对气虚型心力衰竭具有保护作用的中药组合物及制备方法

技术领域

本发明属于中药组合物技术领域，具体涉及一种对气虚型心力衰竭具有保护作用的中药组合物及其制备方法和应用。

背景技术

慢性心力衰竭是慢性原发性心脏病病变和心室因长期压力或容量负荷过重，使心肌收缩力减弱，不能维持心排血量的一种复杂的临床综合征。心力衰竭是临床心血管疾病中的一种常见病、多发病、危重病，同时，也是导致心血管疾病终末期和死亡的重要病因，有资料显示，心力衰竭患者在4年时间内的死亡率高达50％，因此该病已引起社会及医疗界的广泛关注和重视。

慢性心力衰竭的现代常规药物治疗，已从以往的强心、利尿、扩血管的治疗原则转变为采用神经内分泌抑制剂及其的联合应用。在2014中国心力衰竭防治指南中也强调利尿剂、ACEI、β-阻滞剂、醛固酮受体拮抗剂在慢性心力衰竭治疗中的应用，以达改善患者临床症状、提高心功能、增加心室射血分数、延缓心室重构之功。虽然西医药物的规范化应用，在治疗慢性心力衰竭中取得了一定的成效，延缓其病情的进展及恶化。但是，在大量临床观察中发现，大多数慢性心力衰竭患者即使在病情平稳的情况下，仍有心悸、胸闷、气短、神疲乏力、纳差、尿少等不适。慢性心衰患者的治愈率较低，患者的反复再住院率高。此外，对于西医药物部分患者存在耐受性差，不良反应多，且存在相对或绝对的禁忌证。因此，在规范的西医药物的治疗中，加用中医中药，中西医联合治疗已经成为慢性心力衰竭临床干预的新选择，其临床效果佳，已被大量循证医学所证实。

祖国医学虽然没有对心衰病有具体的记述，但根据慢性心力衰竭的临床症状、发病特点，可将其归为“水肿”、“喘证”、“心悸”、“胸痹”等相关中医病证中。《黄帝内经》、《素问·逆调论篇第三十四》等众多文献中均记载了有关现代慢性心力衰竭的症状、病因病机、预后等内容。近期，2014年《慢性心力衰竭中医诊疗专家共识》指出，心力衰竭的基本中医症候特征为本虚标实、虚实夹杂。本虚以气虚为主，标实以血瘀为主。病位在心，涉及肺、脾、肝、肾。心气推动血液在脉管内流动，心脏的正常搏动节律及心功能的正常发挥均依赖于心气的充沛和心血的运行。在《灵枢·经脉篇》中指出：心气虚则无以推动血行，可致血行瘀滞、瘀血内停，瘀阻于心脉。气虚血瘀可导致心功能下降，出现心悸、胸闷、气短、神疲倦怠等慢性心衰的症状，并可合并有胸痛、面色青紫、舌暗淡紫，或有瘀点、瘀斑等的心脉气血瘀阻的症状和体征，“气虚血瘀”是慢性心力衰竭致病的关键。因此，针对由气虚血瘀所导致的心衰病，益气温阳、生津养血、活血化瘀、行滞通痹是其治疗大法。

发明内容

本发明提供一种对气虚型心力衰竭具有保护作用的中药组合物及制备方法。

从心衰病的病因病机、治疗原则入手，以益气温阳为本，辅以生津养血、活血通络之药，使气旺血行，津血得养、滞痹得通。组合物中黄芪益气升阳、固表止汗、利水消肿为君药；人参大补元气、复脉固脱、补脾益肺、生津养血，醋五味子益气生津、补肾宁心，共为臣药；丹参活血祛瘀、通经止痛、凉血消痈，甘草补脾益气，清热解毒，缓急止痛，二者共为佐药；肉桂温通血脉，引他药入血分，补火助阳，引火归元，使气血充达周身则毒易外散，为使药。诸药合用，共奏益气温阳、生津养血、活血化瘀、行滞通痹之功。

