一种含抗初老组合物的乳液及其制备方法

技术领域

本发明属于化妆品生产与应用技术领域，具体涉及一种含抗初老组合物的乳液及其制备方法。

背景技术

人体从约25岁开始，皮肤会逐步进入到自然老化状态，衰老速度会因遗传基因和生活习惯的不同而表现出一定差异，此时初老的表现并不明显，至30岁左右初现端倪。加之来自现代社会的多重压力和环境污染，初老迹象主要表现是：细纹、浅层皱纹和干纹的出现，皮肤糖化现象明显，发黄粗糙，色素沉积，黯淡无光；角质层水分含量降低，皮肤干燥或毛孔粗大冒油；肌肤防御能力和血液循环能力下降，易敏感。初老表现出的是肌肤整体状况的下滑，它与衰老所表现出的皱纹加深，皮肤萎缩等现象不完全相同，需要从皮肤护理的多个维度进行缓解。人们对抗初老的产品需求量也日益增涨，抗初老产品必须可有效预防和延缓由内因和外因造成的肌肤衰老问题。目前市面上的护肤品主要的功效还是以保湿为主，功效单一片面，对于抗初老方面的功效较为薄弱。

由于针对肌肤综合状态改善的护肤产品则相对较少或使用效果不佳或刺激性大。效果欠佳或刺激性又与配方配伍性息息相关。且伴随着气候变化、空气污染及化妆品种类与成分复杂化，提高了敏感皮肤的产生，加上人们对皮肤健康意识的提高，敏感皮肤的感知率和关注度逐渐上升。化妆品行业的研发者们意识到了这种现象，将针对敏感皮肤的产品摆在越来越重要的位置，并且已开发出大量针对敏感皮肤各种原因和表现的活性物质。

CN111450010A公开了一种具有抗初老功效的组合物及其在化妆品中的应用。该组合物包括包裹视黄醇、视黄醇棕榈酸酯、肌肽、抗坏血酸葡糖苷、烟酰胺、柑橘果皮提取物、水解透明质酸钠、透明质酸钠，透明质酸钠交联聚合物，β-燕麦葡聚糖、欧洲七叶树籽提取物。该发明提供的化妆品含有上述具有抗初老功效的组合物，具有改善和改提升皮肤综合状态的功效，有助于恢复皮肤健康状态，抵抗肌肤初老。

CN111973508A公开了一种舒缓保湿的抗初老组合物，包括以下按重量百分比计算的组分：甘草酸二钾0.02-0.2％、母菊花提取物1-3％、抗初老组合物1-15％、保湿剂1-20％、增稠剂0.05-1％、乳化剂0.5-2.5％、润肤剂1-10％以及余量的纯水；其中，所述抗初老组合物为乙酰基六肽-8、二裂酵母发酵产物溶胞物、茶叶提取物、葡萄籽提取物和黑莓叶提取物；该发明组合物通过各种成分的合理搭配，舒缓修复由各种光源给肌肤带来的损伤，并为肌肤提供深沉补水达到及时抗衰效果。

因此，开发一种具有舒缓，修护肌肤的护肤品是本领域研究的重点。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种含抗初老组合物的乳液及其制备方法。所述含抗初老组合物的乳液具有长效舒缓，修护肌肤的功效。

为达此目的，本发明采用以下技术方案：

第一方面，本发明提供一种含抗初老组合物的乳液，所述含抗初老组合物的乳液的制备原料包括：抗初老组合物、皮肤调理剂、保湿剂和水；

所述抗初老组合物包括：姜花根提取物、黄岑根提取物和可可籽提取物；

所述皮肤调理剂包括：水解红藻提取物、人参提取物和高山火绒草提取物。

在本发明中，所述抗初老组合物通过调节细胞氧化还原平衡，调节细胞自噬，促进细胞排毒来提高皮肤的耐受力，可与乳液的皮肤调理剂中各成分相互配合，协同增效，从而提高乳液的舒缓、修护的功效。

