制备甲基{4,6-二氨基-2-5-氟-1-(2-氟苄基)-1H-吡唑并3,4-b吡啶-3-基嘧啶-5-基}氨基甲酸酯的方法

本申请涉及一种制备呈变体I晶形的式(I)的甲基{4,6-二氨基-2-[5-氟-1-(2-氟苄基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-基]嘧啶-5-基}氨基甲酸酯的新颖高效方法，其中式(I)化合物的变体I的X射线衍射图在5.9、6.9、22.7处显示2θ角的峰最大值，作为活性化合物纯度非常高并具有改良的固体处理物理性质。

甲基{4,6-二氨基-2-[5-氟-1-(2-氟苄基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-基]嘧啶-5-基}氨基甲酸酯为一种用于治疗和/或预防心血管疾病的药物活性化合物。

式(I)化合物作为可溶性鸟苷酸环化酶的刺激剂，并且可用作预防和/或治疗心血管病症的药剂，例如治疗高血压及心力衰竭，包含慢性心力衰竭、射血分数降低的心力衰竭(HFrEF)、射血分数保留的心力衰竭(HFpEF)、稳定及不稳定心绞痛、外周及心脏血管病症、心律不整，用于治疗血栓栓塞病症及局部缺血(例如心肌梗塞、中风、短暂性及缺血性发作)、外周灌注病症、预防再狭窄(例如血栓形成治疗后)、经皮腔内血管成形术(PTA)、经皮腔内冠状动脉成形术(PTCA)、旁路，及用于治疗动脉硬化、气喘病症及泌尿生殖系统疾病(例如前列腺肥大、勃起障碍)、女性性功能障碍、骨质疏松症、青光眼、肺动脉高压、胃轻瘫、硬皮病及失禁。

如WO 2013/076168所述，式(I)化合物可以各种晶形和溶剂合物存在。式(I)化合物以五种多晶型存在，熔点为257℃(多晶型I)、253℃(多晶型II)、247℃(多晶型III)、246℃(多晶型IV)、234℃(多晶型V)、二甲基甲酰胺/水溶剂合物(DMF含量13.6％、水含量0.9％)、二二甲亚砜溶剂合物(化学计量值：26.8％DMSO)、三乙酸溶剂合物(29.7％乙酸盐)、单水合物(4.1％水)和二水合物(7.8％水)。WO 2011/147809和WO 2013/076168进一步描述一种制备式(I)化合物的方法。

在本发明上下文中，“呈变体I晶形的式(I)化合物”定义为呈变体I晶形的式(I)的甲基{4,6-二氨基-2-[5-氟-1-(2-氟苄基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-基]嘧啶-5-基}氨基甲酸酯，其中式(I)化合物变体I的X射线衍射图在5.9、6.9、22.7处显示2θ角的峰最大值。

在本发明上下文中，“呈变体I晶形的式(I)化合物”进一步表征为WO 2013/076168中变体I晶形的式(I)化合物变体；例如参考在5.9、6.9及22.7处或在5.9、6.9、16.2、16.5、24.1、22.7和24.7处具有2θ角的定义峰最大值的X射线衍射图；或经由在1707、1633和1475cm

WO 2020/126983(在本发明优先权日后公开)涉及一种新的甲基{4,6-二氨基-2-[5-氟-1-(2-氟苄基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-基]嘧啶-5-基}氨基甲酸酯活性化合物产物，其具有改良性质，例如在活性化合物产物的可分离性、活性化合物产物在分离及干燥后的排放能力以及活性化合物产物的运输能力、筛分能力及微粉化能力方面，并涉及一种生产及配制其剂型的方法。WO 2020/126983的全部内容通过引用并入本文。

式(I)的甲基{4,6-二氨基-2-[5-氟-1-(2-氟苄基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-基]嘧啶-5-基}氨基甲酸酯的变体I晶形的制备方法在以下方案1中阐明，其中式(I)化合物变体I的X射线衍射图在5.9、6.9、22.7处显示2θ角的峰最大值，如WO 2013/076168所述。

[a)氯化锂、甲磺酸、乙醇；b)甲酰胺、甲醇钠/甲醇、乙醇；c)磷酰氯、乙腈、环丁砜；d)1.甲醇钠/甲醇、乙醇、2.氯化铵/乙醇；e)DMF、三乙胺、[(E)-苯基二氮烯基(diazenyl)]丙二腈；f)Pd/C、氢、DMF；g)异丙醇、氯甲酸甲酯、三乙胺]。

WO 2013/076168被认为是最接近的现有技术文献。由于以下概述的各种原因，该最接近的现有技术文献中所述方法不适合以工业规模进行。

方案1的步骤a)和b)及WO 2013/076168的实施例6和7以分开的反应进行，中间分离式(IV)化合物。为了以工业规模进行该方法，这具有结晶期间仍存在于母液的酯成分损失的缺点。为了分离式(IV)化合物，必须进行分离及干燥的额外步骤，在工业规模方法中，具有增加生产设备的占用时间的缺点，导致生产成本相当高。进一步，在式(IV)化合物的后处理(work-up)中需要用异丙醇进行精细洗涤步骤，以便从中间体除去甲磺酸的盐，这也增加生产成本。

当大规模进行方案1的步骤c)及WO 2013/076168所述实施例8时，观察到产物(化合物(VI))水解成输入材料(化合物(V))。这是以工业规模进行该方法的另一项主要缺点。

在本发明上下文中，“输入材料”与“起始材料”或“提取物(educt)”同义使用。

当根据方案1的步骤d)及WO 2013/076168的实施例9进行转化(VI)→(VII)时，在容器壁处建立硬壳(encrustations)。当以工业规模进行该方法时，这是决定性缺点。

在WO 2013/076168中，根据实施例10A合成中间体(VIIIa)，

其用于根据方案1的步骤e)的转化(VII)+(VIIIa)→(VIII)。将[(E)-苯基二氮烯基]丙二腈(化合物(VIIIa))用每千克苯胺5.3L水及每千克苯胺4.15L甲苯各洗涤三次。这种洗涤步骤是不利的，因为甲苯与水不互溶，因此置换水变得困难且可能导致盐的不完全除去。

根据方案1的步骤e)的转化(VII)+(VIIIa)→(VIII)为根据WO 2013/076168的实施例11A进行。该反应中，在DMF中加热一当量WO 2013/076168实施例9获得的化合物(VII)。随后，在30分钟期间对每1.1当量于DMF中的三乙胺加入1.7当量化合物(VIIIa)。DMF总量为5.8kg/kg化合物(VII)。

在这些条件下，式(VIIIb)的副产物

由两分子化合物(VIIIa)与化合物(VII)在三乙胺存在下反应产生(实施例11A)。该副产物必须被精密除去，这是根据WO 2013/076168的实施例11A的方法的主要缺点。

在根据WO 2013/076168的实施例12的方法中，在10L DMF/kg输入材料(化合物(VIII))中进行方案1的步骤f)通过氢化转化(VIII)→(IX)。这具有产物(化合物(IX))与DMF形成溶剂合物的缺点，需要用热水及大量工作将其转化为无溶剂合物形式。在方案1接下来的反应步骤g)中，通过残余DMF与氯甲酸甲酯及来自实施例12的式(IX)化合物而非式(I)化合物盐酸盐反应，剩余DMF会形成甲酰基副产物(化合物(Ib)，实施例13A)。该杂质需要大量工作除去。根据WO 2013/076168的实施例12的方法的进一步缺点为产物(化合物(IX))于DMF中的低溶解度。在过滤除去催化剂期间，产物结晶造成阻碍，这对于在工业规模上进行该方法是非常不利的。

作为WO 2013/076168方法的步骤f)/实施例12的进一步缺点，DMF的主要部分需要在氢化后通过蒸馏除去，由于DMF高沸点(162℃)，这是精细的步骤。在结晶前省略蒸馏DMF需要增加水量并造成减少产率，这甚至更加不利。

根据WO 2013/076168实施例13、方案1步骤g)导致释放化合物(I)盐酸盐的方法在异丙醇中用三乙胺作为碱进行。在此方法中，输入材料(化合物(IX))悬浮于异丙醇中，并在20小时的延长的反应时间期间，与1.3当量(相对于输入材料计)溶于异丙醇的氯甲酸甲酯反应，得到产物(化合物(I)盐酸盐)悬浮液。如上所述，通过残余DMF与氯甲酸甲酯及实施例12化合物式(IX)反应，来自方案1步骤f)的剩余DMF将形成甲酰基侧组分(化合物(Ib)，实施例13A)，而非式(I)化合物盐酸盐。长反应时间及相对于输入材料相对高过量的氯甲酸甲酯不利于以工业规模进行该方法。过量氯甲酸甲酯需要通过加入甲醇破坏。该方法的产物(化合物(I)盐酸盐)不经分离直接与三乙胺反应生成化合物(I)。当过滤掉三乙胺盐酸盐时，产物的结晶导致过滤设备的阻碍及潜在堵塞。这造成产物损失及进行该方法的缺点。此反应步骤产率仅为理论值的70％。

如WO 2020/126983(在本发明优先权日后公开)所概述，如WO 2013/076168所述的呈变体I晶形的式(I)化合物的生产导致非常纤细、毛发般的性质，由于结晶的全向分层，通过差压过滤或在过滤离心机中分离时，生成具有非常高撕裂强度的非常致密的毡样滤饼。因为滤饼结构更紧密，故可预计这种效果在离心场中比在差压过滤中更明显。这导致分离时间冗长，且从工业分离组件排放期间会造成滤饼不破裂或裂断，从而堵塞排放路径的问题。这些毡样滤饼结构可预计在所有随后方法步骤中(例如在真空接触干燥机中干燥、筛分或微粉化)导致有问题的块材性能。由于频繁的筛网堵塞，工业筛分机上的筛分可能只能以非常低的产出量进行，因此存在问题。由于高静电荷及对工厂零件(例如输送通道)的相关黏附，在随后微粉化前输送固体是困难的。

本发明的目的为提供可以工业规模制备如上定义呈变体I晶形的式(I)的甲基{4,6-二氨基-2-[5-氟-1-(2-氟苄基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-基]嘧啶-5-基}氨基甲酸酯的新颖高效方法，作为极高纯度及极高产率的活性化合物具有改良的固体处理物理性质，其明显更具成本效益且避免本领域已知方法的缺点，且可在常规中试及生产工厂设备(用于分离的搅拌槽/分离装置)中进行。

本发明的另一目的为生产如上定义呈变体I晶形的式(I)化合物的活性化合物产物，相较用WO 2013/076168所述方法生产的呈变体I晶形的式(I)化合物的活性化合物产物，其显示更好的性质，尤其在活性化合物产物的可分离性、分离及干燥后活性化合物产物的排放能力以及运输能力、筛分能力及微粉化能力方面，因此适合于固体剂型药物活性化合物的工业规模生产。

在本发明上下文中，“活性化合物产物”被定义为如上定义的呈变体I晶形的式(I)化合物，呈固体形式，其或者由WO 2013/076168所述方法得到，或者由本发明方法(包含以下方案2步骤i)或实施例15)得到。

