一种辛夷脂素用于治疗过敏性鼻炎的中药制剂

技术领域

本发明涉及医疗药物制备的技术领域，尤其涉及一种辛夷脂素用于治疗过敏性鼻炎的中药制剂。

背景技术

过敏性鼻炎(allergicrhinitis,AR)是世界范围内日益严重的公共卫生，医疗和经济问题。

传统中药辛夷具有散风寒、通鼻窍作用，其有效成分辛夷脂素则具有抗炎、抗过敏等功效。

过敏性鼻炎是指机体在接触过敏原后，由IgE介导产生的鼻腔、鼻窦黏膜非感染性炎性病变为主的疾病。近年来我市过敏性鼻炎患病率呈逐年增加，我国发病率为17.6％，而内蒙古草原地区发病率为32.4％，7-9月高发，黄花蒿类为主要致敏原。目前过敏性鼻炎的发病机制尚不明确，治疗手段较为单一。

发明内容

本发明公开一种辛夷脂素用于治疗过敏性鼻炎的中药制剂，旨在解决背景技术中提出来的过敏性鼻炎的发病机制尚不明确，治疗手段较为单一的技术问题。

为了实现上述目的，本发明采用了如下技术方案：

一种辛夷脂素用于治疗过敏性鼻炎的中药制剂，包括细胞学实验、动物体内模型实验、体外细胞模型实验和动物治疗实验，细胞学实验的实验内容主要包括鼻腔黏膜细胞吞噬实验、检测鼻腔黏膜细胞活性实验和鼻腔黏膜细胞功能极化实验，动物体内模型实验的内容为：将SD大鼠，随机分为正常对照组、过敏性鼻炎造模组和过敏性鼻炎造模治疗组，在造模前，对治疗组动物模型鼻腔黏膜取材，取大鼠静脉血，通过对鼻腔黏膜形态学及血清炎性指标、自噬指标进行评估，给与造模大鼠辛夷脂素制剂(50mg/Kg)滴鼻7天后，对治疗组动物模型断头处死后取材，留取静脉血，观察鼻腔黏膜的炎症调控，并取鼻腔黏膜组织行病理学检查，观察造模组和治疗组鼻腔黏膜形态学改变。

在一个优选的方案中，鼻腔黏膜细胞吞噬实验：观察鼻腔黏膜细胞对辛夷脂素制剂的吞噬情况及其在细胞内的稳定情况，检测鼻腔黏膜细胞活性实验：鼻腔黏膜细胞与不同浓度的辛夷脂素制剂溶液孵育，在酶联免疫监测仪上测定各孔光吸收值，记录结果，以时间为横坐标，吸光值为纵坐标绘制细胞生长曲线，鼻腔黏膜细胞功能极化实验：鼻腔黏膜细胞的表型和功能，对比正常鼻腔黏膜细胞和炎症模型，观察辛夷脂素制剂作用后的鼻腔黏膜细胞的形态和炎症因子及自噬蛋白表达。

在一个优选的方案中，体外细胞模型实验的具体内容包括有体外过敏性鼻炎细胞模型构建、小胶质细胞的凋亡检测和动物治疗实验，体外过敏性鼻炎细胞模型构建具体包括以下内容：在37℃、5％CO

在一个优选的方案中，小胶质细胞的凋亡检测包括以下内容：取对数生长期的鼻腔黏膜上皮细胞制成细胞悬液，接种于96孔培养板，待24h后，加入含不同药物的无FBS培养基，实验细胞设为：1)正常对照组，2)OVA模型组，3)OVA+辛夷脂素治疗组，通过检测细胞活性和凋亡情况，观察药物的抗炎作用，检测细胞活性和凋亡情况的方法包括有TUNEL检测方法、Westernblot检测方法和ELISA法，TUNEL检测方法：处理24h后，吸去培养基，PBS洗3次，4％多聚甲醛固定10min，PBS洗3次；滴加0.1％TritonX-100，冰浴2min；每个样品滴加50μLTUNEL检测液，37℃避光孵育60min，PBS洗3次；甘油封片后荧光显微镜下观察、拍照，Westernblot检测方法：鼻腔黏膜细胞分组进行不同药物处理后，提取细胞总蛋白，用BCA试剂盒对蛋白样品定量，取等量蛋白20μg上样于12％的聚丙烯酰胺凝胶，以120mV恒压电泳1h，200mA恒流转膜50min，膜于含5％20mL脱脂奶粉的TBST封闭液室温封闭1.5h，加一抗(1：10000)4℃过夜，TBST洗膜10min×3次，加HRP标记的二抗(1：10000)室温1h，TBST洗膜10min×3次，加电化学发光试剂(ECL)，X胶片曝光，洗片，用分析软件进行定量分析，以和β-actin的比值代表目的蛋白TNF-α、IL-4和LC3的相对含量，ELISA法：取对数生长期的鼻腔黏膜上皮细胞制成细胞悬液,接种于6孔培养板(105/孔)，48h后，加入不同药物处理后，继续培养24h，收集细胞上清液,一氧化氮(NO)一步法试剂盒检测细胞上清液中NO的含量，ELISA试剂盒检测细胞上清液中TNF-α和IL-4和LC3的相对含量。

在一个优选的方案中，动物治疗实验具体包括以下内容：建立大鼠AR模型，取质量250g左右的健康雄性SD大鼠，用30mgOVA作抗原，氢氧化铝[Al(OH)

