用于肽化合物或酰胺化合物的脱保护方法和在固相反应中的树脂脱除方法以及用于生产肽化合物的方法
文献发布时间：2023-06-19 11:39:06
[技术领域]
本发明涉及肽化合物或酰胺化合物的脱保护的方法和从在固相反应中的树脂脱除这样的化合物的方法，以及生产肽化合物的方法。
[背景技术]
肽是其中许多氨基酸连接在一起的分子。不仅对由生物体产生的肽的合成进行了广泛的研究，而且对具有人工设计的结构和所需功能的肽也进行了广泛的研究(非专利文献1)。
可以通过重复以下步骤来连接多个氨基酸而生产肽：(i)用缩合剂等活化N-末端受保护的、C末端未保护的氨基酸的羧基以提供活性酯，(ii)使该活性酯与N末端未保护的肽反应以提供通过该氨基酸伸长的肽，和(iii) 从伸长的肽中脱除N-末端的保护基(NPL2)。
肽生产方法大致分为固相方法和液相方法。固相方法是通过以下方式进行的：使氨基酸或其衍生物(受保护的氨基酸)或者其肽或其衍生物的C- 末端与含有氯三苯甲基、苄基等的固相合成用树脂如CTC树脂、Wang树脂或SASRIN树脂结合，并在用作亲核试剂的所得氨基酸或肽的氨基与用作亲电试剂的N-末端受保护的肽或氨基酸的羰基之间进行偶联反应。液相方法是通过在作为亲电试剂的N-末端受保护的氨基酸或肽的羰基与作为亲核试剂的氨基酸或肽的氨基之间的偶联反应来进行的。当这样的偶联反应可能导致氨基酸或肽侧链中的官能团发生不希望的转化时，必须事先将保护基引入到这些侧链中。可以在酸性条件下脱除的保护基如Boc、t-Bu 或三苯甲基通常用于保护氨基酸或肽的C-末端、氨基酸或肽的N-末端以及氨基酸或肽的侧链。在用于从肽结合的固相合成用树脂中解离肽的树脂脱除反应中，通常使用在酸性条件下可脱除的固相合成用树脂如CTC树脂、Wang树脂和SASRIN树脂(NPL 4)。
可以在酸性条件下脱除的保护基还包括3，5-二甲氧基苯基异丙氧基羰基(Ddz)、苄氧基羰基(Cbz)、苄基(Bn)和环己基(cHx)基团(NPL 4和NPL 5)。在它们的脱保护反应或树脂脱除反应的条件下，可能发生副反应，如肽中的酰胺键的断裂和氨基酸侧链中的官能团的意外转化，导致具有意外序列的副产物肽。因此，需要提供靶肽而不破坏肽主链的反应，如肽主链的酰胺键断裂反应和重排反应。
可以在酸性条件下脱除的上述保护基通常通过用盐酸、硫酸、甲磺酸或TFA处理而脱除(NPL 2，NPL 3和NPL 4)。TFA通常用于固相合成中的树脂脱除反应(NPL 6)。然而，已经描述了，即使在酸性条件下，使用 TFA(它们之中最温和的酸)，酰胺键也可能会断裂(NPL7)。
还已经描述了通过在稀释的TFA条件下进行反应和在温和条件下进行Boc脱保护反应来尝试解决酰胺键断裂的问题；然而，该问题在两种情况下都没有得到解决(NPL 8，PTL 1)。还已经报道了使用较低酸性的TFE 从受保护的氨基酸中脱除保护基的方法(NPL5，PTL 1)。在这些文献中，反应转化率低，并且因此有必要添加更多的酸或在更严格的反应条件下如升高的反应温度下进行反应以推进反应。然而，当将包括添加酸或升高反应温度的条件在内的反应条件应用于肽时，存在肽的主链可能被破坏的问题。实际上，当在TFE中使Boc-Leu-MeLeu-Thr(OBn)-MeGly-O烯丙基与氯化氢反应以进行Boc-脱保护反应时，在Boc脱保护反应完成之前观察到主链断裂。
还报道了，通过在低温条件下进行反应并在副反应发生之前停止反应而可以成功地抑制酰胺键断裂(NPL 9)。然而，此技术需要严格控制反应时间，并且容易推定这样的控制在批量生产中具有挑战性，其中难以在短时间内停止反应。
作为在酸性条件下的脱保护方法，已经尝试通过添加阳离子清除剂来抑制侧链与在Boc或t-Bu基团的脱除中同时产生的t-Bu阳离子之间的副反应(NPL 10)。
在这种情况下，利用含硫的添加剂如二甲基硫醚和硫代苯甲醚来进行在酸性条件下的脱保护，以清除衍生自t-Bu基团的t-Bu阳离子，但据报道这会引起作为副反应的酰胺键断裂，导致收率和纯度降低(NPL 7)。
还已经报道了允许硫代苯甲醚和TfOH在TFA溶液中起作用或允许硫代苯甲醚和三甲基甲硅烷基溴或三氟甲磺酸三甲基硅酯在TFA溶液中起作用的方法(NPL 12)。
然而，以二甲基硫醚和硫代苯甲醚为代表的许多含硫添加剂具有令人讨厌的气味，并且因此它们对制造工人的影响是一个问题。另外，这样的添加剂的脱除需要通过柱色谱的脱除步骤也是有问题的，这对于大规模生产是不合适的。
还已经报道了，即使当使用水作为阳离子清除剂时，肽链断裂也增加 (NPL 11)。
已经报道了使用含硅添加剂代替含硫添加剂作为阳离子清除剂的脱保护方法，其中含有酰胺键的N-Boc保护的化合物用阳离子清除剂如三异丙基硅烷(iPr
如上所述，当在酸性条件下进行固相合成中的脱保护反应和树脂脱除反应时，它们不仅会涉及所需的脱保护或树脂脱除反应，而且还会破坏肽主链如构成肽主链的酰胺键的断裂以及氨基酸侧链的官能团向主链的重排。已知由于这样的主链破坏所引起的副产物的产生降低了目标产物的收率和纯度，并且成为有效合成肽的一个问题。
同时，还已经报道了肽的结构特征与酰胺键的稳定性或可破坏性有关。
例如，已知酰胺键的扭曲引起酰胺键的酸不稳定性增大(NPL 15和 NPL 16)。
此外，除了键扭曲之外，在肽酰胺键的情况下，氨基酸侧链的类型、氮原子的取代模式、肽中的氨基酸残基的数目以及氨基酸序列影响分子内氢键的模式和肽的稳定构象。取决于这样的构象变化，羰基氧可能变得更加碱性并且易于质子化(NPL 18和NPL 19)。已知在一些情况下酰胺键因
还已经报道了，含有N-Me氨基酸(其是具有甲基化的氮原子的氨基酸) 的肽可以在酸性条件下经历逐步的酰胺键断裂(NPL 11，NPL 17和NPL 20)。此外，已知的是，当在C末端具有N-Me氨基酸的肽经历TFA酸性条件下时，该肽的第一个残基和第二个残基之间的酰胺键可能会断裂，从而导致缺少C-末端残基的副产物肽(NPL 21)。因此，已知的是，在N-Me氨基酸中含有N-Me基团的酰胺键容易断裂。
另外，已知的是，具有两个以上的连续N-Me氨基酸残基的序列的肽通常在酸中是不稳定的并且在固相合成中的树脂脱除反应期间经历酰胺键断裂(NPL 11)。因此，已知的是，在N-Me氨基酸中含有N-Me基团的酰胺键和/或在N-Me氨基酸中含有羰基基团的酰胺键容易断裂。
含有Asp或Gln的肽也以序列依赖性方式对酸是不稳定的(NPL 22和 NPL 23)。例如，已知的是，当用酸如氟化氢和甲磺酸处理具有Asp的肽序列时，其侧链的羰基受主链酰胺的氮原子亲核性攻击，从而产生作为副产物的天冬酰胺(aspartimide)(NPL 23)。因此，已知的是，即使氨基酸是 N-未取代的，酰胺键也容易在含有具有特定侧链的氨基酸的部位断裂。
当此天冬酰胺中间体发生水解时，产生具有改变的酰胺结构的重排副产物和主链断裂的副产物，由此降低了目标产物的收率和纯度。当含有诸如Asp(OBn)-Gly、Asp(OBn)-Ser、Asp(OBn)-Thr、Asp(OBn)-Asn或 Asp(OBn)-Gln的序列的肽在酸性条件下脱保护时，天冬酰胺的形成是显著的。例如，已知的是，当Boc-Phe-Asp(OBn)-Asn-Ala-OBn通过甲磺酸脱保护时，大部分转化为天冬酰胺，并且不具有所需的氨基酸序列，即发生主链破坏性反应(NPL 24)。
还已知的是，当使序列中含有Asp-Pro的肽衍生物经历酸性条件如三氟乙酸、氢氟酸、甲酸和乙酸时，Asp的侧链与Pro的氮原子反应，如在上述副反应中那样，并且因此酰胺键断裂(NPL 25和NPL 26)。
已经报道了一些用于避免在脱保护反应中的副反应的方法，这些副反应是由酰胺键对酸的氨基酸序列依赖性不稳定性所引起的。
例如，已知一种抑制在天冬酰胺衍生物的脱保护和树脂脱除反应中形成天冬酰胺的方法，其中天冬氨酸的侧链的羧基用环己基保护，使得主- 链酰胺的氮原子在用于保护感兴趣基团的脱保护条件下不会进行亲核性攻击。已经报道了，与使用苄基保护基作为侧链保护基的情况相比，此方法显著抑制了天冬酰胺的形成(NPL 27)。然而，随后环己基的脱除需要高腐蚀性、高酸性条件如氢氟酸，并且容易推测该反应和后处理均不能方便地进行。
还已知一种在硫代苯甲醚的存在下用1M三甲基甲硅烷基溴/TFA进行处理的方法(NPL 28)。然而，这种条件是不利的，因为它需要使用溶剂量的TFA并且使用硫代苯甲醚，这如上所述对于大规模生产是不适合的。此外，已经描述了当使用三氟甲磺酸三甲基硅酯代替三甲基甲硅烷基溴时副产物天冬酰胺显著增加，从而表明三甲基甲硅烷基溴优于三氟甲磺酸三甲基硅酯。
有一种已知的方法，其中在叔胺的存在下和在三氟甲磺酸三甲基硅酯或TBDMSOTf的存在下进行肽的Boc脱除反应和酯的t-Bu脱除反应。一个已知的实例是使用2，6-二甲基吡啶作为叔胺并在存在其他官能团的情况下在TMSOTf/2，6-二甲基吡啶条件下进行N-Boc脱除，由此选择性地脱除 Boc基团(NPL 29，NPL 30和NPL 31)。在另一个已知的实例中，用于Boc 脱除和从固相合成用树脂的脱除的反应(其可以在使用TFA的酸性条件下同时发生)在三氟甲磺酸三甲基硅酯/2，6-二甲基吡啶条件下进行，以选择性地实现Boc脱除反应(NPL32和33)。这些方法也已经应用于具有酰胺键的化合物，但并不意图避免破坏酰胺键。
已经在三氟甲磺酸三甲基硅酯/2，6-二甲基吡啶条件下进行了在TBS 和TIPS基团以及硫缩醛的存在下的t-Bu酯的选择性脱保护(NPL 34)。还已经报道了使用此技术从肽t-Bu酯中脱除t-Bu。例如，已知的是，在 TMSOTf/2，6-二甲基吡啶条件下进行t-Bu酯的脱保护反应(NPL 35和NPL 36)。然而，这种情况也不意图避免酰胺键断裂。
已知的是，当将三氟甲磺酸三甲基硅酯/2，6-二甲基吡啶用于天然肽化合物的全合成中的N-Boc脱除反应时(其在用质子酸处理后提供复杂的混合物)，这些反应优先产生目标产物，同时抑制副产物的产生(NPL37)。然而，没有详细描述其中提到的副反应，并且这些反应条件根本没有考察对于一般通用性和避免酰胺键破坏的可能性。此外，需要大量过量的试剂(20 当量以上)，因而从适用底物和制造成本的通用性的角度来看存在问题。在这种情况下，仅仅将三氟甲磺酸三甲基硅酯/2，6-二甲基吡啶应用于具有酰胺键的化合物，并且其没有提及是否由酰胺键断裂引起副反应。
如上所述，使用以三氟乙酸为代表的布朗斯台德酸在酸性条件下的处理通常用于从加载有肽的树脂上断裂肽的反应(树脂脱除反应)，以在固相方法中提供伸长的肽，并且在固相方法和液相方法二者中，用于在N-末端、 C-末端和氨基酸侧链保护基之中脱除在酸性条件下可脱除的保护基的反应。还有已知的实例，其中在路易斯酸的存在下进行脱保护反应。然而，尽管已知的事实是，用常规方法处理含有由N-Me氨基酸所代表的非天然氨基酸的肽以进行树脂脱除反应或脱保护反应导致意图的反应，并伴随进行肽的主链断裂或重排(主链破坏)，并且需要大量试剂，还不清楚解决这些问题的方案(NPL 20，NPL22和NPL 37)。
特别地，由于当使用常规合成方法时，对非天然人工肽的研究经常遇到意想不到的副反应，因此开发工业上有效合成非天然人工肽及其衍生物的技术是极其重要的。然而，在生产这样的含非天然氨基酸的肽方面，仅已经使用了制备由天然氨基酸组成的常规肽的方法。没有已知的关注并解决在含有非天然氨基酸的肽的生产的情况下的问题的有效合成方法，特别是在脱保护或树脂脱除反应中引起的主链破坏的具体问题的有效合成方法。
[引用列表]
[专利文献]
[PTL 1]WO 2014/033466
[非专利文献]
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[发明内容]
[技术问题]
本发明人使含有非天然氨基酸的肽化合物经历与在用由TFA所代表的酸的处理中的相同条件，TFA通常用于从氨基酸或肽中脱除保护基或用于从在固相反应中的树脂上断裂肽，这如在常规肽合成中通常使用的那样。作为结果，本发明人发现，肽化合物在主链上具有显著破坏如酰胺键断裂或重排，并且没有以预期的序列有效地获得，从而导致难以制造这些肽化合物。具体地，本发明人发现，在酸性条件下，主链易于在含有N- 取代的(例如N-烷基化的)氨基酸的部分的酰胺键处(对于含有这样的氨基酸的肽化合物)或在含有天冬氨酸的部分的酰胺键处被破坏。除了这些问题之外，本发明人还发现了许多在常规酸性条件下引起主链破坏的氨基酸序列。本发明的一个目的是提供用于脱除在酸性条件下可脱除的保护基的反应和脱除在固相反应中的树脂的反应的技术，同时抑制诸如肽化合物中含有的酰胺键的断裂或重排的副反应，以及提供在简单操作中以高收率和纯度获得脱保护的和/或树脂脱除的肽化合物的方法。
[解决问题的方案]
在抑制诸如含有N-取代的(例如，N-烷基化的)氨基酸的肽化合物中的酰胺键的断裂或重排的副反应的同时，本发明人主要对脱除可在酸性条件下脱除的保护基或脱除在固相反应中的树脂的反应进行了深入研究。本发明人考察了在亲电物种清除剂的存在下与甲硅烷基化合物发生反应的技术，并且发现含有酸不稳定的酰胺键的肽化合物用甲硅烷基化合物或酸且结合亲电物种清除剂情况下的处理能够在不涉及关注的主链破坏的情况下脱除保护基和/或树脂，由此以高收率和纯度得到脱保护的和/或树脂脱除的目标产物。对于用于这样的脱保护和/或树脂脱除的试剂，本发明人还发现，化合物如亚氨酸酯(imidate)(式2)、酰胺(式3)、烯酮缩醛(式4)、烯酮烷氧基半缩醛胺(式4)、烯醇醚(式4)、烯醇酯(式4)、亚胺(式5)、胺(式 6)、二胺(式7)、二烷基碳二亚胺(式8)、脲(式9)或氨基甲酸酯(式10)可以与适当的甲硅烷基化合物或酸组合用作亲电物种清除剂。与常规技术相比，本发明可以在不涉及酰胺键断裂的情况下以更高的收率和纯度、更有效地提供目标肽化合物。
在非限制性的具体实施方案中，本发明包括以下各项。
[1]一种生产肽化合物的方法，所述肽化合物中的通过甲硅烷化剂可脱除的保护基已经被脱除，所述方法包括以下步骤：使包含天然氨基酸残基和/或氨基酸类似物残基的起始肽化合物与甲硅烷基化剂在溶剂中接触，并由此从所述起始肽化合物中脱除所述保护基，
其中所述甲硅烷基化剂通过混合甲硅烷基化合物或酸与亲电物种清除剂来制备，
其中所述起始肽化合物包含至少一个通过甲硅烷基化剂可脱除的保护基，并且
其中所述起始肽化合物包含至少一个N-取代的氨基酸残基。
[2]一种生产肽化合物的方法，所述肽化合物中通过甲硅烷基化剂可脱除的固相合成用树脂已经被脱除，所述方法包括以下步骤：使包含天然氨基酸残基和/或氨基酸类似物残基的起始肽化合物与甲硅烷基化剂在溶剂中接触，并由此从所述起始肽化合物中脱除所述固相合成用树脂，
其中所述甲硅烷基化剂通过混合甲硅烷基化合物或酸与亲电物种清除剂来制备，
其中所述起始肽化合物连接至所述可脱除的固相合成用树脂，并且
其中所述起始肽化合物包含至少一个N-取代的氨基酸残基。
[3]根据[1]或[2]所述的方法，其中所述起始肽化合物包含至少一种其中至少两个氨基酸残基彼此连接的结构，其中所述结构由以下通式(I)表示：
其中
R
R
但是不包括以下情形：当R
(a)R
(b)R
(c)R
R
R
R
但是不包括以下情形：当R
(a)R
(b)R
(c)R
R
R
R
RES是固相合成用树脂；
R
R
PG
PG
PG
PG
[4]根据[1]至[3]中任一项所述的方法，其中所述起始肽化合物包含在 C-末端处的其中至少两个氨基酸残基彼此连接的结构，其中所述结构由以下通式(II)表示：
其中
R
*表示连接点；
R
R
但是不包括以下情形：当R
(a)R
(b)R
(c)R
R
R
R
RES是固相合成用树脂；
n是0、1或2；
R
R
m是0、1或2；
R
R
PG
PG
PG
PG
[5]一种生产酰胺化合物的方法，所述酰胺化合物中的通过甲硅烷基化剂可脱除的保护基已经被脱除，所述方法包括以下步骤：使起始酰胺化合物与甲硅烷基化剂在溶剂中接触，并由此从所述起始酰胺化合物中脱除所述保护基，
其中所述甲硅烷基化剂通过混合甲硅烷基化合物或酸与亲电物种清除剂来制备，
其中所述起始酰胺化合物由以下通式(II)表示：
其中
R
R
RES是固相合成用树脂；
n是0、1或2；
R
R
m是0、1或2；
R
PG
PG
其中所述起始酰胺化合物包含至少一个通过甲硅烷基化剂可脱除的保护基。
[6]一种生产酰胺化合物的方法，所述酰胺化合物中的固相合成用树脂已经被脱除，所述方法包括以下步骤：使起始酰胺化合物与所述甲硅烷基化剂在溶剂中接触，并由此从所述固相合成用树脂中脱除所述起始酰胺化合物，
其中所述甲硅烷基化剂通过混合甲硅烷基化合物或酸与亲电物种清除剂来制备，并且
其中所述起始酰胺化合物由以下通式(II)表示：
其中
R
R
RES是固相合成用树脂，其中R
RES是固相合成用树脂；
n是0、1或2；
R
R
m是0、1或2；
R
PG
PG
[7]根据[1]和[3]至[5]中任一项所述的方法，其中所述可脱除的保护基选自由以下各项组成的组：t-Bu，三苯基甲基，2-(三甲基甲硅烷基)-乙基， Boc，Teoc，Cbz，甲氧基羰基，四氢吡喃基，1-乙氧基乙基，甲氧基三苯甲基和枯烯基。
[8]根据[1]至[7]中任一项所述的方法，其中所述甲硅烷基化合物由以下式1表示：
其中R
[9]根据[8]所述的方法，其中所述甲硅烷基化合物选自由以下各项组成的组：TMSOTf，TESOTf，TBSOTf，TIPSOTf，TBDPSOTf，TTMSOTf， TMSCl，TMSBr，TMSOClO
[10]根据[1]至[7]中任一项所述的方法，其中所述酸由HX表示，其中X选自由以下各项组成的组：-OTf，-OClO
[11]根据[1]至[10]中任一项所述的方法，其中所述亲电物种清除剂选自由以下式(2)至(10)组成的组：
其中在式2中，
R
R
R
其中在式3中，
R
R
R
其中在式4中，
(a-1)R
(a-2)R
(b-1)R
(b-2)R
(c-1)R
(c-2)R
(d-1)R
(d-2)R
(e-1)R
(e-2)R
(f-1)R
(f-2)R
其中在式5中，
R
其中在式6中，
R
R
R
其中在式7中，
X是单键或碳原子，
其中当X是单键时，R
当X是碳原子时，R
其中在式8中，
R
其中在式9中，
R
其中在式10中，
R
[12]根据[11]所述的方法，其中所述亲电物种清除剂选自由以下各项组成的组：N，O-双(三甲基甲硅烷基)乙酰胺，N，O-双(三甲基甲硅烷基)三氟乙酰胺，N-甲基-N-三甲基甲硅烷基乙酰胺，N-甲基-N-三甲基甲硅烷基三氟乙酰胺，二甲基乙烯酮甲基三甲基甲硅烷基缩醛，异丙烯基氧基三甲基硅烷，2，2，4，4-四甲基戊酮亚胺，1，1，1，3，3，3-六甲基二硅氮烷(HMDS)，N- 三甲基甲硅烷基吗啉，N-三甲基甲硅烷基二乙胺和N-叔丁基三甲基甲硅烷基胺。
[13]根据[1]至[9]和[11]至[12]中任一项所述的方法，其中每一当量的要脱除的保护基或每一当量的要脱除的树脂，混合1至5当量的所述甲硅烷基化合物和1至10当量的所述亲电物种清除剂。
[14]根据[1]至[12]中任一项所述的方法，其中每一当量的要脱除的保护基或每一当量的要脱除的树脂，混合0.1至0.5当量的所述甲硅烷基化合物或酸，
其中所述亲电物种清除剂选自由以下各项组成的组：N，O-双(三甲基甲硅烷基)乙酰胺，N，O-双(三甲基甲硅烷基)三氟乙酰胺，N-甲基-N-三甲基甲硅烷基乙酰胺，N-甲基-N-三甲基甲硅烷基三氟乙酰胺，二甲基乙烯酮甲基三甲基甲硅烷基缩醛和异丙烯基氧基三甲基硅烷，
其中所述甲硅烷基化合物选自由以下各项组成的组：TMSOTf， TESOTf，TBSOTf，TIPSOTf，TBDPSOTf，TTMSOTf，TMSCl，TMSBr 和TMSOClO
其中所述酸由HX表示，其中X选自由以下各项组成的组：-OTf， -OClO
[15]根据[1]至[14]中任一项所述的方法，其中所述起始肽化合物包含 1至30个氨基酸残基并且是直链的(linear)或环状的。
[16]根据[1]至[4]和[6]至[15]中任一项所述的方法，其中所述固相合成用树脂是CTC树脂、Wang树脂或SASRIN树脂。
[17]根据[1]至[16]中任一项所述的方法，其中所述方法包括将所述起始肽化合物与所述溶剂混合，然后与所述亲电物种清除剂混合，并且随后与所述甲硅烷基化合物或酸混合。
[18]根据[1]至[17]中任一项所述的方法，其中所述溶剂选自乙酸乙酯、乙酸异丙酯、2-甲基四氢呋喃、四氢呋喃、二乙醚、甲基叔丁基醚、二氯甲烷、1，2-二氯乙烷、甲苯和乙腈。
[19]一种由以下通式(A)表示的酰胺化合物或其盐：
其中
R
R
R
[20]根据[19]所述的酰胺化合物或其盐，其中所述酰胺化合物选自由以下各项组成的组：
