嵌合受体多肽及其用途

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技术领域

本发明涉及包含细胞外靶标结合结构域、细胞外T细胞受体(TCR)结合结构域、跨膜结构域、和/或细胞内信号传导结构域的嵌合受体多肽。

背景技术

所有T细胞的发育和功能都取决于其抗原受体。T细胞受体(TCR)是多蛋白复合物，包含两个功能不同的模块：配体结合模块和信号传递模块。配体结合模块由两条可变多肽链(TCRα和TCRβ)构成，这两条可变多肽链形成共价连接的异二聚体，并负责TCR的配体特异性。TCR复合物的信号传递模块由恒定多肽链构成，这些恒定多肽链包括CD3ε、CD3γ、CD3δ和ζ。其中，CD3ε、CD3γ和CD3δ形成非共价连接的CD3εγ和CD3εδ异二聚体，而ζ形成共价连接的ζζ同二聚体。TCR复合物的表面表达需要完全组装的一组复合物亚基。组装开始于在内质网中形成CD3εδ和CD3εγ异二聚体。然后它们分别与TCRα和TCRβ结合，以产生中间复合物。ζζ同二聚体是要连接的最后一个亚基，并且在其结合后，整个TCR复合物被转运至质膜(Klausner等人,(1990)；Exley等人,(1991)；Dave等人,(1997)；Marie-Cardine和Schraven,(1999)；Kane等人,(2000)；Matthew等人,(2004))。

与TCRαβ结合的pMHC通过CD3信号传导单元传递到细胞中，其中涉及TCR-CD3聚簇和构象变化。许多实验已经显示，T细胞激活涉及一连串TCR介导的信号，这些信号由位于CD3链的胞内尾区的三个不同的细胞内信号传导基序(CD3ζζ、CD3εγ和CD3εδ)进行调节(Sun等人,J Immunol(185),(2010))。使用嵌合分子的研究表明，TCR复合物的所有信号传导链的胞内尾区可以独立地转导导致细胞毒性和/或细胞因子产生的信号，而绕过了TCR的αβ识别方式。然而，以前有报道称，仅通过CD3ζ链的信号不足以引发静息的T淋巴细胞(Thomas等人,J.Exp.Med.,1995)，并且小鼠中突变的CD3ε信号传导结构域显示出不完整的T细胞功能(Matthew等人,J Immunol(193),2014)。因此，CD3εγ、CD3εδ和ζζ链彼此互补，这有助于T细胞功能，如协同效应(Borroto等人,J Immunol(163),(1999))。

嵌合抗原受体(CAR)是模块化的融合蛋白，该融合蛋白包含结合结构域、间隔子结构域、跨膜结构域和含有与一个或两个共刺激分子连接的CD3ζ的细胞内信号传导结构域。相比最初仅涉及CD3ζ信号传导结构域(称为“第一代CAR”)的组成，CAR结构已经发生了显著变化。此后，为了增强T细胞持久性和增殖，增加了共刺激末端结构域，从而产生第二代(例如，CD3ζ加41BB或CD28信号传导结构域)和第三代(例如，CD3ζ加41BB和CD28信号传导结构域)CAR。

已证明CAR T细胞的过继性转移在治疗血液性肿瘤中取得了显著的成功；显著地，正在探索CD19 CAR在治疗白血病(Gill,S等人,Blood Rev,(2015))以及淋巴瘤和骨髓瘤患者的适应症中的用途。越来越多的临床试验聚焦于实体瘤。令人遗憾的是，临床结果远没有那么鼓舞人心。迄今为止，已经报道的两个最积极的试验是使用GD2 CAR靶向神经母细胞瘤(11名患者中有3名完全缓解)(Louis等人,Blood(118),(2011))和使用HER2 CAR用于肉瘤(17名患者中有4名显示稳定疾病)(Ahmed等人,J Clin Oncol(33),(2015))。

已经提出，患者血清中的不良的运输、有限的持久性和T细胞抑制活性导致了观察到的功效的缺乏(Kershaw等人Clin.Cancer Res(12),(2006))。预期一些装甲CAR-T设计(armored CAR-T design)(组成型分泌免疫检查点抑制剂IL-12等)通过更好的T细胞活性或更好的细胞向肿瘤运输来增强抗肿瘤功效(Oladapo等人,Nature scientific reports,(2017))。然而，提高具有更好的细胞杀伤效果、体内持久性和对肿瘤微环境的更好的耐受性的CAR T细胞的综合功能的新设计仍然是核心要求。

T细胞介导的免疫是发展抗原(Ag)特异性T淋巴细胞以消除恶性细胞的自适应过程。近年来，免疫学和肿瘤生物学的基本改进已导致基于细胞的免疫疗法领域的显著进展。例如，近年来已经开发出一种有前途的方法以使T细胞参与癌症靶向免疫疗法。这种新方法被称为嵌合抗原受体T细胞疗法(CAR-T)。配备CAR的T细胞可以被重定向，以攻击多种细胞，包括与T细胞上的T细胞受体(TCR)的主要组织相容性复合体(MHC)类型不匹配但表达靶细胞表面抗原的那些细胞。已经进行了一些尝试以工程改造具有抗体特异性的TCR分子。参见，例如，WO 2015/117229和WO 2016/187349。

目前的CAR-T和TCR-T方法的一个最显著的不良影响是细胞因子释放综合征(CRS)或细胞因子风暴。在没有目前的CAR-T和TCR-T的肿瘤抗原(抗原非依赖性信号转导(tonicsignaling))的情况下，基础信号传导可能是重要的，这可以增加T细胞的分化和衰竭，并限制其效力。由于抗原非依赖性信号传导，即使在没有刺激的情况下，CAR-T和TCR-T细胞也会表现出细胞因子的产生。

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发明内容

在一方面，本发明提供了嵌合受体多肽(在本文中也称为“STS多肽”)，其包含：a)细胞外靶标结合结构域(例如，抗BCMA sdAb)；b)细胞外TCR结合结构域(例如，抗CD3 scFv或sdAb、或抗TCR scFv)；c)跨膜结构域；和d)任选地细胞内结构域，其中该跨膜结构域和/或细胞内结构域包含选自下组的TCR亚基的跨膜和/或细胞内结构域，该组由以下组成：CD3ε、CD3γ、CD3δ、TCRα、TCRβ、TCRγ、和TCRδ。在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其包含：a)细胞外靶标结合结构域(例如，抗BCMA sdAb)；b)细胞外TCR结合结构域(例如，抗CD3scFv或sdAb、或抗TCR scFv)；c)包含第一TCR亚基的跨膜结构域的跨膜结构域；和d)任选地，包含第二TCR亚基的细胞内结构域的细胞内结构域，其中该第一TCR亚基和该第二TCR亚基均选自由以下组成的组：CD3ε、CD3γ、CD3δ、TCRα、TCRβ、TCRγ、和TCRδ。

根据上述任一实施例，在一些实施例中，细胞外TCR结合结构域包含特异性识别选自下组的TCR亚基(例如，TCR亚基的细胞外结构域)的TCR抗原结合结构域(例如，sdAb、scFv)，该组由以下组成：TCRα、TCRβ、TCRγ、TCRδ、CD3ε、CD3δ、CD3γ、和CD3ζ，如CD3ε或TCRγ/δ。在一些实施例中，TCR抗原结合结构域是单链Fv(scFv；例如，抗CD3 scFv或抗TCRscFv)或单域抗体(sdAb；例如，抗CD3 sdAb)。在一些实施例中，细胞外TCR结合结构域包含两个或更多个TCR抗原结合结构域(例如，scFv、sdAb)，如串联排列的两个或更多个TCR抗原结合结构域。在一些实施例中，TCR抗原结合结构域是包含SEQ ID NO:22或23的氨基酸序列的抗CD3 sdAb。在一些实施例中，TCR抗原结合结构域是包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的抗CD3 scFv。在一些实施例中，TCR抗原结合结构域是包含SEQ ID NO:27的氨基酸序列的抗TCR scFv。

根据上述任一实施例，在一些实施例中，第一TCR亚基和第二TCR亚基均选自由以下组成的组：TCRα、TCRβ、TCRγ、和TCRδ，并且嵌合受体多肽不包含该第一TCR亚基或该第二TCR亚基的细胞外结构域的可变区。在一些实施例中，嵌合受体多肽不包含TCRα、TCRβ、TCRγ、和TCRδ中任一个的细胞外结构域的可变区。

根据上述任一实施例，在一些实施例中，嵌合受体多肽不包含第一TCR亚基或第二TCR亚基的细胞外结构域。在一些实施例中，嵌合受体多肽不包含任何TCR亚基的细胞外结构域。

根据上述任一实施例，在一些实施例中，嵌合受体多肽不包含细胞内共刺激结构域。

根据上述任一实施例，在一些实施例中，第一TCR亚基和第二TCR亚基不同。在一些实施例中，第一TCR亚基是CD3ε。在一些实施例中，第二TCR亚基是CD3ε。

根据上述任一实施例，在一些实施例中，第一TCR亚基和第二TCR亚基相同。在一些实施例中，嵌合受体多肽的跨膜结构域包含CD3ε的跨膜结构域，并且该嵌合受体多肽的细胞内结构域包含CD3ε的细胞内结构域。在一些实施例中，嵌合受体多肽的跨膜结构域包含CD3γ的跨膜结构域，并且该嵌合受体多肽的细胞内结构域包含CD3γ的细胞内结构域。在一些实施例中，嵌合受体多肽的跨膜结构域包含CD3δ的跨膜结构域，并且该嵌合受体多肽的细胞内结构域包含CD3δ的细胞内结构域。在一些实施例中，嵌合受体多肽的跨膜结构域包含TCRα的跨膜结构域，并且该嵌合受体多肽的细胞内结构域包含TCRα的细胞内结构域。在一些实施例中，嵌合受体多肽的跨膜结构域包含TCRβ的跨膜结构域，并且该嵌合受体多肽的细胞内结构域包含TCRβ的细胞内结构域。在一些实施例中，嵌合受体多肽的跨膜结构域包含TCRγ的跨膜结构域，并且该嵌合受体多肽的细胞内结构域包含TCRγ的细胞内结构域。在一些实施例中，嵌合受体多肽的跨膜结构域包含TCRδ的跨膜结构域，并且该嵌合受体多肽的细胞内结构域包含TCRδ的细胞内结构域。

根据上述任一实施例，在一些实施例中，细胞外靶标结合结构域在细胞外TCR结合结构域的N-末端。在一些实施例中，细胞外靶标结合结构域在细胞外TCR结合结构域的C-末端。

根据上述任一实施例，在一些实施例中，细胞外靶标结合结构域包含特异性识别靶抗原(例如，BCMA)的靶抗原结合结构域。在一些实施例中，靶抗原结合结构域是scFv、sdAb(例如，抗BCMA sdAb)、或设计型锚蛋白重复序列蛋白(DARPin)。在一些实施例中，细胞外靶标结合结构域包含两个或更多个靶抗原结合结构域(例如，抗BCMA sdAb)，如串联排列的两个或更多个靶抗原结合结构域。在一些实施例中，两个或更多个靶抗原结合结构域各自特异性识别相同的靶抗原(例如，相同的抗BCMA sdAb)上的相同的表位。在一些实施例中，两个或更多个靶抗原结合结构域各自特异性识别相同的靶抗原上的不同的表位。在一些实施例中，两个或更多个靶抗原结合结构域各自特异性识别不同的靶抗原。

根据上述任一实施例，在一些实施例中，靶抗原选自由以下组成的组：BCMA、NY-ESO-1、VEGFR2、MAGE-A3、AFP、CD4、CD19、CD20、CD22、CD30、CD33、CD38、CD70、CD123、CEA、EGFR(如EGFRvIII)、GD2、GPC-2、GPC-3、HER2、LILRB4、IL-13Rα2、IGF1R、间皮素、PSMA、ROR1、WT1、NKG2D、CLL1、间皮素、TGFaRII、TGFbRII、CCR5、CXCR4、CCR4、HPV相关抗原、EBV相关抗原(如LMP1和LMP2)。在一些实施例中，靶抗原是BCMA。在一些实施例中，靶抗原结合结构域是包含SEQ ID NO:26的氨基酸序列的抗BCMA sdAb。

根据上述任一实施例，在一些实施例中，被TCR抗原结合结构域识别的TCR亚基、第一TCR亚基、和第二TCR亚基都相同。在一些实施例中，被TCR抗原结合结构域识别的TCR亚基与第一TCR亚基或第二TCR亚基不同。

根据上述任一实施例，在一些实施例中，嵌合受体多肽进一步包含连接细胞外靶标结合结构域和细胞外TCR结合结构域的第一接头。在一些实施例中，嵌合受体多肽进一步包含连接细胞外靶标结合结构域和/或细胞外TCR结合结构域和跨膜结构域的第二接头。在一些实施例中，第一接头和/或第二接头是GS接头、α-螺旋接头、甘氨酸-丙氨酸聚合物接头、丙氨酸-丝氨酸聚合物接头、或IgG4-Fc接头。

根据上述任一实施例，在一些实施例中，嵌合受体多肽进一步包含在细胞外靶标结合结构域或细胞外TCR结合结构域的N-末端处的信号肽。

根据上述任一实施例，在一些实施例中，嵌合受体多肽进一步包含在该嵌合受体多肽的跨膜结构域N-末端的铰链区(例如，CD8铰链区)。在一些实施例中，该铰链区包含SEQID NO:31的氨基酸序列。

根据上述任一实施例，在一些实施例中，嵌合受体多肽从N-末端到C-末端包含以下(或基本上由其组成或由其组成)：a)任选的信号肽-细胞外靶标结合结构域-任选的第一接头-细胞外TCR结合结构域-任选的第二接头-任选的铰链区-跨膜结构域-细胞内结构域；或b)任选的信号肽-细胞外TCR结合结构域-任选的第一接头-细胞外靶标结合结构域-任选的第二接头-任选的铰链区-跨膜结构域-细胞内结构域。

根据上述任一实施例，在一些实施例中，嵌合受体多肽从N-末端到C-末端包含以下(或基本上由其组成或由其组成)：任选的信号肽-抗BCMA sdAb-第一接头-抗CD3εscFv-第二接头-没有CD3ε信号肽的全长CD3ε。在一些实施例中，嵌合受体多肽从N-末端到C-末端包含以下(或基本上由其组成或由其组成)：任选的信号肽-抗BCMA sdAb-第一接头-抗CD3εscFv-第二接头-没有CD3γ信号肽的全长CD3γ。在一些实施例中，嵌合受体多肽从N-末端到C-末端包含以下(或基本上由其组成或由其组成)：任选的信号肽-抗BCMA sdAb-第一接头-抗CD3εscFv-第二接头-没有CD3δ信号肽的全长CD3δ。在一些实施例中，嵌合受体多肽从N-末端到C-末端包含以下(或基本上由其组成或由其组成)：任选的信号肽-抗BCMA sdAb-第一接头-抗CD3εscFv-第二接头-CD8铰链区-CD3ε跨膜结构域-CD3ε细胞内结构域。在一些实施例中，嵌合受体多肽从N-末端到C-末端包含以下(或基本上由其组成或由其组成)：任选的信号肽-抗BCMA sdAb-第一接头-抗CD3εscFv-第二接头-CD8铰链区-CD3γ跨膜结构域-CD3γ细胞内结构域。在一些实施例中，嵌合受体多肽从N-末端到C-末端包含以下(或基本上由其组成或由其组成)：任选的信号肽-抗BCMA sdAb-第一接头-抗CD3εscFv-第二接头-CD8铰链区-CD3δ跨膜结构域-CD3δ细胞内结构域。在一些实施例中，嵌合受体多肽从N-末端到C-末端包含以下(或基本上由其组成或由其组成)：任选的信号肽-抗BCMA sdAb-第一接头-抗CD3εscFv-第二接头-TCRα恒定区-TCRα跨膜结构域-TCRα细胞内结构域。在一些实施例中，嵌合受体多肽从N-末端到C-末端包含以下(或基本上由其组成或由其组成)：任选的信号肽-抗BCMA sdAb-第一接头-抗CD3εscFv-第二接头-TCRβ恒定区-TCRβ跨膜结构域-TCRβ细胞内结构域。在一些实施例中，嵌合受体多肽从N-末端到C-末端包含以下(或基本上由其组成或由其组成)：任选的信号肽-抗BCMA sdAb-第一接头-抗CD3εscFv-第二接头-TCRγ恒定区-TCRγ跨膜结构域-TCRγ细胞内结构域。在一些实施例中，嵌合受体多肽从N-末端到C-末端包含以下(或基本上由其组成或由其组成)：任选的信号肽-抗BCMAsdAb-第一接头-抗CD3εscFv-第二接头-TCRδ恒定区-TCRδ跨膜结构域-TCRδ细胞内结构域。在一些实施例中，嵌合受体多肽从N-末端到C-末端包含以下(或基本上由其组成或由其组成)：任选的信号肽-抗BCMA sdAb-第一接头-抗CD3εscFv-第二接头-TCRα跨膜结构域-TCRα细胞内结构域。在一些实施例中，嵌合受体多肽从N-末端到C-末端包含以下(或基本上由其组成或由其组成)：任选的信号肽-抗BCMA sdAb-第一接头-抗CD3εscFv-第二接头-TCRβ跨膜结构域-TCRβ细胞内结构域。在一些实施例中，嵌合受体多肽从N-末端到C-末端包含以下(或基本上由其组成或由其组成)：任选的信号肽-抗BCMA sdAb-第一接头-抗CD3εscFv-第二接头-TCRγ跨膜结构域-TCRγ细胞内结构域。在一些实施例中，嵌合受体多肽从N-末端到C-末端包含以下(或基本上由其组成或由其组成)：任选的信号肽-抗BCMA sdAb-第一接头-抗CD3εscFv-第二接头-TCRδ跨膜结构域-TCRδ细胞内结构域。在一些实施例中，嵌合受体多肽从N-末端到C-末端包含以下(或基本上由其组成或由其组成)：任选的信号肽-抗BCMA sdAb-第一接头-抗TCR scFv-第二接头-TCRα恒定区-TCRα跨膜结构域-TCRα细胞内结构域。在一些实施例中，嵌合受体多肽从N-末端到C-末端包含以下(或基本上由其组成或由其组成)：任选的信号肽-抗BCMA sdAb-第一接头-抗TCR scFv-第二接头-TCRβ恒定区-TCRβ跨膜结构域-TCRβ细胞内结构域。在一些实施例中，嵌合受体多肽从N-末端到C-末端包含以下(或基本上由其组成或由其组成)：任选的信号肽-抗BCMA sdAb-第一接头-抗TCR scFv-第二接头-TCRγ恒定区-TCRγ跨膜结构域-TCRγ细胞内结构域。在一些实施例中，嵌合受体多肽从N-末端到C-末端包含以下(或基本上由其组成或由其组成)：任选的信号肽-抗BCMA sdAb-第一接头-抗TCR scFv-第二接头-TCRδ恒定区-TCRδ跨膜结构域-TCRδ细胞内结构域。在一些实施例中，嵌合受体多肽从N-末端到C-末端包含以下(或基本上由其组成或由其组成)：任选的信号肽-第一抗BCMA sdAb-第一接头-第二抗BCMA sdAb-第二接头-抗CD3εscFv-第三接头-没有CD3ε信号肽的全长CD3ε。

根据上述任一实施例，在一些实施例中，第一、第二、和/或第三接头包含SEQ IDNO:1-21、67、和68中任一个的序列。

在另一方面，提供了编码上述任一嵌合受体多肽的分离的核酸。还提供了包含本文所述的任一编码嵌合受体多肽的核酸的核酸载体。在一些实施例中，该核酸载体包含通过一个或多个连接序列连接的两个或更多个本文所述的任一编码嵌合受体多肽的核酸。在一些实施例中，该连接序列选自由以下组成的组：编码P2A、T2A、E2A、F2A、BmCPV 2A、和BmIFV 2A的核酸、以及内部核糖体进入位点(IRES)序列。在一些实施例中，核酸载体包含编码从N-末端到C-末端的核酸：任选的第一信号肽-第一抗BCMA sdAb-第一接头-第一抗CD3εscFv-第二接头-TCRα恒定区-TCRα跨膜结构域-TCRα细胞内结构域-P2A-任选的第二信号肽-第二抗BCMA sdAb-第三接头-第二抗CD3εscFv-第四接头-TCRβ恒定区-TCRβ跨膜结构域-TCRβ细胞内结构域。在一些实施例中，核酸载体包含编码从N-末端到C-末端的核酸：任选的第一信号肽-第一抗BCMA sdAb-第一接头-第一抗CD3εscFv-第二接头-TCRγ恒定区-TCRγ跨膜结构域-TCRγ细胞内结构域-P2A-任选的第二信号肽-第二抗BCMA sdAb-第三接头-第二抗CD3εscFv-第四接头-TCRδ恒定区-TCRδ跨膜结构域-TCRδ细胞内结构域。在一些实施例中，核酸载体包含编码从N-末端到C-末端的核酸：任选的第一信号肽-第一抗BCMAsdAb-第一接头-第一抗CD3εscFv-第二接头-TCRα跨膜结构域-TCRα细胞内结构域-P2A-任选的第二信号肽-第二抗BCMA sdAb-第三接头-第二抗CD3εscFv-第四接头-TCRβ跨膜结构域-TCRβ细胞内结构域。在一些实施例中，核酸载体包含编码从N-末端到C-末端的核酸：任选的第一信号肽-第一抗BCMA sdAb-第一接头-第一抗CD3εscFv-第二接头-TCRγ跨膜结构域-TCRγ细胞内结构域-P2A-任选的第二信号肽-第二抗BCMA sdAb-第三接头-第二抗CD3εscFv-第四接头-TCRδ跨膜结构域-TCRδ细胞内结构域。在一些实施例中，核酸载体包含编码从N-末端到C-末端的核酸：任选的第一信号肽-第一抗BCMA sdAb-第一接头-第一抗TCRscFv-第二接头-TCRγ恒定区-TCRγ跨膜结构域-TCRγ细胞内结构域-P2A-任选的第二信号肽-第二抗BCMA sdAb-第三接头-第二抗TCR scFv-第四接头-TCRδ恒定区-TCRδ跨膜结构域-TCRδ细胞内结构域。

在另一方面，提供了分离的免疫细胞，其包含上述一种或多种嵌合受体多肽、上述一种或多种核酸、或上述一种或多种核酸载体。在一些实施例中，分离的免疫细胞包含上述两种或更多种嵌合受体多肽。在一些实施例中，提供了分离的免疫细胞，其包含上述任一核酸或核酸载体。在一些实施例中，分离的免疫细胞选自由以下组成的组：Tαβ细胞、Tγδ细胞、效应T细胞、记忆T细胞、细胞毒性T细胞、辅助T细胞、自然杀伤T(NKT)细胞、调节性T细胞(Treg)、肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)。在一些实施例中，分离的免疫细胞是T细胞(例如，效应T细胞)。在一些实施例中，分离的免疫细胞进一步包含嵌合抗原受体(CAR)和/或工程化的TCR。

在另一方面，提供了药物组合物，其包含上述任一免疫细胞、和任选的药学上可接受的赋形剂。在一些实施例中，提供了治疗个体(例如，人类)疾病的方法，该方法包括向该个体施用有效量的上述任一免疫细胞、或上述任一药物组合物。在一些实施例中，药物组合物经静脉内、瘤内或皮下施用。在一些实施例中，该疾病是癌症。在一些实施例中，该癌症选自由以下组成的组：急性白血病(包括但不限于急性髓性白血病(AML)、B细胞急性淋巴性白血病(BALL)、T细胞急性淋巴性白血病(TALL)、和急性淋巴性白血病(ALL))、慢性白血病(包括但不限于慢性髓细胞性白血病(CML)和慢性淋巴细胞性白血病(CLL))、多发性骨髓瘤(MM)、骨髓增生异常综合征(MDS)、骨髓增生性肿瘤(MPN)、慢性髓细胞性白血病(CML)、和母细胞性浆细胞样树突状细胞肿瘤(BPDCN)。

还提供了制造本文所述的任一构建体的方法、制品和适合于本文所述方法的试剂盒。

附图说明

图1示出了在T细胞表面表达的嵌合受体多肽的示例性构型，该构型包含靶抗原结合结构域、TCR抗原结合结构域、和CD3ε。如图1所示，不受理论的束缚，嵌合受体多肽可以通过另一个TCR复合物转导TCR信号传导。

图2示出了在T细胞表面表达的嵌合受体多肽的示例性构型，该构型包含靶抗原结合结构域、TCR抗原结合结构域、和CD3γ。如图2所示，不受理论的束缚，嵌合受体多肽可以通过另一个TCR复合物转导TCR信号传导。

图3示出了在T细胞表面表达的嵌合受体多肽的示例性构型，该构型包含靶抗原结合结构域、TCR抗原结合结构域、和CD3δ。如图3所示，不受理论的束缚，嵌合受体多肽可以通过另一个TCR复合物转导TCR信号传导。

图4示出了在T细胞表面表达的嵌合受体多肽的示例性构型，该构型包含靶抗原结合结构域、TCR抗原结合结构域、和TCRα。如图4所示，不受理论的束缚，嵌合受体多肽可以通过另一个TCR复合物转导TCR信号传导。

图5示出了在T细胞表面表达的嵌合受体多肽的示例性构型，该构型包含靶抗原结合结构域、TCR抗原结合结构域、和TCRβ。如图5所示，不受理论的束缚，嵌合受体多肽可以通过另一个TCR复合物转导TCR信号传导。

图6示出了在T细胞表面表达的嵌合受体多肽的示例性构型，该构型包含靶抗原结合结构域、TCR抗原结合结构域、和CD3ε。如图6所示，不受理论的束缚，嵌合受体多肽可以在掺入了嵌合受体多肽的相同的TCR复合物中转导TCR信号传导。

图7示出了在T细胞表面表达的嵌合受体多肽的示例性构型，该构型包含靶抗原结合结构域、TCR抗原结合结构域、以及TCR亚基的跨膜和细胞内结构域(包括CD3ε、CD3γ、CD3δ、TCRα、TCRβ、TCRγ、和TCRδ)，没有TCR亚基的细胞外结构域。如图7所示，不受理论的束缚，两个嵌合受体多肽可以与彼此二聚化并一起作用以转导TCR信号传导，并且两个嵌合受体多肽上的抗原结合结构域可以相同或不同。

图8示出了在T细胞表面表达的嵌合受体多肽的示例性构型，该构型包含靶抗原结合结构域、包含串联排列的两个TCR抗原结合结构域的细胞外TCR结合结构域、以及TCR亚基的跨膜和细胞内结构域(包括CD3ε、CD3γ、CD3δ、TCRα、TCRβ、TCRγ、和TCRδ)，没有TCR亚基的细胞外结构域。如图8所示，不受理论的束缚，两个嵌合受体多肽可以与彼此二聚化并一起作用以转导TCR信号传导，两个嵌合受体多肽上的抗原结合结构域可以相同或不同，并且两个嵌合受体多肽上的TCR抗原结合结构域可以相同或不同。

图9示出了在T细胞表面表达的嵌合受体多肽的示例性构型，该构型包含含有两个串联排列的靶抗原结合结构域(其可以相同或不同)的细胞外靶标结合结构域、TCR抗原结合结构域、以及TCR亚基的跨膜和细胞内结构域(包括CD3ε、CD3γ、CD3δ、TCRα、TCRβ、TCRγ、和TCRδ)，没有TCR亚基的细胞外结构域。如图9所示，不受理论的束缚，两个嵌合受体多肽可以与彼此二聚化并一起作用以转导TCR信号传导，并且两个嵌合受体多肽上的靶抗原结合结构域可以相同或不同，并且两个嵌合受体多肽上的TCR抗原结合结构域可以相同或不同。

图10A-10B提供了RPMI8226细胞上各种STS-T细胞(表达STS多肽的T细胞)的细胞杀伤测定结果(图10A)和IFNγ分泌结果(图10B)，这些STS-T细胞包括表达sdAbBCMA-抗CD3scFv-e、sdAbBCMA-抗CD3 scFv-g、和sdAb BCMA-抗CD3 scFv-d的STS-T细胞。未转染的T细胞(UnT)作为对照。

图11A-11B提供了RPMI8226细胞上各种STS-T细胞的细胞杀伤测定结果(图11A)和IFNγ分泌结果(图11B)，这些STS-T细胞包括表达sdAbBCMA-抗CD3 scFv-se、sdAbBCMA-抗CD3 scFv-sg、和sdAbBCMA-抗CD3 scFv-sd的STS-T细胞。未转染的T细胞(UnT)作为对照。

图12示出了外源受体、内源TCR、和内源CD3在未转染的T细胞(UnT)、用sdAbBCMA-抗CD3 scFv-sd构建体转染的T细胞上的表达。

图13示出了H929/Luc细胞上表达sdAbBCMA-抗TCR Ab-tgC/tdC的STS-T细胞的细胞杀伤测定结果。未转染的T细胞(UnT)作为对照。

图14示出了CHO/BCMA细胞上表达sdAbBCMA-抗CD3 scFv-sta/stb的STS-T细胞的细胞杀伤测定结果。未转染的T细胞(UnT)作为对照。

图15示出了CHO/BCMA细胞上表达串联的sdAbBCMA-抗CD3 scFv-e的STS-T细胞的细胞杀伤测定结果。未转染的T细胞(UnT)作为对照。

图16A示出了编码抗BCMA-抗CD3 scFv-CD3ε的载体构建体。图16B示出了编码抗BCMA-抗CD3 scFv-se的载体构建体。图16C示出了编码BCMA-抗TCR-tgC/tdC的载体构建体。图16D示出了编码抗BCMA-抗CD3 scFv-sta/stb的载体构建体。

具体实施方式

本发明提供了嵌合受体多肽(在本文中也称为“STS多肽”)，其包含：a)细胞外靶标结合结构域；b)细胞外TCR结合结构域；c)跨膜结构域；和d)细胞内结构域，其中该跨膜结构域和/或该细胞内结构域包含选自下组的TCR亚基的跨膜和/或细胞内结构域，该组由以下组成：CD3ε、CD3γ、CD3δ、TCRα、TCRβ、TCRγ、和TCRδ。还提供了编码STS多肽的分离的核酸和载体、表达STS多肽的工程化的免疫细胞(例如，T细胞)、其药物组合物、以及此类STS多肽或其药物组合物用于治疗疾病(如癌症)的用途。

当在免疫细胞，例如，T细胞(如效应T细胞)中表达时，STS多肽显示出显著的细胞杀伤效果。令人惊奇的是，尽管CD3ε、CD3γ、CD3δ、TCRα、TCRβ、TCRγ、和TCRδ的细胞内结构域通常被认为缺乏信号传导结构域或在没有共刺激的情况下不足以刺激T细胞，表达STS多肽(被称为“STS-T细胞”)的工程化的T细胞的细胞杀伤效果不需要STS多肽中细胞内共刺激结构域的存在。此外，即使STS多肽不包含TCR亚基的任何细胞外结构域，也能观察到细胞杀伤效果，而TCR亚基被认为是向一个或多个细胞内结构域传递细胞外信号所必需的。与先前的构建体如嵌合抗原受体(CAR)武装的(armed)T细胞(CAR-T)相比，STS-T细胞在抗原刺激下具有较低的细胞因子释放，具有改善的离体扩增特性，并在施用后在体内持续更长的时间。此外，与工程化的T细胞受体(工程化的TCR)和T细胞抗原偶联剂(TAC)平台(例如，工程化的TCR-T细胞、TAC-T细胞)不同，STS-T细胞上的内源TCR和CD3分子在细胞表面并没有像人们预期的那样，在表达TCR亚基的结合结构域(例如，抗CD3εscFv或sdAb、或抗TCR scFv)的细胞中下调。

不受理论束缚，STS多肽的细胞外靶标结合结构域能够特异性结合靶抗原(例如，BCMA)，并且将表达这些STS多肽的免疫细胞(例如，T细胞)带到靶细胞(例如，肿瘤细胞)的附近。细胞外TCR结合结构域能够结合免疫细胞(例如，T细胞)表面的TCR复合物中的TCR亚基(例如，TCR亚基的细胞外结构域)，并通过内源TCR复合物传递信号。另外或可替代地，可以将STS多肽与一个或多个内源TCR亚基一起整合到TCR复合物中，并在相同的TCR复合物中转导信号。STS多肽的各种构型和可能的作用机理在图1-9中示出。

因此，本申请在一方面提供了嵌合受体多肽，其包含细胞外靶标结合结构域、细胞外TCR结合结构域、跨膜和细胞内结构域，其中该跨膜结构域和/或细胞内结构域包含选自下组的TCR亚基的跨膜结构域和/或细胞内结构域，该组由以下组成：CD3ε、CD3γ、CD3δ、TCRα、TCRβ、TCRγ、和TCRδ。还提供了编码此嵌合受体多肽的核酸、和包含此类核酸的核酸载体。

在另一方面，提供了在其表面表达嵌合受体多肽的免疫细胞，该嵌合受体多肽包含细胞外靶标结合结构域、细胞外TCR结合结构域、跨膜和细胞内结构域，其中该跨膜结构域和/或细胞内结构域包含选自下组的TCR亚基的跨膜结构域和/或细胞内结构域，该组由以下组成：CD3ε、CD3γ、CD3δ、TCRα、TCRβ、TCRγ、和TCRδ。

还提供了用于治疗目的制造和使用表达嵌合受体多肽的免疫细胞的方法，以及对于此类方法有用的试剂盒和制品。

定义

如本文所用的，术语“治疗”是指被设计为在临床病理学过程中改变正被治疗的个体或细胞的自然过程的临床干预。所希望的治疗效果包括降低疾病进展速度、改善或减轻疾病状态以及缓解或改善预后。例如，如果与癌症相关的一种或多种症状得到减轻或消除，包括但不限于减少癌细胞的增殖(或破坏)、减少疾病引起的症状、提高患有疾病的患者的生活质量、减少治疗疾病所需的其他药物的剂量、和/或延长个体的存活期，那么个体的癌症就被成功地“治疗”了。

如本文所用的，“延迟疾病的进展”是指推迟、阻碍、减缓、减慢、稳定、和/或延缓疾病(如癌症)的发展。该延迟可以具有不同的时间长度，其取决于疾病的历史和/或被治疗的个体。对本领域技术人员显而易见的是，足够的或显著的延迟实际上可以包括预防，因为所述个体没有患上所述疾病。例如，可能延迟晚期癌症(例如转移的发展)。

“有效量”是实现可测量的改善特定的病症所需要的至少最小量。本文的有效量可以根据因素(如患者的疾病状态、年龄、性别和重量)以及抗体在个体中引起所希望的应答的能力等因素而变化。有效量也是治疗有益效果超过治疗的任何毒性或有害作用的量。对于治疗用途，有益或所希望的结果包括临床结果，如减少疾病引起的一种或多种症状、提高患有疾病的患者的生活质量、减少治疗疾病所需的其他药物的剂量、增强另一种药物的效果(如通过靶向)、延迟疾病的进展、和/或延长存活期。在癌症或肿瘤的情况下，有效量的药物可能具有以下效果：减少癌细胞的数量；减小肿瘤大小；抑制(即，在一定程度上减慢或理想地停止)癌细胞浸润到外周器官中；抑制(即，在一定程度上减慢并且理想地停止)肿瘤转移；在一定程度上抑制肿瘤生长；和/或在一定程度上缓解与障碍相关的一种或多种症状。

如本文所用的，“与……结合”是指施用除一种治疗方式之外的另一种治疗方式。同样地，“与……结合”是指在向个体施用一种治疗方式之前、之中或之后，施用另一种治疗方式。

用于治疗目的的“受试者”或“个体”是指分类为哺乳动物的任何动物，包括人、家畜和农畜、以及动物园、运动或宠物动物，如狗、马、猫、牛等。

本文中术语“抗体”以最广泛的含义使用，并且特别地涵盖单克隆抗体(包括全长单克隆抗体)、多特异性抗体(例如，双特异性抗体)、和抗体片段，只要它们表现出所希望的生物活性即可。

本文中可互换使用的术语“天然抗体”、“全长抗体”“完整抗体”和“整个抗体(whole antibody)”是指处于其基本上完整形式的抗体，而不是如下定义的抗体片段。这些术语特别地是指具有含有Fc区的重链的抗体。天然抗体通常是约150,000道尔顿的异四聚体糖蛋白，由两条相同的轻(L)链和两条相同的重(H)链构成。每条轻链经一个共价二硫键与重链连接，而二硫键的数目视不同的免疫球蛋白同种型的重链而不同。每条重链和轻链还具有规则间隔的链内二硫桥。每条重链在一端处具有可变结构域(V

术语“恒定结构域”是指免疫球蛋白分子的一部分，该免疫球蛋白分子的一部分相对于免疫球蛋白的另一部分，即可变结构域，具有更保守的氨基酸序列，该氨基酸序列含有抗原结合位点。恒定结构域包含重链的C

抗体的“可变区”或“可变结构域”是指该抗体的重链或轻链的氨基末端结构域。重链的可变结构域可以被称为“V

术语“可变”是指可变结构域的某些部分在抗体之间序列上广泛地不同并且针对其特定抗原用于每个特定抗体的结合及特异性这一事实。然而，可变性不是均匀分布贯穿于抗体的可变结构域中。它集中于轻链和重链可变结构域中称为高变区(HVR)的三个区段。可变结构域的更保守的部分称为框架区(FR)。天然重链和轻链的可变结构域各自包含主要采用β片层构型的四个FR区，其通过三个HVR连接，这三个HVR连接形成连接β片层结构的环，并且在一些情况下形成β片层结构的一部分。每条链中的HVR由FR区维持密切接近地在一起，并且在HVR来自其他链的情况下，对形成抗体的抗原结合位点作出贡献(参见Kabat等人,Sequences of Proteins of Immunological Interest,第5版,National Instituteof Health,Bethesda,Md.(1991))。恒定结构域不直接参与抗体与抗原的结合，但表现出各种免疫效应子功能，如抗体参与抗体依赖性细胞毒性(ADCC)。

任何哺乳动物物种的抗体(免疫球蛋白)的“轻链”都可以根据其恒定结构域的氨基酸序列指定为两种明显不同的类型之一，分别称为kappa(“κ”)和lambda(“λ”)。

如本文所用的术语IgG“同种型”或“亚类”意指由其恒定区的化学和抗原特征所定义的免疫球蛋白的任何亚类。

根据其重链的恒定结构域的氨基酸序列，可以将抗体(免疫球蛋白)指定为不同类别。存在五个主要类别的免疫球蛋白：IgA、IgD、IgE、IgG、和IgM，并且其中一些可以进一步分为亚类(同种型)，例如，IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1、和IgA2。对应于不同类别的免疫球蛋白的重链恒定结构域分别被称为α、γ、ε、γ、和μ。不同类别的免疫球蛋白的亚基结构和三维构型是熟知的，并且一般在例如，Abbas等人Cellular and Mol.Immunology,第4版(W.B.Saunders,Co.,2000)中有描述。抗体可以是通过该抗体与一种或多种其他蛋白质或肽共价或非共价缔合形成的较大的融合分子的一部分。

本文中可互换使用的术语“全长抗体”“完整抗体”和“整个抗体(wholeantibody)”是指处于其基本上完整形式的抗体，而不是如下定义的抗体片段。这些术语特别地是指具有含有Fc区的重链的抗体。

“抗体片段”包含完整抗体的一部分，该完整抗体优选地包含其抗原结合区。在一些实施例中，本文所述的抗体片段是抗原结合片段。抗体片段的实例包括Fab、Fab'、F(ab')

木瓜蛋白酶消化抗体产生了各自具有单一抗原结合位点的两个相同的抗原结合片段(称为“Fab”片段)和残留的“Fc”片段(此名称反映了其易于结晶的能力)。胃蛋白酶处理得到具有两个抗原结合位点的F(ab')

“Fv”是最小抗体片段，其含有完整的抗原结合位点。在一个实施例中，两链Fv种类由紧密非共价缔合的一个重链可变结构域和一个轻链可变结构域的二聚体组成。在单链Fv(scFv)种类中，一个重链可变结构域和一个轻链可变结构域可以通过柔性肽接头共价连接，使得该轻链和重链能够在类似于两链Fv种类的“二聚”结构中缔合。在此构型中，每个可变结构域的三个HVR相互作用以定义VH-VL二聚体表面的抗原结合位点。总之，六个HVR赋予抗体抗原结合特异性。然而，甚至单个可变结构域(或仅包含三个对抗原有特异性的HVR的半个Fv)具有识别并结合抗原的能力，虽然通常以比完整结合位点更低的亲和力进行。

Fab片段含有重链和轻链可变结构域，并且还含有该轻链的恒定结构域和该重链的第一恒定结构域(CH1)。Fab'片段与Fab片段的区别在于在包括来自抗体铰链区的一个或多个半胱氨酸的重链CH1结构域的羧基末端添加几个残基。Fab'-SH是本文对于Fab'的命名，其中恒定结构域的一个或多个半胱氨酸残基携带游离巯基。F(ab')

“单链Fv”或“scFv”抗体片段包含抗体的VH和VL结构域，其中这些结构域存在于单个多肽链中。通常，scFv多肽进一步包含在VH与VL结构域之间的多肽接头，该多肽接头能够使scFv形成抗原结合的所希望的结构。关于scFv的综述，参见例如，Pluckthün,ThePharmacology of Monoclonal Antibodies.Springer Berlin Heidelberg,1994.269-315。

术语“双抗体”是指具有两个抗原结合位点的抗体片段，这些片段包含与同一多肽链中的轻链可变结构域(VL)连接的重链可变结构域(VH)(VH-VL)。通过使用太短而不会允许同一条链上两个结构域之间配对的接头迫使这些结构域与另一条链的互补结构域配对并产生两个抗原结合位点。双抗体可以是二价的或双特异性的。双抗体更全面地描述于，例如，EP 404,097；WO 1993/01161；Hudson等人,Nat.Med.9:129-134(2003)；和Hollinger等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90:6444-6448(1993)。三抗体和四抗体还被描述于Hudson等人,Nat.Med.9:129-134(2003)中。

术语“仅重链抗体”或“HCAb”是指功能性抗体，其包含重链，但缺乏通常在抗体中发现的轻链。已知骆驼科动物(如骆驼、美洲驼、或羊驼)产生HCAb。

术语“单域抗体”或“sdAb”是指由单个单体可变抗体结构域组成的抗体片段。在一些情况下，单域抗体从骆驼科HCAb工程化，并且此类sdAb在本文中称为“纳米抗体”或“V

如本文使用的，术语“单克隆抗体”是指从基本上均一的抗体群体中获得的抗体，例如包含群体的个体的抗体是同一的，除了可以少量存在的可能的突变，例如天然存在的突变。因此，修饰语“单克隆”表示抗体的特征不是离散抗体的混合物。在某些实施例中，此单克隆抗体典型地包括包含与靶标结合的多肽序列的抗体，其中该结合靶标的多肽序列是通过以下方法获得的，该方法包括从多个多肽序列中选择单个靶标结合多肽序列。例如，选择方法可以是从多个克隆(如，杂交瘤克隆、噬菌体克隆、或重组DNA克隆的库)中选择独特的克隆。应当理解，所选择的靶标结合序列可以进一步改变，例如以改善对于靶标的亲和力、人源化靶标结合序列、改善其在细胞培养物中的产量、降低其体内免疫原性、产生多特异性抗体等，并且应当理解包含改变的靶标结合序列的抗体也是本发明的单克隆抗体。与多克隆抗体制剂(其典型地包括针对不同决定簇(表位)的不同抗体)不同，单克隆抗体制剂的每个单克隆抗体针对抗原上的单个决定簇。除了其特异性之外，单克隆抗体制剂的优点还在于它们典型地不被其他疫球蛋白污染。

修饰语“单克隆”指示从基本上均一的抗体群体中获得的抗体的特征，并且不应解释为需要通过任何特定方法产生抗体。例如，根据本发明使用的单克隆抗体可以通过多种技术制造，包括例如，杂交瘤方法(例如，Kohler和Milstein,Nature 256:495-97(1975)；Hongo等人,Hybridoma 14(3):253-260(1995)，Harlow等人,Antibodies：A LaboratoryManual,(Cold Spring Harbor Laboratory Press,2nd ed.1988)；Hammerling等人,Monoclonal Antibodies and T-Cell Hybridomas 563-681(Elsevier,N.Y.,1981))、重组DNA方法(参见例如，美国专利号4,816,567)、噬菌体展示技术(参见例如，Clackson等人,Nature 352:624-628(1991)；Marks等人,J.Mol.Biol.222：581-597(1992)；Sidhu等人,J.Mol.Biol.338(2):299-310(2004)；Lee等人,J.Mol.Biol.340(5):1073-1093(2004)；Fellouse,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 101(34):12467-12472(2004)；和Lee等人,J.Immunol.Methods 284(1-2):119-132(2004))、以及用于在具有人类免疫球蛋白基因座或编码人类免疫球蛋白序列的基因的部分或全部的动物中产生人类或人类样抗体的技术(参见例如，WO 1998/24893；WO 1996/34096；WO 1996/33735；WO 1991/10741；Jakobovits等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90:2551(1993)；Jakobovits等人,Nature 362:255-258(1993)；Bruggemann等人,Year in Immunol.7:33(1993)；美国专利号5,545,807；5,545,806；5,569,825；5,625,126；5,633,425；和5,661,016；Marks等人,Bio/Technology 10:779-783(1992)；Lonberg等人,Nature 368:856-859(1994)；Morrison,Nature 368:812-813(1994)；Fishwild等人,Nature Biotechnol.14:845-851(1996)；Neuberger,NatureBiotechnol.14:826(1996)；和Lonberg和Huszar,Intern.Rev.Immunol.13:65-93(1995))。

本文的单克隆抗体特别地包括“嵌合”抗体，其中重链和/或轻链的一部分与对应的衍生自特定种类的抗体或属于特定抗体种类或亚类的序列相同或同源，而该一条或多条链的其余部分是与衍生自另一个种类的抗体的或属于另一个抗体种类或亚类的抗体以及此类抗体的片段中的对应序列相同或同源，只要他们表现出所希望的生物活性(参见，例如美国专利号4,816,567；和Morrison等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 81：6851-6855(1984))。嵌合抗体包括

“人源化”形式的非人(例如，鼠)抗体是嵌合抗体，其含有衍生自非人免疫球蛋白的最小序列。在一个实施例中，人源化抗体是人免疫球蛋白(受体抗体)，其中来自受体HVR的残基被来自非人物种(供体抗体)(如具有所希望的特异性、亲和力和/或能力的小鼠、大鼠、兔或非人类灵长类动物)的HVR的残基替代。在一些实例中，人免疫球蛋白的FR残基可以被相应的非人残基替代。另外，人源化抗体可以包含未在受体抗体或供体抗体中发现的残基。这些修饰可以进一步改善抗体性能。通常，人源化抗体将包含至少一个、并且典型地两个可变结构域中的基本上全部，其中全部或基本上全部的高变环对应于非人免疫球蛋白的那些，并且全部或基本上全部的FR是人免疫球蛋白序列的那些。人源化抗体任选地还将包含免疫球蛋白恒定区(Fc)的至少一部分，典型地是人免疫球蛋白的至少一部分。有关进一步的细节，参见例如，Jones等人,Nature 321:522-525(1986)；Riechmann等人,Nature332:323-329(1988)；和Presta,Curr.Op.Struct.Biol.2:593-596(1992)。还参见例如，Vaswani和Hamilton,Ann.Allergy,Asthma&Immunol.1:105-115(1998)；Harris,Biochem.Soc.Transactions 23：1035-1038(1995)；Hurle和Gross,Curr.Op.Biotech.5:428-433(1994)；以及美国专利号6,982,321和7,087,409。

“人抗体”是这样一种抗体，其具有对应于由人类产生的抗体的氨基酸序列的一个氨基酸序列和/或已经使用如本文披露的任何用于制造人抗体的技术来产生。人抗体的此定义特别排除了包含非人抗原结合残基的人源化抗体。可以使用本领域已知的各种技术(包括噬菌体展示文库)产生人抗体。Hoogenboom和Winter,J.Mol.Biol.227:381(1991)；Marks等人,J.Mol.Biol.222:581(1991)。也可用于制备人单克隆抗体的是在Cole等人，Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy,Alan R.Liss,77(1985)；Boerner等人,J.Immunol.147(1):86-95(1991)中描述的方法。另请参见van Dijk和van de Winkel,Curr.Opin.Pharmacol.5：368-74(2001)。人抗体可以通过将抗原施用至已被修饰以响应抗原攻击而产生此类抗体但其内源基因座已失效的转基因动物(例如，已免疫的xenomice)来制备(参见，例如，有关XENOMOUSETM技术的美国专利号6,075,181和6,150,584)。关于通过人B细胞杂交瘤技术产生的人抗体，还参见例如Li等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA103：3557-3562(2006)。

如本文所用的，术语“结合”、“特异性结合”或“对……有特异性”是指可测量和可再现的相互作用，如靶标与抗体之间的结合，其决定了在异质分子(包括生物分子)群体存在时靶标的存在。例如，结合或特异性结合靶标(可以是表位)的抗体是与该靶标结合的抗体，其亲和力、亲合力(avidity)、就绪性和/或持续时间长于与其他靶标的结合。在一个实施例中，抗体与不相关靶标的结合程度小于例如通过放射免疫测定法(RIA)测量的抗体与靶标的结合的约10％。在某些实施例中，特异性结合靶标的抗体具有≤1μM、≤100nM、≤10nM、≤1nM、或≤0.1nM的解离常数(Kd)。在某些实施例中，抗体特异性结合来自不同物种的蛋白质中保守的蛋白质表位。在另一个实施例中，特异性结合可以包括但不要求排他结合。

如本文所用的“嵌合抗原受体”或“CAR”是指将一种或多种抗原特异性移植到细胞如T细胞上的基因工程化的受体。CAR也被称为“人工T细胞受体”、“嵌合T细胞受体”或“嵌合免疫受体”。在一些实施例中，CAR包含特异于肿瘤抗原的抗体的细胞外可变结构域、和T细胞或其他受体的细胞内信号传导结构域，如一个或多个共刺激信号传导结构域。“CAR-T”是指表达CAR的T细胞。

如本文所用的“T细胞受体”或“TCR”是指内源或重组/工程化的T细胞受体，该T细胞受体包含与MHC分子中结合的特定抗原肽结合的细胞外抗原结合结构域。在一些实施例中，TCR包含TCRα多肽链和TCRβ多肽链。在一些实施例中，TCR包含TCRγ多肽链和TCRδ多肽链。在一些实施例中，TCR特异性结合肿瘤抗原。在一些实施例中，TCR特异性结合肿瘤抗原/MHC。“TCR-T”是指表达重组/工程化的TCR的T细胞。

如本文所用的“TCR复合物”是指TCR和CD3的复合物。本文使用的“TCR亚基”是指TCR复合物的亚基，该亚基包括例如，TCRα、TCRβ、TCRγ、TCRδ、CD3ε、CD3γ、CD3δ、和CD3ζ。

术语“重组”是指生物分子，例如基因或蛋白质，该生物分子(1)已从其自然存在的环境中移除，(2)与在自然界中发现该基因的多核苷酸的全部或部分不相关，(3)与在自然界中未连接的多核苷酸可操作地连接，或(4)自然界中不存在。术语“重组”可用于指克隆的DNA分离物、化学合成的多核苷酸类似物、或由异源系统生物合成的多核苷酸类似物、以及由此类核酸编码的蛋白质和/或mRNA。

术语“表达”是指核酸翻译成蛋白质。蛋白质可以表达并保留在细胞内，成为细胞表面膜的组分，或分泌到细胞外基质或培养基中。

术语“宿主细胞”是指支持表达载体的复制或表达的细胞。宿主细胞可以是原核细胞(如大肠杆菌)、或真核细胞(如酵母)、昆虫细胞、两栖动物细胞、或哺乳动物细胞(例如，CHO细胞、免疫细胞如效应T细胞)。

如本文所用的，术语“转染的”或“转化的”或“转导的”是指将外源核酸转移或引到宿主细胞中的过程。“转染的”或“转化的”或“转导的”细胞是使用外源核酸转染、转化或转导的细胞。

术语“体内”是指在获得细胞的生物体的体内。“离体”或“体外”意指在获得细胞的生物体的体外。

术语“细胞”包括原代目标细胞及其子代。

如本文所用的，术语“免疫调节剂”是指对免疫系统具有效果(如抑制或刺激效果)的任何基于蛋白质或肽的药剂。

如本文所用的，术语“免疫检查点抑制剂”是指完全或部分减少、抑制或干扰一种或多种检查点蛋白的分子，这些检查点蛋白可以调节T细胞激活和功能。

如本文所用的，术语“免疫激活剂”是指刺激、激活或增加免疫应答强度的分子。

如本文所用的，术语“治疗蛋白”是指具有治疗效果的任何基于蛋白质或肽的药剂。

应当理解，本文所述的发明的实施例包括“由实施例组成”和/或“基本上由实施例组成”。

本文对“约”值或参数的引用包括(并描述)针对该值或参数本身的变化。例如，涉及“约X”的描述包括“X”的描述。

如本文所用的，对“不是”值或参数的提及通常意指并描述“不同于”值或参数。例如，方法不是用于治疗X型癌症，意味着该方法用于治疗不同于X型的癌症。

本文使用的术语“约X-Y”具有与“约X至约Y”相同的含义。

当在本文和附带的权利要求中使用时，单数形式“一个/种(a)”、“或(or)”和“这些/该(the)”包括复数指代物，除非上下文明确地指示其他的情况。

嵌合受体多肽(STS多肽)

在一方面，本发明提供了嵌合受体多肽(或STS多肽)。在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)细胞外靶标结合结构域(例如，抗BCMA sdAb)；b)细胞外TCR结合结构域(例如，抗CD3 scFv或sdAb、或抗TCR scFv)；c)跨膜结构域；和d)包含TCR亚基的细胞内结构域的细胞内结构域，其中该TCR亚基选自由以下组成的组：CD3ε、CD3γ、CD3δ、TCRα、TCRβ、TCRγ、和TCRδ。在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)细胞外靶标结合结构域(例如，抗BCMAsdAb)；b)细胞外TCR结合结构域(例如，抗CD3 scFv或sdAb、或抗TCR scFv)；和c)包含TCR亚基的跨膜结构域的跨膜结构域，其中该TCR亚基选自由以下组成的组：CD3ε、CD3γ、CD3δ、TCRα、TCRβ、TCRγ、和TCRδ。在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)细胞外靶标结合结构域(例如，抗BCMA sdAb)；b)细胞外TCR结合结构域(例如，抗CD3 scFv或sdAb、或抗TCR scFv)；c)包含TCR亚基的跨膜结构域的跨膜结构域，其中该TCR亚基选自由以下组成的组：CD3ε、CD3γ、CD3δ、TCRα、TCRβ、TCRγ、和TCRδ，和d)细胞内结构域。在一些实施例中，嵌合受体多肽不包含TCR亚基的细胞外结构域(或任何TCR亚基的细胞外结构域)。在一些实施例中，TCR亚基选自由以下组成的组：TCRα、TCRβ、TCRγ、和TCRδ，并且嵌合受体多肽不包含该TCR亚基的细胞外结构域的可变区(或TCRα、TCRβ、TCRγ、和TCRδ中任一个的细胞外结构域的可变区)。在一些实施例中，嵌合受体多肽不包含细胞内共刺激结构域。在一些实施例中，细胞外靶标结合结构域在细胞外TCR结合结构域的N-末端。在一些实施例中，细胞外靶标结合结构域在细胞外TCR结合结构域的C-末端。

在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)细胞外靶标结合结构域(例如，抗BCMA sdAb)；b)细胞外TCR结合结构域(例如，抗CD3scFv或sdAb、或抗TCR scFv)；c)包含第一TCR亚基的跨膜结构域的跨膜结构域；和d)包含第二TCR亚基的细胞内结构域的细胞内结构域，其中该第一TCR亚基和该第二TCR亚基均选自由以下组成的组：CD3ε、CD3γ、CD3δ、TCRα、TCRβ、TCRγ、和TCRδ。在一些实施例中，第一TCR亚基是CD3ε和/或第二TCR亚基是CD3ε。在一些实施例中，第一TCR亚基是CD3γ和/或第二TCR亚基是CD3γ。在一些实施例中，第一TCR亚基是CD3δ和/或第二TCR亚基是CD3δ。在一些实施例中，第一TCR亚基是TCRα和/或第二TCR亚基是TCRα。在一些实施例中，第一TCR亚基是TCRβ和/或第二TCR亚基是TCRβ。在一些实施例中，第一TCR亚基是TCRγ和/或第二TCR亚基是TCRγ。在一些实施例中，第一TCR亚基是TCRδ和/或第二TCR亚基是TCRδ。在一些实施例中，第一TCR亚基和第二TCR亚基相同。在一些实施例中，第一TCR亚基和第二TCR亚基不同。在一些实施例中，第一TCR亚基和第二TCR亚基均选自由以下组成的组：TCRα、TCRβ、TCRγ、和TCRδ，并且嵌合受体多肽不包含该第一TCR亚基或该第二TCR亚基的细胞外结构域的可变区。在一些实施例中，嵌合受体多肽不包含TCRα、TCRβ、TCRγ、和TCRδ中任一个的细胞外结构域的可变区。在一些实施例中，嵌合受体多肽不包含该第一TCR亚基和/或第二TCR亚基的细胞外结构域。在一些实施例中，嵌合受体多肽不包含任何TCR亚基的细胞外结构域。在一些实施例中，嵌合受体多肽不包含细胞内共刺激结构域。在一些实施例中，细胞外靶标结合结构域在细胞外TCR结合结构域的N-末端。在一些实施例中，细胞外靶标结合结构域在细胞外TCR结合结构域的C-末端。

在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其从N-末端到C-末端包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)任选的信号肽；b)细胞外靶标结合结构域(例如，抗BCMA sdAb)；c)任选的第一接头(例如，GS接头)，d)细胞外TCR结合结构域(例如，抗CD3 scFv或sdAb、或抗TCRscFv)；e)任选的第二接头(例如，GS接头)；f)任选的铰链区(例如，CD8铰链区)；g)包含第一TCR亚基的跨膜结构域的跨膜结构域；和h)包含第二TCR亚基的细胞内结构域的细胞内结构域，其中该第一TCR亚基和该第二TCR亚基均选自由以下组成的组：CD3ε、CD3γ、CD3δ、TCRα、TCRβ、TCRγ、和TCRδ。在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其从N-末端到C-末端包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)任选的信号肽；b)细胞外TCR结合结构域(例如，抗CD3scFv或sdAb、或抗TCR scFv)；c)任选的第一接头(例如，GS接头)，d)细胞外靶标结合结构域(例如，抗BCMA sdAb)；e)任选的第二接头(例如，GS接头)；f)任选的铰链区(例如，CD8铰链区)；g)包含第一TCR亚基的跨膜结构域的跨膜结构域；和h)包含第二TCR亚基的细胞内结构域的细胞内结构域，其中该第一TCR亚基和该第二TCR亚基均选自由以下组成的组：CD3ε、CD3γ、CD3δ、TCRα、TCRβ、TCRγ、和TCRδ。在一些实施例中，第一TCR亚基是CD3ε和/或第二TCR亚基是CD3ε。在一些实施例中，第一TCR亚基是CD3γ和/或第二TCR亚基是CD3γ。在一些实施例中，第一TCR亚基是CD3δ和/或第二TCR亚基是CD3δ。在一些实施例中，第一TCR亚基是TCRα和/或第二TCR亚基是TCRα。在一些实施例中，第一TCR亚基是TCRβ和/或第二TCR亚基是TCRβ。在一些实施例中，第一TCR亚基是TCRγ和/或第二TCR亚基是TCRγ。在一些实施例中，第一TCR亚基是TCRδ和/或第二TCR亚基是TCRδ。在一些实施例中，第一TCR亚基和第二TCR亚基相同。在一些实施例中，第一TCR亚基和第二TCR亚基不同。在一些实施例中，第一TCR亚基和第二TCR亚基均选自由以下组成的组：TCRα、TCRβ、TCRγ、和TCRδ，并且嵌合受体多肽不包含该第一TCR亚基或该第二TCR亚基的细胞外结构域的可变区。在一些实施例中，嵌合受体多肽不包含TCRα、TCRβ、TCRγ、和TCRδ中任一个的细胞外结构域的可变区。在一些实施例中，嵌合受体多肽不包含该第一TCR亚基和/或第二TCR亚基的细胞外结构域。在一些实施例中，嵌合受体多肽不包含任何TCR亚基的细胞外结构域。在一些实施例中，嵌合受体多肽不包含细胞内共刺激结构域。

