用于治疗病毒感染的2,6-二甲基-N-((吡啶-4-基)甲基)咪唑并1,2-b哒嗪-8-胺和2,5-二甲基-N-(吡啶-4-基)甲基吡唑并1,5-a嘧啶-7-胺衍生物

技术领域

本发明一般性涉及在治疗中，特别是在治疗由某些病毒引起的病况中具有有用性的化合物，所述病况例如感冒、脑炎、脑膜炎、心肌炎、结膜炎、胰腺炎以及糖尿病、癌症和神经变性疾病(例如阿尔茨海默病和肌萎缩性侧索硬化)。更特别地，本发明涉及某些氨基取代的杂芳族化合物及其在治疗中的用途。

背景技术

吡唑并[1,5-a]嘧啶是药物化学中常用的骨架，并且已知其衍生物具有作为镇痛药、苯并二氮杂

该骨架也已描述于磷脂酰肌醇4-激酶(PI4K)抑制剂中。Bianco等人(PLoSPathogens, 2012, 8(3), 1-17)和LaMarche等人(Antimicr. Agents and Chemother.2012, 56(10), 5149-5156)已经显示PI4K对于丙肝病毒(HCV)复制是重要的，并且Yang等人(J. Biol. Chem. 2012, 287(11), 8547-8467)已经显示出对与冠状病毒是相同的。McLeod等人(ACS Med. Chem. Lett. 2013, 4(7), 585-589)和van der Schaar等人(Antimicrobial Agents Chemother. 2013, 57(10), 4971-4981)已经显示抑制PI4K的一些咪唑并吡嗪衍生物是针对小核糖核酸病毒的有效的抗病毒剂。

Gudmundsson等人(Bioorg. Med. Chem. Lett. 2009, 19, 5689-5692)已经公开了针对疱疹病毒具有有效活性的一些3-芳基吡唑并[1,5-a]嘧啶。

Hwang等人(Bioorg. Med. Chem. Lett. 2012, 22, 7297-7301)已经描述了具有抗HCV作用的作为PI4K抑制剂的3-芳基吡唑并[1,5-a]嘧啶。Décor等人(Bioorg Med ChemLett. 2013, 23, 3841-7)也已经显示PI4K对于肠道病毒复制是重要的。然而，他们还已经显示，当体内测试时，PI4K抑制剂(非3-芳基吡唑并[1,5-a]嘧啶和3-芳基吡唑并[1,5-a]嘧啶3-(3,4-二甲氧基苯基)-2,5-二甲基-N-(2-吗啉代乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-胺(称为T-00127-HEV1))在小鼠中诱导死亡，这引起对抑制PI4K的安全性的怀疑。

在WO 2015/110491中，某些3-芳基吡唑并[1,5-a]嘧啶被描述为PI4K抑制剂，用于治疗病毒诱导的疾病。

咪唑并[1,2-b]哒嗪衍生物已被描述为Mps1激酶抑制剂(Kusakabe, J. Med.Chem. 2015, 58, 1760-1775)。类似的骨架已经被描述为存在于磷脂酰肌醇4-激酶(PI4K)抑制剂(McLeod等人(ACS Med. Chem. Lett. 2013, 4(7), 585-589)和van der Schaar等人(Antimicrobial Agents Chemother. 2013, 57(10), 4971-4981)，并且PI4K的抑制剂已经显示是有效的抗病毒剂(Bianco等人, PLoS Pathogens, 2012, 8(3), 1-17；LaMarche等人, Antimicr. Agents and Chemother. 2012, 56(10), 5149-5156；Décor等人, Bioorg. Med. Chem. Lett. 2013, 23, 3841-7)。

自噬是细胞中的自我平衡劣化过程，用于在应激时产生营养物，并作为回收胞液中受损细胞器或微生物的机制(Karanasios等人, 2016, Autophagy at the cell,tissue and organismal level (Springer))。许多病原体与宿主自噬途径相互作用，并可能损害正常的自噬。Lai等人(Virus, 2016, 8(32), 1-13)描述了病毒破坏自噬机制以利于病毒复制并从宿主中离开，并且PI4KIIIβ的抑制将对自噬过程有影响，并因此抑制病毒复制。Sridhar等人(EMBO J. 2013,32, 324-339)描述了PI4KIIIβ在自噬中是关键因素，并且认为许多疾病由损伤的或异常的自噬引起或与其有关，例如神经变性和神经精神疾病、癌症、心脏病、炎性疾病和糖尿病(Polajnar等人, J. Cell. Mol. Med. 2014, 9(18).1705-1711；Levine等人, Cell, 2008, 132(1), 27-42；Barlow,等人, DNA Cell. Biol,2015, 34(4), 252-260)。