在本发明上下文中且如WO 2020/126983所概述，“改良的固体处理物理性质”，例如如上定义的呈变型I晶形的式(I)化合物活性化合物产物的可分离性、分离及干燥后活性化合物产物的排放能力以及运输能力、筛分能力及微粉化能力被定义为与通过WO 2013/076168的方法生产的呈变体I晶形的式(I)化合物活性化合物产物的性质相比，通过本发明创造性方法生产的呈变体I晶形的式(I)化合物活性化合物产物具有改良的所述性质。

本发明的另一目的为生产呈定义的变体(特别是如上定义的变体I晶形)的式(I)化合物。本发明的另一目的为防止在根据本发明生产方法期间形成变体I晶形的式(I)化合物的水合物或二水合物。此外，相较于含有WO 2013/076168所述方法生产的变体I晶形的式(I)化合物的固体剂型，通过根据发明方法生产的呈变体I晶形的式(I)化合物在由其生产的固体剂型中应显示至少同样的良好药物性质。

根据本发明实现了该目的，如下所示。以下方案2举例阐明各反应步骤。

[a)：氯化锂、氯三甲基硅烷、乙醇；b)甲酰胺、甲醇钠/甲醇，步骤a)+b)以一锅反应(one-pot reaction)进行；c)1.磷酰氯、乙腈、环丁砜，2.水；d)1.悬浮于甲醇，加入甲醇钠/甲醇，2.氯化铵/甲醇；e)DMF、三乙胺；f)1.Pd/C、氢、NMP，2.水；g)THF、氯甲酸甲酯、分离(I)×HCl；h)1.DMSO、三正丁胺，2.乙酸乙酯；分离(I-二DMSO溶剂合物)；i)溶于DMSO，逐步加入乙醇、水、乙酸异丙酯]。

本发明的一个实施方案为一种制备呈变体I晶形的式(I)的甲基{4,6-二氨基-2-[5-氟-1-(2-氟苄基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-基]嘧啶-5-基}氨基甲酸酯的方法，

其特征在于式(I)化合物变体I的X射线衍射图在5.9、6.9、22.7处显示2θ角的峰最大值，

其中制备式(I)化合物盐酸盐

为通过在作为溶剂的四氢呋喃中，加热式(IX)化合物

加入1.0当量至1.2当量氯甲酸甲酯，在1小时至10小时的反应时间内搅拌，分离式(I)化合物盐酸盐制备，

随后制备式(I)化合物的二-DMSO溶剂合物

通过将式(I)化合物的盐酸盐溶于DMSO，加入三正丁胺和活性碳，除去活性碳，冷却并加入乙酸乙酯使二-DMSO溶剂合物结晶，分离呈晶形的二-DMSO溶剂合物，并用DMSO与乙酸乙酯的混合物洗涤，

随后制备呈变体I晶形的式(I)化合物，其中

1.1将式(I)化合物二-DMSO溶剂合物溶于DMSO，以DMSO与乙醇比例2：1至6：1w/w加入乙醇；

1.2溶解的式(I)化合物随后通过加水从溶液中结晶出来；

1.3形成的悬浮液随后冷却至温度5℃至50℃；且

1.4随后通过加入乙酸异丙酯，使步骤1.2形成的结晶聚结得到活性化合物产物，其中乙酸异丙酯质量与式(I)化合物质量加乙醇质量的总和的比例为0.3至2.0。

以上公开的反应顺序化合物(IX)→化合物(I)对应于方案2步骤g)至i)。

本发明的一个实施方案为一种制备呈变体I晶形的式(I)的甲基{4,6-二氨基-2-[5-氟-1-(2-氟苄基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-基]嘧啶-5-基}氨基甲酸酯的方法，其特征在于式(I)化合物变体I的X-射线衍射图在5.9、6.9、22.7处显示2θ角的峰最大值，

其中式(I)化合物盐酸盐的制备为通过将作为溶剂的四氢呋喃中的化合物式(IX)加热至30℃至66℃，在1分钟至30分钟内加入1.0当量至1.2当量氯甲酸甲酯，在温度30℃至66℃及1小时至10小时的反应时间内搅拌，分离式(I)化合物盐酸盐并干燥，

随后制备式(I)化合物的二-DMSO溶剂合物，通过在70℃至90℃在DMSO中，将式(I)化合物的盐酸盐搅拌1小时至3小时，加入三正丁胺及活性碳，在70℃至90℃搅拌，除去活性碳，用DMSO洗涤，冷却至-3℃至+20℃，加入乙酸乙酯使二-DMSO溶剂合物结晶，分离呈结晶形式的二-DMSO，用DMSO与乙酸乙酯的混合物洗涤，并干燥，随后制备呈变体I晶形的式(I)化合物，其中

1.1将式(I)化合物二-DMSO溶剂合物悬浮于DMSO并加热至70℃至80℃，以DMSO与乙醇比例2：1至6：1w/w加入乙醇，将混合物于65℃至85℃搅拌15分钟至21小时；

1.2随后通过在温度15℃至85℃及0.1分钟至30分钟期间加入水，将溶解的式(I)化合物从溶液中结晶出来；

1.3形成的悬浮液随后在1小时至4小时内冷却至温度5℃至50℃；且

1.4随后通过加入乙酸异丙酯，使步骤b)形成的结晶聚结得到活性化合物产物，其中乙酸异丙酯质量与式(I)化合物质量加乙醇质量的总和比例为0.3至2.0。

本发明的一个实施方案为一种制备呈变体I晶形的式(I)的甲基{4,6-二氨基-2-[5-氟-1-(2-氟苄基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-基]嘧啶-5-基}氨基甲酸酯的方法，其特征在于式(I)化合物变体I的X-射线衍射图在5.9、6.9、22.7处显示2θ角的峰最大值，包括如本申请所述制备式(I，HCl)、(I，二-DMSO溶剂合物)化合物及根据本发明呈变体I晶形的(I)的反应步骤，其中以纯度99.90％(以HPLC面积％测量)或更高、或纯度99.95％(以HPLC面积％测量)或更高、或纯度99.97％(以HPLC面积％测量)或更高获得呈变体I晶形的式(I)化合物。

根据本发明的一个实施方案，对于每摩尔化合物(IX)在3.00L至4.60L四氢呋喃中或对于每摩尔化合物(IX)在3.20L至4.30L四氢呋喃中加热化合物式(IX)。根据本发明的一个实施方案，将化合物(IX)加热至30℃至66℃、或至50℃至66℃。

根据本发明的一个实施方案，加入相对于化合物(IX)用量0.95当量至1.40当量、或1.00当量至1.30当量、或1.0当量至1.2当量氯甲酸甲酯。根据本发明的实施方案，在1分钟至30分钟内或在10分钟至20分钟内加入氯甲酸甲酯。

根据本发明的一个实施方案，在30℃至66℃或50℃至66℃下搅拌式(IX)化合物、四氢呋喃及氯甲酸甲酯的混合物。根据本发明的实施方案，将混合物搅拌1小时至10小时、或1小时至6小时、或1小时至4小时、或2小时至3小时、或2小时。

根据本发明的一个实施方案，将固体分离并与每摩尔化合物(IX)1.60L至3.00L四氢呋喃或每摩尔原始计量加入的化合物(IX)1.90L至2.80L四氢呋喃搅拌。根据本发明的一个实施方案，将固体分离并在40℃至66℃或45℃至63℃下与四氢呋喃搅拌15分钟至60分钟。根据本发明的一个实施方案，重复分离及在40℃至66℃或45℃至63℃下搅拌固体与每摩尔化合物(IX)1.60L至3.00L四氢呋喃或与每摩尔化合物(IX)1.90L至2.80L四氢呋喃15分钟至60分钟的步骤。根据本发明的一个实施方案，将固体于40℃至69℃或45℃至63℃收集，并于30℃至80℃干燥。

根据本发明的一个实施方案，用呈DMSO：乙酸乙酯比例1：4.5至1：5.5的DMSO与乙酸乙酯混合物进行结晶的二-DMSO溶剂合物的洗涤。

根据本发明的一个实施方案，制备呈结晶变体I的式(I)化合物的方法步骤1.1后为过滤。

根据本发明的一个实施方案，在制备结晶变体I的式(I)化合物的方法步骤1.2中，水与乙醇比例为2：1至12：1w/w。

根据本发明的一个实施方案，制备结晶变体I的式(I)化合物的方法步骤1.4后为分离、干燥、筛分及捣碎产物。

本发明的一个实施方案为一种制备呈变体I晶形的式(I)的甲基{4,6-二氨基-2-[5-氟-1-(2-氟苄基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-基]嘧啶-5-基}氨基甲酸酯的方法，其中变体I的式(I)化合物的X-射线衍射图在5.9、6.9、22.7处显示2θ角的峰最大值，且其中式(IX)化合物

加水结晶，分离得到式(IX)化合物。

以上公开的化合物(VIII)→化合物(IX)的反应对应于方案2步骤f)。

本发明的一个实施方案为一种制备呈变体I晶形的式(I)的甲基{4,6-二氨基-2-[5-氟-1-(2-氟苄基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-基]嘧啶-5-基}氨基甲酸酯的方法，其中变体I的式(I)化合物的X-射线衍射图在5.9、6.9、22.7处显示2θ角的峰最大值，且其中化合物式(IX)的制备为通过在氢存在下，在作为溶剂的NMP中，于压力50巴至90巴和温度50℃至80℃下，通过选自活性碳载钯、碳载铂、氢氧化钯及阮内镍的催化剂催化，氢化式(VIII)化合物，加水结晶，随后分离干燥，得到化合物式(IX)。

根据本发明的一个实施方案，以浓度4.8L至6.8L NMP/kg输入材料(化合物(VIII))进行氢化。根据本发明的一个实施方案，以浓度5.1L至6.3L NMP/kg输入材料(化合物(VIII))进行氢化。根据本发明的一个实施方案，在氢存在下，于压力50巴至90巴或60巴至80巴及温度50℃至80℃或60℃至70℃下进行氢化。根据本发明的另一个实施方案，氢化由活性碳载钯催化剂催化。根据本发明的另一个实施方案，每千克输入材料(化合物(VIII))加入13g至48g 5％ Pd/C(50％水分)或15g至44g 5％ Pd/C(50％水分)。

根据本发明的一个实施方案，过滤氢化后的混合物以除去用过的催化剂，并用每千克输入材料(化合物(VIII))0.39L至0.58L NMP或用每千克输入材料(化合物(VIII))0.44L至0.53L NMP洗涤过滤管线。根据本发明的另一个实施方案，将滤液冷却至10℃至40℃，然后在3小时或更长时间内加入1.34L至2.50L水或1.50L至2.30L水，并搅拌混合物0.5小时至13小时或1小时至6小时。根据本发明的另一个实施方案，分离固体，并用每千克输入材料(化合物(VIII))2×0.21L至0.63L水或每千克输入材料(化合物(VIII))2×0.24L至0.60L水洗涤，然后于40℃至120℃干燥。

