一种适用于动物口服给药的抗菌剂

本申请为在2019年11月28日提交中国专利局、申请号为CN201911195283.9、发明名称为“一种适用于动物口服给药的抗菌剂”的中国专利申请的分案申请。

技术领域

本发明属于药物技术领域。更具体地，涉及一种适用于动物口服给药的抗菌剂。

背景技术

各种家畜，包括马、牛、羊、猪等动物，都具有一套灵敏的感觉器官(嗅觉、味觉、听觉、视觉)。所有家畜就是依靠这些感觉器官来适应外界复杂的环境条件，以求得生存，繁殖后代。家畜利用嗅觉和味觉来辨别饲料的适口性、选择饮水(家畜嗅觉的本能及其在畜牧业上的应用，卢伟民，《家畜生态》，1989年第1期)。家畜里面猪的视力很差，视距短且范围小，所以猪对事物的识别和判断，主要靠嗅觉和听觉。猪的鼻筒长、嗅区广，嗅粘膜绒毛的总面积较大，分布非常发达的嗅觉神经，对气味的识别能力比人约大7～8倍(猪的嗅觉在养猪生产中的应用，谭明轩，《广东畜牧兽医科技》，1994年第19卷第4期，P35)。怀孕母猪、哺乳母猪和种公猪因其生物本能，为保证繁衍后代对气味尤其敏感。良好的采食行为是动物机体维持生长发育和提高生产性能的基础，而嗅觉和味觉是动物采食过程中最重要的两种感官感受。动物采食与其嗅觉和味觉有着密切的关系，嗅觉是动物机体通过接收食物远距离的挥发性物质而产生的感觉。嗅觉可以使动物机体在不接触食物的情况下，仅通过其气味就能判断对食物的喜好，并做出摄食与否的抉择。在实际畜牧业生产中，嗅觉和味觉对拥有自主采食能力的动物、眼盲的动物、散养的动物和畜禽都至关重要，这直接决定了其成活率、机体健康、繁殖等。对于规模化养殖，群体给药的最佳方式为口服给药，即通过混饮或混饲给药，具有减少动物应激，降低劳动强度，快速防治群体动物疾病等特点。

喹诺酮(Quinolone)又称吡酮酸类或吡啶酮酸类，是一类人工合成的含喹诺酮结构的抗菌药。喹诺酮类药物以细菌的脱氧核糖核酸(DNA)为靶，妨碍DNA回旋酶，进一步造成染色体的不可逆损害，而使细菌细胞不再分裂。本类药物则不受质粒传导耐药性的影响，因此，本类药物与许多抗菌药物间无交叉耐药性，具有抗菌谱广、抗菌活性强、与其他抗菌药物无交叉耐药性和毒副作用小等特点，被广泛应用于畜牧、水产等养殖业中，包括在鸡、鸭、鹅、猪、牛、羊、鱼、虾、蟹等的养殖中用于疾病防治。

然而，喹诺酮类药物带有不愉快气味和味道。该气味和味道能引起动物的厌恶反应，在这种情况下，嗅觉和味觉敏感动物会产生拒食拒饮现象，故喹诺酮类药物难以通过口服给药方式应用于此类动物的细菌性感染的治疗。动物通过嗅觉和味道选择食物，是实现自我保护的基础。该行为被认为是一种抵御有毒物质的防御机制，它在动物的长期进化过程中起着至关重要的作用(HernessMS,GilbertsonT.A.AnnuRevPhysiol,1999,61:873-900)。喹诺酮类药物带有的不愉快气味和味道会被嗅觉或味觉敏感动物认为对动物机体是有害的，因此，通过简单的混饲或者混饮给药，会急剧降低其采食量或饮水量，甚至完全拒食拒饮，影响了药物的摄入量，导致无法通过口服给药达到对罹患细菌性或支原体感染的动物的治疗目的。

为克服动物拒食问题，申请号20020089783的韩国专利通过β-环糊精包合恩诺沙星、添加掩味剂如锅巴香、阿斯巴甜等；专利号为200610049243.X的中国专利通过采用明胶包囊技术来掩味，制成药物添加剂；专利号为200510050039.5的中国专利保护了一种恩诺沙星微囊及制备方法，其通过包衣材料将恩诺沙星制成微胶囊，进而达到掩味的目的；申请号为200810091851.6的中国专利公开了一种通过包膜微胶囊技术来改善恩诺沙星的适口性等。但是这些专利产品添加于饲料中后，遇水或者在动物口腔中遇唾液或经咀嚼破碎，主药的不愉快味道易释放出来，使动物采食下降甚至拒食，难以达到口服给药的目的。