由上可知，本发明提供的辛夷脂素用于治疗过敏性鼻炎的中药制剂应用卵白蛋白刺激大鼠鼻腔黏膜制备过敏性鼻炎动物模型，黄花蒿过敏原刺激大鼠鼻腔黏膜，应用辛夷脂素制剂滴鼻治疗观察其鼻腔黏膜形态学变化及血清特异性炎性因子变化。本研究通过动物实验进一步验证辛夷脂素对过敏性鼻炎大鼠模型具有治疗作用，为过敏性鼻炎的针对性治疗提供参考的技术效果。

附图说明

图1为本发明提出的一种辛夷脂素用于治疗过敏性鼻炎的中药制剂的整体结构示意图。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。

一种辛夷脂素用于治疗过敏性鼻炎的中药制剂，包括细胞学实验、动物体内模型实验、体外细胞模型实验和动物治疗实验，所述细胞学实验的实验内容主要包括鼻腔黏膜细胞吞噬实验、检测鼻腔黏膜细胞活性实验和鼻腔黏膜细胞功能极化实验，所述动物体内模型实验的内容为：将SD大鼠，随机分为正常对照组、过敏性鼻炎造模组和过敏性鼻炎造模治疗组，在造模前，对治疗组动物模型鼻腔黏膜取材，取大鼠静脉血，通过对鼻腔黏膜形态学及血清炎性指标、自噬指标进行评估，给与造模大鼠辛夷脂素制剂(50mg/Kg)滴鼻7天后，对治疗组动物模型断头处死后取材，留取静脉血，观察鼻腔黏膜的炎症调控，并取鼻腔黏膜组织行病理学检查，观察造模组和治疗组鼻腔黏膜形态学改变；

结合过敏性鼻炎患者一般情况、体格检查、鼻内镜检查及蒿属花粉皮肤点刺实验及血清学检测结果，分析患者血清炎性因子IL-4、TNF-α及自噬蛋白LC3表达水平的内容。本研究拟通过收集过敏性鼻炎患者一般信息及明确蒿属花粉致敏，并对患者血清炎性因子IL-4、TNF-α及自噬蛋白LC3表达水平进行进一步分析，明确炎性因子及自噬蛋白在蒿属花粉特异性过敏原致敏病程中的表达水平并提出致敏可能机制。

在一个优选的实施方式中，所述鼻腔黏膜细胞吞噬实验：观察鼻腔黏膜细胞对辛夷脂素制剂的吞噬情况及其在细胞内的稳定情况。

在一个优选的实施方式中，所述检测鼻腔黏膜细胞活性实验：鼻腔黏膜细胞与不同浓度的辛夷脂素制剂溶液孵育，在酶联免疫监测仪上测定各孔光吸收值，记录结果，以时间为横坐标，吸光值为纵坐标绘制细胞生长曲线。

在一个优选的实施方式中，述鼻腔黏膜细胞功能极化实验：鼻腔黏膜细胞的表型和功能，对比正常鼻腔黏膜细胞和炎症模型，观察辛夷脂素制剂作用后的鼻腔黏膜细胞的形态和炎症因子及自噬蛋白表达。

在一个优选的实施方式中，所述体外细胞模型实验的具体内容包括有体外过敏性鼻炎细胞模型构建、小胶质细胞的凋亡检测和动物治疗实验，所述体外过敏性鼻炎细胞模型构建具体包括以下内容：在37℃、5％CO

在一个优选的实施方式中，所述小胶质细胞的凋亡检测包括以下内容：取对数生长期的鼻腔黏膜上皮细胞制成细胞悬液，接种于96孔培养板，待24h后，加入含不同药物的无FBS培养基，实验细胞设为：1)正常对照组，2)OVA模型组，3)OVA+辛夷脂素治疗组，通过检测细胞活性和凋亡情况，观察药物的抗炎作用。

在一个优选的实施方式中，所述检测细胞活性和凋亡情况的方法包括有TUNEL检测方法、Westernblot检测方法和ELISA法，所述TUNEL检测方法：处理24h后，吸去培养基，PBS洗3次，4％多聚甲醛固定10min，PBS洗3次；滴加0.1％TritonX-100，冰浴2min；每个样品滴加50μLTUNEL检测液，37℃避光孵育60min，PBS洗3次；甘油封片后荧光显微镜下观察、拍照。

在一个优选的实施方式中，所述Westernblot检测方法：鼻腔黏膜细胞分组进行不同药物处理后，提取细胞总蛋白，用BCA试剂盒对蛋白样品定量，取等量蛋白20μg上样于12％的聚丙烯酰胺凝胶，以120mV恒压电泳1h，200mA恒流转膜50min，膜于含5％20mL脱脂奶粉的TBST封闭液室温封闭1.5h，加一抗(1：10000)4℃过夜，TBST洗膜10min×3次，加HRP标记的二抗(1：10000)室温1h，TBST洗膜10min×3次，加电化学发光试剂(ECL)，X胶片曝光，洗片，用分析软件进行定量分析，以和β-actin的比值代表目的蛋白TNF-α、IL-4和LC3的相对含量。

在一个优选的实施方式中，所述ELISA法：取对数生长期的鼻腔黏膜上皮细胞制成细胞悬液,接种于6孔培养板(105/孔)，48h后，加入不同药物处理后，继续培养24h，收集细胞上清液,一氧化氮(NO)一步法试剂盒检测细胞上清液中NO的含量，ELISA试剂盒检测细胞上清液中TNF-α和IL-4和LC3的相对含量。

在一个优选的实施方式中，所述动物治疗实验具体包括以下内容：建立大鼠AR模型，取质量250g左右的健康雄性SD大鼠，用30mgOVA作抗原，氢氧化铝[Al(OH)

本发明构建了基于AR动物模型的药物评价方法，通过局部给药缓解AR技术结合诊疗一体化，可有效提高鼻腔黏膜细胞抗过敏功能活化，有效助益鼻腔功能恢复。

以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。