在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)包含特异性结合靶抗原(例如，BCMA)的靶抗原结合结构域(如scFv、sdAb、或DARPin)的细胞外靶标结合结构域；b)包含特异性结合TCR亚基的TCR抗原结合结构域(如scFv或sdAb)的细胞外TCR结合结构域(例如，TCR亚基的细胞外结构域，如CD3ε或TCR的细胞外结构域)；c)跨膜结构域，和d)包含TCR亚基的细胞内结构域的细胞内结构域，其中该TCR亚基选自由以下组成的组：CD3ε、CD3γ、CD3δ、TCRα、TCRβ、TCRγ、和TCRδ。在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)包含特异性结合靶抗原(例如，BCMA)的靶抗原结合结构域(如scFv、sdAb、或DARPin)的细胞外靶标结合结构域；b)包含特异性结合TCR亚基的TCR抗原结合结构域(如scFv或sdAb)的细胞外TCR结合结构域(例如，TCR亚基的细胞外结构域，如CD3ε或TCR的细胞外结构域)；和c)包含TCR亚基的跨膜结构域的跨膜结构域，其中该TCR亚基选自由以下组成的组：CD3ε、CD3γ、CD3δ、TCRα、TCRβ、TCRγ、和TCRδ。在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)包含特异性结合靶抗原(例如，BCMA)的靶抗原结合结构域(如scFv、sdAb、或DARPin)的细胞外靶标结合结构域；b)包含特异性结合TCR亚基的TCR抗原结合结构域(如scFv或sdAb)的细胞外TCR结合结构域(例如，TCR亚基的细胞外结构域，如CD3ε或TCR的细胞外结构域)；c)包含TCR亚基的跨膜结构域的跨膜结构域，其中该TCR亚基选自由以下组成的组：CD3ε、CD3γ、CD3δ、TCRα、TCRβ、TCRγ、和TCRδ，和d)细胞内结构域。在一些实施例中，TCR亚基选自由以下组成的组：TCRα、TCRβ、TCRγ、和TCRδ，并且嵌合受体多肽不包含该TCR亚基的细胞外结构域的可变区。在一些实施例中，嵌合受体多肽不包含TCRα、TCRβ、TCRγ、和TCRδ中任一个的细胞外结构域的可变区。在一些实施例中，嵌合受体多肽不包含TCR亚基的细胞外结构域(或任何TCR亚基的细胞外结构域)。在一些实施例中，嵌合受体多肽不包含细胞内共刺激结构域。在一些实施例中，细胞外靶标结合结构域在细胞外TCR结合结构域的N-末端。在一些实施例中，细胞外靶标结合结构域在细胞外TCR结合结构域的C-末端。在一些实施例中，嵌合受体多肽进一步包含在嵌合受体多肽的N-末端处的信号肽。在一些实施例中，靶抗原结合结构域是特异性结合BCMA的sdAb，如PCT/CN2016/094408和PCT/CN2017/096938中所披露的任一抗BCMA sdAb，其内容通过援引以其全文并入本文。在一些实施例中，抗BCMA sdAb包含SEQID NO：26的氨基酸序列。在一些实施例中，TCR抗原结合结构域(例如，scFv、sdAb)特异性结合CD3ε(例如，CD3ε的N-末端)。在一些实施例中，TCR抗原结合结构域是包含SEQ ID NO:22或23的氨基酸序列的抗CD3 sdAb。在一些实施例中，TCR抗原结合结构域是包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的抗CD3 scFv。在一些实施例中，TCR抗原结合结构域是包含SEQ ID NO:27的氨基酸序列的抗TCR scFv。在一些实施例中，细胞外TCR结合结构域包含串联排列的两个或更多个TCR抗原结合结构域(例如，scFv或sdAb)。在一些实施例中，细胞外靶标结合结构域包含串联排列的两个或更多个靶抗原结合结构域(例如，scFv、sdAb、或DARPin)。在一些实施例中，嵌合受体多肽进一步包含在该嵌合受体多肽的跨膜结构域N-末端的铰链区(例如，CD8铰链区)。在一些实施例中，嵌合受体多肽进一步包含连接细胞外靶标结合结构域和细胞外TCR结合结构域的第一接头。在一些实施例中，嵌合受体多肽进一步包含连接细胞外靶标结合结构域和/或细胞外TCR结合结构域和跨膜结构域的第二接头。在一些实施例中，第一接头和/或第二接头是GS接头、α-螺旋接头、甘氨酸-丙氨酸聚合物接头、丙氨酸-丝氨酸聚合物接头、或IgG4-Fc接头。在一些实施例中，第一接头和/或第二接头包含SEQ ID NO：1-21、67、和68中任一个的氨基酸序列。

在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)包含特异性结合靶抗原(例如，BCMA)的靶抗原结合结构域(如scFv、sdAb、或DARPin)的细胞外靶标结合结构域；b)包含特异性结合TCR亚基的TCR抗原结合结构域(如scFv或sdAb)的细胞外TCR结合结构域(例如，TCR亚基的细胞外结构域，如CD3ε或TCR的细胞外结构域)；c)包含第一TCR亚基的跨膜结构域的跨膜结构域；和d)包含第二TCR亚基的细胞内结构域的细胞内结构域，其中该第一TCR亚基和该第二TCR亚基均选自由以下组成的组：CD3ε、CD3γ、CD3δ、TCRα、TCRβ、TCRγ、和TCRδ。在一些实施例中，第一TCR亚基是CD3ε和/或第二TCR亚基是CD3ε。在一些实施例中，第一TCR亚基是CD3γ和/或第二TCR亚基是CD3γ。在一些实施例中，第一TCR亚基是CD3δ和/或第二TCR亚基是CD3δ。在一些实施例中，第一TCR亚基是TCRα和/或第二TCR亚基是TCRα。在一些实施例中，第一TCR亚基是TCRβ和/或第二TCR亚基是TCRβ。在一些实施例中，第一TCR亚基是TCRγ和/或第二TCR亚基是TCRγ。在一些实施例中，第一TCR亚基是TCRδ和/或第二TCR亚基是TCRδ。在一些实施例中，第一TCR亚基和第二TCR亚基相同。在一些实施例中，第一TCR亚基和第二TCR亚基不同。在一些实施例中，第一TCR亚基和第二TCR亚基均选自由以下组成的组：TCRα、TCRβ、TCRγ、和TCRδ，并且嵌合受体多肽不包含该第一TCR亚基或该第二TCR亚基的细胞外结构域的可变区。在一些实施例中，嵌合受体多肽不包含TCRα、TCRβ、TCRγ、和TCRδ中任一个的细胞外结构域的可变区。在一些实施例中，嵌合受体多肽不包含第一和/或第二TCR亚基的细胞外结构域。在一些实施例中，嵌合受体多肽不包含任何TCR亚基的细胞外结构域。在一些实施例中，嵌合受体多肽不包含细胞内共刺激结构域。在一些实施例中，细胞外靶标结合结构域在细胞外TCR结合结构域的N-末端。在一些实施例中，细胞外靶标结合结构域在细胞外TCR结合结构域的C-末端。在一些实施例中，嵌合受体多肽进一步包含在嵌合受体多肽的N-末端处的信号肽。在一些实施例中，靶抗原结合结构域是特异性结合BCMA的sdAb，如PCT/CN2016/094408和PCT/CN2017/096938中所披露的任一抗BCMA sdAb。在一些实施例中，抗BCMA sdAb包含SEQ ID NO:26的氨基酸序列。在一些实施例中，TCR抗原结合结构域(例如，scFv、sdAb)特异性结合CD3ε(例如，CD3ε的N-末端)。在一些实施例中，TCR抗原结合结构域是包含SEQ ID NO：22或23的氨基酸序列的抗CD3 sdAb。在一些实施例中，TCR抗原结合结构域是包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的抗CD3 scFv。在一些实施例中，TCR抗原结合结构域是包含SEQ ID NO:27的氨基酸序列的抗TCR scFv。在一些实施例中，细胞外TCR结合结构域包含串联排列的两个或更多个TCR抗原结合结构域(例如，scFv或sdAb)。在一些实施例中，细胞外靶标结合结构域包含串联排列的两个或更多个靶抗原结合结构域(例如，scFv、sdAb、或DARPin)。在一些实施例中，嵌合受体多肽进一步包含在该嵌合受体多肽的跨膜结构域N-末端的铰链区(例如，CD8铰链区)。在一些实施例中，嵌合受体多肽进一步包含连接细胞外靶标结合结构域和细胞外TCR结合结构域的第一接头。在一些实施例中，嵌合受体多肽进一步包含连接细胞外靶标结合结构域和/或细胞外TCR结合结构域和跨膜结构域的第二接头。在一些实施例中，第一接头和/或第二接头是GS接头、α-螺旋接头、甘氨酸-丙氨酸聚合物接头、丙氨酸-丝氨酸聚合物接头、或IgG4-Fc接头。在一些实施例中，第一接头和/或第二接头包含SEQ ID NO:1-21、67、和68中任一个的氨基酸序列。

在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其从N-末端到C-末端包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)任选的信号肽；b)包含特异性结合靶抗原(例如，BCMA)的靶抗原结合结构域(如scFv、sdAb、或DARPin)的细胞外靶标结合结构域；c)任选的第一接头(例如，GS接头)，d)包含特异性结合TCR亚基的TCR抗原结合结构域(如scFv或sdAb)的细胞外TCR结合结构域(例如，TCR亚基的细胞外结构域，如CD3ε或TCR的细胞外结构域)；e)任选的第二接头(例如，GS接头)；f)任选的铰链区(例如，CD8铰链)；g)包含第一TCR亚基的跨膜结构域的跨膜结构域；和h)包含第二TCR亚基的细胞内结构域的细胞内结构域，其中该第一TCR亚基和该第二TCR亚基均选自由以下组成的组：CD3ε、CD3γ、CD3δ、TCRα、TCRβ、TCRγ、和TCRδ。在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其从N-末端到C-末端包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)任选的信号肽；b)包含特异性结合TCR亚基的TCR抗原结合结构域(如scFv或sdAb)的细胞外TCR结合结构域(例如，TCR亚基的细胞外结构域，如CD3ε或TCR的细胞外结构域)；c)任选的第一接头(例如，GS接头)，d)包含特异性结合靶抗原(例如，BCMA)的靶抗原结合结构域(如scFv、sdAb、或DARPin)的细胞外靶标结合结构域；e)任选的第二接头(例如，GS接头)；f)任选的铰链区(例如，CD8铰链)；g)包含第一TCR亚基的跨膜结构域的跨膜结构域；和h)包含第二TCR亚基的细胞内结构域的细胞内结构域，其中该第一TCR亚基和该第二TCR亚基均选自由以下组成的组：CD3ε、CD3γ、CD3δ、TCRα、TCRβ、TCRγ、和TCRδ。在一些实施例中，第一TCR亚基是CD3ε和/或第二TCR亚基是CD3ε。在一些实施例中，第一TCR亚基是CD3γ和/或第二TCR亚基是CD3γ。在一些实施例中，第一TCR亚基是CD3δ和/或第二TCR亚基是CD3δ。在一些实施例中，第一TCR亚基是TCRα和/或第二TCR亚基是TCRα。在一些实施例中，第一TCR亚基是TCRβ和/或第二TCR亚基是TCRβ。在一些实施例中，第一TCR亚基是TCRγ和/或第二TCR亚基是TCRγ。在一些实施例中，第一TCR亚基是TCRδ和/或第二TCR亚基是TCRδ。在一些实施例中，第一TCR亚基和第二TCR亚基相同。在一些实施例中，第一TCR亚基和第二TCR亚基不同。在一些实施例中，第一TCR亚基和第二TCR亚基均选自由以下组成的组：TCRα、TCRβ、TCRγ、和TCRδ，并且嵌合受体多肽不包含该第一TCR亚基或该第二TCR亚基的细胞外结构域的可变区。在一些实施例中，嵌合受体多肽不包含TCRα、TCRβ、TCRγ、和TCRδ中任一个的细胞外结构域的可变区。在一些实施例中，嵌合受体多肽不包含第一和/或第二TCR亚基的细胞外结构域。在一些实施例中，嵌合受体多肽不包含任何TCR亚基的细胞外结构域。在一些实施例中，嵌合受体多肽不包含细胞内共刺激结构域。在一些实施例中，靶抗原结合结构域是特异性结合BCMA的sdAb，如PCT/CN2016/094408和PCT/CN2017/096938中所披露的任一抗BCMAsdAb。在一些实施例中，抗BCMA sdAb包含SEQ ID NO:26的氨基酸序列。在一些实施例中，TCR抗原结合结构域(例如，scFv、sdAb)特异性结合CD3ε(例如，CD3ε的N-末端)。在一些实施例中，TCR抗原结合结构域是包含SEQ ID NO:22或23的氨基酸序列的抗CD3 sdAb。在一些实施例中，TCR抗原结合结构域是包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的抗CD3 scFv。在一些实施例中，TCR抗原结合结构域是包含SEQ ID NO：27的氨基酸序列的抗TCR scFv。在一些实施例中，细胞外TCR结合结构域包含串联排列的两个或更多个TCR抗原结合结构域(例如，scFv或sdAb)。在一些实施例中，细胞外靶标结合结构域包含串联排列的两个或更多个靶抗原结合结构域(例如，scFv、sdAb、或DARPin)。在一些实施例中，第一接头和/或第二接头是GS接头、α-螺旋接头、甘氨酸-丙氨酸聚合物接头、丙氨酸-丝氨酸聚合物接头、或IgG4-Fc接头。在一些实施例中，第一接头和/或第二接头包含SEQ ID NO:1-21、67、和68中任一个的氨基酸序列。

在一些实施例中，细胞外靶标结合结构域包含两个或更多个(如两个)靶抗原结合结构域(例如，scFv、sdAb、DARPin)，如串联排列的两个或更多个靶抗原结合结构域(例如，scFv、sdAb、DARPin)。例如，在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)包含各自特异性结合靶抗原(例如，BCMA)的两个或更多个(如两个)靶抗原结合结构域(如scFv、sdAb、或DARPin)的细胞外靶标结合结构域；b)包含特异性结合TCR亚基的TCR抗原结合结构域(如scFv或sdAb)的细胞外TCR结合结构域(例如，TCR亚基的细胞外结构域，如CD3ε或TCR的细胞外结构域)；c)包含第一TCR亚基的跨膜结构域的跨膜结构域；和d)包含第二TCR亚基的细胞内结构域的细胞内结构域，其中该第一TCR亚基和该第二TCR亚基均选自由以下组成的组：CD3ε、CD3γ、CD3δ、TCRα、TCRβ、TCRγ、和TCRδ。在一些实施例中，两个或更多个靶抗原结合结构域是串联排列的。在一些实施例中，两个或更多个靶抗原结合结构域通过一个或多个任选的接头连接。在一些实施例中，靶抗原结合结构域是scFv、sdAb、或DARPin。在一些实施例中，第一TCR亚基是CD3ε和/或第二TCR亚基是CD3ε。在一些实施例中，第一TCR亚基是CD3γ和/或第二TCR亚基是CD3γ。在一些实施例中，第一TCR亚基是CD3δ和/或第二TCR亚基是CD3δ。在一些实施例中，第一TCR亚基是TCRα和/或第二TCR亚基是TCRα。在一些实施例中，第一TCR亚基是TCRβ和/或第二TCR亚基是TCRβ。在一些实施例中，第一TCR亚基是TCRγ和/或第二TCR亚基是TCRγ。在一些实施例中，第一TCR亚基是TCRδ和/或第二TCR亚基是TCRδ。在一些实施例中，第一TCR亚基和第二TCR亚基相同。在一些实施例中，第一TCR亚基和第二TCR亚基不同。在一些实施例中，两个或更多个靶抗原结合结构域与同一抗原或抗原上的同一表位结合。在一些实施例中，两个或更多个靶抗原结合结构域与同一抗原上的不同的表位结合。在一些实施例中，两个或更多个靶抗原结合结构域与不同的抗原(即，不同的靶抗原的不同的表位)结合。在一些实施例中，两个或更多个靶抗原结合结构域相同。在一些实施例中，两个或更多个靶抗原结合结构域不同。在一些实施例中，第一TCR亚基和第二TCR亚基均选自由以下组成的组：TCRα、TCRβ、TCRγ、和TCRδ，并且嵌合受体多肽不包含该第一TCR亚基或该第二TCR亚基的细胞外结构域的可变区。在一些实施例中，嵌合受体多肽不包含TCRα、TCRβ、TCRγ、和TCRδ中任一个的细胞外结构域的可变区。在一些实施例中，嵌合受体多肽不包含第一和/或第二TCR亚基的细胞外结构域。在一些实施例中，嵌合受体多肽不包含任何TCR亚基的细胞外结构域。在一些实施例中，嵌合受体多肽不包含细胞内共刺激结构域。在一些实施例中，细胞外靶标结合结构域在细胞外TCR结合结构域的N-末端。在一些实施例中，细胞外靶标结合结构域在细胞外TCR结合结构域的C-末端。在一些实施例中，嵌合受体多肽进一步包含在嵌合受体多肽的N-末端处的信号肽。在一些实施例中，嵌合受体多肽进一步包含在该嵌合受体多肽的跨膜结构域N-末端的铰链区(例如，CD8铰链区)。在一些实施例中，嵌合受体多肽包含细胞外靶标结合结构域和细胞外TCR结合结构域之间的接头。在一些实施例中，嵌合受体多肽包含细胞外靶标结合结构域(或细胞外TCR结合结构域)和跨膜结构域之间的接头。在一些实施例中，两个或更多个靶抗原结合结构域是特异性结合BCMA的sdAb，如PCT/CN2016/094408和PCT/CN2017/096938中所披露的任一抗BCMA sdAb。在一些实施例中，特异性结合BCMA的两个或更多个靶抗原结合结构域(sdAb)相同。在一些实施例中，特异性结合BCMA的两个或更多个靶抗原结合结构域(sdAb)不同。在一些实施例中，抗BCMA sdAb包含SEQ ID NO：26的氨基酸序列。在一些实施例中，TCR抗原结合结构域(例如，scFv、sdAb)特异性结合CD3ε(例如，CD3ε的N-末端)。在一些实施例中，TCR抗原结合结构域是包含SEQ ID NO:22或23的氨基酸序列的抗CD3 sdAb。在一些实施例中，TCR抗原结合结构域是包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的抗CD3 scFv。在一些实施例中，TCR抗原结合结构域是包含SEQ ID NO：27的氨基酸序列的抗TCR scFv。在一些实施例中，接头是GS接头、α-螺旋接头、甘氨酸-丙氨酸聚合物接头、丙氨酸-丝氨酸聚合物接头、或IgG4-Fc接头。在一些实施例中，接头选自由SEQ ID NO:1-21、67和68组成的组。在一些实施例中，细胞外TCR结合结构域包含串联排列的两个或更多个TCR抗原结合结构域(例如，scFv或sdAb)。

在一些实施例中，细胞外TCR结合结构域包含两个或更多个(如两个)TCR抗原结合结构域(例如，scFv、sdAb)，如串联排列的两个或更多个TCR抗原结合结构域。例如，在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)包含特异性结合靶抗原(例如，BCMA)的靶抗原结合结构域(如scFv、sdAb、或DARPin)的细胞外靶标结合结构域；b)包含各自特异性结合TCR亚基的两个或更多个(如两个)TCR抗原结合结构域(如scFv或sdAb)的细胞外TCR结合结构域(例如，TCR亚基的细胞外结构域，如CD3ε或TCR的细胞外结构域)；c)包含第一TCR亚基的跨膜结构域的跨膜结构域；和d)包含第二TCR亚基的细胞内结构域的细胞内结构域，其中该第一TCR亚基和该第二TCR亚基均选自由以下组成的组：CD3ε、CD3γ、CD3δ、TCRα、TCRβ、TCRγ、和TCRδ。在一些实施例中，两个或更多个TCR抗原结合结构域是串联排列的。在一些实施例中，两个或更多个TCR抗原结合结构域通过一个或多个任选的接头连接。在一些实施例中，TCR抗原结合结构域是scFv或sdAb。在一些实施例中，第一TCR亚基是CD3ε和/或第二TCR亚基是CD3ε。在一些实施例中，第一TCR亚基是CD3γ和/或第二TCR亚基是CD3γ。在一些实施例中，第一TCR亚基是CD3δ和/或第二TCR亚基是CD3δ。在一些实施例中，第一TCR亚基是TCRα和/或第二TCR亚基是TCRα。在一些实施例中，第一TCR亚基是TCRβ和/或第二TCR亚基是TCRβ。在一些实施例中，第一TCR亚基是TCRγ和/或第二TCR亚基是TCRγ。在一些实施例中，第一TCR亚基是TCRδ和/或第二TCR亚基是TCRδ。在一些实施例中，第一TCR亚基和第二TCR亚基相同。在一些实施例中，第一TCR亚基和第二TCR亚基不同。在一些实施例中，两个或更多个TCR抗原结合结构域与TCR亚基上的同一表位结合。在一些实施例中，两个或更多个TCR抗原结合结构域与同一TCR亚基上的不同的表位结合。在一些实施例中，两个或更多个TCR抗原结合结构域与不同的TCR亚基(即，不同的TCR亚基的不同的表位)结合。在一些实施例中，两个或更多个TCR抗原结合结构域相同。在一些实施例中，两个或更多个TCR抗原结合结构域不同。在一些实施例中，被两个或更多个TCR抗原结合结构域识别的一个或多个TCR亚基与第一TCR亚基和第二TCR亚基相同。在一些实施例中，被两个或更多个TCR抗原结合结构域识别的一个或多个TCR亚基与第一TCR亚基或第二TCR亚基不同。在一些实施例中，第一TCR亚基和第二TCR亚基均选自由以下组成的组：TCRα、TCRβ、TCRγ、和TCRδ，并且嵌合受体多肽不包含该第一TCR亚基或该第二TCR亚基的细胞外结构域的可变区。在一些实施例中，嵌合受体多肽不包含TCRα、TCRβ、TCRγ、和TCRδ中任一个的细胞外结构域的可变区。在一些实施例中，嵌合受体多肽不包含第一和/或第二TCR亚基的细胞外结构域。在一些实施例中，嵌合受体多肽不包含任何TCR亚基的细胞外结构域。在一些实施例中，嵌合受体多肽不包含细胞内共刺激结构域。在一些实施例中，细胞外靶标结合结构域在细胞外TCR结合结构域的N-末端。在一些实施例中，细胞外靶标结合结构域在细胞外TCR结合结构域的C-末端。在一些实施例中，嵌合受体多肽进一步包含在嵌合受体多肽的N-末端处的信号肽。在一些实施例中，嵌合受体多肽进一步包含在该嵌合受体多肽的跨膜结构域N-末端的铰链区(例如，CD8铰链区)。在一些实施例中，嵌合受体多肽包含细胞外靶标结合结构域和细胞外TCR结合结构域之间的接头。在一些实施例中，嵌合受体多肽包含细胞外靶标结合结构域(或细胞外TCR结合结构域)和跨膜结构域之间的接头。在一些实施例中，靶抗原结合结构域是特异性结合BCMA的sdAb，如PCT/CN2016/094408和PCT/CN2017/096938中所披露的任一抗BCMA sdAb。在一些实施例中，抗BCMA sdAb包含SEQ ID NO：26的氨基酸序列。在一些实施例中，两个或更多个(如两个)TCR抗原结合结构域(例如，scFv、sdAb)特异性结合CD3ε(例如，CD3ε的N-末端)。在一些实施例中，两个或更多个(如两个)TCR抗原结合结构域是包含SEQ ID NO:22或23的氨基酸序列的抗CD3 sdAb。在一些实施例中，两个或更多个(如两个)TCR抗原结合结构域是包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的抗CD3 scFv。在一些实施例中，两个或更多个(如两个)TCR抗原结合结构域是包含SEQ ID NO:27的氨基酸序列的抗TCR scFv。在一些实施例中，两个或更多个TCR抗原结合结构域中的一个是包含SEQID NO:22或23的氨基酸序列的抗CD3 sdAb，并且该两个或更多个TCR抗原结合结构域中的另一个是包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的抗CD3 scFv。在一些实施例中，两个或更多个TCR抗原结合结构域中的一个是包含SEQ ID NO:22或23的氨基酸序列的抗CD3 sdAb，并且该两个或更多个TCR抗原结合结构域中的另一个是包含SEQ ID NO:27的氨基酸序列的抗TCR scFv。在一些实施例中，两个或更多个TCR抗原结合结构域中的一个是包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的抗CD3 scFv，并且该两个或更多个TCR抗原结合结构域中的另一个是包含SEQ ID NO：27的氨基酸序列的抗TCR scFv。在一些实施例中，两个或更多个TCR抗原结合结构域(例如，scFv、sdAb)相同。在一些实施例中，两个或更多个TCR抗原结合结构域(例如，scFv、sdAb)不同(例如，不同的结构、或结合至不同的表位)。在一些实施例中，细胞外靶标结合结构域包含串联排列的两个或更多个(如两个)靶抗原结合结构域(例如，scFv、sdAb、或DARPin)。在一些实施例中，接头是GS接头、α-螺旋接头、甘氨酸-丙氨酸聚合物接头、丙氨酸-丝氨酸聚合物接头、或IgG4-Fc接头。在一些实施例中，接头选自由SEQ ID NO:1-21、67和68组成的组。

在一些实施例中，细胞外TCR结合结构域包含特异性结合CD3(如CD3ε，例如CD3ε的N-末端)的TCR抗原结合结构域(如scFv或sdAb)。例如，在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)细胞外靶标结合结构域(例如，抗BCMAsdAb)；b)包含特异性结合CD3(如CD3ε，例如CD3ε的N-末端)的TCR抗原结合结构域(如scFv或sdAb)的细胞外TCR结合结构域；c)跨膜结构域，和d)包含TCR亚基的细胞内结构域的细胞内结构域，其中该TCR亚基选自由以下组成的组：CD3ε、CD3γ、CD3δ、TCRα、TCRβ、TCRγ、和TCRδ。在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)细胞外靶标结合结构域(例如，抗BCMA sdAb)；b)包含特异性结合CD3(如CD3ε，例如CD3ε的N-末端)的TCR抗原结合结构域(如scFv或sdAb)的细胞外TCR结合结构域；和c)包含TCR亚基的跨膜结构域的跨膜结构域，其中该TCR亚基选自由以下组成的组：CD3ε、CD3γ、CD3δ、TCRα、TCRβ、TCRγ、和TCRδ。在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)细胞外靶标结合结构域(例如，抗BCMA sdAb)；b)包含特异性结合CD3(如CD3ε，例如CD3ε的N-末端)的TCR抗原结合结构域(如scFv或sdAb)的细胞外TCR结合结构域；c)包含TCR亚基的跨膜结构域的跨膜结构域，其中该TCR亚基选自由以下组成的组：CD3ε、CD3γ、CD3δ、TCRα、TCRβ、TCRγ、和TCRδ，和d)细胞内结构域。在一些实施例中，嵌合受体多肽不包含TCR亚基的细胞外结构域(或任何TCR亚基的细胞外结构域)。在一些实施例中，TCR亚基选自由以下组成的组：TCRα、TCRβ、TCRγ、和TCRδ，并且嵌合受体多肽不包含该TCR亚基的细胞外结构域的可变区。在一些实施例中，嵌合受体多肽不包含TCRα、TCRβ、TCRγ、和TCRδ中任一个的细胞外结构域的可变区。在一些实施例中，嵌合受体多肽不包含细胞内共刺激结构域。在一些实施例中，细胞外靶标结合结构域在细胞外TCR结合结构域的N-末端。在一些实施例中，细胞外靶标结合结构域在细胞外TCR结合结构域的C-末端。在一些实施例中，嵌合受体多肽进一步包含在嵌合受体多肽的N-末端处的信号肽。在一些实施例中，TCR抗原结合结构域是包含SEQ ID NO:22或23的氨基酸序列的抗CD3 sdAb。在一些实施例中，TCR抗原结合结构域是包含SEQ ID NO:22或23的氨基酸序列的CDR1、CDR2、和CDR3的抗CD3 sdAb。在一些实施例中，TCR抗原结合结构域是包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的抗CD3 scFv。在一些实施例中，TCR抗原结合结构域是包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的HC-CDR 1-3和LC-CDR 1-3的抗CD3 scFv。因此，在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)细胞外靶标结合结构域(例如，抗BCMA sdAb)；b)包含特异性结合CD3ε的TCR抗原结合结构域的细胞外TCR结合结构域，其中该TCR抗原结合结构域是包含SEQID NO:22或23的氨基酸序列的sdAb，或是包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的scFv；c)跨膜结构域，和d)包含TCR亚基的细胞内结构域的细胞内结构域，其中该TCR亚基选自由以下组成的组：CD3ε、CD3γ、CD3δ、TCRα、TCRβ、TCRγ、和TCRδ。在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)细胞外靶标结合结构域(例如，抗BCMAsdAb)；b)包含特异性结合CD3ε的TCR抗原结合结构域的细胞外TCR结合结构域，其中该TCR抗原结合结构域是包含SEQ ID NO:22或23的氨基酸序列的sdAb，或是包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的scFv；和c)包含TCR亚基的跨膜结构域的跨膜结构域，其中该TCR亚基选自由以下组成的组：CD3ε、CD3γ、CD3δ、TCRα、TCRβ、TCRγ、和TCRδ。在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)细胞外靶标结合结构域(例如，抗BCMA sdAb)；b)包含特异性结合CD3ε的TCR抗原结合结构域的细胞外TCR结合结构域，其中该TCR抗原结合结构域是包含SEQ ID NO:22或23的氨基酸序列的sdAb，或是包含SEQ IDNO:24的氨基酸序列的scFv；c)包含TCR亚基的跨膜结构域的跨膜结构域，其中该TCR亚基选自由以下组成的组：CD3ε、CD3γ、CD3δ、TCRα、TCRβ、TCRγ、和TCRδ，和d)细胞内结构域。

在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)细胞外靶标结合结构域(例如，抗BCMA sdAb)；b)包含特异性结合CD3(如CD3ε，例如CD3ε的N-末端)的TCR抗原结合结构域(如scFv或sdAb)的细胞外TCR结合结构域；c)包含第一TCR亚基的跨膜结构域的跨膜结构域，和d)包含第二TCR亚基的细胞内结构域的细胞内结构域，其中该第一TCR亚基和该第二TCR亚基均选自由以下组成的组：CD3ε、CD3γ、CD3δ、TCRα、TCRβ、TCRγ、和TCRδ。在一些实施例中，第一TCR亚基是CD3ε和/或第二TCR亚基是CD3ε。在一些实施例中，第一TCR亚基是CD3γ和/或第二TCR亚基是CD3γ。在一些实施例中，第一TCR亚基是CD3δ和/或第二TCR亚基是CD3δ。在一些实施例中，第一TCR亚基是TCRα和/或第二TCR亚基是TCRα。在一些实施例中，第一TCR亚基是TCRβ和/或第二TCR亚基是TCRβ。在一些实施例中，第一TCR亚基是TCRγ和/或第二TCR亚基是TCRγ。在一些实施例中，第一TCR亚基是TCRδ和/或第二TCR亚基是TCRδ。在一些实施例中，第一TCR亚基和第二TCR亚基相同。在一些实施例中，第一TCR亚基和第二TCR亚基不同。在一些实施例中，第一TCR亚基和第二TCR亚基均选自由以下组成的组：TCRα、TCRβ、TCRγ、和TCRδ，并且嵌合受体多肽不包含该第一TCR亚基或该第二TCR亚基的细胞外结构域的可变区。在一些实施例中，嵌合受体多肽不包含TCRα、TCRβ、TCRγ、和TCRδ中任一个的细胞外结构域的可变区。在一些实施例中，嵌合受体多肽不包含第一和/或第二TCR亚基的细胞外结构域。在一些实施例中，嵌合受体多肽不包含任何TCR亚基的细胞外结构域。在一些实施例中，嵌合受体多肽不包含细胞内共刺激结构域。在一些实施例中，细胞外靶标结合结构域在细胞外TCR结合结构域的N-末端。在一些实施例中，细胞外靶标结合结构域在细胞外TCR结合结构域的C-末端。在一些实施例中，嵌合受体多肽进一步包含在嵌合受体多肽的N-末端处的信号肽。在一些实施例中，TCR抗原结合结构域是包含SEQ ID NO:22或23的氨基酸序列的抗CD3 sdAb。在一些实施例中，TCR抗原结合结构域是包含SEQ ID NO：24的氨基酸序列的抗CD3 scFv。在一些实施例中，TCR抗原结合结构域是包含SEQ ID NO:22或23的氨基酸序列的CDR1、CDR2、和CDR3的抗CD3 sdAb。在一些实施例中，TCR抗原结合结构域是包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的HC-CDR 1-3和LC-CDR 1-3的抗CD3scFv。因此，在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)细胞外靶标结合结构域(例如，抗BCMA sdAb)；b)包含特异性结合CD3ε的TCR抗原结合结构域的细胞外TCR结合结构域，其中该TCR抗原结合结构域是包含SEQ ID NO:22或23的氨基酸序列的sdAb，或是包含SEQ ID NO：24的氨基酸序列的scFv；c)包含第一TCR亚基的跨膜结构域的跨膜结构域，和d)包含第二TCR亚基的细胞内结构域的细胞内结构域，其中该第一TCR亚基和该第二TCR亚基均选自由以下组成的组：CD3ε、CD3γ、CD3δ、TCRα、TCRβ、TCRγ、和TCRδ。

在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其从N-末端到C-末端包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)任选的信号肽；b)细胞外靶标结合结构域(例如，抗BCMA sdAb)；c)任选的第一接头(例如，GS接头)，d)包含特异性结合CD3(如CD3ε，例如CD3ε的N-末端)的TCR抗原结合结构域(如scFv或sdAb)的细胞外TCR结合结构域；e)任选的第二接头(例如，GS接头)；f)任选的铰链区(例如，CD8铰链)；g)包含第一TCR亚基的跨膜结构域的跨膜结构域；和h)包含第二TCR亚基的细胞内结构域的细胞内结构域，其中该第一TCR亚基和该第二TCR亚基均选自由以下组成的组：CD3ε、CD3γ、CD3δ、TCRα、TCRβ、TCRγ、和TCRδ。在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其从N-末端到C-末端包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)任选的信号肽；b)包含特异性结合CD3(如CD3ε，例如CD3ε的N-末端)的TCR抗原结合结构域(如scFv或sdAb)的细胞外TCR结合结构域；c)任选的第一接头(例如，GS接头)，d)细胞外靶标结合结构域(例如，抗BCMA sdAb)；e)任选的第二接头(例如，GS接头)；f)任选的铰链区(例如，CD8铰链)；g)包含第一TCR亚基的跨膜结构域的跨膜结构域；和h)包含第二TCR亚基的细胞内结构域的细胞内结构域，其中该第一TCR亚基和该第二TCR亚基均选自由以下组成的组：CD3ε、CD3γ、CD3δ、TCRα、TCRβ、TCRγ、和TCRδ。在一些实施例中，TCR抗原结合结构域是包含SEQ ID NO：22或23的氨基酸序列的抗CD3 sdAb。在一些实施例中，TCR抗原结合结构域是包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的抗CD3 scFv。在一些实施例中，TCR抗原结合结构域是包含SEQ ID NO:22或23的氨基酸序列的CDR1、CDR2、和CDR3的抗CD3 sdAb。在一些实施例中，TCR抗原结合结构域是包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的HC-CDR 1-3和LC-CDR 1-3的抗CD3scFv。因此，在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其从N-末端到C-末端包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)任选的信号肽；b)细胞外靶标结合结构域(例如，抗BCMA sdAb)；c)任选的第一接头(例如，GS接头)，d)包含特异性结合CD3ε的TCR抗原结合结构域的细胞外TCR结合结构域，其中该TCR抗原结合结构域是包含SEQ ID NO:22或23的氨基酸序列的sdAb，或是包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的scFv；e)任选的第二接头(例如，GS接头)；f)任选的铰链区(例如，CD8铰链)；g)包含第一TCR亚基的跨膜结构域的跨膜结构域；和h)包含第二TCR亚基的细胞内结构域的细胞内结构域，其中该第一TCR亚基和该第二TCR亚基均选自由以下组成的组：CD3ε、CD3γ、CD3δ、TCRα、TCRβ、TCRγ、和TCRδ。在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其从N-末端到C-末端包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)任选的信号肽；b)包含特异性结合CD3ε的TCR抗原结合结构域的细胞外TCR结合结构域，其中该TCR抗原结合结构域是包含SEQ ID NO:22或23的氨基酸序列的sdAb，或是包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的scFv；c)任选的第一接头(例如，GS接头)，d)细胞外靶标结合结构域(例如，抗BCMAsdAb)；e)任选的第二接头(例如，GS接头)；f)任选的铰链区(例如，CD8铰链)；g)包含第一TCR亚基的跨膜结构域的跨膜结构域；和h)包含第二TCR亚基的细胞内结构域的细胞内结构域，其中该第一TCR亚基和该第二TCR亚基均选自由以下组成的组：CD3ε、CD3γ、CD3δ、TCRα、TCRβ、TCRγ、和TCRδ。在一些实施例中，第一TCR亚基是CD3ε和/或第二TCR亚基是CD3ε。在一些实施例中，第一TCR亚基是CD3γ和/或第二TCR亚基是CD3γ。在一些实施例中，第一TCR亚基是CD3δ和/或第二TCR亚基是CD3δ。在一些实施例中，第一TCR亚基是TCRα和/或第二TCR亚基是TCRα。在一些实施例中，第一TCR亚基是TCRβ和/或第二TCR亚基是TCRβ。在一些实施例中，第一TCR亚基是TCRγ和/或第二TCR亚基是TCRγ。在一些实施例中，第一TCR亚基是TCRδ和/或第二TCR亚基是TCRδ。在一些实施例中，第一TCR亚基和第二TCR亚基相同。在一些实施例中，第一TCR亚基和第二TCR亚基不同。在一些实施例中，第一TCR亚基和第二TCR亚基均选自由以下组成的组：TCRα、TCRβ、TCRγ、和TCRδ，并且嵌合受体多肽不包含该第一TCR亚基或该第二TCR亚基的细胞外结构域的可变区。在一些实施例中，嵌合受体多肽不包含TCRα、TCRβ、TCRγ、和TCRδ中任一个的细胞外结构域的可变区。在一些实施例中，嵌合受体多肽不包含第一和/或第二TCR亚基的细胞外结构域。在一些实施例中，嵌合受体多肽不包含任何TCR亚基的细胞外结构域。在一些实施例中，嵌合受体多肽不包含细胞内共刺激结构域。

在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)包含特异性结合靶抗原(例如，BCMA)的靶抗原结合结构域(如scFv、sdAb、或DARPin)的细胞外靶标结合结构域；b)包含特异性结合CD3(如CD3ε，例如CD3ε的N-末端)的TCR抗原结合结构域(如scFv或sdAb)的细胞外TCR结合结构域；c)跨膜结构域，和d)包含TCR亚基的细胞内结构域的细胞内结构域，其中该TCR亚基选自由以下组成的组：CD3ε、CD3γ、CD3δ、TCRα、TCRβ、TCRγ、和TCRδ。在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)包含特异性结合靶抗原(例如，BCMA)的靶抗原结合结构域(如scFv、sdAb、或DARPin)的细胞外靶标结合结构域；b)包含特异性结合CD3(如CD3ε，例如CD3ε的N-末端)的TCR抗原结合结构域(如scFv或sdAb)的细胞外TCR结合结构域；和c)包含TCR亚基的跨膜结构域的跨膜结构域，其中该TCR亚基选自由以下组成的组：CD3ε、CD3γ、CD3δ、TCRα、TCRβ、TCRγ、和TCRδ。在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)包含特异性结合靶抗原(例如，BCMA)的靶抗原结合结构域(如scFv、sdAb、或DARPin)的细胞外靶标结合结构域；b)包含特异性结合CD3(如CD3ε，例如CD3ε的N-末端)的TCR抗原结合结构域(如scFv或sdAb)的细胞外TCR结合结构域；c)包含TCR亚基的跨膜结构域的跨膜结构域，其中该TCR亚基选自由以下组成的组：CD3ε、CD3γ、CD3δ、TCRα、TCRβ、TCRγ、和TCRδ，和d)细胞内结构域。在一些实施例中，TCR抗原结合结构域是包含SEQ ID NO：22或23的氨基酸序列的抗CD3 sdAb。在一些实施例中，TCR抗原结合结构域是包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的抗CD3 scFv。在一些实施例中，TCR抗原结合结构域是包含SEQ ID NO:22或23的氨基酸序列的CDR1、CDR2、和CDR3的抗CD3 sdAb。在一些实施例中，TCR抗原结合结构域是包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的HC-CDR 1-3和LC-CDR 1-3的抗CD3 scFv。因此，在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)包含特异性结合靶抗原(例如，BCMA)的靶抗原结合结构域(如scFv、sdAb、或DARPin)的细胞外靶标结合结构域；b)包含特异性结合CD3ε的TCR抗原结合结构域的细胞外TCR结合结构域，其中该TCR抗原结合结构域是包含SEQ ID NO：22或23的氨基酸序列的sdAb，或是包含SEQ ID NO：24的氨基酸序列的scFv；c)跨膜结构域，和d)包含TCR亚基的细胞内结构域的细胞内结构域，其中该TCR亚基选自由以下组成的组：CD3ε、CD3γ、CD3δ、TCRα、TCRβ、TCRγ、和TCRδ。在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)包含特异性结合靶抗原(例如，BCMA)的靶抗原结合结构域(如scFv、sdAb、或DARPin)的细胞外靶标结合结构域；b)包含特异性结合CD3ε的TCR抗原结合结构域的细胞外TCR结合结构域，其中该TCR抗原结合结构域是包含SEQ ID NO:22或23的氨基酸序列的sdAb，或是包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的scFv；和c)包含TCR亚基的跨膜结构域的跨膜结构域，其中该TCR亚基选自由以下组成的组：CD3ε、CD3γ、CD3δ、TCRα、TCRβ、TCRγ、和TCRδ。在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)包含特异性结合靶抗原(例如，BCMA)的靶抗原结合结构域(如scFv、sdAb、或DARPin)的细胞外靶标结合结构域；b)包含特异性结合CD3ε的TCR抗原结合结构域的细胞外TCR结合结构域，其中该TCR抗原结合结构域是包含SEQ ID NO:22或23的氨基酸序列的sdAb，或是包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的scFv；c)包含TCR亚基的跨膜结构域的跨膜结构域，其中该TCR亚基选自由以下组成的组：CD3ε、CD3γ、CD3δ、TCRα、TCRβ、TCRγ、和TCRδ，和d)细胞内结构域。在一些实施例中，TCR亚基选自由以下组成的组：TCRα、TCRβ、TCRγ、和TCRδ，并且嵌合受体多肽不包含该TCR亚基的细胞外结构域的可变区。在一些实施例中，嵌合受体多肽不包含TCRα、TCRβ、TCRγ、和TCRδ中任一个的细胞外结构域的可变区。在一些实施例中，嵌合受体多肽不包含TCR亚基的细胞外结构域(或任何TCR亚基的细胞外结构域)。在一些实施例中，嵌合受体多肽不包含细胞内共刺激结构域。在一些实施例中，细胞外靶标结合结构域在细胞外TCR结合结构域的N-末端。在一些实施例中，细胞外靶标结合结构域在细胞外TCR结合结构域的C-末端。在一些实施例中，嵌合受体多肽进一步包含在嵌合受体多肽的N-末端处的信号肽。在一些实施例中，靶抗原结合结构域是特异性结合BCMA的sdAb，如PCT/CN2016/094408和PCT/CN2017/096938中所披露的任一抗BCMA sdAb。在一些实施例中，抗BCMA sdAb包含SEQ ID NO:26的氨基酸序列。在一些实施例中，细胞外TCR结合结构域包含串联排列的两个或更多个TCR抗原结合结构域(例如，scFv或sdAb)。在一些实施例中，细胞外靶标结合结构域包含串联排列的两个或更多个靶抗原结合结构域(例如，scFv、sdAb、或DARPin)。在一些实施例中，嵌合受体多肽进一步包含在该嵌合受体多肽的跨膜结构域N-末端的铰链区(例如，CD8铰链区)。在一些实施例中，嵌合受体多肽进一步包含连接细胞外靶标结合结构域和细胞外TCR结合结构域的第一接头。在一些实施例中，嵌合受体多肽进一步包含连接细胞外靶标结合结构域和/或细胞外TCR结合结构域和跨膜结构域的第二接头。在一些实施例中，第一接头和/或第二接头是GS接头、α-螺旋接头、甘氨酸-丙氨酸聚合物接头、丙氨酸-丝氨酸聚合物接头、或IgG4-Fc接头。在一些实施例中，第一接头和/或第二接头包含SEQ ID NO：1-21、67、和68中任一个的氨基酸序列。

在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)包含特异性结合靶抗原(例如，BCMA)的靶抗原结合结构域(如scFv、sdAb、或DARPin)的细胞外靶标结合结构域；b)包含特异性结合CD3(如CD3ε，例如CD3ε的N-末端)的TCR抗原结合结构域(如scFv或sdAb)的细胞外TCR结合结构域；c)包含第一TCR亚基的跨膜结构域的跨膜结构域；和d)包含第二TCR亚基的细胞内结构域的细胞内结构域，其中该第一TCR亚基和该第二TCR亚基均选自由以下组成的组：CD3ε、CD3γ、CD3δ、TCRα、TCRβ、TCRγ、和TCRδ。在一些实施例中，TCR抗原结合结构域是包含SEQ ID NO:22或23的氨基酸序列的抗CD3 sdAb。在一些实施例中，TCR抗原结合结构域是包含SEQ ID NO：24的氨基酸序列的抗CD3 scFv。在一些实施例中，TCR抗原结合结构域是包含SEQ ID NO:22或23的氨基酸序列的CDR1、CDR2、和CDR3的抗CD3 sdAb。在一些实施例中，TCR抗原结合结构域是包含SEQ ID NO：24的氨基酸序列的HC-CDR 1-3和LC-CDR 1-3的抗CD3 scFv。因此，在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)包含特异性结合靶抗原(例如，BCMA)的靶抗原结合结构域(如scFv、sdAb、或DARPin)的细胞外靶标结合结构域；b)包含特异性结合CD3ε的TCR抗原结合结构域的细胞外TCR结合结构域，其中该TCR抗原结合结构域是包含SEQ IDNO:22或23的氨基酸序列的sdAb，或是包含SEQ ID NO：24的氨基酸序列的scFv；c)包含第一TCR亚基的跨膜结构域的跨膜结构域，和d)包含第二TCR亚基的细胞内结构域的细胞内结构域，其中该第一TCR亚基和该第二TCR亚基均选自由以下组成的组：CD3ε、CD3γ、CD3δ、TCRα、TCRβ、TCRγ、和TCRδ。在一些实施例中，第一TCR亚基是CD3ε和/或第二TCR亚基是CD3ε。在一些实施例中，第一TCR亚基是CD3γ和/或第二TCR亚基是CD3γ。在一些实施例中，第一TCR亚基是CD3δ和/或第二TCR亚基是CD3δ。在一些实施例中，第一TCR亚基是TCRα和/或第二TCR亚基是TCRα。在一些实施例中，第一TCR亚基是TCRβ和/或第二TCR亚基是TCRβ。在一些实施例中，第一TCR亚基是TCRγ和/或第二TCR亚基是TCRγ。在一些实施例中，第一TCR亚基是TCRδ和/或第二TCR亚基是TCRδ。在一些实施例中，第一TCR亚基和第二TCR亚基相同。在一些实施例中，第一TCR亚基和第二TCR亚基不同。在一些实施例中，第一TCR亚基和第二TCR亚基均选自由以下组成的组：TCRα、TCRβ、TCRγ、和TCRδ，并且嵌合受体多肽不包含该第一TCR亚基或该第二TCR亚基的细胞外结构域的可变区。在一些实施例中，嵌合受体多肽不包含TCRα、TCRβ、TCRγ、和TCRδ中任一个的细胞外结构域的可变区。在一些实施例中，嵌合受体多肽不包含第一和/或第二TCR亚基的细胞外结构域。在一些实施例中，嵌合受体多肽不包含任何TCR亚基的细胞外结构域。在一些实施例中，嵌合受体多肽不包含细胞内共刺激结构域。在一些实施例中，细胞外靶标结合结构域在细胞外TCR结合结构域的N-末端。在一些实施例中，细胞外靶标结合结构域在细胞外TCR结合结构域的C-末端。在一些实施例中，嵌合受体多肽进一步包含在嵌合受体多肽的N-末端处的信号肽。在一些实施例中，靶抗原结合结构域是特异性结合BCMA的sdAb，如PCT/CN2016/094408和PCT/CN2017/096938中所披露的任一抗BCMAsdAb。在一些实施例中，抗BCMA sdAb包含SEQ ID NO：26的氨基酸序列。在一些实施例中，细胞外TCR结合结构域包含串联排列的两个或更多个TCR抗原结合结构域(例如，scFv或sdAb)。在一些实施例中，细胞外靶标结合结构域包含串联排列的两个或更多个靶抗原结合结构域(例如，scFv、sdAb、或DARPin)。在一些实施例中，嵌合受体多肽进一步包含在该嵌合受体多肽的跨膜结构域N-末端的铰链区(例如，CD8铰链区)。在一些实施例中，嵌合受体多肽进一步包含连接细胞外靶标结合结构域和细胞外TCR结合结构域的第一接头。在一些实施例中，嵌合受体多肽进一步包含连接细胞外靶标结合结构域和/或细胞外TCR结合结构域和跨膜结构域的第二接头。在一些实施例中，第一接头和/或第二接头是GS接头、α-螺旋接头、甘氨酸-丙氨酸聚合物接头、丙氨酸-丝氨酸聚合物接头、或IgG4-Fc接头。在一些实施例中，第一接头和/或第二接头包含SEQ ID NO:1-21、67、和68中任一个的氨基酸序列。

在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)包含各自特异性结合靶抗原(例如，BCMA)的两个或更多个(如两个)靶抗原结合结构域(如scFv、sdAb、或DARPin)的细胞外靶标结合结构域；b)包含特异性结合CD3(如CD3ε，例如CD3ε的N-末端)的TCR抗原结合结构域(如scFv或sdAb)的细胞外TCR结合结构域；c)包含第一TCR亚基的跨膜结构域的跨膜结构域；和d)包含第二TCR亚基的细胞内结构域的细胞内结构域，其中该第一TCR亚基和该第二TCR亚基均选自由以下组成的组：CD3ε、CD3γ、CD3δ、TCRα、TCRβ、TCRγ、和TCRδ。在一些实施例中，TCR抗原结合结构域是包含SEQ ID NO：22或23的氨基酸序列的抗CD3 sdAb。在一些实施例中，TCR抗原结合结构域是包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的抗CD3 scFv。在一些实施例中，TCR抗原结合结构域是包含SEQ ID NO：22或23的氨基酸序列的CDR1、CDR2、和CDR3的抗CD3sdAb。在一些实施例中，TCR抗原结合结构域是包含SEQ ID NO：24的氨基酸序列的HC-CDR 1-3和LC-CDR 1-3的抗CD3 scFv。因此，在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)包含各自特异性结合靶抗原(例如，BCMA)的两个或更多个(如两个)靶抗原结合结构域(如scFv、sdAb、或DARPin)的细胞外靶标结合结构域；b)包含特异性结合CD3ε的TCR抗原结合结构域的细胞外TCR结合结构域，其中该TCR抗原结合结构域是包含SEQ ID NO：22或23的氨基酸序列的sdAb，或是包含SEQ ID NO：24的氨基酸序列的scFv；c)包含第一TCR亚基的跨膜结构域的跨膜结构域，和d)包含第二TCR亚基的细胞内结构域的细胞内结构域，其中该第一TCR亚基和该第二TCR亚基均选自由以下组成的组：CD3ε、CD3γ、CD3δ、TCRα、TCRβ、TCRγ、和TCRδ。在一些实施例中，第一TCR亚基是CD3ε和/或第二TCR亚基是CD3ε。在一些实施例中，第一TCR亚基是CD3γ和/或第二TCR亚基是CD3γ。在一些实施例中，第一TCR亚基是CD3δ和/或第二TCR亚基是CD3δ。在一些实施例中，第一TCR亚基是TCRα和/或第二TCR亚基是TCRα。在一些实施例中，第一TCR亚基是TCRβ和/或第二TCR亚基是TCRβ。在一些实施例中，第一TCR亚基是TCRγ和/或第二TCR亚基是TCRγ。在一些实施例中，第一TCR亚基是TCRδ和/或第二TCR亚基是TCRδ。在一些实施例中，第一TCR亚基和第二TCR亚基相同。在一些实施例中，第一TCR亚基和第二TCR亚基不同。在一些实施例中，两个或更多个(如两个)靶抗原结合结构域是串联排列的。在一些实施例中，两个或更多个(如两个)靶抗原结合结构域与同一抗原或抗原上的同一表位结合。在一些实施例中，两个或更多个(如两个)靶抗原结合结构域与同一抗原上的不同的表位结合。在一些实施例中，两个或更多个(如两个)靶抗原结合结构域与不同的抗原结合。在一些实施例中，两个或更多个(如两个)靶抗原结合结构域相同。在一些实施例中，两个或更多个(如两个)靶抗原结合结构域不同。在一些实施例中，第一TCR亚基和第二TCR亚基均选自由以下组成的组：TCRα、TCRβ、TCRγ、和TCRδ，并且嵌合受体多肽不包含该第一TCR亚基或该第二TCR亚基的细胞外结构域的可变区。在一些实施例中，嵌合受体多肽不包含TCRα、TCRβ、TCRγ、和TCRδ中任一个的细胞外结构域的可变区。在一些实施例中，嵌合受体多肽不包含第一和/或第二TCR亚基的细胞外结构域。在一些实施例中，嵌合受体多肽不包含任何TCR亚基的细胞外结构域。在一些实施例中，嵌合受体多肽不包含细胞内共刺激结构域。在一些实施例中，细胞外靶标结合结构域在细胞外TCR结合结构域的N-末端。在一些实施例中，细胞外靶标结合结构域在细胞外TCR结合结构域的C-末端。在一些实施例中，嵌合受体多肽进一步包含在嵌合受体多肽的N-末端处的信号肽。在一些实施例中，嵌合受体多肽包含细胞外靶标结合结构域和细胞外TCR结合结构域之间的接头。在一些实施例中，嵌合受体多肽包含细胞外靶标结合结构域(或细胞外TCR结合结构域)和跨膜结构域之间的接头。在一些实施例中，细胞外靶标结合结构域包含串联排列的两个或更多个靶抗原结合结构域(例如，scFv、sdAb、或DARPin)。在一些实施例中，嵌合受体多肽进一步包含在该嵌合受体多肽的跨膜结构域N-末端的铰链区(例如，CD8铰链区)。在一些实施例中，嵌合受体多肽包含细胞外靶标结合结构域内的两个或更多个(如两个)靶抗原结合结构域之间的接头。在一些实施例中，接头是GS接头、α-螺旋接头、甘氨酸-丙氨酸聚合物接头、丙氨酸-丝氨酸聚合物接头、或IgG4-Fc接头。在一些实施例中，接头包含SEQ ID NO:1-21、67、和68中任一个的氨基酸序列。在一些实施例中，两个或更多个(例如，两个)靶抗原结合结构域是特异性结合BCMA的sdAb，如PCT/CN2016/094408和PCT/CN2017/096938中所披露的任一抗BCMAsdAb。在一些实施例中，抗BCMA sdAb包含SEQ ID NO:26的氨基酸序列。