本发明的一个实施方案为一种制备呈变体I晶形的式(I)的甲基{4,6-二氨基-2-[5-氟-1-(2-氟苄基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-基]嘧啶-5-基}氨基甲酸酯的方法，其中变体I的式(I)化合物的X-射线衍射图在5.9、6.9、22.7处显示2θ角的峰最大值，包括制备式(IX)、(I，HCl)、(I，二-DMSO溶剂合物)化合物及如本文所述的本发明的呈变体I晶形的(I)的反应步骤，其中以纯度99.90％(以HPLC面积％测量)或更高、或纯度99.95％(以HPLC面积％测量)或更高、或纯度99.97％(以HPLC面积％测量)或更高获得呈变体I晶形的式(I)化合物。

本发明的一个实施方案为一种制备呈变体I晶形的式(I)的甲基{4,6-二氨基-2-[5-氟-1-(2-氟苄基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-基]嘧啶-5-基}氨基甲酸酯的方法，其中变体I的式(I)化合物的X-射线衍射图在5.9、6.9、22.7处显示2θ角的峰最大值，且其中式(VIII)化合物

通过将含浓盐酸的水加入含苯胺的水，然后依次加入亚硝酸钠水溶液、乙酸钠水溶液及丙二腈的乙醇溶液，分离固体，用水和异丙醇洗涤，获得式(VIIIa)化合物；

随后在DMF中加热式(VII)化合物，

加入溶于DMF的式(VIIIa)化合物和1.2当量至1.7当量三乙胺(相对于式(VII)化合物计)，加入甲醇，分离式(VIII)化合物。

化合物(VII)+(VIIIa)→化合物(VIII)的反应对应于方案2步骤e)。

本发明的一个实施方案为一种制备呈变体I晶形的式(I)的甲基{4,6-二氨基-2-[5-氟-1-(2-氟苄基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-基]嘧啶-5-基}氨基甲酸酯的方法，其中式(I)化合物变体I的X-射线衍射图在5.9、6.9、22.7处显示2θ角的峰最大值，其中制备式(VIII)化合物为首先制备式(VIIIa)化合物，通过在-3至12℃下将含浓盐酸的水加入含苯胺的水，然后在相同温度依次加入亚硝酸钠水溶液、乙酸钠水溶液、及丙二腈的乙醇溶液，分离固体，用水及异丙醇洗涤，获得式(VIIIa)化合物；

随后在DMF中将式(VII)化合物加热至85℃至115℃，在5小时至15小时内加入溶于DMF的式(VIIIa)化合物及1.2当量至1.7当量三乙胺(相对于式(VII)化合物计)，冷却至77℃至88℃，加入甲醇，分离式(VIII)化合物。

根据本发明的一个实施方案，式(VIIIa)化合物的制备为通过在温度-3℃至+12℃或温度0℃至5℃下将含1.9当量至2.2当量的浓盐酸(相对于苯胺计)的水加入含0.9当量至1.1当量的苯胺的水，然后在相同温度下依次在5分钟至90分钟内加入0.95当量至1.1当量(相对于苯胺计)亚硝酸钠水溶液，在5分钟至90分钟内加入1.17当量至1.43当量(相对于苯胺计)乙酸钠水溶液，及在0.5小时至2小时内加入0.9至1.1当量(相对于苯胺计)丙二腈的乙醇溶液，分离固体，用水及异丙醇各洗涤3次，获得式(VIIIa)化合物；

根据本发明的一个实施方案，用每千克苯胺5.2L至12.8L水及每千克苯胺3.5L至4.8L异丙醇洗涤式(VIIIa)化合物各3次。

根据本发明的一个实施方案，在DMF中将式(VII)化合物加热至85℃至115℃，在5小时至15小时内加入溶于DMF及1.3当量至1.6当量三乙胺(相对于式(VII)化合物计)的式(VIIIa)化合物。根据本发明的一个实施方案，混合物在100℃进一步搅拌10.5小时至24小时，冷却至77℃至88℃，滴加甲醇，使所得混合物在4小时至10小时内冷却至-2℃至+15℃，并搅拌0.5小时至11小时，分离固体。

根据本发明的一个实施方案，依次用DMF、甲醇、水及甲醇洗涤产物式(VIII)。

根据本发明的一个实施方案，使式(VII)化合物以每千克式(VII)化合物4.7kg至6.1kg DMF的总量(包含溶解化合物(VIIIa)的DMF量)悬浮。

本发明的一个实施方案为一种制备呈变体I晶形的式(I)的甲基{4,6-二氨基-2-[5-氟-1-(2-氟苄基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-基]嘧啶-5-基}氨基甲酸酯的方法，其中变体I的式(I)化合物的X-射线衍射图在5.9、6.9、22.7处显示2θ角的峰最大值，包括如本文所述制备式(VIII)、(IX)、(I，HCl)、(I，二-DMSO溶剂合物)化合物及本发明的呈变体I晶形的(I)的反应步骤，其中以纯度99.90％(以HPLC面积％测量)或更高、或纯度99.95％(以HPLC面积％测量)或更高、或纯度99.97％(以HPLC面积％测量)或更高获得呈变体I晶形的式(I)化合物。

本发明的一个实施方案为一种制备呈变体I晶形的式(I)的甲基{4,6-二氨基-2-[5-氟-1-(2-氟苄基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-基]嘧啶-5-基}氨基甲酸酯的方法，其中式(I)化合物变体I的X-射线衍射图在5.9、6.9、22.7处显示2θ角的峰最大值，其中式(VII)化合物

的制备为通过使式(VI)化合物

悬浮于甲醇，加入含甲醇钠的甲醇，加入甲醇及氯化铵，使用助滤剂过滤，浓缩及加入乙酸乙酯，加入乙醇，分离获得式(VII)化合物。

化合物(VI)→化合物(VII)的反应对应于方案2步骤d)。

本发明的一个实施方案为一种制备呈变体I晶形的式(I)的甲基{4,6-二氨基-2-[5-氟-1-(2-氟苄基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-基]嘧啶-5-基}氨基甲酸酯的方法，其中变体I的式(I)化合物的X-射线衍射图在5.9、6.9、22.7处显示2θ角的峰最大值，其中式(VII)化合物的制备为通过将式(VI)化合物悬浮于甲醇，加入含甲醇钠的甲醇，搅拌，加入甲醇及氯化铵，加热回流，搅拌，冷却，使用助滤剂过滤，蒸馏浓缩滤液，加入乙酸乙酯，继续蒸馏，同时用乙酸乙酯重新填充蒸馏出的体积，冷却，加入乙醇，分离，用乙酸乙酯洗涤并干燥，获得化合物式(VII)。

根据本发明的一个实施方案，在加入含甲醇钠的甲醇后，使悬浮液在15至30℃搅拌5至10小时。根据本发明的一个实施方案，在加入甲醇及氯化铵并加热回流后，使悬浮液搅拌4.5至10小时。根据本发明的一个实施方案，在加入甲醇及氯化铵、加热回流并搅拌后，使悬浮液冷却至15至40℃。

根据本发明的一个实施方案，所用助滤剂选自硅藻土(diatomaceous earth)，也称为硅藻土(diatomite)或硅藻土(kieselguhr)。根据本发明的一个实施方案，所用助滤剂为活化的煅烧硅藻土。根据本发明的一个实施方案，所用助滤剂为

通过煅烧/活化(助熔剂-煅烧)经纯化的硅藻土获得

本发明的一个实施方案为一种制备呈变体I晶形的式(I)的甲基{4,6-二氨基-2-[5-氟-1-(2-氟苄基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-基]嘧啶-5-基}氨基甲酸酯的方法，其中变体I的式(I)化合物的X-射线衍射图在5.9、6.9、22.7处显示2θ角的峰最大值，包括如本文所述制备式(VII)、(VIII)、(IX)、(I，HCl)、(I，二-DMSO溶剂合物)化合物及本发明的呈变体I晶形的(I)的反应步骤，其中以纯度99.90％(以HPLC面积％测量)或更高、或纯度99.95％(以HPLC面积％测量)或更高、或纯度99.97％(以HPLC面积％测量)或更高获得呈变体I晶形的式(I)化合物。

本发明的一个实施方案为一种制备呈变体I晶形的式(I)的甲基{4,6-二氨基-2-[5-氟-1-(2-氟苄基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-基]嘧啶-5-基}氨基甲酸酯的方法，其中变体I的式(I)化合物中X-射线衍射图在5.9、6.9、22.7处显示2θ角的峰最大值，其中式(VI)化合物

式(V)化合物的制备通过最初将式(II)化合物

和氯化锂加入乙醇，加入式(III)化合物

和氯三甲基硅烷，加热得到式(IV)化合物，

或者改变任何输入材料的添加顺序，

加入甲酰胺和含甲醇钠的甲醇，蒸馏出低沸点物，同时用甲酰胺重新填充蒸馏出的体积，冷却，加水，分离固体，洗涤并干燥，得到化合物式(V)，

随后在环丁砜、乙腈及磷酰氯中加热使式(V)化合物脱水，在适当搅动和良好速度及冷却下加入乙腈和水，保持内部温度为20℃至50℃，加入含氨的水，分离得到式(VI)化合物。

化合物(II)+化合物(III)→化合物(IV)→化合物(V)→化合物(VI)的反应顺序对应于方案2步骤a)至c)。

本发明的一个实施方案为一种制备呈变体I晶形的式(I)的甲基{4,6-二氨基-2-[5-氟-1-(2-氟苄基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-基]嘧啶-5-基}氨基甲酸酯的方法，其中变体I的式(I)化合物的X-射线衍射图在5.9、6.9、22.7处显示2θ角的峰最大值，其中式(VI)化合物的制备为通过首先制备式(V)化合物：将式(II)化合物和氯化锂初始加入乙醇，加入式(III)化合物和氯三甲基硅烷，加热回流冷却，得到式(IV)化合物，或者改变任何输入材料的添加顺序，加入甲酰胺和含甲醇钠的甲醇，蒸馏出低沸点物，同时用甲酰胺重新填充蒸馏出的体积，冷却，加水，分离固体，洗涤并干燥，得到式(V)化合物，

随后在环丁砜、乙腈和磷酰氯中加热使式(V)化合物脱水，用乙腈润洗，升温搅拌，冷却，加入乙腈，在适当搅动和良好速度及冷却下加水，保持内部温度为20℃至50℃，加入含氨的水，分离，用水洗涤，干燥得到式(VI)化合物。

根据本发明的一个实施方案，式(V)化合物的制备为通过最初将式(II)化合物和2.25当量至2.75当量氯化锂(相对于式(II)化合物计)加入乙醇，加入0.85当量至1.2当量或0.85当量至1.0当量(相对于式(II)化合物计)式(III)化合物，加入1.6当量至2.3当量(相对于式(II)化合物计)氯三甲基硅烷，加热回流并冷却，得到化合物式(IV)，其中可改变任何输入材料的添加顺序，加入甲酰胺和含甲醇钠的甲醇，蒸馏出低沸点物，同时用甲酰胺重新填充蒸馏出的体积，冷却，加水，分离固体，洗涤并干燥，得到式(V)化合物，其中甲醇钠以过量0.4当量或更多施用，相对于施用的氯三甲基硅烷当量计。

