGCGGTCCCAGTTCTAAAGTCCCCACGCACCCACCCGGACTCAGAGTCTCCTCAGACGCCGAGATGCTGGTCATGGCGCCCCGAACCGTCCTCCTGCTGCTCTCGGCGGCCCTGGCCCTGACCGAGACCTGGGCCGGTGAGTGCGGGTCGGGAGGGAAATGGCCTCTGCCGGGAGGAGCGAGGGGACCGCAGGCGGGGGCGCAGGACCTGAGGAGCCGCGCCGGGAGGAGGGTCGGGCGGGTCTCAGCCCCTCCTCACCCCCAGGCTCCCACTCCATGAGGTATTTCTACACCTCCGTGTCCCGGCCCGGCCGCGGGGAGCCCCGCTTCATCTCAGTGGGCTACGTGGACGACACCCAGTTCGTGAGGTTCGACAGCGACGCCGCGAGTCCGAGAGAGGAGCCGCGGGCGCCGTGGATAGAGCAGGAGGGGCCGGAGTATTGGGACCGGAACACACAGATCTACAA

④HLA-A*02:01，见SEQ ID NO：20。

CTTACTCTCTGGCACCAAACTCCATGGGGTGATTTTTCTTCTAGAAGAGTCCAGGTGGACAGGTAAGGAGTGGGAGTCAGGGAGTCCAGTTCAGGGACAGAGATAATGGGATGAAAAGTGAAAGGAGAGGGACGGGGCCCATGCCGAGGGTTTCTCCCTTGTTTCTCAGACAGCTCCTGGGCCAAGACTCAGGGAGACATTGAGACAGAGCGCTTCGCACAGGAGCAGAGGGGTCAGGGCGAAGTCCCAGGGCCCCAGGCGTGGCTCTCAGAGTCTCAGGCCCCGAAGGCGGTGTATGGATTGGGGAGTCCCAGCCTTGGGGATTCCCCAACTCCGCAGTTTCTTTTCTCCCTCTCCCAACCTACGTAGGGTCCTTCATCCTGGATACTCACGACGCGGACCCAGTTCTCACTCCCATTGGGTGTCGGGTTTCCAGAGAAGCCAATCAGTGTCGTCGCGGTCGCTGTTCTAAAGCCCGCACGCACCCACCGGGACTCAGATTCTCCCCAGACGCCGAGGATGGCCGTCATGGCGCCCCGAACCCTCCTCCTGCTACTCT

⑤chr2:171713702，见SEQ ID NO：21。

GACTGGAGTGCCTTTGAAAGAGGAAGCAGGCACACATCATTTATTGCATGCACATCTGTGAAAAAGCTGACATATTTGATTAGATTGTTCTTCCTAACCAGCTCCAAAAATACTTTTTTTGTTTATTTCCCATAGACAGGGACAGCATAGCCTTCCCAAATGCTCATCACAGGGAAATGCAACCACAAACATGACTTTTCTCTTTAAAACAGGGCACAGTGGGATTTGAAAACCAGATCAACAAATGCCTGGAACTGGCTGAATACCTCTATGCCAAGATTAAAAACAGAGAAGAATTTGAGATGGTTTTCAATGGCGAGGTAGGTAATCATCATGGACCAGGTACACAGTATTTCCAGAAAAACTGCTGAGGGAAGCTCCTGAAGCTTCTGGCAACATGGGAAAATCAATCCCATGTTGCCAGAAACTGCTTCAAAATTTTTATTCTTATACACTCTTAATTCCTCTCTTTAATTCCTTCCATGTCTATGAACTTTTCTTCTGGTAGCACTGGGATGACTTTTTCCTTTACATCTTTTAAAACTGTGTTGCTCTTGGCCAGCTTTTGGCAGACAAGAGGTCTTTCCTTGACAGGTCTGAATCCTTCATCATTCTTGGGTTTGTTTTGTGTTGAACCTTTATGAAAAAGTGTTTTTCAGGCTGGGCATG