在一些实施例中，第一TCR亚基和第二TCR亚基选自由CD3ε、CD3γ、和CD3δ组成的组。例如，在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)包含特异性结合靶抗原(例如，BCMA)的靶抗原结合结构域(如scFv、sdAb、或DARPin)的细胞外靶标结合结构域；b)包含特异性结合CD3(如CD3ε，例如CD3ε的N-末端)的TCR抗原结合结构域(如scFv或sdAb)的细胞外TCR结合结构域；c)包含CD3ε的跨膜结构域的跨膜结构域；和d)包含CD3ε的细胞内结构域的细胞内结构域。在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)包含特异性结合靶抗原(例如，BCMA)的靶抗原结合结构域(如scFv、sdAb、或DARPin)的细胞外靶标结合结构域；b)包含特异性结合CD3(如CD3ε，例如CD3ε的N-末端)的TCR抗原结合结构域(如scFv或sdAb)的细胞外TCR结合结构域；c)包含CD3γ的跨膜结构域的跨膜结构域；和d)包含CD3γ的细胞内结构域的细胞内结构域。在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)包含特异性结合靶抗原(例如，BCMA)的靶抗原结合结构域(如scFv、sdAb、或DARPin)的细胞外靶标结合结构域；b)包含特异性结合CD3(如CD3ε，例如CD3ε的N-末端)的TCR抗原结合结构域(如scFv或sdAb)的细胞外TCR结合结构域；c)包含CD3δ的跨膜结构域的跨膜结构域；和d)包含CD3δ的细胞内结构域的细胞内结构域。在一些实施例中，TCR抗原结合结构域是包含SEQ ID NO：22或23的氨基酸序列的抗CD3 sdAb。在一些实施例中，TCR抗原结合结构域是包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的抗CD3 scFv。在一些实施例中，TCR抗原结合结构域是包含SEQ ID NO:22或23的氨基酸序列的CDR1、CDR2、和CDR3的抗CD3 sdAb。在一些实施例中，TCR抗原结合结构域是包含SEQ ID NO：24的氨基酸序列的HC-CDR 1-3和LC-CDR 1-3的抗CD3scFv。因此，在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)包含特异性结合靶抗原(例如，BCMA)的靶抗原结合结构域(如scFv、sdAb、或DARPin)的细胞外靶标结合结构域；b)包含特异性结合CD3ε的TCR抗原结合结构域的细胞外TCR结合结构域，其中该TCR抗原结合结构域是包含SEQ ID NO:22或23的氨基酸序列的sdAb，或是包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的scFv；c)包含CD3ε的跨膜结构域的跨膜结构域；和d)包含CD3ε的细胞内结构域的细胞内结构域。在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)包含特异性结合靶抗原(例如，BCMA)的靶抗原结合结构域(如scFv、sdAb、或DARPin)的细胞外靶标结合结构域；b)包含特异性结合CD3ε的TCR抗原结合结构域的细胞外TCR结合结构域，其中该TCR抗原结合结构域是包含SEQ ID NO:22或23的氨基酸序列的sdAb，或是包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的scFv；c)包含CD3γ的跨膜结构域的跨膜结构域；和d)包含CD3γ的细胞内结构域的细胞内结构域。在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)包含特异性结合靶抗原(例如，BCMA)的靶抗原结合结构域(如scFv、sdAb、或DARPin)的细胞外靶标结合结构域；b)包含特异性结合CD3ε的TCR抗原结合结构域的细胞外TCR结合结构域，其中该TCR抗原结合结构域是包含SEQ ID NO：22或23的氨基酸序列的sdAb，或是包含SEQ ID NO：24的氨基酸序列的scFv；c)包含CD3δ的跨膜结构域的跨膜结构域；和d)包含CD3δ的细胞内结构域的细胞内结构域。在一些实施例中，嵌合受体多肽不包含CD3ε的细胞外结构域。在一些实施例中，嵌合受体多肽不包含CD3γ的细胞外结构域。在一些实施例中，嵌合受体多肽不包含CD3δ的细胞外结构域。在一些实施例中，嵌合受体多肽不包含任何TCR亚基的细胞外结构域。在一些实施例中，第一TCR亚基和第二TCR亚基选自由以下组成的组：TCRα、TCRβ、TCRγ、和TCRδ。例如，在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)包含特异性结合靶抗原(例如，BCMA)的靶抗原结合结构域(如scFv、sdAb、或DARPin)的细胞外靶标结合结构域；b)包含特异性结合CD3(如CD3ε，例如CD3ε的N-末端)的TCR抗原结合结构域(如scFv或sdAb)的细胞外TCR结合结构域；c)包含TCRα的跨膜结构域的跨膜结构域；和d)包含TCRα的细胞内结构域的细胞内结构域。在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)包含特异性结合靶抗原(例如，BCMA)的靶抗原结合结构域(如scFv、sdAb、或DARPin)的细胞外靶标结合结构域；b)包含特异性结合CD3(如CD3ε，例如CD3ε的N-末端)的TCR抗原结合结构域(如scFv或sdAb)的细胞外TCR结合结构域；c)包含TCRβ的跨膜结构域的跨膜结构域；和d)包含TCRβ的细胞内结构域的细胞内结构域。在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)包含特异性结合靶抗原(例如，BCMA)的靶抗原结合结构域(如scFv、sdAb、或DARPin)的细胞外靶标结合结构域；b)包含特异性结合CD3(如CD3ε，例如CD3ε的N-末端)的TCR抗原结合结构域(如scFv或sdAb)的细胞外TCR结合结构域；c)包含TCRγ的跨膜结构域的跨膜结构域；和d)包含TCRγ的细胞内结构域的细胞内结构域。在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)包含特异性结合靶抗原(例如，BCMA)的靶抗原结合结构域(如scFv、sdAb、或DARPin)的细胞外靶标结合结构域；b)包含特异性结合CD3(如CD3ε，例如CD3ε的N-末端)的TCR抗原结合结构域(如scFv或sdAb)的细胞外TCR结合结构域；c)包含TCRδ的跨膜结构域的跨膜结构域；和d)包含TCRδ的细胞内结构域的细胞内结构域。在一些实施例中，TCR抗原结合结构域是包含SEQ ID NO：22或23的氨基酸序列的抗CD3 sdAb。在一些实施例中，TCR抗原结合结构域是包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的抗CD3 scFv。在一些实施例中，TCR抗原结合结构域是包含SEQ ID NO:22或23的氨基酸序列的CDR1、CDR2、和CDR3的抗CD3 sdAb。在一些实施例中，TCR抗原结合结构域是包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的HC-CDR 1-3和LC-CDR 1-3的抗CD3 scFv。因此，在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)包含特异性结合靶抗原(例如，BCMA)的靶抗原结合结构域(如scFv、sdAb、或DARPin)的细胞外靶标结合结构域；b)包含特异性结合CD3ε的TCR抗原结合结构域的细胞外TCR结合结构域，其中该TCR抗原结合结构域是包含SEQ IDNO:22或23的氨基酸序列的sdAb，或是包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的scFv；c)包含TCRα的跨膜结构域的跨膜结构域；和d)包含TCRα的细胞内结构域的细胞内结构域。在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)包含特异性结合靶抗原(例如，BCMA)的靶抗原结合结构域(如scFv、sdAb、或DARPin)的细胞外靶标结合结构域；b)包含特异性结合CD3ε的TCR抗原结合结构域的细胞外TCR结合结构域，其中该TCR抗原结合结构域是包含SEQ ID NO:22或23的氨基酸序列的sdAb，或是包含SEQ ID NO：24的氨基酸序列的scFv；c)包含TCRβ的跨膜结构域的跨膜结构域；和d)包含TCRβ的细胞内结构域的细胞内结构域。在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)包含特异性结合靶抗原(例如，BCMA)的靶抗原结合结构域(如scFv、sdAb、或DARPin)的细胞外靶标结合结构域；b)包含特异性结合CD3ε的TCR抗原结合结构域的细胞外TCR结合结构域，其中该TCR抗原结合结构域是包含SEQ ID NO:22或23的氨基酸序列的sdAb，或是包含SEQ ID NO：24的氨基酸序列的scFv；c)包含TCRγ的跨膜结构域的跨膜结构域；和d)包含TCRγ的细胞内结构域的细胞内结构域。在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)包含特异性结合靶抗原(例如，BCMA)的靶抗原结合结构域(如scFv、sdAb、或DARPin)的细胞外靶标结合结构域；b)包含特异性结合CD3ε的TCR抗原结合结构域的细胞外TCR结合结构域，其中该TCR抗原结合结构域是包含SEQ IDNO:22或23的氨基酸序列的sdAb，或是包含SEQ ID NO：24的氨基酸序列的scFv；c)包含TCRδ的跨膜结构域的跨膜结构域；和d)包含TCRδ的细胞内结构域的细胞内结构域。在一些实施例中，嵌合受体多肽不包含TCRα的可变区，但包含TCRα的恒定区(例如，包含在TCRα跨膜结构域和细胞内结构域N-末端的TCRα恒定区)。在一些实施例中，嵌合受体多肽不包含TCRβ的可变区，但包含TCRβ的恒定区(例如，包含在TCRβ跨膜结构域和细胞内结构域N-末端的TCRβ恒定区)。在一些实施例中，嵌合受体多肽不包含TCRγ的可变区，但包含TCRγ的恒定区(例如，包含在TCRγ跨膜结构域和细胞内结构域N-末端的TCRγ恒定区)。在一些实施例中，嵌合受体多肽不包含TCRδ的可变区，但包含TCRδ的恒定区(例如，包含在TCRδ跨膜结构域和细胞内结构域N-末端的TCRδ恒定区)。在一些实施例中，嵌合受体多肽不包含TCRα的细胞外结构域。在一些实施例中，嵌合受体多肽不包含TCRβ的细胞外结构域。在一些实施例中，嵌合受体多肽不包含TCRγ的细胞外结构域。在一些实施例中，嵌合受体多肽不包含TCRδ的细胞外结构域。在一些实施例中，嵌合受体多肽不包含TCRα、TCRβ、TCRγ、和TCRδ中任一个的细胞外结构域。在一些实施例中，嵌合受体多肽不包含任何TCR亚基的细胞外结构域。在一些实施例中，嵌合受体多肽不包含细胞内共刺激结构域。在一些实施例中，细胞外靶标结合结构域在细胞外TCR结合结构域的N-末端。在一些实施例中，细胞外靶标结合结构域在细胞外TCR结合结构域的C-末端。在一些实施例中，嵌合受体多肽进一步包含在嵌合受体多肽的N-末端处的信号肽。在一些实施例中，细胞外TCR结合结构域包含串联排列的两个或更多个TCR抗原结合结构域(例如，scFv或sdAb)。在一些实施例中，细胞外靶标结合结构域包含串联排列的两个或更多个靶抗原结合结构域(例如，scFv、sdAb、或DARPin)。在一些实施例中，嵌合受体多肽进一步包含在该嵌合受体多肽的跨膜结构域N-末端的铰链区(例如，CD8铰链区)。在一些实施例中，细胞外靶标结合结构域包含特异性结合BCMA的sdAb，如PCT/CN2016/094408和PCT/CN2017/096938中所披露的任一抗BCMA sdAb。在一些实施例中，抗BCMA sdAb包含SEQ ID NO:26的氨基酸序列。在一些实施例中，嵌合受体多肽进一步包含连接细胞外靶标结合结构域和细胞外TCR结合结构域的第一接头。在一些实施例中，嵌合受体多肽进一步包含连接细胞外靶标结合结构域和/或细胞外TCR结合结构域和跨膜结构域的第二接头。在一些实施例中，第一接头和/或第二接头是GS接头、α-螺旋接头、甘氨酸-丙氨酸聚合物接头、丙氨酸-丝氨酸聚合物接头、或IgG4-Fc接头。在一些实施例中，第一接头和/或第二接头包含SEQ ID NO：1-21、67、和68中任一个的氨基酸序列。

在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)包含各自特异性结合靶抗原(如BCMA)的两个或更多个(如两个)靶抗原结合结构域(如scFv、sdAb、或DARPin)的细胞外靶标结合结构域；b)包含特异性结合CD3(如CD3ε，例如CD3ε的N-末端)的TCR抗原结合结构域(如scFv或sdAb)的细胞外TCR结合结构域；c)包含CD3ε的跨膜结构域的跨膜结构域；和d)包含CD3ε的细胞内结构域的细胞内结构域。在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)包含各自特异性结合靶抗原(如BCMA)的两个或更多个(如两个)靶抗原结合结构域(如scFv、sdAb、或DARPin)的细胞外靶标结合结构域；b)包含特异性结合CD3(如CD3ε，例如CD3ε的N-末端)的TCR抗原结合结构域(如scFv或sdAb)的细胞外TCR结合结构域；c)包含CD3γ的跨膜结构域的跨膜结构域；和d)包含CD3γ的细胞内结构域的细胞内结构域。在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)包含各自特异性结合靶抗原(如BCMA)的两个或更多个(如两个)靶抗原结合结构域(如scFv、sdAb、或DARPin)的细胞外靶标结合结构域；b)包含特异性结合CD3(如CD3ε，例如CD3ε的N-末端)的TCR抗原结合结构域(如scFv或sdAb)的细胞外TCR结合结构域；c)包含CD3δ的跨膜结构域的跨膜结构域；和d)包含CD3δ的细胞内结构域的细胞内结构域。在一些实施例中，TCR抗原结合结构域是包含SEQ ID NO:22或23的氨基酸序列的抗CD3 sdAb。在一些实施例中，TCR抗原结合结构域是包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的抗CD3 scFv。在一些实施例中，TCR抗原结合结构域是包含SEQ ID NO:22或23的氨基酸序列的CDR1、CDR2、和CDR3的抗CD3 sdAb。在一些实施例中，TCR抗原结合结构域是包含SEQ ID NO：24的氨基酸序列的HC-CDR 1-3和LC-CDR 1-3的抗CD3 scFv。因此，在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)包含各自特异性结合靶抗原(如BCMA)的两个或更多个(如两个)靶抗原结合结构域(如scFv、sdAb、或DARPin)的细胞外靶标结合结构域；b)包含特异性结合CD3ε的TCR抗原结合结构域的细胞外TCR结合结构域，其中该TCR抗原结合结构域是包含SEQ ID NO：22或23的氨基酸序列的sdAb，或是包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的scFv；c)包含CD3ε的跨膜结构域的跨膜结构域；和d)包含CD3ε的细胞内结构域的细胞内结构域。在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)包含各自特异性结合靶抗原(如BCMA)的两个或更多个(如两个)靶抗原结合结构域(如scFv、sdAb、或DARPin)的细胞外靶标结合结构域；b)包含特异性结合CD3ε的TCR抗原结合结构域的细胞外TCR结合结构域，其中该TCR抗原结合结构域是包含SEQ ID NO:22或23的氨基酸序列的sdAb，或是包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的scFv；c)包含CD3γ的跨膜结构域的跨膜结构域；和d)包含CD3γ的细胞内结构域的细胞内结构域。在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)包含各自特异性结合靶抗原(如BCMA)的两个或更多个(如两个)靶抗原结合结构域(如scFv、sdAb、或DARPin)的细胞外靶标结合结构域；b)包含特异性结合CD3ε的TCR抗原结合结构域的细胞外TCR结合结构域，其中该TCR抗原结合结构域是包含SEQ ID NO:22或23的氨基酸序列的sdAb，或是包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的scFv；c)包含CD3δ的跨膜结构域的跨膜结构域；和d)包含CD3δ的细胞内结构域的细胞内结构域。在一些实施例中，嵌合受体多肽不包含CD3ε的细胞外结构域。在一些实施例中，嵌合受体多肽不包含CD3γ的细胞外结构域。在一些实施例中，嵌合受体多肽不包含CD3δ的细胞外结构域。在一些实施例中，嵌合受体多肽不包含任何TCR亚基的细胞外结构域。在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)包含各自特异性结合靶抗原(如BCMA)的两个或更多个(如两个)靶抗原结合结构域(如scFv、sdAb、或DARPin)的细胞外靶标结合结构域；b)包含特异性结合CD3(如CD3ε，例如CD3ε的N-末端)的TCR抗原结合结构域(如scFv或sdAb)的细胞外TCR结合结构域；c)包含TCRα的跨膜结构域的跨膜结构域；和d)包含TCRα的细胞内结构域的细胞内结构域。在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)包含各自特异性结合靶抗原(如BCMA)的两个或更多个(如两个)靶抗原结合结构域(如scFv、sdAb、或DARPin)的细胞外靶标结合结构域；b)包含特异性结合CD3(如CD3ε，例如CD3ε的N-末端)的TCR抗原结合结构域(如scFv或sdAb)的细胞外TCR结合结构域；c)包含TCRβ的跨膜结构域的跨膜结构域；和d)包含TCRβ的细胞内结构域的细胞内结构域。在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)包含各自特异性结合靶抗原(如BCMA)的两个或更多个(如两个)靶抗原结合结构域(如scFv、sdAb、或DARPin)的细胞外靶标结合结构域；b)包含特异性结合CD3(如CD3ε，例如CD3ε的N-末端)的TCR抗原结合结构域(如scFv或sdAb)的细胞外TCR结合结构域；c)包含TCRγ的跨膜结构域的跨膜结构域；和d)包含TCRγ的细胞内结构域的细胞内结构域。在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)包含各自特异性结合靶抗原(如BCMA)的两个或更多个(如两个)靶抗原结合结构域(如scFv、sdAb、或DARPin)的细胞外靶标结合结构域；b)包含特异性结合CD3(如CD3ε，例如CD3ε的N-末端)的TCR抗原结合结构域(如scFv或sdAb)的细胞外TCR结合结构域；c)包含TCRδ的跨膜结构域的跨膜结构域；和d)包含TCRδ的细胞内结构域的细胞内结构域。在一些实施例中，TCR抗原结合结构域是包含SEQ ID NO:22或23的氨基酸序列的抗CD3 sdAb。在一些实施例中，TCR抗原结合结构域是包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的抗CD3 scFv。在一些实施例中，TCR抗原结合结构域是包含SEQ ID NO:22或23的氨基酸序列的CDR1、CDR2、和CDR3的抗CD3 sdAb。在一些实施例中，TCR抗原结合结构域是包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的HC-CDR 1-3和LC-CDR 1-3的抗CD3 scFv。因此，在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)包含各自特异性结合靶抗原(如BCMA)的两个或更多个(如两个)靶抗原结合结构域(如scFv、sdAb、或DARPin)的细胞外靶标结合结构域；b)包含特异性结合CD3ε的TCR抗原结合结构域的细胞外TCR结合结构域，其中该TCR抗原结合结构域是包含SEQ ID NO：22或23的氨基酸序列的sdAb，或是包含SEQ ID NO：24的氨基酸序列的scFv；c)包含TCRα的跨膜结构域的跨膜结构域；和d)包含TCRα的细胞内结构域的细胞内结构域。在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)包含各自特异性结合靶抗原(如BCMA)的两个或更多个(如两个)靶抗原结合结构域(如scFv、sdAb、或DARPin)的细胞外靶标结合结构域；b)包含特异性结合CD3ε的TCR抗原结合结构域的细胞外TCR结合结构域，其中该TCR抗原结合结构域是包含SEQ ID NO：22或23的氨基酸序列的sdAb，或是包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的scFv；c)包含TCRβ的跨膜结构域的跨膜结构域；和d)包含TCRβ的细胞内结构域的细胞内结构域。在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)包含各自特异性结合靶抗原(如BCMA)的两个或更多个(如两个)靶抗原结合结构域(如scFv、sdAb、或DARPin)的细胞外靶标结合结构域；b)包含特异性结合CD3ε的TCR抗原结合结构域的细胞外TCR结合结构域，其中该TCR抗原结合结构域是包含SEQ ID NO:22或23的氨基酸序列的sdAb，或是包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的scFv；c)包含TCRγ的跨膜结构域的跨膜结构域；和d)包含TCRγ的细胞内结构域的细胞内结构域。在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)包含各自特异性结合靶抗原(如BCMA)的两个或更多个(如两个)靶抗原结合结构域(如scFv、sdAb、或DARPin)的细胞外靶标结合结构域；b)包含特异性结合CD3ε的TCR抗原结合结构域的细胞外TCR结合结构域，其中该TCR抗原结合结构域是包含SEQ ID NO:22或23的氨基酸序列的sdAb，或是包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的scFv；c)包含TCRδ的跨膜结构域的跨膜结构域；和d)包含TCRδ的细胞内结构域的细胞内结构域。在一些实施例中，嵌合受体多肽不包含TCRα的可变区，但包含TCRα的恒定区(例如，包含在TCRα跨膜结构域和细胞内结构域N-末端的TCRα恒定区)。在一些实施例中，嵌合受体多肽不包含TCRβ的可变区，但包含TCRβ的恒定区(例如，包含在TCRβ跨膜结构域和细胞内结构域N-末端的TCRβ恒定区)。在一些实施例中，嵌合受体多肽不包含TCRγ的可变区，但包含TCRγ的恒定区(例如，包含在TCRγ跨膜结构域和细胞内结构域N-末端的TCRγ恒定区)。在一些实施例中，嵌合受体多肽不包含TCRδ的可变区，但包含TCRδ的恒定区(例如，包含在TCRδ跨膜结构域和细胞内结构域N-末端的TCRδ恒定区)。在一些实施例中，嵌合受体多肽不包含TCRα的细胞外结构域。在一些实施例中，嵌合受体多肽不包含TCRβ的细胞外结构域。在一些实施例中，嵌合受体多肽不包含TCRγ的细胞外结构域。在一些实施例中，嵌合受体多肽不包含TCRδ的细胞外结构域。在一些实施例中，嵌合受体多肽不包含TCRα、TCRβ、TCRγ、和TCRδ中任一个的细胞外结构域。在一些实施例中，嵌合受体多肽不包含任何TCR亚基的细胞外结构域。在一些实施例中，两个或更多个靶抗原结合结构域与同一抗原或抗原上的同一表位结合。在一些实施例中，两个或更多个靶抗原结合结构域与同一抗原上的不同的表位结合。在一些实施例中，两个或更多个靶抗原结合结构域与不同的抗原结合。在一些实施例中，两个或更多个靶抗原结合结构域相同。在一些实施例中，两个或更多个靶抗原结合结构域不同。在一些实施例中，嵌合受体多肽不包含细胞内共刺激结构域。在一些实施例中，两个或更多个靶抗原结合结构域是串联排列的。在一些实施例中，两个或更多个靶抗原结合结构域通过一个或多个任选的接头连接。在一些实施例中，细胞外靶标结合结构域在细胞外TCR结合结构域的N-末端。在一些实施例中，细胞外靶标结合结构域在细胞外TCR结合结构域的C-末端。在一些实施例中，嵌合受体多肽进一步包含在嵌合受体多肽的N-末端处的信号肽。在一些实施例中，细胞外TCR结合结构域包含串联排列的两个或更多个TCR抗原结合结构域(例如，scFv或sdAb)。在一些实施例中，嵌合受体多肽进一步包含在该嵌合受体多肽的跨膜结构域N-末端的铰链区(例如，CD8铰链区)。在一些实施例中，嵌合受体多肽包含细胞外靶标结合结构域和细胞外TCR结合结构域之间的接头。在一些实施例中，嵌合受体多肽包含细胞外靶标结合结构域(或细胞外TCR结合结构域)和跨膜结构域之间的接头。在一些实施例中，嵌合受体多肽包含细胞外靶标结合结构域内的两个或更多个靶抗原结合结构域之间的接头。在一些实施例中，两个或更多个靶抗原结合结构域是特异性结合BCMA的sdAb，如PCT/CN2016/094408和PCT/CN2017/096938中所披露的任一抗BCMA sdAb。在一些实施例中，抗BCMA sdAb包含SEQ IDNO：26的氨基酸序列。在一些实施例中，接头是GS接头、α-螺旋接头、甘氨酸-丙氨酸聚合物接头、丙氨酸-丝氨酸聚合物接头、或IgG4-Fc接头。在一些实施例中，两个或更多个靶抗原结合结构域通过选自下组的接头连接，该组由SEQ ID NO：1-21、67、和68组成。

在一些实施例中，细胞外TCR结合结构域包含特异性结合TCR(如TCRγ/δ，例如TCRγ/δ的恒定区)的TCR抗原结合结构域(如scFv或sdAb)。例如，在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)细胞外靶标结合结构域(例如，抗BCMA sdAb)；b)包含特异性结合TCR(如TCRγ/δ，例如TCRγ/δ的恒定区)的TCR抗原结合结构域(如scFv或sdAb)的细胞外TCR结合结构域；c)跨膜结构域，和d)包含TCR亚基的细胞内结构域的细胞内结构域，其中该TCR亚基选自由以下组成的组：CD3ε、CD3γ、CD3δ、TCRα、TCRβ、TCRγ、和TCRδ。在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)细胞外靶标结合结构域(例如，抗BCMA sdAb)；b)包含特异性结合TCR(如TCRγ/δ，例如TCRγ/δ的恒定区)的TCR抗原结合结构域(如scFv或sdAb)的细胞外TCR结合结构域；和c)包含TCR亚基的跨膜结构域的跨膜结构域，其中该TCR亚基选自由以下组成的组：CD3ε、CD3γ、CD3δ、TCRα、TCRβ、TCRγ、和TCRδ。在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)细胞外靶标结合结构域(例如，抗BCMA sdAb)；b)包含特异性结合TCR(如TCRγ/δ，例如TCRγ/δ的恒定区)的TCR抗原结合结构域(如scFv或sdAb)的细胞外TCR结合结构域；c)包含TCR亚基的跨膜结构域的跨膜结构域，其中该TCR亚基选自由以下组成的组：CD3ε、CD3γ、CD3δ、TCRα、TCRβ、TCRγ、和TCRδ，和d)细胞内结构域。在一些实施例中，嵌合受体多肽不包含TCR亚基的细胞外结构域(或任何TCR亚基的细胞外结构域)。在一些实施例中，TCR亚基选自由以下组成的组：TCRα、TCRβ、TCRγ、和TCRδ，并且嵌合受体多肽不包含该TCR亚基的细胞外结构域的可变区。在一些实施例中，嵌合受体多肽不包含TCRα、TCRβ、TCRγ、和TCRδ中任一个的细胞外结构域的可变区。在一些实施例中，嵌合受体多肽不包含细胞内共刺激结构域。在一些实施例中，细胞外靶标结合结构域在细胞外TCR结合结构域的N-末端。在一些实施例中，细胞外靶标结合结构域在细胞外TCR结合结构域的C-末端。在一些实施例中，嵌合受体多肽进一步包含在嵌合受体多肽的N-末端处的信号肽。在一些实施例中，TCR抗原结合结构域是包含SEQ ID NO：27的氨基酸序列的抗TCR scFv。在一些实施例中，TCR抗原结合结构域是包含SEQ ID NO:27的氨基酸序列的HC-CDR 1-3和LC-CDR1-3的抗TCR scFv。因此，在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)细胞外靶标结合结构域(例如，抗BCMA sdAb)；b)包含特异性结合TCRγ/δ的TCR抗原结合结构域的细胞外TCR结合结构域，其中该TCR抗原结合结构域是包含SEQ IDNO:27的氨基酸序列的scFv；c)跨膜结构域，和d)包含TCR亚基的细胞内结构域的细胞内结构域，其中该TCR亚基选自由以下组成的组：CD3ε、CD3γ、CD3δ、TCRα、TCRβ、TCRγ、和TCRδ。在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)细胞外靶标结合结构域(例如，抗BCMA sdAb)；b)包含特异性结合TCRγ/δ的TCR抗原结合结构域的细胞外TCR结合结构域，其中该TCR抗原结合结构域是包含SEQ ID NO:27的氨基酸序列的scFv；和c)包含TCR亚基的跨膜结构域的跨膜结构域，其中该TCR亚基选自由以下组成的组：CD3ε、CD3γ、CD3δ、TCRα、TCRβ、TCRγ、和TCRδ。在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)细胞外靶标结合结构域(例如，抗BCMA sdAb)；b)包含特异性结合TCRγ/δ的TCR抗原结合结构域的细胞外TCR结合结构域，其中该TCR抗原结合结构域是包含SEQ ID NO：27的氨基酸序列的scFv；c)包含TCR亚基的跨膜结构域的跨膜结构域，其中该TCR亚基选自由以下组成的组：CD3ε、CD3γ、CD3δ、TCRα、TCRβ、TCRγ、和TCRδ，和d)细胞内结构域。

在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)细胞外靶标结合结构域(例如，抗BCMA sdAb)；b)包含特异性结合TCR(如TCRγ/δ，例如TCRγ/δ的恒定区)的TCR抗原结合结构域(如scFv或sdAb)的细胞外TCR结合结构域；c)包含第一TCR亚基的跨膜结构域的跨膜结构域，和d)包含第二TCR亚基的细胞内结构域的细胞内结构域，其中该第一TCR亚基和该第二TCR亚基均选自由以下组成的组：CD3ε、CD3γ、CD3δ、TCRα、TCRβ、TCRγ、和TCRδ。在一些实施例中，TCR抗原结合结构域是包含SEQ ID NO:27的氨基酸序列的抗TCR scFv。在一些实施例中，TCR抗原结合结构域是包含SEQ ID NO:27的氨基酸序列的HC-CDR 1-3和LC-CDR 1-3的抗TCR scFv。因此，在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)细胞外靶标结合结构域(例如，抗BCMAsdAb)；b)包含特异性结合TCRγ/δ的TCR抗原结合结构域的细胞外TCR结合结构域，其中该TCR抗原结合结构域是包含SEQ ID NO:27的氨基酸序列的scFv；c)包含第一TCR亚基的跨膜结构域的跨膜结构域，和d)包含第二TCR亚基的细胞内结构域的细胞内结构域，其中该第一TCR亚基和该第二TCR亚基均选自由以下组成的组：CD3ε、CD3γ、CD3δ、TCRα、TCRβ、TCRγ、和TCRδ。在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)包含特异性结合靶抗原(例如，BCMA)的靶抗原结合结构域(如scFv、sdAb、或DARPin)的细胞外靶标结合结构域；b)包含特异性结合TCR(如TCRγ/δ，例如TCRγ/δ的恒定区)的TCR抗原结合结构域(如scFv或sdAb)的细胞外TCR结合结构域；c)包含第一TCR亚基的跨膜结构域的跨膜结构域；和d)包含第二TCR亚基的细胞内结构域的细胞内结构域，其中该第一TCR亚基和该第二TCR亚基均选自由以下组成的组：CD3ε、CD3γ、CD3δ、TCRα、TCRβ、TCRγ、和TCRδ。在一些实施例中，TCR抗原结合结构域是包含SEQ ID NO：27的氨基酸序列的抗TCR scFv。在一些实施例中，TCR抗原结合结构域是包含SEQ ID NO:27的氨基酸序列的HC-CDR 1-3和LC-CDR 1-3的抗TCR scFv。因此，在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)包含特异性结合靶抗原(例如，BCMA)的靶抗原结合结构域(如scFv、sdAb、或DARPin)的细胞外靶标结合结构域；b)包含特异性结合TCRγ/δ的TCR抗原结合结构域的细胞外TCR结合结构域，其中该TCR抗原结合结构域是包含SEQ ID NO:27的氨基酸序列的scFv；c)包含第一TCR亚基的跨膜结构域的跨膜结构域，和d)包含第二TCR亚基的细胞内结构域的细胞内结构域，其中该第一TCR亚基和该第二TCR亚基均选自由以下组成的组：CD3ε、CD3γ、CD3δ、TCRα、TCRβ、TCRγ、和TCRδ。在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)包含各自特异性结合靶抗原(例如，BCMA)的两个或更多个(如两个)靶抗原结合结构域(如scFv、sdAb、或DARPin)的细胞外靶标结合结构域；b)包含特异性结合TCR(如TCRγ/δ，例如TCRγ/δ的恒定区)的TCR抗原结合结构域(如scFv或sdAb)的细胞外TCR结合结构域；c)包含第一TCR亚基的跨膜结构域的跨膜结构域；和d)包含第二TCR亚基的细胞内结构域的细胞内结构域，其中该第一TCR亚基和该第二TCR亚基均选自由以下组成的组：CD3ε、CD3γ、CD3δ、TCRα、TCRβ、TCRγ、和TCRδ。在一些实施例中，TCR抗原结合结构域是包含SEQ ID NO：27的氨基酸序列的抗TCR scFv。在一些实施例中，TCR抗原结合结构域是包含SEQ ID NO:27的氨基酸序列的HC-CDR 1-3和LC-CDR 1-3的抗TCR scFv。因此，在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)包含各自特异性结合靶抗原(例如，BCMA)的两个或更多个(如两个)靶抗原结合结构域(如scFv、sdAb、或DARPin)的细胞外靶标结合结构域；b)包含特异性结合TCRγ/δ的TCR抗原结合结构域的细胞外TCR结合结构域，其中该TCR抗原结合结构域是包含SEQ ID NO：27的氨基酸序列的scFv；c)包含第一TCR亚基的跨膜结构域的跨膜结构域，和d)包含第二TCR亚基的细胞内结构域的细胞内结构域，其中该第一TCR亚基和该第二TCR亚基均选自由以下组成的组：CD3ε、CD3γ、CD3δ、TCRα、TCRβ、TCRγ、和TCRδ。在一些实施例中，两个或更多个(如两个)靶抗原结合结构域是串联排列的。在一些实施例中，两个或更多个(如两个)靶抗原结合结构域与同一抗原或抗原上的同一表位结合。在一些实施例中，两个或更多个(如两个)靶抗原结合结构域与同一抗原上的不同的表位结合。在一些实施例中，两个或更多个(如两个)靶抗原结合结构域与不同的抗原结合。在一些实施例中，两个或更多个(如两个)靶抗原结合结构域相同。在一些实施例中，两个或更多个(如两个)靶抗原结合结构域不同。在一些实施例中，第一TCR亚基是CD3ε和/或第二TCR亚基是CD3ε。在一些实施例中，第一TCR亚基是CD3γ和/或第二TCR亚基是CD3γ。在一些实施例中，第一TCR亚基是CD3δ和/或第二TCR亚基是CD3δ。在一些实施例中，第一TCR亚基是TCRα和/或第二TCR亚基是TCRα。在一些实施例中，第一TCR亚基是TCRβ和/或第二TCR亚基是TCRβ。在一些实施例中，第一TCR亚基是TCRγ和/或第二TCR亚基是TCRγ。在一些实施例中，第一TCR亚基是TCRδ和/或第二TCR亚基是TCRδ。在一些实施例中，第一TCR亚基和第二TCR亚基相同。在一些实施例中，第一TCR亚基和第二TCR亚基不同。在一些实施例中，第一TCR亚基和第二TCR亚基均选自由以下组成的组：TCRα、TCRβ、TCRγ、和TCRδ，并且嵌合受体多肽不包含该第一TCR亚基或该第二TCR亚基的细胞外结构域的可变区。在一些实施例中，嵌合受体多肽不包含TCRα、TCRβ、TCRγ、和TCRδ中任一个的细胞外结构域的可变区。在一些实施例中，嵌合受体多肽不包含第一和/或第二TCR亚基的细胞外结构域。在一些实施例中，嵌合受体多肽不包含任何TCR亚基的细胞外结构域。在一些实施例中，嵌合受体多肽不包含细胞内共刺激结构域。在一些实施例中，细胞外靶标结合结构域在细胞外TCR结合结构域的N-末端。在一些实施例中，细胞外靶标结合结构域在细胞外TCR结合结构域的C-末端。在一些实施例中，嵌合受体多肽进一步包含在嵌合受体多肽的N-末端处的信号肽。在一些实施例中，靶抗原结合结构域是特异性结合BCMA的sdAb，如PCT/CN2016/094408和PCT/CN2017/096938中所披露的任一抗BCMA sdAb。在一些实施例中，抗BCMA sdAb包含SEQ ID NO:26的氨基酸序列。在一些实施例中，细胞外TCR结合结构域包含串联排列的两个或更多个TCR抗原结合结构域(例如，scFv或sdAb)。在一些实施例中，细胞外靶标结合结构域包含串联排列的两个或更多个靶抗原结合结构域(例如，scFv、sdAb、或DARPin)。在一些实施例中，嵌合受体多肽进一步包含在该嵌合受体多肽的跨膜结构域N-末端的铰链区(例如，CD8铰链区)。在一些实施例中，嵌合受体多肽进一步包含连接细胞外靶标结合结构域和细胞外TCR结合结构域的第一接头。在一些实施例中，嵌合受体多肽进一步包含连接细胞外靶标结合结构域和/或细胞外TCR结合结构域和跨膜结构域的第二接头。在一些实施例中，第一接头和/或第二接头是GS接头、α-螺旋接头、甘氨酸-丙氨酸聚合物接头、丙氨酸-丝氨酸聚合物接头、或IgG4-Fc接头。在一些实施例中，第一接头和/或第二接头包含SEQ ID NO:1-21、67、和68中任一个的氨基酸序列。

在一些实施例中，第一TCR亚基和第二TCR亚基选自由CD3ε、CD3γ、和CD3δ组成的组。例如，在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)包含特异性结合靶抗原(例如，BCMA)的靶抗原结合结构域(如scFv、sdAb、或DARPin)的细胞外靶标结合结构域；b)包含特异性结合TCR(如TCRγ/δ，例如TCRγ/δ的恒定区)的TCR抗原结合结构域(如scFv或sdAb)的细胞外TCR结合结构域；c)包含CD3ε的跨膜结构域的跨膜结构域；和d)包含CD3ε的细胞内结构域的细胞内结构域。在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)包含特异性结合靶抗原(例如，BCMA)的靶抗原结合结构域(如scFv、sdAb、或DARPin)的细胞外靶标结合结构域；b)包含特异性结合TCR(如TCRγ/δ，例如TCRγ/δ的恒定区)的TCR抗原结合结构域(如scFv或sdAb)的细胞外TCR结合结构域；c)包含CD3γ的跨膜结构域的跨膜结构域；和d)包含CD3γ的细胞内结构域的细胞内结构域。在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)包含特异性结合靶抗原(例如，BCMA)的靶抗原结合结构域(如scFv、sdAb、或DARPin)的细胞外靶标结合结构域；b)包含特异性结合TCR(如TCRγ/δ，例如TCRγ/δ的恒定区)的TCR抗原结合结构域(如scFv或sdAb)的细胞外TCR结合结构域；c)包含CD3δ的跨膜结构域的跨膜结构域；和d)包含CD3δ的细胞内结构域的细胞内结构域。在一些实施例中，TCR抗原结合结构域是包含SEQ ID NO:27的氨基酸序列的抗TCR scFv。在一些实施例中，TCR抗原结合结构域是包含SEQ ID NO:27的氨基酸序列的HC-CDR 1-3和LC-CDR 1-3的抗TCRscFv。因此，在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)包含特异性结合靶抗原(例如，BCMA)的靶抗原结合结构域(如scFv、sdAb、或DARPin)的细胞外靶标结合结构域；b)包含特异性结合TCRγ/δ的TCR抗原结合结构域的细胞外TCR结合结构域，其中该TCR抗原结合结构域是包含SEQ ID NO:27的氨基酸序列的scFv；c)包含CD3ε的跨膜结构域的跨膜结构域；和d)包含CD3ε的细胞内结构域的细胞内结构域。在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)包含特异性结合靶抗原(例如，BCMA)的靶抗原结合结构域(如scFv、sdAb、或DARPin)的细胞外靶标结合结构域；b)包含特异性结合TCRγ/δ的TCR抗原结合结构域的细胞外TCR结合结构域，其中该TCR抗原结合结构域是包含SEQ ID NO:27的氨基酸序列的scFv；c)包含CD3γ的跨膜结构域的跨膜结构域；和d)包含CD3γ的细胞内结构域的细胞内结构域。在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)包含特异性结合靶抗原(例如，BCMA)的靶抗原结合结构域(如scFv、sdAb、或DARPin)的细胞外靶标结合结构域；b)包含特异性结合TCRγ/δ的TCR抗原结合结构域的细胞外TCR结合结构域，其中该TCR抗原结合结构域是包含SEQ ID NO：27的氨基酸序列的scFv；c)包含CD3δ的跨膜结构域的跨膜结构域；和d)包含CD3δ的细胞内结构域的细胞内结构域。在一些实施例中，嵌合受体多肽不包含CD3ε的细胞外结构域。在一些实施例中，嵌合受体多肽不包含CD3γ的细胞外结构域。在一些实施例中，嵌合受体多肽不包含CD3δ的细胞外结构域。在一些实施例中，嵌合受体多肽不包含任何TCR亚基的细胞外结构域。在一些实施例中，第一TCR亚基和第二TCR亚基选自由以下组成的组：TCRα、TCRβ、TCRγ、和TCRδ。例如，在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)包含特异性结合靶抗原(例如，BCMA)的靶抗原结合结构域(如scFv、sdAb、或DARPin)的细胞外靶标结合结构域；b)包含特异性结合TCR(如TCRγ/δ，例如TCRγ/δ的恒定区)的TCR抗原结合结构域(如scFv或sdAb)的细胞外TCR结合结构域；c)包含TCRα的跨膜结构域的跨膜结构域；和d)包含TCRα的细胞内结构域的细胞内结构域。在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)包含特异性结合靶抗原(例如，BCMA)的靶抗原结合结构域(如scFv、sdAb、或DARPin)的细胞外靶标结合结构域；b)包含特异性结合TCR(如TCRγ/δ，例如TCRγ/δ的恒定区)的TCR抗原结合结构域(如scFv或sdAb)的细胞外TCR结合结构域；c)包含TCRβ的跨膜结构域的跨膜结构域；和d)包含TCRβ的细胞内结构域的细胞内结构域。在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)包含特异性结合靶抗原(例如，BCMA)的靶抗原结合结构域(如scFv、sdAb、或DARPin)的细胞外靶标结合结构域；b)包含特异性结合TCR(如TCRγ/δ，例如TCRγ/δ的恒定区)的TCR抗原结合结构域(如scFv或sdAb)的细胞外TCR结合结构域；c)包含TCRγ的跨膜结构域的跨膜结构域；和d)包含TCRγ的细胞内结构域的细胞内结构域。在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)包含特异性结合靶抗原(例如，BCMA)的靶抗原结合结构域(如scFv、sdAb、或DARPin)的细胞外靶标结合结构域；b)包含特异性结合TCR(如TCRγ/δ，例如TCRγ/δ的恒定区)的TCR抗原结合结构域(如scFv或sdAb)的细胞外TCR结合结构域；c)包含TCRδ的跨膜结构域的跨膜结构域；和d)包含TCRδ的细胞内结构域的细胞内结构域。在一些实施例中，TCR抗原结合结构域是包含SEQ ID NO:27的氨基酸序列的抗TCR scFv。在一些实施例中，TCR抗原结合结构域是包含SEQ ID NO:27的氨基酸序列的HC-CDR 1-3和LC-CDR 1-3的抗TCR scFv。因此，在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)包含特异性结合靶抗原(例如，BCMA)的靶抗原结合结构域(如scFv、sdAb、或DARPin)的细胞外靶标结合结构域；b)包含特异性结合TCRγ/δ的TCR抗原结合结构域的细胞外TCR结合结构域，其中该TCR抗原结合结构域是包含SEQ ID NO：27的氨基酸序列的scFv；c)包含TCRα的跨膜结构域的跨膜结构域；和d)包含TCRα的细胞内结构域的细胞内结构域。在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)包含特异性结合靶抗原(例如，BCMA)的靶抗原结合结构域(如scFv、sdAb、或DARPin)的细胞外靶标结合结构域；b)包含特异性结合TCRγ/δ的TCR抗原结合结构域的细胞外TCR结合结构域，其中该TCR抗原结合结构域是包含SEQ ID NO:27的氨基酸序列的scFv；c)包含TCRβ的跨膜结构域的跨膜结构域；和d)包含TCRβ的细胞内结构域的细胞内结构域。在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)包含特异性结合靶抗原(例如，BCMA)的靶抗原结合结构域(如scFv、sdAb、或DARPin)的细胞外靶标结合结构域；b)包含特异性结合TCRγ/δ的TCR抗原结合结构域的细胞外TCR结合结构域，其中该TCR抗原结合结构域是包含SEQ IDNO:27的氨基酸序列的scFv；c)包含TCRγ的跨膜结构域的跨膜结构域；和d)包含TCRγ的细胞内结构域的细胞内结构域。在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)包含特异性结合靶抗原(例如，BCMA)的靶抗原结合结构域(如scFv、sdAb、或DARPin)的细胞外靶标结合结构域；b)包含特异性结合TCRγ/δ的TCR抗原结合结构域的细胞外TCR结合结构域，其中该TCR抗原结合结构域是包含SEQ ID NO:27的氨基酸序列的scFv；c)包含TCRδ的跨膜结构域的跨膜结构域；和d)包含TCRδ的细胞内结构域的细胞内结构域。在一些实施例中，嵌合受体多肽不包含TCRα的可变区，但包含TCRα的恒定区(例如，包含在TCRα跨膜结构域和细胞内结构域N-末端的TCRα恒定区)。在一些实施例中，嵌合受体多肽不包含TCRβ的可变区，但包含TCRβ的恒定区(例如，包含在TCRβ跨膜结构域和细胞内结构域N-末端的TCRβ恒定区)。在一些实施例中，嵌合受体多肽不包含TCRγ的可变区，但包含TCRγ的恒定区(例如，包含在TCRγ跨膜结构域和细胞内结构域N-末端的TCRγ恒定区)。在一些实施例中，嵌合受体多肽不包含TCRδ的可变区，但包含TCRδ的恒定区(例如，包含在TCRδ跨膜结构域和细胞内结构域N-末端的TCRδ恒定区)。在一些实施例中，嵌合受体多肽不包含TCRα的细胞外结构域。在一些实施例中，嵌合受体多肽不包含TCRβ的细胞外结构域。在一些实施例中，嵌合受体多肽不包含TCRγ的细胞外结构域。在一些实施例中，嵌合受体多肽不包含TCRδ的细胞外结构域。在一些实施例中，嵌合受体多肽不包含TCRα、TCRβ、TCRγ、和TCRδ中任一个的细胞外结构域。在一些实施例中，嵌合受体多肽不包含任何TCR亚基的细胞外结构域。在一些实施例中，嵌合受体多肽不包含细胞内共刺激结构域。在一些实施例中，细胞外靶标结合结构域在细胞外TCR结合结构域的N-末端。在一些实施例中，细胞外靶标结合结构域在细胞外TCR结合结构域的C-末端。在一些实施例中，嵌合受体多肽进一步包含在嵌合受体多肽的N-末端处的信号肽。在一些实施例中，细胞外TCR结合结构域包含串联排列的两个或更多个TCR抗原结合结构域(例如，scFv或sdAb)。在一些实施例中，细胞外靶标结合结构域包含串联排列的两个或更多个靶抗原结合结构域(例如，scFv、sdAb、或DARPin)。在一些实施例中，嵌合受体多肽进一步包含在该嵌合受体多肽的跨膜结构域N-末端的铰链区(例如，CD8铰链区)。在一些实施例中，细胞外靶标结合结构域包含特异性结合BCMA的sdAb，如PCT/CN2016/094408和PCT/CN2017/096938中所披露的任一抗BCMA sdAb。在一些实施例中，抗BCMA sdAb包含SEQ ID NO：26的氨基酸序列。在一些实施例中，嵌合受体多肽进一步包含连接细胞外靶标结合结构域和细胞外TCR结合结构域的第一接头。在一些实施例中，嵌合受体多肽进一步包含连接细胞外靶标结合结构域和/或细胞外TCR结合结构域和跨膜结构域的第二接头。在一些实施例中，第一接头和/或第二接头是GS接头、α-螺旋接头、甘氨酸-丙氨酸聚合物接头、丙氨酸-丝氨酸聚合物接头、或IgG4-Fc接头。在一些实施例中，第一接头和/或第二接头包含SEQ ID NO:1-21、67、和68中任一个的氨基酸序列。

在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)包含各自特异性结合靶抗原(如BCMA)的两个或更多个(如两个)靶抗原结合结构域(如scFv、sdAb、或DARPin)的细胞外靶标结合结构域；b)包含特异性结合TCR(如TCRγ/δ，例如TCRγ/δ的恒定区)的TCR抗原结合结构域(如scFv或sdAb)的细胞外TCR结合结构域；c)包含CD3ε的跨膜结构域的跨膜结构域；和d)包含CD3ε的细胞内结构域的细胞内结构域。在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)包含各自特异性结合靶抗原(如BCMA)的两个或更多个(如两个)靶抗原结合结构域(如scFv、sdAb、或DARPin)的细胞外靶标结合结构域；b)包含特异性结合TCR(如TCRγ/δ，例如TCRγ/δ的恒定区)的TCR抗原结合结构域(如scFv或sdAb)的细胞外TCR结合结构域；c)包含CD3γ的跨膜结构域的跨膜结构域；和d)包含CD3γ的细胞内结构域的细胞内结构域。在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)包含各自特异性结合靶抗原(如BCMA)的两个或更多个(如两个)靶抗原结合结构域(如scFv、sdAb、或DARPin)的细胞外靶标结合结构域；b)包含特异性结合TCR(如TCRγ/δ，例如TCRγ/δ的恒定区)的TCR抗原结合结构域(如scFv或sdAb)的细胞外TCR结合结构域；c)包含CD3δ的跨膜结构域的跨膜结构域；和d)包含CD3δ的细胞内结构域的细胞内结构域。在一些实施例中，TCR抗原结合结构域是包含SEQ ID NO:27的氨基酸序列的抗TCR scFv。在一些实施例中，TCR抗原结合结构域是包含SEQ ID NO：27的氨基酸序列的HC-CDR 1-3和LC-CDR 1-3的抗TCR scFv。因此，在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)包含各自特异性结合靶抗原(如BCMA)的两个或更多个(如两个)靶抗原结合结构域(如scFv、sdAb、或DARPin)的细胞外靶标结合结构域；b)包含特异性结合TCRγ/δ的TCR抗原结合结构域的细胞外TCR结合结构域，其中该TCR抗原结合结构域是包含SEQ ID NO:27的氨基酸序列的scFv；c)包含CD3ε的跨膜结构域的跨膜结构域；和d)包含CD3ε的细胞内结构域的细胞内结构域。在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)包含各自特异性结合靶抗原(如BCMA)的两个或更多个(如两个)靶抗原结合结构域(如scFv、sdAb、或DARPin)的细胞外靶标结合结构域；b)包含特异性结合TCRγ/δ的TCR抗原结合结构域的细胞外TCR结合结构域，其中该TCR抗原结合结构域是包含SEQ ID NO：27的氨基酸序列的scFv；c)包含CD3γ的跨膜结构域的跨膜结构域；和d)包含CD3γ的细胞内结构域的细胞内结构域。在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)包含各自特异性结合靶抗原(如BCMA)的两个或更多个(如两个)靶抗原结合结构域(如scFv、sdAb、或DARPin)的细胞外靶标结合结构域；b)包含特异性结合TCRγ/δ的TCR抗原结合结构域的细胞外TCR结合结构域，其中该TCR抗原结合结构域是包含SEQ ID NO:27的氨基酸序列的scFv；c)包含CD3δ的跨膜结构域的跨膜结构域；和d)包含CD3δ的细胞内结构域的细胞内结构域。在一些实施例中，嵌合受体多肽不包含CD3ε的细胞外结构域。在一些实施例中，嵌合受体多肽不包含CD3γ的细胞外结构域。在一些实施例中，嵌合受体多肽不包含CD3δ的细胞外结构域。在一些实施例中，嵌合受体多肽不包含任何TCR亚基的细胞外结构域。在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)包含各自特异性结合靶抗原(如BCMA)的两个或更多个(如两个)靶抗原结合结构域(如scFv、sdAb、或DARPin)的细胞外靶标结合结构域；b)包含特异性结合TCR(如TCRγ/δ，例如TCRγ/δ的恒定区)的TCR抗原结合结构域(如scFv或sdAb)的细胞外TCR结合结构域；c)包含TCRα的跨膜结构域的跨膜结构域；和d)包含TCRα的细胞内结构域的细胞内结构域。在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)包含各自特异性结合靶抗原(如BCMA)的两个或更多个(如两个)靶抗原结合结构域(如scFv、sdAb、或DARPin)的细胞外靶标结合结构域；b)包含特异性结合TCR(如TCRγ/δ，例如TCRγ/δ的恒定区)的TCR抗原结合结构域(如scFv或sdAb)的细胞外TCR结合结构域；c)包含TCRβ的跨膜结构域的跨膜结构域；和d)包含TCRβ的细胞内结构域的细胞内结构域。在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)包含各自特异性结合靶抗原(如BCMA)的两个或更多个(如两个)靶抗原结合结构域(如scFv、sdAb、或DARPin)的细胞外靶标结合结构域；b)包含特异性结合TCR(如TCRγ/δ，例如TCRγ/δ的恒定区)的TCR抗原结合结构域(如scFv或sdAb)的细胞外TCR结合结构域；c)包含TCRγ的跨膜结构域的跨膜结构域；和d)包含TCRγ的细胞内结构域的细胞内结构域。在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)包含各自特异性结合靶抗原(如BCMA)的两个或更多个(如两个)靶抗原结合结构域(如scFv、sdAb、或DARPin)的细胞外靶标结合结构域；b)包含特异性结合TCR(如TCRγ/δ，例如TCRγ/δ的恒定区)的TCR抗原结合结构域(如scFv或sdAb)的细胞外TCR结合结构域；c)包含TCRδ的跨膜结构域的跨膜结构域；和d)包含TCRδ的细胞内结构域的细胞内结构域。在一些实施例中，TCR抗原结合结构域是包含SEQ IDNO:27的氨基酸序列的抗TCR scFv。在一些实施例中，TCR抗原结合结构域是包含SEQ IDNO：27的氨基酸序列的HC-CDR 1-3和LC-CDR 1-3的抗TCR scFv。因此，在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)包含各自特异性结合靶抗原(如BCMA)的两个或更多个(如两个)靶抗原结合结构域(如scFv、sdAb、或DARPin)的细胞外靶标结合结构域；b)包含特异性结合TCRγ/δ的TCR抗原结合结构域的细胞外TCR结合结构域，其中该TCR抗原结合结构域是包含SEQ ID NO：27的氨基酸序列的scFv；c)包含TCRα的跨膜结构域的跨膜结构域；和d)包含TCRα的细胞内结构域的细胞内结构域。在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)包含各自特异性结合靶抗原(如BCMA)的两个或更多个(如两个)靶抗原结合结构域(如scFv、sdAb、或DARPin)的细胞外靶标结合结构域；b)包含特异性结合TCRγ/δ的TCR抗原结合结构域的细胞外TCR结合结构域，其中该TCR抗原结合结构域是包含SEQ ID NO：27的氨基酸序列的scFv；c)包含TCRβ的跨膜结构域的跨膜结构域；和d)包含TCRβ的细胞内结构域的细胞内结构域。在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)包含各自特异性结合靶抗原(如BCMA)的两个或更多个(如两个)靶抗原结合结构域(如scFv、sdAb、或DARPin)的细胞外靶标结合结构域；b)包含特异性结合TCRγ/δ的TCR抗原结合结构域的细胞外TCR结合结构域，其中该TCR抗原结合结构域是包含SEQ ID NO:27的氨基酸序列的scFv；c)包含TCRγ的跨膜结构域的跨膜结构域；和d)包含TCRγ的细胞内结构域的细胞内结构域。在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)包含各自特异性结合靶抗原(如BCMA)的两个或更多个(如两个)靶抗原结合结构域(如scFv、sdAb、或DARPin)的细胞外靶标结合结构域；b)包含特异性结合TCRγ/δ的TCR抗原结合结构域的细胞外TCR结合结构域，其中该TCR抗原结合结构域是包含SEQ ID NO:27的氨基酸序列的scFv；c)包含TCRδ的跨膜结构域的跨膜结构域；和d)包含TCRδ的细胞内结构域的细胞内结构域。在一些实施例中，嵌合受体多肽不包含TCRα的可变区，但包含TCRα的恒定区(例如，包含在TCRα跨膜结构域和细胞内结构域N-末端的TCRα恒定区)。在一些实施例中，嵌合受体多肽不包含TCRβ的可变区，但包含TCRβ的恒定区(例如，包含在TCRβ跨膜结构域和细胞内结构域N-末端的TCRβ恒定区)。在一些实施例中，嵌合受体多肽不包含TCRγ的可变区，但包含TCRγ的恒定区(例如，包含在TCRγ跨膜结构域和细胞内结构域N-末端的TCRγ恒定区)。在一些实施例中，嵌合受体多肽不包含TCRδ的可变区，但包含TCRδ的恒定区(例如，包含在TCRδ跨膜结构域和细胞内结构域N-末端的TCRδ恒定区)。在一些实施例中，嵌合受体多肽不包含TCRα的细胞外结构域。在一些实施例中，嵌合受体多肽不包含TCRβ的细胞外结构域。在一些实施例中，嵌合受体多肽不包含TCRγ的细胞外结构域。在一些实施例中，嵌合受体多肽不包含TCRδ的细胞外结构域。在一些实施例中，嵌合受体多肽不包含TCRα、TCRβ、TCRγ、和TCRδ中任一个的细胞外结构域。在一些实施例中，嵌合受体多肽不包含任何TCR亚基的细胞外结构域。在一些实施例中，两个或更多个靶抗原结合结构域与同一抗原或抗原上的同一表位结合。在一些实施例中，两个或更多个靶抗原结合结构域与同一抗原上的不同的表位结合。在一些实施例中，两个或更多个靶抗原结合结构域与不同的抗原结合。在一些实施例中，两个或更多个靶抗原结合结构域相同。在一些实施例中，两个或更多个靶抗原结合结构域不同。在一些实施例中，嵌合受体多肽不包含细胞内共刺激结构域。在一些实施例中，两个或更多个靶抗原结合结构域是串联排列的。在一些实施例中，两个或更多个靶抗原结合结构域通过一个或多个任选的接头连接。在一些实施例中，细胞外靶标结合结构域在细胞外TCR结合结构域的N-末端。在一些实施例中，细胞外靶标结合结构域在细胞外TCR结合结构域的C-末端。在一些实施例中，嵌合受体多肽进一步包含在嵌合受体多肽的N-末端处的信号肽。在一些实施例中，细胞外TCR结合结构域包含串联排列的两个或更多个TCR抗原结合结构域(例如，scFv或sdAb)。在一些实施例中，嵌合受体多肽进一步包含在该嵌合受体多肽的跨膜结构域N-末端的铰链区(例如，CD8铰链区)。在一些实施例中，嵌合受体多肽包含细胞外靶标结合结构域和细胞外TCR结合结构域之间的接头。在一些实施例中，嵌合受体多肽包含细胞外靶标结合结构域(或细胞外TCR结合结构域)和跨膜结构域之间的接头。在一些实施例中，嵌合受体多肽包含细胞外靶标结合结构域内的两个或更多个靶抗原结合结构域之间的接头。在一些实施例中，两个或更多个(例如，两个)靶抗原结合结构域是特异性结合BCMA的sdAb，如PCT/CN2016/094408和PCT/CN2017/096938中所披露的任一抗BCMAsdAb。在一些实施例中，抗BCMA sdAb包含SEQ ID NO：26的氨基酸序列。在一些实施例中，接头是GS接头、α-螺旋接头、甘氨酸-丙氨酸聚合物接头、丙氨酸-丝氨酸聚合物接头、或IgG4-Fc接头。在一些实施例中，两个或更多个靶抗原结合结构域通过选自下组的接头连接，该组由SEQ ID NO:1-21、67、和68组成。

