用于治疗结节性硬化症的加奈索酮

本申请要求于2019年12月6日提交的美国临时申请第62/944,549号的权益，其全部内容以引用的方式并入本文中。

背景技术

结节性硬化，又称为结节性硬化症(TSC)，是一种罕见的多系统遗传病症，它的特征是在身体的许多部位生长许多非癌性(良性)肿瘤(Northrup等人,(2013),PediatrNeurol.,49(4):243-254。这些肿瘤可能发生在皮肤、大脑、肾脏和其它器官中，在许多情况下会导致严重的健康问题。同上。

癫痫是TSC患者最常见的神经症状(“TSC相关癫痫”)，并且是发病率和死亡率的重要原因。Jülich和Sahin(2014),Pediatric Neurol.,50:290-296。婴儿痉挛症是婴儿期呈现的最常见的癫痫发作类型，并且表示50％患者癫痫的首发表现。同上。在年龄较大的儿童和成人中，局灶性受损知觉癫痫发作(以前称为复杂部分性癫痫发作)是最常见的。同上。也可能发生其它局灶性和全身性癫痫发作。同上。

TSC相关癫痫影响多达约90％的患者，其中约70％对治疗有抗性(Portocarrero等人,(2018),An Bras Dermatol.,93(3):323-331)。此外，与患有控制癫痫的患者相比，难治性癫痫患者的智力残疾(如自闭症、智力迟钝和情绪障碍)患病率更高，并且疾病表现在受影响个体的一生中持续存在。同上。癫痫对认知发展以及对生活质量的负面影响使得癫痫发作的预防和管理成为治疗TSC的重要目标(Vergeer等人,(2019),Epilepsia Open,4:581-592)。

没有治愈这种疾病的方法。TSC相关婴儿痉挛症的一线疗法是氨己烯酸(vigabatrin)(Uliel-Sibony等人(2020),Child’s Nervous System,36:2511-2517)。然而，氨己烯酸与严重的不良副作用有关。同上。例如，它引起约21-34％的患者出现不可逆的视网膜损伤。其它潜在的副作用包括丘脑、基底节、脑干被盖和小脑齿状核的大脑异常、多动性运动障碍和急性脑病。同上。此外，没有其它抗癫痫发作药物可以显著降低TSC相关癫痫的严重度或发病率。

因此，对于治疗TSC的有效疗法存在显著未满足的需求。

发明内容

本公开涉及用于治疗TSC和/或TSC相关癫痫的方法。如上所说明，TSC和/TSC相关癫痫是一种极其复杂且治疗具有挑战性的疾病。在70％的病例中，患者对治疗有抗性，并且癫痫是难治的。难治性癫痫通常引起重大的行为和发育后果。如本文所述和示例，发明人相信加奈索酮(ganaxolone)可以为TSC和/或TSC相关癫痫提供有效疗法。

鉴于治疗TSC和TSC相关癫痫症的复杂性和困难，发明人认为有效的治疗需要高剂量的药物(例如，加奈索酮)。例如，在成人局灶性癫痫发作的临床试验中，加奈索酮以1800mg的日剂量施用(以900mg一天施用两次)，但未达到临床终点。发明人现在意外地发现，加奈索酮以较低的日剂量施用但施用更频繁可以为TSC和TSC相关癫痫提供有效的疗法。不希望受任何特定理论或机制的束缚，相信更频繁地施用加奈索酮(例如，一天三次)但日剂量比以前使用的日剂量低可通过维持加奈索酮血清水平(例如，谷水平)高于阈值水平较长时间来改善药物暴露量，从而有效治疗。例如，每日施用口服加奈索酮三次(或更多次)且每日总剂量不超过1800mg、或不超过1700mg、或不超过1600mg、或不超过1500mg、或每天不超过63/mg/kg的加奈索酮可在一天24小时内产生至少约100ng/ml的加奈索酮血浆浓度达约70％或更大，并提供有效的癫痫发作减少。此外，使用每天三次(或更频繁)施用通常需要较少的加奈索酮来实现增加的加奈索酮谷浓度，这对接受治疗的受试者也是有益的。事实上，一天两次给药的加奈索酮谷水平在24小时治疗期内通常保持低于100ng/ml。

发明人还意外地发现，患有TSC相关癫痫的患者亚群具有低血浆浓度的别孕烷醇酮-硫酸盐(Allo-S)(例如，低于2,500pg/ml)，并且可能对加奈索酮治疗更好地响应。

因此，本公开涉及有效治疗TSC和或TSC相关癫痫的方法。本文公开的方法包括向有需要的受试者施用治疗有效量的神经类固醇，优选加奈索酮，或其药学上可接受的盐。加奈索酮优选以在一天24小时内提供约100ng/ml或更高的加奈索酮谷水平(例如，加奈索酮血浆浓度)达约70％或更多的量施用。

为了在一天24小时内达到约100ng/ml或更高的加奈索酮血浆浓度达约70％或更多，可以每日施用加奈索酮三次(或更多次)，最大量为每天约1,800mg。在体重小于40kg的受试者中，可以每日施用加奈索酮三次(或更多次)，最大量为每天63mg/kg。典型地，当一天施用三次时每天高达约1,500mg的加奈索酮可在一天24小时内产生约100ng/ml或更大的血浆浓度达约70％或更多。加奈索酮可以一天三次以约500mg的剂量施用。熟练的临床医生将理解，只要总量不超过加奈索酮的最大日剂量，可以调整一天三次(例如，口服)施用的加奈索酮的量以达到所需的加奈索酮谷水平。

优选地，加奈索酮经口施用(例如，作为口服悬浮液或口服胶囊)。不受理论束缚，发明人相信，由于血浆加奈索酮暴露量增加，故三次给药可提高抗癫痫发作活性(即，降低癫痫发作频率和/或癫痫发作的严重度)。这与讲授以高剂量(例如，每天剂量)施用加奈索酮以实现治疗功效的先前治疗方案相反。例如，以较高剂量一天两次施用加奈索酮。

以在24小时时间段内达到至少约100ng/ml或更大的加奈索酮血浆浓度达约70％或更多的量施用加奈索酮可使受试者中癫痫发作的频率和/或癫痫发作的严重度相对于基线降低。典型地，可以实现癫痫发作频率相对于基线癫痫发作频率降低至少约20％或更大。在治疗期间，可以监测受试者中加奈索酮的血浆浓度和/或可以使用EEG监测受试者的癫痫发作活动。如果受试者出现癫痫发作的迹象(例如，癫痫复发)，可以相应地调整加奈索酮的施用量。

本文公开的方法适于治疗与TSC或TSC相关癫痫相关的任何形式的癫痫发作。例如但不限于婴儿痉挛症、局灶性受损知觉癫痫发作、局灶性癫痫发作或全身性癫痫发作。

本公开的一个目标是提供结节性硬化的治疗。本公开的一个目标是提供结节性硬化症(TSC)相关癫痫的治疗。本公开的另一个目标是提供与TSC相关癫痫相关的癫痫发作的治疗。本公开的另一个目标是利用加奈索酮的γ-氨基丁酸(GABA)能作用机制为患有TSC和TSC相关癫痫的人提供治疗益处。

为了推动上述目标和其它目标，本公开部分涉及一种治疗罹患结节性硬化的人的方法，所述方法包括以有效缓解或减轻人的结节性硬化的一种或多种症状的量向所述人施用治疗有效量的药学上可接受的孕烯醇酮神经类固醇。药学上可接受的孕烯醇酮神经类固醇可以按每天约1mg至每天约5000mg的量肠胃外和/或经口施用。特别准备从施用药学上可接受的孕烯醇酮神经类固醇中获得治疗益处的人是具有低水平的别孕烷醇酮-硫酸盐的人。

别孕烷醇酮-硫酸盐的血浆水平似乎与别孕烷醇酮的血浆水平呈正相关，并且可以定性地代表大脑中的别孕烷醇酮水平。因此，低水平的别孕烷醇酮-硫酸盐可能表明大脑中缺乏别孕烷醇酮。约2500pg/ml或更低的血浆别孕烷醇酮-硫酸盐水平被认为是低的，并且可能表明人体缺乏内源性神经类固醇。低水平的别孕烷醇酮-硫酸盐可以是2400pg/ml或更低、2300pg/ml或更低、2200pg/ml或更低、2100pg/ml或更低、2000pg/ml或更低、1900pg/ml或更低、1800pg/ml或更低、1700pg/ml或更低、1600pg/ml或更低、1500pg/ml或更低、1400pg/ml或更低、1300pg/ml或更低、1200pg/ml或更低、1100pg/ml或更低、1000pg/ml或更低、900pg/ml或更低、850pg/ml或更低、800pg/ml或更低、750pg/ml或更低、700pg/ml或更低、650pg/ml或更低、600pg/ml或更低、550pg/ml或更低、500pg/ml或更低、450pg/ml或更低、400pg/ml或更低、350pg/ml或更低、300pg/ml或更低、250pg/ml或更低、200pg/ml或更低、150pg/ml或更低、100pg/ml或更低、90pg/ml或更低、80pg/ml或更低、70pg/ml或更低、60pg/ml或更低、50pg/ml或更低、40pg/ml或更低、30pg/ml或更低、20pg/ml或更低、15pg/ml、10pg/ml或更低、9pg/ml或更低、8pg/ml或更低、7pg/ml或更低、6pg/ml或更低、5pg/ml或更低、4pg/ml或更低、3pg/ml或更低、2pg/ml或更低、1pg/ml或更低。

因为大脑中别孕烷醇酮的缺乏可能引起结节性硬化的一种或多种症状，所以在本文公开的方法中，根据本文公开的方法施用药学上可接受的孕烯醇酮神经类固醇可以纠正这种缺乏，并因此减轻和/或降低结节性硬化的一种或多种症状的严重度和/或降低所述症状的频率。可以通过施用药学上可接受的孕烯醇酮神经类固醇缓解或减轻的结节性硬化的症状包括但不限于例如癫痫发作、智力残疾、发育迟缓、行为问题、皮肤异常、肺病和肾病。癫痫发作可包括例如无意识或知觉损害的局灶性运动性癫痫发作、伴有意识或知觉损害的局灶性癫痫发作、演变为双侧全身性惊厥发作的局灶性癫痫发作、强直-阵挛性惊厥发作和具有可数运动分量的全身性癫痫发作，包括例如强直-阵挛、双侧强直、双侧阵挛或失张力/跌落发作。

本公开还涉及一种治疗罹患结节性硬化的人的方法，所述方法包括以有效缓解或减轻人的结节性硬化的一种或多种症状的量向所述人施用治疗有效量的加奈索酮。加奈索酮可以肠胃外和/或经口施用。特别准备从施用加奈索酮中获得治疗益处的人是具有低水平的别孕烷醇酮-硫酸盐的人。

当经口施用加奈索酮时，加奈索酮的治疗有效量可以是例如每天约600mg至每天约2000mg。在某些实施方案中，剂量可增加到约每天2100mg、每天2200mg、每天2300mg或更高，以提供比较低剂量更好的响应，限制因素是较高剂量的副作用增加。通常施用高达约每天1,500mg或每天1,800mg的加奈索酮。在某些实施方案中，剂量可降低至约每天550mg、每天500mg、每天450mg、每天300mg或低于每天300mg，以减轻或降低人在更高剂量下所经历的副作用的严重度。可以通过根据本文公开的方法施用加奈索酮缓解和/或可以降低频率和/或严重度的结节性硬化的症状包括例如癫痫发作、智力残疾、发育迟缓、行为问题、皮肤异常、肺病和肾病。癫痫发作可包括例如无意识或知觉损害的局灶性运动性癫痫发作、伴有意识或知觉损害的局灶性癫痫发作、演变为双侧全身性惊厥发作的局灶性癫痫发作、强直-阵挛性惊厥发作和具有可数运动分量的全身性癫痫发作，包括例如强直-阵挛、双侧强直、双侧阵挛或失张力/跌落发作。

本公开还涉及一种治疗患有TSC或TSC相关癫痫的人的方法，所述方法包括以有效降低所述人中的癫痫发作频率的量向所述人长期施用药学上可接受的孕烯醇酮神经类固醇(例如加奈索酮)，其中所述人具有低血浆水平的内源性神经类固醇(例如，如上所概述的别孕烷醇酮-硫酸盐(Allo-S))。

本公开还涉及一种治疗患有TSC或TSC相关癫痫的人的方法，所述方法包括一天两次(例如，每10-13小时)向所述人经口施用固体口服立即释放制剂，所述制剂包含药学上可接受的孕烯醇酮神经类固醇(例如加奈索酮)，其中所述神经类固醇具有约18小时至约24小时的半衰期，在将制剂放在模拟胃肠液(SGF和/或SIF)中45分钟时该制剂释放不少于约70％或约80％的加奈索酮，并且所述施用使所述人中每28天癫痫发作频率与第一次施用前28天时间段内的癫痫发作频率相比降低至少约35％、约40％、约45％或约50％。

本公开还涉及一种治疗患有TSC或TSC相关癫痫的人的方法，所述方法包括一天三次(例如，每6至8小时)向所述人经口施用液体口服立即释放制剂，所述制剂包含药学上可接受的孕烯醇酮神经类固醇(例如加奈索酮)，其中所述神经类固醇具有约18小时至约24小时的半衰期，在将制剂放在模拟胃肠液(SGF和/或SIF)中45分钟时所述制剂释放不少于约70％或约80％的加奈索酮并且所述施用使所述人中每28天癫痫发作频率与第一次施用前28天时间段内的癫痫发作频率相比降低至少约35％、约40％、约45％或约50％。

本公开还涉及一种用孕烯醇酮神经类固醇治疗人的方法，其中所述人罹患TSC或TSC相关癫痫，所述方法包括以下步骤：通过从该人获得或已经获得生物样品(例如，血液样品)确定该人是否具有低水平的内源性神经类固醇(例如，Allo-S)；并对生物样品进行或已经进行测定以确定生物样品中内源性神经类固醇的血浆水平。2500pg mL-1或更低、2000pgmL-1或更低、1500pg mL-1或更低、1000pg mL-1或更低、900pg mL-1或更低、800pg mL-1或更低、700pg mL-1或更低、600pg mL-1或更低、500pg mL-1或更低、400pg mL-1或更低、300pg mL-1或更低、200pg mL-1或更低、100pg mL-1或更低、75pg mL-1或更低、50pg mL-1或更低、或25pg mL-1或更低的内源性神经类固醇的水平表明该人具有低水平的内源性类固醇。具有低水平内源性类固醇(例如，Allo-S)的受试者(例如，人)可以经口施用孕烯醇酮神经类固醇(例如加奈索酮)，剂量为每天1mg/kg至约每天63mg/kg、约每天2mg/kg至约每天63mg/kg、约每天3mg/kg至约每天63mg/kg、约每天4mg/kg至约每天63mg/kg、约每天5mg/kg至约每天63mg/kg、约每天6mg/kg至约每天63mg/kg或约每天7mg/kg至约每天63mg/kg，历时至少一天，分两次或三次剂量。