其中，姜花根提取物，可以调节成纤维细胞的自噬作用，以此实现细胞本身的代谢需要、某些细胞器的更新以及维持细胞稳态；即使在蓝光压力下也可以保护成纤维细胞的溶酶体网络，帮助皮肤提高自身天然防护力从而抵御蓝光/UV损伤，促进细胞排毒，促进皮肤新生等进程。黄岑根提取物能抑制弹性蛋白酶，干扰分泌，可以消除自由基，从而增加皮肤新陈代谢、增加皮肤弹性和抗皱性，可以抗初老；促进脑酰胺，改善皮脂使皮肤柔润；能抑制皮炎、增强皮肤的抵抗力，具有抗炎性；能中和释放的组胺，具有防止过敏的能力。可可籽提取物富含分子肽、糖类和多酚，蓝光压力下减少活性氧，蓝光压力下保护视蛋白光感受器，提高胶原蛋白I，原纤蛋白-1和syndecan-4的含量，显著改善弹性蛋白纤维网状结构，从而改善皮肤弹性，明显改善皮肤皱纹。

其中，水解红藻提取物可以调节神经源性炎症，与抑制慢性炎症的抗初老组合物协同增效，可以有效抑制皮肤发红，减少皮肤瘙痒，起到舒缓皮肤的功效。人参提取物能延缓皮肤衰老，防止皮肤干燥脱水，增加皮肤的弹性，从而起到保护皮肤光泽柔嫩，防止和减少皮肤皱纹的作用，人参活性物质还具有抑制黑色素的还原性能，使皮肤洁白光滑。高山火绒草提取物蕴含丰富的矿物质，对肌肤具舒缓、镇静、美白及滋养保护作用，能够温和而深层清洁皮肤，去除表皮的油脂及毛孔内污质，同时舒缓皮肤紧张状态，柔和不紧绷，天然美白成分，能够渗入肌肤，帮助分解代谢杂质，防止色素沉着，用后肌肤柔滑细致，白皙光泽。

优选地，在所述抗初老组合物中，所述姜花根提取物、黄岑根提取物和可可籽提取物的质量比为(3-8):(5-15):(2-7)；

其中，“3-8”可以为3、4、5、6、7、8等；

其中，“5-15”可以为5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15等；

其中，“2-7”可以为2、3、4、5、6、7等。

优选地，在所述皮肤调理剂中，所述水解红藻提取物、人参提取物和高山火绒草提取物的质量比为(1-5):(0.1-0.5):(0.1-0.5)；

其中，“1-5”可以为1、1.5、2、2.5、3、3.5、4、4.5等；

其中，第一个“0.1-0.5”可以为0.1、0.2、0.3、0.4、0.5等；

其中，第二个“0.1-0.5”可以为0.1、0.2、0.3、0.4、0.5等。

优选地，以所述含抗初老组合物的乳液的制备原料的质量为100％计，所述含抗初老组合物的乳液的制备原料按质量百分含量计包括：抗初老组合物0.01-5％、皮肤调理剂0.01-10％、乳化剂1-2％、保湿剂5-25％，余量为水。

其中，抗初老组合物的含量为0.01-5％，例如可以是0.01％、0.02％、0.05％、0.1％、0.15％、0.2％、0.4％、0.5％、0.6％、0.8％、1％、2％、3％、4％、5％等。

其中，皮肤调理剂的含量为0.01-10％，例如可以是0.01％、0.02％、0.05％、0.1％、0.15％、0.2％、0.4％、0.5％、0.6％、0.8％、1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％等。

其中，乳化剂的含量为1-2％，例如可以是1％、1.2％、1.4％、1.6％、1.8％、2％等。

其中，保湿剂的含量为5-25％，例如可以是5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％、22％、25％等。

优选地，所述皮肤调理剂还包括：苦参根提取物、胀果甘草根提取物、烟酰胺、酵母菌/川谷籽发酵产物滤液、二裂酵母发酵产物溶胞物、动物脐带提取物、动物胎盘蛋白或动物胎盘酶中的任意一种或至少两种的组合。