⑥rs1049123，见SEQ ID NO：22。

TTCACCTTTGCACAGATCTTGGGGGAGGTGATGACAATACACCCTGGACCTCAACTTTCTCTGTCTGAAGCTGCAGGGGGCCCCTGAAGGGTGGGGGAGATGGCAGGCCCACCAGGATACCCTGTGCTGATCAATGCTCTTCTCTCTTCTCCAGGGCTTCTGCACTGACTCCTGAGACTATTTTAACTAGGATTGGTTATCACTCTTCTGTGATGCCTGCTTATGCCTGCCCAGAATTCCCAGCTGCCTGTGTCAGCTTGTCCCCCTGAGATCAAAGTCCTACAGTGGCTGTCACGCAGCCACCAGGTCATCTCCTTTCATCCCCACCCCAAGGCGCTGGCTGTGACTCTGCTTCCTGCACTGACCCAGAGCCTCTGCCTGTGCATGGCCAGCTGCGTCTACTCAGGTCCCAAGGGGTTTCTGTTTCTATTCTTTCCTCAGACTGCTCAAGAGAAGCACATGAAAAACATTACCTGACTTTAGAGCTTTTTTACATAATTAAACATGATCCTGAGTTATCTGTATTCTGAACTTTCTTAATTGAGAAGAGGCAGGAAATCACTGCAGAATGAAGGAACATCCCTTGAGGTGACCCAGCAAACCTGTGGCCAGAAGGAGGATTGTACCTTGAAAAGACACTGAAAGCATTTTGGGGTGTGAAGTAAGGGTGGGCAGAGGAGGTAGAAAATAATTCAATTGTCGCATCATTCATGGTTCTTTAATACTGATGCTCAGTGCATTGGCCTTAGAATATCCCAGCCTCTCTTCTGGTTTGGTGAGTGCTGTGTA

⑦rs9273471，见SEQ ID NO：23。

CTTGTGAAATGTGGAGCCAGAACCACAGCTTAAATGTTAGACACTAGGATGATGCCCACTTTGTGCCACATGATGGTGGCTACTGCCTGTAAGCATTTTCCAGTGACTGAAAGAGGCTGCTAGTGGTCGGGAAGAGATATCATCCAATTTCCTAAAAAGACTGAACCCTTCATATTCCCCAGAAGAATAACAGCTGTTCCCCACCTCCCACACATCTGCATCAAGCTGAAGTTCTGTGTCCTCATGAGCTGATTTCACCTTTGCACAGATCTTGGGGGAGGTGATGACAATACACCCTGGACCTCAACTTTCTCTGTCTGAAGCTGCAGGGGGCCCCTGAAGGGTGGGGGAGATGGCAGGCCCACCAGGATACCCTGTGCTGATCAATGCTCTTCTCTCTTCTCCAGGGCTTCTGCACTGACTCCTGAGACTATTTTAACTAGGATTGGTTATCACTCTTCTGTGATGCCTGCTTATGCCTGCCCAGAATTCCCAGCTGCCTGTGTCAGCTTGTCCCCCTGAGATCAAAGTCCTACAGTGGCTGTCACGCAGCCACCAGGTCATCTCCTTTCATCCCCACCCCAAGGCGCTGGCTGTGACTCTGCTTCCTGCACTGACCCAGAGCCTCTGCCTGTGCATGGCCAGCTGCGTCTACTCAGGTCCCAAGGGGTTTCTGTTTCTATTCTT

⑧rs774409792，见SEQ ID NO：24。

AGTGGGGATGCTACCACACTGTTGGTCATGATTTTGGTGCTGATGTGGGTGGTGCTGATGCTGGTGGTGATGACAATAATAGTGAGGGTCACAGTGTTGGTGACATTGATGATGACAATGGTAATAATAAAGGTAACAGATAATATTTAGTATTATAGAACTCTGAATATGCACCAAGAGGTATGCTAACTACTACTATTATTTAGTAGGCTTTGTTAGAAACTTCTGTTGTTATAGTCAAGGGACGCATGGAAACTTTTTATATTATTCTCTCTTTAAATCCTGTTGCATATGTTTAGAAGTAGGCCTTTTGGAAATATATAAAGTTCTCCACTTTTGAACATGTTGTTTCTTTCCCACCTCCACGACAGCTGCCAGCCCTCTCCTGGTGCTATTCACTCTCAACTTCACCATCACCAACCTGCGGTATGAGGAGAACATGCAGCACCCTGGCTCCAGGAAGTTCAACACCACGGAGAGGGTCCTTCAGGGCCTGGTAAGAGCCCCGCCCATCTCACTCTGCCCAGTTCACCTTGTCTAGTTCCACCTGTCTCACTCATGACAGGGCATGGAAGAAGATCTCACCCACCTCCTCTCACACCCAGAGCCGTGAGCCCCCATCCACTGATGCCAGGCCCGCCTACTGGTGCCAGCCCCAATGACTAGTCCCCTGACGCTACCCCCTCAGCCATCCTACTCACCTCCCTCTCCCTCTCCCACAGCTCAGGTCCCTGTTCAAGAGCACCAGTGTTGGCCCTCTGTACTCTGGCTGCAGACTGACTTTGCT