在这些实施方案的一些实施方案中，2500pg mL-1或更低、2000pg mL-1或更低、1500pg mL-1或更低、1000pg mL-1或更低、900pg mL-1或更低、800pg mL-1或更低、700pgmL-1或更低、600pg mL-1或更低、500pg mL-1或更低、400pg mL-1或更低、300pg mL-1或更低、200pg mL-1或更低、100pg mL-1或更低、75pg mL-1或更低、50pg mL-1或更低、或25pgmL-1或更低的内源性神经类固醇的水平表明在施用28天后，与第一次施用前28天时间段内的癫痫发作频率相比，所述加奈索酮的施用可能降低患者的癫痫发作频率，例如降低35％或更高；约40％或更高；约45％或更高；或约50％或更高。内源性神经类固醇可选自包含以下或由以下组成的组：孕烷醇酮、孕烷醇酮-硫酸盐、5-αDHP、别孕烷醇酮、别孕烷醇酮-S、孕烷醇酮、孕烷醇酮-S、DHEA和它们的组合；并且孕烯醇酮神经类固醇可例如选自包含以下或由以下组成的组：别孕烷醇酮、加奈索酮、阿法沙龙(alphaxalone)、阿法多龙(alphadolone)、羟孕二酮(hydroxydione)、米那索龙(minaxolone)、孕烷醇酮、醋布洛可(acebrochol)或四氢皮质酮(tetrahydrocorticosterone)和它们的药学上可接受的盐。在这些实施方案的一些实施方案中，所述方法还包括在施用孕烯醇酮神经类固醇之前或之后将测定结果传达给患者或医疗提供者。加奈索酮是优选的孕烯醇酮神经类固醇。

本公开还涉及一种用加奈索酮治疗人的方法，其中所述人罹患TSC或TSC相关癫痫，所述方法包括以下步骤：确定该人是否具有2500pg mL-1或更低的水平的别孕烷醇酮-硫酸盐(Allo-S)，并且如果该人具有2500pg mL-1或更低的水平的别孕烷醇酮-硫酸盐，则向该人经口施用加奈索酮，剂量为每天1mg/kg至约每天63mg/kg、约每天2mg/kg至约每天63mg/kg、约每天3mg/kg至约每天63mg/kg、约每天4mg/kg至约每天63mg/kg、约每天5mg/kg至约每天63mg/kg、约每天6mg/kg至约每天63mg/kg或约每天7mg/kg至约每天63mg/kg，持续至少一天，分两次或三次剂量。在这些实施方案的一些实施方案中，2500pg mL-1或更低的别孕烷醇酮-硫酸盐的水平表明在施用28天之后，与第一次施用前28天时间段内的癫痫发作频率相比，所述加奈索酮的施用可能降低人的癫痫发作频率，例如降低至少约35％、约40％、约45％或约50％。

本公开还涉及一种用于治疗罹患TSC或TSC相关癫痫的人的方法，所述方法包括以下步骤：确定该人是否具有2500pg mL-1或更低的水平的别孕烷醇酮-硫酸盐，并且如果该人具有2500pg mL-1或更低的水平的别孕烷醇酮-硫酸盐，则向该人经口施用内源性神经类固醇(例如别孕烷醇酮、孕烷醇酮等)或合成神经类固醇(例如Co26749/WAY-141839、Co134444、Co177843、Sage-217(3α-羟基-3β-甲基-21-(4-氰基-1H-吡唑-1'-基)-19-降-5β-孕烷-20-酮)、加奈索酮等)，剂量为每天1mg/kg至约每天200mg/kg、约每天2mg/kg至每天约150mg/kg、约每天3mg/kg至约每天100mg/kg、约每天4mg/kg至约每天90mg/kg、约每天5mg/kg至约每天80mg/kg、约每天6mg/kg至约每天70mg/kg或约每天7mg/kg至约每天65mg/kg，持续至少一天，分两次或三次剂量，并且如果该人具有超过2500pg mL-1的水平的别孕烷醇酮-硫酸盐，则避免向该人施用内源性或合成神经类固醇和/或施用不同的抗惊厥药。不同的抗惊厥药可以例如选自由以下组成的组：苯二氮

本公开还涉及一种用于治疗罹患TSC或TSC相关癫痫的人的方法，所述方法包括以下步骤：确定该人是否具有2500pg mL-1或更低的水平的别孕烷醇酮-硫酸盐，并且如果该人具有2500pg mL-1或更低的水平的别孕烷醇酮-硫酸盐，则向该人经口施用加奈索酮，剂量为每天1mg/kg至约每天63mg/kg、约每天2mg/kg至约每天63mg/kg、约每天3mg/kg至约每天63mg/kg、约每天4mg/kg至约每天63mg/kg、约每天5mg/kg至约每天63mg/kg、约每天6mg/kg至约每天63mg/kg或约每天7mg/kg至约每天63mg/kg，持续至少一天，分两次或三次剂量。在这些实施方案的一些实施方案中，2500pg mL-1或更低的别孕烷醇酮-硫酸盐的水平表明在施用28天之后，与第一次施用前28天时间段内的癫痫发作频率相比，所述加奈索酮的施用可能降低人的癫痫发作频率，例如降低至少约35％、约40％、约45％或约50％。

本公开还涉及一种用于治疗患有TSC或TSC相关癫痫的人的方法，所述方法包括以下步骤：确定该人是否具有200pg mL-1或更低的水平的别孕烷醇酮，并且如果该人具有200pg mL-1或更低的水平的别孕烷醇酮，则向该人经口施用加奈索酮，剂量为每天1mg/kg至约每天80mg/kg、约每天2mg/kg至约每天75mg/kg、约每天3mg/kg至约每天70mg/kg、约每天4mg/kg至约每天65mg/kg、约每天5mg/kg至约每天63mg/kg、约每天6mg/kg至约每天63mg/kg或约每天7mg/kg至约每天63mg/kg，持续至少一天，分两次或三次剂量，并且如果该人具有超过200pg mL-1的水平的别孕烷醇酮，则避免向该人施用加奈索酮。在这些实施方案的一些实施方案中，在施用28天之后，与第一次施用前28天时间段内的癫痫发作频率相比，200pg mL-1或更低的水平的别孕烷醇酮表明所述加奈索酮的施用可能降低人的癫痫发作频率，例如降低至少约35％、约40％、约45％或约50％。

本文公开的方法还可包括测量患有TSC或TSC相关癫痫的人中别孕烷醇酮的血浆水平的步骤。约200pg/ml或更低的别孕烷醇酮血浆水平是低水平，并且可能表明该人可能缺乏内源性神经类固醇。因此，在一些实施方案中，人体内的低内源性神经类固醇水平可以为例如200pg/ml或更低、199pg/ml或更低、198pg/ml或更低、197pg/ml或更低、196pg/ml或更低、195pg/ml或更低、194pg/ml或更低、193pg/ml或更低、192pg/ml或更低、191pg/ml或更低、190pg/ml或更低、189pg/ml或更低、188pg/ml或更低、187pg/ml或更低、186pg/ml或更低、185pg/ml或更低、184pg/ml或更低、183pg/ml或更低、182pg/ml或更低、181pg/ml或更低、180pg/ml或更低、179pg/ml或更低、178pg/ml或更低、177pg/ml或更低、176pg/ml或更低、175pg/ml或更低、174pg/ml或更低、173pg/ml或更低、172pg/ml或更低、171pg/ml或更低、170pg/ml或更低、169pg/ml或更低、168pg/ml或更低、167pg/ml或更低、166pg/ml或更低、165pg/ml或更低、164pg/ml或更低、163pg/ml或更低、162pg/ml或更低、161pg/ml或更低、160pg/ml或更低、159pg/ml或更低、158pg/ml或更低、157pg/ml或更低、156pg/ml或更低、155pg/ml或更低、154pg/ml或更低、153pg/ml或更低、152pg/ml或更低、151pg/ml或更低、150pg/ml或更低、149pg/ml或更低、148pg/ml或更低、147pg/ml或更低、146pg/ml或更低、145pg/ml或更低、144pg/ml或更低、143pg/ml或更低、142pg/ml或更低、141pg/ml或更低、140pg/ml或更低、139pg/ml或更低、138pg/ml或更低、137pg/ml或更低、136pg/ml或更低、135pg/ml或更低、134pg/ml或更低、133pg/ml或更低、132pg/ml或更低、131pg/ml或更低、130pg/ml或更低、129pg/ml或更低、128pg/ml或更低、127pg/ml或更低、126pg/ml或更低、125pg/ml或更低、124pg/ml或更低、123pg/ml或更低、122pg/ml或更低、121pg/ml或更低、120pg/ml或更低、119pg/ml或更低、118pg/ml或更低、117pg/ml或更低、116pg/ml或更低、115pg/ml或更低、114pg/ml或更低、113pg/ml或更低、112pg/ml或更低、111pg/ml或更低、110pg/ml或更低、109pg/ml或更低、108pg/ml或更低、107pg/ml或更低、106pg/ml或更低、105pg/ml或更低、104pg/ml或更低、103pg/ml或更低、102pg/ml或更低、101pg/ml或更低、100pg/ml或更低、99pg/ml或更低、98pg/ml或更低、97pg/ml或更低、96pg/ml或更低、95pg/ml或更低、94pg/ml或更低、93pg/ml或更低、92pg/ml或更低、91pg/ml或更低、90pg/ml或更低、89pg/ml或更低、88pg/ml或更低、87pg/ml或更低、86pg/ml或更低、85pg/ml或更低、84pg/ml或更低、83pg/ml或更低、82pg/ml或更低、81pg/ml或更低、80pg/ml或更低、79pg/ml或更低、78pg/ml或更低、77pg/ml或更低、76pg/ml或更低、75pg/ml或更低、74pg/ml或更低、73pg/ml或更低、72pg/ml或更低、71pg/ml或更低、70pg/ml或更低、69pg/ml或更低、68pg/ml或更低、67pg/ml或更低、66pg/ml或更低、65pg/ml或更低、64pg/ml或更低、63pg/ml或更低、62pg/ml或更低、61pg/ml或更低、60pg/ml或更低、59pg/ml或更低、58pg/ml或更低、57pg/ml或更低、56pg/ml或更低、55pg/ml或更低、54pg/ml或更低、53pg/ml或更低、52pg/ml或更低、51pg/ml或更低、50pg/ml或更低、49pg/ml或更低、48pg/ml或更低、47pg/ml或更低、46pg/ml或更低、45pg/ml或更低、44pg/ml或更低、43pg/ml或更低、42pg/ml或更低、41pg/ml或更低、40pg/ml或更低、39pg/ml或更低、38pg/ml或更低、37pg/ml或更低、36pg/ml或更低、35pg/ml或更低、34pg/ml或更低、33pg/ml或更低、32pg/ml或更低、31pg/ml或更低、30pg/ml或更低、29pg/ml或更低、28pg/ml或更低、27pg/ml或更低、26pg/ml或更低、25pg/ml或更低、24pg/ml或更低、23pg/ml或更低、22pg/ml或更低、21pg/ml或更低、20pg/ml或更低、19pg/ml或更低、18pg/ml或更低、17pg/ml或更低、16pg/ml或更低、15pg/ml或更低、14pg/ml或更低、13pg/ml或更低、12pg/ml或更低、11pg/ml或更低、10pg/ml或更低、9pg/ml或更低、8pg/ml或更低、7pg/ml或更低、6pg/ml或更低、5pg/ml或更低、4pg/ml或更低、3pg/ml或更低、2pg/ml或更低、1pg/ml或更低、或0pg/ml。

本公开还涉及一种用于治疗TSC或TSC相关癫痫的方法，所述方法包括以下步骤：确定该人是否具有200pg mL-1或更低的水平的别孕烷醇酮，并且如果该人具有200pg mL-1或更低的水平的别孕烷醇酮，则向该人经口施用加奈索酮，剂量为每天1mg/kg至约每天100mg/kg、约每天2mg/kg至约每天80mg/kg、约每天3mg/kg至约每天70mg/kg、约每天4mg/kg至约每天65mg/kg、约每天5mg/kg至约每天65mg/kg、约每天6mg/kg至约每天65mg/kg或约每天7mg/kg至约每天65mg/kg，持续至少一天。

本公开还涉及一种治疗有需要的人的内源性神经类固醇缺乏症的方法，所述方法包括以每天约1800mg或更少的剂量向人施用药学上可接受的孕烯醇酮神经类固醇(例如加奈索酮)，持续至少1天，其中该人具有位于染色体9q34上的TSC1基因和/或位于染色体16p13.3上的TSC2基因的基因突变，并且具有一种或多种选自由以下组成的组的症状：脱色斑(≥3个，直径至少5mm)、血管纤维瘤(≥3个)或纤维头斑、甲纤维瘤(≥2个)、鲨鱼斑、多发性视网膜错构瘤、皮质发育不良、室管膜下结节、室管膜下巨细胞星形细胞瘤、心脏横纹肌瘤、淋巴管平滑肌瘤病(LAM)、血管平滑肌脂肪瘤(≥2个)、“斑驳样(Confetti)”皮肤病变、牙釉质坑(≥3个)、口腔内纤维瘤(≥2个)、视网膜无色斑、多发性肾囊肿、非肾错构瘤。

在这些实施方案的一些实施方案中，药学上可接受的孕烯醇酮神经类固醇是加奈索酮并且以约每天200mg至约每天2500mg、约每天200mg至约每天2250mg、约每天200mg至约每天2000mg、约每天300mg至约每天1800mg、约每天400mg至约每天1800mg、约每天450mg至约每天1800mg、约每天675mg至约每天1800mg、约每天900mg至约每天1800mg、约每天1125mg至约每天1800mg、约每天1350mg至约每天1800mg、约每天1575mg至约每天1800mg或约每天1800mg的量经口施用，分两次或三次剂量。在一些实施方案中，人经历癫痫发作并且与第一次施用前28天时间段内的癫痫发作频率相比，施用药学上可接受的孕烯醇酮神经类固醇使每28天平均癫痫发作频率降低35％或更好(例如，约40％、约45％、约50％、约55％)。在一些实施方案中，改善为50％或更多。

本文公开的方法还可以包括定期测量所施用的药学上可接受的孕烯醇酮神经类固醇(例如，加奈索酮)和/或伴随的AED药物(如果有的话)和/或别孕烷醇酮(3α-羟基-5α-孕烷-20-酮)和/或相关的内源性CNS活性类固醇的血浆水平。在一些实施方案中，还在用药学上可接受的孕烯醇酮神经类固醇治疗之前、期间或之后测量肝酶(AST、ALT和ALK Phos)的血浆水平。可以例如每周、每2周、每3周、每4周、每5周、每6周、每7周、每8周、每9周、每10周、每11周或每12周测量血浆水平一次。