本发明采取的技术方案是：一种对气虚型心力衰竭具有保护作用的中药组合物，按照重量份数计，包括以下原料：

黄芪60～120份，人参30～60份，醋五味子20～40份，甘草15～30份，丹参20～40份，肉桂6～12份。

优选的是，该中药组合物按照重量份数计，包括以下原料：

黄芪90份，人参50份，醋五味子30份，甘草20份，丹参30份，肉桂10份。

本发明还提供一种对气虚型心力衰竭具有保护作用的中药组合物的制备方法，包括下列步骤：

(1)、以上六味，人参加水煎煮2次，每次1～3小时，每次加水量为药材量的8～12倍，合并煎液，滤过，滤液浓缩至稠膏，减压干燥，制成干浸膏1，备用；

(2)、醋五味子、丹参以4～6倍量60～95％乙醇回流提取2次，每次0.5～1.5小时，滤过，滤液合并，回收乙醇，备用；

(3)、肉桂加6～14倍量水蒸馏提取挥发油4～8小时，挥发油用倍他环糊精包结，蒸馏后的水溶液另器收集，备用；

(4)、上述药渣与黄芪、甘草二味加4～8倍量水煎煮2次，每次0.5～1.5小时，滤过，滤液与上述备用液合并，浓缩至相对密度为1.20～1.35(80℃)的稠膏，减压干燥，制成干浸膏2；

(5)、取干浸膏1、干浸膏2，分别粉碎成细粉，加入上述倍他环糊精包结物，混匀，即得对气虚型心力衰竭具有保护作用的中药组合物。

本发明还提供上述中药组合物作为在防治气虚型心力衰竭药物中的应用。

本发明的中药组合物可以添加常用的药用辅料制成药学上可接受的口服制剂如片剂、胶囊剂或颗粒剂等，且所述片剂、胶囊剂或颗粒剂均可采用相应种类制剂的常规制备方法来制得。

本发明的有益效果

(1)本发明的中药组合物组方系由经典名方加减化裁而成，组方精炼，君臣佐使搭配合理，疗效突出。

(2)该中药组合物提取过程仅采用水、乙醇为提取溶媒，安全无毒。

(3)药理试验证明，本发明的中药组合物，对半食量饥饿、力竭游泳、注射盐酸肾上腺素和异丙肾上腺素复合因素所致的气虚血瘀心肌缺血大鼠有明显的保护作用。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明做进一步详细的说明，实施例中涉及到的原料及辅料均采用商购获得。