优选地，以所述含抗初老组合物的乳液的制备原料的质量为100％计，所述皮肤调理剂包括：水解红藻提取物1-5％、人参提取物0.1-0.5％、高山火绒草提取物0.1-0.5％、苦参根提取物0.01-0.1％、胀果甘草根提取物0.01-0.1％、烟酰胺0.1-1％、酵母菌/川谷籽发酵产物滤液0.01-0.1％、二裂酵母发酵产物溶胞物0.01-0.3％、动物脐带提取物0.01-0.1％、动物胎盘蛋白0.01-0.1％和动物胎盘酶0.01-0.1％。

其中，水解红藻提取物的含量为1-5％，例如可以1％、1.5％、2％、2.5％、3％、3.5％、4％、4.5％、5％等。

其中，人参提取物的含量为0.1-0.5％，例如可以是0.1％、0.15％、0.2％、0.25％、0.3％、0.35％、0.4％、0.45％、0.5％等。

其中，高山火绒草提取物的含量为0.1-0.5％，例如可以是0.1％、0.15％、0.2％、0.25％、0.3％、0.35％、0.4％、0.45％、0.5％等。

其中，苦参根提取物的含量为0.01-0.1％，例如可以是0.01％、0.02％、0.04％、0.06％、0.08％、0.1％等。

其中，胀果甘草根提取物的含量为0.01-0.1％，例如可以是0.01％、0.02％、0.04％、0.06％、0.08％、0.1％等。

其中，烟酰胺的含量为0.1-1％，例如可以是0.1％、0.2％、0.4％、0.6％、0.8％、1％等。

其中，酵母菌/川谷籽发酵产物滤液的含量为0.01-0.1％，例如可以是0.01％、0.02％、0.04％、0.06％、0.08％、0.1％等。

其中，二裂酵母发酵产物溶胞物的含量为0.01-0.3％，例如可以是0.01％、0.02％、0.04％、0.06％、0.08％、0.1％、0.15％、0.2％、0.25％、0.3％等。

其中，动物脐带提取物的含量为0.01-0.1％，例如可以是0.01％、0.02％、0.04％、0.06％、0.08％、0.1％等。

其中，动物胎盘蛋白的含量为0.01-0.1％，例如可以是0.01％、0.02％、0.04％、0.06％、0.08％、0.1％等。

其中，动物胎盘酶的含量为0.01-0.1％，例如可以是0.01％、0.02％、0.04％、0.06％、0.08％、0.1％等。

优选地，所述乳化剂包括：C20-22醇和/或C20-22醇磷酸酯。

优选地，以所述含抗初老组合物的乳液的制备原料的质量为100％计，所述乳化剂包括：C20-22醇0.5-1％和C20-22醇磷酸酯0.5-1％。

其中，C20-22醇的含量为0.5-1％，例如可以是0.5％、0.6％、0.7％、0.8％、0.9％、1％等。

其中，C20-22醇磷酸酯的含量为0.5-1％，例如可以是0.5％、0.6％、0.7％、0.8％、0.9％、1％等。

优选地，所述保湿剂包括：丁二醇、甘油聚醚-26、海藻糖、透明质酸钠或1,2-己二醇中的任意一种或至少两种的组合。

优选地，以所述含抗初老组合物的乳液的制备原料的质量为100％计，所述保湿剂包括：丁二醇5-10％、甘油聚醚-262-5％、海藻糖2-4％、透明质酸钠0.15-0.25％、1,2-己二醇0.1-1％。

其中，丁二醇的含量为5-10％，例如可以是5％、6％、7％、8％、9％、10％等。

其中，甘油聚醚-26的含量为2-5％，例如可以是2％、2.5％、3％、3.5％、4％、4.5％、5％等。

其中，海藻糖的含量为2-4％，例如可以是2％、2.5％、3％、3.5％、4％等。

其中，透明质酸钠的含量为0.15-0.25％，例如可以是0.15％、0.17％、0.2％、0.23％、0.25％等。

其中，1,2-己二醇的含量为0.1-1％，例如可以是0.1％、0.2％、0.4％、0.6％、0.8％、1％等。

优选地，所述乳液的制备原料中还包括：润肤剂、增稠剂、pH调节剂、螯合剂、抗氧化剂或芳香剂中的任意一种或至少两种的组合。

优选地，以所述含抗初老组合物的乳液的制备原料的质量为100％计，所述乳液的制备原料中还包括：润肤剂5-10％、增稠剂0.2-0.5％、pH调节剂0.16-0.35％、螯合剂0.01-0.05％、抗氧化剂0.1-1％和芳香剂0.01-0.05％。