在本文所述的方法中孕烯醇酮神经类固醇(例如加奈索酮)可以长期经口或肠胃外施用。在某些优选的实施方案中，孕烯醇酮神经类固醇是加奈索酮，并且作为口服悬浮液或口服固体剂型(例如，口服胶囊)以每天至多总计63mg/kg的剂量施用，并且优选施用每天至多1800mg的最大量的加奈索酮。优选地，长期施用加奈索酮，例如，只要患者从治疗中获得治疗益处而没有需要停止治疗的不良副作用即可。在某些实施方案中，加奈索酮施用至少一天、至少2天、至少3天、2周、至少3周、至少4周、至少5周、至少6周、至少7周、至少8周、至少9周、至少10周、至少11周或至少12周。在一些实施方案中，加奈索酮可以施用2周至100年的时间段，或人的一生。

当孕烯醇酮神经类固醇呈口服悬浮液施用时，它可以例如每天施用一次至三次之间的任何次数。在某些优选的实施方案中，当经口施用孕烯醇酮神经类固醇(例如加奈索酮)时，它可以与食物一起施用(为了更好地吸收)或不与食物一起施用。当孕烯醇酮神经类固醇呈口服片剂或胶囊施用时，它可以例如每天施用一次至四次之间的任何次数。当孕烯醇酮神经类固醇经肠胃外施用时，它可以例如每天施用一次至约三次之间的任何次数或视需要而定。

本公开还部分涉及用于TSC和/或TSC相关癫痫的包含颗粒的立即释放制剂，所述颗粒包含(i)孕烯醇酮神经类固醇(例如加奈索酮)和(ii)一种或多种药学上可接受的赋形剂(例如，口服悬浮液、片剂或胶囊)，其中颗粒具有确保在模拟胃肠液(SGF和/或SIF)中分散后不结块的颗粒尺寸，并且在制剂在25℃/60％RH下存储1个月后不会发生变化。在优选的实施方案中，在37℃+0.5℃下在USP设备1(篮)中在100rpm下，在将制剂放入500ml溶出介质(例如，SGF(模拟胃液)中的5％SLS和/或SIF(模拟肠液)中的5％SLS)中45分钟时制剂释放不少于约70％或约80％的孕烯醇酮神经类固醇，并且在单剂量和/或多剂量施用后，提供约55ng/mL、约60ng/ml或约65ng/ml的孕烯醇酮神经类固醇的血浆水平至约240ng/ml至400ng/ml(例如，262ng/mL)的孕烯醇酮神经类固醇的血浆水平，持续至少约6小时、约7小时、约8小时、约9小时、约10小时或约12小时的时间段。在这些实施方案的一些实施方案中，颗粒的体积加权中值直径为约250nm至约450nm(例如，约332nm)。在一些实施方案中，颗粒具有约200nm至约220nm的D(10)颗粒尺寸、约250nm至约450nm的D(50)颗粒尺寸和约480nm至约700nm的D(90)颗粒尺寸，并且该制剂不含环糊精，包括磺烷基醚环糊精和其改性形式，并且用于治疗TSC相关癫痫。

本公开还部分涉及用于TSC和/或TSC相关癫痫的包含颗粒的口服立即释放制剂，所述颗粒包含(i)加奈索酮和(ii)一种或多种药学上可接受的赋形剂(例如，口服悬浮液、片剂或胶囊)，其中颗粒具有约0.3微米的平均颗粒尺寸(即，约0.3微米的体积加权中值直径(D50))；制剂在25℃/60％RH下存储1个月后，颗粒尺寸不会发生变化；在37℃+0.5℃下在USP设备1(篮)中在100rpm下，在将制剂放入500ml溶出介质(例如，SGF(模拟胃液)中的5％SLS和/或SIF(模拟肠液)中的5％SLS)中45分钟时制剂释放不少于约70％或约80％的加奈索酮；在单剂量和/或多剂量后，制剂提供约55ng/mL、约60ng/ml或约65ng/ml的加奈索酮血浆水平至约240ng/ml至约400ng/ml(例如，262ng/mL)的血浆水平，在施用后持续至少6小时至12小时，并且用于治疗TSC或TSC相关癫痫。可以在空腹和/或进食后施用制剂后提供约55ng/mL、约60ng/ml或约65ng/ml的加奈索酮血浆水平至约240ng/ml至400ng/ml(例如，262ng/mL)的血浆水平。

在这些实施方案的一些实施方案中，约0.3微米的平均颗粒尺寸对于提供以下来说是关键的：在将制剂放在模拟胃肠液(SGF和/或SIF)中45分钟时不少于约70％或约80％孕烯醇酮神经类固醇溶出，以及约55ng/mL、约60ng/ml或约65ng/ml的孕烯醇酮神经类固醇的血浆水平至约240ng/ml至400ng/ml(例如，262ng/mL)的孕烯醇酮神经类固醇的血浆水平持续至少约6小时、约7小时、约8小时、约9小时、约10小时或约12小时的时间段。

本公开还部分涉及用于TSC和/或TSC相关癫痫的包含颗粒的立即释放制剂，所述颗粒包含(i)加奈索酮和(ii)一种或多种药学上可接受的赋形剂(例如，口服悬浮液、片剂或胶囊)，其中颗粒具有约0.3微米的平均颗粒尺寸；制剂在25℃/60％RH下存储2个月和/或3个月和/或4个月后，颗粒尺寸不会发生变化；在37℃+0.5℃下在USP设备1(篮)中在100rpm下，在将制剂放入500ml溶出介质(例如，SGF(模拟胃液)中的5％SLS和/或SIF(模拟肠液)中的5％SLS)中45分钟时制剂释放不少于80％的加奈索酮；制剂提供约55ng/mL、约60ng/ml或约65ng/ml的加奈索酮血浆水平至约240ng/ml至约400ng/ml(例如，262ng/mL)的血浆水平，在施用后持续至少6小时至12小时。

附图说明

图1描绘了PCDH19相关癫痫女性患者的基线内源性别孕烯醇酮-硫酸盐(allopregnenolone-sulfate，“Allo-S”)水平，按响应者与无响应者分层。当对别孕烷醇酮-硫酸盐(Allo-S)水平<2.5ng mL-1的患者进行分层时，观察到与基线相比，癫痫发作频率(n＝7)平均减少了50％。这项分析是在一个小型开放标签队列中回顾性进行的。然而，响应者与无响应者之间别孕烷醇酮-硫酸盐的1.5-2个数量级差异表明，别孕烷醇酮-硫酸盐的血浆水平可用于预测药学上可接受的孕烯醇酮神经类固醇的功效。这些数据提供了初步证据，表明别孕烷醇酮-硫酸盐的血浆水平可用作预测性生物标志物，以前瞻性地鉴定出可能经历加奈索酮增强的治疗效果的患者。

图2基于来自生物样品库(Biosample Repository)的血浆样品，描绘了TSC患者对比对照患者中的别孕烷醇酮-硫酸盐(Allo-S)水平。目标是使用我们专有的经过验证的分析方法(LC/MS/MS)定量内源性神经类固醇水平，并将水平与健康(未受影响)的年龄匹配的对照样品进行比较。与对照组(n＝60，中值4.1ngmL-1)相比，来自TSC癫痫患者的血浆样品显示出Allo-S水平降低的趋势(n＝47，中值1.8ng mL-1)。当仅抽数1-14岁的患者/受试者(TSC n＝28，对照n＝28)时，这一发现得到了加强。患者/受试者包括29名女性、18名男性。女性中值年龄为15岁(范围为2-27岁)。男性中值年龄为10.5岁(范围为2-33岁)。青春期后神经类固醇水平的波动可能会混淆所有患者中的分析。

图3描绘了TSC患者和未受影响的受试者(所有个体)中的Allo-S分布。

图4描绘了PCDH19和TSC中的别孕烷醇酮-硫酸盐(Allo-S)比较以及探索TSC中的Allo-S生物标志物的潜在扩展机会。

图5描绘了别孕烷醇酮(Allo)与别孕烷醇酮-硫酸盐(Allo-S)之间正相关。

具体实施方式

有效治疗TSC和/或TSC相关癫痫一直具有挑战性，传统的治疗方案对许多患者无效。实际上，约70％的患者对治疗有抗性，并且癫痫是难治的。大多数癫痫发作在生命的前12个月内开始，因此智力残疾的患病率很高。癫痫发作的控制可以减少这种发育后果。因此，迫切需要用于治疗TSC和/或TSC相关癫痫的改良方法。

本公开涉及治疗SE的新方法。如本文所例示和描述的，根据所述方法的治疗提供了TSC相关癫痫中癫痫发作频率的降低和/或抑制癫痫发作。所述方法可用于治疗任何形式的TSC相关癫痫。例如但不限于婴儿痉挛症、无意识或知觉损害的局灶性运动性癫痫发作、伴有意识或知觉损害的局灶性癫痫发作、演变为双侧的局灶性癫痫发作、强直-阵挛性惊厥发作和全身性癫痫发作运动性癫痫发作，包括可数的强直-阵挛、双侧强直、双侧阵挛、失张力/跌落发作、肌阵挛发作或癫痫发作。

本文所述的方法包括向受试者施用治疗有效量的神经类固醇。加奈索酮是一种优选的神经类固醇。

本文所述的方法还可以包括以治疗有效量施用加奈索酮以在一天24小时内达到100ng/ml或更高的加奈索酮血浆浓度达约70％或更多。这可以通过一天至少施用三次加奈索酮来实现。一天三次是优选的，尽管在一些情况下，加奈索酮可能适合一天施用超过三次以达到所需的加奈索酮谷浓度。在一天24小时内至少约100ng/ml或更高的血浆浓度达大约70％或更多使癫痫发作减少和/或癫痫发作抑制得到改善。例如，可以实现癫痫发作相对于基线癫痫发作频率降低至少20％或更大。每日施用超过三次的较低最大剂量的加奈索酮可以实现所需的加奈索酮谷浓度。典型地，施用约1,800mg，优选1,500mg的加奈索酮的最大日剂量。加奈索酮的最大日剂量在一天24小时内经至少三个时间间隔以相同或不同的剂量施用。

本文公开的方法还可以包括确定患有TSC或TSC相关癫痫的患者是否将受益于神经类固醇(例如，加奈索酮)治疗。患有TSC相关癫痫的患者亚群具有低血浆浓度的Allo-S(例如，低于2,500pg/ml)，并且可能对加奈索酮治疗更好地响应。本文所述的方法可以包括在开始用神经类固醇(例如，加奈索酮)治疗之前测量受试者的内源性神经类固醇的水平。低水平的内源性神经类固醇可表明受试者将对神经类固醇的治疗有响应。一旦确定受试者具有低内源性神经类固醇水平，就可以向受试者施用治疗有效量的神经类固醇。

本文提供了所述方法的附加描述和所述方法的实践指导。为了便于说明，提供了关于使用加奈索酮的优选方面的进一步细节和指导。进一步的细节和指导也旨在与其它神经类固醇的治疗有关。

I.定义

除非本文另外指示，否则值范围的列举仅仅意图用作个别地提及属于所述范围的各单独值的速记方法，并且犹如本文个别列举地那样将各单独值并入到本说明书中。所有范围的端点都包括在范围内并且可以独立组合。除非本文中另外指示或与上下文明显矛盾，否则本文中所描述的所有方法都可以按合适的顺序进行。任何和所有实例或示例性语言(例如，“例如”)的使用仅意图进行说明，并且除非另外要求，否则不会对本发明的范围施加限制。本说明书中的语言不应解释为将任何未要求的要素指示为实践本发明所必需的。

术语“一个(a/an)”并不表示数量的限制，而是表示至少有一个提及的项目存在。

术语“约”与术语“大约”同义使用。如本领域普通技术人员将理解的，“约”的确切边界将取决于组合物的组分。作为例证，使用术语“约”表示稍微超出引用值的值，即±0.1％至10％，这也是安全有效的。因此，稍微超出所引用范围的组合物也包含在本发明的权利要求书的范围内。

“活性剂”是当单独或与另一种剂组合施用于患者时，直接或间接地对患者产生生理作用的任何化合物、要素或混合物。当活性剂是化合物时，包括盐、游离化合物或盐的溶剂化物(包括水合物)、结晶和非结晶形式，以及化合物的各种多晶型物。化合物可以含有一种或多种不对称要素，例如立体异构源中心、立体轴等，例如不对称碳原子，使得化合物可以呈不同的立体异构形式存在。这些化合物可以是例如外消旋体或旋光形式。对于具有两种或更多种不对称要素的化合物，这些化合物还可以是非对映异构体的混合物。对于具有不对称中心的化合物，应该理解的是，涵盖所有纯形式的旋光异构体以及它们的混合物。此外，具有碳-碳双键的化合物可以呈Z-形式和E-形式存在，化合物的所有异构形式都包括在本发明中。在这些情况下，单一对映异构体，即旋光形式，可以通过不对称合成、由光学纯前体合成或通过外消旋体的拆分来获得。外消旋体的拆分也可以例如通过常规方法，例如在拆分剂存在下结晶或使用例如手性HPLC柱进行色谱法来实现。

术语“内源性神经类固醇”意指在大脑内产生并能够通过与神经元膜受体和离子通道(主要是GABA-A受体)相互作用来调节神经元兴奋性的类固醇，并包括例如孕烷神经类固醇(例如，别孕烷醇酮、别四氢脱氧皮质酮等)、雄甾烷神经类固醇(例如雄甾烷二醇、本胆烷醇酮等)和硫酸化神经类固醇(例如，孕烷醇酮硫酸盐、脱氢表雄酮硫酸盐(DHEAS))。

术语“孕烯醇酮神经类固醇”意指能够通过与神经元膜受体和离子通道(主要是GABA-A受体)相互作用来调节神经元兴奋性的内源性或外源性类固醇，并涵盖例如在体外和体内从孕烯醇酮合成或衍生的内源性神经类固醇和合成神经类固醇。

术语“生物标志物”是指区分药物响应者与无响应者的神经类固醇的血清或血浆水平。

如本文所公开的术语“血清”和“血浆”可以互换使用。

术语“包含”、“包括”和“含有”是非限制性的。其它未列举的要素可能存在于这些过渡短语要求保护的实施方案中。在“包含”、“含有”或“包括”用作过渡短语的情况下，可以包括其它要素并且仍然形成权利要求书范围内的实施方案。开放式过渡短语“包含”涵盖中间过渡短语“基本上由……组成”和封闭式过渡短语“由……组成”。

“推注剂量”是在短时间内，例如在1至30分钟内施用的相对大剂量的药物。

“C

“加奈索酮”又称为3α-羟基-5α-孕烷-20-酮，在本文中或称为“GNX”。

“输注”施用是非口服施用，通常是静脉内施用，但在一些实施方案中包括其它非口服途径，例如硬膜外施用。输注施用进行的时间比推注施用长，例如进行至少15分钟、至少30分钟、至少1小时、至少2小时、至少3小时或至少4小时的时间。