细胞色素P450 3A4 (缩写为CYP3A4)是最重要的细胞色素P450酶之一，并且涉及许多临床有用的治疗剂的氧化生物转化。因此，CYP3A4的抑制剂可以影响多种药物的代谢，增加它们的生物利用度，从而由于出乎意料的高药物暴露而引起不良事件。在平行接受几种不同药物的患者中，必须避免这样的药物-药物相互作用，并且这有时排除一些在其他方面在治疗上有用的药物的使用。

因此，对新药具有持续的需求，所述新药不仅具有所寻求的治疗后活性，而且对药物代谢中涉及的酶(特别是CYP3A4)的活性没有或几乎没有影响。

发明内容

第一方面是式(I)的化合物

或其药学上可接受的盐，其中

X和Y中的一个是C，而另一个是N；

R

R

式(I)的化合物组合高抗病毒活性和低(优选基本上可忽略不计的)CYP3A4抑制活性。因此，本文提供了药物-药物相互作用的风险显著降低的药物。

另一方面是用于治疗的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。

另一方面是药物组合物，其包含式(I)的化合物或其药学上可接受的盐和任选的药学上可接受的赋形剂。

另一方面是用于治疗病毒感染（例如RNA病毒感染）的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。

另一方面是式(I)的化合物或其药学上可接受的盐在制造用于治疗病毒感染(例如RNA病毒感染)的药物中的用途。

另一方面是用于治疗本文提及的疾病的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，其能够改进细胞中受损的或调节异常的自噬。

另一方面是用于治疗与受损的或异常的自噬相关的疾病的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。

另一方面是用于治疗与受损的自噬相关的疾病的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。

另一方面是用于治疗与异常的自噬相关的疾病的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。

另一方面是用于治疗无包膜单链(+) RNA病毒感染的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。

另一方面是用于治疗肠道病毒感染（例如小核糖核酸病毒感染）的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。

再一方面是用于治疗以下的疾病的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，所述疾病选自：胰腺炎、脊髓灰质炎、脑炎、脑膜炎、脓毒症、癌症(例如乳腺癌、前列腺癌、卵巢癌或结肠直肠癌)、麻痹、心脏病(例如心肌炎)、糖尿病、感冒、手足口病、疱疹性咽峡炎、胸膜痛、腹泻、粘膜皮肤损伤、呼吸道疾病、结膜炎、肌炎、慢性疲劳综合征、神经精神疾病和神经变性疾病(例如多发性硬化症、帕金森病、肌萎缩性侧索硬化、阿尔茨海默病和亨廷顿病)或炎性病况。

另一方面是用于治疗病毒感染(例如RNA病毒感染)的方法，所述方法通过给予需要这样的治疗的哺乳动物治疗有效量的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。

具体实施方式

除非另有定义或通过上下文清楚地指出，否则本文所用的所有技术和科学术语和缩写具有与本公开所属领域的普通技术人员通常理解相同的含义。然而，本文所用的一些术语的定义将在下文中给出。

“药学上可接受的”是指可用于制备药物组合物，其通常是安全、无毒的，并且在生物学上和其它方面都不是不期望的，并且包括可用于兽医用途以及人类药物用途。

术语疾病或病症的“治疗(treating)” (或“治疗(treatment)”)可以指改善疾病或病症(即，阻止或减少疾病或其至少一种临床症状的发展)，和/或改善患者可能无法辨别的至少一种身体参数。该术语还可以指抑制疾病或病症，通过物理地(例如，稳定可辨别的症状)、生理地(例如，稳定身体参数)或两者。

“治疗有效量”是指当给予患者用于治疗疾病时，足以实现该疾病的这样的治疗的化合物的量。“治疗有效量”将根据化合物、疾病及其严重性以及待治疗患者的年龄、体重等而变化。

“病毒感染”是指在哺乳动物中病毒的感染。

“RNA病毒感染”是指其中病毒具有RNA (核糖核酸)作为其遗传物质的病毒感染。

“无包膜单链(+) RNA病毒感染”是指无包膜单链(+) RNA病毒的感染。

“无包膜病毒”是缺乏病毒包膜的病毒。

“单链(+) RNA病毒”是具有为单链RNA的遗传物质的病毒，并且该RNA可以被感染该病毒的细胞立即翻译成病毒蛋白。

“异常的自噬”是指例如有利于病毒复制和释放的自噬。

“受损的自噬”是指细胞中功能低于正常的自噬。

可以根据本发明治疗的与受损的或异常的自噬相关的疾病例如可以选自神经变性疾病和神经精神疾病、癌症、心脏病、炎性疾病和糖尿病，例如本文提及的疾病。

术语“哺乳动物”是指人或任何哺乳动物，例如灵长类、农场动物、宠物动物或实验室动物。这样的动物的实例是猴、牛、绵羊、山羊、马、猪、狗、猫、兔、小鼠、大鼠等。优选地，哺乳动物是人。然而。在一些实施方案中，哺乳动物是动物，例如农场动物，例如牛、绵羊、山羊、马或猪。在一些其它实施方案中，动物是宠物，例如狗、猫或兔。