发明内容

本发明要解决的技术问题是克服现有喹诺酮类药物在用药时由于药物本身的气味和味道给动物带来的不愉快感觉，导致动物拒食拒饮的问题。本发明通过研究发现喹诺酮类药物和单宁组合使用可以消除喹诺酮类药物的不愉快气味和味道，解决上述问题，同时可以降低喹诺酮类药物的最低抑菌浓度，减少喹诺酮类药物的使用量。

本发明的目的是提供一种适用于动物口服给药的抗菌剂。

本发明上述目的通过以下技术方案实现：

众所周知，喹诺酮类药物具有强烈的苦味，单宁具有强烈的涩味，本发明研究发现，将两者联合使用可以避免两者单独使用时具有的不愉快感觉，同时可发挥显著的协同作用，降低喹诺酮类药物的最低抑菌浓度，减少喹诺酮类药物的使用量，因此提供了一种新的动物抗菌产品。

一种适用于动物口服给药的抗菌产品，包含以下组分：

(i)喹诺酮(Quinolones)或其可药用盐；

(ii)单宁(Tannins)或其可药用盐；

其中，所述喹诺酮是指含有喹诺酮结构的化合物，其具有如下结构：

R

R

R

R

R

R

当R

所述烷基、环烷基、烷氧基、五元杂环基、六元杂环基或苯基上的一个或多个氢原子可以被取代基取代，所述取代基独立选自烷基、烷氧基、酰基、卤素、氰基、氨基、硝基、羟基；

术语“烷基”指仅含有碳、氢两种原子的直链或支链的饱和烃基，优选1-10个碳原子，更优选1-6个碳原子，包括但不限于甲基(-CH

术语“烷氧基”指烷基基团通过氧原子与分子其余部分相连，其中烷基基团具有如本发明所述的含义；

术语“环烷基”指仅含有碳、氢两种原子的环状有机基团，优选3-10个碳原子，包括但不限于环丙基，环丁基，环戊基，环己基，环庚基，环辛基，环壬基，环癸基，环十一烷基，环十二烷基，等等；

术语“卤素”指氟、氯、溴、碘；

术语“五元杂环基”指由碳原子和非碳原子构成的环状有机化合物形成的基团，碳原子个数与非碳原子个数之和为5。五元杂环基可以是取代或者未取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个，可独立地选自卤素、羟基、氨基、烷氧基、烷基、氰基、芳基、杂环基。

术语“六元杂环基”指由碳原子和非碳原子构成的环状有机化合物形成的基团，碳原子个数与非碳原子个数之和为6。六元杂环基可以是取代或者未取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个，可独立地选自卤素、羟基、氨基、烷氧基、烷基、氰基、芳基、杂环基。

术语“芳基”指取代的或没有取代的拥有共轭的平面环体系，常见的如苯环、萘环、呋喃、吡咯、吲哚、噻吩、咪唑、吡唑、恶唑等等。

上述烷基、环烷基或烷氧基基团的一个或多个CH

优选地，本发明中喹诺酮优选为含有如下结构的化合物：

X独立选自碳原子、氮原子和氧原子；Y独立选自碳原子和氮原子。

其中：R

R

R

R

所述烷基、环丙基、烷氧基、五元杂环基、六元杂环基或苯基上的一个或多个氢原子可以被取代基取代，所述取代基独立选自烷基、烷氧基、酰基、卤素、氰基、氨基、硝基、羟基。

更优选地，所述喹诺酮中取代基优选如下：

R

R

R

R

所述C

作为一种优选方案，上述喹诺酮优选为恩诺沙星Enrofloxacin、马波沙星Marbofloxacin、二氟沙星Difloxacin、沙拉沙星Sarafloxacin、环丙沙星Ciprofloxacin、达氟沙星Danofloxacin、氟甲喹Flumequine、倍诺沙星Benofloxacin、诺氟沙星Norfloxacin、氧氟沙星Ofloxacin、洛美沙星Lomefloxacin、培氟沙星Pefloxacin、奥比沙星Orbifloxacin、依巴沙星Ibafloxacin、普多沙星Pradofloxacin。

作为一种较优选方案，上述喹诺酮更优选为：恩诺沙星Enrofloxacin、马波沙星Marbofloxacin、二氟沙星Difloxacin、沙拉沙星Sarafloxacin、环丙沙星Ciprofloxacin、达氟沙星Danofloxacin、氟甲喹Flumequine、倍诺沙星Benofloxacin、诺氟沙星Norfloxacin、氧氟沙星Ofloxacin、洛美沙星Lomefloxacin、培氟沙星Pefloxacin。