实施例1一种对气虚型心力衰竭具有保护作用的中药组合物的制备

按下述重量称取原料：黄芪60g，人参60g，醋五味子20g，甘草15g，丹参20g，肉桂8g。

以上六味，人参加水煎煮2次，每次2小时，每次加水量为药材量的8倍，合并煎液，滤过，滤液浓缩至稠膏，减压干燥，制成干浸膏1，备用；

醋五味子、丹参以4倍量80％乙醇回流提取2次，每次1小时，滤过，滤液合并，回收乙醇，备用；

肉桂加10倍量水蒸馏提取挥发油6小时，挥发油用倍他环糊精包结，蒸馏后的水溶液另器收集，备用；

上述药渣与黄芪、甘草二味加6倍量水煎煮2次，每次1小时，滤过，滤液与上述备用液合并，浓缩至相对密度为1.30(80℃)的稠膏，减压干燥，制成干浸膏2；

取干浸膏1、干浸膏2，分别粉碎成细粉，加入上述倍他环糊精包结物，混匀，即得对气虚型心力衰竭具有保护作用的中药组合物。

实施例2一种对气虚型心力衰竭具有保护作用的中药组合物(颗粒剂)的制备

按下述重量称取原料：黄芪90g，人参50g，醋五味子30g，甘草20g，丹参30g，肉桂10g。

以上六味，人参加水煎煮2次，每次1小时，每次加水量为药材量的12倍，合并煎液，滤过，滤液浓缩至稠膏，减压干燥，制成干浸膏1，备用；

醋五味子、丹参以6倍量95％乙醇回流提取2次，每次1.5小时，滤过，滤液合并，回收乙醇，备用；

肉桂加6倍量水蒸馏提取挥发油8小时，挥发油用倍他环糊精包结，蒸馏后的水溶液另器收集，备用；

上述药渣与黄芪、甘草二味加8倍量水煎煮2次，每次1.5小时，滤过，滤液与上述备用液合并，浓缩至相对密度为1.35(80℃)的稠膏，减压干燥，制成干浸膏2；

取干浸膏1、干浸膏2，分别粉碎成细粉，加入适量糊精、可溶性淀粉及甜菊糖苷，混匀，制颗粒，干燥，加入上述倍他环糊精包结物，即得对气虚型心力衰竭具有保护作用的中药组合物(颗粒剂)。

实施例3一种对气虚型心力衰竭具有保护作用的中药组合物(片剂)的制备

按下述重量称取原料：黄芪120g，人参30g，醋五味子40g，甘草30g，丹参40g，肉桂12g。

以上六味，人参加水煎煮2次，每次3小时，每次加水量为药材量的10倍，合并煎液，滤过，滤液浓缩至稠膏，减压干燥，制成干浸膏1，备用；

醋五味子、丹参以5倍量60％乙醇回流提取2次，每次0.5小时，滤过，滤液合并，回收乙醇，备用；

肉桂加14倍量水蒸馏提取挥发油4小时，挥发油用倍他环糊精包结，蒸馏后的水溶液另器收集，备用；

上述药渣与黄芪、甘草二味加4倍量水煎煮2次，每次0.5小时，滤过，滤液与上述备用液合并，浓缩至相对密度为1.25(80℃)的稠膏，减压干燥，制成干浸膏2；

取干浸膏1、干浸膏2，分别粉碎成细粉，加入适量淀粉、硬脂酸镁，混匀，制颗粒，干燥，加入上述倍他环糊精包结物，压片，包衣，即得对气虚型心力衰竭具有保护作用的中药组合物(片剂)。

下面通过具体动物实验来进一步说明本发明中药组合物对气虚血瘀心肌缺血大鼠的保护作用及对阿霉素所致心衰大鼠的保护作用。

1.对气虚血瘀心肌缺血大鼠的保护作用

1.1试验材料

1.1.1动物

雄性SD大鼠，180～220g，动物等级：SPF级，购自辽宁长生生物技术有限公司，生产单位动物许可证编号为：SCXK-(辽)2020-0001，实验动物质量合格证号：210726220100901127。接收日期2022年7月9日。本实验经吉林省中医药科学院伦理委员会批准，批准文号JLSZKYDWLL2022-003。

1.1.2饲料

大、小鼠维持饲料，原料组成：玉米、豆粕、鱼粉、麸皮、食盐、碳酸氢钙、石粉、多种维生素、多种微量元素、氨基酸等，购自科澳协力(天津)饲料有限公司，饲料生产许可证号：津饲证(2020)01005，饲料批号：22063111。

1.1.3饲养环境及条件

吉林省中医药科学院清洁级动物室，试验动物使用许可证号：SYXK(吉)2022-0004，试验动物室温度：19～23℃，相对湿度40～65％，光照：12小时明，12小时暗交替。笼具、笼盖每周更换2次，所有动物饲养笼具和垫料均通过高压消毒后使用，保持笼具的清洁，干燥。动物分笼在IVC系统中饲养。每笼的动物数2-3只。自由采食，饮水。