其中，润肤剂的含量为5-10％，例如可以是5％、5.5％、6％、6.5％、7％、8％、9％、10％等。

其中，增稠剂的含量为0.2-0.5％，例如可以是0.2％、0.25％、0.3％、0.35％、0.4％、0.45％、0.5％等。

其中，pH调节剂的含量为0.16-0.35％，例如可以是0.16％、0.18％、0.2％、0.22％、0.24％、0.26％、0.28％、0.3％、0.32％、0.35％等。

其中，螯合剂的含量为0.01-0.05％，例如可以是0.01％、0.02％、0.03％、0.04％、0.05％等。

其中，抗氧化剂的含量为0.1-1％，例如可以是0.1％、0.2％、0.4％、0.6％、0.8％、1％等。

其中，芳香剂的含量为0.01-0.05％，例如可以是0.01％、0.015％、0.02％、0.025％、0.03％、0.04％、0.05％等。

优选地，所述润肤剂包括角鲨烷、异壬酸异壬酯或霍霍巴籽油中的任意一种或至少两种的组合。

优选地，所述增稠剂包括丙烯酰二甲基牛磺酸铵/VP共聚物和/或卡波姆。

优选地，所述pH调节剂为精氨酸。

优选地，所述螯合剂为EDTA二钠。

优选地，所述抗氧化剂为对羟基苯乙酮。

优选地，所述芳香剂为香精。

第二方面，本发明提供一种如第一方面所述的含抗初老组合物的乳液的制备方法，所述乳液的制备方法包括以下步骤：

(1)将保湿剂和水进行水相混合，得到水相混合液；将乳化剂进行油相混合，得到油相混合液；

(2)将步骤(1)得到的水相混合液和油相混合液混合均质，得到均质液；

(3)将步骤(2)得到的均质液、抗初老组合物和皮肤调理剂，混合搅拌，得到所述含抗初老组合物的乳液。

优选地，步骤(1)中所述水相混合的温度为80-85℃，例如可以是80℃、81℃、82℃、83℃、84℃、85℃等，所述水相混合的时间为5-10min，例如可以是5min、6min、7min、8min、9min、10min等。

优选地，步骤(1)中所述油相混合的温度为75-80℃，例如可以是75℃、76℃、77℃、78℃、79℃、80℃等，所述油相混合的时间为5-10min，例如可以是5min、6min、7min、8min、9min、10min等。

优选地，步骤(1)中，所述水相混合还需增稠剂。

优选地，步骤(1)中，所述油相混合还需添加润肤剂。

优选地，步骤(2)中所述混合均质的温度为80-82℃，例如可以是80℃、80.5℃、81℃、81.5℃、82℃等，所述混合均质的时间为5-10min，例如可以是5min、6min、7min、8min、9min、10min等。

优选地，步骤(3)中所述混合搅拌的温度为40-50℃，例如可以是40℃、42℃、44℃、46℃、48℃、50℃等，所述混合搅拌的时间为5-10min，例如可以是5min、6min、7min、8min、9min、10min等。

优选地，步骤(3)中，所述混合搅拌还需添加pH调节剂、螯合剂、抗氧化剂或芳香剂中的任意一种或至少两种的组合。

相对于现有技术，本发明具有以下有益效果：

(1)本发明所述抗初老组合物和皮肤调理剂中各组分协同增效，可有效减少因外界环境导致的皮肤脆弱敏感的状态，增强肌肤抵抗力，改善皮肤弹性，减少皱纹，减少肌肤发红，增加皮肤水分，使肌肤保持光泽细腻的健康状态；