作为一种更优选方案，上述喹诺酮更优选为：恩诺沙星Enrofloxacin、马波沙星Marbofloxacin、二氟沙星Difloxacin、沙拉沙星Sarafloxacin、环丙沙星Ciprofloxacin、达氟沙星Danofloxacin、氟甲喹Flumequine、奥比沙星Orbifloxacin。

作为一种较佳方案，上述喹诺酮为恩诺沙星Enrofloxacin。

作为一种较佳方案，上述喹诺酮为达氟沙星Danofloxacin。

作为一种较佳方案，上述喹诺酮为沙拉沙星Sarafloxacin。

作为一种较佳方案，上述喹诺酮为奥比沙星Orbifloxacin。

优选地，所述抗菌产品中，组分(i)和(ii)的重量比优选为5:95～95:5。

作为一种优选方案，组分(i)和(ii)的重量比更优选为15:85～85:15。

作为一种更优选方案，组分(i)和(ii)的重量比更优选为25:75～75:25。

优选地，所述适用于动物口服给药的抗菌产品，是通过将组分(i)和(ii)均匀混合制备得到。

上述动物口服给药的抗菌产品的制备方法，是由(i)喹诺酮或其可药用盐和(ii)单宁或其可药用盐通过化学方法或者物理方法均匀混合制得。

作为一种可选择的优选方案，所述抗菌产品还可以通过如下步骤进行：

(1)将(i)喹诺酮或其可药用盐直接或使其形成溶液或悬浊液；

(2)将(ii)单宁或其可药用盐直接或使其形成溶液或悬浊液；；

(3)且，喹诺酮或单宁至少一种是溶液或悬浊液，然后将(1)和(2)混合，过滤，收集沉淀；

(4)沉淀干燥得到抗菌产品。

作为另一种可选方法，所述抗菌产品的制备方法，可以是由(i)喹诺酮或其可药用盐和(ii)单宁或其可药用盐通过直接均匀混合制得。

本申请所述的直接均匀混合，是指没有溶剂参与下的混合方式，具体地，所述抗菌产品的制备可通过以下步骤实现：

(1)称取喹诺酮或其可药用盐；

(2)称取单宁或其可药用盐；

(3)将喹诺酮或其可药用盐和单宁或其可药用盐均匀混合，得到抗菌产品。

所述均匀混合通常是先对喹诺酮或其可药用盐、单宁或其可药用盐进行粉碎，然后过筛，再进行混合。

在均匀混合后，还可以通过制粒的方法，使抗菌产品能够更好地成型。所述制粒优选为湿法制粒，制粒后对颗粒进行烘干，得到所述抗菌产品。

上述粉碎和过筛可以采用本领域常用的粉碎设备和过筛设备完成，对工艺无特殊要求，粉碎和过筛的目的，均是为了实现二者更均匀地混合。

喹诺酮或单宁形成溶液或悬浊液的过程，可以加入溶剂，必要时还可以加入无机酸或有机酸增加其溶解度。

所述溶剂指可以溶解喹诺酮和单宁的任何溶剂，包括但不限于：水、甲醇、乙醇、异丙醇、丙酮、乙酸乙酯、乙酸异丙酯、甲基叔丁基醚、乙腈、N,N-二甲基甲酰胺、二氯甲烷、三氯甲烷、二氯乙烷以及此类溶剂的混合物。

所述无机酸或有机酸可以是盐酸、硫酸、磷酸、甲酸、乙酸、丙酸、丁酸、甲磺酸、乳酸、苯甲酸、延胡索酸、苹果酸、精氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、酒石酸等。

基于上述方法，本发明提供一种由上述方法制备得到的抗菌产品。

本发明抗菌产品可以作为广谱抗菌药，可用于制备抗动物细菌性感染的药物。在降低了喹诺酮类药物的用量的同时消除了喹诺酮类药物的不愉快气味和味道，解决现有的喹诺酮类药物在用药时由于药物本身的气味和味道给动物带来的不愉快感觉，导致动物拒食拒饮的问题。

所述动物为嗅觉和/或味觉敏感动物。所述嗅觉和/或味觉敏感动物包括但不限于猪、牛、羊、马、犬、猫。优选指猪、牛、犬。

本发明提供一种药物制剂，包含上述抗菌产品及一种或多种药学上可接受的辅料。

所述药学上可接受的辅料选自：溶剂、增溶剂、助溶剂、乳化剂、着色剂、黏合剂、崩解剂、填充剂、润滑剂、润湿剂、稳定剂、助流剂、矫味剂、防腐剂、助悬剂、包衣材料、芳香剂、抗黏合剂、整合剂、渗透促进剂、pH值调节剂、缓冲剂、增塑剂、表面活性剂、发泡剂、消泡剂、增稠剂、包合剂、保湿剂、吸收剂、稀释剂、絮凝剂与反絮凝剂、助滤剂、释放阻滞剂中的至少一种及其组合。