根据本发明的一个实施方案，式(V)化合物为在环丁砜及乙腈中加热至100℃至120℃脱水，滴加磷酰氯，用乙腈润洗，升温搅拌4小时至10小时，冷却，加入乙腈，在适当搅动和良好速度及冷却下缓慢加入水，保持内部温度为20℃至50℃，加入水中的氨，过滤收集固体，用水洗涤，干燥得到化合物式(VI)。

本发明的一个实施方案为一种制备呈变体I晶形的式(I)的甲基{4,6-二氨基-2-[5-氟-1-(2-氟苄基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-基]嘧啶-5-基}氨基甲酸酯的方法，其中变体I的式(I)化合物的X-射线衍射图在5.9、6.9、22.7处显示2θ角的峰最大值，包括制备如本文所述式(IV)、(V)、(VI)、(VII)、(VIII)、(IX)、(I，HCl)、(I，二-DMSO溶剂合物)化合物及本发明的呈变体I晶形的(I)的反应步骤，其中以纯度99.90％(以HPLC面积％测量)或更高、或纯度99.95％(以HPLC面积％测量)或更高、或纯度99.97％(以HPLC面积％测量)或更高获得呈变体I晶形的式(I)化合物。

本发明的一个实施方案为制备化合物式(V)的方法，

其中将式(II)化合物

和氯化锂最初加入乙醇，加入式(III)化合物

和氯三甲基硅烷，加热，得到式(IV)化合物，

或者改变任何输入材料的添加顺序，

加入甲酰胺和含甲醇钠的甲醇，蒸馏出低沸点物，同时用甲酰胺重新填充蒸馏出的体积，冷却，加水，分离固体，洗涤并干燥，得到化合物式(V)。

化合物(II)+化合物(III)→化合物(IV)→化合物(V)的反应顺序对应于方案2步骤a)及b)。

本发明的一个实施方案为一种制备式(V)化合物的方法，其中将式(II)化合物和氯化锂最初装入乙醇，加入式(III)化合物和氯三甲基硅烷，加热回流并冷却，得到化合物式(IV)，或者改变任何输入材料的添加顺序，加入甲酰胺和含甲醇钠的甲醇，蒸馏出低沸点物，同时用甲酰胺重新填充蒸馏出的体积，冷却，加水，分离固体，洗涤并干燥，得到式(V)化合物。

本发明的一个实施方案为一种制备化合物式(VII)的方法，

其中使式(VI)化合物

悬浮于甲醇，加入含甲醇钠的甲醇，加入甲醇和氯化铵，使用助滤剂过滤，浓缩并加入乙酸乙酯，加入乙醇，分离得到式(VII)化合物。

化合物(VI)→化合物(VII)的反应对应于方案2步骤d)。

本发明的一个实施方案为一种制备式(VII)化合物的方法，其中使式(VI)化合物悬浮于甲醇，加入含甲醇钠的甲醇，搅拌，加入甲醇和氯化铵，加热回流，搅拌，冷却，使用助滤剂过滤，蒸馏浓缩滤液，加入乙酸乙酯，继续蒸馏，同时用乙酸乙酯重新填充蒸馏出的体积，冷却，加入乙醇，分离，用乙酸乙酯洗涤，干燥，得到式(VII)化合物。

本发明的一个实施方案为一种制备式(VIII)化合物的方法，

其中最初制备式(VIIIa)化合物

式(VIIIa)化合物的制备为通过将含浓盐酸的水加入含苯胺的水，然后依次加入亚硝酸钠水溶液、乙酸钠水溶液及丙二腈的乙醇溶液，分离固体，用水和异丙醇洗涤，获得式(VIIIa)化合物；

随后在DMF中加热式(VII)化合物，

加入溶于DMF的式(VIIIa)化合物及1.2当量至1.7当量三乙胺(相对于式(VII)化合物计)，加入甲醇，分离式(VIII)化合物。

化合物(VII)+化合物(VIIIa)→化合物(VIII)的反应对应于方案2步骤e)。

本发明的一个实施方案为一种制备式(VIII)化合物的方法，其中式(VIIIa)化合物的制备为通过最初在-3至+12℃将含浓盐酸的水加入含苯胺的水，然后在相同温度依次加入亚硝酸钠水溶液、乙酸钠水溶液及丙二腈的乙醇溶液，分离固体，用水和异丙醇洗涤，获得式(VIIIa)化合物；随后在DMF中将式(VII)化合物加热至85℃至115℃，在5小时至15小时内加入溶于DMF的式(VIIIa)化合物及1.2当量至1.7当量三乙胺(相对于式(VII)化合物计)，冷却至77℃至88℃，加入甲醇，分离化合物式(VIII)。

本发明的一个实施方案为制备式(IX)化合物的方法，

其中在氢存在下，在作为溶剂的NMP中，通过选自活性碳载钯、碳载铂、氢氧化钯及阮内镍的催化剂催化，氢化式(VIII)化合物，

加水结晶，分离得到式(IX)化合物。

化合物(VIII)→化合物(IX)的反应对应于方案2步骤f)。

本发明的一个实施方案为一种制备式(IX)化合物的方法，其中在氢存在下，在作为溶剂的NMP中，于压力50巴至90巴及温度50℃至80℃，通过选自活性碳载钯、碳载铂、氢氧化钯及阮内镍的催化剂催化，氢化式(VIII)化合物，加水结晶，随后分离并干燥，得到式(IX)化合物。

本发明的一个实施方案为一种制备式(I)化合物盐酸盐的方法，

其中在作为溶剂的四氢呋喃中，加热式(IX)化合物，

加入1.0当量至1.2当量氯甲酸甲酯，在1小时至10小时的反应时间内搅拌，分离出式(I)化合物盐酸盐。

化合物(IX)→化合物(I)×HCl的反应对应于方案2步骤g)。

本发明的一个实施方案为一种制备式(I)化合物盐酸盐的方法，其中在作为溶剂的四氢呋喃中，将化合物式(IX)加热至30℃至66℃，在1分钟至30分钟内加入1.0当量至1.2当量氯甲酸甲酯，在温度30℃至66℃下以及1小时至10小时的反应时间内搅拌，分离式(I)化合物盐酸盐并干燥。

本发明的一个实施方案为一种制备式(I，二-DMSO溶剂合物)化合物的方法，

其中将式(I)化合物盐酸盐溶于DMSO，加入三正丁胺及活性碳，除去活性碳，冷却并加入乙酸乙酯使二-DMSO溶剂合物结晶，分离呈晶形的二-DMSO，并用DMSO与乙酸乙酯的混合物洗涤。

化合物(I)×HCl→化合物(I)二DMSO溶剂合物的反应顺序对应于方案2步骤h)。

本发明的一个实施方案为一种制备式(I，二-DMSO溶剂合物)化合物的方法，其中在70℃至90℃在DMSO中，将式(I)化合物盐酸盐搅拌1小时至3小时，加入三正丁胺及活性碳，在70℃至90℃搅拌，除去活性碳，用DMSO洗涤，冷却至-3至+20℃，加入乙酸乙酯使二-DMSO溶剂合物结晶，分离呈晶形的二-DMSO，用DMSO与乙酸乙酯的混合物洗涤，并干燥。

本发明的一个实施方案为一种制备式(I)的甲基{4,6-二氨基-2-[5-氟-1-(2-氟苄基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-基]嘧啶-5-基}氨基甲酸酯的变体I晶形的方法，

其中式(I)化合物变体I的X-射线衍射图在5.9、6.9、22.7处显示2θ角的峰最大值，且

其中式(VI)化合物

的制备通过首先制备式(V)化合物

通过最初将式(II)化合物

和氯化锂加入乙醇，加入式(III)化合物

和氯三甲基硅烷，加热得到式(IV)化合物，

或者改变任何输入材料的添加顺序，

加入甲酰胺和含甲醇钠的甲醇，蒸馏出低沸点物，同时用甲酰胺重新填充蒸馏出的体积，冷却，加水，分离固体，洗涤并干燥，得到式(V)化合物，

随后在环丁砜、乙腈及磷酰氯中加热使式(V)化合物脱水，在适当搅动和良好速度及冷却下加入乙腈和水，保持内部温度为20℃至50℃，加入溶于水的氨，分离得到式(VI)化合物；

随后，式(VII)化合物

的制备通过使式(VI)化合物

悬浮于甲醇，加入含甲醇钠的甲醇，加入甲醇和氯化铵，使用助滤剂过滤，浓缩及加入乙酸乙酯，加入乙醇，分离获得化合物式(VII)；

随后，式(VIII)化合物

的制备为通过最初制备式(VIIIa)化合物

式(VIIIa)化合物的制备通过将含浓盐酸的水加入含苯胺的水，然后依次加入亚硝酸钠水溶液、乙酸钠水溶液及丙二腈的乙醇溶液，分离固体，用水和异丙醇洗涤，获得化合物式(VIIIa)；

随后在DMF中加热式(VII)化合物，

加入溶于DMF的式(VIIIa)化合物及1.2当量至1.7当量三乙胺(相对于式(VII)化合物计)，加入甲醇，分离式(VIII)化合物；

随后，制备式(IX)化合物

式(IX)化合物的制备通过在氢存在下，在作为溶剂的NMP中，通过选自活性碳载钯、碳载铂、氢氧化钯及阮内镍的催化剂催化，氢化式(VIII)化合物，

加水结晶，分离得到式(IX)化合物；

随后，制备式(I)化合物盐酸盐

式(I)化合物盐酸盐的制备为通过在作为溶剂的四氢呋喃中，加热式(IX)化合物，

加入1.0当量至1.2当量氯甲酸甲酯，在1小时至10小时的反应时间内搅拌，分离式(I)化合物盐酸盐，

随后制备式(I)化合物二-DMSO溶剂合物

式(I)化合物二-DMSO溶剂合物的制备为通过将式(I)化合物盐酸盐溶于DMSO，加入三正丁胺和活性碳，除去活性碳，冷却并加入乙酸乙酯使二-DMSO溶剂合物结晶，分离呈晶形的二-DMSO溶剂合物，并用DMSO与乙酸乙酯的混合物洗涤，

最后制备呈变体I晶形的式(I)化合物，其中

1.1将式(I)化合物二-DMSO溶剂合物溶于DMSO，以DMSO与乙醇比例2：1至6：1w/w加入乙醇，

1.2溶解的式(I)化合物随后通过加水从溶液中结晶出来；

1.3形成的悬浮液随后冷却至温度5℃至50℃，且

1.4随后通过加入乙酸异丙酯，使步骤1.2形成的结晶聚结得到活性化合物产物，其中乙酸异丙酯质量与式(I)化合物质量加乙醇质量的总和比例为0.3至2.0。

此反应顺序对应于方案2步骤a)至i)。

本发明的一个实施方案为一种制备变体I晶形的方法，其中式(I)化合物变体I的X射线衍射图在5.9、6.9、22.7处显示2θ角的峰最大值，其中式(VI)化合物的制备为首先制备式(V)化合物：最初将式(II)化合物和氯化锂加入乙醇，加入式(III)化合物和氯三甲基硅烷，加热回流冷却，得到式(IV)化合物，