1.1.4动物饮水源

使用重庆华创水处理工程有限公司生产的BDW1-200L-AD纯水机制备的纯净水，灌装消毒的饮水瓶中，供大鼠自由饮水。

1.1.5动物接收方式

动物进入屏障系统前，依次核对包装箱内的动物性别、数量与动物合格证明是否一致，并且逐一对动物外观进行检查。

1.1.6受试物

实施例2制得的颗粒，性状：棕褐色颗粒；来源：吉林省中医药科学院新药中心；含药量：2.3g生药/g；规格：5g/袋；用法用量：口服，每次1袋，每日3次；保存条件：密封，置阴凉干燥处。

1.1.7阳性药

芪参益气滴丸，成份：黄芪、丹参、三七、降香油。性状：本品为浅棕色至深棕色的滴丸；气微香，味微苦。功能主治：益气通脉，活血止痛。用于气虚血瘀型胸痹，症见胸闷胸痛，气短乏力，心悸、面色少华、自汗、舌体胖有齿痕、舌质暗或紫暗有瘀斑，脉沉或沉弦，适用于冠心病心绞痛见上述证候者。用法用量：餐后半小时服用，一次1袋，一日3次。4周为一疗程。规格：9袋装，每袋装0.5g。产品批号：210804。生产日期：20210623，有效期至2024年5月。生产厂家：天士力制药集团股份有限公司。

1.1.8造模试剂

盐酸肾上腺素注射液，规格：1ml：1mg，生产日期：2021年1月25日，产品批号：2101252，性状：无色或几乎无色的澄明液体，厂家：遂成药业股份有限公司(原天津药业集团新郑股份有限公司)。盐酸异丙肾上腺素注射液，规格：2ml：1mg，产品批号：41150401；成份：盐酸异丙肾上腺素，性状：本品为无色的澄明液体，厂家：上海禾丰制药有限公司。

1.1.9试剂盒

谷草转氨酶(AST/GOT)试剂盒：生产批号：20220802；丙二醛(MDA)测试盒：生产批号：20220811；总超氧化物歧化酶(T-SOD)测试盒，生产批号：20220813。以上试剂盒均为南京建成生物工程研究所生产。

大鼠L-乳酸脱氢酶(L-LDH)ELISA检测试剂盒、大鼠肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)ELISA检测试剂盒、大鼠内皮素1(ET-1)ELISA检测试剂盒、大鼠心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTn-Ⅰ)ELISA检测试剂盒，均为上海语纯生物科技有限公司产品，批号均为Aug 2022。

1.1.10仪器

JA2003B千分之一天平，上海越平科学仪器有限公司；JJ200精密电子天平、Y-2000型电子天平，常熟双杰测试仪器厂；DNM酶标仪，北京普朗新技术有限公司；BL-420F生物机能实验系统、HX-101E小动物呼吸机，成都泰盟科技有限公司；UV0759紫外-可见分光光度计，上海精密科学仪器有限公司；KDC-2046低速冷冻离心机，安徽中科中佳科学仪器有限公司；不锈钢水箱，规格：150cm×65cm×55cm(长×宽×高)；ZT-14V

1.2试验方法

1.2.1分组及给药

72只SD大鼠适应性喂养3天，随机分为6组，每组12只，分别为对照组，模型组，阳性药组，组合物高、中、低剂量组。对照组和模型组大鼠灌胃0.5％CMC-Na，阳性药组按150mg/kg灌胃芪参益气滴丸的0.5％CMC-Na溶液；组合物高、中、低剂量组，分别按3.08、1.54、0.77g/kg灌胃组合物的0.5％CMC-Na溶液，所有大鼠灌胃体积均为10ml/kg，连续灌胃31天。

1.2.2造模

以半食量饥饿、力竭游泳结合盐酸肾上腺素注射三个复合因素造成大鼠气虚血瘀模型，最终皮下注射异丙肾上腺素，造成气虚血瘀型心肌缺血大鼠模型

适应喂养阶段，每日称量食量、体重，计算每公斤体重正常食量(g/kg体重)。连续3日，计算统计得出大鼠正常食量约为100g饲料/kg体重。对照组大鼠正常饲养，其余组大鼠半量食量，即50g饲料/kg体重喂养。连续饥饿1周。