本发明抗菌产品还可以制成混悬剂、干混悬剂、颗粒剂、散剂、粉剂、预混剂、丸剂、片剂、泡腾剂、溶液剂等。

本发明抗菌产品对动物的给药方式，可以是饮水给药或混饲给药。

本发明具有以下有益效果：

本发明的抗菌产品通过将喹诺酮类药物和单宁组合，制得的产品成品稳定，分散性良好，具有显著的协同效应，没有不愉快气味和味道，具有良好的抑菌效果和药物动力学特征，在降低喹诺酮类药物使用剂量的同时维持同样的抗菌作用，因此降低抗生素的副作用或不良反应的风险；同时该药物组合缓释控释，易于吸收，治疗效果好。

本发明动物用抗菌产品还通过混饲或者饮水给药的方法让动物群体摄入药物，减少了个体给药的劳动强度，方便快捷，避免动物因生病食欲下降而导致药物摄入不充分的问题。

附图说明

图1为单宁的热重分析图。

图2为环丙沙星的热重分析图。

图3为实施例12的产品的热重分析图。

图4为实施例12产品对金黄色葡萄球菌或大肠杆菌生长情况的影响。

图5为实施例31产品31A、31B、31C、31D对大肠杆菌生长情况的影响。

具体实施方式

以下结合说明书附图和具体实施例来进一步说明本发明，但实施例并不对本发明做任何形式的限定。除非特别说明，本发明采用的试剂、方法和设备为本技术领域常规试剂、方法和设备。

除非特别说明，以下实施例所用试剂和原辅材料均为可从商业途径得到。

实施例1

将恩诺沙星与单宁按质量份数5:95经粉碎、过筛、混合，制得动物用抗菌产品。

实施例2

将甲磺酸达氟沙星与单宁按质量份数10:90经粉碎、过筛、混合，湿法制粒，烘干，常法制得动物用抗菌产品。

实施例3

将环丙沙星盐酸盐与单宁按质量份数20:80经粉碎、过筛、混合，常法制得动物用抗菌产品。

实施例4

将马波沙星与单宁按质量份数30:70经粉碎、过筛、混合，湿法制粒，烘干，常法制得动物用抗菌产品。

实施例5

将50份重量的沙拉沙星置于1500份水中，搅拌，滴加盐酸直至完全溶解；将50份重量的单宁溶解于500份水中，将其缓慢加入前述溶液中，搅拌，50℃保温反应1小时，过滤，滤饼烘干，制得动物用抗菌产品。

实施例6

将50份重量的二氟沙星盐酸盐溶解于2000份水中，将50份重量的单宁溶解于500份水中，将两份溶液合并搅拌均匀，过滤，滤饼烘干，制得动物用抗菌产品。

实施例7

将50份重量的沙拉沙星置于2000份水中，将50份重量的单宁溶解于500份水中，将两者合并搅拌均匀，过滤，滤饼烘干，制得动物用抗菌产品。

实施例8

将60份重量的恩诺沙星溶解于2000份二氯甲烷中，将40份重量的单宁溶解于800份水中，将两份溶液合并搅拌均匀，过滤，滤饼烘干，制得动物用抗菌产品。

实施例9

将80份重量的奥比沙星置于2000份乙醇中，加热搅拌至溶解，将20份重量的单宁溶解于400份水中，将两份溶液合并搅拌均匀，过滤，滤饼烘干，制得动物用抗菌产品。

实施例10

将马波沙星盐酸盐与单宁按质量份数95:5经粉碎、过筛、混合，湿法制粒，烘干，常法制得动物用抗菌产品。

实施例11

将50份重量的马波沙星置于200份水中，加入盐酸直至完全溶解，另将50份重量的单宁溶解于500份水中，将两份溶液合并搅拌均匀，过滤，滤饼烘干，制得动物用抗菌产品。

实施例12

将10份重量的环丙沙星置于400份水中，将15份重量的单宁溶解于200份水中，将两者合并搅拌均匀，过滤，滤饼烘干，制得动物用抗菌产品。

实施例13

将10份重量的诺氟沙星烟酸盐置于400份三氯甲烷中，将15份重量的单宁溶解于200份水中，将其缓慢加入前述溶液中，搅拌，50℃保温反应1小时，过滤，滤饼烘干，制得动物用抗菌产品。

