促进猪肌肉脂肪酸沉积的微生物菌剂及其分离方法与应用

技术领域

本发明涉及微生物菌剂技术领域，尤其涉及促进猪肌肉脂肪酸沉积的微生物菌剂及其分离方法与应用。

背景技术

随着人们生活水平的提高，市场对猪肉需求量不断增长，对猪肉的品质也提出了更高的要求。消费者开始追求更高品质和更丰富风味的猪肉，因此对猪肉品质也提出相应的要求，包括廋肉率，肌内脂肪和营养价值等。

而肌内脂肪是影响肉质和口感的重要影响因素。近年来，商品猪大多追求屠宰性能和瘦肉率，瘦肉率高达60％以上，肌内脂肪含量却小于2.5％，极大影响了猪肉品质和口感。另外，肠道微生物在脂质代谢中的作用越来越受到关注，研究发现肠道微生物参与猪肉质和脂质代谢，同时可作为潜在的靶点用于调控猪脂质代谢及肉品质。但现有技术中关于促进饱和脂肪酸沉积的微生物菌剂保教较少。因此，亟需一种新的促进饱和脂肪酸沉积的微生物菌剂，以弥补现有技术缺陷。

通过上述分析，现有技术存在的问题及缺陷为：目前，关于研究促进动物机体饱和脂肪酸沉积以及现有技术中关于促进饱和脂肪酸沉积的微生物菌剂的研究较少。

解决以上问题及缺陷的难度为：该菌剂利用16S rDNA测序技术从宁乡猪肠道中筛选，并与血清脂质进行关联分析，筛选差异菌株进行实验。本实验难点在于16S rDNA测序技术的掌握与数据分析， Pearson关联分析等技术。

发明内容

1.要解决的技术问题

本发明的目的是为了解决现有技术中如何对16S rDNA测序技术的掌握与数据分析的问题，而提出的促进猪肌肉脂肪酸沉积的微生物菌剂及其分离方法与应用。

2.技术方案

为了实现上述目的，本发明采用了如下技术方案：

促进猪肌肉脂肪酸沉积的微生物菌剂，所述促进猪肌肉脂肪酸沉积的微生物菌剂为宁乡猪粪便分离的罗伊氏乳杆菌，保藏单位：中国典型微生物保藏中心(CCTCC)，保藏日期：2021年9月29日，保藏号：CCTCC M 20211240。

优选地，所述罗伊氏乳杆菌使用剂量为1×10^11CFU/头。

优选地，在制备促进肌肉脂肪酸沉积中的应用。

本发明中还提出了一种促进猪肌肉脂肪酸沉积的微生物菌剂的分离方法，包括以下步骤：

S1：取健康宁乡猪粪便0.1g，用5ml无菌PBS溶解、振荡混匀，梯度稀释至10

S2：选择稀释梯度合适的平板，挑取不同形态的单菌落，进行平板划线获得纯培养物，并利用扩增细菌16S rDNA基因通用引物为 27-FAGAGTTTGATCCTGGCTCAG和1492R-GGTTACCTTGTTACGACTT进行菌落PCR鉴定。

本发明中还提出了一种促进猪肌肉脂肪酸沉积的微生物菌剂药效验证的动物模型构建方法，包括以下步骤：

步骤1：选取体重为36.58±3.71kg，健康状况相似的DLY公猪 16头，分为2个组：对照组Cont(n＝8)，罗伊氏乳杆菌灌服组Lr(n＝8)；

步骤2：然后罗伊氏乳杆菌灌服组为每日上午9：00进行，灌服剂量为1×10^11CFU/头；

步骤3：使猪舍保持温度和湿度适宜，保证猪自由饮水和采食。

优选地，所述步骤1中DLY公猪的体重为36.58±3.71kg。

3.有益效果

相比于现有技术，本发明的优点在于：

(1)本发明中提供的促进猪肌肉脂肪酸沉积的微生物菌剂为罗伊氏乳杆菌，罗伊氏乳杆菌一定程度上可以促进瘦肉型猪肌肉脂肪酸在机体的沉积。实验结果表明，罗伊氏乳杆菌未显著增加猪的体重。

(2)本发明继续测定了背最长肌中中长链脂肪酸的含量，进一步探索罗伊氏乳杆菌对中长链脂肪酸的影响。与对照组相比较，罗伊氏乳杆菌组显著提高了猪背最长肌中总脂肪酸和饱和脂肪酸的含量 (P<0.05)。

附图说明

图1为本发明实施例提供的促进猪肌肉脂肪酸沉积的微生物菌剂的验证方法流程图；

图2为本发明实施例提供的罗伊氏乳杆菌促进猪肌肉脂肪酸沉积结果示意图。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。

实施例1：

促进猪肌肉脂肪酸沉积的微生物菌剂，促进猪肌肉脂肪酸沉积的微生物菌剂为宁乡猪粪便分离的罗伊氏乳杆菌，保藏单位：中国典型微生物保藏中心(CCTCC)，保藏日期：2021年9月29日，保藏号： CCTCC M 20211240，罗伊氏乳杆菌使用剂量为1×10^11CFU/头。

实施例二

其具有上述实施例的实施内容，其中，对于上述实施例的具体实施方式可参阅上述描述，此处的实施例不作重复详述；而在本申请实施例中，其与上述实施例的区别在于：

本发明中，促进猪肌肉脂肪酸沉积的微生物菌剂的分离方法，包括以下步骤：

S1：取健康宁乡猪粪便0.1g，用5ml无菌PBS溶解、振荡混匀，梯度稀释至10

S2：选择稀释梯度合适的平板，挑取不同形态的单菌落，进行平板划线获得纯培养物，并利用扩增细菌16S rDNA基因通用引物为 27-FAGAGTTTGATCCTGGCTCAG和1492R-GGTTACCTTGTTACGACTT进行菌落PCR鉴定。