(3-1)3-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)(甲基)氨基)-4-(二甲基氨基)-4-氧代丁酸，
(3-2)3-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)(甲基)氨基)-4-(二甲基氨基)-4-氧代丁酸烯丙酯，
(3-3)3-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)(甲基)氨基)-4-(二甲基氨基)-4-氧代丁酸叔丁酯，
(3-4)3-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)(甲基)氨基)-4-(二甲基氨基)-4-氧代丁酸苄酯，
(3-5)3-((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)-4-(二甲基氨基)-4-氧代丁酸，
(3-6)3-((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)-4-(二甲基氨基)-4-氧代丁酸烯丙酯，
(3-7)3-((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)-4-(二甲基氨基)-4-氧代丁酸叔丁酯，
(3-8)3-((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)-4-(二甲基氨基)-4-氧代丁酸苄酯，
(3-9)3-(((苄氧基)羰基)(甲基)氨基)-4-(二甲基氨基)-4-氧代丁酸，
(3-10)3-(((苄氧基)羰基)(甲基)氨基)-4-(二甲基氨基)-4-氧代丁酸烯丙酯，
(3-11)3-(((苄氧基)羰基)(甲基)氨基)-4-(二甲基氨基)-4-氧代丁酸叔丁酯，
(3-12)3-(((苄氧基)羰基)(甲基)氨基)-4-(二甲基氨基)-4-氧代丁酸苄酯，
(3-13)3-(((烯丙氧基)羰基)(甲基)氨基)-4-(二甲基氨基)-4-氧代丁酸，
(3-14)3-(((烯丙氧基)羰基)(甲基)氨基)-4-(二甲基氨基)-4-氧代丁酸烯丙酯，
(3-15)3-(((烯丙氧基)羰基)(甲基)氨基)-4-(二甲基氨基)-4-氧代丁酸叔丁酯，
(3-16)3-(((烯丙氧基)羰基)(甲基)氨基)-4-(二甲基氨基)-4-氧代丁酸苄酯，
(3-17)4-(二甲基氨基)-3-(甲基((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)羰基)氨基)-4-氧代丁酸，
(3-18)4-(二甲基氨基)-3-(甲基((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)羰基)氨基)-4-氧代丁酸烯丙酯，
(3-19)4-(二甲基氨基)-3-(甲基((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)羰基)氨基)-4-氧代丁酸叔丁酯，
(3-20)4-(二甲基氨基)-3-(甲基((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)羰基)氨基)-4-氧代丁酸苄酯，
(2-1)3-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)(甲基)氨基)-4-吗啉基-4-氧代丁酸，
(2-2)3-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)(甲基)氨基)-4-吗啉基-4-氧代丁酸烯丙酯，
(2-3)3-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)(甲基)氨基)-4-吗啉基-4-氧代丁酸叔丁酯，
(2-4)3-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)(甲基)氨基)-4-吗啉基-4-氧代丁酸苄酯，
(2-5)3-((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)-4-吗啉基-4-氧代丁酸，
(2-6)3-((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)-4-吗啉基-4-氧代丁酸烯丙酯，
(2-7)3-((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)-4-吗啉基-4-氧代丁酸叔丁酯，
(2-8)3-((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)-4-吗啉基-4-氧代丁酸苄酯，
(2-9)3-(((苄氧基)羰基)(甲基)氨基)-4-吗啉基-4-氧代丁酸，
(2-10)3-(((苄氧基)羰基)(甲基)氨基)-4-吗啉基-4-氧代丁酸烯丙酯，
(2-11)3-(((苄氧基)羰基)(甲基)氨基)-4-吗啉基-4-氧代丁酸叔丁酯，
(2-12)3-(((苄氧基)羰基)(甲基)氨基)-4-吗啉基-4-氧代丁酸苄酯，
(2-13)3-(((烯丙氧基)羰基)(甲基)氨基)-4-吗啉基-4-氧代丁酸，
(2-14)3-(((烯丙氧基)羰基)(甲基)氨基)-4-吗啉基-4-氧代丁酸烯丙酯，
(2-15)3-(((烯丙氧基)羰基)(甲基)氨基)-4-吗啉基-4-氧代丁酸叔丁酯，
(2-16)3-(((烯丙氧基)羰基)(甲基)氨基)-4-吗啉基-4-氧代丁酸苄酯，
(2-17)3-(甲基((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)羰基)氨基)-4-吗啉基-4-氧代丁酸，
(2-18)3-(甲基((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)羰基)氨基)-4-吗啉基-4-氧代丁酸烯丙酯，
(2-19)3-(甲基((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)羰基)氨基)-4-吗啉基-4-氧代丁酸叔丁酯，
(2-20)3-(甲基((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)羰基)氨基)-4-吗啉基-4-氧代丁酸苄酯，
(4-1)3-(甲基氨基)-4-氧代-4-(哌啶-1-基)丁酸，
(4-2)3-(甲基氨基)-4-氧代-4-(哌啶-1-基)丁酸烯丙酯，
(4-3)3-(甲基氨基)-4-氧代-4-(哌啶-1-基)丁酸叔丁酯，
(4-4)3-(甲基氨基)-4-氧代-4-(哌啶-1-基)丁酸苄酯，
(4-5)3-(甲基氨基)-4-吗啉基-4-氧代丁酸，
(4-6)3-(甲基氨基)-4-吗啉基-4-氧代丁酸烯丙酯，
(4-7)3-(甲基氨基)-4-吗啉基-4-氧代丁酸叔丁酯，
(4-8)3-(甲基氨基)-4-吗啉基-4-氧代丁酸苄酯，
(4-9)4-(二甲基氨基)-3-(甲基氨基)-4-氧代丁酸，
(4-10)4-(二甲基氨基)-3-(甲基氨基)-4-氧代丁酸烯丙酯，
(4-11)4-(二甲基氨基)-3-(甲基氨基)-4-氧代丁酸叔丁酯，
(4-12)4-(二甲基氨基)-3-(甲基氨基)-4-氧代丁酸苄酯，
(1-1)3-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)(甲基)氨基)-4-氧代-4-(哌啶-1-基) 丁酸，
(1-2)3-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)(甲基)氨基)-4-氧代-4-(哌啶-1-基) 丁酸烯丙酯，
(1-3)3-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)(甲基)氨基)-4-氧代-4-(哌啶-1-基) 丁酸叔丁酯，
(1-4)3-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)(甲基)氨基)-4-氧代-4-(哌啶-1-基) 丁酸苄酯，
(1-5)3-((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)-4-氧代-4-(哌啶-1-基)丁酸，
(1-6)3-((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)-4-氧代-4-(哌啶-1-基)丁酸烯丙酯，
(1-7)3-((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)-4-氧代-4-(哌啶-1-基)丁酸叔丁酯，
(1-8)3-((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)-4-氧代-4-(哌啶-1-基)丁酸苄酯，
(1-9)3-(((苄氧基)羰基)(甲基)氨基)-4-氧代-4-(哌啶-1-基)丁酸，
(1-10)3-(((苄氧基)羰基)(甲基)氨基)-4-氧代-4-(哌啶-1-基)丁酸烯丙酯，
(1-11)3-(((苄氧基)羰基)(甲基)氨基)-4-氧代-4-(哌啶-1-基)丁酸叔丁酯，
(1-12)3-(((苄氧基)羰基)(甲基)氨基)-4-氧代-4-(哌啶-1-基)丁酸苄酯，
(1-13)3-(((烯丙氧基)羰基)(甲基)氨基)-4-氧代-4-(哌啶-1-基)丁酸，
(1-14)3-(((烯丙氧基)羰基)(甲基)氨基)-4-氧代-4-(哌啶-1-基)丁酸烯丙酯，
(1-15)3-(((烯丙氧基)羰基)(甲基)氨基)-4-氧代-4-(哌啶-1-基)丁酸叔丁酯，
(1-16)3-(((烯丙氧基)羰基)(甲基)氨基)-4-氧代-4-(哌啶-1-基)丁酸苄酯，
(1-17)3-(甲基((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)羰基)氨基)-4-氧代-4-(哌啶 -1-基)丁酸，
(1-18)3-(甲基((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)羰基)氨基)-4-氧代-4-(哌啶 -1-基)丁酸烯丙酯，
(1-19)3-(甲基((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)羰基)氨基)-4-氧代-4-(哌啶 -1-基)丁酸叔丁酯，和
(1-20)3-(甲基((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)羰基)氨基)-4-氧代-4-(哌啶 -1-基)丁酸苄酯。
[21]一种生产肽化合物的方法，所述肽化合物中的通过甲硅烷基化剂可脱除的保护基已经被脱除，所述方法包括以下步骤：使包含天然氨基酸残基和/或氨基酸类似物残基的起始肽化合物与甲硅烷基化剂在溶剂中接触，并由此从所述起始肽化合物中脱除所述保护基，
其中所述甲硅烷基化剂通过混合甲硅烷基化合物或酸与亲电物种清除剂来制备，
其中所述起始肽化合物包含其中两个氨基酸残基彼此连接的结构，其中所述结构由以下通式(I)表示：
其中
R
R
但是不包括以下情形：当R
(a)R
(b)R
(c)R
R
R
R
但是不包括以下情形：当R
(a)R
(b)R
(c)R
R
R
R
RES是固相合成用树脂；
R
R
PG
PG
PG
PG
其中所述起始肽化合物任选地包含额外的天然氨基酸残基和/或氨基酸类似物残基，并且
其中所述起始肽化合物包含至少一个通过甲硅烷基化剂可脱除的保护基。
[22]一种生产肽化合物的方法，所述肽化合物中的固相合成用树脂已经被脱除，所述方法包括以下步骤：使包含天然氨基酸残基和/或氨基酸类似物残基的起始肽化合物与甲硅烷基化剂在溶剂中接触，并由此从所述固相合成用树脂中脱除所述起始肽化合物，
其中所述甲硅烷基化剂通过混合甲硅烷基化合物或酸与亲电物种清除剂来制备，
其中所述起始肽化合物包含其中两个氨基酸残基彼此连接的结构，其中所述结构由以下通式(I)表示：
其中
R
R
但是不包括以下情形：当R
(a)R
(b)R
(c)R
R
R
R
但是不包括以下情形：当R
(a)R
(b)R
(c)R
R
R
R
RES是固相合成用树脂；
R
R
PG
PG
PG
PG
其中所述起始肽化合物任选地包含额外的天然氨基酸残基和/或氨基酸类似物残基，并且
其中所述起始肽化合物包含至少一个与所述固相合成用树脂结合的氨基酸残基。
[23]一种生产肽或酰胺化合物的方法，所述肽或酰胺化合物中的通过甲硅烷基化剂可脱除的保护基已经被脱除，所述方法包括以下步骤：使包含天然氨基酸残基和/或氨基酸类似物残基的起始肽或酰胺化合物与甲硅烷基化剂在溶剂中接触，并由此从所述起始肽或酰胺化合物中脱除所述保护基，
其中所述甲硅烷基化剂通过混合甲硅烷基化合物或酸与亲电物种清除剂来制备，
其中所述起始肽或酰胺化合物包含在C-末端处的氨基酸残基或其中两个氨基酸残基彼此连接的结构，其中所述氨基酸残基或结构由通式(II) 表示：
其中
R
*表示连接点；
R
R
但是不包括以下情形：当R
(a)R
(b)R
(c)R
R
R
R
RES是固相合成用树脂；
n是0、1或2；
R
R
m是0、1或2；
R
R
PG
PG
PG
PG
其中所述起始肽化合物任选地包含额外的天然氨基酸残基和/或氨基酸类似物残基，并且
其中所述起始肽或酰胺化合物包含至少一个通过甲硅烷基化剂可脱除的保护基。
[24]一种生产肽或酰胺化合物的方法，所述肽或酰胺化合物中的固相合成用树脂已经被脱除，所述方法包括以下步骤：使包含天然氨基酸残基和/或氨基酸类似物残基的起始肽或酰胺化合物与甲硅烷基化剂在溶剂中接触，并由此从所述固相合成用树脂中脱除所述起始肽或酰胺化合物，
其中所述甲硅烷基化剂通过混合甲硅烷基化合物或酸与亲电物种清除剂来制备，
其中所述起始肽或酰胺化合物包含在C-末端处的氨基酸残基或其中两个氨基酸残基彼此连接的结构，其中所述氨基酸残基或结构由以下通式 (II)表示：
其中
R
*表示连接点；
R
R
但是不包括以下情形：当R
(a)R
(b)R
(c)R
R
R
R
RES是固相合成用树脂，其中R
RES是固相合成用树脂；
n是0、1或2；
R
R
m是0、1或2；
R
R
PG
PG
PG
PG
其中所述起始肽化合物任选地包含额外的天然氨基酸残基和/或氨基酸类似物残基。
[25]一种用于脱除保护基的脱保护剂，其包括甲硅烷基化合物或酸以及亲电物种清除剂。
[26]一种用于从在固相反应中的树脂断裂肽化合物的树脂脱除剂，其包括甲硅烷基化合物或酸以及亲电物种清除剂。
[发明效果]
本发明相对于已知的方法是有利的，因为不使用大量的容易破坏酰胺键的布朗斯台德酸，可以减少试剂的当量，所使用的试剂可以容易地除去，并且在后续步骤中的反应不受影响。例如，2，6-二甲基吡啶具有高沸点 (144℃)并且因此很少蒸发。尽管2，6-二甲基吡啶是碱性化合物并且因此可以被酸除去，但是当目标化合物为肽化合物时，在酸性条件下除去过量的 2，6-二甲基吡啶是效率低下的，因为产物是具有碱性氨基基团的化合物。当前一步骤中使用的2，6-二甲基吡啶在脱保护反应后仍保留在缩合反应 (伸长酰胺键的反应)中时，存在的问题是缩合剂仍然与残余的2，6-二甲基吡啶发生反应，或者由于在缩合反应期间碱的存在使得缩合反应仍无法在所需条件下进行。相反，例如，本发明的甲硅烷基胺比常规使用的2，6-二甲基吡啶更有方便使用，因为甲硅烷基胺在反应后通过用水处理而被水解并转化为高度水溶性的化合物，其可以很容易地被除去，使得衍生自这样的甲硅烷基胺的试剂可以通过用水溶液洗涤而容易地被除去，并且不影响在随后步骤中的肽伸长。
在用作亲电物种清除剂的化合物如亚氨酸酯(式2)、酰胺(式3)、烯酮缩醛(式4)、烯酮烷氧基半缩醛胺(式4)、烯醇醚(式4)、烯醇酯(式4)、亚胺(式5)、胺(式6)、二胺(式7)、二烷基碳二亚胺(式8)、脲(式9)或氨基甲酸酯(式10)之中，亚氨酸酯(式2)、酰胺(式3)、烯酮缩醛(式4)，烯酮烷氧基半缩醛胺(式4)、烯醇醚(式4)、烯醇酯(式4)或亚胺(式5)可以通过反应后的温和水解处理而转化为可以容易地被除去的低沸点化合物。因此，与过量的2，6-二甲基吡啶相比，用于反应的过量试剂可以显著更容易地被除去。不仅酰胺化合物(式3)而且亚氨酸酯通过反应后的温和水解处理被转化为易于被除去的化合物，并且因此不会影响后续步骤。特征在于，除了传统上众所周知的叔胺之外，用作亲电物种清除剂的胺也可以是仲胺，并且这样的胺可以实现脱保护同时抑制对酰胺键的破坏。
在本发明的一个方面，可以脱除肽化合物的N-Boc基团，同时抑制对该肽化合物的主链的破坏。在本发明的另一个方面，在肽化合物的主链 C-末端处和侧链中，可以脱除t-Bu酯的t-Bu，可以脱除苄基酯的苄基，并且可以脱除三苯甲基酯的三苯甲基，同时抑制对该肽化合物的主链的破坏。在本发明的再一个方面，可以在与肽化合物的主链的C-末端或侧链结合的树脂中脱除肽化合物，同时抑制对肽化合物的主链的破坏。
[具体实施方式]
以下列出本发明中使用的缩写：
AcOEt：乙酸乙酯
Alloc：烯丙氧基羰基
Allyl：烯丙基
BEP：四氟硼酸2-溴-1-乙基吡啶鎓盐
Bn：苄基
Boc：叔丁氧基羰基
BSA：N，O-双(三甲基甲硅烷基)乙酰胺
BSTFA：N，O-双(三甲基甲硅烷基)三氟乙酰胺
Bu：丁基
Cbz：苄氧基羰基
cHx：环己基
Cl-CTC树脂：2-氯三苯甲基氯聚合物树脂
CPME：环戊基甲基醚
CTC：2-氯三苯甲基氯
DBU：2，3，4，6，7，8，9，10-八氢嘧啶并[1，2-a]氮杂
DdZ：3，5-二甲氧基苯基异丙氧基羰基
DIC：N，N′-二异丙基碳二亚胺
DIPEA：N，N-二异丙基乙胺
DMA：N，N-二甲基乙酰胺
DME：1，2-二甲氧基乙烷
DMF：N，N-二甲基甲酰胺
DMSO：二甲亚砜
DMT-MM：氯化4-(4，6-二甲氧基-1，3，5-三嗪-2-基)-4-甲基吗啉鎓
EDCI：1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺
eq.：当量
EtOH：乙醇
Et：乙基
Fmoc：9-芴基甲氧基羰基
HATU：1-[双(二甲基氨基)亚甲基]-1H-1，2，3-三唑并[4，5-b]吡啶鎓3-氧化物六氟磷酸盐
HMDS：六甲基二硅氮烷
HOAt：3H-1，2，3-三唑并[4，5-b]吡啶-3-醇
HOBt：1，2，3-苯并三唑-1-醇
HPLC：高效液相色谱
i-PrOAc：乙酸异丙酯
i-Pr：异丙基
LCMS：液相色谱质谱仪
MeCN：乙腈
Me：甲基
MS：质谱
MsOH：甲磺酸
MSTFA：N-甲基-N-三甲基甲硅烷基三氟乙酰胺
MTBE：甲基叔丁基醚
ND：未测定的
NMI：1-甲基咪唑
NMP：N-甲基吡咯烷酮
oxyma：氰基(羟亚胺基)乙酸乙酯
Pd/C：碳载钯
Ph：苯基
pip：哌啶基
prep.：制备型
T3P：丙基膦酸酐
TBDPS：叔丁基二苯基甲硅烷基
TBS：叔丁基二甲基甲硅烷基
t-Bu：叔丁基
TEA：三乙基胺
Teoc：2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基羰基
TES：三乙基甲硅烷基
TFA：三氟乙酸
TFE：2，2，2-三氟乙醇
TfOH：三氟甲磺酸
Tf：三氟甲磺酰基
THF：四氢呋喃
2-MeTHF：2-甲基四氢呋喃
TIPS：三异丙基甲硅烷基
TMSOTf：三氟甲磺酸三甲基硅酯
TMS：三甲基甲硅烷基
Tr：三苯甲基
TTMS：三(三甲基甲硅烷基)甲硅烷基
vol.：体积
Gly：甘氨酸
Ala：丙氨酸
Ser：丝氨酸
Thr：苏氨酸
Val：缬氨酸
Leu：亮氨酸
Ile：异亮氨酸
Phe：苯丙氨酸
Tyr：酪氨酸
Trp：色氨酸
His：组氨酸
Glu：谷氨酸
Asp：天冬氨酸
Gln：谷氨酰胺
Asn：天冬酰胺(Asparagine)
Cys：半胱氨酸
Met：蛋氨酸
Lys：赖氨酸
Arg：精氨酸
Pro：脯氨酸
MeGly：N-Me甘氨酸
MeAla：N-Me丙氨酸
MeSer：N-Me丝氨酸
MeThr：N-Me苏氨酸
MeVal：N-Me缬氨酸
MeLeu：N-Me亮氨酸
MeIle：N-Me异亮氨酸
MePhe：N-Me苯丙氨酸
MeTyr：N-Me酪氨酸
MeTrp：N-Me色氨酸
MeHis：N-Me组氨酸
MeGlu：N-Me谷氨酸
MeAsp：N-Me天冬氨酸
MeGln：N-Me谷氨酰胺
MeAsn：N-Me天冬酰胺