实施例14

将80份重量的甲磺酸达氟沙星溶解于800份水中，将20份重量的单宁溶解于200份水中，将两份溶液合并搅拌均匀，过滤，滤饼烘干，制得动物用抗菌产品。

实施例15

将25份重量的倍诺沙星置于1000份水中，将75份重量的单宁溶解于750份水中，将单宁溶液缓慢加入倍诺沙星中，搅拌10分钟，过滤，滤饼烘干，制得动物用抗菌产品。

实施例16

将85份重量的洛美沙星置于1500份水中，加入天冬氨酸搅拌至完全溶解。将15份重量的单宁溶解于150份水中，将单宁溶液缓慢加入洛美沙星溶液中，搅拌60分钟，过滤，滤饼烘干，制得动物用抗菌产品。

实施例17

将恩诺沙星与单宁按质量份数50:50均匀混合，制得动物用抗菌产品。

实施例18

将依巴沙星与单宁按质量份数75:25均匀混合，制得动物用抗菌产品。

实施例19

健康怀孕母猪90头(怀孕10周)，随机平均分成3组，给药方式：饮水给药。设空白对照组：饮水为不加任何物质的清水；恩诺沙星组：饮水中添加恩诺沙星，按恩诺沙星计浓度为0.1g/L(100ppm)；本发明实施例1组：饮水中添加本发明实施例1制得的动物用抗菌产品，按恩诺沙星计浓度为0.1g/L(100ppm)。

预实验3天(分组但不添加药物)，记录3组的饮水量，基本相同无差异。第四天添加，观察12小时，记录各组饮水量如表1所示：

表1

实验结果表明：怀孕母猪完全不接受含有恩诺沙星的饮用水，而往饮水中添加实施例1产品对怀孕母猪饮水量几乎没有影响。

实施例20

哺乳母猪90头(产后4周)，随机平均分成3组，给药方式：饮水给药。设空白对照组：饮水为不加任何物质的清水；甲磺酸达氟沙星组：饮水中添加盐酸达氟沙星，按达氟沙星计浓度为0.05g/L(50ppm)；本发明实施例2组：饮水中添加本发明实施例2制得的动物用抗菌产品，按达氟沙星计浓度为0.05g/L(50ppm)。

预实验3天(分组但不添加药物)，记录3组的饮水量，基本相同无差异。第四天添加，观察12小时，记录各组饮水量如表2所示：

表2

实验结果表明：哺乳母猪不喜饮用含有甲磺酸达氟沙星的饮水，而往饮水中添加实施例2产品对哺乳母猪饮水量几乎没有影响。

实施例21

平均体重50kg的细菌性腹泻猪36头，随机平均分成3组，给药方式：饮水给药。设空白对照组：饮水为不加任何物质的清水；环丙沙星盐酸盐组：饮水中添加环丙沙星盐酸盐，按环丙沙星计浓度为0.05g/L(50ppm)；本发明实施例3组：饮水中添加本发明实施例3制得动物用抗菌产品，按环丙沙星计浓度为0.05g/L(50ppm)。

预实验3天(分组但不添加药物)，记录3组的饮水量，基本相同无差异。第四天添加，观察12小时，记录各组饮水量如表3所示：

表3

实验结果表明：病猪不喜饮用含有环丙沙星盐酸盐的饮水，而往饮水中添加实施例3产品对病猪饮水量几乎没有影响，且可以明显治疗病猪的腹泻。

实施例22

怀孕3周的母猪120头，随机平均分成3组，给药方式：饮水给药。设空白对照组：饮水为不加任何物质的清水；马波沙星组：饮水中添加马波沙星，按马波沙星计浓度为0.1g/L(100ppm)；本发明实施例4组：饮水中添加本发明实施例4制得动物用抗菌产品，按马波沙星计浓度为0.1g/L(100ppm)。

预实验3天(分组但不添加药物)，记录3组的饮水量，基本相同无差异。第四天添加，观察12小时，记录各组饮水量如表4所示：

表4

实验结果表明：猪不喜饮用含有马波沙星的饮水，而往饮水中添加实施例4产品对其饮水量没有影响。

实施例23

平均体重80kg的健康后备母猪120头，随机平均分成3组，给药方式：混饲给药。设空白对照组：饲料不加任何药物；沙拉沙星盐酸盐组：饲料中添加沙拉沙星盐酸盐，按沙拉沙星计浓度为0.1g/kg；本发明实施例5组：饲料中添加本发明实施例5制得动物用抗菌产品，按沙拉沙星计浓度为0.1g/kg。