“患者”是需要医学治疗的人或非人类动物。医学治疗包括治疗现有疾患，例如病症或损伤。在某些实施方案中，治疗还包括防治性或预防性治疗，或诊断性治疗。

“儿童”意指1天至18岁(例如，1天至15岁)的人，包括18岁。

“成人”是指超过18岁的人。

“药物组合物”是包含至少一种活性剂如式(I)的化合物或盐、溶剂化物或水合物和至少一种其它物质如载体的组合物。药物组合物任选地含有一种或多种另外的活性剂。当指定时，药物组合物符合美国FDA的人用或非人用药物的GMP(良好生产规范)标准。“药物组合”是至少两种活性剂的组合，它们可以组合在单一剂型中或以单独的剂型一起提供，并附有将活性剂一起用于治疗例如癫痫发作病症的病症的说明。

“聚维酮”也称为聚维酮和聚乙烯吡咯烷酮(PVP)，是一种由单体N-乙烯基吡咯烷酮制成的水溶性聚合物。Plasdone C-12和C-17是N-乙烯基吡咯烷酮的药物级均聚物。Plasdone C-12的K值为10-2-13.8，标称分子量为4000d。Plasdone C-17的K值为15.5-17.5，标称分子量为10,000d。

“灭菌”意指使样品、制剂或产品中的基本上所有生物污染物失活。对于大多数药物应用来说，生物负荷减少100万倍也被认为是“灭菌的”。

术语“减少”癫痫发作或癫痫发作活动是指可检测到的癫痫发作频率、严重度和/或持续时间的减少。癫痫发作的频率、严重度和/或持续时间的减少可以通过自我评估(例如，通过患者的报告)或通过训练有素的临床观察者来测量。可以通过比较治疗前后的患者状态来确定癫痫发作频率、严重度和/或持续时间的减少。

“治疗有效量”或“有效量”是达到药理作用的药剂的量。术语“治疗有效量”包括例如预防有效量。神经类固醇的“有效量”是在没有过度副作用的情况下实现所需药理作用或治疗改善所需的量。本领域技术人员将根据具体患者和疾病选择神经类固醇的有效量。应理解，“有效量”或“治疗有效量”可因神经类固醇的代谢、年龄、体重、受试者的一般状况、所治疗的疾患、所治疗的疾患的严重度的变化以及开药医生的判断而在受试者之间变化。

“治疗(Treat)”或“治疗(treatment)”是指对病症或疾病的任何治疗，例如抑制病症或疾病，例如阻止病症或疾病的发展、缓解病症或疾病、引起病症或疾病的消退、缓解由疾病或病症引起的疾患、或减轻疾病或病症的症状。

“烷基”是支链或直链饱和脂族烃基，具有特定数目的碳原子，通常为1至约8个碳原子。如本文所用，术语C

“芳基”表示在一个或多个芳环中仅含碳的芳族基团。典型的芳基含有1个至3个单独的、稠合的或侧链环和6个至约18个环原子，没有杂原子作为环成员。当指示时，这类芳基可进一步经碳或非碳原子或基团取代。芳基包括例如苯基、萘基，包括1-萘基、2-萘基和联苯基。“芳基烷基”取代基是如本文定义的芳基，它通过亚烷基接头连接到其取代的基团。亚烷基是如本文所述的烷基，除了它是二价的。

“环烷基”是具有特定数目的碳原子的饱和烃环基团。单环环烷基通常具有3个至约8个碳环原子或3个至6个(3个、4个、5个或6个)碳环原子。环烷基取代基可以悬垂在取代的氮、氧或碳原子上，或者可以具有两个取代基的取代的碳原子可以具有呈螺基连接的环烷基。环烷基的实例包括环丙基、环丁基、环戊基和环己基。

“杂烷基”是至少一个碳被杂原子(例如N、O或S)置换的如所述的烷基。

如本文所用，术语“取代的”意指指定原子或基团上的任一个或多个氢被选自所指示基团的选择置换，条件是不超过指定原子的正常化合价。当取代基是氧代基(即＝O)时，原子上的2个氢被置换。当氧代基取代杂芳族部分时，所得分子有时可以采用互变异构形式。例如，在2位或4位被氧代基取代的吡啶基有时可以写成吡啶或羟基吡啶。仅当取代基和/或变量的组合产生稳定化合物或适用的合成中间体时，才可允许这类组合。稳定的化合物或稳定的结构意指足够坚固以经受得住从反应混合物中分离和随后配制成有效治疗剂的化合物。除非另有说明，否则将取代基命名至核心结构中。例如，应理解氨基烷基是指该取代基与核心结构的连接点在烷基部分中，而烷基氨基是指连接点是与氨基的氮的键。

可存在于“取代的”或“任选取代的”位置上的合适基团包括但不限于例如卤素；氰基；-OH；氧代基；-NH

II.结节性硬化症

结节性硬化症(TSC)是一种胚胎皮质发育的多系统病症，可通过称为错构瘤的良性肿瘤的过度生长影响许多器官。症状的组合可能包括癫痫发作、智力残疾、发育迟缓、行为问题、皮肤异常、肺病和肾病。虽然TSC的疾病表型变化很大，但高达90％的TSC患者会出现如癫痫等神经系统表现(Krueger等人,2013)。这种情况是由位于染色体9q34上的TSC1基因或位于染色体16p13.3上的TSC2基因的遗传突变引起的。TSC的发生频率为1:6,000，并且在85％的患者中发现了突变(Jülich和Sahin,2014)。基因产物错构瘤蛋白(TSC1)和薯球蛋白(TSC2)形成一种调控复合物，负责限制哺乳动物雷帕霉素靶蛋白复合物1(mTORC1)的活性，mTORC1是细胞内生长和代谢的重要调节因子，它通过抑制小GTP酶的大脑富含的Ras同源物(Rheb)进行调节(Krueger等人,2013)。依维莫司(Everolimus)是一种mTOR抑制剂，已显示其可以减少癫痫发作(French等人,2016；Mizuguchi等人,2019)。

TSC是癫痫最常见的遗传原因之一，癫痫发作的症状因发病年龄而异(Jülich和Sahin,2014)。有效的治疗选择包括使用促肾上腺皮质激素(ACTH)，它包括与加奈索酮使用一致的可能机制。ACTH已经显示对脱氧皮质酮(DOC)具有刺激作用，DOC可进行进一步合成，形成各种神经类固醇。具体而言，ACTH已经显示可迅速增加别孕烷醇酮的内源性血浆和脑水平，这可能进一步解释对IS的有益作用。

婴儿痉挛症(“IS”)是婴儿期呈现的最常见的癫痫发作类型，并且代表50％患者癫痫的首发表现。在年龄较大的儿童和成人中，局灶性受损知觉癫痫发作(以前称为复杂部分性发作)是最常见的。也可能发生其它局灶性和全身性癫痫发作，超过30％的患者发展为难治性癫痫(Jülich和Sahin,2014)。虽然癫痫发作通常归因于结节和周围皮层，但TSC中的癫痫可以被认为源于多因素的，因为癫痫发作可能起源于其它脑部区域，或者可能发生在没有结节的TSC患者中(Jülich和Sahin,2014)。

临床诊断明确TSC，包括下表7中的两个主要特征或一个主要特征加≥2个次要特征。

表7.

*包括结节和脑白质径向迁移线

**两个主要临床特征(LAM和血管平滑肌脂肪瘤)的组合，没有其它不符合明确诊断标准的特征。

γ-氨基丁酸(GABA)似乎在TSC相关癫痫的发展中发挥核心作用，这可能是由于内源性GABA

有证据支持神经活性类固醇3α,5α-四氢孕酮(THP)或别孕烷醇酮的缺乏是TSC中癫痫发生的一个因素。别孕烷醇酮是GABAA受体的正调节剂，已经显示在实验动物和人中具有抗癫痫作用。在TSC相关癫痫患者中，别孕烷醇酮相对于其功能性GABAA拮抗剂3β-THP有所减少，但在没有癫痫的TSC患者中或对照组中则没有减少(di Michele等人,2003)。这种减少的比率可能会改变由GABAA受体介导的神经元兴奋性，从而导致癫痫的发展。氨己烯酸(一种特异性且不可逆的GABA氨基转移酶抑制剂)在TSC引起的癫痫发作中相对于其它癫痫的更大功效也支持GABAA受体介导的作用(di Michele等人,2003)。

患有癫痫的TSC患者的内源性神经类固醇水平降低，尤其是Allo，这与PCDH19中的先前报告相似。所有TSC患者中大约25％患者的血浆别孕烯酮-硫酸盐水平低于6ng/ml。

具有抗惊厥特性的神经活性类固醇可用于治疗TSC和TSC相关的癫痫。具有抗惊厥特性的神经活性类固醇可以增加GABAA介导的信号传导，不仅可以改善癫痫发作控制，还可以改善患有TSC和TSC相关癫痫的个体的行为异常。

TSC-mTOR通路的上调导致炎症响应增加，有证据表明促炎性toll样受体4(TLR4)信号传导增加。包括Allo在内的神经类固醇已经显示可作为包括TLR4在内的各种神经炎症通路的抑制剂，这将这些化合物的作用机制扩展到正向调节GABAA受体之外。

III.神经类固醇

内源性神经类固醇在维持大脑活动的稳态中起关键作用。神经类固醇能够响应大脑环境变化而迅速产生大脑变化。神经类固醇没有与调节基因转录的经典类固醇激素受体相互作用；它们主要通过与神经元膜受体和离子通道的相互作用来调节大脑兴奋性。

取决于类固醇分子的化学结构，神经类固醇可以是GABA

如加奈索酮等神经类固醇是GABA

最近的研究表明，GABA

含δ-亚基的突触外GABA

孕烷神经类固醇和孕烯醇酮神经类固醇是一类可用作麻醉剂、镇静剂、催眠药、抗焦虑药、抗抑郁药、抗震颤药、治疗自闭症行为和抗惊厥药的化合物。这些化合物的特点是水溶性极低，这限制了它们的配制选择。可以使用口服和肠胃外生物可利用的孕烷和孕烯醇酮神经类固醇的纳米颗粒制剂。

孕烷神经类固醇和孕烯醇酮神经类固醇的可注射制剂是特别理想的，因为这些化合物用于排除口服施用的临床适应症，例如麻醉，特别是用于活动性癫痫发作的紧急治疗。

本公开包括可注射的纳米粒子神经类固醇制剂。

本发明的孕烷神经类固醇和孕烯醇酮神经类固醇各自可以是式IA化合物：

或其药学上可接受的盐，其中：

X是O、S或NR

R

A是羟基、O、S、NR

R

R

R

R

每个杂烷基基团是其中一个或多个甲基基团被独立选择的-O-、-S-、-N(R

R

R

本发明的孕烷神经类固醇和孕烯醇酮神经类固醇各自可以是式IA化合物，其中

X是O；

R

R

R

R

R

每个杂烷基基团是其中一个或多个甲基基团被独立选择的-O-、-S-、-N(R

本发明的孕烷神经类固醇和孕烯醇酮神经类固醇各自可以是式IB化合物

或其药学上可接受的盐，其中：

X是O、S或NR

R

R

R

R

R

R

每个杂烷基基团是其中一个或多个甲基基团被独立选择的-O-、-S-、-N(R

式IA和IB的化合物包括例如别孕烷醇酮、加奈索酮、阿法沙龙、阿法多龙、羟孕二酮、米那索龙、孕烷醇酮、醋布洛可或四氢皮质酮和它们的药学上可接受的盐。

本发明的孕烷神经类固醇和孕烯醇酮神经类固醇也可以各自是式II化合物：

或其药学上可接受的盐，其中：

X是O、S或NR

R

A是羟基、O、S、NR

R

R

R

R

每个杂烷基基团是其中一个或多个甲基基团被独立选择的-O-、-S-、-N(R

R

R

本发明的孕烷神经类固醇和孕烯醇酮神经类固醇也可以各自是式III化合物：

或其药学上可接受的盐，其中：

X是O、S或NR

R

A是羟基、O、S、NR

R

R

R

R

每个杂烷基基团是其中一个或多个甲基基团被独立选择的-O-、-S-、-N(R

R

R

a)加奈索酮

加奈索酮(CAS Reg.No.38398-32-2，3α-羟基-3β-甲基-5α-孕烷-20-酮)是别孕烷醇酮(一种CNS GABAA受体的内源性变构调节剂)的3β-甲基化合成类似物。加奈索酮的结构式为：

在与苯二氮

除了抗惊厥活性外，加奈索酮还显示可以减少脆性X综合征患儿的焦虑、多动和注意力(Ligsay 2016)。患有TSC的个体也会出现类似的行为问题，ADHD和自闭症的发生率大约为50％(Jülich和Sahin,2014)。因此，加奈索酮治疗可以增加GABAA介导的信号传导，不仅可以改善癫痫发作控制，还可以改善患有TSC和TSC相关癫痫的个体的行为异常。

加奈索酮具有与别孕烷醇酮相同的核心化学结构，但添加了一个3β甲基，旨在防止转化回对核激素受体具有活性的实体，从而消除了不必要的激素效应的机会，同时提高神经类固醇的生物利用率并保留其所需的CNS活性。

与别孕烷醇酮一样，加奈索酮(一种神经活性类固醇)通过变构调节中枢神经系统(CNS)中的γ-氨基丁酸A型(GABAA)受体，在动物中表现出有效的抗癫痫、抗焦虑、镇静和催眠活性。在与苯二氮

加奈索酮通过在该类独有的结合位点与突触和突触外GABA

加奈索酮不溶于水。它在95％酒精、丙二醇和聚乙二醇中的溶解度分别是13mg/mL、3.5mg/mL和3.1mg/mL。

加奈索酮主要由CYP3A肝酶家族代谢，但基于肝代谢的相互作用限于由其它药物(如酮康唑(ketoconazole))诱导或抑制CYP3A4/5引起的相互作用。

在体外，加奈索酮的清除似乎主要由CYP3A4驱动。在成人的临床研究中，施用葡萄柚会增加健康志愿者的加奈索酮暴露量。在同时使用酶诱导AED治疗的患者中，加奈索酮水平降低。这些数据进一步支持了CYP3A4是人类清除加奈索酮的主要因素的假设。

在成人中，经口施用后加奈索酮的血浆浓度的特征在于高度变化性。单剂量PK参数受加奈索酮吸收速率和程度以及受试者是否处于进食或空腹状态强烈影响。

在儿科人群中，CYP3A4表达水平在大约2岁时接近成人(de Wildt等人,2003)，尽管具有高度的个体间变化性。因此，预计大于2岁的患者具有与成人相似的加奈索酮清除率。

加奈索酮具有相对长的半衰期——经口施用后在人血浆中大约20小时(Nohria,V.和Giller,E.,Neurotherapeutics,(2007)4(1):102-105)。此外，加奈索酮的T

