一种酵母组合物及其制备方法和应用

技术领域

本发明属于护肤品技术领域，涉及一种酵母组合物及其制备方法和应用。

背景技术

随年龄增长，皮肤基底细胞代谢更新变慢，表皮层变薄，基底膜松弛，真皮层厚度变薄，胶原蛋白等胞外基质含量变少，皮肤分泌保湿因子和脂质成分的能力也降低。在外观上表现为干燥、粗糙、抵抗外界损伤的屏障能力降低，肤色暗淡，有皱纹，等等状况。

发酵类成分在护肤品中的应用越来越多，以发酵类成分为功效支撑和宣传概念的产品也日益增多。发酵是利用微生物在一定条件下获得代谢产物或者微生物本体的过程，也是一个分解的过程。难以渗透进皮肤角质层而被利用起效的大分子有机物，可以在发酵过程中分解成小分子的氨基酸、短肽、糖类、有机酸等成分，一定程度上更容易渗透起效。

发明内容

本发明针对皮肤衰老现象，提供一种酵母组合物及其制备方法。通过合理组合搭配四种不同功效的发酵成分，组成具有修护、抗皱、亮白、紧致等效果的功效物组合，在一定添加比例和高速均质设备下，制得脂质体，低添加量即可起效。

具体来说，二裂酵母发酵产物溶胞产物具有修护皮肤损伤的作用；酵母菌发酵产物滤液具有亮白皮肤的作用；芽孢杆菌发酵产物具有促进老化角质细胞更新的作用；女酒酵母发酵产物具有紧致肌肤、减少皱纹的作用。四种原材料组分复杂，含有各种氨基酸、有机酸、电解质、多肽。为使他们组合在一起能互相促进而不会由于负责的成分导致互相排除，特使用同为发酵来源的鞘氨醇单胞菌发酵产物提取物来增稠，起到稳定作用；而其他增稠剂如琼脂、琼脂糖、结冷胶则不适用于本发明。进一步的，根据四种发酵产物的研究资料，要达到起效添加量，配方成本会很高；同时添加足量原料，皮肤负担也会加重。本发明通过发酵产物水溶液在脂质体中完全代替水来进行神经酰胺NP的包裹，获得包裹脂质体，提升了屏障修护功效和头皮渗透率。同时，做成包裹脂质体后，透皮率增加，可降低使用量，增加安全性。

本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：

<第一方面>

本发明涉及一种酵母组合物，所述组合物包括质量比为(10～20):(10～20):(5～10):(1～3)的二裂酵母发酵产物溶胞产物、酵母菌发酵产物滤液、女酒酵母发酵产物和芽孢杆菌发酵产物。

<第二方面>

本发明涉及一种酵母脂质体，包含所述的组合物、鞘氨醇单胞菌发酵产物提取物和神经酰胺NP。通过组合物中的发酵产物水溶液在脂质体制备中完全代替水来进行神经酰胺NP的包裹，获得所述酵母脂质体。

作为一个实施方案，所述脂质体包括如下组分：鞘氨醇单胞菌发酵产物提取物0.05～0.5％、甘油40～60％、丁二醇5～15％、氢化卵磷脂3～7％、糖脂0.1～0.5％、甘油硬脂酸酯1～3％、鲸蜡硬脂醇1～3％、山梨坦硬脂醇1～3％、神经酰胺NP0.5～1.5％、二裂酵母发酵产物溶胞产物10～20％、酵母菌发酵产物滤液10～20％、女酒酵母发酵产物5～10％、芽孢杆菌发酵产物1～3％。

<第三方面>

本发明涉及一种酵母脂质体的制备方法，所述方法包括如下步骤：

S1、40～60％甘油、5～15％丁二醇、0.05～0.5％鞘氨醇单胞菌发酵产物提取物混合搅拌分散均匀，加入3～7％氢化卵磷脂、0.1～0.5％糖脂、1～3％甘油硬脂酸酯、1～3％鲸蜡硬脂醇、1～3％山梨坦硬脂醇、0.5～1.5％神经酰胺NP，温后高速均质处理，降温；