MeCys：N-Me半胱氨酸
MeMet：N-Me蛋氨酸
MeLVs：N-Me赖氨酸
MeArg：N-Me精氨酸
(官能团的定义)
如本文所使用的，术语″烷基″是指通过从脂族烃中脱除任一个氢原子而衍生的一价基团，并且覆盖含有氢和碳原子但在骨架中不含有杂原子(其是指不同于碳和氢原子之外的原子)或不饱和碳-碳键的烃基或烃基团结构的亚组。″烷基″包括直链或支链烷基。烷基是具有1至20个碳原子(C
如本文所使用的，术语″环烷基″是指饱和或部分饱和的环状一价脂族烃基，其包括单环、二环和螺环。环烷基可以是部分不饱和的。环烷基的优选实例包括C
如本文所使用的，术语″环烷基烷基″是指其中在以上所定义的″烷基″中的任意氢原子被以上所定义的″环烷基″替代的基团。环烷基烷基的优选实例包括C
如本文所使用的，术语″烷氧基″是指结合了以上所定义的″烷基″的氧基团。优选的实例包括C
如本文所使用的，术语″脂环族环″是指一价非芳族烃环。所述脂环族环可以在环中具有不饱和键，并且可以是具有两个以上环的多环。构成环的碳原子可以被氧化而形成羰基。形成脂环族环的原子的数量优选为3至 7(3至7元脂环族环)。脂环族环的具体实例包括环烷基环、环烯基环和环炔基环。
如本文所使用的，术语″杂环″是指在成环原子中优选包括1至5个杂原子的非芳族一价或二价杂环。所述杂环在环中可以具有双键和/或三键，在环中可以具有被氧化而形成羰基的碳原子，并且可以是单环、稠合环或螺环。成环原子的数量优选为3至12个(3至12元杂环)，更优选4至7(4 至7元杂环)，并且仍然更优选5至6(5至6元杂环)。
所述杂环的具体实例包括氮杂环丁烷、哌嗪、吡咯烷、哌啶、吗啉、高吗啉(homomorpholine)、(R)-六氢吡咯并[1，2-a]吡嗪、(S)-六氢吡咯并[1，2-a] 吡嗪、3-氧代哌嗪、2-氧代吡咯烷、氮杂环丁烷、2-氧代咪唑烷、氧杂环丁烷、二氢呋喃、四氢呋喃、二氢吡喃、四氢吡喃、四氢吡啶、硫代吗啉、吡唑烷、咪唑啉、
如本文所使用的，术语″芳族杂环″是指在成环原子中优选包含1至5 个杂原子的芳族一价或二价杂环。芳族杂环可以是部分饱和的，并且可以是单环、稠合环(如其中单环芳族杂环与苯环或单环芳族杂环稠合的二环芳族杂环)或螺环。成环原子的数量优选为4至10(4至10元芳族二环芳族杂环)。
芳族杂环的具体实例包括呋喃、噻吩、吡咯、咪唑、吡唑、噻唑、异噻唑、
如本文所使用的，术语“芳基”是指一价的芳族烃环，其优选实例包括C
如本文所使用的，术语“杂芳基”是指在成环原子中优选包含1至5 个杂原子的一价芳族杂环基团。杂芳基可以是部分饱和的，并且可以是单环或稠合环(如其中杂芳基与苯环或单环杂芳基环稠合的二环杂芳基)。成环原子的数量优选为5至10个(5至10元杂芳基)。
杂芳基的具体实例包括呋喃基、噻吩基、吡咯基、咪唑基、吡唑基、噻唑基、异噻唑基、
如本文所使用的，术语“杂环基”是指在成环原子中优选包含1至5 个杂原子的非芳族一价杂环基团。杂环基可以在环中具有双键或三键，可以具有被氧化而形成羰基的碳原子，并且可以是单环或稠合环。成环原子的数量优选为3至10(3至10元杂环基)。
杂环基的具体实例包括氧杂环丁烷基、二氢呋喃基、四氢呋喃基、二氢吡喃基、四氢吡喃基、四氢吡啶基、吗啉基、硫代吗啉基、吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、吡唑烷基、咪唑啉基、咪唑烷基、
如本文所使用的，术语″芳基烷基″是指其中在以上所定义的″烷基″中的任意氢原子被以上所定义的″芳基″替代的基团。芳基烷基的优选实例包括C
如本文所使用的，术语″杂芳基烷基″是指其中在以上所定义的″烷基″中的任一个氢原子被以上所定义的″杂芳基″替代的基团。杂芳基烷基的优选实例包括5至10元杂芳基-C
如本文所使用的，术语″取代的甲硅烷基″是指被1至3个取代基取代的甲硅烷基。取代基可以相同或不同。这样的取代基优选是C
当在本文中提供修饰语″任选取代的″时，这样的取代基的实例包括烷基、烷氧基、烯基、烯氧基、炔基、炔氧基、环烷基、芳基、杂芳基、杂环基、芳基烷基、杂芳基烷基、取代的甲硅烷基、卤素原子、硝基、氨基、已烷基氨基、二烷基氨基、氰基、羧基、烷氧基羰基和甲酰基。
如本文所使用的，术语″脱保护/保护基的脱除″是指通过脱除保护基而将受保护的官能团转化回到初始官能团。
如本文所使用的，术语″树脂脱除/树脂的脱除″是指从与肽化合物结合的固相合成用树脂中解离肽化合物。固相合成用树脂优选结合至起始肽化合物的C-末端氨基酸残基。
在一个实施方案中，本发明提供了生产包含可用于肽药物的氨基酸类似物的肽药物的方法。在其他实施方案中，本发明提供了生产用于供应制药药物物质的包含高品质氨基酸类似物的肽的方法。在又一个实施方案中，本发明提供了可用于生产肽化合物的新型酰胺化合物。
(脱保护/树脂脱除方法)
在一些方面，本发明涉及一种生产肽化合物的方法，其中通过甲硅烷基化剂可脱除的保护基已经被脱除，所述方法包括以下步骤：使包含天然氨基酸残基和/或氨基酸类似物残基的起始肽化合物与甲硅烷基化剂在溶剂中接触，并由此从起始肽化合物中脱除保护基。
在一些方面，本发明涉及一种生产肽化合物的方法，其中固相合成用树脂已经被脱除，所述方法包括以下步骤：使包含天然氨基酸残基和/或氨基酸类似物残基的起始肽化合物与甲硅烷基化剂在溶剂中接触，并由此从固相合成用树脂中脱除起始肽化合物。
如本文所使用的，术语″起始肽化合物″是指这样的″肽化合物″，其是要经历本发明的脱保护反应和/或树脂脱除反应的起始材料。起始肽化合物优选包含至少一个N-取代的氨基酸残基。
本发明中的″肽化合物″包括包含天然氨基酸残基和/或氨基酸类似物残基的直链或环状肽化合物。环状肽化合物与″具有环状部分的肽化合物″同义。
如在本发明中所使用的，对“直链肽化合物”没有特别限制，只要它们是通过形成酰胺或酯键的天然氨基酸或氨基酸类似物形成并且不具有环状部分的肽化合物即可。这样的直链肽化合物可以由总共1、2、3、4、 5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、15、20、25或30个天然氨基酸或氨基酸类似物形成。构成直链肽化合物的氨基酸的数目优选在1至30 个、6至20个、7至19个、7至18个、7至17个、7至16个、7至15 个、8到14个或9至13个的范围内。
如在本发明中所使用的，对“具有环状部分的肽化合物”没有特别限制，只要它们是由形成酰胺或酯键的天然氨基酸或氨基酸类似物形成并且具有环状部分的肽化合物即可。这样的环状部分优选通过共价键如酰胺键、碳-碳键、S-S键、硫醚键和三唑键形成(WO2013/100132， WO2012/026566，WO2012/033154，WO2012/074130，WO2015/030014， CombChem High Throughput Screen.2010；13：75-87，Nature Chem.Bio. 2009，5，502，NatChem Biol.2009，5，888-90，Bioconjugate Chem.，2007，18， 469-476，ChemBioChem，2009，10，787-798，Chemical Communications (Cambridge，United Kingdom)(2011)，47(36)，9946-9958)。通过进一步化学修饰这样的化合物获得的化合物也包括在本发明的肽化合物中。具有环状部分的本发明的肽化合物也可以具有直链部分。对酰胺或酯键的数目(天然氨基酸或氨基酸类似物的数目或长度)没有特别限制，但是当肽化合物具有直链部分时，合并的环状和直链部分优选具有30个以下的残基。为了实现高的代谢稳定性，氨基酸的总数更优选为9个以上。除上述以外，环状部分优选由5至12个、6至12个或7至12个，仍更优选7至11个或8 至11个，并且特别优选9至11个(10个或11)天然氨基酸和氨基酸类似物形成。直链部分优选具有0至8个、0至7个、0至6个、0至5个或0 至4个，并且更优选0至3个氨基酸和氨基酸类似物。天然氨基酸和氨基酸类似物的总数优选为1至30个、6至20个、7至19个、7至18个、7至17个、7至16个、7至15个、8至14个或9至13个。
尽管对形成具有环状部分的本发明的肽化合物的环状部分的天然氨基酸残基和氨基酸类似物残基的类型没有特别限制，但是环状部分优选由具有高代谢稳定性的官能团的天然氨基酸残基和氨基酸类似物残基形成。对具有环状部分的本发明的肽化合物进行环化的方法没有特别限制，只要该方法可以形成这样的环状部分即可。环化方法的实例包括由羧酸和胺的酰胺键形成；以及使用过渡金属作为催化剂的碳-碳键形成反应，如Suzuki反应、Heck反应和Sonogashira反应。因此，本发明的肽化合物含有至少一组允许这样的在环化之前的键形成反应的官能团。特别地，就代谢稳定性而言，其优选含有通过键形成反应而形成酰胺键的官能团。
优选地，例如，所形成的环状部分不包括含有可能容易被氧化的杂原子并且阻碍代谢稳定性的键。由环化产生的键的实例包括由活性酯和胺形成的酰胺键以及由来自碳-碳双键和芳基卤的Heck反应产物产生的键。
在上述的天然氨基酸和氨基酸类似物的总数的条件下或独立于该条件，本发明的“肽化合物”可以是包含至少一个N-取代的氨基酸(优选为 2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13，14、15、20、25或30个，特别优选5、6或7个N-取代的氨基酸)和至少一个N-未取代的氨基酸的直链或环状肽。N-取代的氨基酸的数目优选在1至30个、6至20个、7 至19个、7至18个、7至17个、7至16个、7至15个、8至14个或9 至13个的范围内。
在一些方面，起始肽化合物包含1至30个氨基酸残基并且是直链的或环状的。起始肽化合物中含有的氨基酸可以是″天然氨基酸″或″氨基酸类似物″。″氨基酸″、″天然氨基酸″和″氨基酸类似物″在本文中可以分别称为″氨基酸残基″、″天然氨基酸残基″和″氨基酸类似物残基″。起始肽化合物可以由仲酰胺、叔酰胺或者仲酰胺和叔酰胺的混合物形成。
术语″天然氨基酸″是指Gly、Ala、Ser、Thr、Val、Leu、Ile、Phe、Tyr、 Trp、His、Glu、Asp、Gln、Asn、Cys、Met、Lys、Arg或Pro。
对“氨基酸类似物”没有特别限制，并且包括β-氨基酸、γ-氨基酸、D- 氨基酸、N-取代的氨基酸、α，α-二取代的氨基酸、羟基羧酸和非天然氨基酸(其侧链与天然氨基酸的那些侧链不同的氨基酸：例如，非天然α-氨基酸、β-氨基酸和γ-氨基酸)。α-氨基酸可以是D-氨基酸或α，α-二烷基氨基酸。以与α-氨基酸的类似方式，β-氨基酸和γ-氨基酸也允许具有任意构型。N- 取代的氨基酸的实例包括其氨基被任意取代基取代的氨基酸。这样的取代基的实例包括但不特别限于烷基、芳基和芳烷基。N-取代的氨基酸包括 N-烷基氨基酸、N-芳基氨基酸和N-甲基氨基酸。对氨基酸侧链的选择没有特别限制，但除了氢原子之外，其可以自由地选自例如烷基、烯基、炔基、芳基、杂芳基、芳烷基和环烷基。在这样的基团中的一个或多个非相邻亚甲基任选地被氧原子、羰基(-CO-)或磺酰基(-SO
如此处所使用的，其中构成肽化合物的″天然氨基酸″和″氨基酸类似物″包括对应于每个氨基酸的所有同位素。″天然氨基酸″或″氨基酸类似物″的同位素是指具有至少一个被相同原子数(质子数)和不同质量数(质子和中子总数)的原子替代的原子的那些。在构成本发明的肽化合物的″天然氨基酸″或″氨基酸类似物″中含有的同位素的实例包括氢原子、碳原子、氮原子、氧原子、磷原子、硫原子、氟原子和氯原子，其分别包括
如本文所使用的，含有卤素原子的取代基的实例包括卤素取代的烷基、环烷基、烯基、炔基、芳基、杂芳基或芳烷基。更具体的实例包括氟烷基、二氟烷基和三氟烷基。
含有O原子的取代基包括诸如羟基(-OH)、氧基(-OR)、羰基(-C＝O-R)、羧基(-CO
氧基(-OR)的实例包括烷氧基、环烷氧基、烯氧基、炔氧基、芳氧基、杂芳氧基和芳烷氧基。烷氧基优选是C1-C4烷氧基和C1-C2烷氧基，并且特别优选甲氧基或乙氧基。
羰基(-C＝O-R)的实例包括甲酰基(-C＝O-H)、烷基羰基、环烷基羰基、烯基羰基、炔基羰基、芳基羰基、杂芳基羰基和芳烷基羰基。
氧基羰基(-C＝O-OR)的实例包括烷氧基羰基、环烷氧基羰基、烯氧基羰基、炔氧基羰基、芳氧基羰基、杂芳氧基羰基和芳烷氧基羰基。
羰基氧基(-O-C＝O-R)的实例包括烷基羰基氧基、环烷基羰基氧基、烯基羰基氧基、炔基羰基氧基、芳基羰基氧基、杂芳基羰基氧基和芳烷基羰基氧基。
硫基羰基(-C＝O-SR)的实例包括烷硫基羰基、环烷硫基羰基、烯硫基羰基、炔硫基羰基、芳硫基羰基、杂芳硫基羰基和芳烷硫基羰基。
羰基硫基(-S-C＝O-R)的实例包括烷基羰基硫基、环烷基羰基硫基、烯基羰基硫基、炔基羰基硫基、芳基羰基硫基、杂芳基羰基硫基和芳烷基羰基硫基。
氨基羰基(-C＝O-NHR)的实例包括烷基氨基羰基(其实例包括C1-C
羰基氨基(-NH-C＝O-R)的实例包括烷基羰基氨基、环烷基羰基氨基、烯基羰基氨基、炔基羰基氨基、芳基羰基氨基、杂芳基羰基氨基和芳烷基羰基氨基。另外的实例包括其中在-NH-C＝O-R中接合至N原子的H原子进一步被烷基、环烷基、烯基、炔基、芳基、杂芳基或芳烷基替代的化合物。
氧基羰基氨基(-NH-C＝O-OR)的实例包括烷氧基羰基氨基、环烷氧基羰基氨基、烯氧基羰基氨基、炔氧基羰基氨基、芳氧基羰基氨基、杂芳氧基羰基氨基和芳烷氧基羰基氨基。另外的实例包其中在-NH-C＝O-OR中接合至N原子的H原子进一步被烷基、环烷基、烯基、炔基、芳基、杂芳基或芳烷基替代的化合物。
磺酰基氨基(-NH-SO
氨基磺酰基(-SO
氨磺酰基氨基(-NH-SO
含有S原子的取代基包括诸如硫羟基(-SH)、硫基(-S-R)、亚磺酰基 (-S＝O-R)、磺酰基(-SO
硫基(-S-R)的实例包括烷硫基、环烷硫基、烯硫基、炔硫基、芳硫基、杂芳硫基和芳烷硫基。
磺酰基(-SO
含有N原子的取代基包括诸如叠氮基(-N
仲氨基(-NH-R；一取代的氨基)的实例包括烷基氨基、环烷基氨基、烯基氨基、炔基氨基、芳基氨基、杂芳基氨基和芳烷基氨基。
叔氨基(-NR(R′)；二取代的氨基)的实例包括具有任意两个各自独立地选自烷基、环烷基、烯基、炔基、芳基、杂芳基和芳烷基中的取代基的氨基，如烷基(芳烷基)氨基，其中任意两个这样的取代基可以形成环。具体实例包括二烷基氨基，特别是C
取代的脒基(-C(＝NR)-NR′R″)的实例包括其中在N原子上的三个取代基R、R′和R″各自独立地选自烷基、环烷基、烯基、炔基、芳基、杂芳基和芳烷基的基团，如烷基(芳烷基)(芳基)脒基。
取代的胍基(-NR-C(＝NR″′)-NR′R″)的实例包括其中R、R′、R″和R″′各自独立地选自烷基、环烷基、烯基、炔基、芳基、杂芳基和芳烷基的基团，或者其中这些取代基形成环的基团。
氨基羰基氨基(-NR-CO-NR′R″)的实例包括其中R、R′和R″各自独立地选自氢原子、烷基、环烷基、烯基、炔基、芳基、杂芳基和芳烷基的基团，或者其中这些取代基形成环的基团。
在一些方面，要经过脱保护和/或树脂脱除的起始肽化合物包含至少一个N-取代的氨基酸残基。起始肽化合物中含有的N-取代的氨基酸残基的数目的实例包括1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、 20、25或30个。N-取代的氨基酸残基的数目优选在6至20个、7至19 个、7至18个、7至17个、7至16个、7至15个、8至14个或9至13 个的范围内。两个以上N-取代的氨基酸残基可以在起始肽化合物中彼此连接。
在一些方面，当本发明的肽化合物由2n个氨基酸构成时，构成该肽化合物的氨基酸中的一半以上(例如，n个以上氨基酸(其中n为整数)，或者当肽化合物由2n+1个氨基酸构成时为n+1个以上氨基酸)优选是N- 取代的氨基酸。
如本文所使用的，N-取代的氨基酸中的术语″N-取代″是指但不限于连接至N原子的氢原子被甲基、乙基、丙基、丁基或己基替代。优选的N- 取代的氨基酸包括其中天然氨基酸中的氨基被N-甲基化、N-乙基化、N- 丙基化、N-丁基化和N-戊基化的氨基酸。这样的氨基酸被称为N-甲基氨基酸、N-乙基氨基酸、N-丙基氨基酸、N-丁基氨基酸和N-戊基氨基酸。
当起始肽化合物包含至少一个N-取代的氨基酸残基时(例如，当起始肽化合物包含一个或多个其中N-取代的氨基酸残基连接至相邻氨基酸残基的部分结构，更具体地，一个或多个各自包含至少两个氨基酸残基的部分结构时，该结构由通式式(I)和/或(II)表示)，常规的脱保护/树脂脱除方法容易引起主链破坏如酰胺键断裂或肽主链重排。即使在这样的起始肽化合物的情况下，使用本发明的方法能够以高收率和纯度有效地脱除感兴趣的保护基，同时不涉及主链破坏，并且能够以高收率和纯度在固相反应性有效地从树脂中解离肽化合物。
在一些实施方案中，本发明的起始肽化合物可以不包含N-取代的氨基酸残基或不包含其中N-取代的氨基酸残基连接至相邻氨基酸残基的部分结构。
在一些方面，要经过脱保护和/或树脂脱除的起始肽化合物包含至少一个其中至少两个氨基酸残基彼此连接的部分结构，其中该结构由以下通式 (I)表述。
在式(I)中，R
当由式(I)表示的结构在起始肽化合物的N-末端处时，R
在式(I)中，R
在一些方面，当R
在一些方面，当R
在式(I)中，但是不包括以下情形：当R
(a)R
(b)R
(c)R
R
在式(I)中，R
R
R
在式(I)中，R
在一些方面，当R
在一些方面，当R
在式(I)中，优选地，R
在式(I)中，但是不包括以下情形：当R
(a)R
(b)R
(c)R
R
在式(I)中，R
R
R
在式(I)中，R
当由式(I)表示的结构在起始肽化合物的C-末端处时，R
在式(I)中，R
在式(I)中，R
在式(I)中，PG
PG
在式(I)中，PG
PG
在式(I)中，PG
PG
在式(I)中，PG
PG
其中至少两个氨基酸残基彼此连接的由通式(I)表示的结构包括许多这样的当使用已知的脱保护或树脂脱除条件时容易断裂或破坏的结构。通过使用本发明的反应条件，可以选择性地且有效地仅脱除感兴趣的保护基或固相合成用树脂，而无这样的断裂或破坏。
在一些方面，其中至少两个氨基酸残基彼此连接的由通式(I)表示的结构包括其中一个N-取代的氨基酸连接至一个N-未取代的氨基酸的那些结构以及其中两个N-取代的氨基酸彼此连接的那些结构。这样的氨基酸残基的具体实例包括其中两个氨基酸残基彼此连接的由通式(I′)表示的结构结构，在此通式(I)中的R
式(I′)中的各个基团可以与上述式(I)中的相同。
在一些方面，在式(I’)中，R
在一些方面，在式(I’)中，优选地，R
在一些方面，在式(I’)中，R
在一些方面，在式(I’)中，R
在一些方面，在式(I’)中，R
在一些方面，在式(I’)中，R
在一些方面，在式(I’)中，R
在一些方面，在式(I’)中，R
更优选地，在由通式(I′)表示的结构中，R
R
R
R
R
当R
在一些方面，除了一个或多个由通式(I)表示的结构之外，起始肽化合物还可以包含一个或多个额外的天然氨基酸残基和/或氨基酸类似物残基。
在一些方面，起始肽化合物包含至少一个通过本发明的方法可脱除的保护基。这样的保护基可以包含在由通式(I)表示的结构中，或者可以包含在不同于由通式(I)表示的结构的氨基酸残基中。
在一些方面，起始肽化合物包含至少一种通过本发明的方法可脱除的固相合成用树脂。这样的树脂可以包含在由通式(I)表示的结构中，或者可以包含在不同于由通式(I)表示的结构的氨基酸残基中。
在一些方面，固相合成用树脂结合至在起始肽化合物的C-末端氨基酸残基中含有的羧基。
在一些方面，要经过脱保护和/或树脂脱除的起始肽化合物包含在C- 末端处的其中至少两个氨基酸残基彼此连接的结构，其中该结构由以下通式(II)表示。
R
其中*表示连接点。
在式(III)中，R
在式(III)中，R
在一些方面，当R
在一些方面，当R
在式(III)中，但是不包括以下情形：当R
(a)R
(b)R
(c)R
R
在式(III)中，R
R
R
在式(II)中，R
在一些方面，当用于本发明的树脂脱除方法时，R
在式(II)中，R
在式(II)和(III)中，优选地，R
在式(II)中，R
在一些方面，当R
在一些方面，当R
在式(II)中，R
当R
当R
PG
PG
在式(II)中，PG
PG
在式(II)中，PG
在式(II)中，PG
在一些方面，可以包含在通式(I)至(III)中的PG
在一些方面，PG
在一些方面，PG
其中至少两个氨基酸残基彼此连接的由通式(II)表示的结构包括许多这样的当使用已知的脱保护或树脂脱除条件时容易发生断裂或重排的结构。这样的断裂和重排可以是称为破坏。使用本发明的反应条件，可以选择性地且有效地仅脱除感兴趣的保护基或固相合成用树脂，而没有这样的破坏。