加奈索酮通过与不同于其它变构GABAA受体调节剂(例如苯二氮

还评价了静脉内施用的加奈索酮，并显示在其它正常大鼠中诱导爆发抑制样脑电图(EEG)模式，并在代表临床癫痫持续状态(SE)的模型中阻断癫痫发作响应。加奈索酮引起镇静响应，但没有引起完全麻醉响应。

除了抗惊厥活性外，加奈索酮已经显示具有抗焦虑特性以及改善与自闭症相关的行为。在创伤后应激障碍(PTSD)的小鼠模型中，加奈索酮治疗减少了攻击性和社会孤立引起的焦虑样行为(Pinna和Rasmussen,2014)。在另一项研究中，加奈索酮治疗改善了自闭症BTBR小鼠模型的社交能力(Kazdoba等人,2016)。加奈索酮治疗患有脆性X综合征(FXS)的儿童和青少年的临床研究表明，加奈索酮可减少焦虑和多动症，并提高基线焦虑水平较高的儿童和青少年的注意力(Ligsay等人,2017)。

加奈索酮在70nM(n＝2)的测量浓度下不与人乙醚阿哥哥相关基因(human ether-a-go-go related gene，hERG)受体相互作用。在高达15mg/kg的单剂量(最大浓度[Cmax]为1000ng/mL，浓度时间曲线下面积(AUC)(0-24)为10000ng·h/mL)下加奈索酮在犬中对心血管参数无作用。在为期1年的犬毒性研究(Cmax>1500ng/mL)中，在4只动物给药3个月后观察到短暂的窦性心动过速(>190次/分钟[bpm])，并伴有PR和QT间期缩短，但对QRS持续时间或校正Q-T间期(QTc)没有治疗效果。在剂量高达40mg/kg下未在雌性大鼠中观察到肺部作用。

响应于较高的心率，PR和QT间期在生理上正常缩短。对QRS持续时间或QTc间期没有作用。在剂量高达40mg/kg下未在雌性大鼠中观察到肺部作用。

加奈索酮在雌性大鼠中诱导主要细胞色素P450(CYP)同工酶1A1/2和2B1/2，但雄性大鼠中未诱导。在小鼠和大鼠中也观察到了自诱导，而在犬中没有观察到自诱导。

对小鼠和大鼠的组织分布研究表明，[

所有物种中大部分排泄的放射性是通过粪便(>70％)，其余通过尿液排泄。

在毒理学研究中，加奈索酮治疗后最常见的作用是剂量相关的镇静作用，这是GABA

在犬的慢性经口毒性研究中，大于1500ng/mL(每天10和15mg/kg)的平均C

当向大鼠和狗静脉内给药时，主要的剂量限制性毒性发现是镇静作用。大鼠静脉内给药14天后未观察到有害作用的水平(NOAEL)确定为雄性每天42mg/kg和雌性每天30mg/kg。通过静脉内推注然后连续静脉内输注来施用加奈索酮28天后，犬的NOAEL为每天7.20mg/kg，对应于大约330ng/mL和333ng/mL的稳态浓度。在兔的局部耐受性研究中没有发现。最后，体外加奈索酮不会引起溶血并与人的血浆相容。

加奈索酮在大鼠或小鼠中没有致畸作用，并且对后代的发育没有显著影响。加奈索酮对大鼠的生育力和早期胚胎发育没有影响。未检测到潜在的致突变性。用加奈索酮治疗新生大鼠产生了预期的镇静迹象，但不影响发育或表现出任何死后变化。

b)别孕烷醇酮

别孕烷醇酮(CAS Reg.No.516-54-1，3α,5α-四氢孕酮)是一种具有抗惊厥活性的内源性孕酮衍生物。

别孕烷醇酮的半衰期相对较短，在人的血浆中约为45分钟。

别孕烷醇酮凭借其GABAA受体调节活性在动物中表现出有效的抗癫痫、抗焦虑、镇静和催眠活性。

除了治疗癫痫发作的功效外，正在评价别孕烷醇酮用于治疗神经退行性疾病，包括阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease)、帕金森病(Parkinson’s disease)、亨廷顿病(Huntington’s disease)和肌萎缩性侧索硬化症，以及用于治疗以胆固醇合成异常为特征的溶酶体贮积症，例如尼曼匹克(Niemann Pick)A、B和C病、戈谢病(Gaucher disease)和泰萨克斯病(Tay Sachs disease)。(参见US 8,604,011，其关于使用别孕烷醇酮治疗神经病症的教导以引用的方式并入本文中。)

已经在患有月经性癫痫的女性中对孕酮和其代谢物别孕烷醇酮与癫痫发作之间的关系进行了广泛的研究，月经性癫痫是癫痫发作频率会随着月经周期的不同阶段而变化的一种疾患。在月经周期期间，当孕酮较低时(例如，经期前后)，癫痫发作的可能性往往会增加(French 2005)。循环别孕烷醇酮水平与孕酮水平平行。虽然孕酮的生殖作用与其与细胞内孕酮受体的相互作用有关，但孕酮的抗惊厥作用与此无关(Reddy和Rogawski 2009)。孕酮的抗癫痫活性由其转化为神经类固醇别孕烷醇酮产生(Kokate等人，1999)。由于其对GABAA受体的影响，别孕烷醇酮在许多动物模型中已经显示可以防止癫痫发作(Reddy和Rogawski 2009)。加奈索酮是一种没有孕酮相关作用的别孕烷醇酮合成类似物，可用于治疗TSC相关癫痫。

c)阿法沙龙

阿法沙龙，也称为阿法沙酮(CAS Reg.No.23930-19-0，3α-羟基-5α-孕烷-11,20-二酮)，是一种具有麻醉活性的神经类固醇。它在兽医实践中用作全身麻醉剂。麻醉剂经常与抗惊厥药组合使用以治疗难治性癫痫发作。含有单独的阿法沙龙或阿法沙龙与加奈索酮或别孕烷醇酮组合的可注射纳米颗粒神经类固醇剂型在本公开的范围内。

d)阿法多龙

阿法多龙，也称为阿法多酮(CAS Reg.No.14107-37-0，3α,21-二羟基-5α-孕烷-11,20-二酮)是一种具有麻醉特性的神经类固醇。其盐醋酸阿法多龙与阿法沙龙组合用作兽用麻醉剂。

e)另外的神经类固醇

可用于本公开的纳米颗粒神经类固醇制剂和本文公开的方法的其它神经类固醇包括但不限于孕烯醇酮、羟孕二酮(CAS Reg.No.303-01-5，(5β)-21-羟基孕烷-3,20-二酮)、米那索龙(CAS Reg.No.62571-87-3，2β,3α,5α,11α)-11-(二甲基氨基)-2-乙氧基-3-羟基孕烷-20-酮)、孕烷醇酮(CAS Reg.No.128-20-1，(3α,5β)-d-羟基孕烷-20-酮)、雷那诺龙(renanolone)(CAS Reg.No.565-99-1，3α-羟基-5β-孕烷-11,20-二酮)或四氢皮质酮(CAS Reg.No.68-42-8，3α,5α-孕烷-20-二酮)。

可用于本公开的纳米颗粒神经类固醇制剂和本文公开的方法的另外的神经类固醇包括Co26749/WAY-141839、Co134444、Co177843和Sage-217、Sage-324和Sage-718。Co26749/WAY-141839、Co134444、Co177843和Sage-217具有以下结构：

可用于本公开的纳米颗粒神经类固醇制剂和本文公开的方法中的另外的神经类固醇包括美国专利公布No.2016-0229887(美国序列号14/913,920，2016年2月23日提交)中公开的化合物，以引用的方式整体并入本文中。

IV.剂量

在本文公开的方法中使用的孕烯醇酮神经类固醇可以按约每天1mg至约每天5000mg的量分一次、二次、三次或四次剂量施用。在某些实施方案中，每天1600mg和每天2000mg的剂量可能引起嗜睡，每天1800mg的剂量界定了药物暴露量、给药方便性和耐受性的最佳组合。

当孕烯醇酮神经类固醇是加奈索酮时，加奈索酮的目标和最大剂量为约每天1800mg。在这些实施方案中，该剂量基于加奈索酮的非线性动力学提供了最高可能的暴露量。因此，当孕烯醇酮神经类固醇是加奈索酮时，在本文公开的方法中施用的加奈索酮的量一般是约每天200mg至约每天1800mg、约每天300mg至约每天1800mg、约每天400mg至约每天1800mg、约每天450mg至约每天1800mg、约每天675mg至约每天1800mg、约每天900mg至约每天1800mg、约每天1125mg至约每天1800mg、约每天1350mg至约每天1800mg、约每天1575mg至约每天1800mg、或约每天1800mg，剂量为每天1mg/kg至约每天80mg/kg，分一次、二次、三次或四次剂量。在某些实施方案中，如果需要，加奈索酮的目标和最大剂量可以更高，以实现改善的治疗益处，但受到副作用(例如嗜睡)的限制。

在某些实施方案中，每天经口施用约300mg至约2000mg、约900mg至约1800mg、约950mg至约1800mg、约1000mg至约1800mg、约1100mg至约1800mg或约1200mg的加奈索酮，连续两天或更多天(例如1周至50年的时间段，或患者终生。加奈索酮可以每天一剂、二剂、三剂或四剂经口或肠胃外施用。

一个人每天接受加奈索酮两次还是三次可取决于制剂。对于给予口服立即释放胶囊的患者，加奈索酮通常一天施用两次，每剂与后一剂和/或前一剂相隔8至12小时。对于服用口服悬浮液的患者，加奈索酮通常一天施用三次，每剂与后一剂和/或前一剂相隔4至8小时。

当孕烯醇酮神经类固醇是加奈索酮时，本文公开的方法包括以约每天1mg/kg至约每天80mg/kg的剂量施用加奈索酮，条件是施用的加奈索酮总量不超过每天2000mg。

本文所述的方法还可以包括以治疗有效量施用加奈索酮以在一天24小时内达到100ng/ml或更高的加奈索酮血浆浓度达约70％或更多。在一些情况下，加奈索酮的血浆浓度在24小时时段内可高于100ng/ml达约至少约70％、约75％、约80％、约85％、约90％、约95％或更大。

为了在一天24小时内达到100ng/ml或更高的加奈索酮血浆浓度达约70％或更多，可以一天施用加奈索酮至少三次。一天三次是优选的，如果需要或期望，加奈索酮可以一天施用超过三次以达到所需的加奈索酮谷浓度。例如，加奈索酮可以一天施用三次、一天四次、一天五次、一天六次、一天七次、一天八次或更多次。

根据本文公开的方法施用的加奈索酮可以按临床试验中使用的相同或更低的日剂量施用，并且可以通过例如在一天24小时内维持至少约100ng/ml的加奈索酮血清浓度达至少约70％或更多来增加药物暴露量。可以施用约1800mg、约1700mg、约1600mg、约1500mg或每天63mg/kg的加奈索酮的总日剂量，条件是在三次或更多次单独的施用中施用总日剂量(优选每次都含有相同量的加奈索酮)以在一天24小时内产生至少约100ng/ml的血清加奈索酮浓度达至少70％或更多。典型地，当一天中一天施用三次时，每天1500mg的加奈索酮的总日剂量可以在一天24小时内产生至少约100ng/ml或更大的血浆浓度达大约70％或更多。

例如，当施用1500mg总日剂量的加奈索酮时，可以施用约500mg的剂量，一天三次。例如，当施用1800mg总日剂量的加奈索酮时，可以施用约600mg的剂量，一天三次。加奈索酮的最大日剂量在24小时时段内经至少三个时间间隔以相同或不同的剂量施用。熟练的临床医生将理解，只要总量不超过加奈索酮的最大日剂量，可以调整一天三次施用的加奈索酮的量以达到所需的加奈索酮谷水平。

虽然至少约100ng/ml的血浆浓度是优选的，但基于例如受试者的体重、代谢、年龄、癫痫发作持续时间和癫痫发作严重度的差异，可能存在一些变化性。

加奈索酮可以经口施用(例如，作为口服悬浮液或口服胶囊)或为静脉内制剂。优选地，加奈索酮经口施用。经口施用可以包括但不限于口服悬浮液制剂和口服胶囊。

在一天24小时内至少约100ng/ml或更高的血浆浓度达大约70％或更多使癫痫发作减少和/或癫痫发作抑制得到改善。例如，可以实现癫痫发作相对于基线癫痫发作频率降低至少20％或更大。例如，可以实现癫痫发作相对于基线频率减少至少35％或更大。可以使用EEG监测癫痫发作负荷和/或频率。

在包含立即释放0.3微米颗粒的制剂(例如实施例2的制剂)中的加奈索酮的药代动力学至大约每天1200mg(一天两次给予(“BID”))都是线性的，在每天1600mg的剂量下暴露量适度增加，并且在每天2000mg的剂量下暴露量几乎没有进一步增加。因此，为了在所有受试者中保持尽可能高的谷水平，通常以每天1800mg的剂量为目标，但在某些个体中可能会调得更高或更低以提供最佳的治疗效果。

在某些实施方案中，加奈索酮以超过每天5mg/kg的剂量，例如约每天6mg/kg至约每天80mg/kg的剂量施用，条件是施用的加奈索酮的总量不超过每天1800mg。

在某些实施方案中，在治疗期间将加奈索酮的剂量调整为每天15mg/kg至每天100mg/kg至最高每天1800mg的最大剂量。

在某些实施方案中，治疗方法包括以一剂、二剂、三剂或四剂施用至少每天33mg/kg的加奈索酮，最大日剂量为约1800mg。

在某些实施方案中，人为约0.6至约7岁，并且加奈索酮施用的剂量为约1.5mg/kg(一天两次(“BID”)(每天3mg/kg)至12mg/kg(一天三次(“TID”)(每天36mg/kg)。在人接受12mg/kg TID剂量方案的实施方案中，达到至少约38.5±37.4ng/mL的谷浓度。

在某些实施方案中，加奈索酮在β-环糊精制剂中以6mg/kg BID(每天12mg/kg)至12mg/kg TID(每天36mg/kg)的剂量与食物一起口服施用，并且在施用的第4周和第8周分别达到高达22.1ng/mL和5.7至43.7ng/mL的加奈索酮血浆浓度。

在某些实施方案中，加奈索酮以1至12mg/kg TID(每天3至36mg/kg)的剂量与食物一起口服施用，并且达到高达5.78ng/mL(1mg/kg TID)至10.3至16.1ng/mL(12mg/kg TID)的加奈索酮血浆浓度。