或者改变任何输入材料的添加顺序，

加入甲酰胺和含甲醇钠的甲醇，蒸馏出低沸点物，同时用甲酰胺重新填充蒸馏出的体积，冷却，加水，分离固体，洗涤并干燥，得到式(V)化合物，

随后将式(V)化合物通过在环丁砜及乙腈中加热而脱水，加入磷酰氯，用乙腈润洗，升温搅拌，冷却，加入乙腈，在适当搅动和良好速度及冷却下加水，保持内部温度为20℃至50℃，加入水中的氨，过滤收集固体，用水洗涤，干燥得到式(VI)化合物；

随后，制备式(VII)化合物，通过将式(VI)化合物悬浮于甲醇中，加入含甲醇钠的甲醇，搅拌，加入甲醇及氯化铵，加热回流，搅拌，冷却，使用助滤剂过滤，蒸馏浓缩滤液，加入乙酸乙酯，继续蒸馏，同时用乙酸乙酯重新填充蒸馏出的体积，冷却，加入乙醇，分离，用乙酸乙酯洗涤，干燥，得到式(VII)化合物；

随后，式(VIII)化合物的制备为通过首先制备式(VIIIa)化合物：最初在-3至12℃将含浓盐酸的水加入含苯胺的水，然后在相同温度依次加入亚硝酸钠水溶液、乙酸钠水溶液及丙二腈的乙醇溶液，分离固体，用水和异丙醇洗涤，得到式(VIIIa)化合物；

随后在DMF中将式(VII)化合物加热至85℃至115℃，在5小时至15小时内加入溶于DMF的式(VIIIa)化合物及1.2当量至1.7当量三乙胺(相对于式(VII)化合物计)，冷却至77℃至88℃，加入甲醇，分离式(VIII)化合物；

随后，式(IX)化合物的制备为在氢气存在下，在作为溶剂的NMP中，于压力50巴至90巴及温度50℃至80℃下，通过选自活性碳载钯、碳载铂、氢氧化钯及阮内镍的催化剂催化，氢化式(VIII)化合物，加水结晶，随后分离，干燥，得式(Ⅸ)化合物；

随后，式(I)化合物盐酸盐的制备为通过在作为溶剂的四氢呋喃中将式(IX)化合物加热至30℃至66℃，在1分钟至30分钟内加入1.0当量至1.2当量氯甲酸甲酯，在温度30℃至66℃下以及1小时至10小时的反应时间内搅拌，分离式(I)化合物盐酸盐并干燥，

随后式(I)化合物二-DMSO溶剂合物的制备为通过在70℃至90℃在DMSO中，将式(I)化合物盐酸盐搅拌1小时至3小时，加入三正丁胺及活性碳，在70℃至90℃搅拌，除去活性碳，冷却至-3至+20℃，加入乙酸乙酯使二-DMSO溶剂合物结晶，分离呈晶形的二-DMSO，用DMSO与乙酸乙酯的混合物洗涤，并干燥，

最后制备呈变体I晶形的式(I)化合物，其中

1.1将式(I)化合物二-DMSO溶剂合物悬浮于DMSO并加热至70℃至80℃，以DMSO与乙醇比例2：1至6：1w/w加入乙醇，将混合物于65℃至85℃搅拌15分钟至21小时，

1.2随后通过在温度15℃至85℃及0.1分钟至30分钟期间加入水，将溶解的式(I)化合物从溶液中结晶出来；

1.3将形成的悬浮液随后在1至4小时内冷却至温度5℃至50℃，且

1.4随后通过加入乙酸异丙酯，使步骤1.2形成的结晶聚结得到活性化合物产物，其中乙酸异丙酯质量与式(I)化合物质量加乙醇质量的总和比例为0.3至2.0。

本发明的一个实施方案为式(X)化合物。

本发明的一个实施方案为式(XI)化合物。

本发明的一个实施方案为式(XII)化合物。

根据WO 2020/152010(在本发明优先权日后公开)所述的实施例3制备式(XIII)的4-(2,2,3,3-四氟丙基)吗啉。也有可能是其他剂量变体。

根据本发明方法，包括单一反应步骤、反应顺序及整个过程，提供较现有技术(特别较WO 2013/076168)的相当大的优势，因此可以工业规模进行。以下概述这一点。

与WO 2013/076168对比，根据本发明的方案2步骤a)和b)在一锅反应中进行(比较例8)。针对方案2的转化(II)+(III)→(IV)(步骤a)，使用氯三甲基硅烷代替甲磺酸。

相较于现有技术的反应，使用氯三甲基硅烷代替甲磺酸导致本发明反应的相当大的优势。氯三甲基硅烷与乙醇反应生成相应的三甲基硅烷基乙基醚和盐酸。盐酸催化5-氨基-1-(2-氟苄基)-1H-吡唑-3-羧酸乙酯(II)与2-氟-3-(吗啉-4-基)丙烯醛(III)的反应，如同根据WO 2013/076168的实施例6的反应中甲磺酸的作用一样。三甲基硅烷基乙基醚与化合物(II)和化合物(III)缩合期间形成的水反应，得到三甲基硅烷醇。通过形成三甲基硅烷醇除去水对反应有正面影响，因为水将易皂化的酯(II)水解成羧酸。化合物(II)皂化的风险也为反应中不能使用盐酸水溶液的原因。因此，氯三甲基硅烷在步骤a)中同时当作酸和捕水剂(water trap)。

新反应方式的进一步优势为作为一锅反应的性能。这具有在结晶期间存在于母液的那些酯(II)成分也被处理至下一步骤的优势。一锅反应具有省去分离及干燥步骤的进一步优势。在工业规模的方法中，这具有减少生产设备占用时间的优势，导致大幅降低生产成本。

相较于现有方法，进一步优势为大幅简化后处理。省略用异丙醇短暂搅拌及用水洗涤以便除去甲磺酸的盐。进一步，无需中间分离即可获得产物，因为氯化物较甲磺酸的盐更易除去。这又大幅降低生产成本。

该一锅反应产率(82.9％o.t.)高于WO 2013/076168相应的两步骤总产率79.0％(实施例6和7)。以高产率(82.9％o.t.)和高纯度(HPLC面积％：99.7％)获得根据本发明方法的产物(化合物(V))，这是较现有技术进一步意想不到的优势。

就现有技术而言，令人惊讶的是相较于最接近的现有技术，本发明方案2步骤a)和b)的上述差异，即使用氯三甲基硅烷代替甲磺酸并在一锅反应中进行步骤a)和b)，导致较现有技术如此明显的优势。

针对方案2步骤c)的转化(V)→(VI)，使用与WO 2013/076168实施例8相同的输入材料。决定性差异在于反应控制。在根据本发明的反应中，在适当搅动和良好速度及冷却下加入水以保持内部温度为20℃至50℃。

在适当搅动下，以良好速度加入乙腈和水，同时冷却以保持内部温度为20℃至50℃，令人惊讶地避免将产物(化合物(VI))水解为输入材料(化合物(V))。因而，与根据现有技术的方法相比，不同的反应控制提供主要优势。

根据本发明的该反应的进一步优势为以高产率(95.9％o.t.)和高纯度(HPLC面积％：99.4％)获得产物(化合物VI)。

对于根据WO 2013/076168实施例9的方案1步骤d)的转化(VI)→(VII)，将输入材料悬浮于乙醇。对比之下，根据本发明的方案2步骤d)的输入材料为悬浮于甲醇。

令人惊讶地，通过将输入材料(化合物(VI))悬浮于甲醇而非乙醇，完全避免根据WO 2013/076168实施例9进行转化(VI)→(VII)时在容器壁处建立的硬壳(encrustations)。当以工业规模进行该方法时，这是决定性优势。

作为进一步令人惊讶的效果，产物(化合物(VII))于20℃完全溶解，只有过量存在的盐及杂质以未溶解的形式存在。这导致在加入助滤剂的同时，通过过滤可易于分离这些杂质的进一步优势。

相对于190kg输入材料(化合物(VI))，用18kg助滤剂(Kieselguhr ClarcelDICB)、压差2巴和过滤器表面积6.5m

将溶剂改为乙酸乙酯后，以高产率(88.6％o.t.)和高纯度(HPLC面积％：99.9％)获得产物。

就现有技术而言，令人惊讶的是，在本发明方案2步骤d)中将输入材料(化合物(VI))悬浮于甲醇，而非如最接近的现有技术所述使用乙醇，导致较现有技术如此明显的优势。

当制造用于方案2的转化(VII)+(VIIIa)→(VIII)(步骤e)的中间体(VIIIa)时，以与WO 2013/076168实施例10A不同的方式洗涤化合物(VIIIa)。根据WO 2013/076168实施例10A，中间体(VIIIa)用5.3L水/kg苯胺及4.15L甲苯/kg苯胺各洗涤三次。根据本发明，化合物(VIIIa)用5.2L至12.8L水/kg苯胺及3.5L至4.8L异丙醇(而不是甲苯)/kg苯胺各洗涤三次。

根据本发明改变化合物(VIIIa)的洗涤程序(用异丙醇代替甲苯及不同比例的水)令人惊讶地具有完全除去所有盐的主要优势。

作为根据本发明的化合物(VIIIa)这种洗涤程序的进一步优势，用异丙醇洗涤有效地除去水，与在WO 2013/076168实施例10A所述反应中采用的甲苯相反，异丙醇可与水互混。通过用异丙醇洗涤，因而除去进一步杂质且以非常高纯度(HPLC面积％：100％)获得化合物(VIIIa)。因而，根据本发明洗涤程序较现有技术已知方法具有出乎意料及相当大的优势。

与WO 2013/076168实施例11A(转化(VII)+(VIIIa)→(VIII))的不同处在于输入材料比例(化合物(VII)、三乙胺及DMF总量)。在WO 2013/076168实施例11A中，在DMF中加热一当量化合物(VII)。随后，在30分钟期间相对于每1.1当量于DMF中的三乙胺加入1.7当量化合物(VIIIa)。DMF总量为5.8kg/kg式(VII)化合物。根据本发明，在DMF中加热一当量化合物(VII)。随后，在10小时期间相对于每1.45当量于DMF中的三乙胺加入1.25当量化合物(VIIIa)。DMF总量(包含溶解化合物(VIIIa)的DMF量)为4.7kg至6.1kg DMF/kg式(VII)化合物，或5.2kg DMF/kg式(VII)化合物。

相较于现有技术，根据本发明的转化(VII)+(VIIIa)→(VIII)中输入材料(化合物(VII)、三乙胺及DMF的总量)的不同比例令人惊讶地产生高纯度产物。

三乙胺用于从盐酸盐中释放化合物(VII)。通常，略高于1当量的三乙胺(相对于化合物(VII)计)即足够。然而，出乎意料地，使用1.45当量三乙胺产生更高纯度产物。使用更高过量的三乙胺的进一步优势为抑制由两分子化合物(VIIIa)反应所构建的副组分的形成。施用小于1.30当量三乙胺的反应条件造成实施例11的化合物(VIII)具有显著更高含量的式(VIIIb)化合物。

