一种具有抑菌活性的海洋原生动物腹柱虫提取物浸膏

技术领域

本发明属于原生动物提取物技术领域，特别是涉及一种具有抑菌活性的海洋原生动物腹柱虫提取物浸膏。

背景技术

病原微生物对人类生产和生活产生巨大的危害，抗生素作为由微生物或高等动植物在生活过程中所产生的一类次级代谢产物，不仅能杀灭细菌而且对霉菌、支原体、衣原体等其它致病微生物也有良好的抑制和杀灭作用，但在过去的几十年间，抗生素的普遍使用使得致病菌对其产生耐药性，抗生素耐受菌的出现使新型抗生素的研发变得更为迫切；

过去的几十年中，抗生素的获得主要集中在陆地资源上，然而从陆源生物中发现新的生物活性化合物的可能性不断降低；海洋环境生物成为新颖的活性次级代谢产物的重要来源，海洋环境由于其生态压力，包括空间和捕食的竞争，以及诸如盐度、压力和温度变化等物理特性，导致海洋微生物在这一高要求的生态系统中发展了独特的代谢系统和机体防御机制来适应这种环境，由此海洋微生物的特征与陆地微生物的特征必定也会存在着极大的差异，因此，海洋生物可能会产生各种不同于陆地的新的生物活性代谢物，目前海洋环境已成为寻找和发现新产品资源的主要产地；

原生生物是无细胞壁真核单细胞动物，虽然结构简单，但具有维持生命和延续后代所必需的一切功能，目前相关领域的研究集中在形态分类学、系统学、细胞发生学、病害学和生态学等几个方面，近年来研究者们在某些海洋原生动物中提取到了一些病原拮抗活性物质，例如腹毛目的厚后游仆虫(Euplotes crassus)能产生一种名为Euplotin的独特萜类化合物，能抗对利什曼虫有拮抗效应promastigotes，药学上可作为抗原虫化疗药物的增效物。原生动物抗菌活性成分的研究具有重要意义。

发明内容

针对现有抗生素的普遍使用使得致病菌对其产生耐药性的问题，本发明提供一种具有抑菌活性的海洋原生动物腹柱虫提取物浸膏，为新型抗生素的研发提供了资源。

本发明是通过以下技术方案实现的：一种具有抑菌活性的海洋原生动物腹柱虫提取物浸膏，包括海洋腹柱虫浸膏的制备方法和微量稀释法测定海洋腹柱虫浸膏抑菌活性；

所述海洋腹柱虫浸膏的制备方法用于原生动物腹柱虫提取物浸膏的制备；

所述微量稀释法测定海洋腹柱虫浸膏抑菌活性，用于海洋腹柱虫浸膏抑菌效果检测的用途。

进一步地，所述海洋腹柱虫浸膏的制备方法包括以下步骤：

第一步：从环境中分离纯化腹柱虫种群，获取腹柱虫的单一种群；

第二步：腹柱虫的扩大培养，接种腹柱虫的单一种群入液体培养基中进行扩大培养；

第三步：浸膏制备。

进一步地，所述微量稀释法测定海洋腹柱虫浸膏抑菌活性采用检测培养病原微生物中加入海洋腹柱虫浸膏的菌体抑制百分比，来测定海洋腹柱虫浸膏的抑菌活性。

进一步地，所述微生物为耐甲氧西林金黄色葡萄球、轮虫弧菌、坎氏弧菌和创伤弧菌。

本发明具有以下有益效果：

本发明的海洋腹柱虫浸膏抗菌活性高，能用于制备抑菌剂，并且来源自海洋原生动物，可通过扩大培养持续获得原料，具有环境友好性，应用成本低；用于耐甲氧西林金黄色葡萄球菌、轮虫弧菌、坎氏弧菌和创伤弧菌抑菌剂的开发，其应用前景十分广阔。

具体实施方式

下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本发明保护的范围。

本发明为一种具有抑菌活性的海洋原生动物腹柱虫提取物浸膏，包括海洋腹柱虫浸膏的制备方法和微量稀释法测定海洋腹柱虫浸膏抑菌活性；

所述海洋腹柱虫浸膏的制备方法用于原生动物腹柱虫提取物浸膏的制备；

所述海洋腹柱虫浸膏的制备方法包括以下步骤：

第一步：从环境中分离纯化腹柱虫种群；

从海水中采集原生动物群落，实验室内用麦粒培养液扩群，操作步骤为：显微镜下吸取一只腹柱虫(Gastrostyla sp.)，用麦粒培养液扩大培养，获得腹柱虫的单一种群；

第二步：腹柱虫的扩大培养；

接种腹柱虫的单一种群入液体培养基，25℃低速摇床培养2个月，扩大培养达到5L规模，所得的样品进行离心(3,000rpm，10min)，收集虫体，接种腹柱虫的单一种群入液体培养基中进行扩大培养；

第三步：浸膏制备；用甲醇进行萃取，反复萃取3次，萃取的方法是将甲醇加入离心后去除水样的沉积物中，采用高速弥散机将沉积物打成匀浆，离心为(12000r/min)，取上清甲醇样，采用旋转蒸发仪浓缩成浸膏，然后用甲醇复溶至5mL，4℃保存备用；

高速弥散机购买自德国IKA艾卡集团广州仪科实验室技术有限公司产品编号：T25DS25；

旋转蒸发仪购买自德国Heidolph公司，产品编号：Hei-VAP；

所述微量稀释法测定海洋腹柱虫浸膏抑菌活性用于海洋腹柱虫抑菌作用浸膏制备抑菌剂中的用途。

所述微量稀释法测定海洋腹柱虫浸膏抑菌活性采用检测培养病原微生物中加入海洋腹柱虫浸膏的菌体生长抑制情况，，来测定海洋腹柱虫浸膏的抑菌活性。

所述微生物为耐甲氧西林金黄色葡萄球、轮虫弧菌、坎氏弧菌和创伤弧菌；

两株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌、轮虫弧菌、坎氏弧菌和创伤弧菌。采用OD

以上菌株可以购自ATCC、CGMCC和MCCC；

海洋腹柱虫浸膏对上述病原菌的最低抑菌浓度MIC如表1所示，从表1可以看出，本发明的海洋腹柱虫浸膏有效地抑制了上述病原菌的增殖，其抑制细菌增殖的活性较高，能用于制备抑菌剂，开发和应用前景十分广阔；

表1.海洋腹柱虫浸膏的最低抑菌浓度MIC结果表

所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。

在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“示例”、“具体示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不一定指的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任何的一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。

以上公开的本发明优选实施例只是用于帮助阐述本发明。优选实施例并没有详尽叙述所有的细节，也不限制该发明仅为所述的具体实施方式。显然，根据本说明书的内容，可作很多的修改和变化。本说明书选取并具体描述这些实施例，是为了更好地解释本发明的原理和实际应用，从而使所属技术领域技术人员能很好地理解和利用本发明。本发明仅受权利要求书及其全部范围和等效物的限制。