在某些实施方案中，加奈索酮在口服悬浮液制剂中以3至18mg/kg TID(每天9至54mg/kg)的剂量口服，并且达到约123ng/mL的加奈索酮C

在某些实施方案中，基于一天三次经口施用1000mg加奈索酮，平均加奈索酮C

在某些实施方案中，基于一天两次经口施用1000mg加奈索酮，所述方法使得平均C

在某些实施方案中，加奈索酮的施用提供了大于3、3.5、4、4.5、5或6的C

在某些实施方案中，从儿科药代动力学模型确定所施用的剂量，该模型允许确定各种儿科年龄范围内将产生与根据成人癫痫人群中确定的有效剂量所实现类似的C

在某些实施方案中，可以使用多个滴定步骤将孕烯醇酮神经类固醇施用于患者，直到获得治疗有效的剂量方案。例如，取决于患者的体型，可以使用约六-八个滴定步骤。

在某些实施方案中，本文公开的方法包括为患者建立基线癫痫发作频率，最初以约每天0.5mg/kg至约每天15mg/kg的量向患者施用加奈索酮的剂量；并在4周的过程中逐渐将加奈索酮的剂量增加到约每天18mg/kg至约每天60mg/kg的量，其中对于体重大于30kg患者，加奈索酮的总剂量至多约每天1800mg。对于体重为30kg以下的患者，加奈索酮每天的总剂量可能会更少(例如，约每天63mg)。在某些优选实施方案中，加奈索酮的初始剂量为约每天4.5mg/kg。

在某些优选实施方案中，加奈索酮的剂量增加至约每天36mg/kg。在某些优选实施方案中，如果患者经历剂量限制性不良事件，则加奈索酮剂量降低至先前水平。

在某些实施方案中，对于体重超过30kg的受试者，按每天900mg的剂量以分次剂量开始治疗。然后以不少于3天且不超过2周的间隔将剂量增加大约20％至50％(例如，从每天900mg增加到每天1200mg是增加33％)，条件是当前剂量是合理耐受的，直到达到所需的功效或达到最大耐受剂量(MTD)水平。随后的剂量调整可以按大约20％至50％的增量进行，剂量变化之间至少间隔3天，除非出于安全考虑。这些实施方案中的最大允许剂量是每天1800mg。

在某些实施方案中，对于体重为30kg以下的受试者，以每天18mg/kg开始治疗，并且以不少于3天且不超过2周的间隔以约20％至50％增量增加，条件是当前剂量是合理耐受的，直到达到所需的功效或达到最大耐受剂量(MTD)水平。随后的剂量调整可以按大约20％至50％的增量进行，剂量变化之间至少间隔3天，除非出于安全考虑。这些实施方案中的最大允许剂量是每天63mg/kg。

对于体重≥28kg(62lbs)的人，加奈索酮可以按约每天300mg至约每天600mg(例如，每天400mg)的剂量以分次剂量开始。剂量将每7天每天增加450mg，直到达到每天1800mg或最大耐受剂量。

对于体重<28kg(62lbs)的人，加奈索酮可以按约每天10mg/kg至约每天30mg/kg(例如，每天18mg/kg)的剂量开始，每周每天增加大约15mg/kg，直到达到每天63mg/kg。

在某些实施方案中，加奈索酮作为口服悬浮液以每天10mg至每天20mg(例如，每天15mg/kg)，至多每天63mg/kg(最大每天1800mg)的增量施用，或作为口服胶囊，以每天225mg至每天900mg(例如，每天450mg)的增量施用。在这些实施方案的一些实施方案中，加奈索酮可以例如如下给予：每天6mg/kg三次(TID)(每天18mg/kg)悬浮液/每天225两次(BID)(每天450mg)胶囊-第1-7天；11mg/kg TID(每天33mg/kg)悬浮液/450BID(每天900mg)胶囊-第8-14天；16mg/kg TID(每天48mg/kg)悬浮液/675BID(每天1350mg)胶囊-第15-21天；21mg/kgTID(每天63mg/kg，不超过每天1800mg)悬浮液/900BID(每天1800mg)胶囊-第22-28天。

在某些实施方案中，加奈索酮以口服悬浮液的形式施用，并使用以下滴定方案：

15kg(33lbs)

20kg(44lbs)

25kg(55lbs)

30kg(66lbs)

在某些实施方案中，加奈索酮以胶囊施用，并使用以下滴定方案：

在某些实施方案中，与最大功效相关的谷浓度在约55ng/mL、约60ng/ml或约65ng/ml(0.3微米悬浮液；TID给药)范围内，并且每天1800mg的剂量(0.3微米胶囊，BID施用)提供在此范围内的谷血浆浓度。

本文公开的治疗方法涵盖与或不与食物一起施用神经类固醇(例如，加奈索酮)。在某些实施方案中，加奈索酮与食物一起施用。

V.治疗持续时间

根据本文公开的方法的治疗持续时间可以在1天至超过2年的范围内。例如，治疗持续时间可为约1天至约80年、约1天至约70年、约1天至约60年、约1天至约50年、约1天至约45年、约2天至约45年、约2天至约40年、约5天至约35年、约10天至约30年、约10天至约30年、约15天到大约30年。在一些实施方案中，只要受试者继续从施用神经类固醇(例如，加奈索酮)中获得治疗益处，治疗持续时间就持续。在一些实施方案中，治疗持续时间为14天、28天、30天、6周、8周、10周、12周、6个月、1年、2年、2.5年、3年、3.5年、4年、4.5年、5年、5.5年、6年、6.5年、7年、7.5年、8年、8.5年、9年、9.5年或10年。

在某些实施方案中，在治疗期结束时，或在停止治疗时，基于受试者的年龄、体重、剂量和治疗持续时间，剂量在1至4周的时间段内逐渐降低。

VI.制剂

可以根据本文公开的方法施用包含孕烯醇酮神经类固醇(例如加奈索酮)和一种或多种药学上可接受的赋形剂的任何所需制剂。包括治疗有效量的孕烯醇酮神经类固醇以治疗TSC或TSC相关癫痫的一种或多种症状。在某些实施方案中，制剂不含环糊精，包括磺烷基醚环糊精和其改性形式。

在优选的实施方案中，制剂中孕烯醇酮神经类固醇的量对于治疗TSC相关癫痫的症状在治疗上是有效的，例如，在经口施用制剂1周和/或2周和/或3周和/或4周和/或6周和/或7周和/或8周和/或9周和/或10周和/或11周和/或12周或更长时间后。

在优选的实施方案中，将孕烯醇酮神经类固醇(例如加奈索酮)掺入用于经口施用的药学上可接受的组合物中。在某些优选实施方案中，这样的制剂可以是液体(例如，水性液体(涵盖悬浮液、溶液等)。在其它优选的实施方案中，口服制剂可以是口服固体剂型(例如，口服胶囊或片剂)。在最优选的实施方案中，口服制剂是包含孕烯醇酮神经类固醇的口服悬浮液或包含孕烯醇酮神经类固醇的口服胶囊。优选地，口服制剂的单位剂量含有治疗有效量的孕烯醇酮神经类固醇，其可以经口施用于(例如人)患者(例如婴儿、儿童、青少年或成人)。在某些实施方案中，口服悬浮液经由使用口腔注射器施用于患者。例如，考虑口服悬浮液用于体重小于约30kg(例如，约28kg)的人。另一方面，口服悬浮液可以施用于难以吞咽固体口服剂型的人。大于30kg的儿童可以服用固体剂型，例如加奈索酮胶囊。加奈索酮口服悬浮液可以通过经口给药注射器施用，例如每天三次。可以例如每天两次施用加奈索酮胶囊。患者在用餐(牛奶)时会更好地吸收加奈索酮。

如美国专利No.8,022,054中所述，液体制剂可以是稳定化的孕烯醇酮神经类固醇(例如加奈索酮)颗粒的水分散体，所述颗粒包含加奈索酮、亲水聚合物、润湿剂和有效量的在初始颗粒生长和终点达到后稳定颗粒生长的络合剂，所述络合剂选自分子量小于550的有机小分子的组并含有选自由苯酚部分、芳族酯部分和芳族酸部分组成的组的部分，其中稳定化的颗粒具有约50nm至约500nm的颗粒的体积加权中值直径(D50)，络合剂以基于颗粒重量约0.05％至约5％w/w的量存在，颗粒分散在进一步含有至少两种防腐剂的水溶液中，防腐剂的量足以抑制微生物生长。基于固体颗粒的重量，亲水聚合物的量可为约3％至约50％w/w。基于固体颗粒的重量，润湿剂的量可为约0.01％至约10％w/w。基于稳定化的颗粒的重量，孕烯醇酮神经类固醇(例如加奈索酮)的量可为约10％至约80％(并且在某些实施方案中形成约50％至约80％)。当颗粒以0.5至1mg加奈索酮/mL的浓度分散在模拟胃液(SGF)或模拟肠液(SIF)中并在36℃至38℃的加热浴中放置1小时时，与在相同条件下将颗粒分散在蒸馏水中时稳定化的颗粒的体积加权中值直径(D50)相比，稳定化的颗粒的D50增加不超过约150％，其中分散在SGF或SIF中的稳定化的颗粒的体积加权中值直径(D50)小于约750nm。当制剂以0.5至1mg加奈索酮/mL的浓度分散在15mL SGF或SIF中时，与在相同条件下将颗粒分散在蒸馏水中时稳定化的颗粒的D50相比，稳定化的颗粒的体积加权中值直径(D50)增加不超过约150％，其中分散在SGF或SIF中的稳定化的颗粒的体积加权中值直径(D50)小于约750nm。络合剂可以是对羟基苯甲酸酯、苯甲酸、苯酚、苯甲酸钠、邻氨基苯甲酸甲酯等。亲水聚合物可以是纤维素聚合物、乙烯基聚合物和它们的混合物。纤维素聚合物可以是纤维素醚，例如羟丙基甲基纤维素。乙烯基聚合物可以是聚乙烯醇，例如乙烯基吡咯烷酮/乙酸乙烯酯共聚物(S630)。润湿剂可以是月桂基硫酸钠、多库酯的药学上可接受的盐以及它们的混合物。水分散体还可以包含甜味剂，例如三氯蔗糖。防腐剂选自由山梨酸钾、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯、苯甲酸、对羟基苯甲酸丁酯、乙醇、苯甲醇、苯酚、苯扎氯铵(benzalkonium chloride)和任何前述物质的混合物组成的组。

在一些实施方案中，提供了向受试者经口施用的液体孕烯醇酮神经类固醇(例如加奈索酮)制剂，其包含本文所述的加奈索酮颗粒和至少一种分散剂或悬浮剂。加奈索酮制剂可以是用于悬浮的粉末和/或颗粒，并且在与水混合后，获得基本上均匀的悬浮液。如本文所述，水分散体可以包含由多种有效颗粒尺寸组成的无定形和非无定形加奈索酮颗粒，使得具有较小有效颗粒尺寸的加奈索酮颗粒被较快地吸收，具有较大有效颗粒尺寸的加奈索酮颗粒被较缓慢地吸收。在某些实施方案中，水分散体或悬浮液是立即释放制剂。在另一个实施方案中，配制包含无定形加奈索酮颗粒的水分散体，使得约50％的加奈索酮颗粒在施用后约3小时内被吸收，约90％的加奈索酮颗粒在施用后约10小时内被吸收。在其它实施方案中，向水分散体中加入络合剂导致更大跨度的含有加奈索酮的颗粒延长药物吸收阶段，使得50-80％的颗粒在前3小时内被吸收，约90％到约10小时被吸收。

当悬浮液大部分是均质时，即悬浮液在整个悬浮液中的任何点由大致相同浓度的孕烯醇酮神经类固醇(例如加奈索酮)构成时，悬浮液是“基本均匀的”。优选的实施方案是在摇动后当在加奈索酮水性口服制剂中的不同点测量时提供基本相同的浓度(在15％以内)的实施方案。特别优选的是水悬浮液和分散体，它们在摇动后2小时测量时保持均匀性(至多15％的变化)。应通过与确定整个组合物的均质性一致的取样方法来确定均质性。在一个实施方案中，可以通过持续少于1分钟的物理搅拌将水性悬浮液重新悬浮成均质的悬浮液。在另一个实施方案中，可以通过持续少于45秒的物理搅拌将水性悬浮液重新悬浮成均质的悬浮液。在另一个实施方案中，可以通过持续少于30秒的物理搅拌将水性悬浮液重新悬浮成均质的悬浮液。在又一个实施方案中，维持均质的水分散体不需要搅拌。

在一些实施方案中，用于本文所述的水分散体的孕烯醇酮神经类固醇(例如加奈索酮)粉末包含与按重量计有效颗粒尺寸大于500nm的加奈索酮颗粒一起配制的按重量计有效颗粒尺寸小于500nm的稳定的加奈索酮颗粒。在这样的实施方案中，制剂具有这样的颗粒尺寸分布，其中按重量计约10％至约100％的加奈索酮颗粒在约75nm与约500nm之间，按重量计约0％至约90％的加奈索酮颗粒在约150nm与约400nm之间，以及按重量计约0％至约30％的加奈索酮颗粒大于约600nm。本文所述的加奈索酮颗粒可以是无定形的、半无定形的、结晶的、半结晶的或它们的混合物。

在一个实施方案中，本文所述的水悬浮液或分散体包含浓度为约20mg/ml至约150mg/ml悬浮液的加奈索酮颗粒或加奈索酮络合物。在另一个实施方案中，本文所述的口服水分散体包含浓度为约25mg/ml至约75mg/ml溶液的加奈索酮颗粒或加奈索酮络合物颗粒。在又一个实施方案中，本文所述的口服水分散体包含浓度为约50mg/ml悬浮液的加奈索酮颗粒或加奈索酮络合物。本文所述的水分散体特别有利于将加奈索酮施用于婴儿(小于2岁)、10岁以下的儿童和任何不能吞咽或摄取固体口服剂型的患者组。

用于口服的液体孕烯醇酮神经类固醇(例如加奈索酮)制剂剂型可以是选自包括但不限于药学上可接受的口服水分散体、乳液、溶液和糖浆的组的水悬浮液。参见例如Singh等人,Encyclopedia of Pharmaceutical Technology,第2版,第754-757页(2002)。除了加奈索酮颗粒外，液体剂型还可以包含添加剂，例如：(a)崩解剂；(b)分散剂；(c)润湿剂；(d)至少一种防腐剂，(e)增粘剂，(f)至少一种甜味剂，(g)至少一种调味剂，(h)络合剂，以及(i)离子分散调节剂。在一些实施方案中，水分散体还可以包含结晶抑制剂。