S2、保持一定温度，加入10～20％二裂酵母发酵产物溶胞产物、10～20％酵母菌发酵产物滤液、5～10％女酒酵母发酵产物、1～3％芽孢杆菌发酵产物，高速均处理，搅拌均匀，即得所述酵母脂质体。

作为一个实施方案，步骤S1中，所述升温为加热到85～90℃；所述降温为降温到40～50℃。

作为一个实施方案，步骤S1中，高速均质处理3～5分钟；所述高速为2600-3000rpm。

作为一个实施方案，步骤S2中，保持温度为40～50℃。

作为一个实施方案，步骤S2中，高速均质处理3～6分钟；所述高速为2600-3000rpm。

<第四方面>

本发明涉及一种酵母脂质体在制备护肤品中的应用。

作为一个实施方案，所述酵母脂质体添加于护肤精华露中，添加量为3-5％。

与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：

(1)本发明的四种发酵来源功效原料组合比单一使用更高效；且四种功效物组合，护肤效果更全面；

(2)本发明采用四种酵母提取物溶液代替水，与神经酰胺组成脂质体，增加酵母的渗透和修护功效，生物利用率高，安全性高；

(3)由于促渗透技术，酵母提取物等功效原料添加量降低，成本大幅度降低，安全性大幅度提高；

(4)本发明体系中的悬浮稳定剂也使用发酵来源的，与酵母功效物相容性更好。

(5)本发明关键原料均通过发酵技术获得，属于绿色工业技术，更环保。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明进行详细说明。以下实施例将有助于本领域的技术人员进一步理解本发明，但不以任何形式限制本发明。应当指出的是，对本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干调整和改进。这些都属于本发明的保护范围。

以下实施例及对比例中，二裂酵母发酵产物溶胞产物(Bifida Ferment LysateN，韩国摩尔公司)、酵母菌发酵产物滤液(酵母菌发酵产物滤液，安琪酵母)、女酒酵母发酵产物(TECHNOLONG LADY'S SAKE LEES-CA，日本特科诺宝公司)和芽孢杆菌发酵产物(KERATOLINE C PS，禾大公司)、酵母菌溶胞物提取物(皮肤呼吸因子，艾缇公司)、大麦籽发酵产物(ORGERIDE C，日本片仓公司)、乳酸杆菌发酵产物(ProRenew Complex CLR，德国CLR公司)。

实施例1

本实施例提供一种含酵母组合物的酵母脂质体及其制备方法，包括如下步骤：

1)反应釜中加入50.9％甘油、10％丁二醇，加入0.1％鞘氨醇单胞菌发酵产物提取物，搅拌分散均匀，加入5％氢化卵磷脂、0.5％糖脂、2％甘油硬脂酸酯、2％鲸蜡硬脂醇、2％山梨坦硬脂醇、1.5％神经酰胺NP，加热到85～90℃，高速均质4分钟，降温到45℃。

2)保持45℃，加入10％二裂酵母发酵产物溶胞产物、10％酵母菌发酵产物滤液、5％女酒酵母发酵产物、1％芽孢杆菌发酵产物，高速均质5分钟，搅拌均匀；得酵母脂质体。

实施例2

本实施例提供一种含酵母组合物的酵母脂质体及其制备方法，包括如下步骤：

1)反应釜中，加入40％甘油、5％丁二醇、0.5％鞘氨醇单胞菌发酵产物提取物混合搅拌分散均匀，加入3％氢化卵磷脂、0.5％糖脂、1％甘油硬脂酸酯、1％鲸蜡硬脂醇、1％山梨坦硬脂醇、0.5％神经酰胺NP，加热到85～90℃，高速均质4分钟，降温到45℃。

2)保持45℃，加入20％二裂酵母发酵产物溶胞产物、14.5％酵母菌发酵产物滤液、10％女酒酵母发酵产物、3％芽孢杆菌发酵产物，高速均质5分钟，搅拌均匀；得酵母脂质体。

实施例3

本实施例提供一种含酵母组合物的酵母脂质体及其制备方法，包括如下步骤：

1)反应釜中，加入40％甘油、6％丁二醇、0.2％鞘氨醇单胞菌发酵产物提取物混合搅拌分散均匀，加入4.5％氢化卵磷脂、0.5％糖脂、1％甘油硬脂酸酯、1％鲸蜡硬脂醇、1％山梨坦硬脂醇、0.8％神经酰胺NP，加热到85～90℃，高速均质4分钟，降温到45℃。