在一些实施例中，细胞外靶标结合结构域包含特异性结合BCMA的sdAb，如PCT/CN2016/094408和PCT/CN2017/096938中所披露的任一抗BCMA sdAb。在一些实施例中，抗BCMA sdAb包含PCT/CN2016/094408和PCT/CN2017/096938中所披露的任一抗BCMA sdAb的氨基酸序列的CDR1、CDR2、和CDR3。在一些实施例中，抗BCMA sdAb包含SEQ ID NO：26的氨基酸序列。在一些实施例中，抗BCMA sdAb包含SEQ ID NO:26的氨基酸序列的CDR1、CDR2、和CDR3。因此，在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)包含抗BCMA sdAb(例如，包含SEQ ID NO:26)的细胞外靶标结合结构域；b)包含特异性结合CD3(如CD3ε，例如CD3ε的N-末端)的TCR抗原结合结构域(如scFv或sdAb)的细胞外TCR结合结构域；c)包含第一TCR亚基的跨膜结构域的跨膜结构域，和d)包含第二TCR亚基的细胞内结构域的细胞内结构域，其中该第一TCR亚基和该第二TCR亚基均选自由以下组成的组：CD3ε、CD3γ、CD3δ、TCRα、TCRβ、TCRγ、和TCRδ。在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)包含抗BCMA sdAb(例如，包含SEQ ID NO:26)的细胞外靶标结合结构域；b)包含特异性结合CD3ε的TCR抗原结合结构域的细胞外TCR结合结构域，其中该TCR抗原结合结构域是包含SEQ ID NO:22或23的氨基酸序列的sdAb，或是包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的scFv；c)包含第一TCR亚基的跨膜结构域的跨膜结构域，和d)包含第二TCR亚基的细胞内结构域的细胞内结构域，其中该第一TCR亚基和该第二TCR亚基均选自由以下组成的组：CD3ε、CD3γ、CD3δ、TCRα、TCRβ、TCRγ、和TCRδ。在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)包含两个或更多个(如两个)抗BCMA sdAb的细胞外靶标结合结构域；b)包含特异性结合CD3(如CD3ε，例如CD3ε的N-末端)的TCR抗原结合结构域(如scFv或sdAb)的细胞外TCR结合结构域；c)包含第一TCR亚基的跨膜结构域的跨膜结构域，和d)包含第二TCR亚基的细胞内结构域的细胞内结构域，其中该第一TCR亚基和该第二TCR亚基均选自由以下组成的组：CD3ε、CD3γ、CD3δ、TCRα、TCRβ、TCRγ、和TCRδ。在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)包含两个或更多个(如两个)抗BCMA sdAb的细胞外靶标结合结构域；b)包含特异性结合CD3ε的TCR抗原结合结构域的细胞外TCR结合结构域，其中该TCR抗原结合结构域是包含SEQ ID NO:22或23的氨基酸序列的sdAb，或是包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的scFv；c)包含第一TCR亚基的跨膜结构域的跨膜结构域，和d)包含第二TCR亚基的细胞内结构域的细胞内结构域，其中该第一TCR亚基和该第二TCR亚基均选自由以下组成的组：CD3ε、CD3γ、CD3δ、TCRα、TCRβ、TCRγ、和TCRδ。在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其从N’到C’包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)任选的信号肽；b)包含抗BCMA sdAb(例如，包含SEQ ID NO：26)的细胞外靶标结合结构域；c)任选的第一接头(例如，GS接头)；d)包含抗CD3scFv(例如，包含SEQ ID NO:24)的细胞外TCR结合结构域；e)任选的第二接头(例如，GS接头)；f)没有CD3ε信号肽的CD3ε细胞外结构域；g)包含CD3ε的跨膜结构域的跨膜结构域；和h)包含CD3ε的细胞内结构域的细胞内结构域。在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其从N’到C’包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)任选的信号肽；b)包含抗BCMA sdAb(例如，包含SEQ ID NO:26)的细胞外靶标结合结构域；c)任选的第一接头(例如，GS接头)；d)包含抗CD3 scFv(例如，包含SEQ ID NO:24)的细胞外TCR结合结构域；e)任选的第二接头(例如，GS接头)；f)没有CD3γ信号肽的CD3γ细胞外结构域；g)包含CD3γ的跨膜结构域的跨膜结构域；和h)包含CD3γ的细胞内结构域的细胞内结构域。在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其从N’到C’包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)任选的信号肽；b)包含抗BCMAsdAb(例如，包含SEQ ID NO:26)的细胞外靶标结合结构域；c)任选的第一接头(例如，GS接头)；d)包含抗CD3 scFv(例如，包含SEQ ID NO:24)的细胞外TCR结合结构域；e)任选的第二接头(例如，GS接头)；f)没有CD3δ信号肽的CD3δ细胞外结构域；g)包含CD3δ的跨膜结构域的跨膜结构域；和h)包含CD3δ的细胞内结构域的细胞内结构域。在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其从N’到C’包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)任选的信号肽；b)包含抗BCMA sdAb(例如，包含SEQ ID NO：26)的细胞外靶标结合结构域；c)任选的第一接头(例如，GS接头)；d)包含抗CD3scFv(例如，包含SEQ ID NO：24)的细胞外TCR结合结构域；e)任选的第二接头(例如，GS接头)；f)任选的铰链区(例如，CD8铰链)；g)包含CD3ε的跨膜结构域的跨膜结构域；和h)包含CD3ε的细胞内结构域的细胞内结构域。在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其从N’到C’包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)任选的信号肽；b)包含抗BCMAsdAb(例如，包含SEQ ID NO:26)的细胞外靶标结合结构域；c)任选的第一接头(例如，GS接头)；d)包含抗CD3 scFv(例如，包含SEQ ID NO:24)的细胞外TCR结合结构域；e)任选的第二接头(例如，GS接头)；f)任选的铰链区(例如，CD8铰链)；g)包含CD3γ的跨膜结构域的跨膜结构域；和h)包含CD3γ的细胞内结构域的细胞内结构域。在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其从N’到C’包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)任选的信号肽；b)包含抗BCMAsdAb(例如，包含SEQ ID NO:26)的细胞外靶标结合结构域；c)任选的第一接头(例如，GS接头)；d)包含抗CD3 scFv(例如，包含SEQ ID NO:24)的细胞外TCR结合结构域；e)任选的第二接头(例如，GS接头)；f)任选的铰链区(例如，CD8铰链)；g)包含CD3δ的跨膜结构域的跨膜结构域；和h)包含CD3δ的细胞内结构域的细胞内结构域。在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其从N’到C’包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)任选的信号肽；b)细胞外靶标结合结构域，其包含任选地通过任选的第一接头(例如，GS接头)连接的串联排列的第一抗BCMAsdAb(例如，包含SEQ ID NO:26)和第二抗BCMA sdAb(例如，包含SEQ ID NO:26)的细胞外靶标结合结构域；c)任选的第二接头(例如，GS接头)；d)包含抗CD3 scFv(例如，包含SEQ IDNO：24)的细胞外TCR结合结构域；e)任选的第三接头(例如，GS接头)；f)没有CD3ε信号肽的CD3ε细胞外结构域；g)包含CD3ε的跨膜结构域的跨膜结构域；和h)包含CD3ε的细胞内结构域的细胞内结构域。在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其从N’到C’包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)任选的信号肽；b)细胞外靶标结合结构域，其包含任选地通过任选的第一接头(例如，GS接头)连接的串联排列的第一抗BCMA sdAb(例如，包含SEQ ID NO:26)和第二抗BCMA sdAb(例如，包含SEQ ID NO：26)的细胞外靶标结合结构域；c)任选的第二接头(例如，GS接头)；d)包含抗CD3 scFv(例如，包含SEQ ID NO：24)的细胞外TCR结合结构域；e)任选的第三接头(例如，GS接头)；f)没有CD3γ信号肽的CD3γ细胞外结构域；g)包含CD3γ的跨膜结构域的跨膜结构域；和h)包含CD3γ的细胞内结构域的细胞内结构域。在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其从N’到C’包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)任选的信号肽；b)细胞外靶标结合结构域，其包含任选地通过任选的第一接头(例如，GS接头)连接的串联排列的第一抗BCMA sdAb(例如，包含SEQ ID NO:26)和第二抗BCMA sdAb(例如，包含SEQ ID NO:26)的细胞外靶标结合结构域；c)任选的第二接头(例如，GS接头)；d)包含抗CD3scFv(例如，包含SEQ ID NO:24)的细胞外TCR结合结构域；e)任选的第三接头(例如，GS接头)；f)没有CD3δ信号肽的CD3δ细胞外结构域；g)包含CD3δ的跨膜结构域的跨膜结构域；和h)包含CD3δ的细胞内结构域的细胞内结构域。在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其从N’到C’包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)任选的信号肽；b)细胞外靶标结合结构域，其包含任选地通过任选的第一接头(例如，GS接头)连接的串联排列的第一抗BCMA sdAb(例如，包含SEQ ID NO:26)和第二抗BCMA sdAb(例如，包含SEQ ID NO:26)的细胞外靶标结合结构域；c)任选的第二接头(例如，GS接头)；d)包含抗CD3 scFv(例如，包含SEQ ID NO:24)的细胞外TCR结合结构域；e)任选的第三接头(例如，GS接头)；f)任选的铰链区(例如，CD8铰链)；g)包含CD3ε的跨膜结构域的跨膜结构域；和h)包含CD3ε的细胞内结构域的细胞内结构域。在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其从N’到C’包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)任选的信号肽；b)细胞外靶标结合结构域，其包含任选地通过任选的第一接头(例如，GS接头)连接的串联排列的第一抗BCMA sdAb(例如，包含SEQ ID NO：26)和第二抗BCMAsdAb(例如，包含SEQ ID NO:26)的细胞外靶标结合结构域；c)任选的第二接头(例如，GS接头)；d)包含抗CD3 scFv(例如，包含SEQ ID NO:24)的细胞外TCR结合结构域；e)任选的第三接头(例如，GS接头)；f)任选的铰链区(例如，CD8铰链)；g)包含CD3γ的跨膜结构域的跨膜结构域；和h)包含CD3γ的细胞内结构域的细胞内结构域。在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其从N’到C’包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)任选的信号肽；b)细胞外靶标结合结构域，其包含任选地通过任选的第一接头(例如，GS接头)连接的串联排列的第一抗BCMA sdAb(例如，包含SEQ ID NO：26)和第二抗BCMA sdAb(例如，包含SEQ ID NO:26)的细胞外靶标结合结构域；c)任选的第二接头(例如，GS接头)；d)包含抗CD3 scFv(例如，包含SEQ ID NO:24)的细胞外TCR结合结构域；e)任选的第三接头(例如，GS接头)；f)任选的铰链区(例如，CD8铰链)；g)包含CD3δ的跨膜结构域的跨膜结构域；和h)包含CD3δ的细胞内结构域的细胞内结构域。在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其从N’到C’包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)任选的信号肽；b)包含抗BCMA sdAb(例如，包含SEQ ID NO:26)的细胞外靶标结合结构域；c)任选的第一接头(例如，GS接头)；d)包含抗CD3 scFv(例如，包含SEQ ID NO：24)的细胞外TCR结合结构域；e)任选的第二接头(例如，GS接头)；f)TCRα的恒定区；g)包含TCRα的跨膜结构域的跨膜结构域；和h)包含TCRα的细胞内结构域的细胞内结构域。在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其从N’到C’包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)任选的信号肽；b)包含抗BCMA sdAb(例如，包含SEQ ID NO：26)的细胞外靶标结合结构域；c)任选的第一接头(例如，GS接头)；d)包含抗CD3 scFv(例如，包含SEQ ID NO：24)的细胞外TCR结合结构域；e)任选的第二接头(例如，GS接头)；f)TCRβ的恒定区；g)包含TCRβ的跨膜结构域的跨膜结构域；和h)包含TCRβ的细胞内结构域的细胞内结构域。在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其从N’到C’包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)任选的信号肽；b)包含抗BCMA sdAb(例如，包含SEQ ID NO:26)的细胞外靶标结合结构域；c)任选的第一接头(例如，GS接头)；d)包含抗CD3 scFv(例如，包含SEQ ID NO:24)的细胞外TCR结合结构域；e)任选的第二接头(例如，GS接头)；f)TCRγ的恒定区；g)包含TCRγ的跨膜结构域的跨膜结构域；和h)包含TCRγ的细胞内结构域的细胞内结构域。在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其从N’到C’包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)任选的信号肽；b)包含抗BCMA sdAb(例如，包含SEQ ID NO：26)的细胞外靶标结合结构域；c)任选的第一接头(例如，GS接头)；d)包含抗CD3 scFv(例如，包含SEQ ID NO：24)的细胞外TCR结合结构域；e)任选的第二接头(例如，GS接头)；f)TCRδ的恒定区；g)包含TCRδ的跨膜结构域的跨膜结构域；和h)包含TCRδ的细胞内结构域的细胞内结构域。在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其从N’到C’包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)任选的信号肽；b)包含抗BCMA sdAb(例如，包含SEQ ID NO:26)的细胞外靶标结合结构域；c)任选的第一接头(例如，GS接头)；d)包含抗CD3 scFv(例如，包含SEQ ID NO:24)的细胞外TCR结合结构域；e)任选的第二接头(例如，GS接头)；f)包含TCRα的跨膜结构域的跨膜结构域；和g)包含TCRα的细胞内结构域的细胞内结构域。在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其从N’到C’包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)任选的信号肽；b)包含抗BCMA sdAb(例如，包含SEQ ID NO:26)的细胞外靶标结合结构域；c)任选的第一接头(例如，GS接头)；d)包含抗CD3 scFv(例如，包含SEQ ID NO:24)的细胞外TCR结合结构域；e)任选的第二接头(例如，GS接头)；f)包含TCRβ的跨膜结构域的跨膜结构域；和g)包含TCRβ的细胞内结构域的细胞内结构域。在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其从N’到C’包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)任选的信号肽；b)包含抗BCMA sdAb(例如，包含SEQ ID NO:26)的细胞外靶标结合结构域；c)任选的第一接头(例如，GS接头)；d)包含抗CD3 scFv(例如，包含SEQ ID NO：24)的细胞外TCR结合结构域；e)任选的第二接头(例如，GS接头)；f)包含TCRγ的跨膜结构域的跨膜结构域；和g)包含TCRγ的细胞内结构域的细胞内结构域。在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其从N’到C’包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)任选的信号肽；b)包含抗BCMA sdAb(例如，包含SEQ ID NO：26)的细胞外靶标结合结构域；c)任选的第一接头(例如，GS接头)；d)包含抗CD3 scFv(例如，包含SEQ ID NO:24)的细胞外TCR结合结构域；e)任选的第二接头(例如，GS接头)；f)包含TCRδ的跨膜结构域的跨膜结构域；和g)包含TCRδ的细胞内结构域的细胞内结构域。在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其从N’到C’包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)任选的信号肽；b)细胞外靶标结合结构域，其包含任选地通过任选的第一接头(例如，GS接头)连接的串联排列的第一抗BCMA sdAb(例如，包含SEQ ID NO：26)和第二抗BCMA sdAb(例如，包含SEQ ID NO:26)的细胞外靶标结合结构域；c)任选的第二接头(例如，GS接头)；d)包含抗CD3 scFv(例如，包含SEQ ID NO:24)的细胞外TCR结合结构域；e)任选的第三接头(例如，GS接头)；f)TCRα的恒定区；g)包含TCRα的跨膜结构域的跨膜结构域；和h)包含TCRα的细胞内结构域的细胞内结构域。在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其从N’到C’包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)任选的信号肽；b)细胞外靶标结合结构域，其包含任选地通过任选的第一接头(例如，GS接头)连接的串联排列的第一抗BCMA sdAb(例如，包含SEQ IDNO：26)和第二抗BCMA sdAb(例如，包含SEQ ID NO:26)的细胞外靶标结合结构域；c)任选的第二接头(例如，GS接头)；d)包含抗CD3 scFv(例如，包含SEQ ID NO:24)的细胞外TCR结合结构域；e)任选的第三接头(例如，GS接头)；f)TCRβ的恒定区；g)包含TCRβ的跨膜结构域的跨膜结构域；和h)包含TCRβ的细胞内结构域的细胞内结构域。在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其从N’到C’包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)任选的信号肽；b)细胞外靶标结合结构域，其包含任选地通过任选的第一接头(例如，GS接头)连接的串联排列的第一抗BCMA sdAb(例如，包含SEQ ID NO:26)和第二抗BCMA sdAb(例如，包含SEQ ID NO：26)的细胞外靶标结合结构域；c)任选的第二接头(例如，GS接头)；d)包含抗CD3 scFv(例如，包含SEQ ID NO:24)的细胞外TCR结合结构域；e)任选的第三接头(例如，GS接头)；f)TCRγ的恒定区；g)包含TCRγ的跨膜结构域的跨膜结构域；和h)包含TCRγ的细胞内结构域的细胞内结构域。在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其从N’到C’包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)任选的信号肽；b)细胞外靶标结合结构域，其包含任选地通过任选的第一接头(例如，GS接头)连接的串联排列的第一抗BCMA sdAb(例如，包含SEQ ID NO：26)和第二抗BCMA sdAb(例如，包含SEQ ID NO:26)的细胞外靶标结合结构域；c)任选的第二接头(例如，GS接头)；d)包含抗CD3 scFv(例如，包含SEQ ID NO:24)的细胞外TCR结合结构域；e)任选的第三接头(例如，GS接头)；f)TCRδ的恒定区；g)包含TCRδ的跨膜结构域的跨膜结构域；和h)包含TCRδ的细胞内结构域的细胞内结构域。在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其从N’到C’包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)任选的信号肽；b)细胞外靶标结合结构域，其包含任选地通过任选的第一接头(例如，GS接头)连接的串联排列的第一抗BCMA sdAb(例如，包含SEQ ID NO:26)和第二抗BCMA sdAb(例如，包含SEQ ID NO:26)的细胞外靶标结合结构域；c)任选的第二接头(例如，GS接头)；d)包含抗CD3 scFv(例如，包含SEQ ID NO：24)的细胞外TCR结合结构域；e)任选的第三接头(例如，GS接头)；f)包含TCRα的跨膜结构域的跨膜结构域；和g)包含TCRα的细胞内结构域的细胞内结构域。在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其从N’到C’包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)任选的信号肽；b)细胞外靶标结合结构域，其包含任选地通过任选的第一接头(例如，GS接头)连接的串联排列的第一抗BCMA sdAb(例如，包含SEQ ID NO:26)和第二抗BCMA sdAb(例如，包含SEQ ID NO:26)的细胞外靶标结合结构域；c)任选的第二接头(例如，GS接头)；d)包含抗CD3 scFv(例如，包含SEQ ID NO:24)的细胞外TCR结合结构域；e)任选的第三接头(例如，GS接头)；f)包含TCRβ的跨膜结构域的跨膜结构域；和g)包含TCRβ的细胞内结构域的细胞内结构域。在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其从N’到C’包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)任选的信号肽；b)细胞外靶标结合结构域，其包含任选地通过任选的第一接头(例如，GS接头)连接的串联排列的第一抗BCMA sdAb(例如，包含SEQ ID NO:26)和第二抗BCMA sdAb(例如，包含SEQID NO:26)的细胞外靶标结合结构域；c)任选的第二接头(例如，GS接头)；d)包含抗CD3scFv(例如，包含SEQ ID NO:24)的细胞外TCR结合结构域；e)任选的第三接头(例如，GS接头)；f)包含TCRγ的跨膜结构域的跨膜结构域；和g)包含TCRγ的细胞内结构域的细胞内结构域。在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其从N’到C’包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)任选的信号肽；b)细胞外靶标结合结构域，其包含任选地通过任选的第一接头(例如，GS接头)连接的串联排列的第一抗BCMA sdAb(例如，包含SEQ ID NO:26)和第二抗BCMAsdAb(例如，包含SEQ ID NO:26)的细胞外靶标结合结构域；c)任选的第二接头(例如，GS接头)；d)包含抗CD3 scFv(例如，包含SEQ ID NO:24)的细胞外TCR结合结构域；e)任选的第三接头(例如，GS接头)；f)包含TCRδ的跨膜结构域的跨膜结构域；和g)包含TCRδ的细胞内结构域的细胞内结构域。在一些实施例中，抗CD3 scFv包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列。在一些实施例中，抗CD3 scFv包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的HC-CDR 1-3和LC-CDR 1-3。在一些实施例中，抗BCMAsdAb是PCT/CN2016/094408和PCT/CN2017/096938中所披露的任一抗BCMA sdAb。在一些实施例中，抗BCMA sdAb包含SEQ ID NO:26的氨基酸序列。在一些实施例中，细胞外TCR结合结构域包含串联排列的两个或更多个抗CD3 scFv。在一些实施例中，第一接头、第二接头、和/或第三接头是GS接头、α-螺旋接头、甘氨酸-丙氨酸聚合物接头、丙氨酸-丝氨酸聚合物接头、或IgG4-Fc接头。在一些实施例中，第一接头、第二接头、和/或第三接头包含SEQ ID NO：1-21、67、和68中任一个的氨基酸序列。在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其包含(或基本上由以下或由以下组成)SEQ ID NO:43-48中任一个的氨基酸序列。在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其包含(或基本上由以下或由以下组成)SEQ IDNO:51-58中任一个的氨基酸序列。在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其包含(或基本上由以下或由以下组成)SEQ ID NO:61的氨基酸序列。

在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)包含抗BCMA sdAb(例如，包含SEQ ID NO:26)的细胞外靶标结合结构域；b)包含特异性结合TCR(如TCRγ/δ，例如TCRγ/δ的恒定区)的TCR抗原结合结构域(如scFv或sdAb)的细胞外TCR结合结构域；c)包含第一TCR亚基的跨膜结构域的跨膜结构域，和d)包含第二TCR亚基的细胞内结构域的细胞内结构域，其中该第一TCR亚基和该第二TCR亚基均选自由以下组成的组：CD3ε、CD3γ、CD3δ、TCRα、TCRβ、TCRγ、和TCRδ。在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)包含抗BCMA sdAb(例如，包含SEQ ID NO：26)的细胞外靶标结合结构域；b)包含特异性结合TCRγ/δ的TCR抗原结合结构域的细胞外TCR结合结构域，其中该TCR抗原结合结构域是包含SEQ ID NO：27的氨基酸序列的scFv；c)包含第一TCR亚基的跨膜结构域的跨膜结构域，和d)包含第二TCR亚基的细胞内结构域的细胞内结构域，其中该第一TCR亚基和该第二TCR亚基均选自由以下组成的组：CD3ε、CD3γ、CD3δ、TCRα、TCRβ、TCRγ、和TCRδ。在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)包含两个或更多个(如两个)抗BCMA sdAb的细胞外靶标结合结构域；b)包含特异性结合TCR(如TCRγ/δ，例如TCRγ/δ的恒定区)的TCR抗原结合结构域(如scFv或sdAb)的细胞外TCR结合结构域；c)包含第一TCR亚基的跨膜结构域的跨膜结构域，和d)包含第二TCR亚基的细胞内结构域的细胞内结构域，其中该第一TCR亚基和该第二TCR亚基均选自由以下组成的组：CD3ε、CD3γ、CD3δ、TCRα、TCRβ、TCRγ、和TCRδ。在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)包含两个或更多个(如两个)抗BCMA sdAb的细胞外靶标结合结构域；b)包含特异性结合TCRγ/δ的TCR抗原结合结构域的细胞外TCR结合结构域，其中该TCR抗原结合结构域是包含SEQ ID NO:27的氨基酸序列的scFv；c)包含第一TCR亚基的跨膜结构域的跨膜结构域，和d)包含第二TCR亚基的细胞内结构域的细胞内结构域，其中该第一TCR亚基和该第二TCR亚基均选自由以下组成的组：CD3ε、CD3γ、CD3δ、TCRα、TCRβ、TCRγ、和TCRδ。在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其从N’到C’包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)任选的信号肽；b)包含抗BCMA sdAb(例如，包含SEQ ID NO:26)的细胞外靶标结合结构域；c)任选的第一接头(例如，GS接头)；d)包含抗TCRscFv(例如，包含SEQ ID NO:27)的细胞外TCR结合结构域；e)任选的第二接头(例如，GS接头)；f)没有CD3ε信号肽的CD3ε细胞外结构域；g)包含CD3ε的跨膜结构域的跨膜结构域；和h)包含CD3ε的细胞内结构域的细胞内结构域。在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其从N’到C’包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)任选的信号肽；b)包含抗BCMA sdAb(例如，包含SEQ ID NO:26)的细胞外靶标结合结构域；c)任选的第一接头(例如，GS接头)；d)包含抗TCR scFv(例如，包含SEQ ID NO:27)的细胞外TCR结合结构域；e)任选的第二接头(例如，GS接头)；f)没有CD3γ信号肽的CD3γ细胞外结构域；g)包含CD3γ的跨膜结构域的跨膜结构域；和h)包含CD3γ的细胞内结构域的细胞内结构域。在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其从N’到C’包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)任选的信号肽；b)包含抗BCMAsdAb(例如，包含SEQ ID NO:26)的细胞外靶标结合结构域；c)任选的第一接头(例如，GS接头)；d)包含抗TCR scFv(例如，包含SEQ ID NO:27)的细胞外TCR结合结构域；e)任选的第二接头(例如，GS接头)；f)没有CD3δ信号肽的CD3δ细胞外结构域；g)包含CD3δ的跨膜结构域的跨膜结构域；和h)包含CD3δ的细胞内结构域的细胞内结构域。在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其从N’到C’包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)任选的信号肽；b)包含抗BCMA sdAb(例如，包含SEQ ID NO:26)的细胞外靶标结合结构域；c)任选的第一接头(例如，GS接头)；d)包含抗TCR scFv(例如，包含SEQ ID NO:27)的细胞外TCR结合结构域；e)任选的第二接头(例如，GS接头)；f)任选的铰链区(例如，CD8铰链)；g)包含CD3ε的跨膜结构域的跨膜结构域；和h)包含CD3ε的细胞内结构域的细胞内结构域。在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其从N’到C’包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)任选的信号肽；b)包含抗BCMAsdAb(例如，包含SEQ ID NO:26)的细胞外靶标结合结构域；c)任选的第一接头(例如，GS接头)；d)包含抗TCR scFv(例如，包含SEQ ID NO:27)的细胞外TCR结合结构域；e)任选的第二接头(例如，GS接头)；f)任选的铰链区(例如，CD8铰链)；g)包含CD3γ的跨膜结构域的跨膜结构域；和h)包含CD3γ的细胞内结构域的细胞内结构域。在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其从N’到C’包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)任选的信号肽；b)包含抗BCMAsdAb(例如，包含SEQ ID NO:26)的细胞外靶标结合结构域；c)任选的第一接头(例如，GS接头)；d)包含抗TCR scFv(例如，包含SEQ ID NO:27)的细胞外TCR结合结构域；e)任选的第二接头(例如，GS接头)；f)任选的铰链区(例如，CD8铰链)；g)包含CD3δ的跨膜结构域的跨膜结构域；和h)包含CD3δ的细胞内结构域的细胞内结构域。在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其从N’到C’包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)任选的信号肽；b)细胞外靶标结合结构域，其包含任选地通过任选的第一接头(例如，GS接头)连接的串联排列的第一抗BCMAsdAb(例如，包含SEQ ID NO:26)和第二抗BCMA sdAb(例如，包含SEQ ID NO：26)的细胞外靶标结合结构域；c)任选的第二接头(例如，GS接头)；d)包含抗TCR scFv(例如，包含SEQ IDNO：27)的细胞外TCR结合结构域；e)任选的第三接头(例如，GS接头)；f)没有CD3ε信号肽的CD3ε细胞外结构域；g)包含CD3ε的跨膜结构域的跨膜结构域；和h)包含CD3ε的细胞内结构域的细胞内结构域。在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其从N’到C’包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)任选的信号肽；b)细胞外靶标结合结构域，其包含任选地通过任选的第一接头(例如，GS接头)连接的串联排列的第一抗BCMA sdAb(例如，包含SEQ ID NO:26)和第二抗BCMA sdAb(例如，包含SEQ ID NO:26)的细胞外靶标结合结构域；c)任选的第二接头(例如，GS接头)；d)包含抗TCR scFv(例如，包含SEQ ID NO:27)的细胞外TCR结合结构域；e)任选的第三接头(例如，GS接头)；f)没有CD3γ信号肽的CD3γ细胞外结构域；g)包含CD3γ的跨膜结构域的跨膜结构域；和h)包含CD3γ的细胞内结构域的细胞内结构域。在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其从N’到C’包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)任选的信号肽；b)细胞外靶标结合结构域，其包含任选地通过任选的第一接头(例如，GS接头)连接的串联排列的第一抗BCMA sdAb(例如，包含SEQ ID NO：26)和第二抗BCMA sdAb(例如，包含SEQ ID NO:26)的细胞外靶标结合结构域；c)任选的第二接头(例如，GS接头)；d)包含抗TCRscFv(例如，包含SEQ ID NO:27)的细胞外TCR结合结构域；e)任选的第三接头(例如，GS接头)；f)没有CD3δ信号肽的CD3δ细胞外结构域；g)包含CD3δ的跨膜结构域的跨膜结构域；和h)包含CD3δ的细胞内结构域的细胞内结构域。在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其从N’到C’包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)任选的信号肽；b)细胞外靶标结合结构域，其包含任选地通过任选的第一接头(例如，GS接头)连接的串联排列的第一抗BCMA sdAb(例如，包含SEQ ID NO:26)和第二抗BCMA sdAb(例如，包含SEQ ID NO:26)的细胞外靶标结合结构域；c)任选的第二接头(例如，GS接头)；d)包含抗TCR scFv(例如，包含SEQ ID NO:27)的细胞外TCR结合结构域；e)任选的第三接头(例如，GS接头)；f)任选的铰链区(例如，CD8铰链)；g)包含CD3ε的跨膜结构域的跨膜结构域；和h)包含CD3ε的细胞内结构域的细胞内结构域。在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其从N’到C’包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)任选的信号肽；b)细胞外靶标结合结构域，其包含任选地通过任选的第一接头(例如，GS接头)连接的串联排列的第一抗BCMA sdAb(例如，包含SEQ ID NO:26)和第二抗BCMAsdAb(例如，包含SEQ ID NO:26)的细胞外靶标结合结构域；c)任选的第二接头(例如，GS接头)；d)包含抗TCR scFv(例如，包含SEQ ID NO:27)的细胞外TCR结合结构域；e)任选的第三接头(例如，GS接头)；f)任选的铰链区(例如，CD8铰链)；g)包含CD3γ的跨膜结构域的跨膜结构域；和h)包含CD3γ的细胞内结构域的细胞内结构域。在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其从N’到C’包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)任选的信号肽；b)细胞外靶标结合结构域，其包含任选地通过任选的第一接头(例如，GS接头)连接的串联排列的第一抗BCMA sdAb(例如，包含SEQ ID NO:26)和第二抗BCMA sdAb(例如，包含SEQ ID NO:26)的细胞外靶标结合结构域；c)任选的第二接头(例如，GS接头)；d)包含抗TCR scFv(例如，包含SEQ ID NO：27)的细胞外TCR结合结构域；e)任选的第三接头(例如，GS接头)；f)任选的铰链区(例如，CD8铰链)；g)包含CD3δ的跨膜结构域的跨膜结构域；和h)包含CD3δ的细胞内结构域的细胞内结构域。在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其从N’到C’包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)任选的信号肽；b)包含抗BCMA sdAb(例如，包含SEQ ID NO:26)的细胞外靶标结合结构域；c)任选的第一接头(例如，GS接头)；d)包含抗TCR scFv(例如，包含SEQ ID NO:27)的细胞外TCR结合结构域；e)任选的第二接头(例如，GS接头)；f)TCRα的恒定区；g)包含TCRα的跨膜结构域的跨膜结构域；和h)包含TCRα的细胞内结构域的细胞内结构域。在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其从N’到C’包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)任选的信号肽；b)包含抗BCMA sdAb(例如，包含SEQ ID NO:26)的细胞外靶标结合结构域；c)任选的第一接头(例如，GS接头)；d)包含抗TCR scFv(例如，包含SEQ ID NO:27)的细胞外TCR结合结构域；e)任选的第二接头(例如，GS接头)；f)TCRβ的恒定区；g)包含TCRβ的跨膜结构域的跨膜结构域；和h)包含TCRβ的细胞内结构域的细胞内结构域。在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其从N’到C’包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)任选的信号肽；b)包含抗BCMA sdAb(例如，包含SEQ ID NO:26)的细胞外靶标结合结构域；c)任选的第一接头(例如，GS接头)；d)包含抗TCR scFv(例如，包含SEQ ID NO:27)的细胞外TCR结合结构域；e)任选的第二接头(例如，GS接头)；f)TCRγ的恒定区；g)包含TCRγ的跨膜结构域的跨膜结构域；和h)包含TCRγ的细胞内结构域的细胞内结构域。在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其从N’到C’包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)任选的信号肽；b)包含抗BCMA sdAb(例如，包含SEQ ID NO:26)的细胞外靶标结合结构域；c)任选的第一接头(例如，GS接头)；d)包含抗TCR scFv(例如，包含SEQ ID NO：27)的细胞外TCR结合结构域；e)任选的第二接头(例如，GS接头)；f)TCRδ的恒定区；g)包含TCRδ的跨膜结构域的跨膜结构域；和h)包含TCRδ的细胞内结构域的细胞内结构域。在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其从N’到C’包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)任选的信号肽；b)包含抗BCMA sdAb(例如，包含SEQ ID NO:26)的细胞外靶标结合结构域；c)任选的第一接头(例如，GS接头)；d)包含抗TCR scFv(例如，包含SEQ ID NO:27)的细胞外TCR结合结构域；e)任选的第二接头(例如，GS接头)；f)包含TCRα的跨膜结构域的跨膜结构域；和g)包含TCRα的细胞内结构域的细胞内结构域。在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其从N’到C’包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)任选的信号肽；b)包含抗BCMA sdAb(例如，包含SEQ ID NO:26)的细胞外靶标结合结构域；c)任选的第一接头(例如，GS接头)；d)包含抗TCR scFv(例如，包含SEQ ID NO:27)的细胞外TCR结合结构域；e)任选的第二接头(例如，GS接头)；f)包含TCRβ的跨膜结构域的跨膜结构域；和g)包含TCRβ的细胞内结构域的细胞内结构域。在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其从N’到C’包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)任选的信号肽；b)包含抗BCMA sdAb(例如，包含SEQ ID NO:26)的细胞外靶标结合结构域；c)任选的第一接头(例如，GS接头)；d)包含抗TCR scFv(例如，包含SEQ ID NO:27)的细胞外TCR结合结构域；e)任选的第二接头(例如，GS接头)；f)包含TCRγ的跨膜结构域的跨膜结构域；和g)包含TCRγ的细胞内结构域的细胞内结构域。在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其从N’到C’包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)任选的信号肽；b)包含抗BCMA sdAb(例如，包含SEQ ID NO：26)的细胞外靶标结合结构域；c)任选的第一接头(例如，GS接头)；d)包含抗TCR scFv(例如，包含SEQ ID NO:27)的细胞外TCR结合结构域；e)任选的第二接头(例如，GS接头)；f)包含TCRδ的跨膜结构域的跨膜结构域；和g)包含TCRδ的细胞内结构域的细胞内结构域。在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其从N’到C’包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)任选的信号肽；b)细胞外靶标结合结构域，其包含任选地通过任选的第一接头(例如，GS接头)连接的串联排列的第一抗BCMA sdAb(例如，包含SEQ ID NO:26)和第二抗BCMA sdAb(例如，包含SEQ ID NO:26)的细胞外靶标结合结构域；c)任选的第二接头(例如，GS接头)；d)包含抗TCR scFv(例如，包含SEQ ID NO:27)的细胞外TCR结合结构域；e)任选的第三接头(例如，GS接头)；f)TCRα的恒定区；g)包含TCRα的跨膜结构域的跨膜结构域；和h)包含TCRα的细胞内结构域的细胞内结构域。在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其从N’到C’包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)任选的信号肽；b)细胞外靶标结合结构域，其包含任选地通过任选的第一接头(例如，GS接头)连接的串联排列的第一抗BCMA sdAb(例如，包含SEQ IDNO:26)和第二抗BCMA sdAb(例如，包含SEQ ID NO:26)的细胞外靶标结合结构域；c)任选的第二接头(例如，GS接头)；d)包含抗TCR scFv(例如，包含SEQ ID NO:27)的细胞外TCR结合结构域；e)任选的第三接头(例如，GS接头)；f)TCRβ的恒定区；g)包含TCRβ的跨膜结构域的跨膜结构域；和h)包含TCRβ的细胞内结构域的细胞内结构域。在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其从N’到C’包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)任选的信号肽；b)细胞外靶标结合结构域，其包含任选地通过任选的第一接头(例如，GS接头)连接的串联排列的第一抗BCMA sdAb(例如，包含SEQ ID NO:26)和第二抗BCMA sdAb(例如，包含SEQ ID NO:26)的细胞外靶标结合结构域；c)任选的第二接头(例如，GS接头)；d)包含抗TCR scFv(例如，包含SEQ ID NO：27)的细胞外TCR结合结构域；e)任选的第三接头(例如，GS接头)；f)TCRγ的恒定区；g)包含TCRγ的跨膜结构域的跨膜结构域；和h)包含TCRγ的细胞内结构域的细胞内结构域。在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其从N’到C’包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)任选的信号肽；b)细胞外靶标结合结构域，其包含任选地通过任选的第一接头(例如，GS接头)连接的串联排列的第一抗BCMA sdAb(例如，包含SEQ ID NO:26)和第二抗BCMA sdAb(例如，包含SEQ ID NO:26)的细胞外靶标结合结构域；c)任选的第二接头(例如，GS接头)；d)包含抗TCR scFv(例如，包含SEQ ID NO：27)的细胞外TCR结合结构域；e)任选的第三接头(例如，GS接头)；f)TCRδ的恒定区；g)包含TCRδ的跨膜结构域的跨膜结构域；和h)包含TCRδ的细胞内结构域的细胞内结构域。在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其从N’到C’包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)任选的信号肽；b)细胞外靶标结合结构域，其包含任选地通过任选的第一接头(例如，GS接头)连接的串联排列的第一抗BCMA sdAb(例如，包含SEQ ID NO：26)和第二抗BCMA sdAb(例如，包含SEQ ID NO：26)的细胞外靶标结合结构域；c)任选的第二接头(例如，GS接头)；d)包含抗TCR scFv(例如，包含SEQ ID NO：27)的细胞外TCR结合结构域；e)任选的第三接头(例如，GS接头)；f)包含TCRα的跨膜结构域的跨膜结构域；和g)包含TCRα的细胞内结构域的细胞内结构域。在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其从N’到C’包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)任选的信号肽；b)细胞外靶标结合结构域，其包含任选地通过任选的第一接头(例如，GS接头)连接的串联排列的第一抗BCMA sdAb(例如，包含SEQ ID NO：26)和第二抗BCMA sdAb(例如，包含SEQ ID NO:26)的细胞外靶标结合结构域；c)任选的第二接头(例如，GS接头)；d)包含抗TCR scFv(例如，包含SEQ ID NO:27)的细胞外TCR结合结构域；e)任选的第三接头(例如，GS接头)；f)包含TCRβ的跨膜结构域的跨膜结构域；和g)包含TCRβ的细胞内结构域的细胞内结构域。在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其从N’到C’包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)任选的信号肽；b)细胞外靶标结合结构域，其包含任选地通过任选的第一接头(例如，GS接头)连接的串联排列的第一抗BCMA sdAb(例如，包含SEQ ID NO:26)和第二抗BCMA sdAb(例如，包含SEQID NO:26)的细胞外靶标结合结构域；c)任选的第二接头(例如，GS接头)；d)包含抗TCRscFv(例如，包含SEQ ID NO：27)的细胞外TCR结合结构域；e)任选的第三接头(例如，GS接头)；f)包含TCRγ的跨膜结构域的跨膜结构域；和g)包含TCRγ的细胞内结构域的细胞内结构域。在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其从N’到C’包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)任选的信号肽；b)细胞外靶标结合结构域，其包含任选地通过任选的第一接头(例如，GS接头)连接的串联排列的第一抗BCMA sdAb(例如，包含SEQ ID NO:26)和第二抗BCMAsdAb(例如，包含SEQ ID NO:26)的细胞外靶标结合结构域；c)任选的第二接头(例如，GS接头)；d)包含抗TCR scFv(例如，包含SEQ ID NO:27)的细胞外TCR结合结构域；e)任选的第三接头(例如，GS接头)；f)包含TCRδ的跨膜结构域的跨膜结构域；和g)包含TCRδ的细胞内结构域的细胞内结构域。在一些实施例中，抗TCR scFv包含SEQ ID NO:27的氨基酸序列。在一些实施例中，抗TCR scFv包含SEQ ID NO:27的氨基酸序列的HC-CDR 1-3和LC-CDR 1-3。在一些实施例中，抗BCMA sdAb是PCT/CN2016/094408和PCT/CN2017/096938中所披露的任一抗BCMA sdAb。在一些实施例中，抗BCMA sdAb包含SEQ ID NO:26的氨基酸序列。在一些实施例中，细胞外TCR结合结构域包含串联排列的两个或更多个抗TCR scFv。在一些实施例中，第一接头、第二接头、和/或第三接头是GS接头、α-螺旋接头、甘氨酸-丙氨酸聚合物接头、丙氨酸-丝氨酸聚合物接头、或IgG4-Fc接头。在一些实施例中，第一接头、第二接头、和/或第三接头包含SEQ ID NO:1-21、67、和68中任一个的氨基酸序列。在一些实施例中，提供了嵌合受体多肽，其包含(或基本上由以下或由以下组成)SEQ ID NO:62或63的氨基酸序列。

以下各节进一步详细讨论不同的方面。

细胞外靶标结合结构域

细胞外靶标结合结构域特异性结合靶分子。

在一些实施例中，细胞外靶标结合结构域包含两个或更多个(如两个)靶抗原结合结构域(例如，scFv、sdAb、DARPin)。在一些实施例中，两个或更多个(如两个)靶抗原结合结构域(例如，scFv、sdAb、DARPin)特异性结合相同的靶分子。例如，在一些实施例中，细胞外靶标结合结构域包含两个或更多个(如两个)靶抗原结合结构域(例如，scFv、sdAb、DARPin)，这些靶抗原结合结构域各自识别同一靶抗原(例如，BCMA)上的相同或不同的表位。在一些实施例中，细胞外靶标结合结构域包含两个或更多个(如两个)靶抗原结合结构域(例如，scFv、sdAb、或DARPin)，这些靶抗原结合结构域各自识别不同的靶抗原。在一些实施例中，细胞外靶标结合结构域包含两个或更多个(如两个)VHH结构域或sdAb，这些VHH结构域或sdAb各自识别同一靶抗原(例如，BCMA)上的相同或不同的表位。在一些实施例中，细胞外靶标结合结构域包含两个或更多个(如两个)VHH结构域或sdAb，这些VHH结构域或sdAb各自识别不同的靶抗原。在一些实施例中，两个或更多个靶抗原结合结构域(例如，scFv、sdAb、DARPin)是串联排列的。在一些实施例中，两个或更多个靶抗原结合结构域(例如，scFv、sdAb、DARPin)通过一个或多个接头(如本文所述的任何接头)连接。在一些实施例中，一个或多个接头选自SEQ ID NO:1-21、67、和68中的任何一个。在一些实施例中，两个或更多个靶抗原结合结构域(例如，scFv、sdAb、DARPin)相同，两个或更多个靶抗原结合结构域(例如，scFv、sdAb、DARPin)不同。

在一些实施例中，靶抗原结合结构域包含特异性结合同源受体的配体。合适的配体/受体对包括但不限于NGK2D配体/受体对、IL2配体/受体对、BCMA配体/受体对、TACI配体/受体对、IL-13配体/受体对、IL-3配体/受体对、IL-4配体/受体对、VEGF配体/受体对、HER1配体/受体对、HER2配体/受体对等。

在一些实施例中，靶抗原结合结构域是特异性结合靶抗原(例如，BCMA)的抗原结合结构域。合适的靶抗原结合结构域包括但不限于抗体或其片段，如单链Fv(scFv)、单域抗体(sdAb)、VH、VL、scFv-scFv、Fv、Fab、Fab’、(Fab’)

在一些实施例中，靶分子(如靶抗原)是细胞表面分子(如细胞表面抗原)。在一些实施例中，细胞表面分子或抗原选自由蛋白质、碳水化合物、和脂质组成的组。例如，肿瘤抗原可以是肿瘤相关的碳水化合物抗原(TACA)，该碳水化合物抗原是癌细胞上显示的可与正常细胞区分的异常碳水化合物结构。在一些实施例中，细胞表面分子或抗原是在患病细胞中表达的疾病相关的分子或抗原。在一些实施例中，该疾病是癌症，并且该疾病相关的分子或抗原是在癌细胞中表达的肿瘤相关的分子或抗原。在一些实施例中，该肿瘤相关的分子或抗原是癌蛋白。在一些实施例中，该癌蛋白是原癌基因突变的结果，并且该癌蛋白包含含有该突变的新表位。例如，在一些实施例中，该靶分子或抗原是细胞表面肿瘤相关抗原(例如，包含新表位的癌蛋白)。在一些实施例中，该疾病是病毒感染，并且该疾病相关的分子或抗原是在感染的细胞中表达的病毒相关的分子或抗原。例如，在一些实施例中，该靶分子或抗原是细胞表面病毒相关的分子或抗原。在一些实施例中，嵌合受体多肽以约0.1pM至约500nM之间(如约0.1pM、1.0pM、10pM、50pM、100pM、500pM、1nM、10nM、50nM、100nM、或500nM中的任何一个，包括这些值之间的任何范围)的K

在一些实施例中，该靶分子或抗原选自由以下组成的组：肿瘤相关的分子、免疫系统相关的分子、病毒感染相关的分子、和微生物蛋白质。

在一些实施例中，该靶分子(如靶抗原)是肿瘤相关抗原(TAA)，如选自下组的肿瘤相关抗原，该组由以下组成：707-AP、生物素化的分子、a-辅肌动蛋白-4、abl-bcr alb-b3(b2a2)、abl-bcr alb-b4(b3a2)、亲脂素(adipophilin)、AFP、AIM-2、膜联蛋白(Annexin)II、ART-4、BAGE、BCMA、b-连环素、bcr-abl、bcr-abl p190(e1a2)、bcr-abl p210(b2a2)、bcr-abl p210(b3a2)、BING-4、CA-125、CAG-3、CAIX、CAMEL、半胱天冬酶-8、CD171、CD19、CD20、CD22、CD23、CD24、CD30、CD33、CD38、CD44v7/8、CD70、CD123、CD133、CDC27、CDK-4、CEA、CLCA2、CLL-1、CTAG1B、Cyp-B、DAM-10、DAM-6、DEK-CAN、DLL3、EGFR、EGFRvIII、EGP-2、EGP-40、ELF2、Ep-CAM、EphA2、EphA3、erb-B2、erb-B3、erb-B4、ES-ESO-1a、ETV6/AML、FAP、FBP、胎儿乙酰胆碱受体、FGF-5、FN、FR-α、G250、GAGE-1、GAGE-2、GAGE-3、GAGE-4、GAGE-5、GAGE-6、GAGE-7B、GAGE-8、GD2、GD3、GnT-V、Gp100、gp75、磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3(GPC3)、GPC-2、Her-2、HLA-A*0201-R170I、HMW-MAA、HSP70-2 M、HST-2(FGF6)、HST-2/neu、hTERT、iCE、IL-11Rα、IL-13Rα2、KDR、KIAA0205、K-RAS、L1-细胞粘附分子、LAGE-1、LDLR/FUT、Lewis Y、L1-CAM、LILRB4、IGF1R、CCR5、CCR4、CXCR4、MAGE-1、MAGE-10、MAGE-12、MAGE-2、MAGE-3、MAGE-4、MAGE-6、MAGE-A1、MAGE-A2、MAGE-A3、MAGE-A6、MAGE-B1、MAGE-B2、苹果酸酶、乳腺珠蛋白-A、MART-1/Melan-A、MART-2、MC1R、M-CSF、间皮素、MUC1、MUC16、MUC2、MUM-1、MUM-2、MUM-3、肌球蛋白、NA88-A、Neo-PAP、NKG2D、NPM/ALK、N-RAS、NY-ESO-1、OA1、OGT、癌胚抗原(h5T4)、OS-9、P多肽、P15、P53、PRAME、PSA、PSCA、PSMA、PTPRK、RAGE、ROR1、RU1、RU2、SART-1、SART-2、SART-3、SOX10、SSX-2、存活蛋白、存活蛋白-2B、SYT/SSX、TAG-72、TEL/AML1、TGFaRII、TGFbRII、TP1、TRAG-3、TRG、TRP-1、TRP-2、TRP-2/INT2、TRP-2-6b、酪氨酸酶、VEGF-R2、WT1、α-叶酸受体、和κ-轻链。在一些实施例中，第一表位和/或第二表位可以是AFP、EGFR、EGFRvIII、GPC3、GPC-2、DLL3、BCMA、CD19、CD20、CD22、CD123、CLL-1、CD30、CD33、HER2、MSLN、PSMA、CEA、GD2、IL13Rα2、CAIX、L1-CAM、CA125、CD133、FAP、CTAG1B、MUC1、FR-α、CD70、CD171、ROR1、及其任何组合。在一些实施例中，TAA选自由以下组成的组：BCMA、NY-ESO-1、VEGFR2、MAGE-A3、AFP、CD19、CD20、CD22、CD30、CD33、CD38、CD70、CD123、CEA、EGFR(如EGFRvIII)、GD2、GPC-2、GPC3、HER2、LILRB4、IL-13Rα2、IGF1R、间皮素、PSMA、ROR1、WT1、NKG2D、CLL1、TGFaRII、TGFbRII、CCR5、CXCR4、和CCR4。在一些实施例中，TAA是BCMA。

在一些实施例中，靶抗原结合结构域是特异性结合BCMA的sdAb，如PCT/CN2016/094408和PCT/CN2017/096938中所披露的任一抗BCMA sdAb，其内容通过援引以其全文并入本文。在一些实施例中，靶抗原结合结构域是特异性结合BCMA的sdAb，该靶抗原结合结构域包含PCT/CN2016/094408和PCT/CN2017/096938中所披露的抗BCMA sdAb的CDR1、CDR2、和CDR3。在一些实施例中，靶抗原结合结构域是包含SEQ ID NO：26的氨基酸序列的抗BCMAsdAb。在一些实施例中，靶抗原结合结构域是包含SEQ ID NO:26的氨基酸序列的CD1、CD2、和CD3的抗BCMA sdAb。在一些实施例中，细胞外靶标结合结构域包含两个或更多个(如两个)抗BCMA sdAb(例如，串联排列)，如PCT/CN2016/094408和PCT/CN2017/096938中所披露的任一抗BCMA sdAb。在一些实施例中，细胞外靶标结合结构域包含两个或更多个(如两个)抗BCMA sdAb(例如，串联排列)，这些抗BCMA sdAb各自包含SEQ ID NO:26的氨基酸序列。

在一些实施例中，靶抗原是新抗原或新表位，如由突变的基因编码的新抗原或新表位。该基因可选自由以下组成的组：ABL1、ACOl 1997、ACVR2A、AFP、AKT1、ALK、ALPPL2、ANAPC1、APC、ARID1A、AR、AR-v7、ASCL2、β2M、BRAF、BTK、C15ORF40、CDH1、CLDN6、CNOT1、CT45A5、CTAG1B、DCT、DKK4、EEF1B2、EEF1DP3、EGFR、EIF2B3、env、EPHB2、ERBB3、ESR1、ESRP1、FAM11 IB、FGFR3、FRG1B、GAGE1、GAGE 10、GATA3、GBP3、HER2、IDH1、JAK1、KIT、KRAS、LMAN1、MABEB 16、MAGEA1、MAGEA10、MAGEA4、MAGEA8、MAGEB 17、MAGEB4、MAGEC1、MEK、MLANA、MLL2、MMP13、MSH3、MSH6、MYC、NDUFC2、NRAS、NY-ESO、PAGE2、PAGE5、PDGFRa、PIK3CA、PMEL、pol蛋白、POLE、PTEN、RAC1、RBM27、RNF43、RPL22、RUNX1、SEC31A、SEC63、SF3B 1、SLC35F5、SLC45A2、SMAP1、SMAP1、SPOP、TFAM、TGFBR2、THAP5、TP53、TTK、TYR、UBR5、VHL、和XPOT。

在一些实施例中，靶抗原是病原体抗原，如真菌、病毒、或细菌抗原。

在一些实施例中，靶抗原是来自曲霉属或假丝酵母属、隐球菌属、组织胞浆菌属(Histoplasma)、肺囊虫属(Pneumocystis)、或葡萄穗霉属(Stachybotrys)的真菌抗原。

在一些实施例中，靶抗原是在感染的细胞中表达的病毒相关的分子或抗原(例如，病毒抗原)。一些人类癌症由病毒引起，如乙型肝炎病毒(肝癌)、乳头瘤病毒(宫颈癌和其他肛门生殖器癌(anogenital cancer)；例如，HPV)、EB病毒(Epstein-Barr virus，EBV；伯基特淋巴瘤(Burkitt's lymphoma)和鼻咽癌)、卡波西肉瘤(Kaposi’s sarcoma)相关的疱疹病毒(卡波西肉瘤)、和人类嗜T淋巴细胞病毒(成人T细胞白血病)。由于免疫缺陷的结果，AIDS患者中发生的癌症是由HIV间接引起的。在一些实施例中，靶抗原是HIV相关的抗原，如CCR5、CD4。丙型肝炎病毒(RNA病毒)是由慢性组织损伤引起的肝癌的间接原因。在一些实施例中，靶抗原是来自致癌病毒的病毒抗原。示例性致癌病毒包括但不限于，EBV：EBNA-1、LMP-1、LMP-2A；HPV：E6、E7、E5；HBV：HBx；HCV：核心、NS3、NsSA；HTLV：Tax、HBZ；KSHV：vFLIP、LANA、vGPCR、vIRF-1。在一些实施例中，靶抗原是病毒癌蛋白，该病毒癌蛋白包括但不限于Tax、E7、E6/E7、E6、HBx、EBNA蛋白(例如，EBNA3 A、EBNA3 C、和EBNA 2)、v-细胞周期蛋白、LANA1、LANA2、LMP-1、k-bZIP、RTA、KSHV K8、及其片段。示例性病毒病原体包括以下病毒的家族的病原体：腺病毒科、EB病毒(EBV)、巨细胞病毒(CMV)、呼吸道合胞病毒(RSV)、JC病毒、BK病毒、HSV、HHV病毒科、小核糖核酸病毒科、疱疹病毒科、嗜肝脱氧核糖核酸病毒科、黄病毒科、逆转录病毒科、正粘病毒科(Orthomyxoviridae)、副粘病毒科(Parainyxoviridae)、乳多空病毒科、多瘤病毒、弹状病毒科、和披膜病毒科。示例性致病病毒引起天花、流感、流行性腮腺炎、麻疹、水痘、埃博拉、和风疹。靶抗原可衍生自上述病毒中的任一种。在一些实施例中，靶抗原是选自下组的机会病毒病原体的病毒抗原，该组由以下组成：CMV、腺病毒、BK病毒、人类疱疹病毒-6(HHV6)或其他疱疹病毒、流感、呼吸道合胞病毒(RSV)、副流感病毒、和水痘带状疱疹病毒、HSV(单纯疱疹病毒)、EBV、JC病毒、或埃博拉。

在一些实施例中，靶抗原是细菌抗原，如阿弗西尼疏螺旋体(Borrelia afzelii)抗原、伽氏疏螺旋体(Borrelia garinii)抗原、流产布鲁氏菌(Brucella abortus)抗原、空肠弯曲菌(Campylobacter jejuni)抗原、幽门螺杆菌抗原、嗜肺军团菌(Legionellapneumophila)抗原、双曲钩端螺旋体(Leptospira biflexa)抗原、肺炎支原体(Mycoplasmapneumoniae)抗原。示例性致病细菌包括链球菌、假单胞菌、志贺菌、弯曲菌、葡萄球菌、螺杆菌、大肠杆菌、立克次体、芽孢杆菌、鲍特菌(Bordetella)、衣原体、螺旋体、和沙门氏菌。

在一些实施例中，靶抗原是参与肿瘤进展和/或逃离免疫系统监视的免疫系统相关的分子，如T细胞、B细胞、NK细胞、巨噬细胞、单核细胞等上的免疫系统相关的分子。在一些实施例中，靶抗原是CD4、CD8、CD45R、HLA-DR、免疫检查点分子，该靶抗原包括但不限于PD-L1(B7-H1，CD274)、PD-L2(B7DC，CD273)、B7-1(CD80)、B7-2(CD86)、半乳凝素9、HVEM、B7-H3(CD276)、FGL1、CD155、CD112、CD113、半乳凝素-9、CEACAM-1、和B7-H4。

在一些实施例中，靶抗原是自身免疫性抗原。“自身免疫性抗原”是指作为靶标或引起自身免疫性疾病的任何自身蛋白质或自身组分。自身免疫性抗原的实例包括但不限于，髓鞘碱性蛋白、蛋白脂质蛋白、或髓鞘少突胶质细胞蛋白(多发性硬化)；周围髓鞘蛋白P0和P2(格林-巴利综合征(Guillain-Barre syndrome))；乙酰胆碱受体(重症肌无力)；心肌肌球蛋白(风湿热/心肌炎)；朗格汉斯-GAD胰岛中β细胞的蛋白质(谷氨酸脱羧酶)、胰岛素(I型自身免疫性糖尿病)、促甲状腺激素受体(格雷夫斯病)、血小板(血小板减少性紫癜)、神经肌肉接头(重症肌无力)、红细胞(自身免疫性溶血性贫血)和细胞内抗原(系统性红斑狼疮中的剪接体、核糖体、核酸等)。

细胞外TCR结合结构域

本文所述的细胞外TCR结合结构域特异性结合TCR复合物中的一个或多个亚基(例如，这些亚基的细胞外结构域)。TCR复合物是存在于由TCR异二聚体(TCRα/TCRβ或TCRγ/TCRδ)和多个CD3亚基即CD3ε、CD3δ、CD3γ和CD3ζ组成的T细胞表面上的TCR亚基的复合物。其参与激活T细胞以响应抗原的结合。

在一些实施例中，细胞外TCR结合结构域包含特异性识别TCR亚基(如TCR亚基的细胞外结构域)的TCR抗原结合结构域(例如，scFv、sdAb)，该TCR抗原结合结构域包括例如TCRα、TCRβ、TCRγ、TCRδ、CD3ε、CD3δ、CD3γ、和CD3ζ中的任一个。在一些实施例中，由TCR抗原结合结构域(例如，scFv、sdAb)特异性识别的TCR亚基与本文所述的第一TCR亚基(嵌合受体肽的跨膜结构域来源于此)和/或第二TCR亚基(嵌合受体肽的细胞内结构域来源于此)相同。在一些实施例中，被TCR抗原结合结构域(例如，scFv、sdAb)特异性识别的TCR亚基与本文所述的第一TCR亚基和/或第二TCR亚基不同。在一些实施例中，被TCR抗原结合结构域(例如，scFv、sdAb)特异性识别的TCR亚基、本文所述的第一TCR亚基、和第二TCR亚基均相同。在一些实施例中，本文所述的第一TCR亚基和第二TCR亚基相同，但与被TCR抗原结合结构域(例如，scFv、sdAb)特异性识别的TCR亚基不同。

在一些实施例中，TCR抗原结合结构域包含与CD3的亚基(例如，CD3的细胞外结构域)(如CD3ε，例如，CD3ε的N-末端、CD3ε/γ、CD3ε/δ)结合的抗体或其抗原结合片段。CD3抗体的实例是本领域已知的(例如，莫罗单抗、奥昔珠单抗、和维西珠单抗)。在一些实施例中，与CD3的亚基(如CD3ε，例如，CD3ε的N-末端、CD3ε/γ、CD3ε/δ)结合的抗体或其抗原结合片段是单链抗体，如sdAb或scFv。在一些实施例中，与CD3的亚基结合的抗体或其抗原结合片段来源于抗CD3抗体，包括但不限于CN 106084046 A和CN 106084047 A中披露的OKT3、UCHT1、TRX4、HuM291、SK7、和sdAb，其内容通过援引以其全文并入本文。在一些实施例中，特异性结合CD3(例如，CD3ε的细胞外结构域)的TCR抗原结合结构域(如scFv)包含HC-CDR1、HC-CDR2、HC-CDR3、LC-CDR1、LC-CDR2、和UCHT1抗CD3抗体(SEQ ID NO:24)的LC-CDR3。在一些实施例中，特异性结合CD3(例如，CD3ε、CD3ε/γ、CD3ε/δ的细胞外结构域)的TCR抗原结合结构域(如scFv)包含UCHT1抗CD3抗体(SEQ ID NO:24)的VH和VL。在一些实施例中，TCR抗原结合结构域是特异性结合CD3ε(例如，CD3ε的细胞外结构域)的scFv，其中抗CD3εscFv包含SEQ ID NO：24的氨基酸序列。在一些实施例中，TCR抗原结合结构域是特异性结合CD3ε(例如，CD3ε的细胞外结构域)的sdAb。在一些实施例中，TCR抗原结合结构域是包含含有SEQ IDNO：22或23的氨基酸序列的抗CD3 sdAb的CDR1、CDR2、和CDR3的sdAb。在一些实施例中，TCR抗原结合结构域是包含SEQ ID NO:22或23的氨基酸序列的抗CD3εsdAb。

在一些实施例中，TCR抗原结合结构域包含与TCR(例如，TCR的细胞外结构域)结合的抗体或其抗原结合片段，如TCRα、TCRβ、TCRγ、或TCRδ中的任一个，例如，TCRγ/δ的恒定区。TCR抗体的实例是本领域已知的(例如B1.1、IP26、H57-597、1B2、WT31、7F18、3C10、

KJ1298)。在一些实施例中，与TCR(如TCRγ/δ，例如，TCRγ/δ的恒定区)结合的抗体或其抗原结合片段是单链抗体，如sdAb或scFv。在一些实施例中，与TCR结合的抗体或其抗原结合片段来源于抗TCR抗体，包括但不限于B1.1、IP26、H57-597、1B2、WT31、7F18、3C10、KJ1298。在一些实施例中，特异性结合TCR(例如，TCRγ/δ)的TCR抗原结合结构域(如scFv)包含B1.1抗TCRγ/δ抗体(SEQ ID NO:27)的HC-CDR1、HC-CDR2、HC-CDR3、LC-CDR1、LC-CDR2、和LC-CDR3。在一些实施例中，特异性结合TCR(例如，TCRγ/δ)的TCR抗原结合结构域(如scFv)包含B1.1抗TCRγ/δ抗体(SEQ ID NO：27)的VH和VL。在一些实施例中，TCR抗原结合结构域是特异性结合TCRγ/δ(例如，TCRγ/δ的恒定区)的scFv，其中抗TCRγ/δscFv包含SEQID NO:27的氨基酸序列。