用于水悬浮液和分散体的崩解剂的实例包括但不限于淀粉，例如天然淀粉如玉米淀粉或马铃薯淀粉、预胶化淀粉如National 1551或

在一些实施方案中，适用于本文所述的水悬浮液和分散体的分散剂是本领域已知的并且包括例如亲水聚合物、电解质、

适用于本文所述的水悬浮液和分散体的润湿剂(包括表面活性剂)是本领域已知的并且包括但不限于乙酰醇、单硬脂酸甘油酯、聚氧乙烯脱水山梨糖醇脂肪酸酯(例如，可商购的

用于本文所述的水悬浮液或分散体的合适防腐剂包括例如山梨酸钾、对羟基苯甲酸酯(例如对羟基苯甲酸甲酯和对羟基苯甲酸丙酯)和其盐、苯甲酸和其盐、对羟基苯甲酸的其它酯如对羟基苯甲酸丁酯、醇类如乙醇或苯甲醇、酚类化合物如苯酚、或季化合物如苯扎氯铵。如本文所用，防腐剂以足以抑制微生物生长的浓度掺入剂型中。在一个实施方案中，水性液体分散体可以包含浓度范围为按重量计占水分散体重量的约0.01％至约0.3％的对羟基苯甲酸甲酯和按重量计占水分散体总重量的0.005％至0.03％的对羟基苯甲酸丙酯的对羟基苯甲酸甲酯和对羟基苯甲酸丙酯。在又一个实施方案中，水性液体分散体可以包含水分散体的0.05至约0.1重量％的对羟基苯甲酸甲酯和0.01-0.02重量％的对羟基苯甲酸丙酯。

适用于本文所述的水悬浮液或分散体的粘度增强剂包括但不限于甲基纤维素、黄原胶、羧甲基纤维素、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、Plasdone.RTM.S-630、卡波姆(carbomer)、聚乙烯醇、海藻酸盐、阿拉伯胶、壳聚糖以及它们的组合。增粘剂的浓度将取决于所选择的试剂和所需的粘度。

适用于本文所述的水悬浮液或分散体的天然和人造甜味剂的实例包括例如阿拉伯胶糖浆、乙酰磺胺酸钾、阿力甜(alitame)、茴香、苹果、阿斯巴甜、香蕉、巴伐利亚奶油(Bavarian cream)、浆果、黑醋栗、奶油糖果、柠檬酸钙、樟脑、焦糖、樱桃、樱桃奶油、巧克力、肉桂、泡泡糖、柑橘、柑橘潘趣酒、柑橘奶油、棉花糖、可可、可乐、酷樱桃(cool cherry)、酷柑橘、甜蜜素、克力梅(cylamate)、右旋糖、桉树、丁香酚、果糖、水果潘趣酒、生姜、甘草次酸酯、甘草(欧亚甘草)糖浆、葡萄、葡萄柚、蜂蜜、异麦芽酮糖醇、柠檬、酸橙、柠檬奶油、甘草酸一铵

除了上面列出的添加剂，液体孕烯醇酮神经类固醇(例如加奈索酮)制剂还可以包含本领域常用的惰性稀释剂，例如水或其它溶剂、增溶剂和乳化剂。

在一些实施方案中，本文所述的药物孕烯醇酮神经类固醇(例如加奈索酮)制剂可以是自乳化药物递送系统(SEDDS)。乳液是一种不混溶相在另一相中的分散体，通常呈液滴形式。通常，乳液是通过剧烈的机械分散产生的。与乳液或微乳液相反，SEDDS在加入到过量的水中时会自发形成乳液，无需任何外部机械分散或搅拌。SEDDS的一个优点是只需轻轻混合即可将液滴分布在整个溶液中。此外，可以在即将施用时加入水或水相，这确保了不稳定或疏水活性成分的稳定性。因此，SEDDS为疏水活性成分的口服和肠胃外递送提供了一种有效的递送系统。SEDDS可以提高疏水活性成分的生物利用度。生产自乳化剂型的方法是本领域中已知的，包括但不限于例如美国专利No.5,858,401、6,667,048和6,960,563，每一个以引用的方式特定并入。

示例性乳化剂为乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苯甲醇、苯甲酸苄酯、丙二醇、1,3-丁二醇、二甲基甲酰胺、月桂基硫酸钠、多库酯钠、胆固醇、胆固醇酯、牛磺胆酸、磷脂酰胆碱、油类(例如棉籽油、花生油、玉米胚芽油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油)、甘油、四氢糠醇、聚乙二醇、脱水山梨糖醇的脂肪酸酯、或这些物质的混合物等。

在某些优选的实施方案中，液体药物制剂包含加奈索酮、羟丙基甲基纤维素、聚乙烯醇、月桂基硫酸钠、西甲硅油、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯、苯甲酸钠、柠檬酸和柠檬酸钠，pH 3.8-4.2。悬浮液可以包含浓度为50mg/ml的加奈索酮。制剂还可以包含药学上可接受的甜味剂(例如，三氯蔗糖)和/或药学上可接受的调味剂(例如，樱桃)。制剂可以被封装在例如120mL、180mL、240mL或480mL的瓶子中。

在某些优选的实施方案中，使用如申请人之前的标题为“Solid GanaxoloneFormulations and Methods for the Making and Use Thereof”的美国专利No.7,858,609(以引用的方式整体并入本文中)中描述和制备的口服固体制剂。可以根据任何适合方法制备孕烯醇酮神经类固醇的口服固体制剂(例如，口服胶囊或片剂)。

例如，如美国专利No.7,858,609中所公开的，口服固体制剂包含稳定化的颗粒，所述颗粒包含孕烯醇酮神经类固醇(例如加奈索酮)、亲水聚合物、润湿剂和有效量的在初始颗粒生长和终点达到后稳定颗粒生长的络合剂，所述络合剂是分子量小于550的有机小分子，并含有选自由苯酚部分、芳族酯部分和芳族酸部分组成的组的部分，其中稳定化的颗粒的颗粒体积加权中值直径(D50)是约50nm至约500nm，络合剂的存在量为基于固体颗粒的重量约0.05％至约5％w/w。基于固体颗粒的重量，亲水聚合物的量可为约3％至约50％w/w。基于固体颗粒的重量，润湿剂的量可为约0.01％至约10％w/w。基于稳定化的颗粒的重量，孕烯醇酮神经类固醇(例如加奈索酮)的量可为约10％至约80％(并且在某些实施方案中形成约50％至约80％)。当颗粒以0.5至1mg加奈索酮/mL的浓度分散在模拟胃液(SGF)或模拟肠液(SIF)中并在36℃至38℃的加热浴中放置1小时时，与在相同条件下将颗粒分散在蒸馏水中时稳定化的颗粒的体积加权中值直径(D50)相比，稳定化的颗粒的D50增加不超过约150％，其中分散在SGF或SIF中的稳定化的颗粒的体积加权中值直径(D50)小于约750nm。当制剂以0.5至1mg加奈索酮/mL的浓度分散在15mL SGF或SIF中时，与在相同条件下将颗粒分散在蒸馏水中时稳定化的颗粒的D50相比，稳定化的颗粒的体积加权中值直径(D50)增加不超过约150％，其中分散在SGF或SIF中的稳定化的颗粒的体积加权中值直径(D50)小于约750nm。固体稳定化的颗粒可以与任选的赋形剂组合并制备成粉末形式来施用，或者它们可以掺入选自由片剂或胶囊组成的组的剂型中。络合剂可以是对羟基苯甲酸酯、苯甲酸、苯酚、苯甲酸钠、邻氨基苯甲酸甲酯等。亲水聚合物可以是纤维素聚合物、乙烯基聚合物和它们的混合物。纤维素聚合物可以是纤维素醚，例如羟丙基甲基纤维素。乙烯基聚合物可以是聚乙烯醇，例如乙烯基吡咯烷酮/乙酸乙烯酯共聚物(S630)。润湿剂可以是月桂基硫酸钠、多库酯的药学上可接受的盐以及它们的混合物。当颗粒掺入固体剂型时，固体剂型还可以包含至少一种药学上可接受的赋形剂，例如离子分散调节剂、水溶性间隔剂、崩解剂、粘合剂、表面活性剂、增塑剂、润滑剂、稀释剂以及它们的任何组合或混合物。水溶性间隔物可以是糖类或铵盐，例如果糖、蔗糖、葡萄糖、乳糖、甘露醇。表面活性剂可以是例如聚山梨醇酯。增塑剂可以是例如聚乙二醇。崩解剂可以是交联羧甲基纤维素钠、交联聚维酮、它们的混合物等。

可以例如通过将上文所述的掺混孕烯醇酮神经类固醇(例如加奈索酮)制剂置于胶囊内部来制备胶囊。在一些实施方案中，加奈索酮制剂(非水悬浮液和溶液)置于软明胶胶囊中。在其它实施方案中，加奈索酮制剂置于标准的明胶胶囊或非明胶胶囊，例如包含HPMC的胶囊中。在其它实施方案中，加奈索酮制剂置于喷洒胶囊中，其中可以将胶囊整个吞服或者可以打开胶囊并将内容物在进食前喷洒在食物上。治疗剂量可以分成多个(例如，两个、三个或四个)胶囊。在一些实施方案中，加奈索酮制剂的全部剂量以胶囊形式递送。

优选地，每个胶囊含有约200至约600mg加奈索酮、约300至约600mg加奈索酮、约400至约600mg加奈索酮、约500至约600mg加奈索酮、约200mg加奈索酮、约250mg加奈索酮、约300mg加奈索酮、约500mg加奈索酮或约600mg加奈索酮。

在某些实施方案中，每个胶囊含有200mg或225mg加奈索酮，以及羟丙基甲基纤维素、蔗糖、聚乙二醇3350、聚乙二醇400、月桂基硫酸钠、苯甲酸钠、无水柠檬酸、对羟基苯甲酸甲酯钠、微晶纤维素、30％西甲硅油乳液、明胶胶囊、聚山梨醇酯80和氯化钠。在一些实施方案中，胶囊的尺寸是00。

或者，口服剂型可以呈控制释放剂型的形式，如美国专利No.7,858,609中所述。

合适的孕烯醇酮神经类固醇(例如，加奈索酮)制剂也可以肠胃外施用。在这类实施方案中，适合于肠胃外、皮下或静脉内注射的制剂可以包含生理学上可接受的无菌水性或非水性溶液、分散液、悬浮液或乳液，以及用于复原成无菌可注射溶液或分散液的无菌粉末。适合的水性和非水性载体、稀释剂、溶剂或媒介物的实例包括水、乙醇、多元醇(丙二醇、聚乙二醇、甘油、克列莫佛(cremophor)等)、它们合适的混合物、植物油(例如橄榄油)以及可注射有机酯，例如油酸乙酯。另外，加奈索酮可以使用水溶性β-环糊精(例如β-磺基丁基-环糊精和2-羟丙基β-环糊精)以>1mg/ml的浓度溶解。一种特别合适的环糊精是取代的β-环糊精，

在申请人的美国专利公布No.2017/0258812(2016年10月14日提交的美国序列号15/294,135)中公开了特别有用的可注射制剂，该公布以引用的方式整体并入本文中。也可以使用本领域技术人员已知的其它有用的孕烯醇酮神经类固醇可注射制剂。

VII.组合治疗

本公开包括神经类固醇是唯一活性剂的实施方案和神经类固醇与一种或多种另外的活性剂组合施用的实施方案。当与另外的活性剂组合使用时，神经类固醇和另外的活性剂可以组合在相同的制剂中或可以分开施用。神经类固醇可以在施用另外的活性剂的同时施用(同时施用)或可以在施用另外的活性剂之前或之后施用(依序施用)。

本公开包括另外的活性剂是抗惊厥药的实施方案。抗惊厥药包括GABAA受体调节剂、钠通道阻滞剂、GAT-1GABA转运蛋白调节剂、GABA转氨酶调节剂、电压门控钙通道阻滞剂和过氧化物酶体增殖物激活的α调节剂。

本公开包括向患者施用麻醉剂或镇静剂与神经类固醇组合的实施方案。麻醉剂或镇静剂可以以足以使患者失去意识的浓度，例如足以在医学上引起昏迷的浓度或有效引起全身麻醉的浓度施用。或者麻醉剂或镇静剂可以以对镇静有效但不足以引起意识丧失的较低剂量施用。

苯二氮

在某些实施方案中，神经类固醇与苯二氮

本公开的神经类固醇纳米颗粒可注射制剂可以与另一种抗惊厥剂一起施用。抗惊厥药包括许多药物类别，并在一定程度上与可与神经类固醇组合使用的引发昏迷、麻醉和镇静药物重叠。可以与本公开的神经类固醇纳米颗粒可注射制剂组合使用的抗惊厥剂包括醛类，例如三聚乙醛；芳族烯丙醇，例如司替戊醇(stiripentol)；巴比妥酸盐，包括上面列出的那些，以及甲基苯巴比妥和巴贝沙隆(barbexaclone)；苯二氮

VIII.生物标志物

预测性生物标志物用于鉴定更同质并对疗法有更高响应倾向的患者群体。

别孕烷醇酮是孕酮的一种代谢产物，是GABAA受体的正变构调节剂(PAM)。患有TSC相关癫痫的人可能会表现出这种别孕烷醇酮缺乏，这支持了用药学上可接受的孕烯醇酮(例如，加奈索酮)治疗可以降低癫痫发作频率并可能改善TSC相关癫痫的另外的症状的假设。

因此，在某些实施方案中，别孕烷醇酮-硫酸盐(Allo-S)用作对加奈索酮(别孕烷醇酮的类似物)的响应的预测性生物标志物。在这些实施方案中，2,500pg mL

5.实施例

以下根据本发明的制剂实施例不应被解释为以任何方式限制本发明，并且仅是本文所述的各种制剂的样品。

在加奈索酮制剂的开发过程中，已经对多种制剂进行了评价，以建立一种展示足够药代动力学(“PK”)参数并适合开发和商业化的制剂。使用的其它加奈索酮制剂包括以各种悬浮液的形式施用的与十二烷基硫酸钠混合的加奈索酮、在溶液中与羟丙基-β-环糊精(HP-β-CD)混合的加奈索酮以及与β-环糊精(β-CD)混合的加奈索酮，以及悬浮液中加奈索酮0.5微米颗粒和片剂制剂，以及控释胶囊制剂，以及使用磺丁基醚环糊精

实施例1.