在一些方面，其中两个氨基酸残基彼此连接的由通式(II)表示的结构包括其中一个N-取代的氨基酸连接至一个N-未取代的氨基酸的那些结构以及其中两个N-取代的氨基酸彼此连接的那些结构。这样的结构的具体实例包括其中通式(II)的R
在式(IV)和(V)中的各个基团可以与上述式(II)和(III)中的相同。
在一些方面，在式(IV)和(V)中，R
在一些方面，在式(IV)和(V)中，R
在一些方面，在式(IV)和(V)中，R
在一些方面，在式(IV)和(V)中，R
在一些方面，在式(IV)和(V)中，优选地，R
在一些方面，在式(IV)和(V)中，R
在一些方面，在式(IV)和(V)中，R
在一些方面，在式(IV)和(V)中，R
在一些方面，当用于本发明的树脂脱除方法时，R
在一些方面，在式(IV)和(V)中，更优选地，R
R
R
R
R
R
R
在一些方面，除了由通式(II)表示的结构之外，起始肽化合物还可以包含一个或多个额外的天然氨基酸残基和/或氨基酸类似物残基。起始肽化合物可以包含一个或多个由通式(I)表示的结构，可以包含在C-末端处的由通式(II)表示的结构，并且任选地可以进一步包含一个或多个额外的天然氨基酸残基和/或氨基酸类似物残基。肽化合物可以由仲酰胺、叔酰胺或者仲酰胺和叔酰胺的混合物形成。
在一些方面，起始肽化合物包含至少一个通过本发明的方法可脱除的保护基。这样的保护基可以包含在由通式(II)表示的结构中，或者可以包含在不同于由通式(II)所示结构的氨基酸残基中。
在一些方面，起始肽化合物包含至少一种通过本发明的方法可脱除的固相合成用树脂。当起始肽化合物包含由通式(II)表示的结构时，这样的树脂包括在由通式(II)表示的结构中。
在一些方面，本发明涉及一种生产酰胺化合物的方法，该酰胺化合物中的通过甲硅烷基化剂可脱除的保护基已经被脱除，所述方法包括以下步骤：使起始酰胺化合物与甲硅烷基化剂在溶剂中接触，并由此从起始酰胺化合物中脱除保护基。
在一些方面，本发明涉及一种生产酰胺化合物的方法，该酰胺化合物中的固相合成用树脂已经被脱除，所述方法包括以下步骤：使起始酰胺化合物与所述甲硅烷基化剂在溶剂中接触，并由此从固相合成用树脂中脱除起始酰胺化合物。
在一些方面，要经过脱保护/树脂脱除的起始酰胺化合物由通式(II)表示。
在式(II)中，R
当使用已知的脱保护或树脂脱除条件时，由通式(II)表示的起始酰胺化合物，特别是N-取代的化合物易发生被破坏如重排。使用本发明的反应条件，可以选择性地且有效地仅脱除感兴趣的保护基或固相合成用树脂，而不会遭受这样的破坏。
本文中，对″甲硅烷基化剂″没有特别限制，只要其可以用于本发明的脱保护或树脂脱除反应即可，并且该术语是指可以充当脱保护剂或脱保护试剂和/或树脂脱除剂或树脂脱除试剂的试剂。本文中，″甲硅烷基化剂″可以被称为脱保护剂或脱保护试剂和/或树脂脱除剂或树脂脱除试剂。甲硅烷基化剂可以例如通过在溶剂中混合甲硅烷基化合物与亲电物种清除剂或混合酸与具有甲硅烷基的亲电物种清除剂来制得。甲硅烷基化合物与亲电物种清除剂的混合或酸与具有甲硅烷基的亲电物种清除剂的混合可以提前进行、或在溶剂中进行，或在存在或不存在起始肽化合物的情况下进行。
如本文所使用的，″甲硅烷基化合物″的实例包括具有由式1表示的具有离去基团(X)的甲硅烷基化合物：
其中R
优选地，R
这样的甲硅烷基化合物的更具体实例包括TMSOTf、TESOTf、 TBSOTf、TIPSOTf、TBDPSOTf、TTMSOTf、TMSCl、TMSBr、TMSOClO
对可以在本文中用于制备甲硅烷基化剂的″酸″没有特别限制，只要其可以产生甲硅烷基化合物即可，并且其实例包括由HX表示的酸(其中X 与对于式(1)的X所定义的一样)。
如本文所使用的，术语″亲电物种清除剂″是指可以与质子形成加合物或盐或者与阳离子物种是反应性的且不太易于发生甲硅烷基化的化合物。这样的亲电物种清除剂包括亚氨酸酯(式2)、酰胺(式3)、烯酮缩醛(式4)、烯酮烷氧基半缩醛胺(式4)、烯醇醚(式4)、烯醇酯(式4)、亚胺(式5)、胺(式 6)、二胺(式7)、二烷基碳二亚胺(式8)、脲(式9)或氨基甲酸酯(式10)。它们可以具有取代的甲硅烷基，取代的甲硅烷基的具体实例包括TMS(三甲基甲硅烷基)、TES(三乙基甲硅烷基)、TBS(三丁基甲硅烷基)、TIPS(三异丙基甲硅烷基)和TBDPS(叔丁基-二甲基甲硅烷基)。
亚氨酸酯由式2表示：
其中
R
R
R
优选的亚氨酸酯包括由以下式2-1表示的N-甲硅烷基亚氨酸酯以及由以下式2-2表示的双
其中
R
RF和RF独立地是C
优选地，R
优选的N-甲硅烷基亚氨酸酯包括由式2-1-1表示的N，O-双(三甲基甲硅烷基)乙酰胺。优选的双
更优选的N-甲硅烷基亚氨酸酯包括由式2-1-1-1表示的N，O-双(三甲基甲硅烷基)乙酰胺和由式2-1-1-2表示的N，O-双(三甲基甲硅烷基)三氟乙酰胺。更优选的双
酰胺由式3表示：
其中
R
R
R
优选的酰胺包括由式3-1表示的N-甲硅烷基酰胺：
其中
R
R
优选地，R
优选的N-甲硅烷基酰胺包括由式3-1-1表示的N-三甲基甲硅烷基乙酰胺：
其中R
更优选地，N-三甲基甲硅烷基乙酰胺包括由式3-1-1-1表示的N-甲基 -N-三甲基甲硅烷基乙酰胺和由式3-1-1-2表示的N-甲基-N-三甲基甲硅烷基三氟乙酰胺。
烯酮缩醛、烯酮烷氧基半缩醛胺、烯醇醚和烯醇酯各自由式4表示：
其中
(a-1)R
(a-2)R
(b-1)R
(b-2)R
(c-1)R
(c-2)R
(d-1)R
(d-2)R
(e-1)R
(e-2)R
(f-1)R
(f-2)R
此处，C
优选的烯酮缩醛包括由式4-1表示的甲硅烷基烯酮缩醛：
其中
R
R
R
此处，C
优选地，R
优选的烯酮甲硅烷基缩醛包括由式4-1-1表示的烯酮三甲基甲硅烷基缩醛：
其中R
优选的R
优选的烯酮三甲基甲硅烷基缩醛包括由式4-1-1-1表示的二甲基乙烯酮甲基三甲基甲硅烷基缩醛。
优选的烯醇醚包括由式4-2表示的甲硅烷基烯醇醚：
其中
R
R
R
R
优选地，R
优选的甲硅烷基烯醇醚包括由式4-2-1表示的三甲基甲硅烷基烯醇醚：
其中
R
优选的三甲基甲硅烷基烯醇醚包括由式4-2-1-1表示的异丙烯基氧基三甲基硅烷。
在其他实施方案中，优选的烯醇醚包括由式4-3表示的环状烯醇醚：
其中
R
优选的环状烯醇醚包括由式4-3-1表示的二氢吡喃。
在其他实施方案中，优选的烯醇醚包括直链烯醇醚，并且优选的直链烯醇醚包括由式4-4表示的乙基乙烯基醚。
亚胺由式5表示：
其中
R
R
优选的亚胺包括由式5-1表示的酮亚胺：
其中R
优选的R
优选的酮亚胺包括由式5-1-1表示的2，2，4，4-四甲基戊酮亚胺。
胺由式6表示：
其中
R
R
R
优选的胺包括由式6-1表示的二甲硅烷基胺：
其中
R
优选地，R
优选的二甲硅烷基胺包括由式6-1-1表示的1，1，1，3，3，3-六甲基二硅氮烷(HMDS)。
在其他实施方案中，优选的胺包括由式6-2表示的N-二烷基-N-甲硅烷基胺：
其中
R
R
R
优选地，R
优选的N-二烷基-N-甲硅烷基胺包括由式6-2-1表示的N-二烷基-N- 三甲基甲硅烷基胺：
其中
R
优选的N-二烷基-N-三甲基甲硅烷基胺包括由式6-2-1-1表示的N-三甲基甲硅烷基吗啉和由式6-2-1-2表示的N-三甲基甲硅烷基二乙胺。
在其他实施方案中，优选的胺包括由式6-3表示的N-烷基-N-二甲硅烷基胺：
其中
R
R
具体地，例如，R
R
优选的N-烷基-N-二甲硅烷基胺包括由式6-3-1表示的N-烷基-N-双三甲基甲硅烷基胺：
其中
R
R
在其他实施方案中，优选的胺包括由式6-4表示的N-烷基-N-甲硅烷基胺：
其中
R
R
优选地，R
R
优选的N-烷基-N-甲硅烷基胺包括由式6-4-1表示的N-烷基-N-三甲基甲硅烷基胺：
其中R
R
优选的N-烷基-N-三甲基甲硅烷基胺包括由式6-4-1-1表示的N-叔丁基三甲基甲硅烷基胺。
二胺由式7表示：
其中
X是单键或碳原子，
其中当X是单键时，R
当X是碳原子时，R
当式7中的X是碳原子时，优选的二胺包括由式7-1表示的四烷基萘二胺：
其中RU
优选的四烷基萘二胺包括由式7-1-1表示的N，N，N′，N′-四甲基-1，8-萘二胺。
在其他实施方案中，当式7中的X是单键时，优选的二胺包括由式 7-1-1表示的2，2′-联吡啶。
二烷基碳二亚胺由式8表示：
其中R
R
优选的二烷基碳二亚胺包括由式8-1表示的二异丙基碳二亚胺。
脲由式9表示：
其中R
优选的脲包括由式9-1表示的N，N′-双(三甲基甲硅烷基)脲。
氨基甲酸乙酯由式10表示：
其中R
优选的氨基甲酸乙酯包括式10-1表示的N，O-双(三甲基甲硅烷基)脲。
在一些方面，甲硅烷基化剂可以通过以任意顺序混合肽化合物、溶剂、亲电物种清除剂和甲硅烷基化合物或酸制得。优选的是混合肽化合物与溶剂，然后与亲电物种清除剂混合，并且随后与甲硅烷基化合物或酸混合。
在一些方面，使用的溶剂可以是非质子溶剂，其实例包括酯、醚、烷基腈、卤代烃和烃。在它们之中，优选乙酸乙酯、乙酸异丙酯、2-甲基四氢呋喃、四氢呋喃、二乙醚、甲基叔丁基醚、二氯甲烷、1，2-二氯乙烷、甲苯或乙腈，更优选乙酸乙酯、乙酸异丙酯、2-甲基四氢呋喃、四氢呋喃或1，2-二氯乙烷，并且特别优选乙酸乙酯或2-甲基四氢呋喃。
在一些方面，为了生产本发明中的甲硅烷基化剂，可以使用化学计量量以上的甲硅烷基化合物和亲电物种清除剂以从肽化合物中脱除保护基和/或脱除树脂。在这种情况下，例如，对于包含在肽中的一当量的要脱除的保护基或一当量的要脱除的树脂，可以使用1至5当量、优选2至4当量的甲硅烷基化合物和1至10当量、优选1至8当量的亲电物种清除剂。
在一些方面，每一当量的要脱除的保护基或每一当量的要脱除的树脂，甲硅烷基化剂可以通过合并亲电物种清除剂与催化量的例如0.1至0.5 当量，优选0.3至0.4当量的甲硅烷基化合物来制备。在这种情况下， TMSOTf、TESOTf、TBSOTf、TIPSOTf、TBDPSOTf、TTMSOTf、TMSCl、 TMSBr或TMSOClO
在一些方面，每一当量的要脱除的保护基或每一当量的要脱除的树脂，甲硅烷基化剂可以通过合并亲电物种清除剂与催化量的例如0.1至0.5 当量、优选0.3至0.4当量的酸来制备。在这种情况下，优选使用TfOH、 HOClO
在一些方面，对″通过甲硅烷基化剂可脱除的保护基″没有特别限制，只要该保护基可以通过甲硅烷基化剂脱除即可。这样的保护基的具体实例包括用于羧基的保护基，如t-Bu、苄基、三苯基甲基、枯烯基和2-(三甲基甲硅烷基)-乙基；用于氨基的保护基，如Boc、Teoc、Cbz、甲氧基羰基和枯烯基；用于羟基的保护基，如四氢吡喃基和1-乙氧基乙基；以及用于 SH基团的保护基，如三苯基甲基和甲氧基三苯甲基。
本文中用于起始肽化合物的化学合成方法包括例如液相合成方法、使用Fmoc合成、Boc合成等的固相合成方法及其组合。在Fmoc合成中，使用其中主链氨基用Fmoc基团保护、侧链官能团在必要时用不被碱如哌啶断裂的保护基保护并且主链羧酸基团没有被保护的的氨基酸作为基本单元。对该基本单元没有特别限制，并且可以是任何其他组合，只要其具有Fmoc保护的氨基和羧酸基团即可。例如，二肽可以是用作基本单元。位于N末端处的基本单元可以为不是Fmoc氨基酸的基本单元。例如，它可以是Boc氨基酸，或不具有氨基的羧酸类似物。通过与固相载体上的官能团的化学反应来将主链羧酸基团固定到固相上。接下来，将Fmoc基团通过碱如哌啶或DBU脱保护，并且使新产生的氨基和随后加入的基本单元(即带有羧酸的受保护氨基酸)经过缩合反应以生成酰胺键。在缩合反应中，各组组合如DIC和HOBt、DIC和HOAt以及HATU和DIPEA是可能的。重复Fmoc基团脱保护和随后的酰胺键形成反应使得能够产生所需的肽序列。在获得所需的序列之后，进行从固相中脱除树脂，并且将必要时引入到侧链官能团的保护基脱保护。本发明的脱保护和树脂脱除方法可以提供用于从固相树脂的脱除以及保护基从侧链官能团的脱除。诸如环化的步骤也可以在固相树脂脱除步骤或脱保护步骤期间或最后进行。例如，侧链羧酸可以与主链的N-末端氨基缩合，而侧链氨基可以与主链的C-末端羧酸缩合。在这种情况下，在C-末端羧酸和要被环化的侧链羧酸之间，或在主链的N-末端氨基或羟基与要被环化的侧链氨基之间需要反应正交性，并且考虑到保护基的正交性来选择保护基。如此获得的反应产物可以通过反相柱、分子筛柱等进行纯化。细节描述在例如由Merck K.K在2002 年5月1日出版的“Solid-Phase SynthesisHandbook(固相合成手册)”中。
本文中，对“固相合成用树脂”没有特别限制，只要它可以用于通过固相方法的肽化合物的合成并且可以通过本发明的甲硅烷基化剂脱除。这样的固相合成用树脂的具体实例包括在酸性条件下可脱除的那些，如CTC 树脂、Wang树脂、SASRIN树脂、三苯甲基氯树脂(Trt树脂)、4-甲基三苯甲基氯树脂(Mtt树脂)和4-甲氧基三苯甲基氯树脂(Mmt)。可以根据在要使用的氨基酸上的官能团来适当地选择树脂。例如，当使用羧酸(以Asp或 Glu为代表的主链羧酸或侧链羧酸)或芳族环上的羟基(以Tyr为代表的酚基)作为氨基酸上的官能团时，优选使用三苯甲基氯树脂(Trt树脂)或2-氯三苯甲基氯树脂(CTC树脂)作为所述树脂。当使用脂族羟基(以Ser或Thr 为代表的脂族醇基团)作为氨基酸上的官能团时，优选使用三苯甲基氯化物树脂(Trt树脂)、2-氯三苯甲基氯化物树脂(CTC树脂)或4-甲基三苯甲基氯树脂(Mtt树脂)作为所述树脂。
此外，对于构成树脂的聚合物的类型也没有特别限制。对于由聚苯乙烯组成的树脂，可以使用100至200目或200至400目。对于交联百分比没有特别限制，但优选用1％二乙烯基苯(DVB)交联的那些。形成树脂的聚合物的类型包括Tentagel或Chemmatrix。
在一些方面，本发明的脱保护反应和/或树脂脱除反应可以在-50至 100℃，优选-20至50℃，并且最优选0至30℃的反应温度下进行。
在一些方面，本发明的脱保护反应和/或树脂脱除反应可以进行的反应时间为10分钟至一周，优选10分钟至6小时，并且最优选1至3小时。
在一些方面，在本发明的脱保护反应和/或树脂脱除反应中，可以通过向反应溶液中加入醇或水以猝灭反应，并使目标产物沉淀或用水或盐水洗涤有机层，然后在减压下浓缩该有机层来获得目标产物。对于醇没有特别限制，但优选为水溶性且低沸点的醇，并且特别优选甲醇。对于用于猝灭反应的水没有特别限制，但优选为碱性水，并且特别优选碳酸氢钠或磷酸氢二钾水溶液。当洗涤有机层时，对盐水在浓度方面没有特别限制，但是优选为卤水(brine)或5％盐水。
在一些方面，当起始肽化合物包含可以通过本发明的方法脱除的保护基和可以通过本发明的方法脱除的固相合成用树脂二者时，脱保护和树脂脱除反应可以同时进行。具体地，本发明还涉及一种生产肽化合物的方法，在所述肽化合物中通过甲硅烷基化剂可脱除的保护基从包含天然氨基酸残基和/或氨基酸类似物残基的起始肽化合物中已经脱除，并且在所述肽化合物中通过甲硅烷基化剂可脱除的固相合成用树脂从起始肽化合物中已经脱除，该方法包括使起始肽化合物与甲硅烷基化剂在溶剂中接触的步骤。
在一些方面，本发明涉及由以下式(A)表示的酰胺化合物或其盐：
在式(A)中，R
在式(A)中，R
在式(A)中，R
式(A)中的R
由式(A)表示的酰胺化合物的具体实例包括以下化合物：
(1-1)3-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)(甲基)氨基)-4-氧代-4-(哌啶-1-基) 丁酸，
(1-2)3-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)(甲基)氨基)-4-氧代-4-(哌啶-1-基) 丁酸烯丙酯，
(1-3)3-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)(甲基)氨基)-4-氧代-4-(哌啶-1-基) 丁酸叔丁酯，
(1-4)3-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)(甲基)氨基)-4-氧代-4-(哌啶-1-基) 丁酸苄酯，
(1-5)3-((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)-4-氧代-4-(哌啶-1-基)丁酸，
(1-6)3-((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)-4-氧代-4-(哌啶-1-基)丁酸烯丙酯，
(1-7)3-((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)-4-氧代-4-(哌啶-1-基)丁酸叔丁酯，
(1-8)3-((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)-4-氧代-4-(哌啶-1-基)丁酸苄酯，
(1-9)3-(((苄氧基)羰基)(甲基)氨基)-4-氧代-4-(哌啶-1-基)丁酸，
(1-10)3-(((苄氧基)羰基)(甲基)氨基)-4-氧代-4-(哌啶-1-基)丁酸烯丙酯，
(1-11)3-(((苄氧基)羰基)(甲基)氨基)-4-氧代-4-(哌啶-1-基)丁酸叔丁酯，
(1-12)3-(((苄氧基)羰基)(甲基)氨基)-4-氧代-4-(哌啶-1-基)丁酸苄酯，
(1-13)3-(((烯丙氧基)羰基)(甲基)氨基)-4-氧代-4-(哌啶-1-基)丁酸，
(1-14)3-(((烯丙氧基)羰基)(甲基)氨基)-4-氧代-4-(哌啶-1-基)丁酸烯丙酯，
(1-15)3-(((烯丙氧基)羰基)(甲基)氨基)-4-氧代-4-(哌啶-1-基)丁酸叔丁酯，
(1-16)3-(((烯丙氧基)羰基)(甲基)氨基)-4-氧代-4-(哌啶-1-基)丁酸苄酯，
(1-17)3-(甲基((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)羰基)氨基)-4-氧代-4-(哌啶 -1-基)丁酸，
(1-18)3-(甲基((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)羰基)氨基)-4-氧代-4-(哌啶 -1-基)丁酸烯丙酯，
(1-19)3-(甲基((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)羰基)氨基)-4-氧代-4-(哌啶 -1-基)丁酸叔丁酯，
(1-20)3-(甲基((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)羰基)氨基)-4-氧代-4-(哌啶 -1-基)丁酸苄酯，
(2-1)3-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)(甲基)氨基)-4-吗啉基-4-氧代丁酸，
(2-2)3-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)(甲基)氨基)-4-吗啉基-4-氧代丁酸烯丙酯，
(2-3)3-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)(甲基)氨基)-4-吗啉基-4-氧代丁酸叔丁酯，
(2-4)3-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)(甲基)氨基)-4-吗啉基-4-氧代丁酸苄酯，
(2-5)3-((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)-4-吗啉基-4-氧代丁酸，
(2-6)3-((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)-4-吗啉基-4-氧代丁酸烯丙酯，
(2-7)3-((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)-4-吗啉基-4-氧代丁酸叔丁酯，
(2-8)3-((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)-4-吗啉基-4-氧代丁酸苄酯，
(2-9)3-(((苄氧基)羰基)(甲基)氨基)-4-吗啉基-4-氧代丁酸，
(2-10)3-(((苄氧基)羰基)(甲基)氨基)-4-吗啉基-4-氧代丁酸烯丙酯，
(2-11)3-(((苄氧基)羰基)(甲基)氨基)-4-吗啉基-4-氧代丁酸叔丁酯，