预实验3天(分组但不添加药物)，记录3组的采食量，基本相同无差异。第四天开始在饲料中添加药物，记录各组采食量如表5所示：

表5

*注：该采食量为24小时数据，考虑到猪的健康生长，24小时后即恢复空白饲料。

实验结果表明：猪不喜食用含有沙拉沙星盐酸盐的饲料，而往饲料中添加实施例5产品对其采食量几乎没有影响。

实施例24

平均体重75kg的健康英系杜洛克公猪30头，随机平均分成3组，给药方式：饮水给药。设空白对照组：饮水为不加任何物质的清水；二氟沙星盐酸盐组：饮水中添加二氟沙星盐酸盐，按二氟沙星计浓度为0.1g/L(100ppm)；本发明实施例6组：饮水中添加本发明实施例6制得动物用抗菌产品，按二氟沙星计浓度为0.1g/L(100ppm)。

预实验3天(分组但不添加药物)，记录3组的饮水量，基本相同无差异。第四天添加，观察12小时，记录各组饮水量如表6所示：

表6

实验结果表明：杜洛克公猪不喜饮用含有二氟沙星盐酸盐的饮水，而往饮水中添加实施例6产品对饮水量几乎没有影响。

实施例25

平均体重35kg的发生细菌性腹泻的肥育猪90头，随机平均分成3组，给药方式：饮水给药。设空白对照组：饮水为不加任何物质的清水；沙拉沙星组：饮水中添加沙拉沙星，按沙拉沙星计浓度为0.1g/L(100ppm)；本发明实施例7组：饮水中添加本发明实施例7制得动物用抗菌产品，按沙拉沙星计浓度为0.1g/L(100ppm)。

预实验3天(分组但不添加药物)，记录3组的饮水量，基本相同无差异。第四天添加，观察12小时，记录各组饮水量如表7所示：

表7

实验结果表明：患病肥育猪不喜饮用含有沙拉沙星的饮水，而往饮水中添加实施例7产品对其饮水量几乎没有影响，且能明显治疗病猪的腹泻。

实施例26

平均体重20kg的细菌性腹泻的猪90头，随机平均分成3组，给药方式：混饲给药。设空白对照组：饲料不加任何药物；恩诺沙星组：饲料中添加恩诺沙星，按恩诺沙星计浓度为0.1g/kg；本发明实施例8组：饲料中添加本发明实施例8制得动物用抗菌产品，按恩诺沙星计浓度为0.1g/kg。

预实验3天(分组但不添加药物)，记录3组的采食量，基本相同无差异。第四天开始在饲料中添加药物，记录各组采食量如表8所示：

表8

实验结果表明：猪不喜饮用含有恩诺沙星的饲料，而往饲料中添加实施例8产品对其采食量几乎没有影响，且能明显治疗病猪的腹泻。

实施例27

患有急性乳房炎的奶牛24头，临床症状：触诊乳房有轻度发热、疼痛、肿胀。乳汁有絮状物或凝块，乳汁变稀，pH值偏碱性，体细胞计数和氯化物含量均增加，随机平均分成4组，给药方式：饮水给药。空白对照组：饮水中不添加任何药物；注射对照组：肌肉注射，取市售马波沙星注射液，按每公斤体重2.5mg(以马波沙星计)肌肉注射，每天1次，连用5天；饮水对照组：取马波沙星粉剂，配成含马波沙星计浓度为0.025g/L(25ppm)的饮水，供其自由饮用；本发明实施例10组：饮水中添加本发明实施例10制得的动物用抗菌产品，按马波沙星计浓度为0.025g/L(25ppm)，供其自由饮用。

观察并纪录各组饮水量及治疗效果如表9所示：

表9

实验结果表明：往饮水中添加实施例10产品，患病奶牛的饮水量与空白对照组和注射对照组相当，远高于饮水对照组；且其治疗效果远优于饮水对照组。

实施例28

某犬场的犬黄痢病例30例，病畜排白色、灰白色或黄白色腥臭稀便，经实验室诊断为大肠杆菌感染。随机平均分成3组，给药方式：饮水给药。设空白对照组：饮水为不加任何物质的清水；烟酸诺氟沙星组：饮水中添加烟酸诺氟沙星，按诺氟沙星计浓度为0.05g/L(50ppm)；本发明实施例13组：饮水中添加本发明实施例13制得动物用抗菌产品，按诺氟沙星计浓度为0.05g/L(50ppm)。

预实验3天(分组但不添加药物)，记录3组的饮水量，基本相同无差异。第四天添加，观察12小时，记录各组饮水量如表10所示：

表10

实验结果表明：往饮水中添加实施例13产品，并没有降低嗅觉敏感的病犬的饮水量，且其对其腹泻具有明显的治疗效果。

实施例29

本发明的产品和市售对照品的热重分析

1、仪器和方法

仪器：NETZSCH TG 209F1

方法：500-N2-600-air，27℃/10.0(K/min)/500℃

2、结果

(1)单宁的热重分析(图1)：

(2)环丙沙星的热重分析(图2)