实施例三

其具有上述实施例的实施内容，其中，对于上述实施例的具体实施方式可参阅上述描述，此处的实施例不作重复详述；而在本申请实施例中，其与上述实施例的区别在于：

本发明发现了一种能促进猪肌肉脂肪酸沉积的微生物菌剂-罗伊氏乳杆菌。

其中促进猪肌肉脂肪酸沉积的微生物菌剂药效验证的动物模型构建方法，包括以下步骤：

步骤1：选取体重为36.58±3.71kg，健康状况相似的DLY公猪16 头，分为2个组：对照组Cont(n＝8)和罗伊氏乳杆菌灌服组Lr(n＝8)；

步骤2：然后罗伊氏乳杆菌灌服组为每日上午9：00进行，灌服剂量为1×10^11CFU/头；

步骤3：使猪舍保持温度和湿度适宜，保证猪自由饮水和采食。

本发明中，由图2可知，罗伊氏乳杆菌未显著增加猪的体重，实验结果表明，罗伊氏乳杆菌未显著增加猪的体重。本发明继续测定了背最长肌中中长链脂肪酸的含量，进一步探索罗伊氏乳杆菌对中长链脂肪酸的影响。与对照组相比较，罗伊氏乳杆菌组显著提高了猪背最长肌中总脂肪酸和饱和脂肪酸的含量(P<0.05)。

本发明中，可以看出罗伊氏乳杆菌一定程度上可以促进瘦肉型猪脂肪酸在肌肉的沉积。

以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。

<110> 湖南农业大学

<120> 促进猪肌肉脂肪酸沉积的微生物菌剂及其分离方法与应用

<160> 1

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 3

<212> DNA

<213> pig

<400> 1

AGGCGGCTCC CTCCATAATG GTTAGGCCAC CGACTTTGGG CGTTACAAAC TCCCATGGTG 60

TGACGGGCGG TGTGTACAAG GCCCGGGAAC GTATTCACCG CGGCATGCTG ATCCGCGATT 120

ACTAGCGATT CCGACTTCGT GTAGGCGAGT TGCAGCCTAC AGTCCGAACT GAGAACGGCT 180

TTAAGAGATT AGCTTACTCT CGCGAGCTTG CGACTCGTTG TACCGTCCAT TGTAGCACGT 240

GTGTAGCCCA GGTCATAAGG GGCATGATGA TCTGACGTCG TCCCCACCTT CCTCCGGTTT 300

GTCACCGGCA GTCTCACTAG AGTGCCCAAC TTAATGCTGG CAACTAGTAA CAAGGGTTGC 360

GCTCGTTGCG GGACTTAACC CAACATCTCA CGACACGAGC TGACGACGAC CATGCACCAC 420

CTGTCATTGC GTCCCCGAAG GGAACGCCTT ATCTCTAAGG TTAGCGCAAG ATGTCAAGAC 480

CTGGTAAGGT TCTTCGCGTA GCTTCGAATT AAACCACATG CTCCACCGCT TGTGCGGGCC 540

CCCGTCAATT CCTTTGAGTT TCAACCTTGC GGTCGTACTC CCCAGGCGGA GTGCTTAATG 600

CGTTAGCTCC GGCACTGAAG GGCGGAAACC CTCCAACACC TAGCACTCAT CGTTTACGGC 660

ATGGACTACC AGGGTATCTA ATCCTGTTCG CTACCCATGC TTTCGAGCCT CAGCGTCAGT 720

TGCAGACCAG ACAGCCGCCT TCGCCACTGG TGTTCTTCCA TATATCTACG CATTCCACCG 780

CTACACATGG AGTTCCACTG TCCTCTTCTG CACTCAAGTC GCCCGGTTTC CGATGCACTT 840

CTTCGGTTAA GCCGAAGGCT TTCACATCAG ACCTAAGCAA CCGCCTGCGC TCGCTTTACG 900

CCCAATAAAT CCGGATAACG CTTGCCACCT ACGTATTACC GCGGCTGCTG GCACGTAGTT 960

AGCCGTGACT TTCTGGTTGG ATACCGTCAC TGCGTGAACA GTTACTCTCA CGCACGTTCT 1020

TCTCCAACAA CAGAGCTTTA CGAGCCGAAA CCCTTCTTCA CTCACGCGGT GTTGCTCCAT 1080

CAGGCTTGCG CCCATTGTGG AAGATTCCCT ACTGCTGCCT CCCGTAGGAG TATGGACCGT 1140

GTCTCAGTTC CATTGTGGCC GATCAGTCTC TCAACTCGGC TATGCATCAT CGCCTTGGTA 1200

AGCCGTTACC TTACCAACTA GCTAATGCAC CGCAGGTCCA TCCCAGAGTG ATAGCCAAAG 1260

CCATCTTTCA AACAAAAGCC ATGTGGCTTT TGTTGTTATG CGGTATTAGC ATCTGTTTCC 1320

AAATGTTATC CCCCGCTCCG GGGCAGGTTA CCTACGTGTT ACTCACCCGT CCGCCACTCA 1380

CTGGTGATCC ATCGTCAATC AGGTGCAAGC ACCATCAATC AGTTGGGCCA GTGCGTACGA 1440

CTGCA 1445