(2-12)3-(((苄氧基)羰基)(甲基)氨基)-4-吗啉基-4-氧代丁酸苄酯，
(2-13)3-(((烯丙氧基)羰基)(甲基)氨基)-4-吗啉基-4-氧代丁酸，
(2-14)3-(((烯丙氧基)羰基)(甲基)氨基)-4-吗啉基-4-氧代丁酸烯丙酯，
(2-15)3-(((烯丙氧基)羰基)(甲基)氨基)-4-吗啉基-4-氧代丁酸叔丁酯，
(2-16)3-(((烯丙氧基)羰基)(甲基)氨基)-4-吗啉基-4-氧代丁酸苄酯，
(2-17)3-(甲基((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)羰基)氨基)-4-吗啉基-4-氧代丁酸，
(2-18)3-(甲基((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)羰基)氨基)-4-吗啉基-4-氧代丁酸烯丙酯，
(2-19)3-(甲基((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)羰基)氨基)-4-吗啉基-4-氧代丁酸叔丁酯，
(2-20)3-(甲基((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)羰基)氨基)-4-吗啉基-4-氧代丁酸苄酯，
(3-1)3-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)(甲基)氨基)-4-(二甲基氨基)-4-氧代丁酸，
(3-2)3-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)(甲基)氨基)-4-(二甲基氨基)-4-氧代丁酸烯丙酯，
(3-3)3-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)(甲基)氨基)-4-(二甲基氨基)-4-氧代丁酸叔丁酯，
(3-4)3-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)(甲基)氨基)-4-(二甲基氨基)-4-氧代丁酸苄酯，
(3-5)3-((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)-4-(二甲基氨基)-4-氧代丁酸，
(3-6)3-((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)-4-(二甲基氨基)-4-氧代丁酸烯丙酯，
(3-7)3-((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)-4-(二甲基氨基)-4-氧代丁酸叔丁酯，
(3-8)3-((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)-4-(二甲基氨基)-4-氧代丁酸苄酯，
(3-9)3-(((苄氧基)羰基)(甲基)氨基)-4-(二甲基氨基)-4-氧代丁酸，
(3-10)3-(((苄氧基)羰基)(甲基)氨基)-4-(二甲基氨基)-4-氧代丁酸烯丙酯，
(3-11)3-(((苄氧基)羰基)(甲基)氨基)-4-(二甲基氨基)-4-氧代丁酸叔丁酯，
(3-12)3-(((苄氧基)羰基)(甲基)氨基)-4-(二甲基氨基)-4-氧代丁酸苄酯，
(3-13)3-(((烯丙氧基)羰基)(甲基)氨基)-4-(二甲基氨基)-4-氧代丁酸，
(3-14)3-(((烯丙氧基)羰基)(甲基)氨基)-4-(二甲基氨基)-4-氧代丁酸烯丙酯，
(3-15)3-(((烯丙氧基)羰基)(甲基)氨基)-4-(二甲基氨基)-4-氧代丁酸叔丁酯，
(3-16)3-(((烯丙氧基)羰基)(甲基)氨基)-4-(二甲基氨基)-4-氧代丁酸苄酯，
(3-17)4-(二甲基氨基)-3-(甲基((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)羰基)氨基)-4-氧代丁酸，
(3-18)4-(二甲基氨基)-3-(甲基((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)羰基)氨基)-4-氧代丁酸烯丙酯，
(3-19)4-(二甲基氨基)-3-(甲基((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)羰基)氨基)-4-氧代丁酸叔丁酯，
(3-20)4-(二甲基氨基)-3-(甲基((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)羰基)氨基)-4-氧代丁酸苄酯，
(4-1)3-(甲基氨基)-4-氧代-4-(哌啶-1-基)丁酸，
(4-2)3-(甲基氨基)-4-氧代-4-(哌啶-1-基)丁酸烯丙酯，
(4-3)3-(甲基氨基)-4-氧代-4-(哌啶-1-基)丁酸叔丁酯，
(4-4)3-(甲基氨基)-4-氧代-4-(哌啶-1-基)丁酸苄酯，
(4-5)3-(甲基氨基)-4-吗啉基-4-氧代丁酸，
(4-6)3-(甲基氨基)-4-吗啉基-4-氧代丁酸烯丙酯，
(4-7)3-(甲基氨基)-4-吗啉基-4-氧代丁酸叔丁酯，
(4-8)3-(甲基氨基)-4-吗啉基-4-氧代丁酸苄酯，
(4-9)4-(二甲基氨基)-3-(甲基氨基)-4-氧代丁酸，
(4-10)4-(二甲基氨基)-3-(甲基氨基)-4-氧代丁酸烯丙酯，
(4-11)4-(二甲基氨基)-3-(甲基氨基)-4-氧代丁酸叔丁酯，或
(4-12)4-(二甲基氨基)-3-(甲基氨基)-4-氧代丁酸苄酯。
例如，由式(A)表示的本发明的酰胺化合物可以根据以下方案合成。
例如，可以根据固相合成手册(出版商：Merck KK，出版日期：2002 年5月1日)或Albert等人的方法(Synthesis，1987，7，635-637)，使用脱水缩合剂如碳二亚胺化合物，通过将任意胺((R
例如，可以使用在Greene的″Protective Groups in Organic Synthesis(有机合成中的保护基)″(第5版，John Wiley&Sons 2014)中描述的方法或者本文中描述的脱保护方法来实现上述方案中的脱保护步骤。
本发明的化合物可以为游离形式或其盐，它们二者都包括在本发明中。这样的“盐”的实例包括无机酸盐、有机酸盐、无机碱盐、有机碱盐以及酸性或碱性氨基酸盐。
无机酸盐的实例包括盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、硝酸盐和磷酸盐。有机酸盐的实例包括乙酸盐、琥珀酸盐、富马酸盐、马来酸盐、酒石酸盐、柠檬酸盐、乳酸盐、硬脂酸盐、苯甲酸盐、甲磺酸盐、苯磺酸盐和对甲苯磺酸盐。
无机碱盐的实例包括碱金属盐如钠盐和钾盐、碱土金属盐如钙盐和镁盐、铝盐和铵盐。有机碱盐的实例包括二乙胺盐、二乙醇胺盐、葡甲胺盐和N，N-二苄基乙二胺盐。
酸性氨基酸盐的实例包括天冬氨酸盐和谷氨酸盐。碱性氨基酸盐的实例包括精氨酸盐、赖氨酸盐和鸟氨酸盐。
例如，当留在空气中时，本发明的化合物可以吸收水而形成水合物。这样的水合物也包括在本发明中。
此外，本发明的化合物可以吸收某些其他溶剂而形成溶剂化物。这样的溶剂化物也包括在本发明中。
在本文中，尽管为了方便起见，本发明化合物的结构式可以表示某些异构体，但是本发明包括就化合物结构而言可能的所有异构体和异构体的混合物，如几何异构体、光学异构体和互变异构体，并且这些化合物不限于为方便起见所描述的结构式。例如，当化合物在分子中具有不对称碳原子以及以光学活性异构体和外消旋物存在时，两者均包括在本发明中。
本文中引用的所有现有技术参考文献均通过引用并入本说明书中。
[实施例]
将参考以下实施例进一步举例说明本发明，但本发明不限于此。
在本发明的实践中使用的溶剂如二氯甲烷、乙酸乙酯、2-MeTHF、二氯乙烷或DMF是得自商业供应商的那些，无需纯化下使用。在没有添加水作为溶剂的情况下，用于反应的溶剂如脱水溶剂、超脱水溶剂或无水溶剂是得自商业供应商的那些，无需纯化下使用。
除非另有说明，否则在本发明的实践中使用的甲硅烷基化合物如 TMSOTf，或者在本发明的实践中使用的试剂例如亲电物种清除剂如BSA 和BSTFA是得自商业供应商的那些，无需纯化下使用。
除非另有说明，否则在本发明的实践中使用的起始肽或酰胺化合物是得自商业供应商的那些，无需纯化下使用。如果需要，这样的化合物通过已知的方法生产并使用。
在以下实施例中，通过HPLC方法1至4中的任意一种或多种或者方法A、B、C、D、E、F、G或H进行分析。
分析：HPLC(反应转化率，纯度)
仪器：Waters ACQUITY UPLC H-Class
柱：Ascentis Express C18(2.7μm，4.6mmx50mm)，Supelco
洗脱剂：A)0.05％TFA/水，B)0.05％TFA/CH
梯度(B)：
流速：1.0mL/min.
检测：210nm
注入体积：5μL
样品生产：5μL/1.00mL
仪器：Waters LCT Premier
柱：Ascentis Express C18(2.7μm，4.6mmx50mm)，Supelco
柱温：35deg.
洗脱剂：A)0.05％TFA/水，B)0.05％TFA/CH
梯度(B)：
流速：1.0mL/min.
检测：210nm
注入体积：5μL
样品生产：5μL/1.00mL
仪器：Waters ACQUITY UPLC H-Class
柱：Ascentis Express C18，(2.7μm，2.1mmx50mm)，Supelco
柱温：35deg.
洗脱剂：A)0.05％TFA/水，B)0.05％TFA/CH
梯度(A)：95％(0min)→0％(4.0min)→0％(4.5min)→95％(4.6min) →95％(6min)
流速：0.25mL/min
检测：PDA 210nm(200-400nm PDA总计)
注入体积：0.3μL
样品生产：50μL/10mL
仪器：Waters ACQUITY UPLC H-Class
柱：CAPCELL CORE ADME，(2.7μm，3.0mmx150mm)
柱温：30deg.
溶剂：A)0.05％TFA/水，B)0.05％TFA/CH
梯度(A)：70％(0min)→30％(20.0min)→0％(20.1min)→0％(22.0 min)→70％(22.1min)→70％(24min)
流速：0.3mL/min
检测：PDA 254nm(200-400nm PDA总计)
注入体积：0.3μL
样品生产：非结晶的10.0mg，在CH
A.Boc脱除反应实验 (实施例1)
Boc-MeAla-MePhe-Leu-MeLeu-Thr(OBn)-MeGly-O烯丙基(化合物3a) 的Boc脱除反应(6-mer：TfOH-BSTFA方法)
将77.7mg的原料称取到反应容器中并溶解在5v/w的乙酸乙酯中，并且将反应容器用冰冷却。在10分钟之后，在氮气氛下依次加入0.055ml (2.4eq)的BSTFA和3.0μl(0.4eq)的TfOH，并搅拌反应溶液。在加入试剂之后三小时，通过LCMS对反应进行分析并且确认原料消失。
将反应用饱和碳酸氢钠水溶液猝灭。有机层用饱和碳酸氢钠水溶液和 5％盐水洗涤。将所得的有机层在减压下浓缩，定量地得到77.3mg的脱保护的产物。
确认没有酰胺键断裂。
[表1]
[表2]
分析(HPLC方法1)
(实施例2)
Boc-MeIle-Ala-MePhe-MeVal-Asp(pip)-MeAla-MePhe-Leu-MeLeu-Thr( OBn)-MeGly-O烯丙基(化合物1a)的Boc脱除反应(11-mer：TMSOTf-HMDS 方法)
将0.0810g的原料称取到反应容器中并溶解在10v/w的乙酸乙酯中，并且将反应容器用冰冷却。在10分钟之后，在氮气氛下依次加入0.079ml (7.2eq)的HMDS和34μl(3.6eq)的TMSOTf，并搅拌反应溶液。在加入试剂之后四小时，通过LCMS对反应进行分析并且确认原料消失。确认没有酰胺键断裂。
在确认原料消失之后，将反应溶液再搅拌一小时并通过LCMS对反应进行分析。同样在此时，确认没有酰胺键断裂。
向反应容器中加入1ml的盐水以猝灭反应。然后加入5ml的乙酸乙酯并且将两层分离。有机层用1ml的饱和碳酸氢钠水溶液和1ml的盐水的混合物洗涤。将所得的有机层浓缩，以90％收率得到68.0mg的脱保护的产物，为透明薄膜。
[表3]
[表4]
分析(HPLC方法1：测定原料和目标产物的杂质)
[表5]
分析(HPLC方法2：质谱)
(实施例3)
Boc-MeIle-Ala-MePhe-MeVal-Asp(pip)-MeAla-MePhe-Leu-MeLeu-Thr( OBn)-MeGly-O烯丙基(化合物1a)Boc脱除反应(11-mer：TMSOTf-HMDS 方法)
反应根据实施例2进行。在反应开始之后19小时，通过LCMS对反应进行分析。然而，没有确认产物的分解。
[表6]
[表7]
分析(HPLC方法1：测定原料和目标产物的杂质)
(实施例4)
Boc-MeAla-MePhe-Leu-MeLeu-Thr(OBn)-MeGly-MeIle-Ala-MePhe-Me Val-Asp(OBn)-pip(化合物2a)的Boc脱除反应(11-mer：TfOH-BSTFA方法)
反应根据实施例1进行。
[表9]
[表10]
分析(HPLC方法1：测定原料和目标产物的杂质)
[表11]
分析(HPLC方法2：质谱)
(实施例5)
Boc-MePhe-Leu-MeLeu-Thr(OBn)-MeGly-O烯丙基(化合物4a)的Boc 脱除反应(5-mer：TfOH-BSTFA方法)
反应根据实施例1进行。
[表12]
[表13]
分析(HPLC方法1)
(实施例6)
用于Boc-MeLeu-Thr(OBn)-MeGly-O烯丙基(化合物8a)的Boc脱除及其伸长以形成Boc-Leu-MeLeu-Thr(OBn)-MeGly-O烯丙基的反应(3mer： TfOH-BSTFA方法)
将73.3mg的起始材料称取到反应容器中并溶解在5v/w的乙酸异丙酯中。在将反应容器用冰冷却之后，加入0.085ml的BSTFA和0.0047ml 的TfOH并将反应溶液搅拌两小时。在通过LC确认脱保护完成而没有主链断裂之后，加入5v/w的水和186.9mg的磷酸氢二钾。然后加入40.1mg 的Boc-Leu-OH一水合物和63.1mg的DMT-MM并将反应溶液在冰冷却下搅拌。在加入试剂之后17小时，通过LC确认反应完成。通过加入1N氢氧化钠水溶液来猝灭反应。通过液体分离处理来分离有机层，然后用1N 氢氧化钠水溶液洗涤一次，用5％硫酸氢钾水溶液洗涤两次，并且用5％氯化钠水溶液洗涤乙醇，并且随后在减压下浓缩。获得82.0mg(93％收率) 的粗产物，为油状液体。
[表14]
[表15]
脱保护反应的分析(HPLC方法1)
[表16]
伸长反应的分析(HPLC方法1)
(实施例6a)
用于Teoc-MeLeu-Thr(OBn)-MeGly-O烯丙基(化合物80b)的TeoC脱除及其伸长以形成Boc-Leu-MeLeu-Thr(OBn)-MeGly-O烯丙基(7a)的反应 (3-mer：TfOH-BSTFA方法)
化合物7a可以在没有主链断裂的情况下通过以实施例6中的相同操作脱除Teoc基团然后与Boc-Leu-OH反应来获得。
(实施例7)
Boc-MeIle-Ala-MePhe-MeVal-Asp(OBn)-pip(化合物5a)的Boc脱除反应(5-mer：TfOH-BSTFA方法)
根据在实施例6中所描述的实验方法以一锅法操作来进行脱保护和伸长反应。
[表17]
[表18]
脱保护反应的分析(HPLC方法1)
[表19]
伸长之后的产物的分析(HPLC方法1：测定原料和目标产物的杂质)
[表20]
伸长之后的产物的分析(HPLC方法2：质谱)
(实施例8)
Boc-Ala-MePhe-MeVal-Asp(OBn)-pip(化合物6a)的Boc脱除和伸长反应(4-mer：TfOH-BSTFA方法)
根据在实施例6中所描述的实验方法以一锅法操作来进行脱保护和伸长反应。
[表21]
[表22]
脱保护的产物的分析(HPLC方法1)
[表23]
伸长反应之后的分析(HPLC方法1)
(实施例9)
Boc-Leu-MeLeu-Thr(OBn)-MeGly-O烯丙基(化合物7a)的Boc脱除反应(4-mer：TfOH-BSTFA方法)
根据在实施例6中所描述的实验方法以一锅法操作来进行脱保护和伸长反应。
[表24]
[表25]
分析(HPLC方法1)
[表26]
分析(HPLC方法1)
(实施例10)
Boc-Leu-MeLeu-Thr(OBn)-MeGly-O烯丙基(化合物7a)在已知的条件下的Boc脱除反应(4-mer：HCl方法)(Russ.J.Bioorg.Chem.，2016，42， 143)。
将18.7mg的原料称取到反应容器中并溶解在10v/w的三氟乙醇中。然后，加入8.5μl(1.2eq)的4N HCl(乙酸乙酯溶液)并搅拌反应溶液。在加入试剂之后两小时，通过LCMS对反应进行分析(HPLC方法1)并且确认转化率(＝目标产物/(目标产物+起始材料))为81％。此时，分别检测到 0.861％的H-Thr(OBn)-MeGly-O烯丙基(化合物7c)和1.275％的 H-Leu-MeLeu-Thr(OBn)-OH(化合物7d)，为其中酰胺键断裂的化合物。
[表27]
分析(HPLC方法1)
(实施例11)
用于Boc-MePhe-MeVal-Asp(OBn)-pip(化合物9a)的脱保护及其伸长以形成Boc-Ala-MePhe-MeVal-Asp(OBn)-pip的反应(3-mer： TMSOTf-BSTFA方法)
根据在实施例6中所描述的实验方法以一锅法操作来进行脱保护和伸长反应。
[表28]
[表29]
脱保护反应的分析(HPLC方法1)
[表30]
伸长反应的分析(HPLC方法1)
(实施例12)
Boc-MePhe-MeVal-Asp(OBn)-pip(化合物9a)的脱保护(3-met： TMSOTf-MSTFA方法)
根据在实施例6中所描述的实验方法以一锅法操作来进行脱保护和伸长反应。
[表31]
[表32]
脱保护反应的分析(HPLC方法1)
[表33]
伸长反应的分析(HPLC方法1)
(实施例13)
Boc-MePhe-MeVal-Asp(OBn)-pip(化合物9a)的脱保护(3-mer：TMSOTf-BSA方法，TMSOTf 2.4eq，BSA 2.4eq)
根据在实施例6中所描述的实验方法以一锅法操作来进行脱保护和伸长反应。
[表34]
[表35]
脱保护反应的分析(HPLC方法1)
[表36]
伸长反应的分析(HPLC方法1)
(实施例14)
Boc-MePhe-MeVal-Asp(OBn)-pip(化合物9a)的脱保护(3-mer： TMSOTf-HMDS方法)
将107.4mg的原料称取到反应容器中并溶解在5v/w的乙酸乙酯中，并且将反应容器用冰冷却。在10分钟之后，在氮气氛下依次加入0.085ml (2.4eq)的HMDS(1，1，1，3，3，3-六甲基二硅氮烷)和35μl(1.2eq)的 TMSOTf，并搅拌反应溶液。在加入试剂之后两小时，通过LCMS对反应进行分析发现转化率为55.8％。因此，进一步加入20μl(0.69eq)的 TMOSTf。在加入试剂之后一小时，通过LCMS确认原料消失。确认没有酰胺键断裂。
向反应容器中加入373.4mg(13.3eq)的磷酸氢二钾，之后加入0.89ml 的水并将反应溶液搅拌20分钟。
然后向反应容器中加入3ml的乙酸乙酯，并且将两层分离。有机层用1ml的饱和碳酸氢钠水溶液和1ml卤水的混合物。将所得的有机层浓缩。
然后将所得的油状液体溶解在1ml的乙酸乙酯中，并加入251.0mg 的磷酸氢二钾。在加入0.89ml的水之后，将反应容器用冰冷却。加入36.8 mg的Boc-Ala-OH和79.5mg DMT-MM，并将反应溶液在冰浴中搅拌过夜。在15.5小时之后，通过LCMS确认原料消失，然后进行液体分离处理。将所得的有机层用5％碳酸钾洗涤两次，用水洗涤一次，用5％硫酸氢钾洗涤两次，并且用卤水洗涤一次，并浓缩。获得0.1075g(90％收率) 的粗产物，为白色固体。
[表37]
[表38]
脱保护反应的分析(HPLC方法1)
[表39]
伸长反应的分析(HPLC方法1)
B.亲电物种清除剂的筛选 (实施例15)
Boc-MePhe-MeVal-Asp(OBn)-pip(化合物9a)的脱保护
(碱：N-(三甲基甲硅烷基)二乙胺)