2)保持45℃，加入15％二裂酵母发酵产物溶胞产物、20％酵母菌发酵产物滤液、8％女酒酵母发酵产物、2％芽孢杆菌发酵产物，高速均质5分钟，搅拌均匀；得酵母脂质体。

对比例1

本对比例基本同实施例2，所不同之处在于：采用黄原胶替换鞘氨醇单胞菌发酵产物提取物。

对比例2

本对比例基本同实施例1，所不同之处在于：采用酵母菌溶胞物提取物替换酵母菌发酵产物滤液，其脂质体中包含的组合物为二裂酵母发酵产物溶胞产物、酵母菌溶胞物提取物、女酒酵母发酵产物和芽孢杆菌发酵产物。

对比例3

本对比例基本同实施例1，所不同之处在于：采用大麦籽发酵产物替换女酒酵母发酵产物，其脂质体中包含的组合物为二裂酵母发酵产物溶胞产物、酵母菌发酵产物滤液、大麦籽发酵产物和芽孢杆菌发酵产物。

对比例4

本对比例基本同实施例1，所不同之处在于：采用乳酸杆菌发酵产物替换芽孢杆菌发酵产物，其脂质体中包含的组合物为二裂酵母发酵产物溶胞产物、酵母菌发酵产物滤液、女酒酵母发酵产物和乳酸杆菌发酵产物。

对比例5

本对比例基本同实施例2，所不同之处在于：

2)保持45℃，加入18.7％二裂酵母发酵产物溶胞产物、13.5％酵母菌发酵产物滤液、9.3％女酒酵母发酵产物、6％芽孢杆菌发酵产物，高速均质5分钟，搅拌均匀；得酵母脂质体。

对比例6

本对比例基本同实施例1，所不同之处在于：

未制成脂质体，只是将实施例1等质量的神经酰胺NP、二裂酵母发酵产物溶胞产物、酵母菌发酵产物滤液、女酒酵母发酵产物和芽孢杆菌发酵产物在45℃高速均质5分钟，搅拌均匀，得酵母混合物。神经酰胺是油溶，此对比例得到的酵母混合物，不能用于制备水剂精华。

功效验证例

将实施例1-3以及对比例1-5的酵母脂质体或对比例6的酵母混合物分别制备成精华液后进行性能测试，制备成精华的步骤如下：

1、反应器中加入去离子水，加入0.02％EDTA 2Na、1％丁二醇、1％甘油、2％1,3-丙二醇，0.5％对羟基苯乙酮，加热到80℃，保温20min。

2、降温至40℃，加入5％酵母脂质体或酵母混合物，搅拌均匀后，继续加入0.5％己二醇，35rpm匀速搅拌20min。

3、制得酵母精华露

性能测试如下：

1、皮肤封闭型斑贴试验

【方法依据】《化妆品安全技术规范2015年版》

【测试目的】检测受试物引起皮肤不良反应的潜在可能性。

【使用方法】测试部位：背部/前臂曲侧；使用频率:1次

【受试者信息】共30人，男1人，女29人，年龄21至43岁，平均年龄30.87±4.96岁。

【检测环境】温度20℃-22℃；湿度：40％-60％RH

【试验方法】

阴性对照：斑试器

斑试使用方法：选用面积不超过50mm

24小时后除去斑试器，分别于去除斑试器后0.5小时，24小时，48小时观察皮肤反应，按《化妆品安全技术规范》(2015)中皮肤反应分级标准记录其结果。

皮肤封闭型斑贴试验皮肤反应分级标准如下表1：

表1

测试结果如下表2：

表2

2、保湿测试

【方法依据】《QB/T 4256-2011化妆品保湿功效评价指南》

【测试目的】通过受试者单次使用样品，仪器测试的方法测量涂抹样品前后受试部位，评价产品的短效保湿的效果

【使用方法】

测试部位：前臂内侧

使用频率：单次使用

使用方法：用皂基洁面乳清洗胳膊内侧后，取定量受试物涂抹于受试区域

【受试者信息】共33人，女33人，年龄18至42岁，平均年龄29.76<5.49岁。

【检测环境】温度20℃-22℃；湿度：50％-60％RH

【检测仪器】

【试验方法】

(1)受试者先对测试区的皮肤进行清洁，在恒温恒湿环境中静坐30min,不能喝水和饮料，保持放松，平衡期间工作人员会给受试者双手前臂内侧做好涂抹区和空白对照区标记(大小：3cm*3cm),应随机分布于左右手臂标定区域，确保所有产品和空白区域位置在统计学上达到平衡。