(2)本发明所述乳液通过多种植物提取物来调节肌肤的代谢，能够渗入肌肤，帮助分解代谢杂质，防止色素沉着，用后肌肤柔滑细致，白皙光泽，且更能针对敏感肌肤，通过调节皮肤生理功能，修复肌肤到达最佳生理状态，具有非常明显的修复和舒缓功效。

具体实施方式

下面通过具体实施方式来进一步说明本发明的技术方案。本领域技术人员应该明了，所述实施例仅仅是帮助理解本发明，不应视为对本发明的具体限制。

以下制备例中各组分均可由市售购得。

制备例1

本制备例提供一种姜花根提取物，所述姜花根提取物由以下制备方法制备得到：

(1)将姜花根部在-15℃下冷冻18h后，再在-2℃下进行低温粉碎后过筛，得到150目的姜花根粉；

(2)将步骤(1)得到的姜花根粉和正丁醇混合，在25℃浸提2h后，将浸提得到的溶液浓缩，得到浓缩液；再将浓缩液和乙醇混合，在40℃浸提1h后过滤，得到姜花根粗提取液；

其中，姜花根粉、正丁醇和乙醇的质量比为1:10:8；

(3)将步骤(2)得到的姜花根粗提取液过大孔吸附树脂AB-8，先用去离子水水洗涤后弃去水液，再用60wt％的乙醇水溶液洗涤，收集洗涤得到的乙醇水溶液部分，进行浓缩，得到姜花根提取物。

制备例2

本制备例提供一种黄岑根提取物，所述黄岑根提取物由以下制备方法制备得到：

(a)将黄岑根部粉碎后过筛，得到200目的黄岑根粉；

(b)以质量比为1:10的比例将步骤(a)得到的黄岑根粉和浓度为60wt％的乙醇水溶液混合，并以600W的功率微波提取8min后浓缩，得到黄岑根粗提取物；

(c)采用浓度为10wt％的乙醇水溶液将步骤(b)得到的黄岑根粗提取物溶解，再采用大孔树脂凝胶柱D101纯化，并采用浓度为60wt％的乙醇水溶液洗脱，浓缩，得到所述黄岑根提取物。

制备例3

本制备例提供一种可可籽提取物，所述可可籽提取物由以下制备方法制备得到：

(A)将可可籽粉碎至粒径为100目后，以1:10的质量比将粉碎后的可可籽与正己烷混合，在30℃下浸泡3h后，过滤并干燥，得到脱脂可可籽粉；

(B)将步骤(A)得到的脱脂可可籽粉和水混合后加热至45℃，再与生物酶和酸混合，所述脱脂可可籽粉、水和纤维素酶的质量比为1:15:0.006，在45℃、pH为5的条件下进行酶解反应1.5h后灭活，得到可可籽酶解产物；

(C)以质量比为1:10的比例将步骤(B)得到的可可籽酶解产物和浓度为60wt％的乙醇水溶液混合，以300W的功率进行超声提取50min，过滤后浓缩，得到所述可可籽粗提取物。