2)引物合成，见表2：

表2特异性引物列表

/>

3)目标基因片段序列扩增：

①PCR反应体系，见表3：

表3PCR反应体系表

其中，引物为检测HLA-DQB1*06:02、HLA-A*11:01、HLA-B*15:02和HLA-A*02:01基因的引物组。

PCR产物纯化：

1)目标基因片段扩增序列：

电泳：琼脂糖凝胶放入泳槽，将PCR产物加入泳道，110-120V电泳20min，于UVP仪器下观察条带，切取目的胶块。

2)胶回收：

(4)测序：

1)测序反应：

①PCR反应体系，见表4：

表4PCR反应体系表

其中，引物为检测chr2:171713702、rs1049123、rs9273471和rs774409792位点的引物组。

②PCR反应条件，见表5：

表5PCR反应条件表

2)测序反应纯化：

3)上机测序：将上述样品置入测序仪测序，使用专门的软件对数据进行收集。

结果判定：

激素敏感性风险积分参见表6：

表6激素敏感性风险积分表

(1)依据患者携带以上风险等位基因/变异位点情况

(2)结果解读：

＜-1分：患者激素治疗敏感型且无复发风险，分数越低越支持该结论。

[-1分,3分)：临界值，患者有复发风险。

≥3分：患者激素依赖频复发风险程度高且疾病复发率高，分数越高越支持该结论。

NA分值：样本未检测到风险位点，目前无法预测。

基于上述方法，设计一种原发性肾病综合征激素敏感性分型的系统，包括采集模块、扩增模块、风险基因位点确定模块、综合评分计算模块和分型模块；

所述采集模块，用于采集待测者外周静脉血，提取DNA；

所述扩增模块，用于采用权利要求1中检测HLA-DQB1*06:02、HLA-A*11:01、HLA-B*15:02和HLA-A*02:01基因的引物组对提取的DNA进行PCR扩增；

所述风险基因位点确定模块，用于对PCR扩增后的产物进行电泳鉴定、纯化，在PCR仪上采用权利要求1中检测chr2:171713702、rs1049123、rs9273471和rs774409792位点的引物组确定样本中包含的风险SNPs基因型；

所述综合评分计算模块，用于根据每种原发性肾病综合征激素敏感性相关风险基因型的分值之和得出综合评分；

所述分型模块，用于根据所述综合评分对原发性肾病综合征激素敏感性进行分型。

实施例2

选取20例样本(包含确诊激素敏感无复发10例、激素依赖/频复发型10例)验证试剂盒检测的价值。

(1)样本来源

选取经过长期治疗随访最终确诊为激素敏感无复发肾病10例、激素依赖/频复发型肾病15例，相关定义如下：

激素敏感无复发型肾病定义为泼尼松足量2mg/(kg.d)或60mg/(m2.d)治疗≤4周尿蛋白转阴者，且治疗初期治疗2年内无复发。

激素依赖/频复发型肾病定义为对激素敏感，但连续两次减量或停药2周内复发者或者指病程中半年内复发≥2次，或1年内复发≥4次。

(2)样本进行试剂盒检测

检测分数结果见表7：

表720例样本检测结果表

注：组别：1代表确诊激素敏感无复发型肾病，2代表激素依赖/频复发型肾病。

结果分析见表8：

表8检测样本检测结果表

在20例样本中，检测覆盖率为(9+9)/20＝90％，说明本产品试剂盒可覆盖检测样本的90％，覆盖率可。

其中，对于可检测的18例样本，临床灵敏度(sensitivity)为8/(8+1)＝88.9％，临床特异度(specificity)为7/(7+2)＝77.8％，总符合率为(8+7)/18＝83.3％，ROC曲线参见图1，其中，AUC为0.838。

最后说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管通过参照本发明的优选实施例已经对本发明进行了描述，但本领域的普通技术人员应当理解，可以在形式上和细节上对其作出各种各样的改变，而不偏离所附权利要求书所限定的本发明的精神和范围。