将99.5mg的原料称取到反应容器中并溶解在5v/w的乙酸乙酯中，并且将反应容器用冰冷却。在氮气氛下依次加入0.070ml(2.4eq)的N-((三甲基甲硅烷基)二乙胺)和0.032ml(1.2eq)的TMSOTf，并搅拌反应溶液。在加入试剂之后1.5小时，通过LCMS对反应进行分析发现转化率为30％。因此，进一步加入0.029ml(1.1eq)的TMOSTf。在反应开始之后四小时，通过LCMS对反应进行分析并且确认原料消失。此时，确认没有酰胺键断裂。将反应溶液搅拌过夜，并在反应开始之后20小时，再次通过LCMS 来对反应进行分析。同样在此时，确认没有酰胺键断裂。
在反应开始之后21小时，将0.2032g的磷酸氢二钾和0.50ml的水加入到反应溶液中，然后将其搅拌30min。反应溶液用4ml的乙酸乙酯稀释，然后将两个层分离以提供有机层。将所得的有机层用0.5ml卤水和0.5ml的饱和碳酸氢钠水溶液的混合溶剂洗涤两次。然后将有机层用 0.5ml卤水洗涤并浓缩。将剩余物溶解在4ml的乙酸异丙酯中并用1ml 的0.5M氢氧化钠水溶液和0.5ml卤水的混合溶剂洗涤两次。然后，有机层用0.5ml的10％盐水洗涤并在减压下浓缩，以97％收率得到81.7mg 的脱保护的产物。
[表40]
[表41]
分析(HPLC方法1)
(实施例16)
Boc-MePhe-MeVal-Asp(OBn)-pip(化合物9a)的脱保护
(碱：N-(三甲基甲硅烷基)吗啉)
实验根据实施例15中所描述的方法进行。
[表42]
[表43]
分析(HPLC方法1)
(实施例17)
Boc-MePhe-MeVal-Asp(OBn)-pip(化合物9a)的脱保护
(碱：N-叔丁基三甲基甲硅烷基胺)
实验根据实施例15中所描述的方法进行。
[表44]
[表45]
分析(HPLC方法1)
(实施例18)
Boc-MePhe-MeVal-Asp(OBn)-pip(化合物9a)的脱保护
(碱：2，2，4，4-四甲基戊酮亚胺)
实验根据实施例15中所描述的方法进行。
[表46]
[表47]
分析(HPLC方法1)
(实施例19)
Boc-MePhe-MeVal-Asp(OBn)-pip(化合物9a)的脱保护
(碱：异丙烯基氧基三甲基硅烷)
实验根据实施例15中所描述的方法进行。
[表48]
[表49]
分析(HPLC方法1)
(实施例20)
Boc-MePhe-MeVal-Asp(OBn)-pip(化合物9a)的脱保护
(碱：二甲基乙烯酮甲基三甲基甲硅烷基缩醛)
实验根据实施例15中所描述的方法进行。
[表50]
[表51]
分析(HPLC方法1)
(实施例21)
Boc-MePhe-MeVal-Asp(OBn)-pip(化合物9a)的脱保护
(碱：3，4-二氢-2H-吡喃)
实验根据实施例15中所描述的方法进行。
[表52]
[表53]
分析(HPLC方法1)
(实施例22)
Boc-MePhe-MeVal-Asp(OBn)-pip(化合物9a)的脱保护
(碱：N，N，N′，N′-四甲基-1，8-萘二胺)
实验根据实施例15中所描述的方法进行。
[表54]
[表55]
分析(HPLC方法1)
(上述产物的LCA％是通过排除在后处理之后剩余的碱而获得的值。)
(实施例23)
Boc-MePhe-MeVal-Asp(OBn)-pip(化合物9a)的脱保护
(碱：2，2′-亚异丙基双[(4S)-4-叔丁基-2-
实验根据实施例15中所描述的方法进行。
[表56]
[表57]
分析(HPLC方法1)
(上述产物的LCA％是通过排除在后处理之后剩余的碱而获得的值。)
(实施例24)
Boc-MePhe-MeVal-Asp(OBn)-pip(化合物9a)的脱保护
(碱：二异丙基碳二亚胺)
实验根据实施例15中所描述的方法进行。
[表58]
[表59]
分析(HPLC方法1)
(上述产物的LCA％是通过排除在后处理之后剩余的碱而获得的值。)
C.亲电物种清除剂的筛选(11-mer肽中的实验)
(实施例25)
Boc-MeIle-Ala-MePhe-MeVal-Asp(pip)-MeAla-MePhe-Leu-MeLeu-Thr (OBn)-MeGly-O烯丙基(化合物1a)的Boc脱除反应(11-mer： TMSOTf-BSTFA方法)
实验根据实施例2来进行。
[表60]
[表61]
分析(HPLC方法1：测定原料和目标产物的杂质)
(实施例26)
Boc-MeIle-Ala-MePhe-MeVal-Asp(pip)-MeAla-MePhe-Leu-MeLeu-Thr (OBn)-MeGly-O烯丙基(化合物1a)的Boc脱除反应(11-mer：TMSOTf-BSA 方法)
实验根据实施例2来进行。
[表62]
[表63]
分析(HPLC方法1：测定原料和目标产物的杂质)
(实施例27)
Boc-MeIle-Ala-MePhe-MeVal-Asp(pip)-MeAla-MePhe-Leu-MeLeu-Thr (OBn)-MeGly-O烯丙基(化合物1a)的Boc脱除反应(11-mer：TMSOTf-甲硅烷基胺方法)
实验根据实施例2来进行。
[表64]
[表65]
分析(HPLC方法1：测定原料和目标产物的杂质)
(实施例28)
Boc-MeIle-Ala-MePhe-MeVal-Asp(pip)-MeAla-MePhe-Leu-MeLeu-Thr (OBn)-MeGly-O烯丙基(化合物1a)的Boc脱除反应(11-mer：TMSOTf-甲硅烷基胺方法)
实验根据实施例2来进行。
[表66]
[表67]
分析(HPLC方法1：测定原料和目标产物的杂质)
(实施例29)
Boc-MeIle-Ala-MePhe-MeVal-Asp(pip)-MeAla-MePhe-Leu-MeLeu-Thr (OBn)-MeGly-O烯丙基(化合物1a)的Boc脱除反应(11-mer：TMSOTf-亚胺方法)
实验根据实施例2来进行。
[表68]
[表69]
分析(HPLC方法1：测定原料和目标产物的杂质)
(实施例30)
Boc-MeIle-Ala-MePhe-MeVal-Asp(pip)-MeAla-MePhe-Leu-MeLeu-Thr (OBn)-MeGly-O烯丙基(化合物1a)的Boc脱除反应(11-mer： TMSOTf-MSTFA方法)
实验根据实施例2来进行。
[表70]
[表71]
分析(HPLC方法1：测定原料和目标产物的杂质)
(实施例31)
Boc-MeIle-Ala-MePhe-MeVal-Asp(pip)-MeAla-MePhe-Leu-MeLeu-Thr (OBn)-MeGly-O烯丙基(化合物1a)的Boc脱除反应(11-mer：TMSOTf-甲硅烷基胺方法)
实验根据实施例2来进行。
[表72]
[表73]
分析(HPLC方法1：测定原料和目标产物的杂质)
(实施例32)
Boc-MeIle-Ala-MePhe-MeVal-Asp(pip)-MeAla-MePhe-Leu-MeLeu-Thr (OBn)-MeGly-O烯丙基(化合物1a)的Boc脱除反应(11-mer：TMSOTf-烯酮甲硅烷基缩醛方法)
实验根据实施例2来进行。
[表74]
[表75]
分析(HPLC方法1：测定原料和目标产物的杂质)
(实施例33)
Boc-MeIle-Ala-MePhe-MeVal-Asp(pip)-MeAla-MePhe-Leu-MeLeu-Thr (OBn)-MeGly-O烯丙基(化合物1a)的Boc脱除反应(11-mer：TMSOTf-质子海绵方法)
实验根据实施例2来进行。
[表76]
(甚至在后处理之后还保留碱。)
[表77]
分析(HPLC方法1：测定原料和目标产物的杂质)
(上述产物的LCA％是通过排除在后处理之后剩余的碱而获得的值。)
(实施例34)
Boc-MeIle-Ala-MePhe-MeVal-Asp(pip)-MeAla-MePhe-Leu-MeLeu-Thr (OBn)-MeGly-O烯丙基(化合物1a)的Boc脱除反应(11-mer：TMSOTf-二甲基吡啶方法)
将18.8mg的原料称取到反应容器中并溶解在10v/w的乙酸乙酯中。然后加入0.005ml(3.6eq)的2，6-二甲基吡啶和0.0078ml(3.6eq)的TMSOTf并搅拌反应溶液。在加入试剂之后四小时，通过LCMS对反应进行分析(HPLC方法1)并且确认转化率(＝目标产物/(目标产物+起始材料)) 为14％。接下来，在加入试剂之后19小时，通过LCMS对反应进行分析，发现转化率仍然为14％。确认没有酰胺键断裂。
[表78]
[表79]
分析(HPLC方法1：测定原料的纯度)
[表80]
分析(HPLC方法1：测定转化率)
(实施例35)
Boc-MeIle-Ala-MePhe-MeVal-Asp(pip)-MeAla-MePhe-Leu-MeLeu-Thr (OBn)-MeGly-O烯丙基(化合物1a)的Boc脱除反应(11-mer：TMSOTf-二甲基吡啶方法)
将89.3mg的原料称取到反应容器中并溶解在1ml的乙酸乙酯中。然后加入0.016ml(2.4eq)的2，6-二甲基吡啶和0.012ml(1.2eq)的TMSOTf并搅拌反应溶液。在加入试剂之后1.25小时，通过LCMS对反应进行分析(HPLC方法1)，发现转化率(＝目标产物/(目标产物+起始材料)) 为0％。因此，进一步加入0.032ml(4.8eq)的2，6-二甲基吡啶和0.024ml (2.4eq)的TMSOTf。分别在进一步加入试剂之后1.25小时和14小时，通过LCMS对反应进行分析，发现转化率仍然为0％。确认没有酰胺键断裂。
[表81]
[表82]
分析(HPLC方法1：测定原料的纯度)
[表83]
分析(HPLC方法1：测定转化率)
(实施例36)
Boc-MeIle-Ala-MePhe-MeVal-Asp(pip)-MeAla-MePhe-Leu-MeLeu-Thr (OBn)-MeGly-O烯丙基(化合物1a)的Boc脱除反应(11-mer：TMSOTf-2，6- 二-叔丁基吡啶方法)
将14.9mg的原料称取到反应容器中并溶解在0.2ml的乙酸乙酯中。然后加入0.011ml(5.4eq)的2，6-二-叔丁基吡啶和0.0062ml(3.6eq)的 TMSOTf并搅拌反应溶液。在加入试剂之后四小时，通过LCMS对反应进行分析(HPLC方法1)，发现转化率(＝目标产物/(目标产物+起始材料)) 为59％。在开始反应之后22小时，再次通过LCMS对反应进行分析，发现转化率仍然为59％。确认没有酰胺键断裂。
[表84]
[表85]
分析(HPLC方法1：测定原料的纯度)
[表86]
分析(HPLC方法1：测定转化率)
(实施例37)
Boc-MeIle-Ala-MePhe-MeVal-Asp(pip)-MeAla-MePhe-Leu-MeLeu-Thr (OBn)-MeGly-O烯丙基(化合物1a)的Boc脱除反应(11-mer：TMSOTf-叔胺方法)
将17.7mg的原料称取到反应容器中并溶解在0.20ml的乙酸乙酯中。然后加入0.0057ml(3.6eq)的三乙基胺和0.0074ml(3.6eq)的TMSOTf并搅拌反应溶液。在加入试剂之后一小时和四小时，通过LCMS对反应进行分析(HPLC方法1)，发现转化率(＝目标产物/(目标产物+起始材料))在每个时间处仅为0.7％。确认没有酰胺键断裂。
[表87]
[表88]
分析(HPLC方法1：测定原料的纯度)
[表89]
分析(HPLC方法1：测定转化率)
(实施例38)
Boc-MeIle-Ala-MePhe-MeVal-Asp(pip)-MeAla-MePhe-Leu-MeLeu-Thr (OBn)-MeGly-O烯丙基(化合物1a)的Boc脱除反应(11-mer：TMSOTf-叔胺方法)
将19.1mg的原料称取到反应容器中并溶解在0.20ml的乙酸乙酯中。然后加入0.0074ml(3.6eq)的二异丙基乙胺和0.0077ml(3.6eq)的 TMSOTf并搅拌反应溶液。在加入试剂之后两小时和四小时，通过LCMS 对反应进行分析(HPLC方法2)，发现转化率(＝目标产物/(目标产物+起始材料))在每个时间处仅为0.8％以下。确认没有酰胺键断裂。
[表90]
[表91]
分析(HPLC方法1：测定原料的纯度)
[表92]
分析(HPLC方法1：测定转化率)
(实施例39)
Boc-MeIle-Ala-MePhe-MeVal-Asp(pip)-MeAla-MePhe-Leu-MeLeu-Thr (OBn)-MeGly-O烯丙基(化合物1a)的Boc脱除反应(11-mer：TMSOTf-叔胺方法)
将92.9mg的原料称取到反应容器中并溶解在1ml的乙酸乙酯中，然后将反应容器用冰冷却。然后在氮气氛下加入0.015ml(2.4eq)的二异丙基乙胺和0.013ml(1.2eq)的TMSOTf，并搅拌反应溶液。在加入试剂之后两小时对反应进行分析，发现转化率(＝目标产物/(目标产物+起始材料))为0％。因此，在加入试剂之后三小时，进一步加入0.030ml(4.8eq) 的二异丙基乙胺和0.026ml(2.4eq)的TMSOTf。在进一步加入试剂之后三小时，再次对反应进行分析，发现转化率为0％。确认没有酰胺键断裂。
[表93]
[表94]
分析(HPLC方法1：测定原料的纯度)
[表95]
分析(HPLC方法1：测定转化率)
(实施例40)
Boc-MeIle-Ala-MePhe-MeVal-Asp(pip)-MeAla-MePhe-Leu-MeLeu-Thr (OBn)-MeGly-O烯丙基(化合物1a)的Boc脱除反应(11-mer：在缺乏有机碱的情况下仅使用TMSOTf进行。)
将18.3mg的原料称取到反应容器中并溶解在0.2ml的乙酸乙酯中，然后将反应容器用冰冷却。然后在氮气氛下加入0.0077ml(3.6eq)的 TMSOTf，并搅拌反应溶液。在加入试剂之后1.5小时对反应进行分析，确认多种酰胺键断裂的产物以68％的转化率(＝目标产物/(目标产物+起始材料))产生。
[表96]
[表97]
分析(HPLC方法1：测定原料的纯度)
[表98]
分析(HPLC方法1：测定转化率和副产物的生成率)
化合物1g的结构是未知的。
(实施例41)
Boc-MeIle-Ala-MePhe-MeVal-Asp(pip)-MeAla-MePhe-Leu-MeLeu-Thr (OBn)-MeGly-O烯丙基(化合物1a)的Boc脱除反应(11-mer：在缺乏有机碱的情况下利用TMSOTf和三异丙基硅烷进行。)
将20.5mg的原料称取到反应容器中并溶解在0.2ml的乙酸乙酯中，然后将反应容器用冰冷却。然后在氮气氛下加入0.0097ml(3.6eq)的三异丙基硅烷和0.0085ml(3.6eq)的TMSOTf，并搅拌反应溶液。在加入试剂之后一小时对反应进行分析，确认多种酰胺键断裂的产物以43％的转化率(＝目标产物/(目标产物+起始材料))产生。
[表99]
[表100]
分析(HPLC方法1：测定原料的纯度)
[表101]
分析(HPLC方法1：测定转化率和副产物的生成率)
化合物1g的结构是未知的。
(实施例42)
Boc-MeIle-Ala-MePhe-MeVal-Asp(pip)-MeAla-MePhe-Leu-MeLeu-Thr (OBn)-MeGly-O烯丙基(化合物1a)的Boc脱除反应(11-mer：TFA方法)
将35.3mg的原料称取到反应容器中并溶解在10v/w的二氯甲烷中，然后将反应容器用冰冷却。然后在氮气氛下加入0.004ml(2.3eq)的三氟乙酸，并搅拌反应溶液。在加入试剂之后10分钟对反应进行分析，发现转化率(＝目标产物/(目标产物+起始材料))为0％。因此，进一步加入0.004 ml(2.3eq)的三氟乙酸。在进一步加入试剂之后10分钟再次对反应进行分析，发现转化率为0％。因此，进一步加入0.0094ml(5.4eq)的三氟乙酸。在进一步加入试剂之后10分钟，将反应溶液温热至室温并继续搅拌。在温热至室温之后四小时，对反应进行分析以确认，酰胺键断裂的产物1e 以2％的转化率产生。
[表102]
[表103]
分析(HPLC方法1：测定原料的纯度)
[表104]
分析(HPLC方法1：测定转化率和副产物的生成率)
化合物1g的结构是未知的。
(实施例43)
Boc-MeIle-Ala-MePhe-MeVal-Asp(pip)-MeAla-MePhe-Leu-MeLeu-Thr (OBn)-MeGly-O烯丙基(化合物1a)的Boc脱除反应(11-mer： TFA-TIPS-H
参考文献：J.Am.Chem.Soc.，2015，137，13488
将15.9mg的原料称取到反应容器中，加入0.0125ml的水和0.0125 ml的三异丙基硅烷，并将反应容器冷却至-10℃。然后加入0.48ml的三氟乙酸并搅拌反应溶液。在加入试剂之后两小时对反应进行分析，确认酰胺键断裂的产物1d和1e以89％的转化率(＝目标产物/(目标产物+起始材料))产生。在加入试剂之后14.5小时再次对反应进行分析，确认原料被消耗并且酰胺键断裂的产物1d和1e渐增地产生。
[表105]
[表106]
分析(HPLC方法1：测定原料的纯度)
[表107]
分析(HPLC方法1：在反应之后两小时处测定转化率和副产物的生成率)
[表108]
分析(HPLC方法1：在反应之后14.5小时处的目标产物和副产物的生成率)
(实施例44)
Boc-MeIle-Ala-MePhe-MeVal-Asp(pip)-MeAla-MePhe-Leu-MeLeu-Thr (OBn)-MeGly-O烯丙基(化合物1a)的Boc脱除反应(11-mer： TFA-TIPS-H
参考文献：J.Am.Chem.Soc.，2012，134，13244
将10.3mg的苯酚称取到反应容器中，加入0.034ml的水和0.025ml 的三异丙基硅烷，并将反应容器冷却至-10℃。然后加入0.50ml的三氟乙酸。在加入之后六分钟，加入13.4mg的原料并搅拌反应溶液。在加入原料之后两小时对反应进行分析，确认酰胺键断裂的产物1d和1e以82％的转化率(＝目标产物/(目标产物+起始材料))产生。在加入原料之后七小时再次对反应进行分析，确认原料被消耗并且酰胺键断裂的产物1d和1e 渐增地产生。
[表109]
[表110]
分析(HPLC方法1：测定原料的纯度)
[表111]
分析(HPLC方法1：在反应之后的两小时测定转化率和副产物的生成率)
[表112]
分析(HPLC方法1：在反应之后的五小时处的目标产物和副产物的生成率)
如实施例2、3以及26至44中所显示的，发现亚氨酸酯、酰胺、烯酮缩醛、烯醇醚、亚胺、胺、二胺和二烷基碳二亚胺作为亲电物种清除剂是优异的，抑制主链破坏，并且允许有效进行具有长主链的钛如11-mer 的Boc脱除反应。
D.在tBu脱除反应的TFA方法和TMSOTf-HMDS之间的比较实验(表113)
(实施例45)
化合物13a的t-Bu脱除反应(TFA方法)
将29.8mg的底物13a称取到反应容器中并溶解在10v/w的二氯甲烷中。在室温下向该溶液中加入TFA(10eq.)。在加入试剂之后四小时，进一步加入TFA(10eq.)。在进一步加入试剂之后1.5小时，通过LCMS对反应进行分析，发现反应转化率为52％。纯度降低了22％，同时观察到 10％的由于酰胺键断裂的副产物。
(实施例46)
化合物13a的t-Bu脱除反应(TMSOTf-HMDS方法)
将30.0mg的底物13a称取到反应容器中并溶解在10v/w的乙酸乙酯中。在0℃下将HMDS(3.0eq.)和TMSOTf(2.0eq)相继加入到溶液中。在加入试剂之后两小时，将反应溶液温热至室温。在温热之后2.5小时，进一步加入HMDS(3eq.)和TMSOTf(2eq.)。在进一步加入试剂之后30 分钟，通过LCMS对反应进行分析，确认转化率为99％以上。此时，确认没有酰胺键断裂。
(实施例47)
化合物14a的t-Bu脱除反应(TFA方法)
将29.7mg的底物14a称取到反应容器中并溶解在10v/w的二氯甲烷中。在室温下向该溶液中加入TFA(20eq.)。在加入试剂之后七小时，通过LCMS对反应进行分析，发现反应转化率为92％。纯度降低了46％，同时观察到24％的由于酰胺键断裂产生的副产物。
(实施例48)
化合物14a的t-Bu脱除反应(TMSOTf-HMDS方法)
将30.0mg的底物14a称取到反应容器中并溶解在10v/w的乙酸乙酯中。在0℃下将HMDS(3.0eq.)和TMSOTf(2.0eq)相继加入到溶液中。在加入试剂之后六小时，通过LCMS对反应进行分析并且确认原料消失。此时，确认没有酰胺键断裂。在确认反应完成之后，44.5mg(8.0eq)的磷酸氢钾和0.30ml的水加入到反应溶液中，然后在冰冷却下将其搅拌30 分钟。将1ml的乙酸乙酯加入到反应溶液中，然后将其用0.30ml的盐水洗涤。将有机层通过硅藻土过滤，然后浓缩，并且在减压下干燥，得到 26.8mg的2b，纯度为99％。