在一些实施例中，细胞外TCR结合结构域以a)至少约10(包括例如至少约10、20、30、40、50、75、100、200、300、400、500、750、1000或更多倍中的任何一个)倍其对其他分子的结合亲和力的亲和力；或b)Kd不超过其对其他分子的结合的Kd的约1/10(如不超过约1/10、1/20、1/30、1/40、1/50、1/75、1/100、1/200、1/300、1/400、1/500、1/750、1/1000或更少中的任何一个)与TCR亚基(如TCR亚基的细胞外结构域)结合。结合亲和力可以通过本领域已知的方法来确定，所述方法例如ELISA、荧光激活细胞分选(FACS)分析或放射免疫沉淀测定(RIA)。Kd可以通过本领域已知的方法来确定，所述方法例如利用例如Biacore仪器的表面等离子共振(SPR)测定或利用例如Sapidyne仪器的动力学排斥测定(KinExA)。

在一些实施例中，细胞外TCR结合结构域包含两个或更多个(如两个)TCR抗原结合结构域(例如，scFv、sdAb)。在一些实施例中，两个或更多个TCR抗原结合结构域是串联连接的。在一些实施例中，两个或更多个TCR抗原结合结构域通过一个或多个接头(如本文所述的任何接头)连接。在一些实施例中，一个或多个接头选自SEQ ID NO:1-21、67、和68中的任何一个。在一些实施例中，两个或更多个(如两个)TCR抗原结合结构域(例如，scFv、sdAb)特异性结合同一TCR亚基(例如，同一TCR亚基的细胞外结构域)。例如，在一些实施例中，细胞外TCR结合结构域包含两个或更多个(如两个)TCR抗原结合结构域(例如，scFv、sdAb)，这些TCR抗原结合结构域各自识别同一TCR亚基上的相同或不同的表位(例如，同一TCR亚基的细胞外结构域上的表位)。在一些实施例中，细胞外TCR结合结构域包含两个或更多个(如两个)TCR抗原结合结构域(例如，scFv、sdAb)，这些TCR抗原结合结构域各自识别不同的TCR亚基(例如，不同的TCR亚基的细胞外结构域)。在一些实施例中，两个或更多个TCR抗原结合结构域相同。在一些实施例中，两个或更多个TCR抗原结合结构域不同。

在一些实施例中，细胞外TCR结合结构域以约0.1pM至约5μM之间(如约0.1pM、1.0pM、10pM、50pM、100pM、500pM、1nM、10nM、50nM、100nM、500nM、1μM、2μM、3μM、4μM、5μM中的任何一个，包括这些值之间的任何范围)的Kd结合TCR亚基(例如，该TCR亚基的细胞外结构域)。

跨膜结构域

在一些实施例中，嵌合受体多肽包含跨膜结构域。在一些实施例中，该跨膜结构域包含TCR亚基的跨膜结构域，如CD3ε、CD3γ、CD3δ、TCRα、TCRβ、TCRγ、和TCRδ中的任何一个。在一些实施例中，跨膜结构域进一步包含细胞外和/或细胞内区域中与TCR亚基跨膜结构域相邻的一个或多个(例如多达约5个)另外的氨基酸。

嵌合受体多肽的跨膜结构域可以源自天然来源或合成来源。如本文所用的，“跨膜结构域”是指在细胞膜(优选地真核细胞膜)中热力学稳定的任何蛋白质结构。适用于本文所述的嵌合受体多肽的跨膜结构域可获自天然存在的蛋白质，例如天然存在的TCR亚基。可替代地，其可以是合成的、非天然存在的蛋白质区段，例如，在细胞膜中热力学稳定的疏水蛋白区段。

根据跨膜结构域的三维结构对跨膜结构域进行分类。例如，跨膜结构域可以形成α螺旋、多于一个的α螺旋的复合物、β桶、或能够跨越细胞的磷脂双层的任何其他稳定结构。另外，跨膜结构域也可以或可替代地根据跨膜结构域拓扑结构进行分类，包括跨膜结构域穿过膜的次数和蛋白质的取向。例如，单途径膜蛋白穿过细胞膜一次，而多途径膜蛋白穿过细胞膜至少两次(例如，2、3、4、5、6、7或更多次)。膜蛋白可被定义为I型、II型或III型，这取决于其末端和一个或多个膜通过区段相对于细胞内部和外部的拓扑结构。I型膜蛋白具有单个跨膜区，并且其定向为使得蛋白质的N-末端存在于细胞的脂质双层的细胞外侧，而该蛋白的C-末端存在于胞内侧。II型膜蛋白也具有单个跨膜区，但其定向为使得蛋白质的C-末端存在于细胞的脂质双层的细胞外侧，而该蛋白的N-末端存在于胞内侧。III型膜蛋白具有多个跨膜区段，并且可根据跨膜区段的数量和N-末端和C-末端的位置进一步分类。

在一些实施例中，本文所述的嵌合受体多肽的跨膜结构域来源于I型单途径膜蛋白。在一些实施例中，来自多途径膜蛋白的跨膜结构域可适用于本文所述的嵌合受体多肽。多途径膜蛋白可以包含复合物(至少2、3、4、5、6、7或更多)α螺旋或β折叠结构。优选地，多途径膜蛋白的N-末端和C-末端存在于脂质双层的相对侧，例如，蛋白质的N-末端存在于脂质双层的胞内侧，而该蛋白质的C-末端存在于细胞外侧。

在一些实施例中，当嵌合受体多肽同时包含TCR亚基的跨膜结构域和TCR亚基的细胞内结构域时，嵌合受体多肽中的跨膜结构域和细胞内结构域可以来源于同一TCR亚基或来源于不同的TCR亚基。

在一些实施例中，当嵌合受体多肽同时包含跨膜结构域和细胞内结构域时，该细胞内结构域包含TCR亚基的细胞内结构域，该跨膜结构域可以来源于非TCR亚基的蛋白质的跨膜，包括例如CD28、CD45、CD4、CD5、CD8、CD9、CD16、CD22、CD27、CD33、CD37、CD40、CD40L、CD45、CD64、CD70、CD80、CD86、CD95、CD134、CD137(4-1BB)、CD154、CD278(ICOS)、KIRDS2、OX40、CD2、LFA-1(CD11a、CD18)、GITR、BAFFR、HVEM(LIGHTR)、SLAMF7、NKp80(KLRF1)、CD160、CD19、IL-2Rβ、IL-2Rγ、IL-7R a、ITGA1、VLA1、CD49a、ITGA4、IA4、CD49D、ITGA6、VLA-6、CD49f、ITGAD、CD11d、ITGAE、CD103、ITGAL、ITGAM、CD11b、ITGAX、CD11c、ITGB1、CD29、ITGB2、CD18、ITGB7、TNFR2、DNAM1(CD226)、SLAMF4(CD244、2B4)、CD84、CD96(触觉)、CEACAM1、CRTAM、Ly9(CD229)、CD160(BY55)、PSGL1、CDIOO(SEMA4D)、SLAMF6(NTB-A、Lyl08)、SLAM(SLAMF1、CD150、IPO-3)、BLAME(SLAMF8)、SELPLG(CD162)、LTBR、PAG/Cbp、NKp44、NKp30、NKp46、NKG2D、和/或NKG2C。

在一些实施例中，跨膜结构域包含选自下组的TCR亚基的跨膜结构域，该组由以下组成：CD3ε、CD3γ、CD3δ、TCRα、TCRβ、TCRγ、和TCRδ。在一些实施例中，嵌合受体多肽进一步包含选自下组的TCR亚基的细胞外结构域，该组由以下组成：CD3ε、CD3γ、CD3δ、TCRα、TCRβ、TCRγ、和TCRδ，该细胞外结构域与细胞外区域中的嵌合受体多肽的跨膜结构域相邻。在一些实施例中，此细胞外结构域不包含信号肽。在一些实施例中，细胞外结构域所来源的TCR亚基与跨膜结构域所来源的TCR亚基相同。在一些实施例中，细胞外结构域所来源的TCR亚基与跨膜结构域所来源的TCR亚基不同。在一些实施例中，细胞外结构域所来源的TCR亚基与细胞内结构域所来源的TCR亚基相同。在一些实施例中，细胞外结构域所来源的TCR亚基与细胞内结构域所来源的TCR亚基不同。在一些实施例中，细胞外结构域所来源的TCR亚基、跨膜结构域所来源的TCR亚基、和细胞内结构域所来源的TCR亚基均相同。在一些实施例中，细胞外结构域所来源的TCR亚基、跨膜结构域所来源的TCR亚基、和细胞内结构域所来源的TCR亚基均不同。在一些实施例中，细胞外结构域所来源的TCR亚基与跨膜结构域所来源的TCR亚基相同，但与细胞内结构域所来源的TCR亚基不同。在一些实施例中，细胞外结构域所来源的TCR亚基与细胞内结构域所来源的TCR亚基相同，但与跨膜结构域所来源的TCR亚基不同。在一些实施例中，细胞内结构域所来源的TCR亚基与跨膜结构域所来源的TCR亚基相同，但与细胞外结构域所来源的TCR亚基不同。例如，在一些实施例中，嵌合受体多肽包含与细胞外区域中的CD3ε跨膜结构域相邻的CD3ε细胞外结构域(没有信号肽)。在一些实施例中，嵌合受体多肽包含与细胞外区域中的CD3γ跨膜结构域相邻的CD3γ细胞外结构域(没有信号肽)。在一些实施例中，嵌合受体多肽包含与细胞外区域中的CD3δ跨膜结构域相邻的CD3δ细胞外结构域(没有信号肽)。在一些实施例中，嵌合受体多肽包含与细胞外区域中的TCRα跨膜结构域相邻的TCRα细胞外结构域(没有信号肽)。在一些实施例中，嵌合受体多肽包含与细胞外区域中的TCRβ跨膜结构域相邻的TCRβ细胞外结构域(没有信号肽)。在一些实施例中，嵌合受体多肽包含与细胞外区域中的TCRγ跨膜结构域相邻的TCRγ细胞外结构域(没有信号肽)。在一些实施例中，嵌合受体多肽包含与细胞外区域中的TCRδ跨膜结构域相邻的TCRδ细胞外结构域(没有信号肽)。在一些实施例中，细胞外结构域所来源的TCR亚基选自由以下组成的组：TCRα、TCRβ、TCRγ、和TCRδ，并且嵌合受体多肽仅包含与细胞外区域中的嵌合受体多肽的跨膜结构域相邻的所述TCR亚基的恒定区。例如，在一些实施例中，嵌合受体多肽包含与细胞外区域中的TCRα跨膜结构域相邻的TCRα恒定区(没有TCRα可变区和信号肽)。在一些实施例中，嵌合受体多肽包含与细胞外区域中的TCRβ跨膜结构域相邻的TCRβ恒定区(没有TCRβ可变区和信号肽)。在一些实施例中，嵌合受体多肽包含与细胞外区域中的TCRγ跨膜结构域相邻的TCRγ恒定区(没有TCRγ可变区和信号肽)。在一些实施例中，嵌合受体多肽包含与细胞外区域中的TCRδ跨膜结构域相邻的TCRδ恒定区(没有TCRδ可变区和信号肽)。在一些实施例中，嵌合受体多肽不包含任何TCR亚基的细胞外结构域。在一些实施例中，嵌合受体多肽包含CD3ε细胞外结构域(没有信号肽)、CD3ε跨膜结构域、和CD3ε细胞内结构域，如没有CD3ε信号肽的全长CD3ε(下文也被称为构建体“e”)。在一些实施例中，嵌合受体多肽包含CD3γ细胞外结构域(没有信号肽)、CD3γ跨膜结构域、和CD3γ细胞内结构域，如没有CD3γ信号肽的全长CD3γ(下文也被称为构建体“g”)。在一些实施例中，嵌合受体多肽包含CD3δ细胞外结构域(没有信号肽)、CD3δ跨膜结构域、和CD3δ细胞内结构域，如没有CD3δ信号肽的全长CD3δ(下文也被称为构建体“d”)。在一些实施例中，嵌合受体多肽包含CD3ε跨膜结构域和CD3ε细胞内结构域，而没有任何CD3ε细胞外结构域(下文也被称为构建体“se”，SEQ ID NO:40)。在一些实施例中，嵌合受体多肽包含CD3γ跨膜结构域和CD3γ细胞内结构域，而没有任何CD3γ细胞外结构域(下文也被称为构建体“sg”，SEQ ID NO:41)。在一些实施例中，嵌合受体多肽包含CD3δ跨膜结构域和CD3δ细胞内结构域，而没有任何CD3δ细胞外结构域(下文也被称为构建体“sd”，SEQ ID NO：42)。在一些实施例中，嵌合受体多肽包含TCRα恒定区(没有TCRα可变区和信号肽)、TCRα跨膜结构域、和TCRα细胞内结构域(下文也被称为构建体“taC”，SEQ ID NO:32)。在一些实施例中，嵌合受体多肽包含TCRβ恒定区(没有TCRβ可变区和信号肽)、TCRβ跨膜结构域、和TCRβ细胞内结构域(下文也被称为构建体“tbC”，SEQ ID NO:33)。在一些实施例中，嵌合受体多肽包含TCRγ恒定区(没有TCRγ可变区和信号肽)、TCRγ跨膜结构域、和TCRγ细胞内结构域(下文也被称为构建体“tgC”，SEQID NO:36)。在一些实施例中，嵌合受体多肽包含TCRδ恒定区(没有TCRδ可变区和信号肽)、TCRδ跨膜结构域、和TCRδ细胞内结构域(下文也被称为构建体“tdC”，SEQ ID NO:37)。在一些实施例中，嵌合受体多肽包含TCRα跨膜结构域和TCRα细胞内结构域，而没有任何TCRα细胞外结构域(下文也被称为构建体“sta”，SEQ ID NO:34)。在一些实施例中，嵌合受体多肽包含TCRβ跨膜结构域和TCRβ细胞内结构域，而没有任何TCRβ细胞外结构域(下文也被称为构建体“stb”，SEQ ID NO:35)。在一些实施例中，嵌合受体多肽包含TCRγ跨膜结构域和TCRγ细胞内结构域，而没有任何TCRγ细胞外结构域(下文也被称为构建体“stg”，SEQ ID NO:38)。在一些实施例中，嵌合受体多肽包含TCRδ跨膜结构域和TCRδ细胞内结构域，而没有任何TCRδ细胞外结构域(下文也被称为构建体“std”，SEQ ID NO：39)。

铰链区

在一些实施例中，本文所述的嵌合受体多肽的跨膜结构域包含细胞外铰链区(下文也被称为“STS铰链区”)。在一些实施例中，STS铰链区包含TCR亚基或其片段的铰链区，例如，嵌合受体多肽的跨膜结构域所来源的同一TCR亚基(例如，CD3ε)的铰链区(例如，参见“跨膜结构域”部分)。在一些实施例中，铰链区来源于与嵌合受体多肽的跨膜结构域(例如，CD3ε)所来源相比的不同的TCR亚基(例如，CD3γ)。

在一些实施例中，当嵌合受体多肽不包含TCR亚基、铰链区(例如，CD8铰链)的细胞外结构域(例如，CD3ε、CD3γ、CD3δ)时，任选地另外的接头(如GS接头)用于连接嵌合受体多肽的跨膜结构域和细胞外TCR结合结构域(当细胞外靶标结合结构域在细胞外TCR结合结构域的N-末端时)或细胞外靶标结合结构域(当细胞外靶标结合结构域在细胞外TCR结合结构域的C-末端时)。在一些实施例中，铰链区促进细胞表面上两个嵌合受体多肽的二聚化(参见，例如图7-9)。

在一些实施例中，铰链区是天然存在的蛋白质的铰链区。本领域已知的包含铰链区的任何蛋白质的铰链区均适用于本文所述的嵌合受体多肽。在一些实施例中，铰链区至少是天然存在的蛋白质的铰链区的一部分，并且赋予嵌合受体多肽柔性。在一些实施例中，铰链区包含CD8的铰链区。在一些实施例中，铰链包含SEQ ID NO:31的氨基酸序列。

抗体的铰链区(如IgG、IgA、IgM、IgE、或IgD抗体)也适用于本文所述的嵌合受体多肽。在一些实施例中，铰链区是连接抗体的恒定结构域CH1和CH2的铰链区。在一些实施例中，铰链区是抗体的铰链区，并且包含抗体及该抗体的一个或多个恒定区的铰链区。在一些实施例中，铰链区包含抗体及该抗体的CH3恒定区的铰链区。在一些实施例中，铰链区包含抗体及该抗体的CH2和CH3恒定区的铰链区。在一些实施例中，抗体是IgG、IgA、IgM、IgE、或IgD抗体。在一些实施例中，抗体是IgG抗体。在一些实施例中，抗体是IgG1、IgG2、IgG3、或IgG4抗体。在一些实施例中，铰链区包含IgG1抗体的铰链区和CH2和CH3恒定区。在一些实施例中，铰链区包含IgG1抗体的铰链区和CH3恒定区。

非天然存在的肽也可用作本文所述的嵌合受体多肽的铰链区。

铰链区可以含有约5-100个氨基酸，例如，约5-15个氨基酸、15-75个氨基酸、20-50个氨基酸、或30-60个氨基酸中的任何一项。在一些实施例中，铰链区的长度可以是至少约5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、35、40、45、50、55、60、65、70、或75个氨基酸中的任何一个。

在一些实施例中，本文所述的嵌合受体多肽的铰链区和跨膜结构域来源于相同的分子(例如，相同的免疫细胞共刺激分子、免疫细胞共抑制剂、TCR亚基、或T细胞共受体)。例如，在一些实施例中，嵌合受体多肽的铰链区包含TCRα铰链区或其片段，并且嵌合受体多肽的跨膜结构域包含TCRα跨膜结构域或其片段。在一些实施例中，嵌合受体多肽的跨膜结构域来源于不同的分子(例如，不同的免疫细胞共刺激分子、免疫细胞共抑制剂、TCR亚基、或T细胞共受体)。例如，在一些实施例中，嵌合受体多肽的铰链区包含4-1BB铰链区或其片段，并且嵌合受体多肽的跨膜结构域包含CD3ε跨膜结构域或其片段。

细胞内结构域

在一些实施例中，嵌合受体多肽包含细胞内结构域。在一些实施例中，该细胞内结构域包含TCR亚基的细胞内结构域，如CD3ε、CD3γ、CD3δ、TCRα、TCRβ、TCRγ、和TCRδ中的任何一个。在一些实施例中，细胞内结构域包含信号传导结构域(例如，CD3ε、CD3γ、和CD3δ的细胞内结构域)。在一些实施例中，细胞内结构域缺乏信号传导结构域(例如，TCRα、TCRβ、TCRγ、和TCRδ的细胞内结构域)。在一些实施例中，细胞内结构域缺乏共刺激结构域。

在一些实施例中，细胞内结构域包含CD3ε的一部分或整个细胞内结构域。在一些实施例中，细胞内结构域包含CD3γ的一部分或整个细胞内结构域。在一些实施例中，细胞内结构域包含CD3δ的一部分或整个细胞内结构域。

在一些实施例中，细胞内结构域包含TCRα的一部分或整个细胞内结构域。在一些实施例中，细胞内结构域包含TCRβ的一部分或整个细胞内结构域。在一些实施例中，细胞内结构域包含TCRγ的一部分或整个细胞内结构域。在一些实施例中，细胞内结构域包含TCRδ的一部分或整个细胞内结构域。

在一些实施例中，细胞内结构域不包含基于免疫受体酪氨酸的活化基序(ITAM)。如本文所用的，“ITAM”是保守蛋白基序，其通常存在于许多免疫细胞中表达的信号传导分子的尾部。ITAM可包含由6-8个氨基酸分离的氨基酸序列YxxL/I的两个重复，其中每个x独立地为产生保守基序YxxL/Ix(6-8)YxxL/I的任何氨基酸。信号传导分子(例如，CD3ζ、CD3ε、CD3γ、CD3δ)内的ITAM对细胞内的信号转导很重要，该信号转导至少部分由信号传导分子激活后ITAM中的酪氨酸残基的磷酸化(例如，由Src家族激酶如Lck)介导。ITAM也可以作为参与信号传导途径的其他蛋白质的对接位点。示例性含有ITAM的初级胞内信号传导序列包括来源于CD3ζ、FcRγ(FCER1G)、FcRβ(FcεRib)、CD3γ、CD3δ、CD3ε、CD5、CD22、CD79a、CD79b、和CD66d的那些。在一些实施例中，本文所述的细胞内结构域不是来源于含有ITAM的分子。例如，在一些实施例中，细胞内结构域不包含CD3ζ、CD3γ、CD3δ、CD3ε、或其片段的细胞内结构域。在一些实施例中，本文所述的细胞内结构域来源于含有ITAM的分子，但没有任何ITAM序列。例如，在一些实施例中，细胞内结构域包含CD3γ、CD3δ、或CD3ε的细胞内结构域，其中ITAM序列缺失。在一些实施例中，细胞内结构域包含能招募并与酪氨酸激酶Lck相互作用的氨基酸序列。

在一些实施例中，嵌合受体多肽的细胞内结构域所来源的TCR亚基与嵌合受体多肽的跨膜结构域所来源的TCR亚基相同。在一些实施例中，嵌合受体多肽的细胞内结构域所来源的TCR亚基与嵌合受体多肽的跨膜结构域所来源的TCR亚基不同。

接头

在一些实施例中，本文所述的嵌合受体多肽可以包含本文所述的一个或多个结构域之间的接头(例如，肽接头)。例如，在一些实施例中，嵌合受体多肽包含连接细胞外靶标结合结构域和细胞外TCR结合结构域的第一接头。在一些实施例中，嵌合受体多肽进一步包含第二接头。当细胞外靶标结合结构域位于细胞外TCR结合结构域的N-末端时，细胞外TCR结合结构域的C-末端和跨膜结构域的N-末端(或如果细胞外铰链区的N-末端存在于跨膜结构域的N-末端处)由第二接头连接。当细胞外靶标结合结构域位于细胞外TCR结合结构域的C-末端时，细胞外靶标结合结构域的C-末端和跨膜结构域的N-末端(或如果细胞外铰链区的N-末端存在于跨膜结构域的N-末端处)由第二接头连接。在一些实施例中，包含在细胞外靶标结合结构域内的两个或更多个(如两个)靶抗原结合结构域(例如，scFv、VHH、DARPin)由第三接头连接。在一些实施例中，包含在细胞外TCR结合结构域内的两个或更多个(如两个)TCR抗原结合结构域(例如，scFv、sdAb、VHH)由第四接头连接。在一些实施例中，当嵌合受体多肽包含细胞外铰链区时，该细胞外铰链区还可以通过接头连接到跨膜结构域的N-末端。在一些实施例中，在嵌合受体多肽的跨膜结构域的C-末端与细胞内结构域的N-末端之间存在接头。连接本文所述的一个或多个结构域的接头可以相同或不同，如在序列和/或长度上不同。

接头可以是任何合适长度的肽接头。在一些实施例中，肽接头的长度为至少约以下中的任何一者：1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、25、30、35、40、50、75、100个或更多个氨基酸。在一些实施例中，肽接头的长度为不超过约以下中的任何一者：100、75、50、40、35、30、25、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5个或更少个氨基酸。在一些实施例中，肽接头为从约1个氨基酸至约10个氨基酸长、从约2个氨基酸至约15个氨基酸长、从约3个氨基酸至约12个氨基酸长、从约4个氨基酸至约10个氨基酸长、从约5个氨基酸至约9个氨基酸长、从约6个氨基酸至约8个氨基酸长、从约1个氨基酸至约20个氨基酸长、从约10个氨基酸至约20个氨基酸长、从约21个氨基酸至约30个氨基酸长、从约10个氨基酸至约25个氨基酸长、从约5个氨基酸至约15个氨基酸长、从约15个氨基酸至约20个氨基酸长、从约1个氨基酸至约30个氨基酸长、从约5个氨基酸至约30个氨基酸长、从约2个氨基酸至约20个氨基酸长、从约5个氨基酸至约25个氨基酸长、从约5个氨基酸至约24个氨基酸长、从约6个氨基酸至约23个氨基酸长、从约5个氨基酸至约22个氨基酸长、从约6个氨基酸至约21个氨基酸长、从约7个氨基酸至约20个氨基酸长、从约10个氨基酸至约30个氨基酸长、从约30个氨基酸至约40个氨基酸长、从约40个氨基酸至约50个氨基酸长、从约30个氨基酸至约50个氨基酸长、从约50个氨基酸至约100个氨基酸长、从约1个氨基酸至约100个氨基酸长、从约2个氨基酸至约19个氨基酸长、从约3个氨基酸至约18个氨基酸长、从约4个氨基酸至约17个氨基酸长、从约4个氨基酸至约16个氨基酸长、从约4个氨基酸至约15个氨基酸长、从约4个氨基酸至约14个氨基酸长、从约4个氨基酸至约13个氨基酸长、从约4个氨基酸至约12个氨基酸长、从约4个氨基酸至约11个氨基酸长、从约4个氨基酸至约9个氨基酸长、从约4个氨基酸至约8个氨基酸长、从约4个氨基酸至约7个氨基酸长、或从约4个氨基酸至约6个氨基酸长。在一些实施例中，肽接头是1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个氨基酸长中的任何一个。在一些实施例中，肽接头是21、22、23、24、25、26、27、28、29、或30个氨基酸长中的任何一个。

肽接头可具有天然存在的序列或非天然存在的序列。例如，衍生自仅有重链的抗体的铰链区的序列可以用作接头。参见，例如，WO 1996/34103。在一些实施例中，肽接头是人IgG1或IgG4铰链。在一些实施例中，肽接头是突变的人IgG1或IgG4铰链。在一些实施例中，肽接头是IgG4-Fc-接头，如包含SEQ ID NO：21的氨基酸序列的IgG4-Fc-接头

(ESKYGPPCPPCPAPEFEGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFQSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK)。在一些实施例中，肽接头是α-螺旋接头。在一些实施例中，接头是柔性接头。示例性柔性接头包括甘氨酸聚合物(G)

在一些实施例中，接头(例如，肽接头)是稳定的接头(不能被蛋白酶尤其是被基质金属蛋白酶(MMP)切割)。

在一些实施例中，接头(例如，肽接头)是可切割的接头。在一些实施例中，接头包含蛋白酶底物裂解序列，例如，MMP底物裂解序列。可以被MMP裂解的底物序列已被广泛研究。例如，PLGLAG的序列(SEQ ID NO：25)可以被大部分MMP裂解。在一些实施例中，蛋白酶切割位点由MMP-2、MMP-9、或其组合识别。

信号肽

本申请的嵌合受体多肽可以包含嵌合受体多肽的N-末端处的信号肽(也称为信号序列)。通常，信号肽是将多肽靶向细胞中所希望的位点的肽序列。在一些实施例中，信号肽将嵌合受体多肽靶向细胞的分泌途径，并且将允许嵌合受体多肽整合和锚定在脂质双层中。包括天然存在的蛋白质的信号序列或合成的、非天然存在的信号序列的信号肽(这些信号肽可用于本文所述的嵌合受体多肽(和/或下文所述的细胞因子))对本领域的技术人员来说是显而易见的。在一些实施例中，信号肽来源于选自下组的分子，该组由以下组成：CD8α、GM-CSF受体α、IL-3、和IgG1重链。在一些实施例中，信号肽来源于CD8α。在一些实施例中，信号肽来源于与嵌合受体多肽的跨膜结构域和/或细胞内结构域所来源的相同(或与存在于其细胞外结构域(与该嵌合受体多肽的跨膜结构域邻近)的TCR亚基相同，例如，CD3ε细胞外结构域)的分子。例如，在一些实施例中，当嵌合受体多肽包含来源于CD3ε的跨膜结构域、来源于CD3ε的细胞内结构域、和/或CD3ε细胞外结构域时，信号肽也来源于CD3ε。在一些实施例中，当嵌合受体多肽包含来源于CD3γ的跨膜结构域、来源于CD3γ的细胞内结构域、和/或CD3γ细胞外结构域时，信号肽也来源于CD3γ。在一些实施例中，当嵌合受体多肽包含来源于CD3δ的跨膜结构域、来源于CD3δ的细胞内结构域、和/或CD3δ细胞外结构域时，信号肽也来源于CD3δ。在一些实施例中，当嵌合受体多肽包含来源于TCRα的跨膜结构域、来源于TCRα的细胞内结构域、和/或TCRα细胞外结构域(例如，TCRα恒定区)时，信号肽也来源于TCRα。在一些实施例中，当嵌合受体多肽包含来源于TCRβ的跨膜结构域、来源于TCRβ的细胞内结构域、和/或TCRβ细胞外结构域(例如，TCRβ恒定区)时，信号肽也来源于TCRβ。在一些实施例中，当嵌合受体多肽包含来源于TCRγ的跨膜结构域、来源于TCRγ的细胞内结构域、和/或TCRγ细胞外结构域(例如，TCRγ恒定区)时，信号肽也来源于TCRγ。在一些实施例中，当嵌合受体多肽包含来源于TCRδ的跨膜结构域、来源于TCRδ的细胞内结构域、和/或TCRδ细胞外结构域(例如，TCRδ恒定区)时，信号肽也来源于TCRδ。在一些实施例中，信号肽来源于与嵌合受体多肽的跨膜结构域和/或细胞内结构域所来源的TCR亚基不同(或与存在于其细胞外结构域(与该嵌合受体多肽的跨膜结构域邻近)的TCR亚基不同，例如，CD3ε细胞外结构域)的分子。

在一些实施例中，嵌合受体多肽从N-末端到C-末端包含以下(或基本上由其组成或由其组成)：任选的信号肽-细胞外靶标结合结构域(例如，scFv、sdAb、VHH、DARPin，如抗BCMA sdAb)-第一接头(例如，GS接头)-细胞外TCR结合结构域(例如，scFv、sdAb、或VHH，如抗CD3 scFv或sdAb、或抗TCR scFv)-第二接头(例如，GS接头)-任选的细胞外铰链结构域(例如，CD8铰链)-跨膜结构域(例如，第一TCR亚基的跨膜结构域)-细胞内结构域(例如，第二TCR亚基的细胞内结构域)。在一些实施例中，嵌合受体多肽从N-末端到C-末端包含以下(或基本上由其组成或由其组成)：任选的信号肽-细胞外TCR结合结构域(例如，scFv、sdAb、或VHH，如抗CD3 scFv或sdAb、或抗TCR scFv)-第一接头(例如，GS接头)-细胞外靶标结合结构域(例如，scFv、sdAb、VHH、DARPin，如抗BCMA sdAb)-第二接头(例如，GS接头)-任选的细胞外铰链结构域(例如，CD8铰链)-跨膜结构域(例如，第一TCR亚基的跨膜结构域)-细胞内结构域(例如，第二TCR亚基的细胞内结构域)。在一些实施例中，嵌合受体多肽从N-末端到C-末端包含以下(或基本上由其组成或由其组成)：任选的信号肽-(细胞外靶标结合结构域的VHH1(如第一抗BCMA sdAb)-第三接头(例如，GS接头)-细胞外靶标结合结构域的VHH2(如第二抗BCMA sdAb))-第一接头(例如，GS接头)-细胞外TCR结合域(例如，scFv、sdAb、或VHH，如抗CD3 scFv或sdAb、或抗TCR scFv)-第二接头(例如，GS接头)-任选的细胞外铰链结构域(例如，CD8铰链)-跨膜结构域(例如，第一TCR亚基的跨膜结构域)-细胞内结构域(例如，第二TCR亚基的细胞内结构域)。在一些实施例中，嵌合受体多肽从N-末端到C-末端包含以下(或基本上由其组成或由其组成)：任选的信号肽-细胞外TCR结合结构域(例如，scFv、sdAb、或VHH，如抗CD3 scFv或sdAb、或抗TCR scFv)-第一接头(例如，GS接头)-(细胞外靶标结合结构域的VHH1(如第一抗BCMA sdAb)-第三接头(例如，GS接头)-细胞外靶标结合结构域的VHH2(如第二抗BCMA sdAb))-第二接头(例如，GS接头)-任选的细胞外铰链结构域(例如，CD8铰链)-跨膜结构域(例如，第一TCR亚基的跨膜结构域)-细胞内结构域(例如，第二TCR亚基的细胞内结构域)。在一些实施例中，嵌合受体多肽从N-末端到C-末端包含以下(或基本上由其组成或由其组成)：任选的信号肽-细胞外靶标结合结构域(例如，scFv、sdAb、VHH、DARPin，如抗BCMA sdAb)-第一接头(例如，GS接头)-(细胞外TCR结合结构域的VHH1(如第一抗CD3 sdAb)-第四接头(例如，GS接头)-细胞外TCR结合结构域的VHH2(如第二抗CD3sdAb))-第二接头(例如，GS接头)-任选的细胞外铰链结构域(例如，CD8铰链)-跨膜结构域(例如，第一TCR亚基的跨膜结构域)-细胞内结构域(例如，第二TCR亚基的细胞内结构域)。在一些实施例中，嵌合受体多肽从N-末端到C-末端包含以下(或基本上由其组成或由其组成)：任选的信号肽-(细胞外TCR结合结构域的VHH1(如第一抗CD3 sdAb)-第四接头(例如，GS接头)-细胞外TCR结合结构域的VHH2(如第二抗CD3 sdAb))-第一接头(例如，GS接头)-细胞外靶标结合结构域(例如，scFv、sdAb、VHH、DARPin，如抗BCMA sdAb)-第二接头(例如，GS接头)-任选的细胞外铰链结构域(例如，CD8铰链)-跨膜结构域(例如，第一TCR亚基的跨膜结构域)-细胞内结构域(例如，第二TCR亚基的细胞内结构域)。在一些实施例中，嵌合受体多肽从N-末端到C-末端包含以下(或基本上由其组成或由其组成)：任选的信号肽-细胞外靶标结合结构域(例如，scFv、sdAb、DARPin，如抗BCMA sdAb)-第一接头(例如，GS接头)-细胞外TCR结合结构域(例如，scFv、sdAb、或VHH，如抗CD3 scFv或sdAb、或抗TCR scFv)-第二接头(例如，GS接头)-细胞外结构域(例如，第三TCR亚基的细胞外结构域，如第三TCR亚基的非信号肽和/或非可变区)-任选的细胞外铰链结构域(例如，CD8铰链)-跨膜结构域(例如，第一TCR亚基的跨膜结构域)-细胞内结构域(例如，第二TCR亚基的细胞内结构域)。在一些实施例中，嵌合受体多肽从N-末端到C-末端包含以下(或基本上由其组成或由其组成)：任选的信号肽-细胞外TCR结合结构域(例如，scFv、sdAb、或VHH，如抗CD3 scFv或sdAb、或抗TCR scFv)-第一接头(例如，GS接头)-细胞外靶标结合结构域(例如，scFv、sdAb、VHH、DARPin，如抗BCMA sdAb)-第二接头(例如，GS接头)-细胞外结构域(例如，第三TCR亚基的细胞外结构域，如第三TCR亚基的非信号肽和/或非可变区)-任选的细胞外铰链结构域(例如，CD8铰链)-跨膜结构域(例如，第一TCR亚基的跨膜结构域)-细胞内结构域(例如，第二TCR亚基的细胞内结构域)。在一些实施例中，嵌合受体多肽从N-末端到C-末端包含以下(或基本上由其组成或由其组成)：任选的信号肽-细胞外靶标结合结构域的VHH1(如第一抗BCMAsdAb)-第三接头(例如，GS接头)-细胞外靶标结合结构域的VHH2(如第二抗BCMAsdAb))-第一接头(例如，GS接头)-细胞外TCR结合结构域(例如，scFv、sdAb、或VHH，如抗CD3scFv或sdAb、或抗TCR scFv)-第二接头(例如，GS接头)-细胞外结构域(例如，第三TCR亚基的细胞外结构域，如第三TCR亚基的非信号肽和/或非可变区)-任选的细胞外铰链结构域(例如，CD8铰链)-跨膜结构域(例如，第一TCR亚基的跨膜结构域)-细胞内结构域(例如，第二TCR亚基的细胞内结构域)。在一些实施例中，嵌合受体多肽从N-末端到C-末端包含以下(或基本上由其组成或由其组成)：任选的信号肽-细胞外TCR结合结构域(例如，scFv、sdAb、或VHH，如抗CD3 scFv或sdAb、或抗TCR scFv)-第一接头(例如，GS接头)-(细胞外靶标结合结构域的VHH1(如第一抗BCMA sdAb)-第三接头(例如，GS接头)-细胞外靶标结合结构域的VHH2(如第二抗BCMA sdAb))-第二接头(例如，GS接头)-细胞外结构域(例如，第三TCR亚基的细胞外结构域，如第三TCR亚基的非信号肽和/或非可变区)-任选的细胞外铰链结构域(例如，CD8铰链)-跨膜结构域(例如，第一TCR亚基的跨膜结构域)-细胞内结构域(例如，第二TCR亚基的细胞内结构域)。在一些实施例中，嵌合受体多肽从N-末端到C-末端包含以下(或基本上由其组成或由其组成)：任选的信号肽-细胞外靶标结合结构域(例如，scFv、sdAb、VHH、DARPin，如抗BCMA sdAb)-第一接头(例如，GS接头)-(细胞外TCR结合结构域的VHH1(如第一抗CD3 sdAb)-第四接头(例如，GS接头)-细胞外TCR结合结构域的VHH2(如第二抗CD3 sdAb))-第二接头(例如，GS接头)-细胞外结构域(例如，第三TCR亚基的细胞外结构域，如第三TCR亚基的非信号肽和/或非可变区)-任选的细胞外铰链结构域(例如，CD8铰链)-跨膜结构域(例如，第一TCR亚基的跨膜结构域)-细胞内结构域(例如，第二TCR亚基的细胞内结构域)。在一些实施例中，嵌合受体多肽从N-末端到C-末端包含以下(或基本上由其组成或由其组成)：任选的信号肽-细胞外TCR结合结构域的VHH1(如第一抗CD3 sdAb)-第四接头(例如，GS接头)-细胞外TCR结合结构域的VHH2(如第二抗CD3 sdAb))-第一接头(例如，GS接头)-细胞外靶标结合结构域(例如，scFv、sdAb、VHH、DARPin，如抗BCMA sdAb)-第二接头(例如，GS接头)-细胞外结构域(例如，第三TCR亚基的细胞外结构域，如第三TCR亚基的非信号肽和/或非可变区)-任选的细胞外铰链结构域(例如，CD8铰链)-跨膜结构域(例如，第一TCR亚基的跨膜结构域)-细胞内结构域(例如，第二TCR亚基的细胞内结构域)。在一些实施例中，嵌合受体多肽从N-末端到C-末端包含以下(或基本上由其组成或由其组成)：任选的信号肽-(细胞外靶标结合结构域的VHH1(如第一抗BCMA sdAb)-第三接头(例如，GS接头)-细胞外靶标结合结构域的VHH2(如第二抗BCMA sdAb))-第一接头(例如，GS接头)-(细胞外TCR结合结构域的VHH1(如第一抗CD3 sdAb)-第四接头(例如，GS接头)-细胞外TCR结合结构域的VHH2(如第二抗CD3 sdAb))-第二接头(例如，GS接头)-任选的细胞外铰链结构域(例如，CD8铰链)-跨膜结构域(例如，第一TCR亚基的跨膜结构域)-细胞内结构域(例如，第二TCR亚基的细胞内结构域)。在一些实施例中，嵌合受体多肽从N-末端到C-末端包含以下(或基本上由其组成或由其组成)：任选的信号肽-(细胞外TCR结合结构域的VHH1(如第一抗CD3 sdAb)-第四接头(例如，GS接头)-细胞外TCR结合结构域的VHH2(如第二抗CD3 sdAb))-第一接头(例如，GS接头)-(细胞外靶标结合结构域的VHH1(如第一抗BCMA sdAb)-第三接头(例如，GS接头)-细胞外靶标结合结构域的VHH2(如第二抗BCMA sdAb))-第二接头(例如，GS接头)-任选的细胞外铰链结构域(例如，CD8铰链)-跨膜结构域(例如，第一TCR亚基的跨膜结构域)-细胞内结构域(例如，第二TCR亚基的细胞内结构域)。在一些实施例中，嵌合受体多肽从N-末端到C-末端包含以下(或基本上由其组成或由其组成)：任选的信号肽-(细胞外靶标结合结构域的VHH1(如第一抗BCMA sdAb)-第三接头(例如，GS接头)-细胞外靶标结合结构域的VHH2(如第二抗BCMA sdAb))-第一接头(例如，GS接头)-(细胞外TCR结合结构域的VHH1(如第一抗CD3 sdAb)-第四接头(例如，GS接头)-细胞外TCR结合结构域的VHH2(如第二抗CD3 sdAb))-第二接头(例如，GS接头)-细胞外结构域(例如，第三TCR亚基的细胞外结构域，如第三TCR亚基的非信号肽和/或非可变区)-任选的细胞外铰链结构域(例如，CD8铰链)-跨膜结构域(例如，第一TCR亚基的跨膜结构域)-细胞内结构域(例如，第二TCR亚基的细胞内结构域)。在一些实施例中，嵌合受体多肽从N-末端到C-末端包含以下(或基本上由其组成或由其组成)：任选的信号肽-(细胞外TCR结合结构域的VHH1(如第一抗CD3 sdAb)-第四接头(例如，GS接头)-细胞外TCR结合结构域的VHH2(如第二抗CD3 sdAb))-第一接头(例如，GS接头)-(细胞外靶标结合结构域的VHH1(如第一抗BCMA sdAb)-第三接头(例如，GS接头)-细胞外靶标结合结构域的VHH2(如第二抗BCMA sdAb))-第二接头(例如，GS接头)-细胞外结构域(例如，第三TCR亚基的细胞外结构域，如第三TCR亚基的非信号肽和/或非可变区)-任选的细胞外铰链结构域(例如，CD8铰链)-跨膜结构域(例如，第一TCR亚基的跨膜结构域)-细胞内结构域(例如，第二TCR亚基的细胞内结构域)。在一些实施例中，第一、第二、和第三TCR亚基相同。在一些实施例中，第一、第二和/或第三TCR亚基不同。第一、第二、第三、和第四接头可以是本文所述的任一接头。在一些实施例中，第一、第二、第三、和/或第四接头是GS接头、α-螺旋接头、甘氨酸-丙氨酸聚合物接头、丙氨酸-丝氨酸聚合物接头、或IgG4-Fc接头。在一些实施例中，第一、第二、第三、和/或第四接头包含SEQ ID NO:1-21、67、和68中任一个的氨基酸序列。

编码嵌合受体多核苷酸的核酸

还考虑了编码本文所述的嵌合受体多肽的核酸分子(如分离的核酸)，下文也称为“编码STS多肽的核酸”或“编码STS的核酸”。本发明还提供了插入本发明的核酸的载体。

例如，在一些实施例中，提供了编码嵌合受体多肽的核酸(例如，分离的核酸)，该嵌合受体多肽包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)包含特异性结合靶抗原(例如，BCMA)的靶抗原结合结构域(如scFv、sdAb、或DARPin)的细胞外靶标结合结构域；b)包含特异性结合TCR亚基的TCR抗原结合结构域(如scFv或sdAb)的细胞外TCR结合结构域(例如，TCR亚基的细胞外结构域，如CD3ε或TCR的细胞外结构域)；c)包含第一TCR亚基的跨膜结构域的跨膜结构域；和d)包含第二TCR亚基的细胞内结构域的细胞内结构域，其中该第一TCR亚基和该第二TCR亚基均选自由以下组成的组：CD3ε、CD3γ、CD3δ、TCRα、TCRβ、TCRγ、和TCRδ。在一些实施例中，提供了编码嵌合受体多肽的核酸(例如，分离的核酸)，该嵌合受体多肽从N’到C’包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)任选的信号肽；b)包含特异性结合靶抗原(例如，BCMA)的靶抗原结合结构域(如scFv、sdAb、或DARPin)的细胞外靶标结合结构域；c)任选的第一接头(例如，GS接头)，d)包含特异性结合TCR亚基的TCR抗原结合结构域(如scFv或sdAb)的细胞外TCR结合结构域(例如，TCR亚基的细胞外结构域，如CD3ε或TCR的细胞外结构域)；e)任选的第二接头(例如，GS接头)；f)第三TCR亚基的任选的细胞外结构域(例如，第三TCR亚基的非信号肽和/或非可变区)；g)任选的铰链区(例如，CD8铰链)；h)包含第一TCR亚基的跨膜结构域的跨膜结构域；和i)包含第二TCR亚基的细胞内结构域的细胞内结构域，其中该第一、第二、和第三TCR亚基均选自由以下组成的组：CD3ε、CD3γ、CD3δ、TCRα、TCRβ、TCRγ、和TCRδ。在一些实施例中，提供了编码嵌合受体多肽的核酸(例如，分离的核酸)，该嵌合受体多肽从N’到C’包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)任选的信号肽；b)包含特异性结合TCR亚基的TCR抗原结合结构域(如scFv或sdAb)的细胞外TCR结合结构域(例如，TCR亚基的细胞外结构域，如CD3ε或TCR的细胞外结构域)；c)任选的第一接头(例如，GS接头)，d)包含特异性结合靶抗原(例如，BCMA)的靶抗原结合结构域(如scFv、sdAb、或DARPin)的细胞外靶标结合结构域；e)任选的第二接头(例如，GS接头)；f)第三TCR亚基的任选的细胞外结构域(例如，第三TCR亚基的非信号肽和/或非可变区)；g)任选的铰链区(例如，CD8铰链)；h)包含第一TCR亚基的跨膜结构域的跨膜结构域；和i)包含第二TCR亚基的细胞内结构域的细胞内结构域，其中该第一、第二、和第三TCR亚基均选自由以下组成的组：CD3ε、CD3γ、CD3δ、TCRα、TCRβ、TCRγ、和TCRδ。在一些实施例中，细胞外TCR结合结构域包含串联排列的两个或更多个TCR抗原结合结构域(例如，scFv或sdAb)。在一些实施例中，细胞外靶标结合结构域包含串联排列的两个或更多个靶抗原结合结构域(例如，scFv、sdAb、或DARPin)。在一些实施例中，第一、第二、和第三TCR亚基均相同。在一些实施例中，第一、第二和/或第三TCR亚基不同。在一些实施例中，提供了编码嵌合受体多肽的核酸(例如，分离的核酸)，该嵌合受体多肽包含(或基本上由以下或由以下组成)SEQ ID NO:43-48、51-58、和61-63中任一个的氨基酸序列。

在一些实施例中，提供了包含本文所述的任一核酸的载体(如病毒载体，例如，慢病毒载体)。在一些实施例中，该载体包含两个或更多个(如两个)本文所述的任一核酸。在一些实施例中，两个核酸各自具有单独的启动子(可以是相同或不同的)。在一些实施例中，两个核酸在相同的启动子(例如hEF1α)下调节。在一些实施例中，两个或更多个(如两个)编码STS的核酸通过一个或多个连接序列(如编码P2A、T2A、E2A、F2A、BmCPV 2A、和BmIFV 2A的任一核酸)和内部核糖体进入位点(IRES)序列连接。因此，在一些实施例中，提供了载体(如病毒载体，例如，慢病毒载体)，其包含a)启动子；b)编码第一嵌合受体多肽的第一核酸；c)连接序列(例如，IRES、或编码P2A、T2A、E2A、F2A、BmCPV 2A、和BmIFV 2A中任一个的核酸)；和d)编码第二嵌合受体多肽的第二核酸；其中该第一嵌合受体多肽包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)包含特异性结合第一靶抗原(例如，BCMA)的第一靶抗原结合结构域(如scFv、sdAb、或DARPin)的第一细胞外靶标结合结构域；b)包含特异性结合第五TCR亚基的第一TCR抗原结合结构域(如scFv或sdAb)的第一细胞外TCR结合结构域(例如，第五TCR亚基的细胞外结构域，如CD3ε或TCR的细胞外结构域)；c)包含第一TCR亚基的跨膜结构域的第一跨膜结构域；和d)包含第二TCR亚基的细胞内结构域的第一细胞内结构域，其中该第一TCR亚基和该第二TCR亚基均选自由以下组成的组：CD3ε、CD3γ、CD3δ、TCRα、TCRβ、TCRγ、和TCRδ；其中该第二嵌合受体多肽包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)包含特异性结合第二靶抗原(例如，BCMA)的第二靶抗原结合结构域(如scFv、sdAb、或DARPin)的第二细胞外靶标结合结构域；b)包含特异性结合第六TCR亚基的第二TCR抗原结合结构域(如scFv或sdAb)的第二细胞外TCR结合结构域(例如，第六TCR亚基的细胞外结构域，如CD3ε或TCR的细胞外结构域)；c)包含第三TCR亚基的跨膜结构域的第二跨膜结构域；和d)包含第四TCR亚基的细胞内结构域的第二细胞内结构域，其中该第三TCR亚基和该第四TCR亚基均选自由以下组成的组：CD3ε、CD3γ、CD3δ、TCRα、TCRβ、TCRγ、和TCRδ。在一些实施例中，第一嵌合受体多肽和第二嵌合受体多肽具有相同的结构域排列(例如，细胞外靶标结合结构域均处于细胞外TCR结合结构域的N-末端，细胞外靶标结合结构域均处于细胞外TCR结合结构域的C-末端，均包含或均不包含TCR亚基的细胞外结构域，和/或均包含或均不包含铰链区)。在一些实施例中，第一嵌合受体多肽和第二嵌合受体多肽具有不同的结构域排列(例如，一种在细胞外TCR结合结构域的N-末端处的细胞外靶标结合结构域并且另一种包含在细胞外TCR结合结构域的C-末端处的细胞外靶标结合结构域，两个嵌合受体多肽具有不同数量的靶抗原结合结构域和/或TCR抗原结合结构域，一种包含TCR亚基的细胞外结构域而另一种不包含，和/或一种包含铰链区而另一种不包含)。因此，在一些实施例中，提供了载体(如病毒载体，例如，慢病毒载体)，其包含a)启动子；b)编码第一嵌合受体多肽的第一核酸；c)连接序列(例如，IRES、或编码P2A、T2A、E2A、F2A、BmCPV 2A、和BmIFV 2A中任一个的核酸)；和d)编码第二嵌合受体多肽的第二核酸；其中该第一嵌合受体多肽从N’到C’包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)任选的第一信号肽；b)包含特异性结合第一靶抗原(例如，BCMA)的第一靶抗原结合结构域(如scFv、sdAb、或DARPin)的第一细胞外靶标结合结构域；c)任选的第一接头(例如，GS接头)；d)包含特异性结合第五TCR亚基的第一TCR抗原结合结构域(如scFv或sdAb)的第一细胞外TCR结合结构域(例如，第五TCR亚基的细胞外结构域，如CD3ε或TCR的细胞外结构域)；e)任选的第二接头(例如，GS接头)；f)第七TCR亚基的任选的细胞外结构域(例如，第七TCR亚基的非信号肽和/或非可变区)；g)任选的第一铰链区(例如，CD8铰链)；h)包含第一TCR亚基的跨膜结构域的第一跨膜结构域；和i)包含第二TCR亚基的细胞内结构域的第一细胞内结构域，其中该第一TCR亚基和该第二TCR亚基均选自由以下组成的组：CD3ε、CD3γ、CD3δ、TCRα、TCRβ、TCRγ、和TCRδ；并且其中该第二嵌合受体多肽从N’到C’包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)任选的第二信号肽；b)包含特异性结合第二靶抗原(例如，BCMA)的第二靶抗原结合结构域(如scFv、sdAb、或DARPin)的第二细胞外靶标结合结构域；c)任选的第三接头(例如，GS接头)；d)包含特异性结合第六TCR亚基的第二TCR抗原结合结构域(如scFv或sdAb)的第二细胞外TCR结合结构域(例如，第六TCR亚基的细胞外结构域，如CD3ε或TCR的细胞外结构域)；e)任选的第四接头(例如，GS接头)；f)第八TCR亚基的任选的细胞外结构域(例如，第八TCR亚基的非信号肽和/或非可变区)；g)任选的第二铰链区(例如，CD8铰链)；h)包含第三TCR亚基的跨膜结构域的第二跨膜结构域；和i)包含第四TCR亚基的细胞内结构域的第二细胞内结构域，其中该第三TCR亚基和该第四TCR亚基均选自由以下组成的组：CD3ε、CD3γ、CD3δ、TCRα、TCRβ、TCRγ、和TCRδ。在一些实施例中，提供了载体(如病毒载体，例如，慢病毒载体)，其包含a)启动子；b)编码第一嵌合受体多肽的第一核酸；c)连接序列(例如，IRES、或编码P2A、T2A、E2A、F2A、BmCPV 2A、和BmIFV 2A中任一个的核酸)；和d)编码第二嵌合受体多肽的第二核酸；其中该第一嵌合受体多肽从N’到C’包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)任选的第一信号肽；b)包含特异性结合第五TCR的第一TCR抗原结合结构域(如scFv或sdAb)的第一细胞外靶标结合结构域(例如，第五TCR亚基的细胞外结构域，如CD3ε或TCR的细胞外结构域)；c)任选的第一接头(例如，GS接头)；d)包含特异性结合第一靶抗原(例如，BCMA)的第一靶抗原结合结构域(如scFv、sdAb、或DARPin)的第一细胞外靶标结合结构域；e)任选的第二接头(例如，GS接头)；f)第七TCR亚基的任选的细胞外结构域(例如，第七TCR亚基的非信号肽和/或非可变区)；g)任选的第一铰链区(例如，CD8铰链)；h)包含第一TCR亚基的跨膜结构域的第一跨膜结构域；和i)包含第二TCR亚基的细胞内结构域的第一细胞内结构域，其中该第一TCR亚基和该第二TCR亚基均选自由以下组成的组：CD3ε、CD3γ、CD3δ、TCRα、TCRβ、TCRγ、和TCRδ；并且其中该第二嵌合受体多肽从N’到C’包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)任选的第二信号肽；b)包含特异性结合第六TCR的第二TCR抗原结合结构域(如scFv或sdAb)的第二细胞外靶标结合结构域(例如，第六TCR亚基的细胞外结构域，如CD3ε或TCR的细胞外结构域)；c)任选的第三接头(例如，GS接头)；d)包含特异性结合第二靶抗原(例如，BCMA)的第二靶抗原结合结构域(如scFv、sdAb、或DARPin)的第二细胞外靶标结合结构域；e)任选的第四接头(例如，GS接头)；f)第八TCR亚基的任选的细胞外结构域(例如，第八TCR亚基的非信号肽和/或非可变区)；g)任选的第二铰链区(例如，CD8铰链)；h)包含第三TCR亚基的跨膜结构域的第二跨膜结构域；和i)包含第四TCR亚基的细胞内结构域的第二细胞内结构域，其中该第三TCR亚基和该第四TCR亚基均选自由以下组成的组：CD3ε、CD3γ、CD3δ、TCRα、TCRβ、TCRγ、和TCRδ。在一些实施例中，第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、和第八TCR亚基相同。在一些实施例中，第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、和/或第八TCR亚基不同。在一些实施例中，第三、第四、和第八TCR亚基相同。在一些实施例中，第一、第二、和第七TCR亚基相同。在一些实施例中，第三、第四、和第八TCR亚基相同(例如，TCRα)，并且第三、第四、和第八TCR亚基相同(例如，TCRβ)，但第三、第四、和第八TCR亚基与第三、第四、和第八TCR亚基不同。在一些实施例中，第三、第四、和第八TCR亚基是TCRα，并且第三、第四、和第八TCR亚基是TCRβ。在一些实施例中，第三、第四、和第八TCR亚基是TCRγ，并且第三、第四、和第八TCR亚基是TCRδ。在一些实施例中，第一、第二、第三、和第四接头相同。在一些实施例中，第一、第二、第三、和/或第四接头不同。在一些实施例中，第一、第二、第三、和第四接头选自GS接头、α-螺旋接头、甘氨酸-丙氨酸聚合物接头、丙氨酸-丝氨酸聚合物接头、和IgG4-Fc接头。在一些实施例中，第一、第二、第三、和第四接头选自由SEQ ID NO:1-21、67、和68组成的组。在一些实施例中，第一和第二TCR抗原结合结构域相同。在一些实施例中，第一和第二TCR抗原结合结构域不同。在一些实施例中，第一和/或第二TCR抗原结合结构域是包含SEQ ID NO:22或23的氨基酸序列的抗CD3 sdAb。在一些实施例中，第一和/或第二TCR抗原结合结构域是包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的抗CD3scFv。在一些实施例中，第一和/或第二TCR抗原结合结构域是包含SEQ ID NO:27的氨基酸序列的抗TCR scFv。在一些实施例中，第一和第二靶抗原结合结构域相同。在一些实施例中，第一和第二靶抗原结合结构域不同。在一些实施例中，第一和/或第二靶抗原结合结构域是特异性结合BCMA的sdAb，如PCT/CN2016/094408和PCT/CN2017/096938中所披露的任一抗BCMA sdAb。在一些实施例中，第一和/或第二靶抗原结合结构域是包含SEQ ID NO:26的氨基酸序列的抗BCMA sdAb。