第二周不再限制食量，开始力竭游泳结合注射盐酸肾上腺素。除对照组大鼠外，其余大鼠每日游泳，游泳水温20～25℃，水位高35cm，当半数大鼠出现力竭无法浮出水面时，所有剩余大鼠也停止游泳，力竭标准控制为大鼠沉入水中5秒左右不能自行浮出水面。每日游泳一次，连续游泳二周。除对照组大鼠外，其余大鼠同时每日皮下注射0.1％盐酸肾上腺素0.4ml/kg，对照组皮下注射等量的生理盐水，连续注射三周。

第五周开始，除对照组大鼠外，多点皮下注射异丙肾上腺素，连续注射3天，每日注射剂量分别为3、2.5、2.5mg/kg，对照组注射等体积生理盐水，末次注射异丙肾上腺素为灌胃给药后0.5h，注射异丙肾上腺素后0.5h，10％戊巴比妥钠麻醉，腹主动脉采血，3500转离心10分钟，取血清备用。

1.2.3检测指标

1.2.3.1测定大鼠心电图

在首次注射异丙肾上腺素前和注射后5、10、30min，记录心电图，分别计算并统计给予异丙肾上腺素后5、10、30min时间点上，J点移位的变化值。

1.2.3.2心肌酶指标

用酶联免疫法测定血清L-乳酸脱氢酶(L-LDH)、肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)、肌钙蛋白1(cTl)、内皮素(ET-1)含量，赖氏法测定血清AST活性。

1.2.3.3抗氧化指标

硫代巴比妥酸比色法得到血清MDA含量，羟胺法测定血清SOD活性。

1.2.3.4心脏病理

取心脏下1/3处心肌，10％福尔马林固定，常规石蜡包埋、切片，HE染色，光镜观察心肌细胞变化情况。

1.2.4统计学处理

试验结果采用SPSS19.0统计软件进行统计分析，计量资料以均数±标准差(X±SD)表示，作单因素方差分析。

1.3试验结果

1.3.1大鼠行为外观

正常组大鼠外观活动正常，皮毛光亮，活动自如。模型组大鼠逐渐出现体重降低，活动减少，倦怠，皮毛枯黄，皮松，溏便或稀便，恶臭，嘴唇变紫，颜色暗。四个给药组外观状态均好于模型组。组合物高剂量组大鼠游泳时间最长，倦怠，皮毛情况明显好于模型组，出现稀便动物数量少，活动较多。组合物各组大鼠游泳状态优于阳性药大鼠组。

表1大鼠游泳情况(60只大鼠游泳)

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1.3.2对气虚血瘀心肌缺血大鼠心电图改变的影响

注射异丙肾上腺素后，大鼠心电图J点显著下移，与正常对照组比较两组差别有非常显著意义(P<0.01)，能持续30min，表示模型成立。组合物高、中剂量组，在30min时间点上，能明显和显著抑制J的下移(P<0.01和P<0.05)，在5、10min时间点上与模型组比较无明显差异。表明组合物不能直接对抗异丙肾上腺素所致的大鼠心电图J点的下移，但可以明显促进已经下移的J点恢复。结果见表2。

表2对气虚血瘀心肌缺血大鼠心电图J点的影响

注：注射异丙肾上腺素期间死亡7只大鼠。与模型组比较：

1.3.3对心肌三酶的影响

模型组大鼠，血清AST、L-LDH、CK-MB活性显著升高，与对照组大鼠比较有显著差异(P<0.01)。阳性药组大鼠血清AST、L-LDH和CK-MB活性水平明显降低，与模型组大鼠比较有明显或显著差异(P<0.05或P<0.01)。组合物高剂量组大鼠血清AST、L-LDH和CK-MB活性水平显著降低，与模型组比较有显著和明显差异(P<0.01)。组合物中剂量大鼠血清AST、L-LDH和CK-MB活性水平明显降低，与模型组比较有明显差异(P<0.05)。组合物低剂量大鼠血清AST、L-LDH活性水平明显降低，与模型组比较有明显差异(P<0.05)。结果见表3。