(实施例49)
化合物15a的t-Bu脱除反应(TFA方法)
将29.9mg的底物15a称取到反应容器中并溶解在10v/w的二氯甲烷中。在室温下向该溶液中加入TFA(20eq.)。在加入试剂之后5.5小时，通过LCMS对反应进行分析，发现反应转化率为50％。观察到28％的由于酰胺键断裂产生的副产物。
(实施例50)
化合物15a的t-Bu脱除反应(TMSOTf-HMDS方法)
将30.0mg的底物15a称取到反应容器中并溶解在10v/w的乙酸乙酯中。在室温下将HMDS(3.6eq)和TMSOTf(2.4eq)相继加入到溶液中。在加入试剂之后五小时，进一步加入HMDS(1.8eq.)和TMSOTf(1.2eq.)。在进一步加入试剂之后一小时，通过LCMS对反应进行分析并且确认原料消失。此时，确认没有酰胺键断裂。
(实施例51)
化合物16a的t-Bu脱除反应(TFA方法)
将30.2mg的底物16a称取到反应容器中并溶解在10v/w的二氯甲烷中。在室温下向该溶液中加入TFA(20eq.)。在加入试剂之后4.5小时，进一步加入TFA(10eq.)。在加入试剂之后一小时，通过LCMS对反应进行分析，发现反应转化率为65％。观察到7.0％的由于酰胺键断裂产生的副产物。
(实施例52)
化合物16a的t-Bu脱除反应(TMSOTf-HMDS方法)
将29.9mg的底物16a称取到反应容器中并溶解在10v/w的乙酸乙酯中。在室温下将HMDS(3.6eq)和TMSOTf(2.4eq)相继加入到溶液中。在加入试剂之后四小时，通过LCMS对反应进行分析并且确认原料消失。
此时，确认没有酰胺键断裂。
(实施例53)
化合物17a的t-Bu脱除反应(TFA方法)
将50.0mg的底物17a称取到反应容器中并溶解在10v/w的二氯甲烷中。在0℃下向该溶液中加入TFA(5eq.)。在加入试剂之后两小时，加入 TFA(5eq.)。在另外的15.5小时之后，将反应溶液温热至室温。在温热之后三小时，加入TFA(10eq.)。在另外的1.5小时之后，加入TFA(20eq.)。在进一步加入试剂之后1.5小时，通过LCMS对反应进行分析，发现反应转化率为54％。观察到26％的由于酰胺键断裂产生的副产物。
(实施例54)
化合物17a的t-Bu脱除反应(TMSOTf-HMDS方法)
将30.0mg的底物17a称取到反应容器中并溶解在10v/w的乙酸乙酯中。在0℃下将HMDS(5.4eq.)和TMSOTf(3.6eq)相继加入到溶液中。在加入试剂之后四小时，将反应溶液温热至室温。在温热之后三小时，通过LCMS对反应进行分析并且确认原料消失。此时，确认没有酰胺键断裂。
(实施例55)
化合物18a的t-Bu脱除反应(TFA方法)
将29.9mg的底物18a称取到反应容器中并溶解在10v/w的二氯甲烷中。在0℃下向该溶液中加入TFA(20eq.)。在加入试剂之后4.5小时，进一步加入TFA(10eq.)并将反应溶液温热至室温。在进一步加入试剂之后两小时，通过LCMS对反应进行分析，发现反应转化率为82％。观察到34％的由于酰胺键断裂产生的副产物。
(实施例56)
化合物18a的t-Bu脱除反应(TMSOTf-HMDS方法)
将29.8mg的底物18a称取到反应容器中并溶解在10v/w的乙酸乙酯中。在0℃下将HMDS(7.2eq.)和TMSOTf(4.8eq)相继加入到溶液中。在加入试剂之后三小时，将反应溶液温热至室温。在温热之后3.5小时，通过LCMS对反应进行分析并且确认原料消失。此时，确认没有酰胺键断裂。
(实施例57)
化合物19a的t-Bu脱除反应(TFA方法)
将50.0mg的底物19a称取到反应容器中并溶解在10v/w的二氯甲烷中。在0℃下向该溶液中加入TFA(5eq.)。在加入试剂之后两小时，加入 TFA(5eq.)。在另外的15.5小时之后，将反应溶液温热至室温。在温热之后三小时，加入TFA(10eq.)。在另外的1.5小时之后，加入TFA(20eq.)。在进一步加入试剂之后1.5小时，通过LCMS对反应进行分析，发现反应转化率为82％。观察到14％的由于酰胺键断裂产生的副产物。
(实施例58)
化合物19a的t-Bu脱除反应(TMSOTf-HMDS方法)
将30.0mg的底物19a称取到反应容器中并溶解在10v/w的乙酸乙酯中。在0℃下将HMDS(3.6eq.)和TMSOTf(2.4eq)相继加入到溶液中。在加入试剂之后3.5小时，将反应溶液温热至室温并且进一步加入HMDS (3.6eq.)和TMSOTf(2.4eq.)。在进一步加入试剂之后一小时，通过LCMS 对反应进行分析并且确认原料消失。此时，确认没有酰胺键断裂。
如实施例45至58中所显示的，发现在Bu脱除反应中，与常规TFA 方法相比，使用甲硅烷基化剂和亲电物种清除剂的组合的 TMSOTf-HMDS方法不会引起主链破坏并且允许脱保护反应更有效地进行。
[表113]
反应条件和实验结果
(产物的鉴定)
[表114]
(HPLC方法1)
目标产物的MS(主要峰)和保留时间(在TMSOTf/HMDS方法的实施例中)
[表115]
分解的产物的MS和保留时间
以下提供化合物13c至19h的结构。
(实施例59)
Fmoc-MeAsp(OtBu)-pip(化合物12a)的t-Bu脱除反应(1-mer：TFA方法)
将48.0mg的原料称取到反应容器中并溶解在9v/w的二氯甲烷中。然后加入1v/w的三氟乙酸并搅拌反应溶液。在加入试剂之后19小时，通过LCMS对反应进行分析(HPLC方法4)并且确认转化率(＝目标产物/(目标产物+起始材料))为77％。此时，观察到作为其中酰胺键被破坏的化合物的重排产物12c和水解物12d。还产生未知结构的杂质。
[表116]
原料纯度分析(HPLC方法1)
[表117]
分析(HPLC方法1)
[表118]
分析(HPLC方法4)
(实施例60)
Fmoc-MeAsp(OtBu)-pip(化合物12a)的t-Bu脱除反应(1-mer： TMSOTf-HMDS方法)
实验根据实施例2进行。
[表119]
[表120]
分析(HPLC方法1)
[表121]
分析(HPLC方法4)
E.在t-Bu脱除反应中的TFA方法和TMSOTf-HMDS方法之间的比较实验(表122)
(实施例61)
化合物20a的t-Bu脱除反应(TFA方法)
将27.1mg的底物20a称取到反应容器中并溶解在10v/w的二氯甲烷中。在室温下向该溶液中加入TFA(10eq.)。在加入试剂之后八小时，通过LCMS对反应进行分析，发现反应转化率为76％。纯度降低了11％，同时观察到8.1％的由于酰胺键断裂产生的副产物。对于底物21a进行相同的反应(表122)。
(实施例62)
化合物20a的t-Bu脱除反应(TMSOTf-HMDS方法)
将27.6mg的底物20a称取到反应容器中并溶解在10v/w的乙酸乙酯中。在室温下将HMDS(2.4eq)和TMSOTf(2.4eq)相继加入到溶液中。在加入试剂之后两小时，通过LCMS对反应进行分析并且确认原料消失。此时，确认没有酰胺键断裂。
对于底物21a进行相同的反应(表122)。
[表122]
(产物的鉴定)
[表123]
(HPLC方法1)
产物和目标产物的主要峰和保留时间
F.在树脂脱除反应中的TFA方法和TMSOTf-HMDS方法之间的比较实验
(表124)
(实施例65)
树脂22a的树脂脱除反应(TFA方法)
将30.2mg的树脂22a称取到反应容器中，并且通过加入10v/w的二氯甲烷使树脂溶胀。在从反应溶液中除去二氯甲烷之后，在室温添加10 v/w％的TFA(5％二氯甲烷溶液)并将容器在25℃下振荡。在振荡开始之后一小时，通过LCMS对反应进行分析，发现产生7.8％的由于酰胺键断裂的副产物。对于树脂23a至24a进行相同的反应(表124)。
(实施例66)
树脂22a的树脂脱除反应(TMSOTf-HMDS方法)
将23.0mg的底物22a称取到反应容器中，并通过加入10v/w的1，2- 二氯乙烷使树脂溶胀。在从反应溶液中除去1，2-二氯乙烷之后，向反应容器中加入HMDS(3.6eq.)和TMSOTf(2.4eq.)在10v/w的1，2-二氯乙烷中的溶液。在25℃下搅拌四小时之后，通过LCMS对反应进行分析并且确认无酰胺键断裂。对于树脂23a至24a进行相同的反应(表124)。
[表124]
(产物的鉴定)
仪器：Waters ACQUITY UPLC H-Class
柱：Ascentis Express C18(2.7μm，4.6mmx50mm)，Supelco
洗脱剂：A)0.05％TFA/水，B)0.05％TFA/CH3CN
梯度(B)：
流速：1.0mL/min.
检测：210nm
注入体积：5μL
样品生产：25μL/0.975mL MeCN
仪器：WatersACQUITY UPLC H-Class
柱：Ascentis Express C18(2.7μm，4.6mm x50mm)，Supelco
洗脱剂：A)0.05％TFA/水，B)0.05％TFA/CH3CN
梯度(B)：
流速：1.0mL/min.
检测：210nm
注入体积：5μL
样品生产：5μL/1.00mL(MeCN0.950ml+0.1M磷酸盐缓冲液(pH 8.0)0.050ml)
仪器：Waters ACQUITY UPLC H-Class
柱：Ascentis Express C18(2.7μm，4.6mm x 50mm)，Supelco
洗脱剂：A)0.05％TFA/水，B)0.05％TFA/CH3CN
梯度(B)：
流速：1.0mL/min.
检测：210nm
注入体积：5μL
样品生产：5μL/1.00mL MeCN
仪器：Shimadzu LCMS-2020
柱：Ascentis Express C18(2.7μm，2.1mmx50mm)，Supelco
洗脱剂：A)0.1％FA/水，B)0.1％FA/CH
梯度(B)：
流速：1.0mL/min.
检测：210nm-400nm
注入体积：1μL
仪器：SHIMADZU LCMS-2020
柱：Ascentis Express C182.1mm x 50mm，Supelco
洗脱剂：A)0.1％FA/水，B)0.1％FA/CH
梯度(B)：
流速：1.0mL/min.
检测：PDA 210nm-400nm
注入体积：1μL
仪器：Waters Acquity UPLC/SQD2
柱：Ascentis Express C18(2.7μm，2.1mmx50mm)，Supelco
洗脱剂：A)0.1％FA/水，B)0.1％FA/CH
梯度(B)：
流速：1.0mL/min.
检测：210nm-400nm
注入体积：1μL
仪器：Waters Acquity UPLC/SQD2
柱：Ascentis Express C18(2.7μm，2.1mmx50mm)，Supelco
洗脱剂：A)0.1％FA/水，B)0.1％FA/CH
梯度(B)：
流速：1.0mL/min.
检测：210nm-400nm
注入体积：1μL
仪器：Waters Acquity UPLC/SQD
柱：Ascentis Express C18(2.7μm，2.1mmx50mm)，Supelco
洗脱剂：A)0.1％FA/水，B)0.1％FA/CH3CN
梯度(B)：
流速：1.0mL/min.
检测：210nm-400nm
注入体积：2μL
[表125]
G.在树脂脱除反应中的TFA方法和TMSOTf-HMDS方法之间的比较实验(表126)
(实施例71)
树脂25a的CTC树脂脱除和t-Bu脱除反应(TFA方法)
将20.0mg的树脂25a称取到反应容器中，并且通过加入10v/w的二氯甲烷使树脂溶胀。在从反应溶液中除去二氯甲烷之后，在室温下加入 10v/w％的TFA(10％二氯甲烷溶液)并将容器在25℃下振荡。在振荡开始之后一小时，通过LCMS对反应进行分析，发现反应转化率为17％。产生3.8％的由于酰胺键断裂的副产物。对于树脂26a进行相同的反应(表 126)。
(实施例72)
树脂25a的CTC树脂脱除和tBu脱保护反应(TMSOTf-HMDS方法)
将23.0mg的底物25a称取到反应容器中，并通过加入10v/w的1，2- 二氯乙烷使树脂溶胀。在从反应溶液中除去1，2-二氯乙烷之后，向反应容器中加入HMDS(10.7eq.)和TMSOTf(7.1eq.)在10v/w的1，2-二氯乙烷中的溶液。在25℃下振荡四小时之后，通过LCMS对反应进行分析并且确认t-Bu酯消失。对于树脂26a进行相同的反应(表126)。
[表126]
(产物的鉴定)
[表127]
(HPLC方法1)
产物和目标产物的主要峰和保留时间
H.用于Boc脱除、t-Bu脱除和树脂脱除反应的原料的合成
(实施例75)
用于Boc脱除反应的3-mer原料的合成(Boc-Asp(OBn)-pip)
合成根据实施例88进行。
[表128]
[表129]
分析(HPLC方法1)
(实施例76)
2-mer(Boc-MeVal-Asp(OBn)-pip)的合成
将5.714g的原料称取到反应容器中并加入29ml的MeCN。在加入 2.3ml的甲磺酸之后，将油浴设置在45℃下并且将反应容器加热。在70 分钟之后，使反应容器回到室温，然后浸没在冰浴中。向反应溶液中加入 14ml的二异丙基乙胺，接着加入4.046g的Boc-MeVal-OH和5.284g的 DMT-MM。在加入试剂之后一小时，将反应溶液浓缩。通过向浓缩物中加入乙酸乙酯和5％碳酸钾水溶液来使反应猝灭。通过液体分离处理来分离有机层，然后用5％碳酸钾水溶液洗涤两次，用水洗涤一次，用5％硫酸氢钾水溶液洗涤一次，用10％氯化钠水溶液洗涤一次，并且用卤水洗涤一次。将有机层在减压下浓缩，得到7.055g(96％收率)的淡黄色固体。
[表130]
[表131]
分析(HPLC方法1)
(实施例77)
3-mer(Boc-MePhe-MeVal-Asp(OBn)-pip)的合成
将7.055g的原料称取到反应容器中并加入35ml的MeCN。在加入 2.2ml的甲磺酸之后，将油浴设置在45℃并且将反应容器加热。在70分钟之后，使反应容器回到室温，然后将反应溶液浓缩。在浓缩之后，加入 35ml的乙酸乙酯，将反应容器浸没在冰浴中，然后加入9.466g的碳酸氢钠。然后加入35ml的水，接着加入4.61g的Boc-MePhe-OH和7.73g 的DMT-MM。在六小时之后，通过LCMS跟踪反应，确认原料消耗率为 99％。在分析之后一小时，通过加入乙酸乙酯和水来进行液体分离，得到有机层。将有机层用5％碳酸钾水溶液洗涤三次，用水洗涤一次，用5％硫酸氢钾水溶液洗涤三次，并且用卤水洗涤一次。将有机层在减压下浓缩并将所得的粗产物通过硅胶柱色谱纯化，得到6.9757g(75％收率)的目标产物，为白色固体。
[表132]
[表133]
分析(HPLC方法1)
(实施例78)
Boc-MeGly-O烯丙基的合成
将9.286g的原料称取到反应容器中并加入46m1的DMF。将反应容器用冰冷却，然后加入10.20g的碳酸钾和4.15m1的烯丙基溴。在15分钟之后，使反应容器回到室温，然后搅拌过夜。向反应容器中加入MTBE，并且将反应用水猝灭。在液体分离之后，将有机层用卤水洗涤一次。将有机层用硫酸镁干燥，过滤，并在减压下浓缩。将所得的粗产物通过硅胶柱色谱纯化，得到10.083g(90％收率)的目标产物31，为透明油状液体。
[表134]
(实施例79)
Boc-Thr(OBn)-MeGly-O烯丙基的合成
根据实施例76进行脱保护和缩合反应。
[表135]
[表136]
分析(HPLC方法1)
(实施例80)
Boc-MeLeu-Thr(OBn)-MeGly-O烯丙基的合成
通过如上所述的相同方法进行脱保护和缩合反应。
(实施例80a)
通过Teoc-MeLeu-OH与五氟苯酚(Pfp-OH)的酯化反应来合成 Teoc-MeLeu-OPfp
将926mg的原料和736mg的五氟苯酚(Pfp-OH)分别称取到反应容器中，并加入7.8ml的乙酸异丙酯。加入767mg的EDCI盐酸盐并将反应溶液在室温下搅拌两小时。将有机层用8ml的0.5N盐酸洗涤两次并且用8ml的5％碳酸钾水溶液洗涤两次，并且向有机层中加入2g的硫酸钠。将固体通过过滤除去并且将有机层在减压下浓缩，得到目标产物，为透明油状液体。将所获得的化合物在未经纯化下用于下一步反应。
[表137]
分析(HPLC方法G)
(实施例80b)
Teoc-MeLeu-Thr(OBn)-MeGly-O烯丙基的合成
化合物80b可以利用Meneses等人(J.Org.Chem.，2010，75，564-569) 的方法通过缩合反应来合成，其中将化合物33的末端保护基脱除，然后与五氟苯基酯(化合物80a)反应以形成酰胺键。
[表138]
[表139]
分析(HPLC方法1)
(实施例81)
Boc-MeAla-MePhe-Leu-MeLeu-Thr(OBn)-MeGly-O烯丙基的合成
该反应根据实施例88进行。
[表140]
[表141]
分析(HPLC方法1)
(实施例82)
Boc-MeAla-MePhe-Leu-MeLeu-Thr(OBn)-MeGly-OH的合成
将1.1180g的原料称取到反应容器中并加入THF、甲醇和水各自2.2 ml。然后加入102.8mg的氢氧化锂一水合物并将反应溶液在室温下搅拌五小时。通过LC确认反应完成，然后将反应溶液在减压下浓缩。在向浓缩物中加入乙酸乙酯之后，加入0.5N盐酸以猝灭反应。通过液体分离处理来分离有机层，然后用0.5N盐酸洗涤两次并且用5％氯化钠水溶液洗涤两次。通过在减压下浓缩来蒸发溶剂，得到918.8mg(86％收率)的白色固体。
[表142]
[表143]
分析(HPLC方法1)
(实施例83)
Fmoc-Asp(OtBu)-pip的合成
该反应根据实施例88进行。
[表144]
[表145]
分析(HPLC方法1)
(实施例84)
FmocAsp(OH)pip的合成
将45.4g的原料称取到反应容器中并加入454ml的三氟乙醇。然后加入24ml的三甲基氯硅烷，并将反应溶液在室温下搅拌。在反应开始之后2.5小时，分两个部分加入910ml的水并允许晶体沉淀。将晶体过滤，然后干燥，得到25.8g(61％收率)的目标产物36。
[表146]
[表147]
分析(HPLC方法1)
(实施例85)
将Fmoc-Asp(OH)-pip加载到CTC树脂上
进行如在实施例112中所描述的方法中的相同加载步骤。在5-mer伸长和随后的树脂脱除步骤之后对产物进行分析。
[表148]
(实施例86)
固相合成(2-mer伸长)
在固相合成柱中进行反应。
1)脱保护步骤：向Fmoc-MeAla-OCTC树脂(37，理论氨基酸加载量： 9.49mmol)中加入DMF(104mL)。在30℃下哌啶在DMF中的20％溶液 (104mL)，并将柱在30℃下振荡15分钟。在将溶液排出之后，再次加入哌啶在DMF中的20％溶液(104mL)并将柱在30℃下振荡15分钟。在将溶液排出之后，将树脂用DMF(130ml)洗涤2minx7。
2)伸长步骤：在与固相合成柱分开的反应器中，将6.62g的 Fmoc-MeVal-OH和2.93g的Oxyma溶解在52ml的DMF中，然后加入 5.87ml的DIC。将该容器在30℃下振荡30分钟。将此溶液加入到固相合成柱中，然后将其在30℃下振荡两小时。在将溶液排出之后，将树脂用DMF(130ml)洗涤2minx6。
(实施例87)
固相合成(相继的从2-mer到5-mer的伸长和树脂脱除反应)
根据在实施例86中所描述的方法重复脱保护和伸长步骤，以提供 Boc-MeIle-Ala-MePhe-MeVal-Asp(OCTC)-pip。向所得的树脂中加入147 ml的二异丙基乙胺、三氟乙醇和二氯甲烷(2％二异丙基乙胺，溶剂体积比 1：1)的混合溶剂，接着在30℃下振荡2.5小时。收集排出的且树脂脱除的肽溶液。在将树脂脱除溶液排出之后，将树脂用三氟乙醇和二氯甲烷的 25ml混合溶剂(体积比1∶1)洗涤两次，并且将溶液浓缩。将浓缩物溶解在 130ml的乙酸乙酯中并用碳酸钾水溶液洗涤两次，用硫酸氢钾洗涤两次，并且用氯化钠水溶液洗涤一次，然后将有机层在减压下浓缩。在干燥之后，获得4.9821g(69％收率)的白色固体。
[表149]
[表150]
分析(HPLC方法1)
(实施例88)
Fmoc-MeAsp(OtBu)-pip的合成