相较于本发明，WO 2013/076168实施例11A的另一区别在于化合物(VIII)的洗涤。在WO 2013/076168实施例11A中，用水/DMF、2x水/甲醇及甲醇进行洗涤。根据本发明，随后用DMF、甲醇、水与甲醇进行洗涤。这种化合物(VIII)洗涤步骤的优化出乎意料地导致进一步纯化产物化合物(VIII)。以高产率(78.1％o.t.)及高纯度(HPLC面积％：99.0％)获得式(VIII)化合物。

在根据WO 2013/076168实施例12的方法中，在DMF中进行方案1步骤f)的转化(VIII)→(IX)。在本发明方法中，使用NMP代替DMF。

在根据WO 2013/076168实施例12的方法中(方案1步骤f)的转化(VIII)→(IX))使用DMF具有几个主要缺点。产物(IX)与DMF形成溶剂合物，需要用热水及大量工作转变成无溶剂合物形式。在接下来的步骤中(转化(IX)→(I)盐酸盐)，剩余DMF会与氯甲酸甲酯形成需要用大量工作除去的甲酰基副产物。根据WO 2013/076168实施例12方法的进一步缺点为产物(化合物(IX))于DMF中的低溶解度。在除去催化剂的过滤期间，产物结晶会造成阻碍，其非常不利于以工业规模进行该方法。

在本发明方法中，使用NMP代替DMF。产物(化合物(IX))于NMP中具有相当高溶解度，其具有可以更高浓度(4.6L至6.8L NMP/kg输入材料(化合物(VIII))，相对于根据WO2013/076168实施例12中的10L DMF/kg输入材料)进行氢化的优势。作为额外优势，在结晶期间通过过滤母液可容易地除去NMP。这简化了有关例如减少工厂操作时间的工艺，并因此减少生产成本。从现有技术中未预料在此反应中使用NMP代替DMF会造成如此显著的好处。

作为WO 2013/076168方法实施例12步骤f)的进一步缺点，DMF的主要部分需要在氢化后通过蒸馏除去，由于DMF高沸点(162℃)，故这是精细的步骤。通过本发明的改良方法可省去此步骤。在结晶前省略蒸馏DMF需要提高水量，并导致甚至更不利的产率降低。

通过本发明的该方法，以高产率(95.5％o.t.)及高纯度(HPLC面积％：98.6％)获得产物(化合物(IX))。

基于现有技术，令人惊讶地，与最接近的现有技术中使用DMF相比，本发明方案2步骤f)中使用NMP导致较现有技术如此明显的优势。

根据WO 2013/076168实施例13A方法的第一方法步骤，在异丙醇中进行转化(IX)→(I)盐酸盐。将输入材料(化合物(IX))悬浮于异丙醇，并与溶于异丙醇的氯甲酸甲酯反应20小时，得到化合物(I)盐酸盐的悬浮液。通过加入甲醇破坏过量的氯甲酸甲酯。未分离化合物(I)盐酸盐。

在本发明方法中，在THF而非异丙醇中进行产生化合物(I)盐酸盐的反应(方案2步骤g))，并分离化合物(I)盐酸盐。

在本发明方法中，令人惊讶地发现，当在THF而非异丙醇中进行反应时，反应悬浮液完全转换成在反应期间产物从其中结晶的溶液。由此，反应时间从异丙醇中20小时缩短至THF中2小时，这是有关如生产设备的成本及操作时间的重要优势。通过过滤可易于分离反应产物化合物(I)盐酸盐。

对于120kg输入材料(化合物(IX))、压差2巴和过滤器表面积2.5m

基于现有技术，令人惊讶地，与最接近的现有技术使用异丙醇对比，本发明方案2步骤g)中使用THF导致该方法技术性能较现有技术如此明显的优势。

根据本发明方法的进一步重要优势为与根据WO 2013/076168实施例13A方法中使用的1.3当量氯甲酸甲酯对比，在本发明反应中使用仅1.0当量至1.2当量过量的氯甲酸甲酯。

进一步，因为在本发明方法中过滤母液时除去氯甲酸甲酯，所以不需要通过加入甲醇来破坏过量的氯甲酸甲酯，其为优于本领域方法的进一步优势。

分离呈盐酸盐的化合物(I)已经提供高产率(96.2％o.t.)及高纯度(HPLC面积％：99.14％)的产物。

根据WO 2013/076168实施例13A，未分离在该方法第一步骤中形成的化合物(I)盐酸盐。用三乙胺处理化合物(I)盐酸盐获得粗产物化合物(I)。然后将粗产物化合物(I)于DMSO中搅拌，加入乙酸乙酯及活性碳，加热回流。然后过滤掉活性碳，用乙酸乙酯洗涤过滤残渣。过滤掉活性碳后得到的滤液含有溶于DMSO和乙酸乙酯的式(I)化合物，将其按剂量加入预热的乙酸乙酯，产生结晶形式的化合物(I)。因而，根据WO 2013/076168的实施例13A，未分离化合物(I)二-DMSO溶剂合物。

在根据WO 2013/076168实施例13A分离粗产物后，用乙醇洗涤三次以除去三乙胺盐酸盐，这是费力的。

在本发明方法中，用三正丁胺代替三乙胺处理式(I)化合物盐酸盐(方案2的步骤h))。

根据本发明，与WO 2013/076168步骤g)相比，在释放化合物(I)盐酸盐以得到化合物(I)粗产物期间，形成三正丁胺盐酸盐，其完全溶于母液且在分离化合物(I)DMSO溶剂合物时被分离出。优势为省去洗涤胺的盐酸盐的步骤，导致较少费力的方法步骤。这种效果无法从现有技术预期。

本发明的方法与WO 2013/076168实施例13A的另一区别在于过滤掉活性碳后，用DMSO而非乙酸乙酯洗涤过滤残渣，后者被用于WO 2013/076168实施例13A的方法。

作为进一步区别，在根据本发明的方法中，化合物(I)二-DMSO溶剂合物通过加入乙酸乙酯结晶并通过过滤分离。DMSO与乙酸乙酯的混合物用于洗涤根据本发明的产物。

进一步，通过在纯DMSO、而非DMSO与乙酸乙酯的混合物中进行活性碳的分离，根据本发明的活性碳的过滤较WO 2013/076168实施例13A得到改良。

本发明反应的进一步优势在于随后将乙酸乙酯加入滤液时，二-DMSO溶剂合物结晶并可通过过滤分离。

根据本发明，过滤二-DMSO溶剂合物后，用DMSO与乙酸乙酯的混合物洗涤残渣。这具有的优势为避免DMSO从溶剂合物洗脱，所述洗脱在较大规模进行反应时由延长的接触时间引起。因而，用DMSO与乙酸乙酯的混合物洗涤总是导致溶剂合物中DMSO的理论含量。通过根据本发明的结晶，非常有效地除去杂质。这与产生药物产物的下一步高度相关。令人惊奇地，反应产物稳定且可在所述条件下干燥并随后储存。以高产率(77.7％o.t.)及高纯度(HPLC面积％：99.92％)获得化合物(I)二-DMSO溶剂合物。

如以上针对方案1步骤h)所概述，未分离化合物(I)二-DMSO溶剂合物，而是通过加入乙酸乙酯直接结晶，得到呈变体I晶形的式(I)化合物。

根据本发明，化合物(I)二-DMSO溶剂合物转化为呈结晶变体I的式(I)化合物基本上如WO 2020/126983(在本发明优先权日后公开)所述进行。

将分离的式(I)化合物二-DMSO溶剂合物悬浮于DMSO并加热，加入乙醇并搅拌混合物，其中溶解的式(I)化合物随后通过加入水，从溶液结晶出来；随后冷却形成的悬浮液，且随后通过加入乙酸异丙酯，使步骤b)形成的结晶聚结以提供活性化合物产物。

根据本发明方法步骤i)产生呈结晶变体I的式(I)化合物的活性化合物产物，其具有改良性质，例如在活性化合物产物的可分离性、分离及干燥后活性化合物产物的排放能力以及运输能力、筛分能力及微粉化能力方面。

在本发明上下文中及如WO 2020/126983所概述，改良的式(I)化合物活性化合物产物的可分离性、分离及干燥后活性化合物产物的排放能力、以及活性化合物产物的运输能力、筛分能力及微粉化能力应理解为以下含义，例如：

改良的可分离性可在工业规模上测量，例如通过翻袋卸料离心机(invertingfilter centrifuge)中更高的面积比产出量(实施例16)。

可测量来自分离装置的改良的排放能力，例如通过最大滤饼厚度，在所述最大滤饼厚度处，排放路径(例如从翻袋卸料离心机出来的排放路径)未被堵塞。

可测量改良的干燥，例如通过真空接触式干燥器中无问题干燥及避免从干燥器排放时在下落轴中堵塞。

可测量改良的筛分能力，例如通过由于活性化合物产物的改良的流动能力而改良的送入工业筛分机的进料，及通过更少的筛网堵塞，例如通过每单位时间的活性化合物产物产出量(实施例17)。

可测量改良的微粉化，例如通过更容易地将活性化合物产物进料到喷射研磨机中。

在本发明上下文中，“工业规模”定义为批量大小>10kg活性化合物。

在本发明上下文中，使用例如过滤离心机(例如翻袋卸料离心机)进行活性化合物产物的分离。

在本发明上下文中，使用例如真空接触干燥器(例如球形干燥器)进行活性化合物产物的干燥。

在本发明上下文中，例如使用Frewitt Coniwitt TC200筛分机(筛网孔径3mm)或Frewitt Oscillowitt MG-800筛分机(筛网孔径2.5mm至4.0mm)进行活性化合物产物的筛分。

在本发明上下文中，例如通过在喷射研磨机中粉碎进行微粉化。

相较于通过WO 2013/076168的方法所生产的材料，通过本发明的方法生产的材料的可分离性得到改良。这表现为例如在翻袋卸料离心机中更高的面积比产出量。在工业规模上，来自WO 2013/076168方法的材料的分离实现的平均面积比产出量为1.6kg/m

改良从分离装置的排放能力：根据本发明方法防止形成具有高撕裂强度的毡样滤饼。在压力过滤器中分离后及在过滤离心器中分离后，滤饼都是柔软且可成型的。这防止排放路径堵塞。例如，在工业规模上，分离来自WO 2013/076168方法的材料后，只有通过将滤饼厚度减少到8mm至9mm，才能避免来自翻袋卸料离心机的排放路径堵塞。对比之下，在分离来自本发明方法的材料时，实现平均滤饼高度25mm，而未观察到排放路径的任何堵塞。

改良的干燥：由于来自本发明方法的滤饼柔软稠度及良好可变形性，在真空接触干燥器(例如球形干燥器)中干燥并无问题。干燥的材料形成易于流动的块材，其从干燥器排放时也不会导致下落轴堵塞。

改良的筛分能力：来自本发明方法的材料由于其良好流动性而易于送入筛分机。相较于来自根据路径1方法的材料，筛分导致明显更少的筛网堵塞。例如，在工业规模上，来自本发明方法的65kg材料在Frewitt Coniwitt TC200筛分机(筛网孔径3mm)中可在<5分钟内筛分。这相当于>13kg/min。相比之下，通过Frewitt Oscillowitt MG-800筛分机(筛网孔径2.5mm至4.0mm)筛分来自路径1的材料仅实现产出量<10kg/h。这相当于<0.17kg/min(实施例17)。此处观察到，相较于本发明的活性化合物产物，路径1的活性化合物产物的筛分产出量有接近100倍的非常大的差异。这种筛分产出量的非常大的差异主要由活性化合物产物的材料特征造成，且无法用不同机器类型来解释。