在一些实施例中，提供了载体(如病毒载体，例如，慢病毒载体)，其包含编码多肽的核酸，其中该多肽从N-末端到C-末端包含(或基本上由以下或由以下组成)：任选的第一信号肽-第一抗BCMA sdAb(例如，SEQ ID NO:26)-第一接头(例如，GS接头)-第一抗CD3scFv(例如，SEQ ID NO:24)-第二接头(例如，GS接头)-TCRα恒定区-TCRα跨膜结构域-TCRα细胞内结构域-P2A-任选的第二信号肽-第二抗BCMA sdAb(例如，SEQ ID NO:26)-第三接头(例如，GS接头)-第二抗CD3 scFv(例如，SEQ ID NO:24)-第四接头(例如，GS接头)-TCRβ恒定区-TCRβ跨膜结构域-TCRβ细胞内结构域。在一些实施例中，提供了载体(如病毒载体，例如，慢病毒载体)，其包含编码多肽的核酸，其中该多肽从N-末端到C-末端包含(或基本上由以下或由以下组成)：任选的第一信号肽-第一抗BCMA sdAb(例如，SEQ ID NO：26)-第一接头(例如，GS接头)-第一抗CD3 scFv(例如，SEQ ID NO：24)-第二接头(例如，GS接头)-TCRα跨膜结构域-TCRα细胞内结构域-P2A-任选的第二信号肽-第二抗BCMA sdAb(例如，SEQ IDNO：26)-第三接头(例如，GS接头)-第二抗CD3 scFv(例如，SEQ ID NO:24)-第四接头(例如，GS接头)-TCRβ跨膜结构域-TCRβ细胞内结构域。在一些实施例中，提供了载体(如病毒载体，例如，慢病毒载体)，其包含编码多肽的核酸，其中该多肽从N-末端到C-末端包含(或基本上由以下或由以下组成)：任选的第一信号肽-第一抗BCMA sdAb(例如，SEQ ID NO:26)-第一接头(例如，GS接头)-第一抗CD3 scFv(例如，SEQ ID NO:24)-第二接头(例如，GS接头)-TCRγ恒定区-TCRγ跨膜结构域-TCRγ细胞内结构域-P2A-任选的第二信号肽-第二抗BCMAsdAb(例如，SEQ ID NO：26)-第三接头(例如，GS接头)-第二抗CD3 scFv(例如，SEQ ID NO:24)-第四接头(例如，GS接头)-TCRδ恒定区-TCRδ跨膜结构域-TCRδ细胞内结构域。在一些实施例中，提供了载体(如病毒载体，例如，慢病毒载体)，其包含编码多肽的核酸，其中该多肽从N-末端到C-末端包含(或基本上由以下或由以下组成)：任选的第一信号肽-第一抗BCMAsdAb(例如，SEQ ID NO:26)-第一接头(例如，GS接头)-第一抗CD3 scFv(例如，SEQ ID NO:24)-第二接头(例如，GS接头)-TCRγ跨膜结构域-TCRγ细胞内结构域-P2A-任选的第二信号肽-第二抗BCMA sdAb(例如，SEQ ID NO:26)-第三接头(例如，GS接头)-第二抗CD3 scFv(例如，SEQ ID NO：24)-第四接头(例如，GS接头)-TCRδ跨膜结构域-TCRδ细胞内结构域。在一些实施例中，提供了载体(如病毒载体，例如，慢病毒载体)，其包含编码多肽的核酸，其中该多肽从N-末端到C-末端包含(或基本上由以下或由以下组成)：任选的第一信号肽-第一抗BCMA sdAb(例如，SEQ ID NO:26)-第一接头(例如，GS接头)-第一抗TCR scFv(例如，SEQID NO:27)-第二接头(例如，GS接头)-TCRα恒定区-TCRα跨膜结构域-TCRα细胞内结构域-P2A-任选的第二信号肽-第二抗BCMA sdAb(例如，SEQ ID NO:26)-第三接头(例如，GS接头)-第二抗TCR scFv(例如，SEQ ID NO:27)-第四接头(例如，GS接头)-TCRβ恒定区-TCRβ跨膜结构域-TCRβ细胞内结构域。在一些实施例中，提供了载体(如病毒载体，例如，慢病毒载体)，其包含编码多肽的核酸，其中该多肽从N-末端到C-末端包含(或基本上由以下或由以下组成)：任选的第一信号肽-第一抗BCMA sdAb(例如，SEQ ID NO：26)-第一接头(例如，GS接头)-第一抗TCR scFv(例如，SEQ ID NO:27)-第二接头(例如，GS接头)-TCRα跨膜结构域-TCRα细胞内结构域-P2A-任选的第二信号肽-第二抗BCMA sdAb(例如，SEQ ID NO:26)-第三接头(例如，GS接头)-第二抗TCR scFv(例如，SEQ ID NO:27)-第四接头(例如，GS接头)-TCRβ跨膜结构域-TCRβ细胞内结构域。在一些实施例中，提供了载体(如病毒载体，例如，慢病毒载体)，其包含编码多肽的核酸，其中该多肽从N-末端到C-末端包含(或基本上由以下或由以下组成)：任选的第一信号肽-第一抗BCMA sdAb(例如，SEQ ID NO:26)-第一接头(例如，GS接头)-第一抗TCR scFv(例如，SEQ ID NO:27)-第二接头(例如，GS接头)-TCRγ恒定区-TCRγ跨膜结构域-TCRγ细胞内结构域-P2A-任选的第二信号肽-第二抗BCMA sdAb(例如，SEQ ID NO:26)-第三接头(例如，GS接头)-第二抗TCR scFv(例如，SEQ ID NO:27)-第四接头(例如，GS接头)-TCRδ恒定区-TCRδ跨膜结构域-TCRδ细胞内结构域。在一些实施例中，提供了载体(如病毒载体，例如，慢病毒载体)，其包含编码多肽的核酸，其中该多肽从N-末端到C-末端包含(或基本上由以下或由以下组成)：任选的第一信号肽-第一抗BCMA sdAb(例如，SEQ ID NO:26)-第一接头(例如，GS接头)-第一抗TCR scFv(例如，SEQ ID NO:27)-第二接头(例如，GS接头)-TCRγ跨膜结构域-TCRγ细胞内结构域-P2A-任选的第二信号肽-第二抗BCMA sdAb(例如，SEQ ID NO:26)-第三接头(例如，GS接头)-第二抗TCR scFv(例如，SEQID NO:27)-第四接头(例如，GS接头)-TCRδ跨膜结构域-TCRδ细胞内结构域。在一些实施例中，第一、第二、第三、和/或第四接头不同。在一些实施例中，第一、第二、第三、和第四接头选自GS接头、α-螺旋接头、甘氨酸-丙氨酸聚合物接头、丙氨酸-丝氨酸聚合物接头、和IgG4-Fc接头。在一些实施例中，第一、第二、第三、和第四接头选自由SEQ ID NO:1-21、67、和68组成的组。在一些实施例中，第一和第二抗CD3 scFv相同。在一些实施例中，第一和第二抗CD3scFv不同。在一些实施例中，第一和第二抗TCR scFv相同。在一些实施例中，第一和第二抗TCR scFv不同。在一些实施例中，第一和/或第二抗CD3 scFv包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列。在一些实施例中，第一和/或第二抗TCR scFv包含SEQ ID NO:27的氨基酸序列。在一些实施例中，第一和第二抗BCMA sdAb相同。在一些实施例中，第一和第二抗BCMA sdAb不同。在一些实施例中，第一和/或第二抗BCMA sdAb是PCT/CN2016/094408和PCT/CN2017/096938中所披露的任一抗BCMA sdAb。在一些实施例中，第一和/或第二靶抗BCMA sdAb包含SEQ IDNO：26的氨基酸序列。

简而言之，通过编码嵌合受体多肽的核酸表达嵌合受体多肽可以通过将核酸插入适当的表达载体来实现，这样核酸与5'和3'调控元件可操作地连接，包括例如启动子(如淋巴细胞特异性启动子)和3'非翻译区(UTR)。这些载体可以适合于在真核宿主细胞中复制和整合。典型的克隆和表达载体含有转录和翻译终止子、启动序列、以及用于调控所希望的核酸序列的表达的启动子。

可以将核酸克隆至许多类型的载体中。例如，可以将核酸克隆到载体中，该载体包括但不限于质粒、噬菌粒、噬菌体衍生物、动物病毒和粘粒。特别感兴趣的载体包括表达载体、复制载体、探针生成载体和测序载体。

此外，可以将表达载体以病毒载体的形式提供至细胞。病毒载体技术是本领域熟知的并且描述于例如Sambrook等人(2001,Molecular Cloning：A Laboratory Manual,Cold Spring Harbor Laboratory,New York)，以及其他病毒学和分子生物学手册中。可用作载体的病毒包括但不限于逆转录病毒、腺病毒、腺相关病毒、疱疹病毒、和慢病毒。通常，合适的载体含有在至少一种生物体中起作用的复制起点、启动子序列、方便的限制性内切核酸酶位点、和一种或多种选择标记(参见例如，WO 01/96584；WO 01/29058；和美国专利号6,326,193)。

已经开发了用于将基因转移到哺乳动物细胞中的许多基于病毒的系统。例如，逆转录病毒为基因递送系统提供了便利的平台。使用本领域已知的技术可以将选择的基因插入载体并包装在逆转录病毒颗粒中。然后可以将重组病毒可以分离，并体内或离体递送到受试者的细胞中。许多逆转录病毒系统是本领域已知的。在一些实施例中，使用腺病毒载体。许多腺病毒载体是本领域已知的。在一些实施例中，使用慢病毒载体。来源于逆转录病毒(如慢病毒)的载体是实现长期基因转移的合适工具，因为它们允许转基因的长期、稳定整合及其在子细胞中的繁殖。慢病毒载体比来源于癌逆转录病毒(如鼠白血病病毒)的载体具有更多的优势，因为它们可以转导非增殖细胞(如肝细胞)。它们还具有低免疫原性的另外的优势。在一些实施例中，慢病毒载体是基于H1V-1的慢病毒载体，如pLVX-Puro或其修饰的慢病毒载体。

另外的启动子型元件调节转录启动的频率。典型地，这些位于起始位点上游30-110bp的区域，尽管最近已经显示许多启动子也包含起始位点下游的功能元件。启动子元件之间的间隔通常是灵活的，使得当元件相对于彼此反向或移动时能保持启动子功能。在胸苷激酶(tk)启动子中，启动子元件之间的间隔可以在活性开始下降之前增加至50bp。取决于启动子，似乎单个元件可以协同或独立地起作用以激活转录。

合适的启动子的一个实例是即早期巨细胞病毒(CMV)启动子序列。该启动子序列是强组成型启动子序列，能够驱动与其可操作连接的任何多核苷酸序列的高水平表达。合适的启动子的另一个实例是延伸生长因子-1α(EF-1α)。然而，也可以使用其他组成型启动子序列，包括但不限于猿猴病毒40(SV40)早期启动子、小鼠乳房肿瘤病毒(MMTV)、人免疫缺陷病毒(HIV)长末端重复(LTR)启动子、MoMuLV启动子、禽类白血病病毒启动子、EB病毒即早期启动子、劳斯肉瘤病毒启动子、以及人基因启动子，如但不限于肌动蛋白启动子、肌球蛋白启动子、血红蛋白启动子、和肌酸激酶启动子。在许多研究中，已经广泛地比较了此类组成型启动子对驱动转基因表达的效率。例如，Michael C.Milone等人比较了CMV、hEF1α、UbiC和PGK驱动初级人类T细胞中嵌合受体表达的效率，并得出结论，hEF1α启动子不仅诱导了最高水平的转基因表达，并且最优地维持在CD4和CD8人T细胞中(Molecular Therapy,17(8)：1453-1464(2009))。

诱导型启动子也被认为是本发明的一部分。诱导型启动子的使用提供了分子开关，能够在需要表达时打开与其可操作连接的多核苷酸序列的表达，或在不需要表达时关闭该表达。用于在真核细胞中使用的示例性诱导型启动子系统包括但不限于，激素调控元件、合成配体调控元件和电离辐射调控元件。用于在哺乳动物系统体外或体内中使用的另外的示例性诱导型启动子系统综述于Gingrich等人(1998)Annual Rev.Neurosci 21：377-405。

用于在本发明中使用的示例性诱导型启动子系统是Tet系统。在示例性实施例，目的多核苷酸在包含一个或多个Tet操纵子(TetO)位点的启动子的控制下。在非活性状态下，Tet阻遏物(TetR)将与TetO位点结合并抑制启动子的转录。在活性状态下，例如在诱导剂如四环素(Tc)、脱水四环素、多西环素(Dox)、或其活性类似物的存在下，诱导剂引起TetR从TetO中释放，从而使转录发生。多西环素是抗生素的四环素家族的成员，其化学名称为1-二甲基氨基-2,4a,5,7,12-五羟基-11-甲基-4,6-二氧代-1,4a,11,11a,12,12a-六氢并四苯-3-甲酰胺。

在一个实施例中，TetR经密码子优化以在哺乳动物细胞(例如，鼠或人细胞)中表达。由于遗传密码的简并性，大多数氨基酸由多于一个的密码子编码，从而使给定核酸的核苷酸序列发生重大的变化，而由核酸编码的氨基酸序列不发生任何改变。然而，许多生物体在密码子使用上显示出差异，也称为“密码子偏倚”(即，对于给定氨基酸使用一种或多种特定密码子的偏倚)。密码子偏倚通常与特定密码子中tRNA的主要种类的存在有关，这反过来又增加了mRNA翻译的效率。因此，通过密码子优化可以定制来源于特定生物体(例如，原核生物)的编码序列，以改善在不同生物体(例如，真核生物)中的表达。

Tet系统的其他特定变化包括以下“Tet-Off”和“Tet-On”系统。在Tet-Off系统中，在Tc或Dox的存在下，转录是不活跃的。在该系统中，四环素控制的反式激活因子蛋白(tTA)由与单纯疱疹病毒VP16的强反式激活结构域融合的TetR组成，该蛋白调节受四环素应答启动子元件(TRE)转录控制的靶核酸的表达。TRE是由TetO序列多联体与启动子(通常是来源于人巨细胞病毒(hCMV)即时早期启动子的最小启动子序列)融合而成的。在没有Tc或Dox的情况下，tTA与TRE结合并激活靶基因的转录。在Tc或Dox存在的情况下，tTA不能与TRE结合，并且靶基因的表达仍然没有活性。

相反，在Tet-On系统中，在Tc或Dox的存在下，转录是活跃的。Tet-On系统基于反向四环素控制的反式激活因子rtTA。与tTA一样，rtTA是由TetR阻遏物和VP16反式激活结构域组成的融合蛋白。然而，TetR DNA结合部分中四个氨基酸的变化改变了rtTA的结合特性，使其只能在Dox存在的情况下识别靶转基因的TRE中的tetO序列。因此，在Tet-On系统中，仅在Dox存在的情况下，rtTA才会刺激TRE调节的靶基因的转录。

另一个诱导型启动子系统是来自大肠杆菌的lac阻遏物系统(参见，Brown等人,Cell 49:603-612(1987))。lac阻遏物系统通过调节与包含lac操纵子(lacO)的启动子可操作连接的目的多核苷酸的转录而发挥作用。lac阻遏物(lacR)与LacO结合，从而阻止目的多核苷酸的转录。通过合适的诱导剂，例如异丙基-β-D-硫代半乳吡喃糖苷(IPTG)，诱导目的多核苷酸的表达。

增强子最初作为遗传元件检测到，这些遗传元件增加了位于同一DNA分子远处的启动子的转录。在原核转录调控的经典研究中，这种在大距离内起作用的能力几乎没有先例。随后的工作表明，具有增强子活性的DNA区域如启动子一样组织。也就是说，它们由许多单独的元件组成，每个元件都与一个或多个转录蛋白结合。

为了评估多肽或其部分的表达，要引入细胞的表达载体也可以含有可选择的标记基因或报道基因或两者，以促进从寻求通过病毒载体转染或感染的细胞群中识别和选择表达细胞。在其他方面，可选择的标记可以携带在分离的DNA上，并用于共转染过程。可选择的标记和报道基因都可以侧接适当的调控序列，以在宿主细胞中表达。有用的可选择的标记包括，例如，抗生素抗性基因，如neo等。

报道基因用于识别潜在的转染细胞和评估调控序列的功能。通常，报道基因是在受体生物体或组织中不存在或不表达的基因，该报道基因编码多肽，该多肽的表达通过一些易于检测的特性(例如，酶活性)来表现。报道基因的表达在DNA被引入受体细胞后的合适的时间检测。合适的报道基因可以包括编码荧光素酶、β-半乳糖苷酶、氯霉素乙酰基转移酶、分泌型碱性磷酸酶、或绿色荧光蛋白基因的基因。合适的表达系统是熟知的，并且可以使用已知技术制备或从商业上获得。通常，显示出报道基因的最高表达水平的具有最小5′侧翼区域的构建体被鉴定为启动子。此类启动子区域可与报道基因连接，并用于评估药剂调节启动子驱动的转录能力。

在一些实施例中，提供了编码根据本文所述的任一嵌合受体多肽的嵌合受体多肽的核酸(例如，分离的核酸)。表达可以在mRNA或蛋白水平上确定。mRNA表达水平可以通过使用各种众所周知的方法，包括RNA印迹法、定量RT-PCR、微阵列分析等测量从核酸转录的mRNA的量来确定。可以通过已知方法测量蛋白质表达，这些方法包括免疫细胞化学染色、酶联免疫吸附测定(ELISA)、蛋白质印迹分析、发光测定法、质谱法、高效液相色谱法、高压液相色谱法-串联质谱法等。

在一些实施例中，提供了载体(如慢病毒载体)，其包含编码根据本文所述的任一嵌合受体多肽的嵌合受体多肽的核酸、包含可操作连接编码嵌合受体多肽的核酸序列的启动子。在一些实施例中，该启动子是诱导型的。在一些实施例中，该启动子是组成型的。在一些实施例中，该启动子是hEF1α或巨细胞病毒即早期启动子(P

在一些实施例中，提供了载体(如慢病毒载体)，其包含编码根据本文所述的任一嵌合受体多肽的嵌合受体多肽的第一核酸和编码嵌合抗原受体(CAR)或工程化的TCR的第二核酸。在一些实施例中，提供了载体(如慢病毒载体)，其包含编码根据本文所述的任一嵌合受体多肽的第一嵌合受体多肽的第一核酸和编码根据本文所述的任一嵌合抗原受体多肽的第二嵌合受体多肽的第二核酸。在一些实施例中，两个核酸各自具有单独的启动子。在一些实施例中，两个核酸受相同的启动子(如诱导型启动子)控制，并且两个核酸通过连接序列连接。在一些实施例中，该连接序列编码自切割2A肽，如P2A、T2A、E2A、F2A、BmCPV 2A、BmIFV 2A。在一些实施例中，该连接序列编码P2A肽(例如，包含SEQ ID NO:66)或T2A肽。在一些实施例中，该连接序列是内部核糖体进入位点(IRES)。IRES是允许以cap-自主方式进行翻译启动的RNA元件。在一些实施例中，该启动子是诱导型的。在一些实施例中，该启动子是组成型的(例如，hEF1α)。在一些实施例中，编码根据本文所述的任一嵌合受体多肽的嵌合受体多肽的第一核酸和编码嵌合抗原受体(CAR)或工程化的TCR的第二核酸在分开的载体上。在一些实施例中，编码根据本文所述的任一嵌合受体多肽的第一嵌合受体多肽的第一核酸和编码根据本文所述的任一嵌合受体多肽的第二嵌合受体多肽的第二核酸在分开的载体上。

将基因引入并表达到细胞中的方法在本领域中是已知的。在表达载体的背景下，该载体可以通过本领域的任何方法容易地引入宿主细胞，例如哺乳动物、细菌、酵母或昆虫细胞。例如，表达载体可以通过物理、化学或生物手段转移到宿主细胞中。

将多核苷酸引入宿主细胞的物理方法包括磷酸钙沉淀、脂质转染、粒子轰击、显微注射、电穿孔等。产生含有载体和/或外源核酸的细胞的方法是本领域熟知的。在一些实施例中，将多核苷酸引入宿主细胞是通过磷酸钙转染进行的。

将目的多核苷酸引入宿主细胞的生物方法包括使用DNA和RNA载体。病毒载体，特别是逆转录病毒载体，已经成为将基因插入哺乳动物(例如，人细胞)的最广泛使用的方法。其他病毒载体可来源于慢病毒、痘病毒、单纯疱疹病毒1、腺病毒和腺相关的病毒等。参见，例如，美国专利号5,350,674和5,585,362。

用于将多核苷酸引入宿主细胞的化学方法包括胶体分散系统，例如大分子复合物、纳米胶囊、微球、珠、和基于脂质的系统，包括水包油乳剂、胶束、混合胶束和脂质体。用作体外和体内递送媒介物的示例性胶体系统是脂质体(例如人造膜囊泡)。

在一些实施例中，载体是非病毒载体。在一些实施例中，载体是转座子，如睡美人(SB)转座子系统、或PiggyBac转座子系统。在一些实施例中，载体是基于聚合物的非病毒载体，该聚合物包括例如，聚(乳酸-乙醇酸共聚物)(PLGA)和聚乳酸(PLA)、聚(乙烯亚胺)(PEI)、和树状聚合物。在一些实施例中，载体是基于阳离子脂质的非病毒载体，该阳离子脂质如阳离子脂质体、脂质纳米乳剂、和固体脂质纳米颗粒(SLN)。在一些实施例中，载体是基于肽的基因非病毒载体，如聚-L-赖氨酸。适用于基因组编辑的任一已知非病毒载体都可用于将本文所述的核酸引入免疫细胞(例如，T细胞)。参见，例如，Yin H.等人NatureRev.Genetics(2014)15:521-555；Aronovich EL等人“The Sleeping Beauty transposonsystem:a non-viral vector for gene therapy.”Hum.Mol.Genet.(2011)R1:R14-20；和Zhao S.等人“PiggyBac transposon vectors:the tools of the human gene editing.”Transl.Lung Cancer Res.(2016)5(1):120-125，其内容通过援引并入本文。在一些实施例中，将编码本文所述的任一嵌合受体多肽的核酸通过物理方法引入免疫细胞(例如，T细胞)，该方法包括但不限于电穿孔、声孔效应、光穿孔、磁转染、水穿孔(hydroporation)。

在使用非病毒递送系统的情况下，示例性递送媒介物是脂质体。考虑使用脂质配制品将核酸引入宿主细胞(体外、离体或体内)。在另一方面，核酸可与脂质相关。可以将与脂质缔合的核酸包封在脂质体的含水内部、散布在脂质体的脂质双层、经由与脂质体和寡核苷酸二者缔合的连接分子附接至脂质体、捕获在脂质体中、与脂质体复合、分散在含有脂质的溶液中、与脂质混合、与脂质合并、作为脂质中的悬浮液而含有、含有微团或与微团复合、或以其他方式与脂质缔合。脂质、脂质/DNA或脂质/表达载体相关的组合物不限于溶液中的任何特定结构。例如，它们可能以双层结构、微团或“折叠”结构存在。它们也可以简单地散布在溶液中，可能形成大小或形状不均匀的聚集体。脂质是可能是天然存在的或合成的脂质的脂肪性物质。例如，脂质包括天然存在于细胞质中的脂肪滴，以及含有长链脂族烃及其衍生物的一类化合物，如脂肪酸、乙醇、胺、氨基醇和醛。

在一些实施例中，睡美人转座子系统用作非病毒载体。将睡美人转座子系统进行工程化设计，使得DNA转座子精确地将定义的DNA序列几乎随机地插入宿主基因组中，从而增加了基因表达的寿命(即使经过多代)。此外，转座避免了形成多个串联整合，而这些串联整合往往导致转基因的表达关闭。Aronovich等人(April2011).“The Sleeping Beautytransposon system：a non-viral vector for gene therapy”.Hum Mol Genet.20(R1)：R14-R20。

在一些实施例中，PiggyBac(PB)转座子系统用作非病毒载体。PB转座子系统通过“剪切和粘贴”机制在载体和染色体之间进行转座。在转座过程中，PB转座酶识别位于转座子载体两端的转座子特异性倒末端重复(ITR)序列，并将内容物从其原来的位置移出，整合到TTAA染色体位点。

可以进行多种测定以确认宿主细胞中重组DNA序列的存在。此类测定包括例如本领域技术人员熟知的“分子生物学”测定，如DNA印迹法和RNA印迹法、RT-PCR和PCR；“生物化学”测定，如例如通过免疫学方法(ELISA和蛋白质印迹)或通过本文所述的测定来检测特定肽的存在或不存在，以确定属于本发明范围的药剂。

表达嵌合受体多肽(STS多肽)的免疫细胞

在一些实施例中，提供了在其表面表达根据本文所述的任一嵌合受体多肽的嵌合受体多肽的免疫细胞、或工程化的哺乳动物免疫细胞(如T细胞)，下文也称为“STS-免疫细胞”或“STS-T细胞”。在一些实施例中，免疫细胞(如T细胞)包含两个或更过个嵌合受体多肽。在一些实施例中，免疫细胞(例如，T细胞)包含编码本文所述的任一嵌合受体多肽的核酸(或其载体)，其中该嵌合受体多肽从核酸中表达并定位到免疫细胞表面。在一些实施例中，免疫细胞(如T细胞)在其细胞表面进一步表达CAR或工程化的TCR。在一些实施例中，免疫细胞(如T细胞)进一步包含编码CAR或工程化的TCR的第二核酸(在与编码嵌合受体多肽的核酸相同的载体上、或在不同的载体上)。在一些实施例中，本文所述的嵌合受体多肽不影响工程化的免疫细胞(例如，T细胞)的内源TCR复合物(例如，内源TCRα/β和/或CD3表达)的表达。

用于本发明的示例性免疫细胞包括但不限于，树突状细胞(包括不成熟的树突状细胞和成熟的树突状细胞)、T淋巴细胞(如天然T细胞、效应T细胞、记忆T细胞、细胞毒性T淋巴细胞、辅助T细胞、自然杀伤T细胞、Treg细胞、肿瘤浸润淋巴细胞(TIL))、单核细胞、粒细胞、及其组合。免疫细胞的亚群可以通过本领域已知的一种或多种细胞表面标志物(例如，CD3、CD4、CD8、CD19、CD20、CD11c、CD123、CD56、CD34、CD14、CD33等)的存在或缺失来定义。在一些实施例中，免疫细胞选自由以下组成的组：Tαβ细胞、Tγδ细胞、效应T细胞、记忆T细胞、细胞毒性T细胞、辅助T细胞、自然杀伤T细胞、Treg细胞、肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)。在一些实施例中，免疫细胞是效应T细胞。

“免疫效应细胞”是指能发挥免疫效应子功能的免疫细胞。在一些实施例中，该免疫效应细胞至少表达FcγRIII，并且发挥ADCC效应子功能。介导ADCC的免疫效应细胞的实例包括外周血单核细胞(PBMC)、自然杀伤(NK)细胞、单核细胞、细胞毒性T细胞、中性粒细胞、和嗜酸性粒细胞。

在一些实施例中，免疫细胞是T细胞。在一些实施例中，这些T细胞事CD4+/CD8-、CD4-/CD8+、CD4+/CD8+、CD4-/CD8-、或其组合。在一些实施例中，T细胞在表达嵌合受体多肽并结合到靶细胞(如CD20+或CD19+肿瘤细胞)时产生IL-2、TFN、和/或TNF。在一些实施例中，CD8+ T细胞在表达嵌合受体多肽并结合到靶细胞时裂解抗原特异性靶细胞。在一些实施例中，免疫细胞选自由以下组成的组：细胞毒性T细胞、辅助T细胞、自然杀伤T(NKT)细胞、和抑制因子T细胞。

在一些实施例中，免疫细胞(例如，免疫效应细胞)是从干细胞(如造血干细胞、多能干细胞、iPS、或胚胎干细胞)分化而来的。

通过将本文所述的任一嵌合受体多肽(和/或另外的CAR/工程化的TCR)引入免疫细胞(如T细胞)来制备工程化的免疫细胞(例如，免疫效应细胞)。在一些实施例中，通过转染本文所述的任一分离的核酸或任一载体，将本文所述的嵌合受体多肽(和/或另外的CAR/工程化的TCR)引入免疫细胞(例如，免疫效应细胞(如T细胞))。在一些实施例中，编码本文所述的任一嵌合受体多肽的核酸和编码CAR/工程化的TCR的核酸在分开的载体上。在一些实施例中，编码本文所述的任一嵌合受体多肽的核酸和编码CAR/工程化的TCR的核酸在相同的载体上。在一些实施例中，编码本文所述的任一嵌合受体多肽的核酸和编码CAR/工程化的TCR的核酸在不同的启动子下调节。在一些实施例中，编码本文所述的任一嵌合受体多肽的核酸和编码CAR/工程化的TCR的核酸在相同的启动子下调节。在一些实施例中，通过将蛋白质插入细胞膜而将本文所述的嵌合受体多肽(和/或另外的CAR/工程化的TCR)引入免疫细胞(例如，免疫效应细胞(如T细胞))，同时使细胞通过微流体系统，如CELL

将基因引入并表达到细胞中的方法在本领域中是已知的。在表达载体的背景下，该载体可以通过本领域的任何方法容易地引入宿主细胞，例如哺乳动物、细菌、酵母或昆虫细胞。例如，表达载体可以通过物理、化学或生物手段转移到宿主细胞中。

在药物组合物包含多个工程化的哺乳动物免疫细胞(例如，T细胞)的情况下，该工程化的哺乳动物免疫细胞可以是免疫细胞类型的特定亚群、免疫细胞类型的亚群组合、或两种或更多种免疫细胞类型的组合。在一些实施例中，免疫细胞存在于同质细胞群中。在一些实施例中，免疫细胞存在于富含该免疫细胞的异质细胞群中。在一些实施例中，工程化的哺乳动物细胞是淋巴细胞。在一些实施例中，工程化的哺乳动物细胞不是淋巴细胞。在一些实施例中，工程化的哺乳动物细胞适合于采用免疫疗法。在一些实施例中，工程化的哺乳动物细胞是PBMC。在一些实施例中，工程化的哺乳动物细胞是来源于PBMC的免疫细胞。在一些实施例中，工程化的哺乳动物细胞是T细胞。在一些实施例中，工程化的哺乳动物细胞是CD4+T细胞。在一些实施例中，工程化的哺乳动物细胞是CD8+ T细胞。

在一些实施例中，免疫细胞是T细胞。在一些实施例中，免疫细胞选自由以下组成的组：细胞毒性T细胞、辅助T细胞、自然杀伤T细胞、和抑制因子T细胞。在一些实施例中，免疫细胞被修饰以阻断或降低嵌合受体多肽所来自的一个或两个内源TCR亚基(如TCRα、TCRβ、TCRγ、TCRδ、CD3ε、CD3γ和CD3δ)的表达。修饰细胞以破坏基因表达包括本领域已知的任何此类技术，包括例如RNA干扰(例如，siRNA、shRNA、miRNA)、基因编辑(例如，基于CRISPR-或TALEN的基因敲除)等。

本文所述的免疫细胞(例如，T细胞)可以包含任何数量(如1、2、3、4、5、10、50、100、1000、或更多中的任一个)的编码嵌合受体多肽的核酸。在一些实施例中，免疫细胞包含核酸的单拷贝。在一些实施例中，免疫细胞包含核酸的多个拷贝。在一些实施例中，免疫细胞包含各自编码不同的嵌合受体多肽的两个或更多个核酸。这些不同的嵌合受体多肽克存在于相同的TCR复合物中。可替代地，将这些不同的嵌合受体多肽各自并入不同的TCR复合物。

本文所述的核酸可以存在于异源基因表达盒中，该表达盒包含一个或多个编码蛋白质的序列和任选地一个或多个启动子。在一些实施例中，该异源基因表达盒包含单个编码蛋白质的序列。在一些实施例中，该异源基因表达盒包含由单个启动子(即，多顺反子)驱动的两个或更多个编码蛋白质的序列。在一些实施例中，该异源基因表达盒进一步包含一个或多个调控序列(如5’UTR、3’UTR、增强子序列、IRES、转录终止序列)、重组位点、一种或多种选择标记(如抗生素抗性基因、报道基因等)、信号序列、或其组合。在一些实施例中，编码嵌合受体多肽的核酸进一步包含用于分泌的信号序列的编码序列(例如，信号肽)。

核酸可以瞬时或稳定地整合在免疫细胞(例如，T细胞)中。在一些实施例中，核酸在免疫细胞中瞬时表达。例如，核酸可以存在于包含异源基因表达盒的染色体外阵列中的免疫细胞的细胞核中。使用本领域已知的任何转染或转导方法(包括病毒或非病毒方法)，将异源核酸引入免疫细胞。示例性非病毒转染方法包括但不限于基于化学的转染，如使用磷酸钙、树状聚合物、脂质体、或阳离子聚合物(例如，DEAE-葡聚糖或聚乙烯亚胺)；非化学方法，如电穿孔、细胞挤压、声孔效应、光学转染、刺穿染、原生质体融合、水动力递送、或转座子；基于粒子的方法，如使用基因枪、磁连接或磁辅助转染、粒子轰击；和混合方法，如核转染。在一些实施例中，核酸是DNA。在一些实施例中，核酸是RNA。在一些实施例中，核酸是线性的。在一些实施例中，核酸是环状的。

在一些实施例中，本文所述的核酸存在于免疫细胞(例如，T细胞)的基因组中。例如，通过本领域已知的任何方法，可以将核酸整合到免疫细胞的基因组中，这些方法包括但不限于病毒介导的整合、随机整合、同源重组方法、和定点整合方法，如使用位点特异性重组酶或整合酶、转座酶、转录激活因子样效应物核酸酶

在一些实施例中，免疫细胞(例如，T细胞)包含两个或更多个(如2、3、4、5、或更多个)嵌合受体多肽。在一些实施例中，两个或更多个嵌合受体多肽相同。在一些实施例中，两个或更多个嵌合受体多肽彼此不同。不同的嵌合受体多肽可以在以下一个或多个结构域中彼此不同：a)细胞外靶标结合结构域；b)细胞外TCR结合结构域；c)跨膜结构域；和d)细胞内结构域。不同的嵌合受体多肽还可以在以下中彼此不同：连接细胞外靶标结合结构域和细胞外TCR结合结构域的任选的接头、连接细胞外靶标结合结构域(或如果处于细胞外靶标结合结构域的C-末端时，是细胞外TCR结合结构域)与跨膜结构域的任选的接头、任选地存在的TCR亚基的细胞外结构域、或任选地存在的铰链区。可以将两个或更多的嵌合受体多肽可以掺入单个TCR复合物中，或各自独立地合掺入不同的TCR复合物中。

例如，在一些实施例中，提供了在其表面表达本文所述的任一嵌合受体多肽的免疫细胞(如T细胞)。在一些实施例中，提供了包含编码根据本文所述的任一嵌合受体多肽的嵌合受体多肽的核酸的免疫细胞(如T细胞)，其中该嵌合受体多肽从核酸中表达并定位到免疫细胞表面。

在一些实施例中，提供了在其表面上表达嵌合受体多肽的免疫细胞(例如，T细胞)，其中该嵌合受体多肽包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)细胞外靶标结合结构域(例如，抗BCMA sdAb)；b)细胞外TCR结合结构域(例如，抗CD3 scFv或sdAb、或抗TCR scFv)；c)跨膜结构域；和d)包含TCR亚基的细胞内结构域的细胞内结构域，其中该TCR亚基选自由以下组成的组：CD3ε、CD3γ、CD3δ、TCRα、TCRβ、TCRγ、和TCRδ。在一些实施例中，提供了包含编码嵌合受体多肽的核酸的免疫细胞(例如，T细胞)，其中该嵌合受体多肽包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)细胞外靶标结合结构域(例如，抗BCMA sdAb)；b)细胞外TCR结合结构域(例如，抗CD3 scFv或sdAb、或抗TCR scFv)；c)跨膜结构域；和d)包含TCR亚基的细胞内结构域的细胞内结构域，其中该TCR亚基选自由以下组成的组：CD3ε、CD3γ、CD3δ、TCRα、TCRβ、TCRγ、和TCRδ。在一些实施例中，免疫细胞包含两个或更多个(如2、3、4、5、或更多个)嵌合受体多肽。在一些实施例中，两个或更多个嵌合受体多肽彼此不同。

在一些实施例中，提供了在其表面上表达嵌合受体多肽的免疫细胞(例如，T细胞)，其中该嵌合受体多肽包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)细胞外靶标结合结构域(例如，抗BCMA sdAb)；b)细胞外TCR结合结构域(例如，抗CD3 scFv或sdAb、或抗TCR scFv)；和c)包含TCR亚基的跨膜结构域的跨膜结构域，其中该TCR亚基选自由以下组成的组：CD3ε、CD3γ、CD3δ、TCRα、TCRβ、TCRγ、和TCRδ。在一些实施例中，提供了包含编码嵌合受体多肽的核酸的免疫细胞(例如，T细胞)，其中该嵌合受体多肽包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)细胞外靶标结合结构域(例如，抗BCMA sdAb)；b)细胞外TCR结合结构域(例如，抗CD3scFv或sdAb、或抗TCR scFv)；和c)包含TCR亚基的跨膜结构域的跨膜结构域，其中该TCR亚基选自由以下组成的组：CD3ε、CD3γ、CD3δ、TCRα、TCRβ、TCRγ、和TCRδ。在一些实施例中，免疫细胞包含两个或更多个(如2、3、4、5、或更多个)嵌合受体多肽。在一些实施例中，两个或更多个嵌合受体多肽彼此不同。

在一些实施例中，提供了在其表面上表达嵌合受体多肽的免疫细胞(如T细胞)，其中该嵌合受体多肽包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)细胞外靶标结合结构域(例如，抗BCMA sdAb)；b)细胞外TCR结合结构域(例如，抗CD3 scFv或sdAb、或抗TCR scFv)；和c)包含TCR亚基的跨膜结构域的跨膜结构域，其中该TCR亚基选自由以下组成的组：CD3ε、CD3γ、CD3δ、TCRα、TCRβ、TCRγ、和TCRδ，和d)细胞内结构域。在一些实施例中，提供了包含编码嵌合受体多肽的核酸的免疫细胞(如T细胞)，其中该嵌合受体多肽包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)细胞外靶标结合结构域(例如，抗BCMA sdAb)；b)细胞外TCR结合结构域(例如，抗CD3 scFv或sdAb、或抗TCR scFv)；和c)包含TCR亚基的跨膜结构域的跨膜结构域，其中该TCR亚基选自由以下组成的组：CD3ε、CD3γ、CD3δ、TCRα、TCRβ、TCRγ、和TCRδ，和d)细胞内结构域。在一些实施例中，免疫细胞包含两个或更多个(如2、3、4、5、或更多个)嵌合受体多肽。在一些实施例中，两个或更多个嵌合受体多肽彼此不同。

在一些实施例中，提供了在其表面上表达嵌合受体多肽的免疫细胞(如T细胞)，其中该嵌合受体多肽包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)细胞外靶标结合结构域(例如，抗BCMA sdAb)；b)细胞外TCR结合结构域(例如，抗CD3 scFv或sdAb、或抗TCR scFv)；c)包含第一TCR亚基的跨膜结构域的跨膜结构域；和d)包含第二TCR亚基的细胞内结构域的细胞内结构域，其中该第一TCR亚基和该第二TCR亚基均选自由以下组成的组：CD3ε、CD3γ、CD3δ、TCRα、TCRβ、TCRγ、和TCRδ。在一些实施例中，提供了包含编码嵌合受体多肽的核酸的免疫细胞(如T细胞)，其中该嵌合受体多肽包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)细胞外靶标结合结构域(例如，抗BCMA sdAb)；b)细胞外TCR结合结构域(例如，抗CD3 scFv或sdAb、或抗TCR scFv)；c)包含第一TCR亚基的跨膜结构域的跨膜结构域；和d)包含第二TCR亚基的细胞内结构域的细胞内结构域，其中该第一TCR亚基和该第二TCR亚基均选自由以下组成的组：CD3ε、CD3γ、CD3δ、TCRα、TCRβ、TCRγ、和TCRδ。在一些实施例中，免疫细胞包含两个或更多个(如2、3、4、5、或更多个)嵌合受体多肽。在一些实施例中，两个或更多个嵌合受体多肽彼此不同。在一些实施例中，第一TCR亚基是CD3ε和/或第二TCR亚基是CD3ε。在一些实施例中，第一TCR亚基是CD3γ和/或第二TCR亚基是CD3γ。在一些实施例中，第一TCR亚基是CD3δ和/或第二TCR亚基是CD3δ。在一些实施例中，第一TCR亚基是TCRα和/或第二TCR亚基是TCRα。在一些实施例中，第一TCR亚基是TCRβ和/或第二TCR亚基是TCRβ。在一些实施例中，第一TCR亚基是TCRγ和/或第二TCR亚基是TCRγ。在一些实施例中，第一TCR亚基是TCRδ和/或第二TCR亚基是TCRδ。在一些实施例中，第一TCR亚基和第二TCR亚基相同。在一些实施例中，第一TCR亚基和第二TCR亚基均选自由以下组成的组：TCRα、TCRβ、TCRγ、和TCRδ，并且嵌合受体多肽不包含该第一TCR亚基或该第二TCR亚基的细胞外结构域的可变区。在一些实施例中，嵌合受体多肽不包含TCRα、TCRβ、TCRγ、和TCRδ中任一个的细胞外结构域的可变区。在一些实施例中，第一TCR亚基和第二TCR亚基不同。在一些实施例中，嵌合受体多肽不包含第一和/或第二TCR亚基的细胞外结构域。在一些实施例中，嵌合受体多肽不包含任何TCR亚基的细胞外结构域。在一些实施例中，嵌合受体多肽不包含细胞内共刺激结构域。在一些实施例中，嵌合受体多肽进一步包含在嵌合受体多肽的N-末端处的信号肽。在一些实施例中，细胞外靶标结合结构域在细胞外TCR结合结构域的N-末端。在一些实施例中，细胞外靶标结合结构域在细胞外TCR结合结构域的C-末端。在一些实施例中，嵌合受体多肽进一步包含与细胞外区域上嵌合受体多肽的跨膜结构域相邻的铰链区(例如，CD8铰链区)。在一些实施例中，细胞外TCR结合结构域包含串联排列的两个或更多个TCR抗原结合结构域(例如，scFv或sdAb)。在一些实施例中，细胞外靶标结合结构域包含串联排列的两个或更多个靶抗原结合结构域(例如，scFv、sdAb、或DARPin)。在一些实施例中，免疫细胞包含两个或更多个(如2、3、4、5、或更多个)嵌合受体多肽。在一些实施例中，两个或更多个嵌合受体多肽彼此不同。在一些实施例中，嵌合受体多肽包含细胞外靶标结合结构域和细胞外TCR结合结构域之间的接头。在一些实施例中，嵌合受体多肽包含细胞外靶标结合结构域(或细胞外TCR结合结构域)和跨膜结构域之间的接头。在一些实施例中，接头是GS接头、α-螺旋接头、甘氨酸-丙氨酸聚合物接头、丙氨酸-丝氨酸聚合物接头、或IgG4-Fc接头。在一些实施例中，接头选自由SEQ ID NO:1-21、67和68组成的组。

在一些实施例中，提供了在其表面上表达嵌合受体多肽的免疫细胞(如T细胞)，其中该嵌合受体多肽包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)包含特异性结合靶抗原(例如，BCMA)的靶抗原结合结构域(如scFv、sdAb、DARPin)的细胞外靶标结合结构域；b)包含特异性结合TCR亚基的TCR抗原结合结构域(如scFv或sdAb)的细胞外TCR结合结构域(例如，TCR亚基的细胞外结构域，如CD3ε或TCR的细胞外结构域)；c)包含第一TCR亚基的跨膜结构域的跨膜结构域；和d)包含第二TCR亚基的细胞内结构域的细胞内结构域，其中该第一TCR亚基和该第二TCR亚基均选自由以下组成的组：CD3ε、CD3γ、CD3δ、TCRα、TCRβ、TCRγ、和TCRδ。在一些实施例中，提供了包含编码嵌合受体多肽的核酸的免疫细胞(如T细胞)，其中该嵌合受体多肽包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)包含特异性结合靶抗原(例如，BCMA)的靶抗原结合结构域(如scFv、sdAb、DARPin)的细胞外靶标结合结构域；b)包含特异性结合TCR亚基的TCR抗原结合结构域(如scFv或sdAb)的细胞外TCR结合结构域(例如，TCR亚基的细胞外结构域，如CD3ε或TCR的细胞外结构域)；c)包含第一TCR亚基的跨膜结构域的跨膜结构域；和d)包含第二TCR亚基的细胞内结构域的细胞内结构域，其中该第一TCR亚基和该第二TCR亚基均选自由以下组成的组：CD3ε、CD3γ、CD3δ、TCRα、TCRβ、TCRγ、和TCRδ。在一些实施例中，免疫细胞包含两个或更多个(如2、3、4、5、或更多个)嵌合受体多肽。在一些实施例中，两个或更多个嵌合受体多肽彼此不同。在一些实施例中，靶抗原结合结构域是特异性结合BCMA的sdAb，如PCT/CN2016/094408和PCT/CN2017/096938中所披露的任一抗BCMA sdAb。在一些实施例中，抗BCMA sdAb包含PCT/CN2016/094408和PCT/CN2017/096938中所披露的任一抗BCMA sdAb的氨基酸序列的CDR1、CDR2、和CDR3。在一些实施例中，抗BCMA sdAb包含SEQID NO:26的氨基酸序列。在一些实施例中，抗BCMA sdAb包含SEQ ID NO:26的氨基酸序列的CDR1、CDR2、和CDR3。在一些实施例中，嵌合受体多肽包含细胞外靶标结合结构域和细胞外TCR结合结构域之间的接头。在一些实施例中，嵌合受体多肽包含细胞外靶标结合结构域(或细胞外TCR结合结构域)和跨膜结构域之间的接头。在一些实施例中，接头是GS接头、α-螺旋接头、甘氨酸-丙氨酸聚合物接头、丙氨酸-丝氨酸聚合物接头、或IgG4-Fc接头。在一些实施例中，接头选自由SEQ ID NO：1-21、67和68组成的组。

在一些实施例中，提供了在其表面上表达嵌合受体多肽的免疫细胞(如T细胞)，其中该嵌合受体多肽包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)细胞外靶标结合结构域(例如识别靶抗原(如BCMA)的scFv、sdAb、DARPin)；b)包含特异性结合CD3(如CD3ε，例如CD3ε的N-末端)或TCR(如TCRγ/δ，例如TCRγ/δ的恒定区)的TCR抗原结合结构域(如scFv或sdAb)的细胞外TCR结合结构域；c)包含CD3ε的跨膜结构域的跨膜结构域；和d)包含CD3ε的细胞内结构域的细胞内结构域。在一些实施例中，提供了包含编码嵌合受体多肽的核酸的免疫细胞(如T细胞)，其中该嵌合受体多肽包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)细胞外靶标结合结构域(例如识别靶抗原(如BCMA)的scFv、sdAb、DARPin)；b)包含特异性结合CD3(如CD3ε，例如CD3ε的N-末端)或TCR(如TCRγ/δ，例如TCRγ/δ的恒定区)的TCR抗原结合结构域(如scFv或sdAb)的细胞外TCR结合结构域；c)包含CD3ε的跨膜结构域的跨膜结构域；和d)包含CD3ε的细胞内结构域的细胞内结构域。在一些实施例中，嵌合受体多肽不包含CD3ε的细胞外结构域。在一些实施例中，嵌合受体多肽不包含任何TCR亚基的细胞外结构域。在一些实施例中，提供了在其表面上表达嵌合受体多肽的免疫细胞(如T细胞)，其中该嵌合受体多肽包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)细胞外靶标结合结构域(例如识别靶抗原(如BCMA)的scFv、sdAb、DARPin)；b)包含特异性结合CD3(如CD3ε，例如CD3ε的N-末端)或TCR(如TCRγ/δ，例如TCRγ/δ的恒定区)的TCR抗原结合结构域(如scFv或sdAb)的细胞外TCR结合结构域；c)包含CD3γ的跨膜结构域的跨膜结构域；和d)包含CD3γ的细胞内结构域的细胞内结构域。在一些实施例中，提供了包含编码嵌合受体多肽的核酸的免疫细胞(如T细胞)，其中该嵌合受体多肽包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)细胞外靶标结合结构域(例如识别靶抗原(如BCMA)的scFv、sdAb、DARPin)；b)包含特异性结合CD3(如CD3ε，例如CD3ε的N-末端)或TCR(如TCRγ/δ，例如TCRγ/δ的恒定区)的抗原结合结构域(如scFv或sdAb)的细胞外TCR结合结构域；c)包含CD3γ的跨膜结构域的跨膜结构域；和d)包含CD3γ的细胞内结构域的细胞内结构域。在一些实施例中，嵌合受体多肽不包含CD3γ的细胞外结构域。在一些实施例中，嵌合受体多肽不包含任何TCR亚基的细胞外结构域。在一些实施例中，提供了在其表面上表达嵌合受体多肽的免疫细胞(如T细胞)，其中该嵌合受体多肽包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)细胞外靶标结合结构域(例如识别靶抗原(如BCMA)的scFv、sdAb、DARPin)；b)包含特异性结合CD3(如CD3ε，例如CD3ε的N-末端)或TCR(如TCRγ/δ，例如TCRγ/δ的恒定区)的TCR抗原结合结构域(如scFv或sdAb)的细胞外TCR结合结构域；c)包含CD3δ的跨膜结构域的跨膜结构域；和d)包含CD3δ的细胞内结构域的细胞内结构域。在一些实施例中，提供了包含编码嵌合受体多肽的核酸的免疫细胞(如T细胞)，其中该嵌合受体多肽包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)细胞外靶标结合结构域(例如识别靶抗原(如BCMA)的scFv、sdAb、DARPin)；b)包含特异性结合CD3(如CD3ε，例如CD3ε的N-末端)或TCR(如TCRγ/δ，例如TCRγ/δ的恒定区)的TCR抗原结合结构域(如scFv或sdAb)的细胞外TCR结合结构域；c)包含CD3δ的跨膜结构域的跨膜结构域；和d)包含CD3δ的细胞内结构域的细胞内结构域。在一些实施例中，嵌合受体多肽不包含CD3δ的细胞外结构域。在一些实施例中，嵌合受体多肽不包含任何TCR亚基的细胞外结构域。在一些实施例中，提供了在其表面上表达嵌合受体多肽的免疫细胞(如T细胞)，其中该嵌合受体多肽包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)细胞外靶标结合结构域(例如识别靶抗原(如BCMA)的scFv、sdAb、DARPin)；b)包含特异性结合CD3(如CD3ε，例如CD3ε的N-末端)或TCR(如TCRγ/δ，例如TCRγ/δ的恒定区)的TCR抗原结合结构域(如scFv或sdAb)的细胞外TCR结合结构域；c)包含TCRα的跨膜结构域的跨膜结构域；和d)包含TCRα的细胞内结构域的细胞内结构域。在一些实施例中，提供了包含编码嵌合受体多肽的核酸的免疫细胞(如T细胞)，其中该嵌合受体多肽包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)细胞外靶标结合结构域(例如识别靶抗原(如BCMA)的scFv、sdAb、DARPin)；b)包含特异性结合CD3(如CD3ε，例如CD3ε的N-末端)或TCR(如TCRγ/δ，例如TCRγ/δ的恒定区)的TCR抗原结合结构域(如scFv或sdAb)的细胞外TCR结合结构域；c)包含TCRα的跨膜结构域的跨膜结构域；和d)包含TCRα的细胞内结构域的细胞内结构域。在一些实施例中，嵌合受体多肽不包含TCRα的细胞外结构域的可变区。在一些实施例中，嵌合受体多肽不包含TCRα的细胞外结构域。在一些实施例中，嵌合受体多肽不包含任何TCR亚基的细胞外结构域。在一些实施例中，提供了在其表面上表达嵌合受体多肽的免疫细胞(如T细胞)，其中该嵌合受体多肽包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)细胞外靶标结合结构域(例如识别靶抗原(如BCMA)的scFv、sdAb、DARPin)；b)包含特异性结合CD3(如CD3ε，例如CD3ε的N-末端)或TCR(如TCRγ/δ，例如TCRγ/δ的恒定区)的TCR抗原结合结构域(如scFv或sdAb)的细胞外TCR结合结构域；c)包含TCRβ的跨膜结构域的跨膜结构域；和d)包含TCRβ的细胞内结构域的细胞内结构域。在一些实施例中，提供了包含编码嵌合受体多肽的核酸的免疫细胞(如T细胞)，其中该嵌合受体多肽包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)细胞外靶标结合结构域(例如识别靶抗原(如BCMA)的scFv、sdAb、DARPin)；b)包含特异性结合CD3(如CD3ε，例如CD3ε的N-末端)或TCR(如TCRγ/δ，例如TCRγ/δ的恒定区)的TCR抗原结合结构域(如scFv或sdAb)的细胞外TCR结合结构域；c)包含TCRβ的跨膜结构域的跨膜结构域；和d)包含TCRβ的细胞内结构域的细胞内结构域。在一些实施例中，嵌合受体多肽不包含TCRβ的细胞外结构域的可变区。在一些实施例中，嵌合受体多肽不包含TCRβ的细胞外结构域。在一些实施例中，嵌合受体多肽不包含任何TCR亚基的细胞外结构域。在一些实施例中，提供了在其表面上表达嵌合受体多肽的免疫细胞(如T细胞)，其中该嵌合受体多肽包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)细胞外靶标结合结构域(例如识别靶抗原(如BCMA)的scFv、sdAb、DARPin)；b)包含特异性结合CD3(如CD3ε，例如CD3ε的N-末端)或TCR(如TCRγ/δ，例如TCRγ/δ的恒定区)的TCR抗原结合结构域(如scFv或sdAb)的细胞外TCR结合结构域；c)包含TCRγ的跨膜结构域的跨膜结构域；和d)包含TCRγ的细胞内结构域的细胞内结构域。在一些实施例中，提供了包含编码嵌合受体多肽的核酸的免疫细胞(如T细胞)，其中该嵌合受体多肽包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)细胞外靶标结合结构域(例如识别靶抗原(如BCMA)的scFv、sdAb、DARPin)；b)包含特异性结合CD3(如CD3ε，例如CD3ε的N-末端)或TCR(如TCRγ/δ，例如TCRγ/δ的恒定区)的TCR抗原结合结构域(如scFv或sdAb)的细胞外TCR结合结构域；c)包含TCRγ的跨膜结构域的跨膜结构域；和d)包含TCRγ的细胞内结构域的细胞内结构域。在一些实施例中，嵌合受体多肽不包含TCRγ的细胞外结构域的可变区。在一些实施例中，嵌合受体多肽不包含TCRγ的细胞外结构域。在一些实施例中，嵌合受体多肽不包含任何TCR亚基的细胞外结构域。在一些实施例中，提供了在其表面上表达嵌合受体多肽的免疫细胞(如T细胞)，其中该嵌合受体多肽包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)细胞外靶标结合结构域(例如识别靶抗原(如BCMA)的scFv、sdAb、DARPin)；b)包含特异性结合CD3(如CD3ε，例如CD3ε的N-末端)或TCR(如TCRγ/δ，例如TCRγ/δ的恒定区)的TCR抗原结合结构域(如scFv或sdAb)的细胞外TCR结合结构域；c)包含TCRδ的跨膜结构域的跨膜结构域；和d)包含TCRδ的细胞内结构域的细胞内结构域。在一些实施例中，提供了包含编码嵌合受体多肽的核酸的免疫细胞(如T细胞)，其中该嵌合受体多肽包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)细胞外靶标结合结构域(例如识别靶抗原(如BCMA)的scFv、sdAb、DARPin)；b)包含特异性结合CD3(如CD3ε，例如CD3ε的N-末端)或TCR(如TCRγ/δ，例如TCRγ/δ的恒定区)的TCR抗原结合结构域(如scFv或sdAb)的细胞外TCR结合结构域；c)包含TCRδ的跨膜结构域的跨膜结构域；和d)包含TCRδ的细胞内结构域的细胞内结构域。在一些实施例中，嵌合受体多肽不包含TCRδ的细胞外结构域的可变区。在一些实施例中，嵌合受体多肽不包含TCRδ的细胞外结构域。在一些实施例中，嵌合受体多肽不包含任何TCR亚基的细胞外结构域。在一些实施例中，嵌合受体多肽不包含细胞内共刺激结构域。在一些实施例中，细胞外靶标结合结构域在细胞外TCR结合结构域的N-末端。在一些实施例中，细胞外靶标结合结构域在细胞外TCR结合结构域的C-末端。在一些实施例中，嵌合受体多肽进一步包含在嵌合受体多肽的N-末端处的信号肽。在一些实施例中，免疫细胞包含两个或更多个(如2、3、4、5、或更多个)嵌合受体多肽。在一些实施例中，两个或更多个嵌合受体多肽彼此不同。在一些实施例中，靶抗原结合结构域是特异性结合BCMA的sdAb，如PCT/CN2016/094408和PCT/CN2017/096938中所披露的任一抗BCMA sdAb。在一些实施例中，抗BCMA sdAb包含SEQ ID NO:26的氨基酸序列。在一些实施例中，抗BCMA sdAb包含SEQ ID NO：26的氨基酸序列的CDR1、CDR2、和CDR3。在一些实施例中，TCR抗原结合结构域(例如，scFv、sdAb)特异性结合CD3ε(例如，CD3ε的N-末端)。在一些实施例中，TCR抗原结合结构域是包含SEQ ID NO:22或23的氨基酸序列的抗CD3 sdAb。在一些实施例中，TCR抗原结合结构域是包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的抗CD3 scFv。在一些实施例中，TCR抗原结合结构域是包含SEQ ID NO:22或23的氨基酸序列的CDR1、CDR2、和CDR3的抗CD3 sdAb。在一些实施例中，TCR抗原结合结构域是包含SEQ ID NO：24的氨基酸序列的HC-CDR 1-3和LC-CDR 1-3的抗CD3 scFv。在一些实施例中，TCR抗原结合结构域(例如，scFv、sdAb)特异性结合TCRγ/δ(例如，TCRγ/δ的恒定区)。在一些实施例中，TCR抗原结合结构域是包含SEQ ID NO:27的氨基酸序列的抗TCR scFv。在一些实施例中，TCR抗原结合结构域是包含SEQ ID NO:27的氨基酸序列的HC-CDR 1-3和LC-CDR 1-3的抗TCR scFv。在一些实施例中，细胞外TCR结合结构域包含串联排列的两个或更多个TCR抗原结合结构域(例如，scFv或sdAb)。在一些实施例中，细胞外靶标结合结构域包含串联排列的两个或更多个靶抗原结合结构域(例如，scFv、sdAb、或DARPin)。在一些实施例中，嵌合受体多肽进一步包含与细胞外区域上嵌合受体多肽的跨膜结构域相邻的铰链区(例如，CD8铰链区)。在一些实施例中，嵌合受体多肽包含细胞外靶标结合结构域和细胞外TCR结合结构域之间的接头。在一些实施例中，嵌合受体多肽包含细胞外靶标结合结构域(或细胞外TCR结合结构域)和跨膜结构域之间的接头。在一些实施例中，接头是GS接头、α-螺旋接头、甘氨酸-丙氨酸聚合物接头、丙氨酸-丝氨酸聚合物接头、或IgG4-Fc接头。在一些实施例中，接头选自由SEQ ID NO:1-21、67和68组成的组。