术语“赋形剂”是指药学上可接受的化学品，例如药学领域普通技术人员已知的帮助药剂给药的化学品。它是可用于制备药物组合物的化合物，通常是安全的、无毒的，并且在生物学上和其它方面都不是不期望的，并且包括兽医用途以及人类药物用途可接受的赋形剂。示例性赋形剂包括粘结剂、表面活性剂、稀释剂、崩解剂、抗粘附剂和润滑剂。

除非另有说明或从上下文中显而易见，术语“卤素”是指F (氟)、Cl (氯)、Br (溴)或I (碘)。

除非另有说明或从上下文中显而易见，术语“Cm-Cn烷基”表示具有m至n个碳原子的直链或支链烷基。例如，术语“C1-C4烷基”表示具有1-4个碳原子的直链或支链烷基。这样的C1-C4烷基包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基和叔丁基。

术语“Cm-Cn烷氧基”是指下式的部分

其中R为Cm-Cn烷基。

术语NH(CH

术语N(CH

术语CN表示下式的部分

在式(I)的化合物中，X和Y中的一个是C，而另一个是N。在一些实施方案中，X是C并且Y是N，即式(Ia)表示的化合物

其中R

在一些实施方案中，X是N并且Y是C，即式(Ib)表示的化合物

其中R

在式(I)的化合物中，R

在一些实施方案中，R

在一些实施方案中，当R

在一些实施方案中，当R

在一些实施方案中，当R

在一些实施方案中，当R

在一些实施方案中，当R

在一些实施方案中，R

在一些实施方案中，R

在一些其它实施方案中，R

在一些实施方案中，R

在再其它实施方案中，R

在再一些其它实施方案中，R

在式(I)的化合物中，R

在一些实施方案中，R

其中X、Y和R

在一些其它实施方案中，R

其中X、Y和R

在式(Ic)的化合物的一些实施方案中，X是C并且Y是N，即化合物可以由式(Ie)表示

其中R

在式(Ic)的化合物的一些其它实施方案中，X是N并且Y是C，即化合物可以由表示式(If)

其中R

在式(Id)的化合物的一些实施方案中，X是C并且Y是N，即化合物可以由式(Ig)表示

其中R

在式(Id)的化合物的一些其它实施方案中，X是N并且Y是C，即化合物可以由式(Ih)表示

其中R

除非另有说明或从上下文中显而易见，否则对式(I)的化合物的任何提及也应解释为对由式(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)和(Ih)中的任一个表示的化合物的提及。

在一些实施方案中，式(I)的化合物更特别是式(Ie)或(Ih)化合物，即式(I)的化合物

或其药学上可接受的盐，其中

R

X是C，Y是N，并且R

X是N，Y是C，并且R

式(I)的化合物也可以转化为合适的药学上可接受的盐。术语化合物的药学上可接受的盐是指如本文所定义的药学上可接受的盐，并且其具有母体化合物的期望的药理学活性。药学上可接受的盐包括与无机酸形成的酸加成盐，所述无机酸例如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸；或与有机酸形成的酸加成盐，所述有机酸例如乙酸、苯磺酸、苯甲酸、樟脑磺酸、柠檬酸、乙磺酸、富马酸、葡庚糖酸、葡糖酸、谷氨酸、乙醇酸、羟基萘甲酸、2-羟基乙磺酸、乳酸、马来酸、苹果酸、丙二酸、扁桃酸、甲磺酸、粘康酸、2-萘磺酸、丙酸、水杨酸、琥珀酸、酒石酸、对甲苯磺酸、三甲基乙酸等。

在酸加成盐的制备中，优选使用形成合适的治疗上可接受的盐的酸。这样的酸的实例为氢卤酸、硫酸、磷酸、硝酸、脂族、脂环族、芳族或杂环羧酸或磺酸，例如甲酸、乙酸、丙酸、琥珀酸、乙醇酸、乳酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、抗坏血酸、马来酸、羟基马来酸、丙酮酸、对羟基苯甲酸、扑酸、甲磺酸、乙磺酸、羟基乙磺酸、卤素苯磺酸、甲苯磺酸或萘磺酸。

当手性原子存在于化学结构中时，除非另有说明，否则意在与该手性原子相关的所有立体异构体均涵盖在该结构中。使用Cahn-Ingold-Prelog RS标记系统，任何不对称原子可以以(R)-或(S)-构型存在，并且化合物可以作为其立体异构体的混合物存在，例如外消旋混合物，或仅作为一种立体异构体存在，各自在本发明的范围内。