将49.6g的EDCI盐酸盐称取到反应容器中并加入400ml的DMF。将反应容器冷却至0℃，然后加入100.050g的Fmoc-MeAsp(OtBu)-OH。接下来，使用滴液漏斗，加入40.1g的Oxyma在100ml的DMF中的溶液，加入加入34.9ml的哌啶。在完成逐滴加入哌啶之后四小时又30分钟，通过LCMS对反应进行分析并且确认原料消失。将反应溶液用乙酸乙酯稀释，然后加入500ml的0.5N盐酸以猝灭反应。将有机层分离，然后用水洗涤两次，用5％碳酸钠水溶液洗涤两次，并用5％氯化钠水溶液洗涤两次。将所获得的有机层在减压下浓缩。将所得的粗产物从乙酸乙酯和庚烷重结晶，得到86.230g(75％收率)的目标产物。
[表151]
分析(HPLC方法1)
(实施例89)
用于11-残基肽(tBu形式，Cbz-MeAla-MePhe-Leu-MeLeu-Val-MeGly-MeIle-Ser(OtBu)-MePhe-MeVal -Asp(OtBu)-pip(22))的合成中间体的合成(Cbz-Asp(OtBu)-pip(41))
将17.5g的Cbz-Asp(OtBu)-OH称取到反应容器中并加入175ml的乙酸乙酯。在将反应溶液冷却至0℃之后，分别加入哌啶(3eq.)、二异丙基乙胺(6eq.)和T3P在乙酸乙酯中的1.7M溶液(3eq.)。将反应溶液温热至室温并在室温下搅拌10分钟，然后加入175ml的5％碳酸钾水溶液。将水层除去，然后将有机层用175ml的5％硫酸氢钾水溶液洗涤两次。将所得的有机层在减压下浓缩并干燥，以100％收率得到20g的 Cbz-Asp(OtBu)-pip(41)。
(实施例90)
H-Asp(OtBu)-pip(42)的合成
将9.5g的Cbz-Asp(OtBu)-pip(41)称取到两个反应容器中的每一个中，并向每个容器中加入50ml的CPME。向两个容器中加入10％Pd/C(20 w/w％)，然在3巴氢气氛下在30℃下反应。在反应开始之后三小时，将两个反应溶液混合，过滤，并用100ml的CPME洗涤。将所得的混合物在减压下浓缩并干燥，以99％收率得到12.3g的H-Asp(OtBu)-pip(42)。
通过以下所描述的19个步骤由H-Asp(OtBu)-pip(42)来合成11-mer (22)。合成的中间体提供如下。
H-Asp(OtBu)-pip(42)
Cbz-MeVal-Asp(OtBu)-pip(43)
H-MeVal-Asp(OtBu)-pip(44)
Cbz-MePhe-MeVal-Asp(OtBu)-pip(45)
H-MePhe-MeVal-Asp(OtBu)-pip(46)
Cbz-Ser(OtBu)-MePhe-MeVal-Asp(OtBu)-pip(13)
H-Ser(OtBu)-MePhe-MeVal-Asp(OtBu)-pip(47)
Cbz-Melle-Ser(OtBu)-MePhe-MeVal-Asp(OtBu)-pip(14)
H-Melle-Ser(OtBu)-MePhe-MeVal-Asp(OtBu)-pip(48)
Cbz-MeGly-Melle-Ser(OtBu)-MePhe-MeVal-Asp(OtBu)-pip(49)
H-MeGly-Melle-Ser(OtBu)-MePhe-MeVal-Asp(OtBu)-pip(50)
Cbz-Val-MeGly-Melle-Ser(OtBu)-MePhe-MeVal-Asp(OtBu)-pip(15)
H-Val-MeGly-Melle-Ser(OtBu)-MePhe-MeVal-Asp(OtBu)-pip(51)
Cbz-MeLeu-Val-MeGly-Melle-Ser(OtBu)-MePhe-MeVal-Asp(OtBu)-pip(16)
H-MeLeu-Val-MeGly-Melle-Ser(OtBu)-MePhe-MeVal-Asp(OtBu)-pip(52)
Cbz-Leu-MeLeu-Val-MeGly-Melle-Ser(OtBu)-MePhe-MeVal-Asp(OtBu)-pip(17)
H-Leu-MeLeu-Val-MeGly-Melle-Ser(OtBu)-MePhe-MeVal-Asp(OtBu)-pip(53)
Cbz-MePhe-Leu-MeLeu-Val-MeGly-Melle-Ser(OtBu)-MePhe-MeVal-Asp(OtBu)-pip(18)
H-MePhe-Leu-MeLeu-Val-MeGly-Melle-Ser(OtBu)-MePhe-MeVal-Asp(OtBu)-pip(54)
Cbz-MeAla-MePhe-Leu-MeLeu-Val-MeGly-Melle-Ser(OtBu)-MePhe-MeVal-Asp(OtBu)-pip(19) (实施例91)
肽链的伸长(伸长方法A)
将8.6g的42称取到反应容器中并加入108ml的CPME。加入 Cbz-MeVal-OH(1.1eq.)和二异丙基乙胺(3eq.)，然后加入BEP(1.5eq.)在 21.5ml的MeCN中的溶液。在室温下搅拌三分钟之后，加入15ml的10％硫酸氢钠水溶液。将水层除去，然后在室温下向有机层中加入15ml的 5％碳酸钾水溶液和三甲胺盐酸盐(3eq.)。将混合物温热至40℃，然后在 40℃下搅拌90分钟。在冷却至室温之后，将水层除去，然后将所得的有机层用15ml的5％碳酸钾水溶液洗涤。将所得的有机层在减压下浓缩并干燥，定量地得到17g的43。
(实施例92)
N-末端的Cbz的脱除(脱保护方法A)
将9.5g的43称取到两个反应容器中的每一个中，并向每个容器中加入50ml的CPME。向两个容器中加入10％Pd/C(20w/w％)，然后在3巴氢气氛下在35℃下反应。在反应开始之后两小时，将两个反应溶液混合，过滤，并用100ml的CPME洗涤。将所得的混合物在减压下浓缩并干燥，以100％收率得到14g的44。
(实施例93)
肽链的伸长(伸长方法B)
将14g的44称取到反应容器中，并且分别加入126ml的CPME和 14ml的乙腈。在室温下相继加入Cbz-MePhe-OH(1.1eq.)、二异丙基乙胺(8eq.)和T3P在乙酸乙酯的1.7M溶液(3eq.)。在室温下搅拌一小时之后，加入140ml的5％硫酸氢钾水溶液。将水层除去，然后在室温下加入140 ml的5％碳酸钾水溶液和三甲胺盐酸盐(3eq.)。在室温下搅拌30分钟之后，将水层除去。然后将所得的有机层用140ml的5％碳酸钾水溶液洗涤。将所得的有机层在减压下浓缩并干燥，以96％收率得到24.1g的45。
(实施例94)
N-末端的Cbz的脱除(脱保护方法B)
将9.2g的15a称取到两个反应容器中的每一个中，并向每个容器中加入46ml的CPME。向两个容器中加入10％Pd/C(20w/w％)并在5巴氢气氛下在35℃下反应。在反应开始之后六小时，将反应容器冷却至室温并在空气气氛下在室温储存过夜。在5巴氢气氛下在45℃进一步反应进行四小时。将两个反应溶液混合，过滤并用92ml的CPME洗涤。将所得的混合物在减压下浓缩并干燥，以98％收率得到15.9g的51。
通过相同的技术来合成由2-mer到11-mer的肽。除了反应时间和所使用的原料的质量，与以上所述的那些不相同的反应条件在“反应方法”列中进一步描述。
[表152]
(HPLC方法1)
在所合成的中间体之中，将13a、14a、15a、16a、17a、18a和19a 用于tBu脱除实验。对用于tBu脱除反应的化合物如表153中所述通过 LCMS进行分析。
[表153]
分析
I.C-末端的tBu-保护的肽的合成
(实施例110)
Fmoc-MeAla-MeAla-OtBu(20a)的合成
将99.7mg的H-MeAla-OtBu盐酸盐和710mg的磷酸氢二钾分别称取到反应容器中，并加入相对于H-MeAla-OtBu盐酸盐为各10v/w的 2-MeTHF和水。在0℃下相继加入Fmoc-MeAla-OH(167mg)和DMT-MM (211mg)，然后将反应溶液温热至室温。在室温下振荡16小时之后，通过LCMS对反应进行分析并且确认Fmoc-MeAla-OH消失。使用4ml的水和6ml的2-MeTHF将反应溶液转移到分液漏斗，然后将水层除去。将所得的有机层分别用卤水(3mL)、15％硫酸氢钠水溶液(3mL)和5％碳酸钠水溶液(3mL)洗涤，然后通过在减压下浓缩来将溶剂除去。使用以下所述的条件，通过硅胶柱色谱来纯化所得的粗产物，然后将含有目标产物的级分在减压下浓缩并干燥，以96％的收率和99.5％的纯度得到227.6mg 的20a。
(实施例111)
Fmoc-MePhe-MeAla-OtBu(21a)的合成
分别将H-MeAla-OtBu盐酸盐(99.8mg)和Fmoc-MePhe-OH(205mg) 称取到反应容器中，并且相继加入相对于H-MeAla-OtBu盐酸盐为8v/w 的乙酸异丙酯和2v/w的乙腈以及二异丙基乙胺(4eq.)。在室温下加入T3P 在乙酸乙酯(2.5eq.)中的1.7M溶液。在室温下搅拌四小时之后，加入 T3P在乙酸乙酯(0.5eq.)和二异丙基乙胺(0.8eq.)中的1.7M溶液。在加入所述试剂之后30分钟，通过LCMS对反应进行分析，发现反应转化率为98.5％。在室温下加入NMI(2eq.)，然后将反应溶液在50℃下搅拌五分钟。使用6ml的乙酸乙酯将反应溶液转移到分液漏斗，然后将水层除去。将所得的有机层分别用5％碳酸钠水溶液(3mL)、5％硫酸氢钾水溶液 (3mL)和5％碳酸钠水溶液(3mL)洗涤。将有机层用硫酸钠脱水30分钟，然后过滤，并在减压下浓缩以除去溶剂。使用以下所述的条件，通过硅胶柱色谱来纯化所得的粗产物，然后将含有目标产物的馏分在减压下浓缩并干重，以96％的收率和99.5％的纯度得到227.6mg的21a。
[表154]
分析(HPLC方法1)
J.CTC树脂-加载的二肽的合成
(实施例112)
将Fmoc-MeAla-OH加载到CTC树脂上
将4.47g的Cl-CTC树脂称取到反应柱中，加入二氯甲烷(36mL)，并将柱在30℃下振荡60分钟。在排出二氯甲烷之后，在室温下加入Fmoc-MeAla-OH(1.24g)和二异丙基乙胺(1.4mL)在二氯甲烷(36mL)中的溶液。在30℃下搅拌三小时之后，通过LCMS对反应进行分析，发现反应转化率为96.0％。在排出反应溶液之后，在室温下加入甲醇(3.6mL) 和二异丙基乙胺(1.8mL)在DMF(30mL)中的溶液。在30℃下振荡1.5小时之后，排出反应溶液。将树脂用36ml的DMF洗涤四次，然后在减压下干燥，得到4.80g的55。也通过相同技术来合成56。在下一步骤中对产物进行分析。
[表155]
分析(HPLC方法1)
(实施例114)
Fmoc-MeAla-MeAla-OCTC(22a)、Fmoc-MeVal-MeAla-OCTC(23a)和 Fmoc-Pro-MeAla-OCTC(24a)的合成
使用固相肽合成器Prelude X来同时合成二肽22a至24a。分别将676 mg、687mg和705mg的树脂Fmoc-MeAla-OCTC(55)称取到三个反应容器中。向其中加入DMF(8mL)，并通过允许在室温下静置一小时来使树脂溶胀。在排出DMF之后，加入哌啶在DMF中的20％溶液(8mL)并将溶液在室温下振荡15分钟。在将溶液排出之后，再次加入哌啶在DMF 中的20％溶液(8mL)并将容器在室温下振荡15分钟。分别将以下所述的混合物1至3加入到RV 1至RV 3中，然后加入DIC在DMF中的12.5％溶液(4eq.)。在氮气鼓泡的情况下将容器在室温下振荡三小时。在排出溶液之后，将树脂用DMF(8v/w)洗涤2minx5并且用MTBE(8v/w)洗涤2 minx4，每次洗涤通过在室温下振荡进行。将所得的树脂在减压下干燥，分别得到30a、31a和32a。所获得的化合物通过在实施例65、67和69 中的树脂脱除反应进行鉴定。
将约20mg的所获得的三种树脂中的每一种称取到三个反应容器中，并向每个容器中加入哌啶在DMF中的20％溶液(100mL)，并将反应溶液在室温下搅拌两小时。从溶液的吸光度定量地测定二苯富烯以计算每种二肽的加载率(表156)。
(实施例115)
Fmoc-MeAla-MeAsp(OtBu)-OCTC(25a)和 Fmoc-MeLeu-MeAsp(OtBu)-OCTC(26a)的合成
使用固相肽合成器Prelude X来同时合成二肽25a至26a。将340mg 的树脂Fmoc-MeAsp(OtBu)-OCTC(10)称取到两个反应器的每一个中。向其中加入DMF(8mL)，并且通过允许在室温静置30分钟来使树脂溶胀。在将DMF排出之后，加入哌啶在DMF中的20％溶液(8v/w)，并将容器在室温下振荡5分钟。在将溶液排出之后，再次加入哌啶在DMF中的20％溶液(8v/w)，并将容器在室温下振荡20分钟。在排出溶液之后，将以下所述的混合物1和2分别加入到相应的反应容器中，然后加入DIC在DMF (4eq.)中的12.5％溶液，并且在氮气鼓泡的情况下，将容器在室温下振荡三小时。在排出溶液之后，将树脂用DMF(8v/w)洗涤2minx4，并且用 MTBE(8v/w)洗涤2minx4，每次洗涤通过在室温下振荡进行。将所得的树脂在减压下干燥，分别得到994mg的25a和1.00g的26a。所获得的化合物通过在实施例71和73中的树脂脱除反应进行鉴定。
将所获得的两种树脂各自称取约20mg到两个反应容器中，向每个容器中加入哌啶在DMF中的20％溶液(100mL)，并将反应溶液在室温下搅拌两小时。从溶液的吸光度定量地确定二苯富烯以计算每种二肽的加载率(表156)。
[表156]
分析(HPLC方法1)
(实施例116)
Fmoc-MeAsp(O烯丙基)-mor的合成
将Fmoc-MeAsp(O烯丙基)-OH(56，87.9g)加入到反应容器中并溶解在DMF(430ml)中。然后在环境温度下加入HOBt(31.9g)和EDCI盐酸盐(49.4g)，并将反应溶液冷却至0℃。向反应溶液中逐渐加入吗啉(20.4 ml)，然后将其在0℃下搅拌45分钟。在0℃下向反应溶液中加入水(180 ml)，然后将其在环境温度下搅拌一小时。进一步加入水(180ml)并且将反应溶液在环境温度下搅拌1.75小时。使用Kiriyama漏斗，通过过滤来收集所产生的固体，并且将所得的固体用水(450ml)洗涤两次。在用水洗涤之后，将固体在减压下干燥，得到86.8g(85％收率)的目标产物，为无色固体。
(实施例117)
Fmoc-MeAsp(O烯丙基)-NMe2的合成
在氮气流下，将EDCI盐酸盐(27.4g)和DMF(217ml)加入到反应容器中，然后在在0℃下加入HOBt(17.7g)以及Fmoc-MeAsp(O烯丙基)-OH (56，48.8g)在二氯甲烷-DMF(90ml-90ml)中的溶液。在0℃下将反应溶液搅拌30分钟之后，在两分钟内向反应溶液中逐滴加入二甲基胺-THF 溶液(2N，65.6ml)，然后将其在0℃下搅拌30分钟。将反应溶液用乙酸乙酯(488ml)稀释，并且将有机层用1N盐酸(两次，用391ml)、水(488 ml)、5％碳酸氢钠水溶液(两次，用488ml)和18％氯化钠水溶液(488ml)洗涤，然后用硫酸钠干燥。通过过滤除去干燥剂，然后将滤液在减压下浓缩，得到51.2g(98％收率)的目标产物，为无色油状物。
(实施例118)
Fmoc-MeAsp(OH)-mor的合成
在氮气流下，将Fmoc-MeAsp(O烯丙基)-mor(57，22.8g)和二氯甲烷 (50ml)加入到反应容器中，然后在环境温度下加入四三苯基膦钯(0.55g)。逐滴加入苯基硅烷(3.61g)，然后将反应溶液在环境温度下搅拌30分钟。将反应溶液用MTBE(228ml)稀释，然后用5％碳酸氢钠水溶液(228ml) 除去。将水层用85％磷酸水溶液(12ml)酸化至约pH 3，并用MTBE(228ml) 萃取。有机层用18％氯化钠水溶液洗涤(两次，用228ml)，然后用硫酸钠干燥。通过过滤除去干燥剂，然后将滤液在减压下浓缩，得到20.3g(97％收率)的目标产物，为无色无定形晶体。
(实施例119)
Fmoc-MeAsp(OH)-NMe2的合成
在氮气流下，将Fmoc-MeAsp(O烯丙基)-NMe2(58，32.0g)和四三苯基膦钯(0.847g)加入到反应容器中，然后加入二氯甲烷(73.3ml)。向反应溶液中逐滴加入苯基硅烷(5.55g)，然后将其在环境温度下搅拌30分钟。将反应溶液用MTBE(320ml)稀释，然后用5％碳酸氢钠水溶液(308ml) 萃取。将水层用85％磷酸水溶液(30.1ml)酸化至约pH 2并用MTBE(320 ml)萃取。有机层用18％氯化钠水溶液萃取(两次，用320ml)，然后用硫酸钠干燥。通过过滤除去干燥剂，然后将滤液在减压下浓缩，得到25.1g (86％收率)的目标产物，为淡褐色无定形晶体。
[表157]
分析
(实施例120)
Fmoc-MeAsp(OtBu)-mor(61)的合成
在氮气流下，将Fmoc-MeAsp(OtBu)-OH(39，3.0g)和Oxyma(1.1g) 加入到反应容器中，然后加入二甲基甲酰胺(15mL)。将1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(1.5g)和吗啉(0.74mL)加入到反应溶液中，同时将反应溶液的温度保持在10℃以下，并将其搅拌三小时。将AcOEt (15mL)和0.5N盐酸(15mL)加入到反应溶液中。有机层用水(15mL)洗涤并且进一步用5％碳酸钠水溶液(15mL)洗涤。有机层用5％氯化钠水溶液 (15mL)洗涤，然后在减压下浓缩，得到3.50g(100％)的目标产物，为黄色无定形晶体。将所获得的化合物在未经纯化下用于下一反应。
(实施例121)
Fmoc-MeAsp(OtBu)-NMe2(62)的合成
在氮气流下，将Fmoc-MeAsp(OtBu)-OH(39，3.0g)和Oxyma(1.1g) 加入到反应容器中，然后加入二甲基甲酰胺(15mL)。将1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(1.5g)、二甲基胺盐酸盐(0.69g)和N，N-二异丙基乙胺(1.5ml)加入到反应溶液中，同时将反应溶液的温度保持在10℃以下，并将其搅拌三小时。向反应溶液中加入乙酸乙酯(15mL)，接着加入0.5N盐酸(15mL)。有机层用水(15mL)洗涤并且进一步用5％碳酸钠水溶液(15mL)洗涤。有机层用5％氯化钠水溶液(15mL)洗涤，然后在减压下浓缩，得到3.17g(95％)的目标产物，为无色油状物质。将所获得的化合物在未经纯化下用于下一反应。
(实施例122)
Fmoc-MeAsp(OH)-mor(59)的合成
在氮气流下，将Fmoc-MeAsp(OtBu)-mor(61，1.8g)和2-甲基四氢呋喃(9.2mL)加入到反应容器中，然后加入HMDS(0.86mL)。将反应容器冷却至0℃，加入TMSOTf(0.81mL)，并将反应溶液在25℃下搅拌一小时。将反应容器冷却至0℃，将5％磷酸二氢钾水溶液(9.2mL)加入到反应溶液中，并分离有机层。加入5％碳酸钠水溶液(9.2mL)，并分离水层。向水层中加入MTBE(9.2mL)和2N盐酸(5.0mL)，并分离有机层。有机层用5％磷酸二氢钾水溶液(9.2mL)洗涤，然后用10％氯化钠水溶液(9.2 mL)洗涤。将有机层在减压下浓缩，得到1.31g(97％)的目标产物，为黄色无定形晶体。
(实施例123)
Fmoc-MeAsp(OH)-NMe2(60)的合成
在氮气流下，将Fmoc-MeAsp(OtBu)-NMe2(62，1.6g)和2-甲基四氢呋喃(7.9mL)加入到反应容器中，然后加入HMDS(0.80mL)。将反应容器冷却至0℃，加入TMSOTf(0.75mL)，并将反应溶液在25℃下搅拌一小时。将5％磷酸二氢钾水溶液(7.9mL)加入到反应溶液中，并分离有机层。加入5％碳酸钠水溶液(7.9mL)，并分离水层。向水层中加入MTBE(7.9 mL)和2N盐酸(5.0mL)，并分离有机层。有机层用5％磷酸二氢钾水溶液 (7.9mL)洗涤，然后用10％氯化钠水溶液(7.9mL)洗涤。将有机层在减压下浓缩，得到1.31g(95％)的目标产物，为无色油状物质。
[表158]
分析
[工业适用性]
本发明通过使用甲硅烷基化剂的新型脱保护和/或树脂脱除方法而提供了生产肽化合物的方法。本发明可以提供肽合成的工业上适用且有效率的技术。
- 用于肽化合物或酰胺化合物的脱保护方法和在固相反应中的树脂脱除方法以及用于生产肽化合物的方法
- 用于肽化合物或酰胺化合物的脱保护方法和在固相反应中的树脂脱除方法以及用于生产肽化合物的方法