在一些实施例中，提供了在其表面上表达嵌合受体多肽的免疫细胞，其中该嵌合受体多肽包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)包含各自特异性结合靶抗原(如BCMA)的两个或更多个(如两个)靶抗原结合结构域(如scFv、sdAb、DARPin)的细胞外靶标结合结构域；b)包含特异性结合CD3(如CD3ε，例如CD3ε的N-末端)或TCR(如TCRγ/δ，例如TCRγ/δ的恒定区)的TCR抗原结合结构域(如scFv或sdAb)的细胞外TCR结合结构域；c)包含CD3ε(或CD3γ或CD3δ)的跨膜结构域的跨膜结构域；和d)包含CD3ε(或CD3γ或CD3δ)的细胞内结构域的细胞内结构域。在一些实施例中，提供了包含编码嵌合受体多肽的核酸的免疫细胞，其中该嵌合受体多肽包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)包含各自特异性结合靶抗原(如BCMA)的两个或更多个(如两个)靶抗原结合结构域(如scFv、sdAb、DARPin)的细胞外靶标结合结构域；b)包含特异性结合CD3(如CD3ε，例如CD3ε的N-末端)或TCR(如TCRγ/δ，例如TCRγ/δ的恒定区)的TCR抗原结合结构域(如scFv或sdAb)的细胞外TCR结合结构域；c)包含CD3ε(或CD3γ或CD3δ)的跨膜结构域的跨膜结构域；和d)包含CD3ε(或CD3γ或CD3δ)的细胞内结构域的细胞内结构域。在一些实施例中，嵌合受体多肽不包含任何TCR亚基的细胞外结构域。在一些实施例中，嵌合受体多肽不包含CD3ε、CD3γ、或CD3δ的细胞外结构域。在一些实施例中，提供了在其表面上表达嵌合受体多肽的免疫细胞，其中该嵌合受体多肽包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)包含各自特异性结合靶抗原(如BCMA)的两个或更多个(如两个)靶抗原结合结构域(如scFv、sdAb、DARPin)的细胞外靶标结合结构域；b)包含特异性结合CD3(如CD3ε，例如CD3ε的N-末端)或TCR(如TCRγ/δ，例如TCRγ/δ的恒定区)的TCR抗原结合结构域(如scFv或sdAb)的细胞外TCR结合结构域；c)包含TCRα(或TCRβ或TCRγ或TCRδ)的跨膜结构域的跨膜结构域；和d)包含TCRα(或TCRβ或TCRγ或TCRδ)的细胞内结构域的细胞内结构域。在一些实施例中，提供了包含编码嵌合受体多肽的核酸的免疫细胞，其中该嵌合受体多肽包含(或基本上由以下或由以下组成)：a)包含各自特异性结合靶抗原(如BCMA)的两个或更多个(如两个)靶抗原结合结构域(如scFv、sdAb、DARPin)的细胞外靶标结合结构域；b)包含特异性结合CD3(如CD3ε，例如CD3ε的N-末端)或TCR(如TCRγ/δ，例如TCRγ/δ的恒定区)的TCR抗原结合结构域(如scFv或sdAb)的细胞外TCR结合结构域；c)包含TCRα(或TCRβ或TCRγ或TCRδ)的跨膜结构域的跨膜结构域；和d)包含TCRα(或TCRβ或TCRγ或TCRδ)的细胞内结构域的细胞内结构域。在一些实施例中，嵌合受体多肽不包含TCRα、TCRβ、TCRγ、或TCRδ的细胞外结构域的可变区。在一些实施例中，嵌合受体多肽不包含TCRα、TCRβ、TCRγ、或TCRδ的细胞外结构域。在一些实施例中，嵌合受体多肽不包含任何TCR亚基的细胞外结构域。在一些实施例中，两个或更多个靶抗原结合结构域与同一抗原或抗原上的同一表位结合。在一些实施例中，两个或更多个靶抗原结合结构域与同一抗原(如BCMA)上的不同的表位结合。在一些实施例中，两个或更多个靶抗原结合结构域与不同的抗原结合。在一些实施例中，两个或更多个靶抗原结合结构域相同。在一些实施例中，两个或更多个靶抗原结合结构域不同。在一些实施例中，嵌合受体多肽不包含细胞内共刺激结构域。在一些实施例中，细胞外靶标结合结构域在细胞外TCR结合结构域的N-末端。在一些实施例中，细胞外靶标结合结构域在细胞外TCR结合结构域的C-末端。在一些实施例中，嵌合受体多肽进一步包含在嵌合受体多肽的N-末端处的信号肽。在一些实施例中，嵌合受体多肽包含细胞外靶标结合结构域和细胞外TCR结合结构域之间的接头。在一些实施例中，嵌合受体多肽包含细胞外靶标结合结构域(或细胞外TCR结合结构域)和跨膜结构域之间的接头。在一些实施例中，两个或更多个靶抗原结合结构域(例如，scFv、sdAb、或DARPin)是串联排列的。在一些实施例中，嵌合受体多肽包含细胞外靶标结合结构域内的两个或更多个靶抗原结合结构域(例如，scFv、sdAb、DARPin)之间的接头。在一些实施例中，接头是GS接头、α-螺旋接头、甘氨酸-丙氨酸聚合物接头、丙氨酸-丝氨酸聚合物接头、或IgG4-Fc接头。在一些实施例中，接头选自由SEQ ID NO:1-21、67和68组成的组。在一些实施例中，细胞外TCR结合结构域包含串联排列的两个或更多个TCR抗原结合结构域(例如，scFv或sdAb)。在一些实施例中，嵌合受体多肽进一步包含与细胞外侧上嵌合受体多肽的跨膜结构域相邻的铰链区(例如，CD8铰链区)。在一些实施例中，免疫细胞包含两个或更多个(如2、3、4、5、或更多个)嵌合受体多肽。在一些实施例中，两个或更多个嵌合受体多肽彼此不同。在一些实施例中，靶抗原结合结构域是特异性结合BCMA的sdAb，如PCT/CN2016/094408和PCT/CN2017/096938中所披露的任一抗BCMA sdAb。在一些实施例中，抗BCMA sdAb包含SEQ ID NO：26的氨基酸序列。在一些实施例中，抗BCMA sdAb包含SEQ ID NO:26的氨基酸序列的CDR1、CDR2、和CDR3。在一些实施例中，TCR抗原结合结构域(例如，scFv、sdAb)特异性结合CD3ε(例如，CD3ε的N-末端)。在一些实施例中，TCR抗原结合结构域是包含SEQ ID NO:22或23的氨基酸序列的抗CD3 sdAb。在一些实施例中，TCR抗原结合结构域是包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的抗CD3 scFv。在一些实施例中，TCR抗原结合结构域是包含SEQ ID NO:22或23的氨基酸序列的CDR1、CDR2、和CDR3的抗CD3 sdAb。在一些实施例中，TCR抗原结合结构域是包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的HC-CDR 1-3和LC-CDR 1-3的抗CD3 scFv。在一些实施例中，TCR抗原结合结构域(例如，scFv、sdAb)特异性结合TCRγ/δ(例如，TCRγ/δ的恒定区)。在一些实施例中，TCR抗原结合结构域是包含SEQ ID NO:27的氨基酸序列的抗TCR scFv。在一些实施例中，TCR抗原结合结构域是包含SEQ ID NO:27的氨基酸序列的HC-CDR 1-3和LC-CDR 1-3的抗TCR scFv。

表达嵌合受体多肽的免疫细胞的制备

在一方面，本发明提供了表达本文所述的嵌合受体多肽的免疫细胞(如淋巴细胞，例如T细胞)。本文提供了制备表达嵌合受体多肽的免疫细胞(如T细胞)的示例性方法。

在一些实施例中，可以通过将编码特异性结合靶抗原(如疾病相关抗原)的嵌合受体多肽(如本文所述的任一嵌合受体多肽)的一种或多种核酸(包括例如，慢病毒载体)引入免疫细胞来产生表达嵌合受体多肽的免疫细胞。可以使用本领域已知的技术来完成将一种或多种核酸引入免疫细胞。在一些实施例中，本发明的免疫细胞(如T细胞)能够在体内复制，导致长期持续存在，这可引起持续控制与靶抗原的表达相关的疾病(如癌症、自身免疫性疾病、或病毒感染)。

在一些实施例中，本发明涉及使用淋巴细胞输注，施用表达特异性结合根据本文所述的任一嵌合受体多肽的靶抗原的嵌合受体多肽的遗传修饰的免疫细胞(如T细胞)用于治疗患有或有发展与靶抗原表达有关的疾病和/或障碍(在本文中也称为“靶抗原阳性”或“TA阳性”疾病或障碍)风险的患者，该疾病和/或障碍包括例如，癌症或病毒感染。在一些实施例中，在治疗中使用自体淋巴细胞输注。从需要治疗的患者中收集自体PBMC，并且使用本文所述和本领域已知的方法活化和扩增T细胞，然后回输给患者。

在一些实施例中，提供了表达特异性结合根据本文所述的任一嵌合受体多肽的靶抗原(例如，BCMA)的嵌合受体多肽的T细胞(在本文中也称为“工程化的T细胞”)。本发明的工程化的T细胞可以进行强力的体内T细胞扩增，并且可以建立靶抗原特异性记忆细胞，该靶抗原特异性记忆细胞在血液和骨髓中以高水平持续长时间。在一些实施例中，输注到患者体内的本发明的工程化的T细胞可以在具有靶抗原相关疾病的患者体内消除靶抗原呈递细胞，如靶抗原呈递癌症或病毒感染的细胞。在一些实施例中，输注到患者体内的本发明的工程化的T细胞可以在具有至少一种常规治疗难治的靶抗原相关疾病的患者体内消除靶抗原呈递细胞，如靶抗原呈递癌症或病毒感染的细胞。

在对T细胞进行扩增和基因修饰之前，从受试者获得T细胞来源。T细胞可以获得自许多来源，包括外周血单核细胞、骨髓、淋巴结组织、脐带血、胸腺组织、来自感染部位的组织、腹水、胸腔积液、脾组织和肿瘤。在本发明的一些实施例中，可以使用本领域可用的任何数量的T细胞系。在本发明的一些实施例中，可以使用本领域技术人员已知的任何数量的技术(例如，Ficoll

在一些实施例中，通过例如，通过PERCOLL

通过阴性选择富集T细胞群可以通过结合针对阴性选择细胞特有的表面标记的抗体来实现。一种方法是通过负磁性免疫粘附或流式细胞术进行细胞分选和/或选择，该方法使用针对存在于阴性选择的细胞上的细胞表面标志物的单克隆抗体的混合物。例如，为了通过阴性选择富集CD4+细胞，单克隆抗体混合物典型地包括针对CD14、CD20、CD11b、CD16、HLA-DR和CD8的抗体。在一些实施例中，可能希望富集或正向选择调节性T细胞，这些细胞典型地表达CD4

为了通过阳性或阴性选择分离所希望的细胞群，可以改变细胞和表面(例如，粒子(如珠))的浓度。在一些实施例中，可能希望显著减少珠和细胞混合在一起的体积(即，增加细胞的浓度)，以确保细胞和珠的最大接触。例如，在一些实施例中，使用约20亿个细胞/ml的浓度。在一些实施例中，使用约10亿个细胞/ml的浓度。在一些实施例中，使用大于约1亿个细胞/ml。在一些实施例中，使用约1000、1500、2000、2500、3000、3500、40000、4500、或5000万个细胞/ml中的任一个的浓度。在一些实施例中，使用约7500万、8000万、8500万、9000万、9500万、或1亿个细胞/ml中的任一个。在一些实施例中，使用约1.25或约1.50亿个细胞/ml的浓度。使用高浓度可导致细胞产量、细胞激活和细胞扩增增加。此外，使用高浓度的细胞允许更有效地捕获可能弱表达目的靶抗原的细胞(如CD28阴性T细胞)、或来自存在许多肿瘤细胞的样品(即，白血病血液、肿瘤组织等)的细胞。此类细胞群可能具有治疗价值，并且将期望获得。例如，使用高浓度的细胞允许更有效地选择通常具有较弱的CD28表达的CD8

在本发明的一些实施例中，在治疗或直接从患者中获得T细胞。在这方面，已经观察到，在某些癌症治疗后，特别是用损害免疫系统的药物治疗后，在当患者通常从治疗中恢复的时期，治疗后不久，获得的T细胞的质量可能是最佳的，或改善其离体扩展的能力。同样，在使用本文所述方法进行离体操作后，这些细胞可以处于增强植入和体内扩增的优选状态。因此，在本发明的上下文中预期在该恢复阶段收集血细胞，包括T细胞、树突状细胞、或其他造血系的细胞。此外，在一些实施例中，动员(例如，用GM-CSF动员)和调理方案可用于在受试者中创造条件，其中特别是在治疗后定义的时间窗口期间，有利于细胞类型的再填充、再循环、再生和/或扩展。说明性的细胞类型包括T细胞、B细胞、树突状细胞、和免疫系统的其他细胞。

无论是在T细胞的遗传修饰以表达所希望的嵌合受体多肽之前还是之后，T细胞都可以通常使用例如在美国专利号6,352,694中所述的方法来激活并扩增。

在一些实施例中，通过用编码本文所述的嵌合受体多肽的病毒载体转导免疫细胞(如通过本文所述的方法制备的T细胞)产生表达本发明的嵌合受体多肽的免疫细胞(如T细胞)。病毒载体递送系统包括DNA和RNA病毒，在被递送至免疫细胞后它们具有游离型或整合型基因组。在一些实施例中，该病毒载体是慢病毒载体，并且该免疫细胞包含整合到免疫细胞基因组中的慢病毒载体。

富集

在一些实施例中，提供了富集免疫细胞(例如，T细胞)的异质细胞群的方法，该免疫细胞表达根据本文所述的任以修饰的/工程化的免疫细胞的嵌合受体多肽。

可以通过阳性选择技术来富集表达特异性结合靶抗原(例如，BCMA)的嵌合受体多肽的免疫细胞(如T细胞)的特定的亚群。例如，在一些实施例中，通过与靶抗原-共轭珠孵育足以对所希望的工程化的免疫细胞进行阳性选择的一段时间而富集工程化的免疫细胞(如T细胞)。对于异质细胞群中以低水平存在的修饰免疫细胞的分离，使用较长的孵育时间(如24小时)可以增加细胞产量。本领域的技术人员会认识到，在本发明的上下文中也可以使用多轮选择。

为了通过阳性选择分离所希望的修饰免疫细胞群，可以改变细胞和表面(例如，粒子(如珠))的浓度。在一些实施例中，可能希望显著减少珠和细胞混合在一起的体积(即，增加细胞的浓度)，以确保细胞和珠的最大接触。

在一些本文所述的任何此类实施例中，富集导致修饰的免疫细胞的最小或基本上没有衰竭。例如，在一些实施例中，富集导致少于约50％(如少于约45％、40％、35％、30％、25％、20％、15％、10％、或5％中的任一个)的修饰的免疫细胞衰竭。免疫细胞衰竭可以通过本领域已知的任何方法来确定，包括本文所述的任何方法。

在一些本文所述的任何此类实施例中，富集导致修饰的免疫细胞的最小或基本上没有末端分化。例如，在一些实施例中，富集导致少于约50％(如少于约45％、40％、35％、30％、25％、20％、15％、10％、或5％中的任一个)的修饰的免疫细胞末端分化。免疫细胞分化可以通过本领域已知的任何方法来确定，包括本文所述的任何方法。

在一些本文所述的任何此类实施例中，富集导致修饰的免疫细胞的最小或基本上没有嵌合受体多肽的内化。例如，在一些实施例中，富集导致少于约50％(如少于约45％、40％、35％、30％、25％、20％、15％、10％、或5％中的任一个)的修饰的免疫细胞上的嵌合受体多肽内化。修饰的免疫细胞上的嵌合受体多肽的内化可以通过本领域已知的任何方法来确定，包括本文所述的任何方法。

因此，在一些实施例中，提供了富集表达特异性结合靶抗原(例如，BCMA)的嵌合受体多肽的免疫细胞(例如，T细胞)的异质细胞群的方法，该方法包括：a)将异质细胞群与包括靶抗原或其中含有的一个或多个表位的配体接触，以形成包含与配体结合的免疫细胞的复合物；以及b)从异质细胞群中分离复合物，从而产生富含表达嵌合受体多肽的免疫细胞的细胞群。在一些实施例中，将该配体固定到固体支撑物上。在一些实施例中，该固体支撑物是颗粒(如珠)。在一些实施例中，该固体支撑物是表面(如孔的底部)。在一些实施例中，将该配体用标签标记。在一些实施例中，该标签是荧光分子、亲和标签、或磁性标签。在一些实施例中，该方法进一步包括将免疫细胞从配体中洗脱出来，并回收洗脱液。

文库筛选

为鉴定特异于靶抗原的候选嵌合受体多肽，将嵌合受体多肽文库(例如表达编码多种嵌合受体多肽的核酸的文库的细胞)暴露于包含靶抗原或其含有的一个或多个表位的配体，随后分离特异性结合配体的文库的亲和成员。在一些实施例中，将该配体固定到固体支撑物上。在一些实施例中，该支撑物可以是珠的表面、微量滴定板、免疫试管、或本领域已知的用于此目的的任何材料。在一些实施例中，相互作用发生在溶液中标记的配体靶标上(例如生物素化的配体)。在一些实施例中，该过程涉及一个或多个洗涤步骤，以去除非特异性和非反应性的文库成员(淘选)。在一些实施例中，为了纯化溶液中的复合物，通过固定或通过离心将这些复合物捕获。在一些实施例中，将亲和成员在可溶性生物素化的配体上捕获，随后将亲和复合物(亲和成员和配体)固定在链霉抗生物素蛋白珠上。在一些实施例中，固体支撑物是珠。在一些实施例中，这些珠包括，例如，磁珠、非磁珠、单分散珠、和多分散珠。在一些实施例中，将亲和成员通过阳性选择纯化。在一些实施例中，将亲和成员通过阴性选择纯化以去除不需要的文库成员。在一些实施例中，将亲和成员同时通过阳性和阴性选择步骤纯化。

通常，用于制备文库构建体的技术将基于已知的基因工程技术。在这方面，将编码嵌合受体多肽以在文库中表达的核酸序列并入适合于使用的表达系统的类型的表达载体。用于在细胞(如CD3

在一些实施例中，提供了包含编码根据本文所述的任一实施例中的多种嵌合受体多肽的序列的核酸文库。在一些实施例中，该核酸文库包含编码多种嵌合受体多肽的病毒载体。在一些实施例中，该病毒载体是慢病毒载体。

在一些实施例中，提供了筛选编码特异于靶抗原的嵌合受体多肽的序列的如本文所述的任一实施例中的核酸文库的方法，该方法包括：a)将核酸文库引入多个细胞，使得嵌合受体多肽在多个细胞表面表达；b)将多个细胞与包含靶抗原或其含有的一个或多个表位的配体孵育；c)收集结合至该配体的细胞；和d)从步骤c)中收集的细胞中分离出编码嵌合受体多肽的序列，从而鉴定特异于靶抗原的嵌合受体多肽。在一些实施例中，该方法进一步包括一步或多步洗涤步骤。在一些实施例中，这些一步或多步洗涤步骤在步骤b)和c)之间进行。在一些实施例中，多个细胞是多个CD3

药物组合物

本文还提供了组合物(如药物组合物，在本文中也称为配制品)，其包含如本文所述的任一实施例中的嵌合受体多肽、编码如本文所述的任一实施例中的嵌合受体多肽的核酸(或其载体)、或表达如本文所述的任一实施例中的嵌合受体多肽的免疫细胞(例如，T细胞)、和任选地药学上可接受的赋形剂。在一些实施例中，该组合物是免疫细胞组合物(如药物组合物)，其包含在其表面存在根据本文所述的任一嵌合受体多肽的嵌合受体多肽的免疫细胞(如T细胞)。

组合物可以包含含有相同的细胞类型的免疫细胞并表达相同的嵌合受体多肽的同质细胞群、或异质细胞群，其含有包含不同的细胞类型的免疫细胞和/或表达不同的嵌合受体多肽的多个免疫细胞群。组合物可以进一步包含不是免疫细胞的细胞。

因此，在一些实施例中，提供了免疫细胞组合物，其包含相同的细胞类型的免疫细胞(如T细胞)的均一的细胞群并表达相同的嵌合受体多肽。在一些实施例中，免疫细胞是T细胞。在一些实施例中，免疫细胞选自由以下组成的组：细胞毒性T细胞、辅助T细胞、自然杀伤T细胞、和抑制因子T细胞。在一些实施例中，免疫细胞组合物是药物组合物。

在一些实施例中，提供了包含异质细胞群的免疫细胞组合物，该异质细胞群含有包含不同的细胞类型的免疫细胞和/或表达不同的嵌合受体多肽的多个免疫细胞群。在一些实施例中，免疫细胞是T细胞。在一些实施例中，每个免疫细胞群是选自下组的细胞类型，该组由以下组成：细胞毒性T细胞、辅助T细胞、自然杀伤T细胞、和抑制因子T细胞。在一些实施例中，组合物中的所有免疫细胞都是相同的细胞类型(例如，所有的免疫细胞都是细胞毒性T细胞)。在一些实施例中，至少一个免疫细胞群是与其他不同的细胞类型(例如，一个免疫细胞由细胞毒性T细胞组成而其他免疫细胞群由自然杀伤T细胞组成)。在一些实施例中，每个免疫细胞群表达相同的嵌合受体多肽。在一些实施例中，至少一个免疫细胞群表达与其他不同的嵌合受体多肽。在一些实施例中，每个免疫细胞群表达与其他不同的嵌合受体多肽。在一些实施例中，每个免疫细胞群表达特异性结合相同的靶抗原的嵌合受体多肽。在一些实施例中，至少一个免疫细胞群表达特异性结合与其他不同的靶抗原(或表位)的嵌合受体多肽。在一些实施例中，其中至少一个免疫细胞群表达特异性结合不同的靶抗原(或表位)的嵌合受体多肽，每个免疫细胞群表达特异性结合与相同的疾病或障碍相关的靶抗原嵌合受体多肽(例如，每个靶抗原与癌症(如乳腺癌)相关)。在一些实施例中，免疫细胞组合物是药物组合物。

因此，在一些实施例中，提供了免疫细胞组合物，其包含如本文所述的任一实施例中的多个免疫细胞群，其中组合物中的所有免疫细胞都是相同的细胞类型(例如，所有的免疫细胞都是细胞毒性T细胞)，并且其中每个免疫细胞群表达与其他不同的嵌合受体多肽。在一些实施例中，免疫细胞是T细胞。在一些实施例中，免疫细胞选自由以下组成的组：细胞毒性T细胞、辅助T细胞、自然杀伤T细胞、和抑制因子T细胞。在一些实施例中，每个免疫细胞群表达特异性结合相同的靶抗原的嵌合受体多肽。在一些实施例中，至少一个免疫细胞群表达特异性结合与其他不同的靶抗原(或表位)的嵌合受体多肽。在一些实施例中，其中至少一个免疫细胞群表达特异性结合不同的靶抗原的嵌合受体多肽，每个免疫细胞群表达特异性结合与相同的疾病或障碍相关的靶抗原嵌合受体多肽(例如，每个靶抗原与癌症(如乳腺癌)相关)。在一些实施例中，免疫细胞组合物是免疫细胞药物组合物。

在一些实施例中，提供了组合物，其包含如本文所述的任一实施例中的多个免疫细胞群，其中至少一个免疫细胞群是与其他不同的细胞类型。在一些实施例中，所有的免疫细胞群都是不同的细胞类型。在一些实施例中，每个免疫细胞群是选自下组的细胞类型，该组由以下组成：细胞毒性T细胞、辅助T细胞、自然杀伤T细胞、和抑制因子T细胞。在一些实施例中，每个免疫细胞群表达相同的嵌合受体多肽。在一些实施例中，至少一个免疫细胞群表达与其他不同的嵌合受体多肽。在一些实施例中，每个免疫细胞群表达与其他不同的嵌合受体多肽。在一些实施例中，每个免疫细胞群表达特异性结合相同的靶抗原的嵌合受体多肽。在一些实施例中，至少一个免疫细胞群表达特异性结合与其他不同的靶抗原(或表位)的嵌合受体多肽。在一些实施例中，其中至少一个免疫细胞群表达特异性结合不同的靶抗原(或表位)的嵌合受体多肽，每个免疫细胞群表达特异性结合与相同的疾病或障碍相关的靶抗原嵌合受体多肽(例如，每个靶抗原与癌症(如乳腺癌)相关)。在一些实施例中，免疫细胞组合物是药物组合物。

在制备组合物的各个阶段，冷冻保存细胞可能是必要的或有益的。术语“冷冻(frozen/freezing)”和“冷冻保存(cryopreserved/cryopreserving)”可互换使用。冷冻包括冷冻干燥。

通过(a)使用冷冻保护剂，(b)控制冷冻速度，和/或(c)在足够低的温度下储存以最小化降解反应，可以避免对经受冷冻保存的细胞的损害。示例性冷冻保护剂包括二甲基亚砜(DMSO)、甘油、聚乙烯吡咯烷、聚乙二醇、白蛋白、葡聚糖、蔗糖、乙二醇、异赤藓糖醇、D-核糖醇、D-甘露醇、D-山梨醇、异肌醇、D-乳糖、氯化胆碱、氨基酸、甲醇、乙酰胺、单乙酸甘油酯、和无机盐。在特定的实施例中，可以使用DMSO。添加血浆(例如，达到20％-25％的浓度)可以增强DMSO的保护作用。添加DMSO后，可以将细胞保持在0℃直至冷冻，因为浓度为1％的DMSO在温度高于4℃时可能会有毒性。

在细胞的冷冻保存中，缓慢控制的冷却速度可能是至关重要的，并且需要不同的冷冻保护剂。水变成冰的融合阶段的热量应该是最小的。冷却过程可以通过使用，例如，可编程的冷冻装置或甲醇浴过程来进行。可编程的冷冻装置允许确定最佳的冷却速率，并促进标准的可再现的冷却。

在特定的实施例中，DMSO处理过的细胞可以在冰上预冷，并且转移到含有冷冻甲醇的托盘中，将其置于-80℃的机械冰箱(例如Harris或Revco)中。甲醇浴和样品的热电偶测量表明，可优选冷却速率为1°至3℃/分钟。至少两小时后，试样可以达到-80℃的温度，并且可以直接放入液氮中(-196℃)。

彻底冷冻后，可以将细胞迅速转移到长期低温储存容器中。在优选的实施例中，可以将样品低温储存在液氮(-196℃)或蒸汽(-1℃)中。高效的液氮冰箱的可用性促进了这种储存。

冷冻保存后，可以根据本领域普通技术人员使用的方法将冷冻的细胞解冻。优选地，将冷冻的细胞快速解冻并在解冻后立即冷却。在特定的实施例中，可以将含有冷冻的细胞的小瓶至其颈部浸入温水浴中；缓慢旋转将确保细胞悬浮液在解冻时混合，并增加从温水到内部冰块的热转移。一旦冰完全融化，可立即将小瓶放在冰上。

在特定的实施例中，可以使用方法来防止细胞在解冻期间结块。示例性方法包括：在冷冻前和/或冷冻后添加DNA酶、低分子量的葡聚糖和柠檬酸盐、羟乙基淀粉。如本领域普通技术人员所理解的那样，如果使用了对人有毒的冷冻保护剂，则应在治疗性使用前将其去除。DMSO没有严重的毒性。

美国专利公开号2010/0183564的第14-15页描述了细胞的示例性载剂和施用方式。另外的药物载剂描述于Remington:The Science and Practice of Pharmacy,21版,David B.Troy,编辑,Lippicott Williams&Wilkins(2005)中。

可以从培养基中收获细胞，并以治疗有效量将其洗涤并浓缩到载剂中。示例性载剂包括盐水、缓冲盐水、生理盐水、水、汉克斯(Hanks')溶液、林格氏(Ringer's)溶液、Nonnosol-R(Abbott Labs)、血浆溶解液A(R)(Baxter Laboratories,Inc.,Morton Grove,IL)、甘油、乙醇、及其组合。

在特定的实施例中，载剂可以补充有人血清白蛋白(HSA)或其他人血清组分或胎牛血清。在特定的实施例中，用于输注的载剂包括含有5％HAS或右旋糖的缓冲盐水。另外的等渗剂包括多羟糖醇，这些多羟糖醇包括三羟或更高级糖醇，如甘油(glycerin)、赤藓糖醇、阿糖醇、木糖醇、山梨醇、或甘露醇。

载剂可以包括缓冲剂，如柠檬酸盐缓冲液、琥珀酸盐缓冲液、酒石酸盐缓冲液、富马酸盐缓冲液、葡萄糖酸盐缓冲液、草酸盐缓冲液、乳酸盐缓冲液、乙酸盐缓冲液、磷酸盐缓冲液、组氨酸缓冲液、和/或三甲基胺盐。

稳定剂是指广泛的赋形剂，其功能范围从膨胀剂到有助于防止细胞粘附于容器壁的添加剂。典型的稳定剂可以包括多羟糖醇；氨基酸，如精氨酸、赖氨酸、甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、组氨酸、丙氨酸、鸟氨酸、L-亮氨酸、2-苯丙氨酸、谷氨酸、和苏氨酸；有机糖或糖醇，如乳糖、海藻糖、水苏糖、甘露醇、山梨醇、木糖醇、核糖醇、肌醇(myoinisitol)、半乳糖醇、甘油、和环多醇，如肌醇；PEG；氨基酸聚合物；含硫还原剂，如脲、谷胱甘肽、硫辛酸、硫代乙醇酸钠、硫代甘油、α单硫代甘油、和硫代硫酸钠；低分子量多肽(即，<10个残基)；蛋白质如HSA、牛血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白；亲水性聚合物，如聚乙烯吡咯烷酮；单糖如木糖、甘露糖、果糖和葡萄糖；二糖如乳糖、麦芽糖和蔗糖；三糖如棉子糖、和多糖如葡聚糖。

必要或有益的，组合物可以包括局部麻醉剂(如利多卡因)以减轻注射部位的疼痛。

示例性防腐剂包括苯酚、苯甲醇、间甲酚、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯、十八烷基二甲基苄基氯化铵、苯甲烃铵卤化物、氯化六甲铵、对羟基苯甲酸烷基酯(如对羟基苯甲酸甲酯或丙酯)、儿茶酚、间苯二酚、环己醇、和3-戊醇。

组合物中治疗有效量的细胞可以大于10

在本文披露的组合物和配制品中，细胞的体积通常为一升或更少、500ml或更少、250ml或更少或100ml或更少。因此，施用的细胞密度典型地大于10

本文还披露了核酸组合物(如药物组合物，在本文中也称为配制品)，其包含编码本文所述的嵌合受体多肽的任一核酸。在一些实施例中，核酸组合物是药物组合物。在一些实施例中，核酸组合物进一步包含等渗剂、赋形剂、稀释剂、增稠剂、稳定剂、缓冲液、和/或防腐剂中的任一种；和/或水性媒介物，如纯化水、糖水溶液、缓冲液溶液、生理盐水、聚合物水溶液、或无RNA酶的水。

本文披露的组合物和配制品可以通过例如注射、输液、灌注或灌洗来制备用于施用。组合物和配制品可以进一步配制用于骨髓、静脉内、皮内、动脉内、结内、淋巴管内、腹膜内、病灶内、前列腺内、阴道内、直肠内、局部、鞘内、肿瘤内、肌内、囊内、和/或皮下注射。

用于体内施用的配制品必须是无菌的。这可以通过例如穿过无菌过滤膜过滤而容易地实现。

使用表达嵌合受体多肽的细胞的治疗方法

本发明的嵌合受体多肽和/或组合物(如药物组合物)可用于治疗与靶抗原(TA)表达相关的疾病和/或障碍(在本文中也称为“靶抗原阳性”或“TA阳性”疾病或障碍)，该疾病和/或障碍包括，例如，癌症、传染病(如病毒感染)、和自身免疫性疾病。因此，在一些实施例中，本申请提供了治疗个体(例如，人)中靶抗原阳性疾病(如癌症、病毒感染、自身免疫性疾病)的方法，该方法包括向该个体施用有效量的表达本文所述的嵌合受体多肽的免疫细胞组合物(如药物组合物)。在一些实施例中，该癌症选自例如，由以下组成的组：肾上腺皮质癌、膀胱癌、乳腺癌、宫颈癌、胆管癌、结直肠癌、食管癌、胶质母细胞瘤、胶质瘤、肝细胞癌、头颈癌、肾癌、肺癌、黑色素瘤、间皮瘤、多发性骨髓瘤、胰腺癌、嗜铬细胞瘤、浆细胞瘤、神经母细胞瘤、卵巢癌、前列腺癌、肉瘤、胃癌、子宫癌和甲状腺癌。在一些实施例中，该癌症选自由以下组成的组：急性白血病(包括但不限于急性髓性白血病(AML)、B细胞急性淋巴性白血病(BALL)、T细胞急性淋巴性白血病(TALL)、和急性淋巴性白血病(ALL))、慢性白血病(包括但不限于慢性髓细胞性白血病(CML)和慢性淋巴细胞性白血病(CLL))、多发性骨髓瘤(MM)、骨髓增生异常综合征(MDS)、骨髓增生性肿瘤(MPN)、慢性髓细胞性白血病(CML)、和母细胞性浆细胞样树突状细胞肿瘤(BPDCN)。在一些实施例中，病毒感染由例如选自下组的病毒引起，该组由以下组成：巨细胞病毒(CMV)、EB病毒(EBV)、乙型肝炎病毒(HBV)、卡波西肉瘤相关的疱疹病毒(KSHV)、人乳头瘤病毒(HPV)、接触传染性软疣病毒(MCV)、人T细胞白血病病毒1(HTLV-1)、HIV(人免疫缺陷病毒)、和丙型肝炎病毒(HCV)。在一些实施例中，自身免疫性疾病选自：乳糜泻、1型糖尿病(IDDM)、系统性红斑狼疮(SLE)、舍格伦综合征、多发性硬化(MS)、桥本甲状腺炎、格雷夫斯病、特发性血小板减少性紫癜、和类风湿关节炎(RA)。在一些实施例中，静脉内、瘤内、或皮下施用表达本文所述的嵌合受体多肽的免疫细胞组合物(如药物组合物)。

例如，在一些实施例中，提供了治疗有需要的个体(例如，人)中靶抗原相关的疾病(如癌症、自身免疫性疾病、或病毒感染)的方法，该方法包括向该个体施用有效量的包含在其表面存在根据本文所述的任一嵌合受体多肽的嵌合受体多肽的免疫细胞(如T细胞)的组合物。

还考虑了治疗有需要的个体中靶抗原相关的疾病(如癌症、自身免疫性疾病、或病毒感染)的方法，该方法包括向该个体(例如，人)施用包含表达不同的本文所述的嵌合受体多肽的多个免疫细胞(例如，T细胞)的组合物。因此，在一些实施例中，根据本文所述的任一治疗个体中靶抗原相关的疾病的方法，组合物是如本文所述的异质免疫细胞组合物。

例如，在一些实施例中，提供了治疗有需要的个体(例如，人)中靶抗原相关的疾病(如癌症、病毒感染、或自身免疫性疾病)的方法，该方法包括向该个体施用有效量的包含如本文所述的任一实施例中的多个免疫细胞群的异质免疫细胞组合物，其中该组合物中的所有免疫细胞都是相同的细胞类型，其中每个免疫细胞群表达与其他不同的嵌合受体多肽，并且其中至少一个免疫细胞群表达特异性结合靶抗原的嵌合受体多肽。在一些实施例中，免疫细胞是T细胞。在一些实施例中，免疫细胞选自由以下组成的组：细胞毒性T细胞、辅助T细胞、自然杀伤T细胞、和抑制因子T细胞。在一些实施例中，每个免疫细胞群表达特异性结合相同的靶抗原的嵌合受体多肽。在一些实施例中，至少一个免疫细胞群表达特异性结合不同的靶抗原(或表位)的嵌合受体多肽。在一些实施例中，其中至少一个免疫细胞群表达特异性结合不同的靶抗原的嵌合受体多肽，每个不同的靶抗原(或表位)与靶抗原相关的疾病相关。

在一些实施例中，提供了治疗有需要的个体(例如，人)中靶抗原相关的疾病(如癌症、自身免疫性疾病、或病毒感染)的方法，该方法包括向该个体施用有效量的包含如本文所述的任一实施例中的多个免疫细胞群的异质免疫细胞组合物，其中至少一个免疫细胞群是与其他不同的细胞类型，并且其中至少一个免疫细胞群表达特异性结合靶抗原的嵌合受体多肽。在一些实施例中，所有的免疫细胞群都是不同的细胞类型。在一些实施例中，免疫细胞是T细胞。在一些实施例中，每个免疫细胞群是选自下组的细胞类型，该组由以下组成：细胞毒性T细胞、辅助T细胞、自然杀伤T细胞、和抑制因子T细胞。在一些实施例中，每个免疫细胞群表达相同的嵌合受体多肽。在一些实施例中，至少一个免疫细胞群表达与其他不同的嵌合受体多肽。在一些实施例中，每个免疫细胞群表达与其他不同的嵌合受体多肽。在一些实施例中，每个免疫细胞群表达特异性结合靶抗原的嵌合受体多肽。在一些实施例中，至少一个免疫细胞群表达特异性结合不同的靶抗原的嵌合受体多肽。在一些实施例中，其中至少一个免疫细胞群表达特异性结合不同的靶抗原的嵌合受体多肽，每个不同的靶抗原与靶抗原相关的疾病相关。

在一些实施例中，提供了治疗有需要的个体(例如，人)中与多种靶抗原相关的疾病(例如，癌症、自身免疫性疾病、病毒感染)的方法，该方法包括向该个体施用有效量的包含如本文所述的任一实施例中的多个免疫细胞群的异质免疫细胞组合物，其中该组合物中的所有免疫细胞都是相同的细胞类型(例如，所有的免疫细胞都是细胞毒性T细胞)，其中每个免疫细胞群表达与其他不同的嵌合受体多肽，并且其中对于多种靶抗原的每个靶抗原，至少一个免疫细胞群表达特异性结合该靶抗原的嵌合受体多肽。在一些实施例中，免疫细胞是T细胞。在一些实施例中，免疫细胞选自由以下组成的组：细胞毒性T细胞、辅助T细胞、自然杀伤T细胞、和抑制因子T细胞。

在一些实施例中，提供了治疗有需要的个体(例如，人)中与多种靶抗原相关的疾病(例如，癌症、自身免疫性疾病、病毒感染)的方法，该方法包括向该个体施用有效量的包含如本文所述的任一实施例中的多个免疫细胞的免疫细胞组合物，其中至少一个免疫细胞群是与其他不同的细胞类型，并且其中对于多种靶抗原的每个靶抗原，至少一个免疫细胞群表达特异性结合该靶抗原的嵌合受体多肽。在一些实施例中，所有的免疫细胞群都是不同的细胞类型。在一些实施例中，免疫细胞是T细胞。在一些实施例中，每个免疫细胞群是选自下组的细胞类型，该组由以下组成：细胞毒性T细胞、辅助T细胞、自然杀伤T细胞、和抑制因子T细胞。在一些实施例中，每个免疫细胞群表达与其他不同的嵌合受体多肽。

在一些实施例中，个体是哺乳动物(例如，人、非人灵长类、大鼠、小鼠、牛、马、猪、羊、山羊、狗、猫等)。在一些实施例中，个体是人。在一些实施例中，个体是临床患者、临床试验志愿者、实验动物等。在一些实施例中，个体小于约60岁(包括例如小于约50、40、30、25、20、15或10岁中的任何一者)。在一些实施例中，个体年龄大于约60岁(包括例如大于70、80、90或100岁中的任何一者)。在一些实施例中，个体被诊断患有或环境上或遗传上倾向于本文所述的一种或多种疾病或障碍(如癌症、自身免疫性疾病、或移植)。在一些实施例中，个体具有与本文所述的一种或多种疾病或障碍相关的一种或多种危险因素。

在一些实施例中，提供了治疗有需要的个体(例如，人)中靶抗原相关的疾病(如癌症、自身免疫性疾病、或病毒感染)的方法，该方法包括向该个体施用有效量的包含编码如本文所述的任一实施例中的嵌合受体多肽的核酸的组合物。

可以通过以下评估癌症治疗，例如，通过杀伤癌细胞、肿瘤消退、肿瘤重量或尺寸缩小、进展时间、诱导外周T细胞再分布(例如，将T细胞招募到表达肿瘤抗原的组织或肿瘤上)、抑制肿瘤转移(例如，转移至淋巴结)、存活持续时间、无进展存活、总体反应率、应答持续时间、缓解患有癌症的个体的一种或多种症状、生活质量、蛋白质表达和/或活性、预防、抑制、或减少癌症复发的可能性。可以采用确定疗法功效的方法，包括例如通过放射成像测量反应。

在一些实施例中，将治疗功效测量为肿瘤生长抑制百分比(％TGI)，使用等式100-(T/C×100)进行计算，其中T是治疗的肿瘤的平均相对肿瘤体积，并且C是未治疗的肿瘤的平均相对肿瘤体积。在一些实施例中，％TGI是约10％、约20％、约30％、约40％、约50％、约60％、约70％、约80％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、或多于95％。在一些实施例中，降低由表达本文所述的嵌合受体多肽(任选地另外的CAR/工程化的TCR)的免疫细胞(例如，T细胞)或其药物组合物介导的肿瘤大小的方法可以减少至少约10％(包括例如，至少约20％、30％、40％、60％、70％、80％、90％、或100％中的任何一个)的肿瘤大小。在一些实施例中，抑制由表达本文所述的嵌合受体多肽(任选地另外的CAR/工程化的TCR)的免疫细胞(例如，T细胞)或其药物组合物介导的肿瘤转移(例如，转移到淋巴结)的方法可以抑制至少约10％(包括例如，至少约20％、30％、40％、60％、70％、80％、90％、或100％中的任何一个)的转移。在一些实施例中，延长由表达本文所述的嵌合受体多肽(任选地另外的CAR/工程化的TCR)的免疫细胞(例如，T细胞)或其药物组合物介导的个体(如人)的存活期的方法可以将个体的存活期延长至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、18、或24个月、或更多中的任一个。在一些实施例中，延长由表达本文所述的嵌合受体多肽(任选地另外的CAR/工程化的TCR)的免疫细胞(例如，T细胞)或其药物组合物介导的癌症进展时间的方法可以将癌症进展时间延长至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、或12周、或更多中的任一个。在一些实施例中，表达本文所述的嵌合受体多肽(任选地另外的CAR/工程化的TCR)的免疫细胞(例如，T细胞)或其药物组合物可以通过激活效应细胞(例如，T细胞，例如CD8+和/或CD4+T细胞)来增加、增强、或刺激受试者的免疫应答或功能。在一些实施例中，相对于施用表达本文所述的嵌合受体多肽(任选地另外的CAR/工程化的TCR)的免疫细胞(例如，T细胞)或其药物组合物之前，个体中的CD4和/或CD8 T细胞具有增加或增强的启动、激活、增殖、细胞因子释放和/或细胞溶解活性。

可以通过以下评估病毒感染治疗，例如，通过病毒载量、存活持续时间、生活质量、蛋白质表达和/或活性。

可以通过以下评估自身免疫性疾病治疗，例如，通过自身抗体检测，例如，使用免疫扩散、免疫印记技术、免疫荧光、酶免疫测定、或流式细胞术用于基于多重珠的测定。

疾病

在一些实施例中，本文所述的工程化的免疫细胞(例如，T细胞)可用于治疗与靶抗原(例如，BCMA)相关的癌症。可以使用本文所述的任何方法治疗的癌症包括未血管化或尚未充分血管化的肿瘤以及血管化的肿瘤。这些癌症可以包含非实体瘤(如血液肿瘤，例如，白血病和淋巴瘤)或可以包含实体瘤。用本发明的免疫细胞治疗的癌症类型包括但不限于上皮癌、母细胞瘤、和肉瘤、以及某些白血病或淋巴恶性肿瘤、良性和恶性肿瘤、以及恶性瘤(例如肉瘤、上皮癌和黑色素瘤)。成人肿瘤/癌症和儿科肿瘤/癌症也包括在内。

血液癌是血液或骨髓的癌症。血液学(或血源性)癌症的实例包括白血病，包括急性白血病(如急性淋巴细胞白血病、急性骨髓细胞性白血病、急性骨髓性白血病和骨髓母细胞性、早幼粒细胞性、髓单核细胞性、单核细胞性和红白血病)、慢性白血病(如慢性髓细胞性(粒细胞性)白血病、慢性髓细胞性白血病、和慢性淋巴细胞性白血病)、真性红细胞增多症、淋巴瘤、霍奇金病、非霍奇金淋巴瘤(惰性和高级别形式)、多发性骨髓瘤、浆细胞瘤、瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症、重链病、骨髓增生异常综合征、毛细胞白血病和骨髓增生异常。

实体瘤是通常不包含囊肿或液体区域的异常组织肿块。实体瘤可以是良性或恶性的。不同的实体瘤类型是以形成它们的细胞的类型命名的(如肉瘤、上皮癌和淋巴瘤)。实体瘤(如肉瘤和上皮癌)的实例包括肾上腺皮质癌、胆管癌、纤维肉瘤、粘液肉瘤、脂肪肉瘤、软骨肉瘤、骨肉瘤、和其他肉瘤、滑膜瘤、间皮瘤、尤因氏瘤、平滑肌肉瘤、横纹肌肉瘤、结肠癌、胃癌、淋巴恶性肿瘤、胰腺癌、乳腺癌、肺癌、卵巢癌、前列腺癌、肝细胞癌、鳞状细胞癌、基底细胞癌、腺癌、汗腺瘤、甲状腺癌(例如，甲状腺髓样癌和乳头状甲状腺癌)、嗜铬细胞瘤、皮脂腺癌、乳头状癌、乳头状腺癌、髓样癌、支气管癌、肾细胞癌、肝癌、胆管癌、绒毛膜癌、维尔姆斯氏肿瘤、宫颈癌(例如，宫颈癌(cervical carcinoma)和前侵袭子宫颈不典型增生)、结直肠癌、肛门癌、肛管癌、或肛门直肠癌、阴道癌、外阴癌(例如，鳞状细胞癌、上皮内癌、腺癌、和纤维肉瘤)、阴茎癌、口咽癌、食管癌、头癌(例如，鳞状细胞癌)、颈癌(例如，鳞状细胞癌)、睾丸癌(例如，精原细胞瘤、畸胎瘤、胚胎癌、畸胎癌(teratocarcinoma)、绒毛膜癌、肉瘤、睾丸间质细胞(leydig cell)瘤、纤维瘤、纤维腺瘤、腺瘤样瘤、和脂肪瘤)、膀胱癌、肾癌、黑色素瘤、子宫癌(例如，子宫内膜癌)、尿路上皮癌(例如，鳞状细胞癌、移行细胞癌、腺癌、输尿管癌、和泌尿膀胱癌、和CNS肿瘤(如胶质瘤(如脑干胶质瘤和混合性胶质瘤)、胶质母细胞瘤(也称为多形性胶质母细胞瘤)、星形细胞瘤、CNS淋巴瘤、生殖细胞瘤、髓母细胞瘤、神经鞘瘤、颅咽管瘤、室管膜瘤、松果体瘤、血管母细胞瘤、听神经瘤、少突神经胶质瘤、脑膜瘤、神经母细胞瘤、视网膜母细胞瘤和脑转移癌)。

在一些实施例中，通过表达本文所述的嵌合受体多肽(和任选地CAR/工程化的TCR的)免疫细胞治疗的癌症可以是，例如，急性白血病(包括但不限于急性髓性白血病(AML)、B细胞急性淋巴性白血病(BALL)、T细胞急性淋巴性白血病(TALL)、和急性淋巴性白血病(ALL))、慢性白血病(包括但不限于慢性髓细胞性白血病(CML)和慢性淋巴细胞性白血病(CLL))、多发性骨髓瘤(MM)、骨髓增生异常综合征(MDS)、骨髓增生性肿瘤(MPN)、慢性髓细胞性白血病(CML)、和母细胞性浆细胞样树突状细胞肿瘤(BPDCN)。

在其他实施例中，工程化的免疫细胞(例如，T细胞)通过靶向病原体相关的(如病毒编码)抗原可用于治疗传染病。要预防或治疗的感染可能是由例如病毒、细菌、原生动物或寄生虫引起的。靶抗原可以是病原性蛋白、多肽或多肽，它负责由病原体引起的疾病，或能够在被病原体感染的宿主中诱发免疫应答。通过免疫细胞靶向的病原性抗原包括但不限于，来源于以下的抗原：鲍氏不动杆菌、无形体属、嗜吞细胞无形体、巴西钩虫、十二指肠钩虫、溶血隐秘杆菌、人蛔虫、曲霉属、星状病毒科、巴贝虫属、炭疽杆菌、蜡样芽孢杆菌、汉氏巴尔通体、BK病毒、人芽囊原虫、皮炎芽生菌、百日咳博德特氏菌、伯氏疏螺旋体、疏螺旋体属、疏螺旋体属物种、布鲁氏菌属、马来布鲁线虫、布尼亚病毒科、洋葱伯克霍尔德杆菌和其他伯霍尔德杆菌属物种、鼻疽伯克霍尔德氏菌、类鼻疽伯克霍尔德氏菌、杯状病毒科、弯曲菌属、白色念珠菌、假丝酵母属物种、沙眼衣原体、肺炎衣原体、鹦鹉热衣原体、CJD朊病毒、华支睾吸虫、肉毒梭菌、艰难梭菌、产气荚膜梭菌、产气荚膜梭菌、梭菌属物种、破伤风梭菌、球孢子菌属物种、冠状病毒、白喉棒杆菌、贝氏柯克斯体、克里米亚-刚果出血热病毒、新生隐球菌、隐孢子虫属、巨细胞病毒(CMV)、登革热病毒(DEN-1、DEN-2、DEN-3和DEN-4)、脆弱双核阿米巴、埃博拉病毒(EBOV)、棘球属、中查菲埃立克体、伊氏埃立克体、埃立克体属、溶组织内阿米巴、肠球菌属、肠病毒属、肠病毒、主要是柯萨奇病毒A和肠病毒71(EV71)、表皮癣菌属物种、EB病毒(EBV)、大肠杆菌O157:H7、O111和O104：H4、肝片吸虫和巨片吸虫、FFI朊病毒、丝虫目超家族、黄病毒、土伦病弗朗西斯氏菌、梭菌属、念珠地丝菌、肠贾第虫、颚口线虫属物种、GSS朊病毒、瓜纳里托病毒、杜克雷嗜血杆菌、流感嗜血杆菌、幽门螺杆菌、亨尼帕病毒(亨德拉病毒，尼帕病毒)、甲型肝炎病毒、乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)、丁型肝炎病毒、戊型肝炎病毒、单纯疱疹病毒1和2(HSV-1和HSV-2)、荚膜组织胞浆菌、HIV(人免疫缺陷病毒)、威尼克外瓶霉(Hortaea werneckii)、人博卡病毒(HBoV)、人疱疹病毒6(HHV-6)和人疱疹病毒7(HHV-7)、人偏肺病毒(Human metapneumovirus)(hMPV)、人乳头瘤病毒(HPV)、人副流感病毒(HPIV)、人T细胞白血病病毒1(HTLV-1)、日本脑炎病毒、JC病毒、胡宁(Junin)病毒、卡波西肉瘤相关的疱疹病毒(KSHV)、金氏金氏菌、肉芽肿杆菌(Klebsiellagranulomatis)、克鲁朊病毒、拉沙病毒、嗜肺军团菌、利什曼原虫属、钩端螺旋体属、单核细胞增生性李斯特氏菌、淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒(LCMV)、马丘波(Machupo)病毒、马拉色菌属物种、马尔堡病毒、麻疹病毒、横川后殖吸虫、微孢子门(Microsporidia phylum)、接触传染性软疣病毒(MCV)、流行性腮腺炎病毒、麻风分枝杆菌(Mycobacterium leprae)和弥漫型麻疯分枝杆菌(Mycobacterium Lepromatosis)、结核分枝杆菌、溃疡分枝杆菌、肺炎支原体、福氏耐格里阿米巴原虫、美洲板口线虫、淋病奈瑟氏菌、脑膜炎奈瑟氏菌、星状诺卡氏菌、诺卡氏菌属物种、盘尾丝虫、恙虫病立克次氏体(Orientia tsutsugamushi)、正粘病毒科(流感)、巴西副球孢子菌、并殖吸虫属物种、卫氏并殖吸虫、细小病毒B19、巴斯德菌属、疟原虫属、杰氏肺囊虫、脊髓灰质炎病毒、狂犬病毒、呼吸道合胞病毒(RSV)、鼻病毒、鼻病毒、小蛛立克次氏体、立克次体属、普氏立克次氏体、立氏立克次氏体、斑疹伤寒立克次氏体、立夫特山谷热病毒(Rift Valley fever virus)、轮状病毒、风疹病毒、萨比亚病毒(Sabiavirus)、沙门氏菌属、疥螨、SARS冠状病毒、血吸虫属(Schistosoma)、志贺菌属、辛诺柏病毒、汉坦病毒、申克抱子丝菌、葡萄球菌属、葡萄球菌属、无乳链球菌、肺炎链球菌、化脓链球菌、粪类圆线虫、绦虫属、猪肉绦虫、蜱传脑炎病毒(TBEV)、犬弓蛔虫或猫弓蛔虫、刚地弓形虫、梅毒螺旋体、旋毛虫、阴道毛滴虫、毛癣菌属物种、毛首鞭形线虫、布氏锥虫、克氏锥虫、解脲支原体、水痘带状疱疹病毒(VZV)、水痘带状疱疹病毒(VZV)、大天花或小天花、vCJD朊病毒、委内瑞拉马脑炎病毒、霍乱弧菌、西尼罗病毒、西方马脑炎病毒、班氏吴策线虫、黄热病毒、小肠结肠炎耶尔森氏菌、鼠疫耶尔森菌、和假结核耶尔森氏菌。

在一些实施例中，表达本文所述的嵌合受体多肽(和任选地CAR/工程化的TCR)的工程化的免疫细胞(例如，T细胞)用于治疗致癌传染病，如通过致癌病毒感染。致癌病毒包括但不限于CMV、EBV、HBV、KSHV、HPV、MCV、HTLV-1、HIV-1、和HCV。嵌合受体多肽的靶抗原可以是病毒癌蛋白，该病毒癌蛋白包括但不限于Tax、E7、E6/E7、E6、HBx、EBNA蛋白(例如，EBNA3 A、EBNA3 C、和EBNA 2)、v-细胞周期蛋白、LANA1、LANA2、LMP-1、k-bZIP、RTA、KSHVK8、及其片段。参见Ahuja,Richa,et al.,Curr.Sci.,2014。

在一些实施例中，表达本文所述的嵌合受体多肽(和任选地CAR/工程化的TCR)的工程化的免疫细胞(例如，T细胞)适用于治疗自身免疫性疾病。自身免疫性疾病，或称自身免疫，是指生物体不能将自己的组成部分(低至亚分子水平)识别为“自身”，从而导致针对其自身细胞和组织的免疫应答。由这种异常免疫应答引起的任何疾病都称为自身免疫性疾病。明显的实例包括乳糜泻、1型糖尿病(IDDM)、系统性红斑狼疮(SLE)、舍格伦综合征、多发性硬化(MS)、桥本甲状腺炎、格雷夫斯病、特发性血小板减少性紫癜、和类风湿关节炎(RA)。

制品和试剂盒

在本发明的一些实施例中，提供了含有用于治疗靶抗原阳性疾病的材料的制品，该靶抗原阳性疾病如癌症(例如肾上腺皮质癌、膀胱癌、乳腺癌、宫颈癌、胆管癌、结直肠癌、食管癌、胶质母细胞瘤、胶质瘤、肝细胞癌、头颈癌、肾癌、肺癌、黑色素瘤、间皮瘤、多发性骨髓瘤、胰腺癌、嗜铬细胞瘤、浆细胞瘤、神经母细胞瘤、卵巢癌、前列腺癌、肉瘤、胃癌、子宫癌或甲状腺癌)、病毒感染(例如被CMV、EBV、HBV、KSHV、HPV、MCV、HTLV-1、HIV-1、或HCV感染)、或自身免疫性疾病(例如，乳糜泻、1型糖尿病(IDDM)、系统性红斑狼疮(SLE)、舍格伦综合征、多发性硬化(MS)、桥本甲状腺炎、格雷夫斯病、特发性血小板减少性紫癜、和类风湿关节炎(RA))。该制品可以包括容器和该容器上或与该容器相关的标签或包装插页。合适的容器包括例如，瓶、小瓶、注射器等。容器可以由多种材料(如玻璃或塑料)形成。通常，容器容纳有效治疗疾病或障碍的组合物(例如，表达本文所述的嵌合受体多肽(和任选地CAR/工程化的TCR)的工程化的免疫细胞组合物)，并且可具有无菌进入口(例如，容器可以是静脉内溶液袋或具有可由皮下注射针刺穿的塞子的小瓶)。该组合物中至少一种活性剂是在其表面存在本发明的嵌合受体多肽(和任选地CAR/工程化的TCR)的免疫细胞。标签或包装插页指示组合物用于治疗特定病症。标签或包装插页将进一步包含向患者施用免疫细胞组合物的说明书。还考虑了包含本文描述的组合疗法的制品和试剂盒。

包装插页是指通常包括在治疗产品的商业包装中的说明书，这些说明书含有关于使用此类治疗产品的适应症、用法、剂量、施用、禁忌症和/或警告的信息。在一些实施例中，包装插页指示组合物用于治疗靶抗原阳性癌症(如肾上腺皮质癌、膀胱癌、乳腺癌、宫颈癌、胆管癌、结直肠癌、食管癌、胶质母细胞瘤、胶质瘤、肝细胞癌、头颈癌、肾癌、肺癌、黑色素瘤、间皮瘤、多发性骨髓瘤、胰腺癌、嗜铬细胞瘤、浆细胞瘤、神经母细胞瘤、卵巢癌、前列腺癌、肉瘤、胃癌、子宫癌或甲状腺癌)。在其他实施例中，包装插页指示组合物用于治疗靶抗原阳性病毒感染(例如被CMV、EBV、HBV、KSHV、HPV、MCV、HTLV-1、HIV-1、或HCV感染)。在其他实施例中，包装插页指示组合物用于治疗靶抗原阳性自身免疫性疾病(例如，乳糜泻、1型糖尿病(IDDM)、系统性红斑狼疮(SLE)、舍格伦综合征、多发性硬化(MS)、桥本甲状腺炎、格雷夫斯病、特发性血小板减少性紫癜、和类风湿关节炎(RA))。在其他实施例中，包装插页指示组合物用于治疗选自下组的癌症，该组由以下组成：急性白血病(包括但不限于急性髓性白血病(AML)、B细胞急性淋巴性白血病(BALL)、T细胞急性淋巴性白血病(TALL)、和急性淋巴性白血病(ALL))、慢性白血病(包括但不限于慢性髓细胞性白血病(CML)和慢性淋巴细胞性白血病(CLL))、多发性骨髓瘤(MM)、骨髓增生异常综合征(MDS)、骨髓增生性肿瘤(MPN)、慢性髓细胞性白血病(CML)、和母细胞性浆细胞样树突状细胞肿瘤(BPDCN)。

另外地，该制品可以进一步包含第二容器，该容器包含药学上可接受的缓冲液，如抑菌性注射用水(BWFI)、磷酸盐缓冲盐水、林格氏溶液和右旋糖溶液。其可以进一步包括从商业和用户角度所希望的其他材料，包括其他缓冲液、稀释剂、过滤器、针头和注射器。

还提供了可用于各种目的的试剂盒，例如任选地与制品组合的用于治疗本文所述的靶抗原阳性疾病或障碍。本发明的试剂盒包括包含免疫细胞组合物(或单位剂型和/或制品)的一个或多个的容器，并且在一些实施例中，进一步包含另一种药剂(如本文所述的药剂)和/或根据本文所述的任一方法的使用说明。该试剂盒可进一步包含选择适合治疗个体的描述。本发明的试剂盒中提供的说明书典型地是标签或包装插页上的书面说明(例如，试剂盒中包含的纸片)，但机器可读的说明书(例如，磁性或光学存储盘上携带的说明)也是可以接受的。

例如，在一些实施例中，试剂盒包含组合物(例如，药物组合物)，该组合物包含在其表面上存在本文所述的嵌合受体多(和任选地CAR/工程化的TCR)的免疫细胞(例如，T细胞)。在一些实施例中，试剂盒包含a)包含在其表面上存在本文所述的嵌合受体多(和任选地CAR/工程化的TCR)的免疫细胞(例如，T细胞)的组合物(例如，药物组合物)，和b)有效量的至少一种其他药剂。在一些实施例中，试剂盒包含a)包含在其表面上存在本文所述的嵌合受体多(和任选地CAR/工程化的TCR)的免疫细胞(例如，T细胞)的组合物(例如，药物组合物)，和b)向个体施用该免疫细胞组合物用于治疗靶抗原阳性疾病(如癌症、自身免疫性疾病、或病毒感染)的说明书。在一些实施例中，试剂盒包含a)包含在其表面上存在本文所述的嵌合受体多(和任选地CAR/工程化的TCR)的免疫细胞(例如，T细胞)的组合物(例如，药物组合物)，b)有效量的至少一种其他药剂，和c)向个体施用该免疫细胞组合物和一种或多种其他药剂用于治疗靶抗原阳性疾病(如癌症、自身免疫性疾病、或病毒感染)的说明书。免疫细胞组合物和一种或多种其他药剂可以存在于单独的容器中，或者也可以存在于一个容器中。例如，试剂盒可包含一种不同的组合物或两种或更多种组合物，其中一种组合物包含免疫细胞，而另一种组合物包含另一种药剂。

在一些实施例中，试剂盒包含编码本文所述的嵌合受体多肽(和任选地CAR/工程化的TCR)的核酸(或核酸组)。在一些实施例中，试剂盒包含a)编码本文所述的嵌合受体多肽(和任选地CAR/工程化的TCR)的核酸(或核酸组)，和b)表达该核酸(或核酸组)的免疫细胞(例如，T细胞)。在一些实施例中，试剂盒包含a)编码本文所述的嵌合受体多肽(和任选地CAR/工程化的TCR)的核酸(或核酸组)，和b)以下的说明书：i)表达免疫细胞(例如，T细胞)中嵌合受体多肽(和任选地CAR/工程化的TCR)，ii)制备包含表达嵌合受体多肽(和任选地CAR/工程化的TCR)的免疫细胞的组合物，和iii)向个体施用包含表达嵌合受体多肽(和任选地CAR/工程化的TCR)的免疫细胞的组合物用于治疗靶抗原阳性疾病(如癌症、自身免疫性疾病、或病毒感染)。在一些实施例中，免疫细胞来源于待治疗的个体。在一些实施例中，试剂盒包含a)编码嵌合受体多肽(和任选地CAR/工程化的TCR)的核酸(或核酸组)，b)表达核酸(或核酸组)的免疫细胞(如T细胞)，和c)以下的说明书：i)表达宿主细胞中嵌合受体多肽(和任选地CAR/工程化的TCR)，ii)制备包含表达嵌合受体多肽(和任选地CAR/工程化的TCR)的免疫细胞的组合物，和iii)向个体施用包含表达嵌合受体多肽(和任选地CAR/工程化的TCR)的免疫细胞(例如T细胞)的组合物用于治疗靶抗原阳性疾病(如癌症、自身免疫性疾病、或病毒感染)。