本发明包括药物组合物，其包含式(I)的化合物或其单独的异构体、异构体的外消旋或非外消旋混合物或药学上可接受的盐，以及至少一种药学上可接受的赋形剂(例如载体)和任选的其它治疗和/或预防成分。

本发明包括药物组合物，其包含至少一种式(I)的化合物或其单独的异构体、异构体的外消旋或非外消旋混合物或药学上可接受的盐，以及至少一种药学上可接受的赋形剂(例如载体)和任选的其它治疗和/或预防成分。

根据本发明的药物组合物可以用于局部(局域)或全身给药，例如用于肠内给药，如直肠或口服给药，或用于对哺乳动物(尤其是人)的胃肠外给药，并且包含治疗有效量的根据本发明的化合物或其药学上可接受的盐作为活性成分，以及药学上可接受的赋形剂(例如药学上可接受的载体)。活性成分的治疗有效量如上文所定义，并且取决于例如哺乳动物的种类、体重、年龄、个体状况、个体药代动力学数据、待治疗的疾病和给药模式。

对于肠内(例如口服)给药，可以将本发明的化合物配制成各种剂型。药物组合物和剂型可以包含本发明的一种或多种化合物或其一种或多种药学上可接受的盐作为活性组分。药学上可接受的载体可以是固体或液体。固体形式的制剂包括散剂、片剂、丸剂、锭剂、胶囊剂、扁囊剂、栓剂和可分散颗粒剂。固体载体可以是一种或多种物质，其也可以作为稀释剂、调味剂、增溶剂、润滑剂、悬浮剂、粘结剂、防腐剂、片剂崩解剂或包封材料。在散剂中，载体通常是细碎的固体，其是与细碎的活性组分的混合物。在片剂中，活性组分通常与具有必要的结合能力的载体以合适的比例混合，并压制成期望的形状和大小。合适的载体包括但不限于碳酸镁、硬脂酸镁、滑石、糖、乳糖、果胶、糊精、淀粉、明胶、黄蓍胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、低熔点蜡、可可脂等。活性化合物的制剂可以包含包封材料作为载体，提供胶囊，其中活性组分(具有或不具有载体)被与之结合的载体包围。

适于口服给药的其它形式包括液体形式制剂(包括乳剂、糖浆剂、酏剂、水性溶液剂、水性混悬剂)或固体形式制剂(意在在使用前不久将其转化为液体形式制剂)。乳剂可以在溶液中制备，例如在丙二醇水溶液中制备，或者可以含有乳化剂，例如卵磷脂、脱水山梨糖醇单油酸酯或阿拉伯胶。水性溶液剂可以通过将活性组分溶解在水中并加入合适的着色剂、调味剂、稳定剂和增稠剂来制备。水性混悬剂可以通过将细碎的活性组分分散在具有粘性物质的水中来制备，所述粘性物质例如天然胶或合成胶、树脂、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠和其它公知的悬浮剂。固体形式的制剂包括溶液剂、混悬剂和乳剂，并且除了活性组分之外，还可以含有着色剂、调味剂、稳定剂、缓冲剂、人工和天然甜味剂、分散剂、增稠剂、增溶剂等。

用于直肠给药的示例性组合物包括栓剂，其可以含有例如合适的无刺激性赋形剂，例如可可脂、合成的甘油酯或聚乙二醇，其在常温下为固体，但在直肠腔中液化和/或溶解以释放药物。

本发明的化合物还可以肠胃外给药，例如通过吸入、注射或输注，例如通过静脉内、动脉内、骨内、肌内、脑内、脑室内、滑膜内、胸骨内、鞘内、病灶内、颅内、皮内和皮下注射或输注。

因此，对于肠胃外给药，本发明的药物组合物可以是无菌可注射或可输注的制剂形式，例如作为无菌水性或油性混悬剂。该混悬剂可以根据本领域已知的技术使用合适的分散剂或润湿剂(例如吐温80)和悬浮剂来配制。无菌可注射或可输注制剂还可以是在无毒的肠胃外可接受的稀释剂或溶剂中的无菌可注射或可输注溶液剂或混悬剂。例如，药物组合物可以是在1,3-丁二醇中的溶液。可用于本发明的组合物的可接受的媒介物和溶剂的其它实例包括但不限于甘露醇、水、林格氏溶液和等渗氯化钠溶液。此外，无菌的不挥发性油通常用作溶剂或悬浮介质。为此目的，可以使用任何温和的不挥发性油，包括合成的甘油单酯或甘油二酯。脂肪酸(例如油酸)及其甘油酯衍生物可用于制备可注射剂，如同天然的药学上可接受的油(例如橄榄油或蓖麻油)，尤其是它们的聚氧乙基化的形式。这些油溶液剂或混悬剂也可以含有长链醇稀释剂或分散剂。