(2)测试样品按(2.0±0.1)mg/cm

(3)工作人员按使用说明书调整仪器后，对标记好的样品区域和对照区域的进行测量，每个区域平行测定3次。先测量各测试区域的初始值(样品使用前)，然后在设定时间4H、8H后测定样品区和对照区的皮肤角质层水分含量。

(4)测试指标

保湿：通过

参数解释：数值越高代表保湿效果越好，反之越差。

(5)取使用样品前、使用样品4H、8H、12H后的数据；应用SPSS应用统计分析软件对各测试时点测量值进行描述性统计，包括数量、均值、标准差、最小值、最大值等。用shapiro-Wilk Test进行数据正态分布的显著性检验,sig(双侧)＞0.05,样本呈正态分布，符合正态分布要求，釆用t检验方法进行统计分析；如测试数据为非正太分布，则采用秩和检验方法进行统计分析。

计算样品区和空白区的初始值与其他测量时间点测量值之间的差值

第n小时差值＝第n小时-初始值

注：本测试中，n取4H、8H、12H数据

(6)结果判定

阳性结果：与空白区比较，涂样区域的角质层水含量呈显著性升高，表示该受试样品具有保湿的效果；

阴性结果：与空白区比较，涂样区域的角质层水含量呈显著性降低或无显著性差异，表示该受试样品不具有保湿的效果。

测试结果见表3：

表3空白组与样品组(实施例、对比例)使用4H、8H后结果(单位：a.u.)

注：统计学软件SPSS分析，第n小时vs初始值，“n.s”表示在统计学上不具有显著性差异P>0.05；"*”表示具有显著性差异，0.01≤P<0.05；"**”表示0.001≤P<0.01；"***"表示P<0.001。

表4样品使用4H、8H后差值对比结果

注：差值＝第n小时-初始值，统计学软件SPSS分析，涂样品区第n小时差值vs空白区域第n小时差值，“n.s”表示在统计学上不具有显著性差异P>0.05；"*”表示具有显著性差异，0.01≤P<0.05；"**”表示0.001≤P<0.01；"***”表示P<0.001。

3、屏障修护测试

【方法依据】T/ZHCA003-2018化妆品影响经表皮水分流失测试方法。

【测试目的】通过受试者使用样品，仪器测试的方法测量涂抹样品前后受试部位经皮水分改善值与对照区前后改善值对照，评价产品的屏障修护功效。

【使用方法】

测试部位：前臂曲侧

使用频率：每天两次，两次涂样时间需大于4小时，由工作人员统一涂样。

【受试者信息】共33人，女32人，男1人，年龄21至42岁，平均年龄28.27<5.90岁。

【检测环境】温度20℃-22℃；湿度：40％-60％RH

【检测仪器】Tewameter经皮水分测试仪、斑试器、移液器。

【检测方法】

1.测试指标

皮肤屏障修护：通过经皮水分散失量(TEWL值)体现，使用经皮水分测试仪测量皮肤TEWL值，测定30s,取3次测试的平均值。在测试条件下，得到的TEWL值越低，代表单位时间、单位横截面积的经表皮水分流失量越少，皮肤屏障能力越好；TEWL值越高，代表单位时间、单位横截面积的经表皮水分流失量越多，皮肤屏障能力越差。

2.样品使用方法

测试样品按(2.0±0.1)mg/cm

3.SLS诱导损伤方法

将200μl±10μl的0.7％的十二烷基硫酸钠溶液注入斑试器(直径为18mm、深度为1.2mm)小室内，浸润滤纸片，将斑贴纸贴在受试者左右前臂曲侧，相邻斑试器小室边缘间距不小于3cm,用手掌轻压使之均匀的贴肤在皮肤上，持续24H后去除。7D：0D(损伤前)、1D(损伤后)、3D、7D分别进行仪器测试；