固体处理和固体输送性质显著改良。

改良的微粉化：来自本发明方法的材料由于其良好流动性而易于送入喷射研磨机中。

WO 2020/126983描述了相较于WO 2013/076168方法关于例如造粒的进一步优势。

基于现有技术，无法预料根据本发明的方法产生这样的活性化合物产物，其相较于来自现有技术方法的产物，在呈固体剂型的式(I)药物活性化合物的工业规模生产中，显示如此显著改良的性质。基于现有技术也无法预料根据本发明方法产生式(I)活性化合物的所定义变体，优选变体I晶形。同样令人惊讶的是，在根据本发明的活性化合物产物的生产期间，未形成活性式(I)化合物的水合物或二水合物。在某些条件下，活性化合物与水接触时形成水合物。这在根据本发明的方法中出乎意料地被防止。进一步，根据本发明的方法导致式(I)化合物的活性化合物产物的所定义变体，即呈变体I晶形的化合物(I)。进一步，根据本发明的方法不导致形成式(I)化合物的活性化合物产物的水合物或二水合物。

实施例

Ac乙酰基

aq.水性

conc.浓缩

DMF 二甲基甲酰胺

DMSO 二甲亚砜

eq.当量

ESI 电喷雾离子源(MS中)

Et 乙基

sat.饱和

h 小时

HCl 盐酸

HPLC 高压高效液相色谱法

Me 甲基

min 分钟

MS 质谱法

NMP N-甲基-2-吡咯烷酮

NMR 核磁共振光谱法

o.t.理论的

Pd/C 活性碳载钯

R

R

THF 四氢呋喃

w/w 重量与重量之比

Zorbax Bonus RP；150mm×3.00mm；3.5μm

柱温：35℃；进样体积：5.0μL；流速：0.6mL/min

流动相A：1.0mL三氟乙酸于水中(1L)；

流动相B：1.0mL三氟乙酸于甲醇中(1L)；

样品溶剂：乙腈/二甲亚砜/水(4：4：2)

梯度：0.0’：65％A；2.0’：65％A；23.0’：10％A；25.0’：10％A；25.1’：65％A

UV检测：236nm。

Zorbax Bonus RP；100mm×4.6mm；1.8μm

柱温：60℃；进样体积：3.0μL；流速：0.6mL/min

流动相A：1.0mL三氟乙酸于水中(1L)；

流动相B：1.0mL三氟乙酸于乙腈中(1L)；

样品溶剂：二甲基甲酰胺

梯度：0.0’：78％A；17.0’：60％A；34.0’：10％A；40.0’：10％A；40.1’：78％A；50.1’：78％A

UV检测：260nm。

Zorbax Bonus RP；100mm×4.6mm；1.8μm

柱温：40℃；进样体积：4.0μL；流速：0.5mL/min

流动相A：1.0mL三氟乙酸于水中(1L)；

流动相B：1.0mL三氟乙酸于乙腈中(1L)；

样品溶剂：二甲亚砜/乙腈(1：1)

梯度：0’：85％A；1.0’：85％A；24.0：15％A；36.0：5％A；36.1：85％A；46.1：85％A

UV检测：260nm。

Poroshell 120Bonus-RP；250×4.00mm；2.7μm

柱温：30℃；进样体积：5.0μL；流速：0.5mL/min

流动相A：1.0mL三氟乙酸于水中(1L)；

流动相B：0.7mL三氟乙酸于乙腈中(1L)；

样品溶剂：二甲亚砜

梯度：0.0’：95％A；13.0’：74％A；24.0’：25％A；30.0’：10％A；33.0：10％A；33.1：95％A；40.1：95％A

UV检测：310nm。

XBridge Shield RP 18，150mm×3.00mm；3.5μm

柱温：10℃；进样体积：5.0μL；流速：0.5mL/min

流动相A：1.15g(NH

流动相B：乙腈；

样品溶剂：洗脱液A的缓冲液/乙腈(1：1)

梯度：0.0’：75％A；8.0：60％A；15.0：55％A；22.0：20％A；30.0’：20％A

UV检测：210nm。

XBridge Shield RP 18，150mm×3.00mm；3.5μm

柱温：10℃；进样体积：5.0μL；流速：0.5mL/min

流动相A：1.15g(NH

流动相B：乙腈；

样品溶剂：洗脱液A的缓冲液/乙腈(1：1)

梯度：0.0’：60％A；8.0：50％A；15.0：50％A；22.0：20％A；30.0’：20％A

UV检测：210nm。

4-(2,2,3,3-四氟丙基)吗啉

根据WO 2020/152010(在本发明优先权日后公开)所述实施例3制备。

将式(II)的2,2,3,3-四氟丙基甲苯磺酸酯(330.0g，1.10mol)与吗啉(208.0g，2.39mol)的经搅拌混合物在高压釜中缓慢加热至130℃，并在该温度下搅拌18小时。将高压釜冷却至80℃，打开，用110ml水稀释反应混合物，进一步冷却至室温。分离下层产物，用甲基叔丁基醚(2x83ml)洗涤水层。合并有机层，在常压蒸发溶剂。在115℃、真空185mmHg下，蒸馏获得呈无色液体的式(I)化合物(4-(2,2,3,3-四氟丙基)吗啉)。

沸点115℃/185mbar，产率188.0g(85％o.t.)。

4-甲基-4-(2,2,3,3-四氟丙基)吗啉-4-鎓(morpholin-4-ium)甲磺酸盐

方法A：

将20.0g(181.3mmol)甲磺酸甲酯加热至135℃，且在此温度下逐滴加入35.1g(172.7mmol)来自实施例1的化合物。将混合物于135℃搅拌3小时，然后加入40ml水。冷却至50℃后，在随后阶段使用标题化合物的水溶液(见实施例5)。

方法B：

将甲磺酸甲酯(143.7g，1.31mol)加热至135℃，且在此温度下逐滴加入250.0g(1.24mol)实施例1化合物。将混合物于100℃搅拌22小时，然后冷却至85℃，并加入异丙醇(375mL)。冷却至0至5℃后，将混合物再搅拌30分钟。通过抽吸过滤收集产物，用异丙醇洗涤(3×125mL)，在真空干燥箱中，在45℃温和氮气流下干燥。产率：336.8g(87％o.t.)。

4-甲基-4-(2,2,3,3-四氟丙基)吗啉-4-鎓甲苯磺酸盐

将4-甲苯磺酸甲酯(17.0g，91.3mmol)与实施例1化合物(18.4g，91.3mmol)的混合物加热至130℃，并在该温度下搅拌5小时。然后将混合物冷却至80℃，并加入异丙醇(20mL)。将140ml乙醚加入该溶液，搅拌10小时。通过抽吸过滤收集沉淀产物，用50ml乙醚洗涤，在真空干燥箱中，在55℃温和氮气流下干燥。产率：33.5g(86％o.t.)。

4-甲基-4-(2,2,3,3-四氟丙基)吗啉-4-鎓甲基硫酸盐

将硫酸二甲酯(0.66g，5.2mmol)与实施例1化合物(1.0g，4.97mmol)的混合物加热至130℃，并在100℃搅拌2小时。然后将混合物冷却至20℃并分离为油状物。产率：1.6g(98％o.t.)。

4-甲基-4-[2,3,3-三氟丙-1-烯-1-基]吗啉-4-鎓甲磺酸盐

在50℃至55℃，将16.9g(189.9mmol)45％氢氧化钠溶液计量加入来自实施例2的方法A化合物(最大172.7mmol)的水溶液中，并将混合物于50℃下搅拌1小时。将反应混合物冷却至20℃，抽吸过滤出沉淀的盐，并用5ml水洗涤。在随后阶段(见实施例7)使用产物水溶液(102.1g；最大172.7mmol)。

出于分析目的，浓缩并干燥样品。

4-甲基-4-[2,3,3-三氟丙-1-烯-1-基]吗啉-4-鎓甲苯磺酸盐

在50℃下，将0.55g(6.2mmol)45％氢氧化钠溶液计量加入2.0g(5.2mmol)来自实施例3的化合物的水溶液中，并将混合物于50℃下搅拌1小时。将反应混合物冷却至20℃，抽吸过滤出沉淀的盐，并用1ml水洗涤。加入10ml二氯甲烷并真空浓缩。将10ml二氯甲烷再次加入残渣并真空浓缩，产生1.55g粗产物。

2-氟-3-(吗啉-4-基)丙烯醛

将43.8g(503mmol)吗啉与76.3g(755mmol)三乙胺的混合物加热至75℃，在25分钟内逐滴加入来自实施例5的化合物(最大251.5mmol)的水溶液。随后，将混合物于75℃搅拌2小时并冷却至23℃，加入290ml二氯甲烷及100ml三乙胺。过滤混合物，分离相，用290ml二氯甲烷与100ml三乙胺的混合物洗涤水相，用250ml碳酸钾饱和水溶液洗涤合并的有机相，并在40℃在旋转蒸发仪上浓缩，加入50ml甲苯，进一步浓缩混合物。这得到35.3g(理论值的83.4％)标题化合物。

5-氟-1-(2-氟苄基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-甲酰胺

最初将氯化锂(40.3g，0.95mol)和5-氨基-1-(2-氟苄基)-1H-吡唑-3-羧酸乙酯((II)，如WO 00/06569中实施例20A所述制备)(100.0g，0.38mol)加入乙醇(用甲苯变性，361mL)，加入0.95当量(相对于化合物(II)计)实施例7化合物。在10分钟内，加入氯三甲基硅烷(74.3g，0.68mol)，将混合物加热至回流温度，搅拌2小时并冷却至65℃。在此温度下加入甲酰胺(303mL)，并在2小时内加入30％溶于甲醇的甲醇钠(191.5g，1.1mol)。将内部温度增加至不超过110℃，蒸馏出低沸点物直至达到内部温度105℃至107℃。在蒸馏期间，连续加入甲酰胺(439mL)以保持填充水平恒定。将其搅拌额外0.5小时，并以速率9k/h冷却至50℃。

然后，在20分钟内加入水(410mL)，将混合物以速率20K/h冷却至20℃并搅拌1小时。抽吸过滤出沉淀的固体，用水(670mL)洗涤，进一步用水(224mL)与乙醇(用甲苯变性，283mL)的混合物洗涤。在50℃在温和氮气流下在真空干燥箱中干燥。

产率：86.3g(82.9％o.t.)