除姜花根提取物、黄岑根提取物和可可籽提取物由上述制备方法制备得到，下述实施例和对比例中其余组分均可由市售购得。

实施例1

本实施例提供一种抗初老组合物，所述抗初老组合物包括：6份姜花根提取物、10份黄岑根提取物和4份的可可籽提取物。

实施例2

本实施例提供一种抗初老组合物，所述抗初老组合物按重量份数计包括：5份的姜花根提取物、9份的黄岑根提取物和6份的可可籽提取物。

实施例3

本实施例提供一种抗初老组合物，所述抗初老组合物按重量份数计包括：7份的姜花根提取物、8份的黄岑根提取物和5份的可可籽提取物。

实施例4

本实施例提供一种抗初老组合物，所述抗初老组合物按重量份数计包括：3份的姜花根提取物、15份的黄岑根提取物和2份的可可籽提取物。

实施例5

本实施例提供一种抗初老组合物，所述抗初老组合物按重量份数计包括：8份的姜花根提取物、5份的黄岑根提取物和7份的可可籽提取物。

对比例1

本对比例提供一种组合物，所述组合物按重量份数计包括：8份的姜花根提取物、12份的黄岑根提取物。

对比例2

本对比例提供一种组合物，所述组合物按重量份数计包括：11份的姜花根提取物、9份的可可籽提取物。

对比例3

本对比例提供一种组合物，所述组合物按重量份数计包括：8份的黄岑根提取物、12份的可可籽提取物。

应用例1

本应用例提供一种含抗初老组合物的乳液，所述含抗初老组合物的乳液的制备原料按质量百分含量计包括如下组分：

本应用例所述含抗初老组合物的乳液的制备方法包括以下步骤：

(1)将上述保湿剂、增稠剂和水在82℃下搅拌混合8min，得到水相混合液；将上述润肤剂和乳化剂在78℃下搅拌混合8min，得到油相混合液；

(2)将步骤(1)得到的水相混合液和油相混合液在80℃下混合均质8min，得到均质液；

(3)将步骤(2)得到的的均质液、抗初老组合物、皮肤调理剂、pH调节剂、螯合剂、抗氧化剂和芳香剂，在45℃下混合搅拌6min，得到所述乳液。

应用例2

本应用例提供一种含抗初老组合物的乳液，所述含抗初老组合物的乳液的制备原料按质量百分含量计包括如下组分：

本应用例所述含抗初老组合物的乳液的制备方法同应用例1。

应用例3

本应用例提供一种含抗初老组合物的乳液，所述含抗初老组合物的乳液的制备原料按质量百分含量计包括如下组分：

本应用例所述含抗初老组合物的乳液的制备方法同应用例1。

应用例4

本应用例提供一种含抗初老组合物的乳液，所述含抗初老组合物的乳液的制备原料按质量百分含量计包括如下组分：

本应用例所述含抗初老组合物的乳液的制备方法同应用例1。

应用例5

本应用例提供一种含抗初老组合物的乳液，所述含抗初老组合物的乳液的制备原料按质量百分含量计包括如下组分：

本应用例所述含抗初老组合物的乳液的制备方法同应用例1。

应用例6

本应用例提供一种乳液，与应用例1的区别在于，不添加海藻糖，丁二醇含量增至6.0％，甘油聚醚-26含量增至4.0％，透明质酸钠含量增至1.2％，其他组分含量及制备方法同应用例1。

应用例7

本应用例提供一种乳液，与应用例1的区别在于，不添加透明质酸钠，海藻糖含量增至3.2％，其他组分含量及制备方法同应用例1。

应用例8

本应用例提供一种乳液，与应用例1的区别在于，不添加角鲨烷，异壬酸异壬酯含量增至4.0％，霍霍巴籽油含量增至2.5％，其他组分含量及制备方法同应用例1。

应用例9

本应用例提供一种乳液，与应用例1的区别在于，不添加霍霍巴籽油，角鲨烷含量增至4.3％，霍霍巴籽油含量增至2.2％，其他组分含量及制备方法同应用例1。

对比应用例1

本对比应用例提供一种乳液，与应用例1的区别在于，将实施例1提供的抗初老组合物替换为等质量的对比例1提供的组合物，其他组分含量及制备方法同应用例1。

对比应用例2

本对比应用例提供一种乳液，与应用例1的区别在于，将实施例1提供的抗初老组合物替换为等质量的对比例2提供的组合物，其他组分含量及制备方法同应用例1。

对比应用例3

本对比应用例提供一种乳液，与应用例1的区别在于，将实施例1提供的抗初老组合物替换为等质量的对比例3提供的组合物，其他组分含量及制备方法同应用例1。

对比应用例4

本对比应用例提供一种乳液，与应用例1的区别在于，不添加水解红藻提取物，人参提取物含量增至1.2％、高山火绒草提取物含量增至1.3％，其他组分含量及制备方法同应用例1。

对比应用例5

本对比应用例提供一种乳液，与应用例1的区别在于，不添加人参提取物，水解红藻提取物含量增至2.1％、高山火绒草提取物含量增至0.4％，其他组分含量及制备方法同应用例1。