4.测试内容

产品涂抹区和空白对照区应随机分布于左右前臂标定区域，确保所有产品和空白区域位置在统计学上达到平衡。

根据随机表标记测试区域，测试样品区和空白区的基础值，然后按照3.方法诱导皮肤损伤。1D揭掉斑试器平衡30min(待压痕消失)后取损伤后的初始数据，数据取好后按照2.样品使用方法涂抹待测试样品并记录；3D、7D回访时于测试环境中平衡30min后进行数据采集；测试结束后按照2.样品使用方法涂抹待测试样品并记录。测量各斑贴区域中心位置的TEWL值区域测量结果以平行测试3次的平均值表示。

应用SPSS软件对各测试时点测量值进行描述性统计，包括数量、均值、标准差、最小值、最大值等。用shapiro-Wilk Test进行数据变化率正态分布的显著性检验，sig(双侧)＞0.05,样本呈正态分布，符合正态分布要求，自身前后的比较釆用配对t检验。

计算样品区和空白区的初始值与其他测量时间点测量值之间的变化值，然后利用此变化值，统计分析不同时间点产品区和空白对照区的差别。

第n天变化率＝(第n天-初始值)/初始值*100％

注：本测试中，0D为损伤前的数值，初始值为损伤后的1D值，n取3D、7D。

【结果判定】

阳性结果：与对照区域相比，样品涂抹区域TEWL值呈显著性降低表示被测样品具有修护皮肤屏障的效果；

阴性结果：与对照区域相比，样品涂抹区域TEWL值无显著性差异或显著性升高，表示被测样品不具有修护皮肤屏障的效果。

水分流失含量测试结果见表5、6.

表5样品区与空区白数值对比结果(单位：g/m

D1 vs D0,“n.s”表示在统计学上不具有显著性差异P>0.05；"#”表示具有显著性差异，0.01≤P<0.05；“##”表示0.001≤P<0.01；"###”表示P<0.001；

第n天vs D1:经统计学软件SPSS分析，第n天vs 1D,“n.s”表示在统计学上不具有显著性差异P>0.05；"*”表示具有显著性差异，0.01≤P<0.05；“**"表示0.001≤P<0.01；"***”表示P<0.001。

表6涂样品后不同时间变化率对比结果

注：变化率＝(第n天-初始值)/初始值*100％

经统计学软件SPSS分析，涂样品区第n天变化率vs空白区域第n天变化率，"n.s”表示在统计学上不具有显著性差异P>0.05；"*”表示具有显著性差异，0.01≤P<0.05；"**”表示0.001≤P<0.01；"***”表示P<0.001。

4、皮肤紧致功效测试

【方法依据】《T/TDCA 003-2021化妆品皮肤紧致功效测试方法》

【测试目的】通过受试者使用样品，仪器测试的方法和受试者自我评估测量涂抹样品前后受试部位，评价产品的皮肤紧致、改善细纹、提高皮肤颜色L值、改善皮肤红区、温和性的功效。

【使用方法】

测试部位：面部；

样品使用方法：一天使用2次，早晚洁面后使用，取适量产品在手心，轻轻拍打至肌肤吸收即可。

【受试者信息】共32人，男2人，女30人，年龄21至51岁，平均年龄：32.59±5.30岁。

【检测环境】M 20℃-22℃；湿度：50％-60％RH。

【检测仪器】

【检测项目】皮肤紧致、改善细纹、皮肤颜色L值、改善皮肤红区、温和性。

【试验方法】

筛选合格的受试者先对测试区的皮肤进行清洁，在恒温恒湿环境中静坐30min,不能喝水和饮料，保持放松，由工作人员在受试者的面部做好定位，然后用相应的仪器对受试区域进行测量，作为使用前的数据。