肠胃外使用的溶液还可以含有合适的稳定剂，并且如果需要，还可以含有缓冲物质。合适的稳定剂包括抗氧化剂，例如硫酸氢钠、亚硫酸钠或抗坏血酸（单独的或组合的），柠檬酸及其盐和EDTA钠。肠胃外溶液还可以含有防腐剂，例如苯扎氯铵、对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯和氯丁醇。

对于吸入或经鼻给药，合适的药物制剂是颗粒、气溶胶、散剂、雾或液滴，例如平均尺寸为约10 μm直径或更小。例如，用于吸入的组合物可以制备为盐水溶液，使用苯甲醇或其它合适的防腐剂、增强生物利用度的吸收促进剂、碳氟化合物和/或本领域已知的其它增溶剂或分散剂。

在一些实施方案中，本发明的制剂是脂质体制剂。脂质体制剂在药物领域是众所周知的，并且例如在Remington, Essentials of Pharmaceutics, Ed. Linda Felton(Pharmaceutical Press 2012), 第456-7页和许多其它出版物中描述。本领域普通技术人员容易获得关于例如合适的脂质体制剂、合适的脂质、制备方法等的选择的信息。用于脂质体形成的脂质的实例是磷脂、鞘脂、固醇脂质和脂肪酸。适于脂质体形成的脂质可以从例如Avanti

本发明的药物组合物也可局部给药至皮肤或粘膜。对于局部施用，药物组合物可以是例如洗剂、凝胶、糊剂、酊剂、透皮贴剂或用于经粘膜递送的凝胶。

可以将组合物配制成含有悬浮或溶解在载体中的活性组分的合适的软膏。用于局部给予本发明的化合物的载体包括但不限于矿物油、液体石油、白石油、丙二醇、聚氧乙烯聚氧丙烯化合物、乳化蜡和水。

或者，可以将药物组合物配制成含有悬浮或溶解在载体中的活性化合物的合适的洗剂或霜剂。合适的载体包括但不限于矿物油、脱水山梨糖醇单硬脂酸酯、聚山梨醇酯60、十六烷基酯蜡、十六烷醇、2-辛基十二烷醇、苯甲醇和水。

本发明的药物组合物还可以通过直肠栓剂制剂或以合适的灌肠剂制剂局部施用于下肠道。

合适的药物赋形剂(例如载体)以及制备药物剂型的方法描述于Remington’sPharmaceutical Sciences，Mack Publishing Company中，其是药物制剂领域的标准参考文本。

药物组合物可以包含约1%至约95%，优选约20%至约90%的式(I)的化合物，以及至少一种药学上可接受的赋形剂。通常，本发明的化合物将通过任何可接受的用于类似用途的药剂的给药方式以治疗有效量给药。合适的日剂量通常在1-1000 mg范围内，例如每日1-500 m g，或每日1-50 m g，这取决于许多因素，例如待治疗疾病的严重程度、患者的年龄和相对健康状况、所用化合物的效力、给药途径和形式、以及给药所涉及的适应症等。治疗这样的疾病的本领域普通技术人员将能够确定本发明化合物对于给定疾病的治疗有效量，而无需过多的实验并依赖于个人知识和本申请的公开内容。本发明的化合物可以以药物制剂的形式给药，包括适于肠内或胃肠外给药的那些。优选的给药方式通常是使用方便的每日剂量方案的口服给药，其可以根据痛苦程度进行调整。

预期本发明的化合物可用于治疗哺乳动物中由RNA病毒感染(例如无包膜单链(+)RNA病毒感染)引起的疾病，特别是由小核糖核酸病毒引起的疾病。

小核糖核酸病毒例如可以是Parechovirus (例如Ljungan或Parecho)、心病毒(例如EMCV或Theile氏病毒)、肠道病毒(例如EV、柯萨奇病毒、脊髓灰质炎病毒、鼻病毒)或肝病毒。对于兽医用途，小核糖核酸病毒可以是例如口蹄疫病毒或猪肠病毒。

认为与病毒感染(例如小核糖核酸病毒感染)有关、由其引起或以其它方式与其相关的疾病是例如神经变性疾病(例如多发性硬化、帕金森病、肌萎缩性侧索硬化、阿尔茨海默病、亨廷顿病)、脊髓灰质炎、脑炎、脑膜炎、脓毒症、癌症、麻痹、心肌炎、糖尿病、感冒、手足口病、疱疹性咽峡炎、胸膜痛、腹泻、粘膜皮肤损伤、呼吸道疾病、结膜炎、肌炎和慢性疲劳综合征。