对比应用例6

本对比应用例提供一种乳液，与应用例1的区别在于，不添加高山火绒草提取物，水解红藻提取物含量增至2.2％、人参提取物含量增至0.3％，其他组分含量及制备方法同应用例1。

试验例1

安全性能测试

对应用例1-9提供的乳液和对比应用例1-6提供的乳液进行安全性能测试，方法如下：

(1)红细胞溶血实验

红细胞悬液的制备：选择健康家兔，心脏取血9mL，加入2％的草酸钾溶液1mL，离心，弃去上清液，用20mmol/L的PBS溶液将沉淀物稀释至20mL，4℃保存备用。选择样品用PBS溶液稀释至不同浓度，每个样品设置5个浓度梯度。取10mL待测样品的稀释液，加入200μL上述红细胞悬液(控制样品终浓度分别为5、10、20、50、100mg/mL)，以蒸馏水作为全溶血对照，PBS溶液作为阴性对照，轻轻混匀，37℃下孵育30min，在2000r/min的转速下离心10min，取上清液，用分光光度计测试其在560nm处的吸光度(A

绘制溶血率-样品浓度标准曲线，计算50％红细胞发生溶血时的样品浓度(HD

(2)蛋白变性实验：

将样品用PBS溶液稀释至10g/L，取10mL待测样品的稀释液，加入200μL上述红细胞悬液，以蒸馏水作为空白对照，1mg/mL十二烷基硫酸钠(SDS)溶液作为阳性对照，轻轻混匀，37℃下孵育30min，在2000r/min的转速下离心10min，取上清液，用分光光度计分别测试其在540nm和575nm处的吸光度A

其中，R

根据L/D值对待测样品的刺激性进行评价，其中L/D值为HD

表1

上述红细胞溶血实验和蛋白变性实验的测试结果如下表2所示：

表2

由安全性能测试可知，由上述试验结果可知，本发明应用例1-9所制备的乳液温和无刺激；本发明所制备的乳液的50％红细胞发生溶血时的样品浓度HD

试验例2

美白功效测试

对应用例1-9提供的乳液和对比应用例1-6提供的乳液进行美白功效测试，方法如下：

(1)酪氨酸酶活性抑制试验

取对数生长期的小鼠黑色素瘤B16细胞，接种于6孔细胞培养板，培养过夜。分别加入终体积分数为1％的待测样品，以未处理组作细胞对照组，每组2个复孔。培养48h后用PBS洗涤1次，每孔加入100μL裂解液，刮取收集细胞，离心取上清液。取50μL细胞上清液至96孔板，再加入50μL 1％L-多巴溶液，于37℃孵育1h，M3读板仪于475nm处读取吸光度值。

相对酪氨酸酶活性(％)＝(测定孔吸光度值-空白对照组吸光度值)/(细胞对照组吸光度值-空白对照组吸光度值)×100％。

(2)黑色素合成抑制实验

取对数生长期的小鼠黑色素瘤B16细胞，接种于T25细胞培养瓶，培养过夜。分别加入终体积分数为1％的待测样品，以未处理组作为细胞对照组。培养48h后用PBS洗涤1次，加入1mL 1mol/L NaOH溶液，刮取收集细胞，放入80℃水浴中30min，取上清液加入96孔板，M3读板仪于475nm处读取吸光度值。

相对黑色素含量(％)＝(测定孔吸光度值-空白对照组吸光度值)/(细胞对照组吸光度值-空白对照组吸光度值)×100％，其中对照组的酪氨酸酶活性为100％，对照组的黑色素含量为100％。

(3)美白效果人体评测

选取150名年龄25-50岁的志愿者，男女不限，随机分成15组，每组10人，分别涂抹各待测样品于手臂，每天早晚各使用1次，每次涂抹量均为2mL，共使用4周。采用皮肤红黑色素测试仪(HexameterMX18)评估受试对象使用前、后皮肤黑色素含量变化。所用仪器的测量范围是0-999，测量数值越高，说明皮肤中黑色素含量越高。