表3对气虚血瘀心肌缺血大鼠心肌酶指标的影响

1.3.4对内皮素和肌钙蛋白的影响

模型组大鼠血清内皮素和肌钙蛋白含量明显增加，与对照组比较有显著差异(P<0.01)。阳性药组大鼠血清内皮素和肌钙蛋白含量明显降低，与模型组比较有明显差异(P<0.05)。组合物高剂量组大鼠血清内皮素和肌钙蛋白含量显著降低，与模型组比较有显著差异(P<0.01)；组合物中剂量大鼠血清内皮素和肌钙蛋白含量明显降低，与模型组比较有明显差异(P<0.05)；组合物低剂量组大鼠血清内皮素和肌钙蛋白含量有降低趋势，与模型组比较无明显差异(P>0.05)。结果见表4。

表4对气虚血瘀心肌缺血大鼠内皮素和肌钙蛋白的影响

1.3.5对抗氧化指标的影响

模型组大鼠血清MDA含量显著高于对照组大鼠(P<0.01)，血清SOD活性显著低于对照组大鼠(P<0.01)。阳性药组大鼠血清MDA含量和SOD活性与模型组大鼠比较，无明显差异(P>0.05)。组合物高、中剂量组大鼠血清MDA含量降低，SOD活性提高，与模型组大鼠比较有明显差异(P<0.05)。组合物低剂量组大鼠可见血清MDA含量降低和SOD活性提高的趋势，与模型组比较无明显差异(P>0.05)。结果见表5。

表5气虚血瘀心肌缺血大SOD和MDA的影响

1.4结论

综上所述，本发明的组合物对半食量饥饿、力竭游泳、注射盐酸肾上腺素和异丙肾上腺素复合因素所致的气虚血瘀心肌缺血大鼠有明显的保护作用，其保护心肌作用机制与降低气虚血瘀大鼠心肌三酶活性，增加超氧化物歧化酶活性，降低内皮素和肌钙蛋白、丙二醛含量有关。

2.对阿霉素所致心衰大鼠的保护作用

2.1试验材料

2.1.1动物

雄性SD大鼠，180～220g，动物等级：SPF级，购自辽宁长生生物技术有限公司，生产单位动物许可证编号为：SCXK-(辽)2020-0001辽宁省实验动物质量合格证号：210726220100688526。接收日期2022年6月8日。本实验经吉林省中医药科学院伦理委员会批准，批准文号JLSZKYDWLL2022-003。

2.1.2饲料

大、小鼠维持饲料，原料组成：玉米、豆粕、鱼粉、麸皮、食盐、碳酸氢钙、石粉、多种维生素、多种微量元素、氨基酸等，购自科澳协力(天津)饲料有限公司，饲料生产许可证号：津饲证(2020)01005，饲料批号：22043231、22063111。

2.1.3饲养环境及条件

吉林省中医药科学院清洁级动物室，试验动物使用许可证号：SYXK(吉)2022-0004，试验动物室温度：19～23℃，相对湿度40～65％，光照：12小时明，12小时暗交替。笼具、笼盖每周更换1-2次，所有动物饲养笼具和垫料均通过高压消毒后使用，保持笼具的清洁，干燥。动物分笼在IVC系统中饲养。每笼的动物数2-3只。自由采食，饮水。

2.1.4动物饮水源

使用重庆华创水处理工程有限公司生产的BDW1-200L-AD纯水机制备的纯净水，灌装消毒的饮水瓶中，供大鼠自由饮水。

2.1.5动物接收方式

动物进入屏障系统前，依次核对包装箱内的动物性别、数量与动物合格证明是否一致，并且逐一对动物外观进行检查。

2.1.6受试物

实施例2制得的颗粒，性状：棕褐色颗粒；来源：吉林省中医药科学院新药中心；含药量：2.3g生药/g；规格：5g/袋；用法用量：口服，每次1袋，每日3次；保存条件：密封，置阴凉干燥处。