通过以下非限制性实例中一般性描述的方法和在文献(例如PCT/EP2018/058522(公开为WO 2018/185120A 1)和PCT/EP2015/051177 (公开为WO 2015/110491A2))中描述的一般方法，合成和鉴定本文定义的式(I)的化合物被认为是本领域普通技术人员公知的，所述申请的内容通过引用并入本文。

实施例

除非另有说明，否则反应在氩气或氮气的正压下在火焰干燥的密封管或烘箱干燥的玻璃器皿中进行。通过注射器转移空气和湿气敏感性液体和溶液。从钠/二苯甲酮-羰游基蒸馏四氢呋喃(THF)。从氢化钙蒸馏二氯甲烷(CH

3-(3,4-二甲氧基苯基)-8-碘-2,6-二甲基咪唑并[1,2-b]哒嗪的合成

合成中间体3-(3,4-二甲氧基苯基)-8-碘-2,6-二甲基咪唑并[1,2-b]哒嗪按如下多步方法合成：

向6-甲基哒嗪-3-基胺(50 g，455.3 mmol)在乙醇(500 mL)中的搅拌的溶液中加入氯丙酮(58 mL，683 mmol)，并将溶液在85℃下加热10小时。完成后，将反应中的乙醇蒸馏出。将获得的粗产物通过快速柱层析法(中性氧化铝)纯化，用10%乙酸乙酯-己烷洗脱所需化合物2,6-二甲基咪唑并[1,2-b]哒嗪(36 g，53.4%)，为深棕色固体。

向2,6-二甲基咪唑并[1,2-b]哒嗪(36 g，244.5 mmol)在乙腈(360 mL)中的搅拌的溶液中加入N-溴琥珀酰亚胺(NBS) (52.2 g，293.4 mmol)，并在环境温度搅拌1小时。完成后，将反应中的乙腈蒸馏出。将获得的粗产物通过快速柱层析法(中性氧化铝)纯化，用15%乙酸乙酯-己烷洗脱所需化合物3-溴-2,6-二甲基咪唑并[1,2-b]哒嗪(18 g，32.5%)，为固体。

在100 ml圆底烧瓶中加入3-溴-2,6-二甲基咪唑并[1,2-b]哒嗪(5 g，17.6mmol)、硼酸酯(4.4 g，19.4 mmol)、碳酸钾(7.5 g，54.3 mmol)和二噁烷：水(45 ml：5ml)。该溶液用N

在-78℃下，向2M二异丙基酰胺锂(LDA) (0.7ml，1.4 mmol)在THF中的搅拌的溶液中逐滴滴加溶解在THF (5mL)中的3-(3,4-二甲氧基苯基)-2,6-二甲基咪唑并[1,2-b]哒嗪(0.2 g，0.705 mmol)的溶液。10分钟后，加入溶解在THF (3mL)中的碘(0.178 g，0.705mmol)，并将反应在环境温度下搅拌1小时。完成后，用饱和NH

实施例1

3-(3,4-二甲氧基苯基)-2,6-二甲基-N-((2-甲基吡啶-4-基)甲基)咪唑并[1,2-b]哒嗪-8-胺

向3-(3,4-二甲氧基苯基)-8-碘-2,6-二甲基咪唑并[1,2-b]哒嗪(0.1 g，0.240mmol)和胺(0.06 g，0.312 mmol)在甲苯(2 mL)中的搅拌的溶液中加入碳酸铯(0.156 g，0.48 mmol)、2,2’-双(二苯基膦基)-1,1’-联萘(BINAP) (7 m g，0.012 mmol)和Pd(OAc)

实施例2

3-(3,4-二甲氧基苯基)-N-((2-氟吡啶-4-基)甲基)-2,6-二甲基咪唑并[1,2-b]哒嗪-8-胺

向3-(3,4-二甲氧基苯基)-8-碘-2,6-二甲基咪唑并[1,2-b]哒嗪(0.15 g，0.360mmol)和胺(0.093 g，0.46 mmol)在甲苯(3mL)中的搅拌的溶液中加入碳酸铯(0.23 g，0.72mmol)、2,2’-双(二苯基膦基)-1,1’-联萘(BINAP) (11 m g，0.018 mmol)和Pd(OAc)

7-氯-3-碘-2,5-二甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶的合成

合成中间体7-氯-3-碘-2,5-二甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶按如下多步方法合成：

在圆底烧瓶中加入3-氨基-5-甲基吡唑(100 g，1.02 mol)、乙酰乙酸乙酯(161mL，1.23 mol)、乙酸(300 mL)和1,4-二噁烷(1000 mL)。将反应在105℃下回流16小时。反应完成后获得灰白色固体，并通过抽吸过滤。将固体用冷己烷洗涤并真空干燥，以获得2,5-二甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-醇(85 g，49%)，为灰白色固体。