(3)实施例12的抗菌产品热重分析(图3)

综合对比单宁、环丙沙星、实施例12的抗菌产品的三个热重分析图，实施例12的产品热重分析图出现明显变化，225-275℃间DTG曲线更加平滑，尤其是环丙沙星的333℃和415℃附近DTG峰形已完全不同。说明实施例12抗菌产品中单宁和环丙沙星间存在一定作用力，并非简单叠加。

实施例30

抗菌产品的体外抗菌活性测定

以实施例12的抗菌产品为例，测定产品对大肠埃希菌1.2385和金黄色葡萄球菌1.2465的最低抑制浓度(MIC)，用于评价本发明抗菌产品的抗菌活性。

1、实验方法

(1)试剂配制

实施例12样品溶液的配制：称取0.0010g的实施例12样品的粉末溶于1mL的DMSO溶液中，手动震荡，至实施例12样品完全溶解于DMSO中。

环丙沙星样品溶液的配制：称取0.0010g的环丙沙星样品的粉末溶于1mL的DMSO溶液中，手动震荡，至环丙沙星样品完全溶解于DMSO中。

1M NaOH溶液的制备：称取40.01g的NaOH粉末，用蒸馏水定容至1L。

营养肉汤液体培养基的配制：称取10.0g的蛋白胨、3.0g的牛肉膏、5.0g的NaCl，用蒸馏水定容至1L，用NaOH调至pH＝7.0，120℃高温高压灭菌20min。

营养肉汤琼脂培养基的配制：称取10.0g的蛋白胨、3.0g的牛肉膏、5.0g的NaCl、15.0g的琼脂粉，用蒸馏水定容至1L，用NaOH调至pH＝7.0，120℃高温高压灭菌20min。

(2)采用二倍比稀释法测定实施例12样品和环丙沙星样品分别对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度(MIC)。

选择预实验中细菌相对存活率低于10％的样品的最低工作浓度为最低抑菌浓度区域，以2的倍数前后共设置六个工作浓度，制备相应工作浓度的营养肉汤琼脂培养基平板，种5×10

2、实验结果

结果如图4和表11所示：

实施例12样品对大肠杆菌的最低抑菌浓度为0.0032μg/mL，实施例12样品的工作浓度为0.0032μg/mL时，3次实验均未有菌落生长；环丙沙星样品对大肠杆菌的最低抑菌浓度为0.0064μg/mL，环丙沙星样品的工作浓度为0.0064μg/mL时，3次实验均未有菌落生长。

实施例12样品对金黄色葡萄球菌的最低抑菌浓度为0.16μg/mL，环丙沙星样品的工作浓度为0.16μg/mL时，3次实验均未有菌落生长；环丙沙星样品对金黄色葡萄球菌的最低抑菌浓度为0.32μg/mL，环丙沙星样品的工作浓度为0.32μg/mL时，3次实验均未有菌落生长。

其中不加药组的平板金黄色葡萄球菌和大肠杆菌均生长旺盛，无法计数；加纯培养基组的未见有菌落生长。

表11实施例12样品和环丙沙星样品对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的最低抑菌浓度

实验结果表明：由40％(重量)的环丙沙星和60％(重量)的单宁组合而成的实施例12产品，较单独使用环丙沙星，可以降低对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的最低抑菌浓度，从而可以在不降低药效的情况下减低药物的使用剂量，降低副作用或不良反应的风险。

实施例31

喹诺酮与单宁组合的抗菌产品的体外抗菌活性测定

以环丙沙星替换实施例6中的二氟沙星盐酸盐，其中环丙沙星与单宁的质量比例为20/80，其余操作同实施例6，制得产品31A；以左氧氟沙星替换实施例6中的二氟沙星盐酸盐，其中环丙沙星与单宁的质量比例为20/80，其余操作同实施例6，制得产品31B；以沙拉沙星替换实施例6中的二氟沙星盐酸盐，其中环丙沙星与单宁的质量比例为20/80，其余操作同实施例6，制得产品31C；以奥比沙星替换实施例6中的二氟沙星盐酸盐，其中环丙沙星与单宁的质量比例为20/80，其余操作同实施例6，制得产品31D；测定上述4个产品的体外抗菌活性

采用测定产品对大肠杆菌最低抑制浓度(MIC)，用于评价产品的抗菌活性。最小抑菌浓度(MIC)采用二倍比稀释法进行测定，并计算分级抑菌浓度(fractional inhibitoryconcentration，FIC)指数。