2.1.7阳性药

芪苈强心胶囊，成分：黄芪、人参、附子、丹参、葶苈子、泽泻、玉竹、桂枝、红花、香加皮、陈皮组成。用法用量：口服，一次4粒，一日3次。规格：0.3g/粒。功能主治：益气温阳，活血通络，利水消肿。用于冠心病、高血压病所致轻、中度充血性心力衰竭证属阳气虚乏，络瘀水停者，症见心慌气短，动则加剧，夜间不能平卧，下肢浮肿，倦态乏力，小便短少，口唇青紫，畏寒肢冷，咳吐稀白痰等。石家庄以岭药业股份有限公司出品，产品批号：A2111010，生产日期：2021年11月07日，有效期至2024年4月。

2.1.8制作模型材料和试剂

盐酸阿霉素(盐酸多柔比星)：批号：N1111B。CAS:25316-40-9。货号：MB1087。购自大连美仑生物技术有限公司。

2.1.9试剂盒

丙二醛(MDA)测试盒，生产批号：20220723；总超氧化物歧化酶(T-SOD)测试盒，生产批号：20220720；谷胱甘肽过氧化物酶测试盒，生产批号：20220722。以上试剂盒均为南京建成生物工程研究所生产。

大鼠肿瘤坏死因子-α(TNF-α)检测试剂盒和大鼠脑钠素(BNP)检测试剂盒均为上海酶联生物科技有限公司生产(抗体为Abcam公司生产)，生产批号均为Aug 2022。

2.1.10仪器

JA2003B千分之一天平，上海越平科学仪器有限公司产品；JJ200精密电子天平、Y-2000型电子天平，均为常熟双杰测试仪器厂制造；DNM酶标仪，北京普朗新技术有限公司；UV0759紫外-可见分光光度计，上海精密科学仪器有限公司；BL-420F生物机能实验系统由成都泰盟科技有限公司提供；KDC-2046低速冷冻离心机，安徽中科中佳科学仪器有限公司。

2.1.11统计学处理

试验结果采用SPSS19.0统计软件进行统计分析，计量资料以均数±标准差(X±SD)表示，作单因素方差分析。

2.2试验方法

2.2.1分组、造模及治疗

SD大鼠60只，适应3天后随机分为六组，即对照组，模型组，阳性药组和组合物高、中、低剂量组，每组10只。对照组和模型组大鼠灌胃0.5％CMC-Na溶液；阳性药组，灌胃芪苈强心胶囊0.74g/kg；组合物高、中、低剂量组，分别按3.08、1.54、0.77g/kg灌胃组合物。所有大鼠灌胃体积均为10ml/kg，连续灌胃给予10日。第9日，除对照组大鼠外，其他组大鼠一次性腹腔注射10mg/kg的盐酸阿霉素，造急性心衰模型。

2.2.2心功能的检测

第10日给药后1h，大鼠腹腔注射戊巴比妥钠35mg/kg麻醉，仰卧，四肢固定，剪开大鼠颈部偏右侧皮肤，在胸锁乳突肌内侧分离出大鼠右颈总动脉1.5cm，颈总动脉远心端结扎，颈总动脉近心端用动脉夹暂时夹闭，在颈总动脉剪开一小口，把连接生物压力换能器的细导管插入颈总动脉管腔中，丝线固定血管，按二导联法连接心电电极，打开BL-420F生物机能实验系统，记录正常心电和血压后，将导管沿颈总动脉缓缓插向左心室腔，当感到导管随心脏搏动而明显抖动时，减慢插进速度，观察屏幕波形变化，当血压波下沿突然下降几乎接近0mmHg时表明已通过主动脉瓣进入左心室腔内，再稍插入1-2mm，当波形稳定后，用丝线固定好，稳定5分钟，记录大鼠心率(HR)、左心室收缩压(LVSP)、左室终末舒张压(LVEDP)、左室最大上升速率(+dp/dtmax)、左室最大下降速率(-dp/dtmax)。