使用前的数据测量完成后对受试者进行样品使用方法说明，受试者听取说明后发放样品，在家连续使用试验样品4周，测试开始前和接受后对产品使用量进行确认。

2W、4W后回访重复前述步骤。

【测试指标】

1)皮肤紧致：使用

2)皮肤纹理：使用VISIA-CR表面图像分析仪器，分数皮肤皮肤细纹面积和占比；参数解释：皮肤细纹面积、占比值越小，代表皮肤皮肤细纹越少，反之皮肤细纹越多。

3)皮肤颜色：使用Colorimeter CL 400皮肤颜色测试仪,测试皮肤的L值；参数解释：L值表征肤色的深浅，值越大代表肤色越浅，反之肤色越深。

4)皮肤红区：使用VISIA-CR表面图像分析仪器，分数皮肤红区面积和占比；参加解释：红区面积、占比值越小，代表皮肤越不红，反之皮肤越红。

5)温和性：通过受试者自我评估，每天使用产品后皮肤未感觉到刺痛、灼热、瘙痒、发红、发麻等不良反应。

【数据统计分析】

取使用样品前、使用后2W、4W的数据；应用SPSS软件对各测试时点测量值进行描述性统计，包括数量、均值、标准差、最小值、最大值等。用shapiro-Wilk Test进行数据变化率正态分布的显著性检验，sig(双侧)＞0.01,样本呈正态分布，符合正态分布要求，自身前后的比较釆用配对t检验，否则釆用两个相关样本秩和检验；试验产品和对照组之间比较釆用独立样本t检验，显著性差异水平a取0.05。

计算样品区的初始值与其他测量时间点测量值之间的变化值

第n周变化率＝(第n周-初始值)/初始值*100％

注：本测试中，n取2W、4W数据

【结果判定】

阳性结果：

样品区域与使用前的初始值比较，样品涂抹区的弹性R2值、颜色L值显著性升高，弹性F4值、皮肤红区、皮肤细纹显著性降低，表示受试者区域具有皮肤紧致、提高皮肤颜色L值、改善皮肤红区、改善皮肤细纹的效果；

阴性结果：

样品区域与使用前的初始值比较，样品涂抹区的弹性R2值、颜色L值显著性降低或无显著性差异，弹性F4值、皮肤红区、皮肤细纹显著性升高或无显著性差异，表示受试者区域不具有皮肤紧致、提高皮肤颜色L值、改善皮肤红区、改善皮肤细纹的效果。

表7样品组使用2W、4W后结果

注：经统计学软件SPSS分析，第n周vs初始值，“n.s"表示在统计学上不具有显著性差异P>0.05；"*”表示具有显著性差异，0.01≤P<0.05；"**”表示0.001≤P<0.01；“***”表示P<0.001。

表8样品使用2W、4W后变化率对比结果

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注：变化率＝(第n周-初始值)/初始值*100％。

表9样品使用2W、4W后皮肤细纹测试结果

注：经统计学软件SPSS分析，第n周vs初始值，“n.s”表示在统计学上不具有显著性差异P>0.05；"*”表示具有显著性差异，0.01≤P<0.05；"**”表示0.001≤P<0.01；"***”表示P<0.001。

表10样品使用2W、4W后变化率结果

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注：变化率＝(第n周-初始值)/初始值*100％。

表11样品使用2W、4W后颜色L值结果

注：经统计学软件SPSS分析，第n周vs初始值，“n.s”表示在统计学上不具有显著性差异P>0.05；"*"表示具有显著性差异，0.01≤P<0.05；"**”表示0.001≤P<0.01；“***表示P<0.001。

表12样品使用2W、4W后变化率结果

注：变化率＝(第n周-初始值)/初始值*100％。

表13样品使用2W、4W后皮肤红区测试结果

注：经统计学软件SPSS分析，第n周vs初始值，“n.s”表示在统计学上不具有显著性差异P>0.05；"*”表示具有显著性差异，0.01≤P<0.05；"**”表示0.001≤P<0.01；"***”表示P<0.001。

表14样品使用2W、4W后变化率结果

通过受试者连续使用产品4周，自我评估皮肤不良反应，温和性测试结果见表15：

表15

以上对本发明的具体实施例进行了描述。需要理解的是，本发明并不局限于上述特定实施方式，本领域技术人员可以在权利要求的范围内做出各种变化或修改，这并不影响本发明的实质内容。在不冲突的情况下，本申请的实施例和实施例中的特征可以任意相互组合。