本发明的试剂盒在合适的包装中。合适的包装包括但不限于小瓶、瓶、罐子、柔性包装(例如，密封的聚酯薄膜或塑料袋)等。试剂盒可以任选地提供其它组分，例如缓冲液和解释信息。因此本申请还提供了制品，其包括小瓶(如密封的小瓶)、瓶、罐子、柔性包装等。

与免疫细胞组合物的使用有关的说明书通常包括有关预期治疗的剂量、给药时间和施用途径的信息。容器可以是单位剂量、散装包装(如多剂量包装)或亚单位剂量。例如，可以提供含有足够剂量的本文公开的免疫细胞组合物的试剂盒，以对个体进行长时间的有效治疗，如一周、8天、9天、10天、11天、12天、13天、2周、3周、4周、6周、8周、3个月、4个月、5个月、7个月、8个月、9个月或更长时间中的任何一个。试剂盒还可以包括多个单位剂量的药物组合物和使用说明书，并且其包装的数量足以在药房(例如，医院药房和配药药房)中存储和使用。

本领域技术人员将会认识到，在本发明的范围和精神内，多个实施例是可能的。现在将参考以下非限制性实例更详细地描述本发明。以下实例进一步说明本发明，但当然不应解释为以任何方式限制其范围。

示例性实施例

实施例1.一种嵌合受体多肽，其包含：

a)细胞外靶标结合结构域；

b)细胞外TCR结合结构域；

c)包含第一TCR亚基的跨膜结构域的跨膜结构域；和

d)任选地，包含第二TCR亚基的细胞内结构域的细胞内结构域，

其中该第一TCR亚基和该第二TCR亚基均选自由以下组成的组：CD3ε、CD3γ、CD3δ、TCRα、TCRβ、TCRγ和TCRδ。

实施例2.如实施例1所述的嵌合受体多肽，其中该细胞外TCR结合结构域包含特异性识别选自下组的TCR亚基的TCR抗原结合结构域，该组由以下组成：TCRα、TCRβ、TCRγ、TCRδ、CD3ε、CD3δ、CD3γ和CD3ζ。

实施例3.如实施例2所述的嵌合受体多肽，其中该TCR抗原结合结构域特异性识别CD3ε、或TCRγ/δ。

实施例4.如实施例2或3所述的嵌合受体多肽，其中该TCR抗原结合结构域是单链Fv(scFv)或单域抗体(sdAb)。

实施例5.如实施例1-4中任一项所述的嵌合受体多肽，其中该细胞外TCR结合结构域包含串联排列的两个或更多个TCR抗原结合结构域。

实施例6.如实施例1-5中任一项所述的嵌合受体多肽，其中该第一TCR亚基和该第二TCR亚基均选自由以下组成的组：TCRα、TCRβ、TCRγ、和TCRδ，并且其中该嵌合受体多肽不包含该第一TCR亚基或该第二TCR亚基的细胞外结构域的可变区。

实施例7.如实施例6所述的嵌合受体多肽，其中该嵌合受体多肽不包含TCRα、TCRβ、TCRγ、和TCRδ中任一个的细胞外结构域的可变区。

实施例8.如实施例1-7中任一项所述的嵌合受体多肽，其中该嵌合受体多肽不包含该第一TCR亚基或该第二TCR亚基的细胞外结构域。

实施例9.如实施例8所述的嵌合受体多肽，其中该嵌合受体多肽不包含任何TCR亚基的细胞外结构域。

实施例10.如实施例1-9中任一项所述的嵌合受体多肽，其中该嵌合受体多肽不包含细胞内共刺激结构域。

实施例11.如实施例1-10中任一项所述的嵌合受体多肽，其中该第一TCR亚基和该第二TCR亚基不同。

实施例12.如实施例1-11中任一项所述的嵌合受体多肽，其中该第一TCR亚基是CD3ε。

实施例13.如实施例1-11中任一项所述的嵌合受体多肽，其中该第二TCR亚基是CD3ε。

实施例14.如实施例1-10中任一项所述的嵌合受体多肽，其中该第一TCR亚基和该第二TCR亚基相同。

实施例15.如实施例14所述的嵌合受体多肽，其中该嵌合受体多肽的跨膜结构域包含CD3ε的跨膜结构域，并且其中该嵌合受体多肽的细胞内结构域包含CD3ε的细胞内结构域。

实施例16.如实施例14所述的嵌合受体多肽，其中该嵌合受体多肽的跨膜结构域包含CD3γ的跨膜结构域，并且其中该嵌合受体多肽的细胞内结构域包含CD3γ的细胞内结构域。

实施例17.如实施例14所述的嵌合受体多肽，其中该嵌合受体多肽的跨膜结构域包含CD3δ的跨膜结构域，并且其中该嵌合受体多肽的细胞内结构域包含CD3δ的细胞内结构域。

实施例18.如实施例14所述的嵌合受体多肽，其中该嵌合受体多肽的跨膜结构域包含TCRα的跨膜结构域，并且其中该嵌合受体多肽的细胞内结构域包含TCRα的细胞内结构域。

实施例19.如实施例14所述的嵌合受体多肽，其中该嵌合受体多肽的跨膜结构域包含TCRβ的跨膜结构域，并且其中该嵌合受体多肽的细胞内结构域包含TCRβ的细胞内结构域。

实施例20.如实施例14所述的嵌合受体多肽，其中该嵌合受体多肽的跨膜结构域包含TCRγ的跨膜结构域，并且其中该嵌合受体多肽的细胞内结构域包含TCRγ的细胞内结构域。

实施例21.如实施例14所述的嵌合受体多肽，其中该嵌合受体多肽的跨膜结构域包含TCRδ的跨膜结构域，并且其中该嵌合受体多肽的细胞内结构域包含TCRδ的细胞内结构域。

实施例22.如实施例1-21中任一项所述的嵌合受体多肽，其中该细胞外靶标结合结构域在细胞外TCR结合结构域的N-末端。

实施例23.如实施例1-21中任一项所述的嵌合受体多肽，其中该细胞外靶标结合结构域在细胞外TCR结合结构域的C-末端。

实施例24.如实施例1-23中任一项所述的嵌合受体多肽，其中该细胞外靶标结合结构域包含特异性识别靶抗原的靶抗原结合结构域。

实施例25.如实施例24所述的嵌合受体多肽，其中该靶抗原结合结构域是scFv、sdAb、或设计型锚蛋白重复序列蛋白(DARPin)。

实施例26.如实施例24或25所述的嵌合受体多肽，其中该细胞外靶标结合结构域包含串联排列的两个或更多个靶抗原结合结构域。

实施例27.如实施例26所述的嵌合受体多肽，其中该两个或更多个靶抗原结合结构域各自特异性识别相同的靶抗原上的相同的表位。

实施例28.如实施例26所述的嵌合受体多肽，其中该两个或更多个靶抗原结合结构域各自特异性识别相同的靶抗原上的不同的表位。

实施例29.如实施例26所述的嵌合受体多肽，其中该两个或更多个靶抗原结合结构域各自特异性识别不同的靶抗原。

实施例30.如实施例1-29中任一项所述的嵌合受体多肽，其中该靶抗原选自由以下组成的组：BCMA、NY-ESO-1、VEGFR2、MAGE-A3、AFP、CD4、CD19、CD20、CD22、CD30、CD33、CD38、CD70、CD123、CEA、EGFR(如EGFRvIII)、GD2、GPC-2、GPC3、HER2、LILRB4、IL-13Rα2、IGF1R、间皮素、PSMA、ROR1、WT1、NKG2D、CLL1、TGFaRII、TGFbRII、CCR5、CXCR4、CCR4、HPV相关抗原、和EBV相关抗原(如LMP1和LMP2)。

实施例31.如实施例30所述的嵌合受体多肽，其中该靶抗原是BCMA。

实施例32.如实施例14-31中任一项所述的嵌合受体多肽，其中被该TCR抗原结合结构域识别的TCR亚基与第一TCR亚基和第二TCR亚基相同。

实施例33.如实施例1-31中任一项所述的嵌合受体多肽，其中被该TCR抗原结合结构域识别的TCR亚基与第一TCR亚基或第二TCR亚基不同。

实施例34.如实施例1-33中任一项所述的嵌合受体多肽，其进一步包含连接细胞外靶标结合结构域和细胞外TCR结合结构域的第一接头。

实施例35.如实施例1-34中任一项所述的嵌合受体多肽，其进一步包含连接细胞外靶标结合结构域和/或细胞外TCR结合结构域和跨膜结构域的第二接头。

实施例36.如实施例34或35所述的嵌合受体多肽，其中该第一接头和/或该第二接头是GS接头、α-螺旋接头、甘氨酸-丙氨酸聚合物接头、丙氨酸-丝氨酸聚合物接头、或IgG4-Fc接头。

实施例37.如实施例1-36中任一项所述的嵌合受体多肽，其进一步包含在细胞外靶标结合结构域或细胞外TCR结合结构域的N-末端处的信号肽。

实施例38.如实施例1-37中任一项所述的嵌合受体多肽，其进一步包含在该嵌合受体多肽的跨膜结构域N-末端的铰链区。

实施例39.如实施例39所述的嵌合受体多肽，其中该铰链区包含CD8的铰链区。

实施例40.如实施例1-39中任一项所述的嵌合受体多肽，其从N-末端到C-末端包含以下：a)任选的信号肽-细胞外靶标结合结构域-任选的第一接头-细胞外TCR结合结构域-任选的第二接头-任选的铰链区-跨膜结构域-细胞内结构域；或b)任选的信号肽-细胞外TCR结合结构域-任选的第一接头-细胞外靶标结合结构域-任选的第二接头-任选的铰链区-跨膜结构域-细胞内结构域。

实施例41.如实施例1和34-36中任一项所述的嵌合受体多肽，其从N-末端到C-末端包含：任选的信号肽-抗BCMA sdAb-第一接头-抗CD3εscFv-第二接头-没有CD3ε信号肽的全长CD3ε。

实施例42.如实施例1和34-36中任一项所述的嵌合受体多肽，其从N-末端到C-末端包含：任选的信号肽-抗BCMA sdAb-第一接头-抗CD3εscFv-第二接头-没有CD3γ信号肽的全长CD3γ。

实施例43.如实施例1和34-36中任一项所述的嵌合受体多肽，其从N-末端到C-末端包含：任选的信号肽-抗BCMA sdAb-第一接头-抗CD3εscFv-第二接头-没有CD3δ信号肽的全长CD3δ。

实施例44.如实施例1和34-39中任一项所述的嵌合受体多肽，其从N-末端到C-末端包含：任选的信号肽-抗BCMA sdAb-第一接头-抗CD3εscFv-第二接头-CD8铰链区-CD3ε跨膜结构域-CD3ε细胞内结构域。

实施例45.如实施例1和34-39中任一项所述的嵌合受体多肽，其从N-末端到C-末端包含：任选的信号肽-抗BCMA sdAb-第一接头-抗CD3εscFv-第二接头-CD8铰链区-CD3γ跨膜结构域-CD3γ细胞内结构域。

实施例46.如实施例1和34-39中任一项所述的嵌合受体多肽，其从N-末端到C-末端包含：任选的信号肽-抗BCMA sdAb-第一接头-抗CD3εscFv-第二接头-CD8铰链区-CD3δ跨膜结构域-CD3δ细胞内结构域。

实施例47.如实施例1和34-36中任一项所述的嵌合受体多肽，其从N-末端到C-末端包含：任选的信号肽-抗BCMA sdAb-第一接头-抗CD3εscFv-第二接头-TCRα恒定区-TCRα跨膜结构域-TCRα细胞内结构域。

实施例48.如实施例1和34-36中任一项所述的嵌合受体多肽，其从N-末端到C-末端包含：任选的信号肽-抗BCMA sdAb-第一接头-抗CD3εscFv-第二接头-TCRβ恒定区-TCRβ跨膜结构域-TCRβ细胞内结构域。

实施例49.如实施例1和34-36中任一项所述的嵌合受体多肽，其从N-末端到C-末端包含：任选的信号肽-抗BCMA sdAb-第一接头-抗CD3εscFv-第二接头-TCRγ恒定区-TCRγ跨膜结构域-TCRγ细胞内结构域。

实施例50.如实施例1和34-36中任一项所述的嵌合受体多肽，其从N-末端到C-末端包含：任选的信号肽-抗BCMA sdAb-第一接头-抗CD3εscFv-第二接头-TCRδ恒定区-TCRδ跨膜结构域-TCRδ细胞内结构域。

实施例51.如实施例1和34-36中任一项所述的嵌合受体多肽，其从N-末端到C-末端包含：任选的信号肽-抗BCMA sdAb-第一接头-抗CD3εscFv-第二接头-TCRα跨膜结构域-TCRα细胞内结构域。

实施例52.如实施例1和34-36中任一项所述的嵌合受体多肽，其从N-末端到C-末端包含：任选的信号肽-抗BCMA sdAb-第一接头-抗CD3εscFv-第二接头-TCRβ跨膜结构域-TCRβ细胞内结构域。

实施例53.如实施例1和34-36中任一项所述的嵌合受体多肽，其从N-末端到C-末端包含：任选的信号肽-抗BCMA sdAb-第一接头-抗CD3εscFv-第二接头-TCRγ跨膜结构域-TCRγ细胞内结构域。

实施例54.如实施例1和34-36中任一项所述的嵌合受体多肽，其从N-末端到C-末端包含：任选的信号肽-抗BCMA sdAb-第一接头-抗CD3εscFv-第二接头-TCRδ跨膜结构域-TCRδ细胞内结构域。

实施例55.如实施例1和34-36中任一项所述的嵌合受体多肽，其从N-末端到C-末端包含：任选的信号肽-抗BCMA sdAb-第一接头-抗TCR scFv-第二接头-TCRα恒定区-TCRα跨膜结构域-TCRα细胞内结构域。

实施例56.如实施例1和34-36中任一项所述的嵌合受体多肽，其从N-末端到C-末端包含：任选的信号肽-抗BCMA sdAb-第一接头-抗TCR scFv-第二接头-TCRβ恒定区-TCRβ跨膜结构域-TCRβ细胞内结构域。

实施例57.如实施例1和34-36中任一项所述的嵌合受体多肽，其从N-末端到C-末端包含：任选的信号肽-抗BCMA sdAb-第一接头-抗TCR scFv-第二接头-TCRγ恒定区-TCRγ跨膜结构域-TCRγ细胞内结构域。

实施例58.如实施例1和34-36中任一项所述的嵌合受体多肽，其从N-末端到C-末端包含：任选的信号肽-抗BCMA sdAb-第一接头-抗TCR scFv-第二接头-TCRδ恒定区-TCRδ跨膜结构域-TCRδ细胞内结构域。

实施例59.如实施例1和34-36中任一项所述的嵌合受体多肽，其从N-末端到C-末端包含：任选的信号肽-第一抗BCMA sdAb-第一接头-第二抗BCMA sdAb-第二接头-抗CD3εscFv-第三接头-没有CD3ε信号肽的全长CD3ε。

实施例60.如实施例34-59中任一项所述的嵌合受体多肽，其中该第一、第二、和/或第三接头包含SEQ ID NO:1-21、67、和68中任一个的序列。

实施例61.一种分离的核酸，其编码如实施例1-60中任一项所述的嵌合受体多肽。

实施例62.一种核酸载体，其包含一种或多种如实施例61所述的核酸。

实施例63.如实施例62所述的核酸载体，其中该核酸载体包含通过一个或多个连接序列连接的两种或更多种所述核酸。

实施例64.如实施例63所述的核酸载体，其中该连接序列选自由以下组成的组：编码P2A、T2A、E2A、F2A、BmCPV 2A、和BmIFV 2A的核酸、以及内部核糖体进入位点(IRES)序列。

实施例65.如实施例62-64中任一项所述的核酸载体，其从N-末端到C-末端包含编码以下的核酸：任选的第一信号肽-第一抗BCMA sdAb-第一接头-第一抗CD3εscFv-第二接头-TCRα恒定区-TCRα跨膜结构域-TCRα细胞内结构域-P2A-任选的第二信号肽-第二抗BCMAsdAb-第三接头-第二抗CD3εscFv-第四接头-TCRβ恒定区-TCRβ跨膜结构域-TCRβ细胞内结构域。

实施例66.如实施例62-64中任一项所述的核酸载体，其从N-末端到C-末端包含编码以下的核酸：任选的第一信号肽-第一抗BCMA sdAb-第一接头-第一抗CD3εscFv-第二接头-TCRγ恒定区-TCRγ跨膜结构域-TCRγ细胞内结构域-P2A-任选的第二信号肽-第二抗BCMA sdAb-第三接头-第二抗CD3εscFv-第四接头-TCRδ恒定区-TCRδ跨膜结构域-TCRδ细胞内结构域。

实施例67.如实施例62-64中任一项所述的核酸载体，其从N-末端到C-末端包含编码以下的核酸：任选的第一信号肽-第一抗BCMA sdAb-第一接头-第一抗CD3εscFv-第二接头-TCRα跨膜结构域-TCRα细胞内结构域-P2A-任选的第二信号肽-第二抗BCMA sdAb-第三接头-第二抗CD3εscFv-第四接头-TCRβ跨膜结构域-TCRβ细胞内结构域。

实施例68.如实施例62-64中任一项所述的核酸载体，其从N-末端到C-末端包含编码以下的核酸：任选的第一信号肽-第一抗BCMA sdAb-第一接头-第一抗CD3εscFv-第二接头-TCRγ跨膜结构域-TCRγ细胞内结构域-P2A-任选的第二信号肽-第二抗BCMA sdAb-第三接头-第二抗CD3εscFv-第四接头-TCRδ跨膜结构域-TCRδ细胞内结构域。

实施例69.如实施例62-64中任一项所述的核酸载体，其从N-末端到C-末端包含编码以下的核酸：任选的第一信号肽-第一抗BCMA sdAb-第一接头-第一抗TCR scFv-第二接头-TCRγ恒定区-TCRγ跨膜结构域-TCRγ细胞内结构域-P2A-任选的第二信号肽-第二抗BCMA sdAb-第三接头-第二抗TCR scFv-第四接头-TCRδ恒定区-TCRδ跨膜结构域-TCRδ细胞内结构域。

实施例70.一种分离的免疫细胞，其包含一种或多种如实施例1-60中任一项所述的嵌合受体多肽。

实施例71.如实施例70所述的分离的免疫细胞，其中该免疫细胞包含两种或更多种嵌合受体多肽。

实施例72.一种分离的免疫细胞，其包含如实施例61所述的核酸或如实施例62-69中任一项所述的核酸载体。

实施例73.如实施例70-72中任一项所述的分离的免疫细胞，其中该分离的免疫细胞选自由以下组成的组：Tαβ细胞、Tγδ细胞、效应T细胞、记忆T细胞、细胞毒性T细胞、辅助T细胞、自然杀伤T(NKT)细胞、调节性T细胞(Treg)、肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)。

实施例74.如实施例73所述的分离的免疫细胞，其为T细胞。

实施例75.如实施例70-74中任一项所述的分离的免疫细胞，其进一步包含嵌合抗原受体(CAR)。

实施例76.如实施例70-75中任一项所述的分离的免疫细胞，其进一步包含工程化的TCR。

实施例77.一种药物组合物，其包含如实施例70-76中任一项所述的分离的免疫细胞，以及任选的药学上可接受的赋形剂。

实施例78.一种治疗个体疾病的方法，该方法包括向该个体施用有效量的如实施例70-76中任一项所述的免疫细胞或如实施例77所述的药物组合物。

实施例79.如实施例78所述的方法，其中该药物组合物经静脉内、瘤内或皮下施用。

实施例80.如实施例78或79所述的方法，其中该疾病是癌症。

实施例81.如实施例80所述的方法，其中该癌症选自由以下组成的组：急性白血病、慢性白血病、多发性骨髓瘤(MM)、骨髓增生异常综合征(MDS)、骨髓增生性肿瘤(MPN)、慢性髓细胞性白血病(CML)、和母细胞性浆细胞样树突状细胞肿瘤(BPDCN)。

实施例82.如实施例81所述的方法，其中该急性白血病选自由以下组成的组：急性髓性白血病(AML)、B细胞急性淋巴性白血病(BALL)、T细胞急性淋巴性白血病(TALL)、和急性淋巴性白血病(ALL)。

实施例83.如实施例81所述的方法，其中该慢性白血病是慢性髓细胞性白血病(CML)或慢性淋巴细胞性白血病(CLL)。

实例

实例1.表达嵌合受体多肽的免疫细胞的制备和表征

设计并构建了嵌合受体多肽，其从N’到C’包含：信号肽，识别BCMA(SEQ ID NO:26)的单域抗体(sdAb)，第一GS接头(SEQ ID NO:3)、识别CD3(UCHT-1)(SEQ ID NO:24)的scFv，第二GS接头(SEQ ID NO:3)，和选自CD3ε(SEQ ID NO:28)、CD3γ(SEQ ID NO:29)、和CD3δ(SEQ ID NO:30)的TCR亚基的完全链(包括细胞外、跨膜、和细胞内结构域)(下文分别称为“sdAbBCMA-抗CD3 scFv-e”(SEQ ID NO:43)、“sdAbBCMA-抗CD3 scFv-g”(SEQ ID NO:44)、和“sdAbBCMA-抗CD3 scFv-d”(SEQ ID NO:45))。以图16A为例。还构建了具有串联的识别BCMA(SEQ ID NO:26)的sdAb的嵌合受体多肽，下文称为“串联的sdAbBCMA-抗CD3 scFv-e”(SEQ ID NO:61)，其从N’到C’包含：信号肽，识别BCMA(SEQ ID NO:26)的第一sdAb，第一GS接头(SEQ ID NO:1)，识别BCMA(SEQ ID NO:26)的第二sdAb，第二GS接头(SEQ ID NO:3)、识别CD3(UCHT-1)(SEQ ID NO:24)的scFv，第三GS接头(SEQ ID NO：3)，和CD3ε(SEQ ID NO:28)的完全链。构建第二组嵌合受体多肽以去除TCR亚基CD3ε、CD3γ、或CD3δ的细胞外结构域，该嵌合受体多肽从N’到C’包含：信号肽，识别BCMA(SEQ ID NO：26)的单域抗体(sdAb)，第一GS接头(SEQ ID NO：3)，识别CD3(UCHT-1)(SEQ ID NO：24)的scFv，第二GS接头(SEQ IDNO：1)，CD8铰链区(SEQ ID NO：31)，和选自CD3ε(即，“se”(SEQ ID NO：40))、CD3γ(即，“sg”(SEQ ID NO：41))、和CD3δ(即，“sd”(SEQ ID NO:42))的TCR亚基的跨膜结构域和细胞内结构域；下文分别称为“sdAbBCMA-抗CD3 scFv-se”(SEQ ID NO：46)、“sdAbBCMA-抗CD3 scFv-sg”(SEQ ID NO:47)、和“sdAbBCMA-抗CD3 scFv-sd”(SEQ ID NO：48)。以图16B为例。

构建了缺乏相应可变区的TCRα/β/γ/δ亚基，从N’到C’为：相应TCR亚基的恒定区-相应TCR亚基的跨膜结构域-相应TCR亚基的细胞内结构域，下文分别称为“taC”(SEQ IDNO:32)、“tbC”(SEQ ID NO:33)、“tgC”(SEQ ID NO:36)、和“tdC”(SEQ ID NO:37)。设计并构建了编码嵌合受体多肽的核酸构建体，这些嵌合受体多肽包含识别BCMA(SEQ ID NO:26)的sdAb，识别CD3(UCHT-1)(SEQ ID NO:24)的scFv，以及taC(SEQ ID NO:32)和tbC(SEQ IDNO:33)、或tgC(SEQ ID NO:36)和tdC(SEQ ID NO:37)(下文分别称为“sdAbBCMA-抗CD3scFv-taC/tbC”(SEQ ID NO:49)、和“sdAbBCMA-抗CD3 scFv-tgC/tdC”(SEQ ID NO:50))。简而言之，sdAbBCMA-抗CD3 scFv-taC/tbC(SEQ ID NO:49)从N’到C’包含：[第一信号肽，识别BCMA(SEQ ID NO：26)的第一sdAb，第一GS接头(SEQ ID NO:67)，识别CD3(UCHT-1)(SEQ IDNO:24)的第一scFv，第二GS接头(SEQ ID NO:3)，taC(SEQ ID NO:32)]-P2A(SEQ ID NO:66)-[第二信号肽，识别BCMA(SEQ ID NO:26)的第二sdAb，第三GS接头(SEQ ID NO:67)的，识别CD3(UCHT-1)(SEQ ID NO:24)的第二scFv，第四GS接头(SEQ ID NO:3)，tbC(SEQ IDNO:33)]。sdAbBCMA-抗CD3 scFv-tgC/tdC(SEQ ID NO：50)从N’到C’包含：[第一信号肽，识别BCMA(SEQ ID NO:26)的第一sdAb，第一GS接头(SEQ ID NO:67)，识别CD3(UCHT-1)(SEQID NO:24)的第一scFv，第二GS接头(SEQ ID NO:3)，tgC(SEQ ID NO:36)]-P2A(SEQ ID NO:66)-[第二信号肽，识别BCMA(SEQ ID NO：26)的第二sdAb，第三GS接头(SEQ ID NO:67)的，识别CD3(UCHT-1)(SEQ ID NO:24)的第二scFv，第四GS接头(SEQ ID NO:3)，tdC(SEQ IDNO:37)]。

构建了缺乏相应细胞外结构域的TCRα/β/γ/δ亚基，从N’到C’为：相应TCR亚基的跨膜结构域-相应TCR亚基的细胞内结构域，下文分别称为“sta”(SEQ ID NO:34)、“stb”(SEQ ID NO:35)、“stg”(SEQ ID NO：38)、和“std”(SEQ ID NO:39)。还制备了编码第二组嵌合受体多肽的核酸构建体，该第二组嵌合受体多肽具有与上述相似的构型，但缺乏TCRαβ或TCRγδ亚基的细胞外结构域(以下分别称为“sdAbBCMA-抗CD3 scFv-sta/stb”(SEQ ID NO：59)和“sdAbBCMA-抗CD3 scFv-stg/std”(SEQ ID NO:60)。简而言之，sdAbBCMA-抗CD3scFv-sta/stb(SEQ ID NO：59)从N’到C’包含：[第一信号肽，识别BCMA(SEQ ID NO：26)的第一sdAb，第一GS接头(SEQ ID NO:67)，识别CD3(UCHT-1)(SEQ ID NO:24)的第一scFv，第二GS接头(SEQ ID NO:3)，sta(SEQ ID NO:34)]-P2A(SEQ ID NO:66)-[第二信号肽，识别BCMA(SEQ ID NO:26)的第二sdAb，第三GS接头(SEQ ID NO:67)的，识别CD3(UCHT-1)(SEQ IDNO:24)的第二scFv，第四GS接头(SEQ ID NO:3)，stb(SEQ ID NO:35)]。sdAbBCMA-抗CD3scFv-stg/std(SEQ ID NO：60)从N’到C’包含：[第一信号肽，识别BCMA(SEQ ID NO:26)的第一sdAb，第一GS接头(SEQ ID NO:67)，识别CD3(UCHT-1)(SEQ ID NO:24)的第一scFv，第二GS接头(SEQ ID NO:3)，stg(SEQ ID NO:38)]-P2A(SEQ ID NO:66)-[第二信号肽，识别BCMA(SEQ ID NO:26)的第二sdAb，第三GS接头(SEQ ID NO:67)的，识别CD3(UCHT-1)(SEQ IDNO:24)的第二scFv，第四GS接头(SEQ ID NO:3)，std(SEQ ID NO:39)]。以图16D为例。

设计并构建了编码嵌合受体多肽的核酸构建体，该嵌合受体多肽包含识别BCMA(SEQ ID NO：26)的sdAb，识别TCR恒定结构域的TCR scFv(B1.1单克隆抗TCRγ/δAb；SEQ IDNO:27)，以及tgC(SEQ ID NO:36)和tdC(SEQ ID NO:37)，下文称为“sdAbBCMA-抗TCR Ab-tgC/tdC”(SEQ ID NO：64)。简而言之，sdAbBCMA-抗TCR Ab-tgC/tdC(SEQ ID NO:64)从N’到C’包含：[第一信号肽，识别BCMA(SEQ ID NO:26)的第一sdAb，第一GS接头(SEQ ID NO:4)，识别TCR恒定结构域(SEQ ID NO:27)的第一TCR抗体，第二GS接头(SEQ ID NO:3)，tgC(SEQID NO:36)]-P2A(SEQ ID NO:66)-[第二信号肽，识别BCMA(SEQ ID NO:26)的第二sdAb，第三GS接头(SEQ ID NO:4)，识别TCR恒定结构域(SEQ ID NO：27)的第二TCR抗体，第四GS接头(SEQ ID NO:3)，tdC(SEQ ID NO:37)]。以图16C为例。

在内部产生的EF1α启动子(pLVX-EF1A)控制下，将编码上述嵌合受体多肽的核酸克隆到慢病毒载体中。简而言之，通过EcoRI和BamHI将位于多克隆位点(MCS)上游的组成性活性的人巨细胞病毒即早期启动子(P

将包括pMDLg/pRRE(Addgene#12251)、pRSV-Rev(Addgene#12253)和pMD2.G(Addgene#12259)的慢病毒包装质粒混合物与携带编码上述嵌合受体多肽的相应核酸的pLVX-EF1A慢病毒载体以预先优化的比率与聚醚酰亚胺(PEI)预混合，然后充分混合并在室温下孵育5分钟。然后将转染混合物逐滴添加滴至293-T细胞中并轻轻混合。然后将细胞在37℃和5％CO

将上清液通过0.45μm PES过滤器过滤，然后用超速离心浓缩。超速离心后，小心弃去上清液，并用预冷的DPBS小心冲洗病毒沉淀物。然后测量病毒的浓度。将病毒适当等分，然后立即储存在-80℃。通过在T细胞系上进行功能转导来测定病毒效价。

从R10培养基中收集白细胞，然后将其与0.9％NaCl溶液按1:1(v/v)比率混合。将3mL lymphoprep培养基添加到15mL离心管中，然后将6mL的稀释的淋巴细胞混合物缓慢添加至lymphoprep的上层。将淋巴细胞混合液在20℃以800g不停地离心30分钟。然后用200μL移液器收集淋巴细胞血沉棕黄层。将收获的级分用至少6倍的0.9％NaCl或R10稀释以降低溶液的密度。然后将收获的级分在20℃以250g离心10分钟。将上清液完全吸出，并将10mL的R10添加到细胞沉淀物中。将混合物在20℃以250g进一步离心10分钟。然后将上清液吸出。将2mL 37℃预热的R10与100IU/mL IL-2添加到细胞沉淀物中，并将细胞沉淀物轻轻重悬。然后对细胞的数目进行计数，并为以后的实验准备PBMC样品。

使用美天旎(Miltenyi)泛T细胞分离试剂盒(目录号130-096-535)按照操作方案从PBMC中纯化人T细胞。随后将制备的T细胞用人T细胞活化/扩增试剂盒(Milteny#130-091-441)预活化48小时。通过每两个细胞使用一个加载的抗生物素MACSiBead颗粒(珠与细胞的比率为1:2)来实现T细胞的最佳活化。

收集预活化的T细胞，并将其悬浮/重悬于终浓度为300IU/mL IL-2的1640培养基中。用相同的培养基将慢病毒稀释到MOI＝5。将1E+06个预活化的T细胞在8μg/ml聚凝胺存在下用稀释的慢病毒转导，并在32℃以1000g离心1h。然后将转导的细胞转移到细胞培养箱中，在适当的条件下进行转基因表达。第二天，将转导的细胞离心并替换为新鲜的1640培养基(补充有300IU/mL IL-2)，每2天测量一次细胞浓度，并且添加新鲜的1640培养基(补充有300IU/mL IL-2)以继续T细胞扩增。表达嵌合受体多肽的T细胞称为“STS-T细胞”。

在6-24小时共培养测定中测定了STS-T细胞的细胞毒性。在实验中，通过离心收集STS-T细胞或未转染的T细胞(UnT)，然后将其用1640无酚红培养基(Invitrogen)和1.25％热灭活的FBS(Invitrogen)稀释到所希望的浓度。使用具有强表达靶抗原(即，BCMA)的靶细胞，如CHO-K1/BCMA细胞(组成型表达全长人BCMA蛋白的内部工程化的CHO细胞系)或RPMI-8226细胞(多发性骨髓瘤细胞系，ATCC，目录号CRM-CCL-155，批号63990046)；NCI-H929细胞(骨髓瘤细胞系，ATCC，目录号CRL-9068，批号61685273)。将STS-T细胞和靶细胞以不同的效应子与靶标比率(E∶T)在37℃于96孔板中共培养6-24小时。其他孔仅含有测定缓冲液(1640无酚红培养基加1.25％hiFBS)，仅含有靶细胞(T)，仅含有效应细胞(E)和最大释放量的靶细胞(含1％triton-X 100溶液的靶细胞)。每种条件一式三份进行，并且通过LDH测定试剂盒(Roche，目录号11644793001)检测STS-T细胞对靶细胞的细胞毒性。共培养6-24小时后，将测定板离心，并且将上清液转移至新的96孔板中。根据制造商手册，在含有上清液的每个孔中加入等体积的LDH测定试剂。将反应在15℃至25℃孵育约30min。然后使用

％靶细胞溶解＝(OD

在6-24小时共培养测定中测定了STS-T细胞的细胞毒性。在实验中，通过离心收集STS-T细胞或未转染的T细胞(UnT)，然后将其用1640无酚红培养基(Invitrogen)和1.25％热灭活的FBS(Invitrogen)稀释到所希望的浓度。使用具有强表达BCMA和荧光素酶的肿瘤细胞，如NCI-H929-Luc细胞(骨髓瘤细胞系，ATCC，目录号CRL-9068，批号61685273)。将STS-T细胞和靶细胞以不同的效应子与靶标比率(E：T)在37℃于96孔板中共培养6-24小时。其他孔中仅装载靶细胞(T)和最大释放量的靶细胞(含1％triton-X 100溶液的靶细胞)。每种条件一式三份进行，并且通过One-Glo测定试剂盒(Promega，目录号E6110)检测STS-T细胞对靶细胞的细胞毒性。

共培养后，将测定板短暂离心(去除上清液)，然后根据制造商手册将等体积(与培养基相等)的One-Glo检测试剂添加到含有细胞的每个孔中。将板在室温下孵育约3min。然后使用

％靶细胞溶解＝(1-(RLU

收集细胞毒性测定中从测定板中转移出来的上清液用于细胞因子释放分析。将上清液转移到新的96孔板中，然后将

通常推荐使用4参数逻辑斯谛(4PL)曲线来拟合ELISA标准曲线。与线性分析相比，这种回归能够在更大的浓度范围内准确测量未知样品，使其非常适合于分析生物系统，如细胞因子释放。

实例2.STS-T细胞的细胞毒性和细胞因子释放测定

通过离心收集实例1中所述的STS-T细胞(或未转染的T细胞(UnT)，对照)和靶细胞，然后将其用测定缓冲液(1640无酚红培养基加1.25％hiFBS)稀释到所希望的浓度。然后将STS-T细胞(或对照UnT)和RPMI-8226细胞(多发性骨髓瘤细胞系)以E∶T为1.25，在37℃于96孔板中共培养20小时。共培养后将上清液从每个孔中转移出来，用于检测LDH的释放和IFNγ的分泌。实例1中描述了详细的方法。

图10A和图10B提供了各种STS-T细胞对RPMI-8226细胞(多发性骨髓瘤细胞系，ATCC，目录号CRM-CCL-155，批号63990046)的细胞杀伤测定结果，这些STS-T细胞包括表达sdAbBCMA-抗CD3 scFv-e、sdAbBCMA-抗CD3 scFv-g、和sdAb BCMA-抗CD3 scFv-d的STS-T细胞。如图10A和图10B所示，与未转染的T细胞(UnT)相比，sdAbBCMA-抗CD3 scFv-e、sdAbBCMA-抗CD3 scFv-g、和sdAbBCMA-抗CD3 scFv-d均显示出对RPMI-8226细胞(多发性骨髓瘤细胞系，ATCC，目录号CRM-CCL-155，批号63990046)的显著的细胞毒性和对IFNγ释放的强诱导，其中sdAbBCMA-抗CD3 scFv-e显示出最强的细胞毒性(图10A)和IFNγ释放(图10B)。

图11A和图11B提供了各种STS-T细胞对RPMI-8226细胞的细胞杀伤测定结果，这些STS-T细胞包括表达sdAbBCMA-抗CD3 scFv-se、sdAbBCMA-抗CD3scFv-sg、和sdAbBCMA-抗CD3 scFv-sd的STS-T细胞。如图11A和图11B所示，与未转染的T细胞(UnT)相比，sdAbBCMA-抗CD3 scFv-se、sdAbBCMA-抗CD3 scFv-sg、和sdAbBCMA-抗CD3 scFv-sd均显示出对RPMI-8226细胞的显著的细胞毒性和对IFNγ释放的强诱导。

这些结果表明，具有或不具有CD3ε/CD3γ/CD3δ的细胞外结构域的嵌合受体多肽均能有效地诱导靶肿瘤细胞的细胞毒性和细胞因子释放。

图13示出了NCI-H929-Luc细胞(在NCI-H929细胞上内部制备的荧光素酶表达的稳定细胞系)上表达sdAbBCMA-抗TCR Ab-tgC/tdC的STS-T细胞的细胞杀伤测定结果。如图13所示，与未转染的T细胞相比，sdAbBCMA-抗TCR Ab-tgC/tdC显示出对靶肿瘤细胞的显著的细胞毒性。

图14示出了CHO-K1/BCMA细胞(组成型表达全长人BCMA蛋白的内部工程化的CHO细胞系)上表达sdAbBCMA-抗CD3 scFv-sta/stb的STS-T细胞的细胞杀伤测定结果。如图14所示，与未转染的T细胞相比，sdAbBCMA-抗CD3 scFv-sta/stb显示出对靶肿瘤细胞的显著的细胞毒性。

这些结果表明，具有或不具有TCRα/β/γ/δ的恒定结构域的嵌合受体多肽均能有效地诱导靶肿瘤细胞的细胞毒性。

图15示出了CHO-K1/BCMA细胞(组成型表达全长人BCMA蛋白的内部工程化的CHO细胞系)上表达串联的sdAbBCMA-抗CD3 scFv-e的STS-T细胞的细胞杀伤测定结果。如图15所示，与未转染的T细胞相比，串联的sdAbBCMA-抗CD3 scFv-e显示出对靶肿瘤细胞的显著的细胞毒性。

实例3.TCR和CD3在STS-T细胞中的表达

构建了来自实例1的sdAbBCMA-抗CD3 scFv-sd(SEQ ID NO：48)，并在T细胞中表达。转导后第5天，收集T细胞并将其用BCMA蛋白(人BCMA蛋白Fc标签，ACRO，目录号BC7-H5254)染色以检测外源受体表达，使用抗TCRα/β(Biolegend，目录号306710)检测内源性TCR表达，以及使用抗CD3抗体(Biolegend，目录号300439)检测内源性CD3表达。如图12所示，与未转染的T细胞(UnT)相比，sdAbBCMA-抗CD3 scFv-sd保持与未转染的T细胞相同的内源TCRα/β和内源CD3表达水平。这表明本发明的嵌合受体多肽并不影响内源TCR表达和/或功能。

序列表

<110> 南京传奇生物科技有限公司

<120> 嵌合受体多肽及其用途

<130> 76142-20015.41

<150> PCT/CN2019/071609

<151> 2019-01-14

<160> 68

<170> Windows用FastSEQ 4.0版

<210> 1

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 接头

<400> 1

Gly Gly Gly Gly Ser

1 5

<210> 2

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 接头

<400> 2

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

1 5 10

<210> 3

<211> 15

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 接头

<400> 3

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

1 5 10 15

<210> 4

<211> 20

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 接头

<400> 4

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly

1 5 10 15

Gly Gly Gly Ser

20

<210> 5

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 接头

<400> 5

Gly Gly Ser Gly Gly Ser

1 5

<210> 6

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 接头

<400> 6

Ser Gly Gly Gly Gly Ser

1 5

<210> 7

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 接头

<400> 7

Gly Arg Ala Gly Gly Gly Gly Ala Gly Gly Gly Gly

1 5 10

<210> 8

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 接头

<400> 8

Gly Arg Ala Gly Gly Gly

1 5

<210> 9

<211> 1

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 接头

<220>

<221> 变体

<222> (1)...(1)

<223> 可以重复出现一个或多个

<400> 9

Gly

1

<210> 10

<211> 2

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 接头

<220>

<221> 变体

<222> (1)...(2)

<223> 可以重复出现一个或多个

<400> 10

Gly Ser

1

<210> 11

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 接头

<220>

<221> 变体

<222> (1)...(5)

<223> 可以重复出现一个或多个

<400> 11

Gly Ser Gly Gly Ser

1 5

<210> 12

<211> 4

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 接头

<220>

<221> 变体

<222> (1)...(4)

<223> 可以重复出现一个或多个

<400> 12

Gly Gly Gly Ser

1

<210> 13

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 接头

<220>

<221> 变体

<222> (1)...(5)

<223> 可以重复出现一个或多个

<400> 13

Gly Gly Gly Gly Ser

1 5

<210> 14

<211> 2

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 接头

<400> 14

Gly Gly

1

<210> 15

<211> 4

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 接头

<400> 15

Gly Gly Ser Gly

1

<210> 16

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 接头

<400> 16

Gly Gly Ser Gly Gly

1 5

<210> 17

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 接头

<400> 17

Gly Ser Gly Ser Gly

1 5

<210> 18

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 接头

<400> 18

Gly Ser Gly Gly Gly

1 5

<210> 19

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 接头

<400> 19

Gly Gly Gly Ser Gly

1 5

<210> 20

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 接头

<400> 20

Gly Ser Ser Ser Gly

1 5

<210> 21

<211> 229

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 接头

<400> 21

Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe

1 5 10 15

Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr

20 25 30

Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val

35 40 45

Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val

50 55 60

Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Gln Ser

65 70 75 80

Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu

85 90 95

Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser

100 105 110

Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro

115 120 125

Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln

130 135 140

Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala

145 150 155 160

Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr

165 170 175

Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu

180 185 190

Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser

195 200 205

Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser

210 215 220

Leu Ser Leu Gly Lys

225

<210> 22

<211> 117

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗CD3 sdAb

<400> 22

Gln Val Lys Leu Glu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Val Ser Cys Thr Ala Ser Gly Arg Thr Phe Asp Thr Met

20 25 30

Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val Ala Ala

35 40 45

Val Arg Trp Ser Ser Gly Asn Thr Leu Tyr Gly Asn Thr Val Lys Gly

50 55 60

Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ala Thr Asn Thr Val Tyr Leu Gln

65 70 75 80

Met Ser Ser Leu Lys His Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Ala

85 90 95

Arg Val Gly Gly Arg Gly Ala Ala Asp His Trp Gly Gln Gly Thr Gln

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 23

<211> 122

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗CD3 sdAb

<400> 23

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Thr Phe Ser Ser Arg

20 25 30

Ala Val Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Gln Phe Val

35 40 45

Ala Ala Ile Asp Ser Gly Gly Gly Glu Thr Gly Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Ala Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Val Ala Asp Leu Leu Val Thr Trp Pro Arg Ala Tyr Lys Tyr Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 24

<211> 250

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗CD3 scFv（UCHT1）

<400> 24

Met Asp Ile Gln Met Thr Gln Thr Thr Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu

1 5 10 15

Gly Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Arg Asn

20 25 30

Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Val Lys Leu Leu

35 40 45

Ile Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Lys Phe Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Asn Leu Glu

65 70 75 80

Gln Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro

85 90 95

Trp Thr Phe Ala Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly Gly Gly Gly

100 105 110

Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

115 120 125

Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala

130 135 140

Ser Met Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr

145 150 155 160

Thr Met Asn Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Asn Leu Glu Trp Met

165 170 175

Gly Leu Ile Asn Pro Tyr Lys Gly Val Ser Thr Tyr Asn Gln Lys Phe

180 185 190

Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr

195 200 205

Met Glu Leu Leu Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys

210 215 220

Ala Arg Ser Gly Tyr Tyr Gly Asp Ser Asp Trp Tyr Phe Asp Val Trp

225 230 235 240

Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Phe Ser

245 250

<210> 25

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> MMP序列

<400> 25

Pro Leu Gly Leu Ala Gly

1 5

<210> 26

<211> 118

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗BCMA sdAb

<400> 26

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Thr Phe Thr Met Gly

20 25 30

Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val Ala Ala Ile

35 40 45

Ser Leu Ser Pro Thr Leu Ala Tyr Tyr Ala Glu Ser Val Lys Gly Arg

50 55 60

Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Val Leu Gln Met

65 70 75 80

Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys Ala Ala Asp

85 90 95

Arg Lys Ser Val Met Ser Ile Arg Pro Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Gln Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 27

<211> 241

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗TCRγ/δ单克隆抗体（B1.1）

<400> 27

Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ile Ser Asp Tyr Thr Phe Ser Asn Ser

20 25 30

Trp Met Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Arg Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Thr Lys Tyr Asn Gly Glu Phe

50 55 60

Lys Ala Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ala Arg Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Gln Leu Asn Asn Leu Thr Ser Val Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys

85 90 95

Ala Arg Trp Glu Arg Tyr Asp Gly Gly Phe Thr Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Pro Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly

115 120 125

Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser

130 135 140

Leu Ser Ala Ser Val Gly Glu Thr Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser

145 150 155 160

Glu Asn Ile Tyr Ser Tyr Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Gln Gly Lys

165 170 175

Ser Pro Gln Leu Leu Val Tyr Tyr Ala Asn Thr Leu Ala Glu Gly Val

180 185 190

Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Tyr Gly Thr Gln Phe Ser Leu Lys

195 200 205

Ile Asn Ser Leu Gln Pro Val Asp Phe Gly Asn Tyr Tyr Cys Gln His

210 215 220

His Tyr Gly Leu Pro Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile

225 230 235 240

Lys

<210> 28

<211> 207

<212> PRT

<213> 智人

<400> 28

Met Gln Ser Gly Thr His Trp Arg Val Leu Gly Leu Cys Leu Leu Ser

1 5 10 15

Val Gly Val Trp Gly Gln Asp Gly Asn Glu Glu Met Gly Gly Ile Thr

20 25 30

Gln Thr Pro Tyr Lys Val Ser Ile Ser Gly Thr Thr Val Ile Leu Thr

35 40 45

Cys Pro Gln Tyr Pro Gly Ser Glu Ile Leu Trp Gln His Asn Asp Lys

50 55 60

Asn Ile Gly Gly Asp Glu Asp Asp Lys Asn Ile Gly Ser Asp Glu Asp

65 70 75 80

His Leu Ser Leu Lys Glu Phe Ser Glu Leu Glu Gln Ser Gly Tyr Tyr

85 90 95

Val Cys Tyr Pro Arg Gly Ser Lys Pro Glu Asp Ala Asn Phe Tyr Leu

100 105 110

Tyr Leu Arg Ala Arg Val Cys Glu Asn Cys Met Glu Met Asp Val Met

115 120 125

Ser Val Ala Thr Ile Val Ile Val Asp Ile Cys Ile Thr Gly Gly Leu

130 135 140

Leu Leu Leu Val Tyr Tyr Trp Ser Lys Asn Arg Lys Ala Lys Ala Lys

145 150 155 160

Pro Val Thr Arg Gly Ala Gly Ala Gly Gly Arg Gln Arg Gly Gln Asn

165 170 175

Lys Glu Arg Pro Pro Pro Val Pro Asn Pro Asp Tyr Glu Pro Ile Arg

180 185 190

Lys Gly Gln Arg Asp Leu Tyr Ser Gly Leu Asn Gln Arg Arg Ile

195 200 205

<210> 29

<211> 182

<212> PRT

<213> 智人

<400> 29

Met Glu Gln Gly Lys Gly Leu Ala Val Leu Ile Leu Ala Ile Ile Leu

1 5 10 15

Leu Gln Gly Thr Leu Ala Gln Ser Ile Lys Gly Asn His Leu Val Lys

20 25 30

Val Tyr Asp Tyr Gln Glu Asp Gly Ser Val Leu Leu Thr Cys Asp Ala

35 40 45

Glu Ala Lys Asn Ile Thr Trp Phe Lys Asp Gly Lys Met Ile Gly Phe

50 55 60

Leu Thr Glu Asp Lys Lys Lys Trp Asn Leu Gly Ser Asn Ala Lys Asp

65 70 75 80

Pro Arg Gly Met Tyr Gln Cys Lys Gly Ser Gln Asn Lys Ser Lys Pro

85 90 95

Leu Gln Val Tyr Tyr Arg Met Cys Gln Asn Cys Ile Glu Leu Asn Ala

100 105 110

Ala Thr Ile Ser Gly Phe Leu Phe Ala Glu Ile Val Ser Ile Phe Val

115 120 125

Leu Ala Val Gly Val Tyr Phe Ile Ala Gly Gln Asp Gly Val Arg Gln

130 135 140

Ser Arg Ala Ser Asp Lys Gln Thr Leu Leu Pro Asn Asp Gln Leu Tyr

145 150 155 160

Gln Pro Leu Lys Asp Arg Glu Asp Asp Gln Tyr Ser His Leu Gln Gly

165 170 175

Asn Gln Leu Arg Arg Asn

180

<210> 30

<211> 171

<212> PRT

<213> 智人

<400> 30

Met Glu His Ser Thr Phe Leu Ser Gly Leu Val Leu Ala Thr Leu Leu

1 5 10 15

Ser Gln Val Ser Pro Phe Lys Ile Pro Ile Glu Glu Leu Glu Asp Arg

20 25 30

Val Phe Val Asn Cys Asn Thr Ser Ile Thr Trp Val Glu Gly Thr Val

35 40 45

Gly Thr Leu Leu Ser Asp Ile Thr Arg Leu Asp Leu Gly Lys Arg Ile

50 55 60

Leu Asp Pro Arg Gly Ile Tyr Arg Cys Asn Gly Thr Asp Ile Tyr Lys

65 70 75 80

Asp Lys Glu Ser Thr Val Gln Val His Tyr Arg Met Cys Gln Ser Cys

85 90 95

Val Glu Leu Asp Pro Ala Thr Val Ala Gly Ile Ile Val Thr Asp Val

100 105 110

Ile Ala Thr Leu Leu Leu Ala Leu Gly Val Phe Cys Phe Ala Gly His

115 120 125

Glu Thr Gly Arg Leu Ser Gly Ala Ala Asp Thr Gln Ala Leu Leu Arg

130 135 140

Asn Asp Gln Val Tyr Gln Pro Leu Arg Asp Arg Asp Asp Ala Gln Tyr

145 150 155 160

Ser His Leu Gly Gly Asn Trp Ala Arg Asn Lys

165 170

<210> 31

<211> 45

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CD8铰链

<400> 31

Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala

1 5 10 15

Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly

20 25 30

Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp

35 40 45

<210> 32

<211> 142

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> taC

<400> 32

Pro Asn Ile Gln Asn Pro Asp Pro Ala Val Tyr Gln Leu Arg Asp Ser

1 5 10 15

Lys Ser Ser Asp Lys Ser Val Cys Leu Phe Thr Asp Phe Asp Ser Gln

20 25 30

Thr Asn Val Ser Gln Ser Lys Asp Ser Asp Val Tyr Ile Thr Asp Lys

35 40 45

Thr Val Leu Asp Met Arg Ser Met Asp Phe Lys Ser Asn Ser Ala Val

50 55 60

Ala Trp Ser Asn Lys Ser Asp Phe Ala Cys Ala Asn Ala Phe Asn Asn

65 70 75 80

Ser Ile Ile Pro Glu Asp Thr Phe Phe Pro Ser Pro Glu Ser Ser Cys

85 90 95

Asp Val Lys Leu Val Glu Lys Ser Phe Glu Thr Asp Thr Asn Leu Asn

100 105 110

Phe Gln Asn Leu Ser Val Ile Gly Phe Arg Ile Leu Leu Leu Lys Val

115 120 125

Ala Gly Phe Asn Leu Leu Met Thr Leu Arg Leu Trp Ser Ser

130 135 140

<210> 33

<211> 177

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> tbC

<400> 33

Glu Asp Leu Asn Lys Val Phe Pro Pro Glu Val Ala Val Phe Glu Pro

1 5 10 15

Ser Glu Ala Glu Ile Ser His Thr Gln Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu

20 25 30

Ala Thr Gly Phe Phe Pro Asp His Val Glu Leu Ser Trp Trp Val Asn

35 40 45

Gly Lys Glu Val His Ser Gly Val Ser Thr Asp Pro Gln Pro Leu Lys

50 55 60

Glu Gln Pro Ala Leu Asn Asp Ser Arg Tyr Cys Leu Ser Ser Arg Leu

65 70 75 80

Arg Val Ser Ala Thr Phe Trp Gln Asn Pro Arg Asn His Phe Arg Cys

85 90 95

Gln Val Gln Phe Tyr Gly Leu Ser Glu Asn Asp Glu Trp Thr Gln Asp

100 105 110

Arg Ala Lys Pro Val Thr Gln Ile Val Ser Ala Glu Ala Trp Gly Arg

115 120 125

Ala Asp Cys Gly Phe Thr Ser Val Ser Tyr Gln Gln Gly Val Leu Ser

130 135 140

Ala Thr Ile Leu Tyr Glu Ile Leu Leu Gly Lys Ala Thr Leu Tyr Ala

145 150 155 160

Val Leu Val Ser Ala Leu Val Leu Met Ala Met Val Lys Arg Lys Asp

165 170 175

Phe

<210> 34

<211> 25

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> sta

<400> 34

Val Ile Gly Phe Arg Ile Leu Leu Leu Lys Val Ala Gly Phe Asn Leu

1 5 10 15

Leu Met Thr Leu Arg Leu Trp Ser Ser

20 25

<210> 35

<211> 27

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> stb

<400> 35

Ile Leu Leu Gly Lys Ala Thr Leu Tyr Ala Val Leu Val Ser Ala Leu

1 5 10 15

Val Leu Met Ala Met Val Lys Arg Lys Asp Phe

20 25

<210> 36

<211> 173

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> tgC

<400> 36

Asp Lys Gln Leu Asp Ala Asp Val Ser Pro Lys Pro Thr Ile Phe Leu

1 5 10 15

Pro Ser Ile Ala Glu Thr Lys Leu Gln Lys Ala Gly Thr Tyr Leu Cys

20 25 30

Leu Leu Glu Lys Phe Phe Pro Asp Val Ile Lys Ile His Trp Gln Glu

35 40 45

Lys Lys Ser Asn Thr Ile Leu Gly Ser Gln Glu Gly Asn Thr Met Lys

50 55 60

Thr Asn Asp Thr Tyr Met Lys Phe Ser Trp Leu Thr Val Pro Glu Lys

65 70 75 80

Ser Leu Asp Lys Glu His Arg Cys Ile Val Arg His Glu Asn Asn Lys

85 90 95

Asn Gly Val Asp Gln Glu Ile Ile Phe Pro Pro Ile Lys Thr Asp Val

100 105 110

Ile Thr Met Asp Pro Lys Asp Asn Cys Ser Lys Asp Ala Asn Asp Thr

115 120 125

Leu Leu Leu Gln Leu Thr Asn Thr Ser Ala Tyr Tyr Met Tyr Leu Leu

130 135 140

Leu Leu Leu Lys Ser Val Val Tyr Phe Ala Ile Ile Thr Cys Cys Leu

145 150 155 160

Leu Arg Arg Thr Ala Phe Cys Cys Asn Gly Glu Lys Ser

165 170

<210> 37

<211> 153

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> tdC

<400> 37

Ser Gln Pro His Thr Lys Pro Ser Val Phe Val Met Lys Asn Gly Thr

1 5 10 15

Asn Val Ala Cys Leu Val Lys Glu Phe Tyr Pro Lys Asp Ile Arg Ile

20 25 30

Asn Leu Val Ser Ser Lys Lys Ile Thr Glu Phe Asp Pro Ala Ile Val

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Asp Ser Asn Ser Val Thr Cys Ser Val Gln His Asp Asn Lys Thr Val

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Pro Lys Ala Ile Val His Thr Glu Lys Val Asn Met Met Ser Leu Thr

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<220>

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20

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Ile

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<220>

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<220>

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<220>

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

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<210> 47

<211> 521

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

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Phe Phe Leu

1170

<210> 65

<211> 490

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> sdAbBCMA-抗CD3 scFv-CD4

<400> 65

Met Asp Phe Gln Val Gln Ile Phe Ser Phe Leu Leu Ile Ser Ala Ser

1 5 10 15

Val Ile Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala

20 25 30

Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Thr Phe Thr

35 40 45

Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val Ala

50 55 60

Ala Ile Ser Leu Ser Pro Thr Leu Ala Tyr Tyr Ala Glu Ser Val Lys

65 70 75 80

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Val Leu

85 90 95

Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys Ala

100 105 110

Ala Asp Arg Lys Ser Val Met Ser Ile Arg Pro Asp Tyr Trp Gly Gln

115 120 125

Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly

130 135 140

Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Met Asp Ile Gln Met Thr Gln Thr Thr

145 150 155 160

Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys Arg

165 170 175

Ala Ser Gln Asp Ile Arg Asn Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro

180 185 190

Asp Gly Thr Val Lys Leu Leu Ile Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu His Ser

195 200 205

Gly Val Pro Ser Lys Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser

210 215 220

Leu Thr Ile Ser Asn Leu Glu Gln Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys

225 230 235 240

Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro Trp Thr Phe Ala Gly Gly Thr Lys Leu

245 250 255

Glu Ile Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly

260 265 270

Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro

275 280 285

Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala Ser Met Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser

290 295 300

Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr Thr Met Asn Trp Val Lys Gln Ser His

305 310 315 320

Gly Lys Asn Leu Glu Trp Met Gly Leu Ile Asn Pro Tyr Lys Gly Val

325 330 335

Ser Thr Tyr Asn Gln Lys Phe Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp

340 345 350

Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Leu Ser Leu Thr Ser Glu

355 360 365

Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Ser Gly Tyr Tyr Gly Asp Ser

370 375 380

Asp Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Phe

385 390 395 400

Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gln Val Leu Leu Glu Ser Asn Ile

405 410 415

Lys Val Leu Pro Thr Trp Ser Thr Pro Val Gln Pro Met Ala Leu Ile

420 425 430

Val Leu Gly Gly Val Ala Gly Leu Leu Leu Phe Ile Gly Leu Gly Ile

435 440 445

Phe Phe Cys Val Arg Cys Arg His Arg Arg Arg Gln Ala Glu Arg Met

450 455 460

Ser Gln Ile Lys Arg Leu Leu Ser Glu Lys Lys Thr Cys Gln Cys Pro

465 470 475 480

His Arg Phe Gln Lys Thr Cys Ser Pro Ile

485 490

<210> 66

<211> 22

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> P2A

<400> 66

Gly Ser Gly Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val

1 5 10 15

Glu Glu Asn Pro Gly Pro

20

<210> 67

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 接头

<400> 67

Gly Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

1 5 10 15

<210> 68

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 接头

<400> 68

Gly Gly Gly Gly Ser Ser

1 5