向2,5-二甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-醇(120 g，0.73 mol)在乙腈(1200 mL)中的溶液中逐滴滴加POCl

在-10℃下，向7-氯-2,5-二甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶(120 g，0.66 mol)在乙腈(1200 mL)中的冰冷的溶液中分批加入N-碘代琥珀酰亚胺(163.5 g，0.726 mol)。将反应在该温度下搅拌1小时。完成后，观察固体。用冰冷的水猝灭反应，并通过抽吸过滤。用己烷洗涤获得的固体并真空干燥，以得到7-氯-3-碘-2,5-二甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶，为白色固体(182.8 g，89.9%)。

1,3-二甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧杂硼杂环戊-2-基)-1H-吲唑的合成

硼酸酯1,3-二甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧杂硼杂环戊-2-基)-1H-吲唑按如下多步方法合成：

将1-(5-溴-2-氟苯基)乙酮(50 g，230 mmol)和N-甲基肼(42.4 mL，805 mmol)在吡啶(500 mL)中的搅拌的溶液在90℃下加热10小时。完成后，将反应中的吡啶蒸馏出。将粗产物在水和乙酸乙酯之间分配。乙酸乙酯层经硫酸钠干燥并浓缩。将获得的粗产物通过快速柱层析法(中性氧化铝)纯化，用2%乙酸乙酯-己烷洗脱所需化合物5-溴-1,3-二甲基-1H-吲唑(20.23 g，41.8%)，为淡棕色粘稠化合物。

向5-溴-1,3-二甲基-1H-吲唑(26 g，115 mmol)和双频哪醇合二硼(32.3 g，127mmol)在1,4-二噁烷(260 mL)中的溶液中加入KOAc (34 g，345 mmol)。将反应用N

实施例3

3-(1,3-二甲基-1H-吲唑-5-基)-2,5-二甲基-N-[(2-氟吡啶-4-基)甲基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-胺

向7-氯-3-碘-2,5-二甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶(1.1 g，3.57 mmol)和1-(2-氟吡啶-4-基)甲胺(0.586 g，4.6 mmol)在乙醇(5.5 mL)中的搅拌的溶液中加入二异丙基乙胺(5.5 mL，5体积)，并在80℃下搅拌6小时。完成后，将反应中的乙醇蒸馏出。将粗产物在水和乙酸乙酯之间分配。乙酸乙酯层经硫酸钠干燥并减压浓缩。用35%乙酸乙酯-己烷通过快速柱层析法洗脱所需化合物。浓缩后得到N-[(2-氟吡啶-4-基)甲基]-3-碘-2,5-二甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-胺(0.9 g，63.82%)，为浅黄色化合物。

在0℃下，向N-[(2-氟吡啶-4-基)甲基]-3-碘-2,5-二甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-胺(0.5 g，1.26 mmol)在二氯甲烷(DCM) (5mL)中的搅拌的溶液中加入4-二甲基氨基吡啶(DMAP) (0.153 g，1.26 mmol)。然后在此温度下逐滴滴加Boc酸酐(二碳酸二叔丁酯)(0.33 ml，1.51 mmol)，并在环境温度下搅拌2小时。完成后，用水洗涤反应。有机层经Na

在25ml圆底烧瓶中加入[(2-氟吡啶-4-基)甲基](3-碘-2,5-二甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-基)氨基甲酸叔丁酯(0.45 g，0.904 mmol)、1,3-二甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧杂硼杂环戊-2-基)-1H-吲唑(0.322 g，1.17mmol)、碳酸钾(0.311 g，2.26mmol)和二噁烷：水(4.5 mL：0.5 mL)。该溶液用N

向[3-(1,3-二甲基-1H-吲唑-5-基)-2,5-二甲基-吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-基]-(2-氟-吡啶-4-基甲基)-氨基甲酸叔丁酯(0.2 g，0.388 mmol)在二氯甲烷(2mL)中的冰冷的溶液中逐滴滴加TFA (2mL)。加入完成后，将反应物料在环境温度下搅拌6小时。反应完成后，将溶剂和过量的TFA蒸馏出。粗产物用1N NaOH溶液碱化，并用10% MeOH-DCM萃取。有机层经Na

实施例4

3-(1,3-二甲基-1H-吲唑-5-基)-2,5-二甲基-N-[(2-甲基吡啶-4-基)甲基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-胺