具体测试结果如表3所示：

表3

由表3的测试结果可知，使用本发明提供的乳液后相对酪氨酸酶活性为17-18％，对酪氨酸酶的抑制效果较好；同时也能明显抑制细胞中的黑色素的合成，相对黑色素含量为8-12％；且通过人体评测结果可知，本发明提供的乳液在使用4周之后，能够明显降低受试者的黑色素含量，受试对象黑色素减少量达到60％以上。说明本发明所述抗初老组合物通过可与乳液的皮肤调理剂中各成分相互配合，协同增效，从而更为有效地抑制黑色素的合成和转移，促进黑色素的分解与排除，抑制酪氨酸酶活性，促进色素代谢，帮助分解代谢杂质，防止色素沉着，用后肌肤柔滑细致，白皙光泽。

试验例3

组胺抑制测试

对应用例1-9提供的乳液和对比应用例1-6提供的乳液进行组胺抑制测试，方法如下：

组胺是生物体内的一种化学传递介质，存在于人体的嗜碱粒细胞和肥大细胞的细胞质颗粒中，皮肤发生过敏、炎症及瘙痒现象与肥大细胞中组胺的释放存在正相关性。研究证明，通过抑制组胺释放可以达到抗敏舒缓的作用；实验采用肥大细胞脱颗粒剂(Compound48/80)诱导豚鼠离体肥大细胞释放组胺，然后通过对应用例1-9提供的乳液和对比应用例1-6提供的乳液进行舒缓功效测试，抑制组胺的释放。采用HPLC法测定豚鼠肥大细胞组胺释放含量，分别对各待测样品的组胺释放抑制率进行测量。

具体测试结果如表4所示：

表4

由表4的测试结果可知，本发明提供的乳液对组胺释放抑制率为77％以上。说明本发明所述抗初老组合物通过可与乳液的皮肤调理剂中各成分相互配合，协同增效，能够通过抑制组胺释放可以达到抗敏舒缓的作用。

试验例4

舒缓敏感刺激效果功能评价

(1)测试样品：应用例1-9提供的乳液和对比应用例1-6提供的乳液；

(2)测试方法：选取150名年龄25-50岁的敏感肌肤人群(刺痛感累计≥3分者)，男女不限，随机分成15组，每组10人；选择受试者鼻沟两测进行试验，受试者的受试部位在测试前15天不能使用任何化妆品、外用药品或内服保健品，试验前，要求受试者清洗颜面部并在清洗后2小时内进入温度为22±1℃、湿度为50±5％的恒温恒湿房间内静坐30min，并保持放松状态；

将50μL的10％乳酸溶液滴在直径为0.8c m的单层滤纸上，分别在第3min、4min和5min询问受试者刺痛感，按4分法进行评分(0分为没有刺痛感，1分为轻度刺痛，2分为中度刺痛，3分为重度刺痛)，记录受试者的评分作为该侧乳酸刺激评分初始值(D0)，实验共进行7天，受试者需按照要求每天早晚使用产品各1次，并避免交叉污染，受试者需在第7天(D7)进行回访；测试时应保持照明条件一致、床的倾斜角度和摆放位置一种，同一个受试者的测试由同一个测量人员完成，计算乳酸刺激结果变化率％；

具体测试结果如表5所示：

表5

由表5测试数据可知，使用本发明提供的乳液7天后，乳酸刺激结果变化率达到-28％以下，说明本发明所述抗初老组合物通过可与乳液的皮肤调理剂中各成分相互配合，协同增效，更能针对敏感肌肤，通过调节皮肤生理功能，修复肌肤到达最佳生理状态，对于敏感性肌肤具有非常明显的修复和舒缓功效，更加吻合肌肤的生理需求。

申请人声明，本发明通过上述实施例来说明本发明所述含抗初老组合物的乳液及其制备方法，但本发明并不局限于上述实施例，即不意味着本发明必须依赖上述实施例才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了，对本发明的任何改进，对本发明产品各原料的等效替换及辅助成分的添加、具体方式的选择等，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。