初步测定产品对大肠杆菌最低抑菌浓度区域(图5)，选择预实验中细菌相对存活率低于10％的产品的最低工作浓度为最低抑菌浓度区域，以2的倍数向前设置三个工作浓度，向后设计两个工作浓度，制备相应工作浓度的营养肉汤琼脂培养基平板，种5×10

结果表12所示：环丙沙星对大肠杆菌的最低抑菌浓度为0.0064μg/mL，环丙沙星的工作浓度为0.0064μg/mL时，3次实验均未有菌落生长；产品31A对大肠杆菌的最低抑菌浓度为0.008μg/mL，产品31A的工作浓度为0.008μg/mL时，3次试验均未有菌落生长；左氧氟沙星对大肠杆菌的最低抑菌浓度为0.032μg/mL，左氧氟沙星的工作浓度为0.032μg/mL时，3次实验均未有菌落生长；产品31B对大肠杆菌的最低抑菌浓度为0.04μg/mL，产品31B的工作浓度为0.04μg/mL时，3次实验均未有菌落生长；沙拉沙星对大肠杆菌的最低抑菌浓度为0.032μg/mL，左氧氟沙星的工作浓度为0.032μg/mL时，3次实验均未有菌落生长；产品31C对大肠杆菌的最低抑菌浓度为0.08μg/mL，产品31C的工作浓度为0.08μg/mL时，3次实验均未有菌落生长；奥比沙星对大肠杆菌的最低抑菌浓度为0.08μg/mL，奥比沙星的工作浓度为0.08μg/mL时，3次实验均未有菌落生长；产品31D对大肠杆菌的最低抑菌浓度为0.2μg/mL，产品31D的工作浓度为0.2μg/mL时，3次实验均未有菌落生长；单宁样品在工作浓度为1000μg/mL时大肠杆菌依旧可以生长，3次实验均有菌落生长，由此可见，单宁样品的最低抑菌浓度会超过环丙沙星样品的最低抑菌浓度的15.6万倍。其中不加药组的平板大肠杆菌均生长旺盛，无法计数；加纯培养基组的未见有菌落生长。

表12样品对大肠杆菌的最低抑菌浓度和FIC

实验结果表明：

产品31A的最低抑菌浓度为0.008μg/mL，根据FIC＝MIC

产品31B的最低抑菌浓度为0.04μg/mL。根据FIC＝MIC

产品31C的最低抑菌浓度为0.08μg/mL。根据FIC＝MIC

产品31D的最低抑菌浓度为0.2μg/mL。根据FIC＝MIC

本产品31A、31B、31C、31D具有协同效应，可以降低喹诺酮类药物使用剂量的同时维持接近的抗菌作用。

实施例32

喹诺酮与单宁组合的抗菌产品的体外抗菌活性测定

以奈诺沙星替换实施例7中的沙拉沙星，其中奈诺沙星与单宁的质量比例为20/80，其余操作同实施例7，制得产品32，测定产品的体外抗菌活性。

采用测定产品32对金黄色葡萄球菌最低抑制浓度(MIC)，用于评价产品的抗菌活性。最小抑菌浓度(MIC)采用二倍比稀释法进行测定，并计算分级抑菌浓度(fractionalinhibitory concentration，FIC)指数。

初步测定产品对金黄色葡萄球菌最低抑菌浓度区域，选择预实验中细菌相对存活率低于10％的产品的最低工作浓度为最低抑菌浓度区域，以2的倍数向前设置三个工作浓度，向后设计两个工作浓度，制备相应工作浓度的营养肉汤琼脂培养基平板，种5×10

结果表13所示：奈诺沙星对金黄色葡萄球菌的最低抑菌浓度为0.05μg/mL，产品16对金黄色葡萄球菌的最低抑菌浓度为0.05μg/mL；单宁样品对金黄色葡萄球菌的最低抑菌浓度为250μg/mL。其中不加药组的平板大肠杆菌均生长旺盛，无法计数；加纯培养基组的未见有菌落生长。

表13样品对金黄色葡萄球菌的最低抑菌浓度和FIC

实验结果表明：

奈诺沙星样品对金黄色葡萄球菌的最低抑菌浓度为0.05μg/mL，单宁样品对金黄色葡萄球菌的最低抑菌浓度为250μg/mL，抑菌作用极低。

产品32的最低抑菌浓度为0.1μg/mL。根据FIC＝MIC

本产品32具有显著的协同效应，可以降低喹诺酮类药物使用剂量的同时维持接近的抗菌作用。

上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。