制备具有下表1所阐述的成分的50mg/ml加奈索酮悬浮液：

表1.50mg/ml加奈索酮悬浮液的组成

表2显示了50mg/ml加奈索酮悬浮液中使用的赋形剂的功能。

表2.50mg/ml加奈索酮悬浮液的成分功能总结

50mg/ml加奈索酮悬浮液的口服生物利用率取决于纳米粒子药物在相关生理环境中的溶解速率和程度。颗粒尺寸测定方法和规格旨在确保加奈索酮药物产品在模拟胃肠液中分散后不出现结块。

使用分散纳米研磨工艺减小加奈索酮的颗粒尺寸并获得稳定的加奈索酮纳米颗粒。纳米研磨工艺包括在纳米研磨机内的高能搅动下使用氧化钇稳定的氧化锆(YTZ)研磨介质。为了在分散纳米研磨之前确保浆料颗粒尺寸一致，Marinus开发了一种使用VakuMixDHO-1的高能转子/定子预研磨工艺。纳米研磨后，将分散体从25％w/w加奈索酮稀释到20％w/w加奈索酮，并通过20微米过滤器过滤，并添加稳定剂(对羟基苯甲酸甲酯、苯甲酸钠和无水柠檬酸)以促进在室温下5-10天固化期内受控生长至大约300nm。稳定化的300nm纳米颗粒对儿科悬浮液药品和封装药品形式中的颗粒生长表现出良好的稳定性。稳定化过程由对羟基苯甲酸酯的准确添加和溶解控制，对羟基苯甲酸酯是水溶性稳定剂。通过在悬浮液稀释(在50mg/ml加奈索酮悬浮液的情况下)或流化床珠包衣(在实施例2中描述的225mg加奈索酮胶囊的情况下)之前调节稳定分散体的保持时间和温度来控制固化过程。

在分散体纳米研磨放大研究中制备的三个分散体批次通过添加对羟基苯甲酸甲酯钠、苯甲酸钠和无水柠檬酸进行稀释和稳定，并固化7天。固化后，测量颗粒尺寸，且示于表3中。

表3.固化7天后稳定化的分散体颗粒尺寸

D＝直径

如所示，D(50)颗粒尺寸稳定在250-450nm的规格内。

实施例2.

制备具有下表4和5中所阐述的成分的加奈索酮胶囊(225mg)：

表4.225mg加奈索酮胶囊IR珠的组成

表5总结了225mg加奈索酮胶囊制剂中使用的赋形剂的功能。

表5.225mg加奈索酮胶囊的成分功能总结

表5.225mg加奈索酮胶囊的成分功能总结

IR＝立即释放

用于制备这些胶囊的制造工艺利用相同的药品规格和相同的定量组成，以及相同的纳米研磨分散体稀释和分散体稳定化工艺。因此，实施例2的产物利用与实施例1的产物相同的稳定化分散中间体。对羟基苯甲酸甲酯钠可以用对羟基苯甲酸甲酯代替。

表6总结了加奈索酮立即释放(IR)225mg胶囊的三十六个月正式稳定性数据结果：

表6.加奈索酮立即释放(IR)225mg胶囊的三十六个月正式稳定性数据(25℃/60％RH)

表6.加奈索酮立即释放(IR)225mg胶囊的三十六个月正式稳定性数据(25℃/60％RH)

实施例3

过去在TSC相关癫痫中的癫痫临床试验总结

实施例4

在TSC相关癫痫中进行加奈索酮的2期临床研究。对大约30名年龄在2至65岁(包括端值)的患有TSC相关癫痫的男性和/或女性患者进行筛选并招收。患者已临床确诊为TSC和TSC1或TSC2基因突变。患者完成关于加奈索酮对癫痫发作的影响的每日日记。

治疗阶段包括2个部分：A部分和B部分。在A部分中，除了它们的标准的抗癫痫发作治疗外，患者还接受加奈索酮共12周(4周滴定，8周维持)。在4周内将患者滴定至每天63mg/kg(最大每天1800mg)，然后再维持该剂量8周。加奈索酮以每天15mg/kg的增量施用，至多每天63mg/kg，作为口服悬浮液与食物一起给予。≤28kg的患者按mg/kg给药。>28kg的患者以每天450mg的增量至最多每天1800mg按固定方案给药。加奈索酮在4周滴定期内如下施用：

任何不能耐受下一个剂量步骤的患者在进入下一个剂量之前将在较低的剂量步骤中再维持几天。如果下一个剂量仍然不能耐受，患者可以退回到下一个较低的剂量步骤。除非由于耐受性问题(例如嗜睡)申办者同意较低的剂量，否则在递增期之后，在维持期内通常需要每天33mg/kg或每天900mg的最低剂量。

在进行剂量改变之前或进行改变的48小时内，与申办者医疗监督员讨论剂量改变，包括替代给药范例(例如，白天较低剂量和晚上较高剂量)。在A部分维持期完成之前停止加奈索酮治疗的患者将继续按照方案进行随访，并且至少将鼓励患者保持记录每日癫痫发作日记记录，直到A部分完成。这些患者还将在逐渐减少2周后返回现场进行安全性随访评估。

与基线(例如，4周基线期)相比，在A部分的12周治疗期内癫痫发作频率降低率≥35％且没有任何其它继续治疗禁忌症的患者继续接受研究OLE期(B部分)的加奈索酮治疗，可继续进入B部分(“符合OLE条件”)。B部分是开放标签扩展，并持续约24周。因此，B部分可用于按照方案定义，对加奈索酮有响应的患者。A部分与B部分之间的主要区别在于治疗时长、评估频率较低以及根据在B部分期间患者的临床过程的评价改变药物剂量(加奈索酮和其它AED治疗两者，包括开始和停止其它药物)的能力。

在B部分中，加奈索酮患者继续按完成A部分时的剂量进行加奈索酮治疗。在B部分期间，对于体重>28kg的患者，加奈索酮的剂量可调整至最大600mg TID，并且对于≤28kg的患者，最大剂量为21/mg/kg TID。在B部分期间，可根据研究者的判断调整其它抗癫痫发作药物的剂量(包括逐渐减少和开始治疗)。

除非有医学禁忌，否则任何完成A部分但未继续B部分或完成B部分或停止GNX治疗的患者将经历2周的药物递减(逐渐减少)期，并在2周后返回现场进行安全性随访评估。

完成A部分并被认为有资格参加B部分的患者继续按完成A部分时的相同剂量服用加奈索酮，在B部分中再进行24周的治疗。

患者可能在白天接受较低剂量，并在晚上接受较高剂量。

除非有其它医学禁忌症，诸如药物引起的皮疹，否则任何停用加奈索酮的人都会经历2周的逐渐减少。

在治疗维持期完成之前停用加奈索酮的患者将继续按照方案进行随访，并且至少将鼓励患者保持每日癫痫发作日记，直到A部分中的治疗期完成。这些患者在逐渐减少2周后返回现场进行安全性随访评估。

患者可以返回进行为期2周的随访安全性访视(例如，由于A部分或B部分的提前终止，不参与B部分或完成B部分)。

主要功效终点是评估加奈索酮在12周时期内对TSC相关癫痫的潜能和/或到A部分中12周治疗(滴定和维持)期结束时原发性癫痫发作频率的变化％。原发性癫痫发作类型包括无意识或知觉损害的局灶性运动性癫痫发作、伴有意识或知觉损害的局灶性癫痫发作、演变为双侧全身性惊厥发作的局灶性癫痫发作和具有可数运动分量的全身性癫痫发作。

次要目标是在A部分的12周治疗(滴定和维持)期结束时评估加奈索酮作为辅助疗法的安全性和耐受性；在整个研究期间评估接受加奈索酮剂量至多每天63mg/kg(或最大每天1800mg)的患者中的药代动力学(PK)参数；在整个研究期间评估接受加奈索酮剂量至多每天63mg/kg(或最大每天1800mg)的患者中的药代动力学(PK)参数；评估GNX在整个B部分作为辅助疗法施用时的长期安全性和耐受性。

探索性目标是评估生活质量的变化；在A部分的12周治疗(滴定和维持)期结束时，评估接受加奈索酮作为辅助疗法的患者中的行为/神经精神变化；评估对加奈索酮的功效响应与生物标志物水平(例如神经类固醇)之间的关系；评估加奈索酮对EEG活动的潜在影响；评估TSC中其它类型癫痫发作(非原发性)的变化；评估加奈索酮对无原发性癫痫发作天数的影响；评估加奈索酮对婴儿/癫痫无痉挛天数的影响；评估加奈索酮对婴儿/癫痫无痉挛天数的影响。

A.药代动力学评估：

PK群体将包括已接受至少1剂GNX并已收集至少1个样品并获得有效生物分析结果的所有患者。将在A部分和B部分的最后一剂后1小时与5小时之间或4小时与8小时之间抽取样品。药代动力学分析将限于浓度列表，因为没有足够的浓度-时间数据可用于非隔室分析，诸如Cmax、AUC或tmax。本研究的药代动力学数据可用于与本研究分开进行并单独报告的群体PK分析。

B.神经类固醇血清和伴随的AED水平：

将在筛选访视、A部分中的第12周和B部分中的最后访视时抽取血样，以测量神经类固醇水平(包括别孕烷醇酮和相关的内源性CNS活性类固醇和硫酸盐代谢物，包括例如别孕烷醇酮-硫酸盐)。

实施例5.生物标志物

2015年5月至2015年11月期间，在美国和意大利的六个中心招收了具有确认的PCDH19突变和最小癫痫发作负荷的个体(n＝11)。评估作为主要终点的癫痫发作频率变化(％)，并且响应者被定义为癫痫发作率降低25％或更多。使用先前公布的GC/MS方法(doi:10.1016/S0028-3908(99)00149-5)定量血浆神经类固醇水平。在两个情况中，未测量基线神经类固醇水平。在这些情况下，使用6个月的值，因为未观察到神经类固醇水平随时间显著变化。

所有参与者(n＝11)的28天癫痫发作频率(所有癫痫发作类型)相对于基线的中值变化减少了26％。在该组中，平均血浆别孕烷醇酮-硫酸盐(Allo-S)浓度为4,741pg mL-1(中值＝433pg mL-1)。响应者分析和与Allo-S的相关性证明了两个离散的群体。响应者(n＝6)(癫痫发作率降低≥25％)和无响应者(n＝5)的血浆Allo-S浓度分别为501±430pgmL-1和9,829±6,638pg mL-1(平均值±SD，p＝0.05，曼-惠特尼(Mann-Whitney))。

当比较6个月与基线的癫痫发作频率时，生物标志物阳性组显著改善(p＝0.02，威尔科克森(Wilcoxon))，而生物标志物阴性(高Allo-S)组未改善，但也没有显著恶化(p＝0.25，威尔科克森)。生物标志物阳性(n＝7，Allo-S<2,500pg mL-1)对比生物标志物阴性(n＝4，Allo-S>2,500pg mL-1)受试者的回顾性分析得出的癫痫发作率中值变化％分别为-53.9％和247％(p＝0.006，曼-惠特尼)。此外，当比较6个月与基线的癫痫发作频率时，生物标志物阳性组显著改善(p＝0.02，威尔科克森符号秩(Wilcoxon Signed Rank))，而生物标志物阴性组未显著恶化(p＝0.25，威尔科克森符号秩)。

实施例6.开放标签2期试验A部分中招收的TSC受试者的病例报告1

根据实施例4中描述的研究方案，加奈索酮(GNX)辅助治疗结节性硬化症相关癫痫的开放标签2期试验的A部分中招收了患有结节性硬化症的受试者(受试者001)。受试者的基线癫痫发作负荷为每28天132.41次。加奈索酮一天经口施用三次，最大日剂量为1800mg，持续11周(78天)。受试者已完成该方案，并且相对于基线，经历了癫痫发作减少了64％。这是第一个完成方案的受试者。目前已经招收另外的受试者但尚未完成研究。

表8.TSC受试者中的癫痫发作变化总结

实施例7.初步药代动力学和药效学(PK/PD)分析

进行初步PK/PD分析，以探索加奈索酮水平与严重运动性癫痫发作频率变化百分比之间的关系(如果有的话)。

a)研究设计

全球、随机、双盲、安慰剂对照的3期临床试验，以评估辅助加奈索酮治疗与CDD相关的癫痫发作的安全性和功效。具有CDKL5基因致病性或可能致病性突变、患有神经发育受损和用至少2种先前抗癫痫发作药物治疗难治的癫痫发作，在筛选前2个月内每28天至少经历16次癫痫发作的2至21岁患者是有资格招收进来的。研究由6周的基线、然后17周的双盲阶段(加奈索酮或安慰剂，1:1)组成。50mg/mL加奈索酮悬浮液的剂量在4周内滴定至每天63mg/kg(21mg/kg TID)，不超过1800mg/d(600mg TID)或最大耐受剂量。用于PK分析的抽血计划在第3次访视(第5周)、第4次访视(第9周)和第5次访视(第17周)进行。

b)方法

在双盲阶段期间使用来自多达三个实验室测定的可用结果计算每个受试者的平均加奈索酮浓度。使用算术和自然对数转换的严重运动性癫痫发作减少百分比(log

所得样品用于确定皮尔逊相关系数(Pearson correlation coefficient)(使用对数转换值)。此外，使用克鲁斯卡尔-沃利斯检验(Kruskal-Wallis test)，在代表低(N＝13)、中(N＝13)和高(N＝12)每个受试者加奈索酮浓度平均值的三个三分位数中比较癫痫发作减少百分比。

在加奈索酮治疗的参与者中，暗示潜在剂量相关毒性(嗜睡、镇静、昏睡、注意力障碍、流口水和张力减退)的CNS相关不良事件的数量以及事件的发生和持续时间被制成表格，并且计算双盲阶段每周内发生CNS不良事件的参与者人数。

c)结果

有癫痫发作减少数据的44名参与者至少进行了一次血浆加奈索酮水平测定(平均值+标准偏差＝103.5+79.2ng/mL)。在以癫痫发作减少百分比作为因变量和平均血浆加奈索酮浓度作为自变量的线性回归中，由于调整后的残差>2或<-2，6个病例被确定为离群值。排除那些病例后重复线性回归(N＝38)得到调整后的R2为0.227(F(1,36)＝11.89)，p＝0.001)。使用相同样品的平均血浆加奈索酮浓度和严重运动性癫痫发作减少百分比的相关系数为-0.499(p＝0.001)。进行了稳健的回归，包括复制了该分析结果的所有观察结果(N＝44)。

计算低、中和高加奈索酮浓度三分位数的严重运动性癫痫发作减少百分比平均值和中值(表9)。严重运动性癫痫发作频率减少百分比在组间存在统计学显著差异(H(2)＝9.087，p＝0.011)(图2)。三组样品分布的事后成对比较显示低GNX水平组与高GNX水平组之间存在统计学显著差异，但其它组间检验则没有。

表9.基于平均加奈索酮血浆浓度的三分位数

总之，血浆加奈索酮水平的对数与严重运动性癫痫发作频率的变化百分比呈负相关。在CDKL5缺乏症(CDD)患者中，血浆GNX水平的增加与27至333ng/mL范围内的癫痫发作频率的更大降低相关。对数值的逆向转换表明，大约100ng/mL(CDD群体的平均值)的血浆浓度预测本研究参与者的癫痫发作减少大约40％。

基于先前1期研究的建模PK曲线表明，与BID给药相比，TID给药能够提供GNX谷水平。初步PK/PD分析的结果表明，血浆加奈索酮浓度的增加与癫痫发作减少得到改善相关，并且大约100ng/mL的浓度与癫痫发作频率的有意义的变化有关。根据建模的PK曲线，TID给药可能会使一天24小时内血浆加奈索酮水平>100ng/mL达大约78％，而使用BID给药时仅为53％。虽然这些分析不能保持随机化，并因此可能不代表GNX对癫痫发作频率变化的因果效应，但它们表明TID给药可能会增加抗癫痫发作的益处。