HPLC方法E：分钟主要成分：12.7分钟

检定(HPLC wt％)：99.9％

纯度(HPLC面积％)：99.7％

5-氟-1-(2-氟苄基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-甲腈

在环丁砜(187mL)和乙腈(39mL)中，将实施例8化合物(99.9重量％，80.0g，0.28mol)加热至103至107℃。在搅拌同时，缓慢逐滴加入磷酰氯(31.9g，0.21mol)，用乙腈(13mL)润洗滴液漏斗，然后将混合物于107℃搅拌4小时。然后，将混合物冷却至25℃，在适当搅动下，以良好速度及在冷却下加入乙腈(13mL)和然后加入水(120mL)，保持内部温度为20℃至30℃。将混合物搅拌1小时，在0.5小时内加热至50℃，在该温度搅拌0.5小时，并在1小时内冷却至20℃。然后，在1小时内逐滴加入氨(28％，43.5g)于水(66.7ml)中的水溶液，将所得混合物于1小时内冷却至5℃并再搅拌0.5小时。通过抽吸过滤收集沉淀的固体，用水(2×156mL)洗涤，并在50℃在温和氮气流下在真空干燥箱中干燥。

产率：71.9g(95.9％o.t.)

HPLC方法F：分钟主要成分：15.3分钟

检定(HPLC wt％)：100.1％

纯度(HPLC面积％)：99.4％

5-氟-1-(2-氟苄基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-甲酰亚胺酰胺盐酸盐

将实施例9化合物(98.8重量％，80.0g，0.30mol)悬浮于甲醇(268ml)。然后，加入30％溶于甲醇的甲醇钠(10.8g，0.06mol)，将混合物于22℃搅拌5小时。加入甲醇(100mL)和氯化铵(18.6g，0.35mol)，将混合物加热回流并搅拌4.5小时。将混合物冷却至20℃，加入硅藻土(7.6g)并搅拌1小时。过滤悬浮液，并用甲醇(26mL)洗涤滤渣。用夹套温度80℃蒸馏浓缩合并的滤液，加入乙酸乙酯(246mL)，继续蒸馏直至获得约100mL馏出液。在施予夹套温度100℃下，继续蒸馏直至达到内部温度72℃。同时，连续加入乙酸乙酯(854mL)以保持填充水平恒定。将混合物于2小时内冷却至20℃，加入乙醇(24mL)，搅拌1小时，过滤悬浮液，滤渣用乙酸乙酯(157mL)洗涤，并在50℃在温和氮气流下在真空干燥箱中干燥。

产率：84.9g(88.6％o.t.)。

HPLC方法D：分钟主要成分：13.8分钟

检定(HPLC wt％)：98.6％

纯度(HPLC面积％)：99.9％

2-[5-氟-1-(2-氟苄基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-基]-5-[(E)-苯基二氮烯基]嘧啶-4,6-二胺

在0℃至5℃，将浓HCl(12.9g，130.9mmol)和水(87.2mL)逐滴加入水(87.2mL)和苯胺(6.0g，65.2mmol)。然后，在45分钟内逐滴加入亚硝酸钠(4.6g，66.0mmol)于水(11.1ml)中的溶液，将混合物于0℃至5℃搅拌15分钟。此后，在此温度，在45分钟内逐滴加入乙酸钠(6.8g，82.6mmol)于水(33.4ml)中的溶液，在1小时内逐滴加入丙二腈(4.4g，65.8mmol)于乙醇(11.7g)中的溶液。用乙醇(68.5mL)润洗滴液漏斗，将混合物于0℃至5℃进一步搅拌2小时。通过抽吸过滤收集黄色固体，用水(3×51mL)及异丙醇(3×26mL)洗涤并抽吸干燥。将仍然潮湿的残渣溶于DMF(47.5g)和三乙胺(6.0g，59.4mmol)，得到[(E)-苯基二氮烯基]丙二腈(化合物(VIIIa))和三乙胺(71.4g)的DMF溶液。将实施例10化合物(97.7重量％，14.0g，40.9mmol)悬浮于DMF(25.7g)。将混合物加热至100℃，在10小时内在此温度下逐滴加入三乙胺和[(E)-苯基二氮烯基]丙二腈的DMF溶液。将混合物于100℃进一步搅拌12.5小时。然后，冷却至85℃，在1小时内逐滴加入甲醇(16.6g)，将所得混合物于5小时内冷却至2℃并搅拌1小时。通过抽吸过滤收集固体，用DMF(5.5g)、甲醇(12g)、水(76g)和然后甲醇(12g)洗涤，抽吸干燥，然后在65℃在温和氮气流下在真空干燥箱中干燥。

产率：14.6g(78.1％o.t)

HPLC方法C：分钟主要成分：18.6分钟

检定(HPLC wt％)：98.6％

纯度(HPLC面积％)：99.0％

3-氨基-3-({6-氨基-2-[5-氟-1-(2-氟苄基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-基]-5-[(E)-苯基二氮烯基]嘧啶-4-基}氨基)-2-[(E)-苯基二氮烯基]丙烯腈

在三乙胺存在下，通过两分子[(E)-苯基二氮烯基]丙二腈(化合物(VIIIa))与化合物(VII)的反应，产生实施例11A化合物作为实施例11化合物(VIII)的杂质。若根据上述条件进行方法，则获得杂质水平0.2至0.6(HPLC面积％)。这种杂质水平在该方法的随后步骤中完全消耗，产生高纯度式(I)化合物。

2-[5-氟-1-(2-氟苄基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-基]嘧啶-4,5,6-三胺

最初将实施例11化合物(97.7重量％，100.0g，0.22mol)加入NMP(0.57L)，然后加入5％Pd/C(50％水分，2.2g)。在60℃及氢气压力60巴下实现氢化，同时搅拌过夜。过滤混合物并用NMP(48.4mL)彻底洗涤固体。将滤液冷却至20℃，然后在3小时内加入水(1.92L)，将混合物搅拌1小时。通过抽滤收集固体，用水(2×300mL)洗涤，抽吸干燥，然后在100℃在温和氮气流下在真空干燥箱中干燥。

产率：76.1g(95.5％o.t.)

HPLC方法B：分钟主要成分：10.6分钟

检定(HPLC wt％)：98.6％

纯度(HPLC面积％)：98.6％

MS(ESI+)：m/z＝369[M+H]

甲基{4,6-二氨基-2-[5-氟-1-(2-氟苄基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-基]嘧啶-5-基}氨基甲酸酯盐酸盐

将四氢呋喃(2.34L)中的实施例12(96.7重量％，250.0g，0.66mol)加热至60℃，然后在15分钟内加入氯甲酸甲酯(72.6g，0.77mol)。将混合物于60℃搅拌2小时，在该温度通过抽吸过滤收集固体，并在55℃与1.54L四氢呋喃一起搅拌0.5小时。在该温度通过抽吸过滤收集固体，并在55℃下再次与1.54L四氢呋喃一起搅拌0.5小时。在该温度通过抽吸过滤收集固体，抽吸干燥，然后在50℃在温和氮气流下在真空干燥箱中干燥。

产率：294.0g(96.2％o.t.)

HPLC方法A：分钟主要成分：9.4分钟

检定(HPLC wt％)：98.49％

纯度(HPLC面积％)：99.14％

MS(ESIpos)：m/z＝427(M+H)+

N-{4,6-二氨基-2-[5-氟-1-(2-氟苄基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-基]嘧啶-5-基}甲酰胺

通过残余DMF与氯甲酸甲酯和实施例12式(IX)化合物反应，产生实施例13A化合物作为杂质，而非式(I)化合物盐酸盐。

甲基{4,6-二氨基-2-[5-氟-1-(2-氟苄基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-基]嘧啶-5-基}氨基甲酸酯的二-二甲亚砜溶剂合物

在80℃下，将实施例13化合物(280.0g)(98.5重量％，280.0g，0.60mol)于DMSO(635.8mL)中搅拌2小时。加入三正丁胺(140.0g，0.18mol)和活性碳(16.8g)，将混合物于80℃搅拌15分钟。将悬浮液热过滤，并用预热至80℃的DMSO(173mL)洗涤滤渣。将合并的滤液于60℃搅拌15分钟，在1.5小时内冷却至45℃，在该温度搅拌0.5小时，并以速率10K/h进一步冷却至20℃。在1小时内加入乙酸乙酯(1.98L)，以速率10K/h加热至45℃，在该温度搅拌1小时，并以速率10K/h再次冷却至20℃。在20℃搅拌过夜，以速率10K/h冷却至20℃，并在该温度下搅拌0.5小时。通过抽吸过滤收集固体，用DMSO(107.3g)与乙酸乙酯(536.7g)的混合物洗涤，抽吸干燥，然后在50℃在温和氮气流下在真空干燥箱中干燥。

产率：271.9g(77.7％o.t.)

HPLC方法A：分钟主要成分：9.4分钟

检定(HPLC wt％)：73.1％；24.4％二甲亚砜

纯度(HPLC面积％)：99.92％

甲基{4,6-二氨基-2-[5-氟-1-(2-氟苄基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-基]嘧啶-5-基}氨基甲酸酯

将6.29g式(I)的甲基{4,6-二氨基-2-[5-氟-1-(2-氟苄基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-基]嘧啶-5-基}氨基甲酸酯的二-DMSO溶剂合物(73.0％w/w式(I)化合物，27.4％w/wDMSO，(实施例14))悬浮于37.4g DMSO并加热至75℃。将15.7g乙醇加入所得澄清溶液，将混合物于75℃搅拌15分钟。过滤溶液并用22.4g DMSO洗涤。将滤液加热至75℃，并在5分钟期间逐滴加入53.4g水。将悬浮液以速率28K/h冷却至20℃，并在30分钟期间加入25.8g乙酸异丙酯。将混合物于20℃进一步搅拌30分钟，分离固体。然后最初用34.3g乙醇、随后用34.8g乙酸异丙酯洗涤。将湿产物于50℃用氮气流减压干燥过夜。这以非常高产率及纯度提供呈变体I晶形的式(I)的甲基{4,6-二氨基-2-[5-氟-1-(2-氟苄基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-基]嘧啶-5-基}氨基甲酸酯。

产率：4.24g(92.6％o.t.)

HPLC方法A：分钟主要成分：9.4分钟

检定(HPLC wt％)：99.27％

纯度(HPLC面积％)：99.97％

MS(ESIpos)：m/z＝427(M+H)+

LC-MS(方法d)：

翻袋卸料离心机中更高的面积比产出量。工业规模。

这些数据显示，相较于来自WO 2013/076168方法的材料，来自本发明方法的材料有改良的可分离性。

改良的筛分产出量。工业规模。

此处观察到根据WO 2013/076168方法生产的呈变体I晶形的活性化合物产物化合物(I)与本发明方法生产的呈变体I晶形的活性化合物产物化合物(I)相比，在筛分产出量上有接近100倍的非常大的差异。这种筛分产出量的非常大的差异主要由活性化合物产物的材料特征造成，且无法用不同机器类型来解释。

附图说明

图1：通过扫描电子显微镜分析，根据WO 2013/076168方法生产的呈变体I晶形的式(I)化合物。

图2：通过扫描电子显微镜分析，根据本发明实施例15生产的呈变体I晶形的式(I)化合物。

这些图像显示作为活性化合物的呈变体I晶形的式(I)化合物结构的显著差异，这表明尤其在根据本发明方法所生产的活性化合物产物的可分离性、分离及干燥后活性化合物产物的排放能力以及活性化合物产物的运输能力、筛分能力及微粉化能力等方面改良的性质。