2.2.3检测指标

在心功能检测完之后，立即腹主动脉采血，3500转离心10分钟，取血清。

2.2.3.1肿瘤坏死因子-α和脑钠素测定

用酶联免疫法测定血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、脑钠素(BNP)含量。

2.2.3.2抗氧化指标

硫代巴比妥酸比色法得到血清MDA含量，羟胺法测定血清SOD活性，比色法测定血清谷胱甘肽过氧化物酶活性。

2.2.3.3心脏检测

取各组大鼠的心肌组织，放入液氮中保存，用于后续实验检测。

2.3试验结果

2.3.1大鼠外观状态

给予阿霉素24小时，对照组大鼠行为正常，模型大鼠活动减少，毛发不整。给药组外观状态好于模型组。

2.3.2对阿霉素所致心力衰竭大鼠心功能的影响

与对照组大鼠比较，模型组大鼠心率明显减慢(P<0.05)，左心室收缩压显著降低(P<0.01)；左室终末舒张压显著增加(P<0.01)，左心室最大上升和下降速率均显著降低(P<0.01)，表明心衰模型成立。与模型组大鼠比较，阳性药组大鼠心率、左心室收缩压、左室最大上升速率、左室最大下降速率均明显提高(P<0.05)。与模型组大鼠比较，组合物高、中剂量组大鼠左心室收缩压、左室最大上升速率、左室最大下降速率明显提高，左室终末舒张压明显降低(P<0.01或P<0.05)。组合物低剂量组大鼠心率、左心室收缩压、左室最大下降速率明显提高，左室终末舒张压明显降低(P<0.05)。结果见表6。

表6对阿霉素所致心衰大鼠血流动力学的影响(n＝10)

注：

2.3.3对肿瘤坏死因子-α和脑钠素的影响

与对照组大鼠比较，模型组大鼠血清TNF-α和BNP含量显著增加(P<

0.01)。与模型组大鼠比较，阳性药组大鼠血清TNF-α和BNP含量明显降低(P<0.05)。与模型组大鼠比较，组合物高剂量组大鼠血清TNF-α和BNP含量显著降低(P<0.01)，组合物中剂量组大鼠血清TNF-α和BNP含量明显和显著降低(P<0.01和P<0.05)，组合物低剂量组大鼠血清TNF-α和BNP含量明显降低(P<0.05)。结果见表7。

表7对急性心衰大鼠血清中TNF-α和BNP含量的影响

2.3.4对抗氧化指标的影响

与对照组大鼠相比，模型组大鼠血清MDA含量显著升高(P<0.01)，SOD、GSH-PX活性显著降低(P<0.01)。与模型组大鼠比较，阳性药组大鼠血清MDA含量明显降低，血清SOD和GSH-PX活性明显提高(P<0.05、P<0.01)。与模型组大鼠比较，组合物高、中剂量组大鼠血清MDA含量显著降低，SOD和GSH-PX活性显著或明显提高(P<0.01、P<0.05)，组合物低剂量组大鼠血清MDA含量有降低趋势，SOD和GSH-PX活性有提高趋势，无显著差异(P>0.05)。结果见表8。

表8对急性心衰大鼠血清中SOD和MDA的影响

2.4结论

综上所述，本发明的组合物对大剂量一次性腹腔注射阿霉素所致的大鼠急性心衰有明显的保护作用，其保护心肌作用机制与增加急性心衰大鼠超氧化物歧化酶活性和谷胱甘肽过氧化物酶，降低脑钠素、肿瘤坏死因子-α、丙二醛含量有关。