向7-氯-3-碘-2,5-二甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶(1.1 g，3.57 mmol)和1-(2-甲基吡啶-4-基)甲胺(0.586 g，4.6 mmol)在乙醇(5.5 mL)中的搅拌的溶液中加入二异丙基乙胺(5.5 mL，5体积)，并在80℃下搅拌6小时。完成后，将反应中的乙醇蒸馏出。将粗产物在水和乙酸乙酯之间分配。乙酸乙酯层经硫酸钠干燥并减压浓缩。用35%乙酸乙酯-己烷通过快速柱层析法洗脱所需化合物。浓缩后得到3-碘-2,5-二甲基-N-[(2-甲基吡啶-4-基)甲基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-胺(0.9 g，40.1%)，为浅黄色化合物。

在0℃下，向3-碘-2,5-二甲基-N-[(2-甲基吡啶-4-基)甲基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-胺(0.5 g，1.26 mmol)在二氯甲烷(5mL)中的搅拌的溶液中加入DMAP (0.153 g，1.26mmol)。然后在该温度下逐滴滴加Boc酸酐(0.33 ml，1.51 mmol)，并在环境温度下搅拌2小时。完成后，用水洗涤反应。有机层经Na

在25ml圆底烧瓶中加入(3-碘-2,5-二甲基-吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-基)-(2-甲基-吡啶-4-基甲基)-氨基甲酸叔丁酯(0.45 g，0.904 mmol)、1,3-二甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧杂硼杂环戊-2-基)-1H-吲唑(0.322 g，1.17mmol)、碳酸钾(0.311 g，2.26mmol)和二噁烷：水(4.5 mL：0.5 mL)。该溶液用N

向[3-(1,3-二甲基-1H-吲唑-5-基)-2,5-二甲基-吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-基]-(2-甲基-吡啶-4-基甲基)-氨基甲酸叔丁酯(0.2 g，0.388 mmol)在二氯甲烷(2mL)中的冰冷的溶液中逐滴滴加三氟乙酸(TFA) (2mL)。加入完成后，将反应物料在环境温度下搅拌6小时。反应完成后，将溶剂和过量的TFA蒸馏出。粗产物用1N NaOH溶液碱化，并用10% MeOH-DCM萃取。有机层经Na

实施例5-8使用与实施例3和4所述相同的一般方法合成。

实施例5

3-(1,3-二甲基-1H-吲唑-5-基)-2,5-二甲基-N-[(2-乙基吡啶-4-基)甲基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-胺

实施例6

3-(1,3-二甲基-1H-吲唑-5-基)-2,5-二甲基-N-[(2-甲氧基吡啶-4-基)甲基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-胺

实施例7

3-(1,3-二甲基-1H-吲唑-5-基)-2,5-二甲基-N-[(2-氰基吡啶-4-基)甲基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-胺

实施例8

3-(1,3-二甲基-1H-吲唑-5-基)-2,5-二甲基-N-[(2-三氟甲基吡啶-4-基)甲基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-胺

实施例1-8的化合物的分析数据在表1中显示。

表1

实施例9

脂质体制剂

将50 mg的3-(1,3-二甲基-1H-吲唑-5-基)-2,5-二甲基-N-[(2-氟吡啶-4-基)甲基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-胺(实施例3)和500 mg大豆卵磷脂转移到烧杯中。加入氯仿(约10 ml)，并将混合物保持搅拌，直到组分已完全溶解。然后通过旋转蒸发器去除溶剂，以获得薄的脂质膜。将水(10 ml)加入到脂质膜中，并使膜在室温下再水合。将制剂充分混合并超声处理以形成精细分散体。该制剂的pH为6.42。

生物学测定

哺乳动物细胞培养物中的体外测定

基于化合物在哺乳动物细胞培养物中防止病毒引起病毒致细胞病变作用(CPE)的能力，已经评价了本发明的化合物的抗病毒活性。孵育时间、细胞系、细胞密度和病毒滴度在不同测定之间不同，但一般程序如下：在合适的培养基中，在96孔平底板上培养细胞至约90%细胞覆盖(20 000-90 000细胞/孔)。通过在细胞上组织培养感染剂量(TCID

使用上述方案测试实施例1-4的本发明的化合物。此外，使用在吡啶环的2-位缺少取代基的化合物(即，3-(3,4-二甲氧基苯基)-2,5-二甲基-N-(吡啶-4-基甲基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-胺(化合物“X”)和3-(1,3-二甲基-1H-吲唑-5-基)-2,5-二甲基-N-[(吡啶-4-基)甲基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-胺(化合物“Y”))进行相同的测试：

　　　　化合物X　　　　　　　　　　　化合物Y

表2和3分别显示在10 nM和100 nM下测试的化合物对不同的小核糖核酸病毒的抑制能力。EV6：肠道病毒菌株6；EV30：肠道病毒菌株30；EV-D68：肠道病毒 D68；EV71：肠道病毒菌株71；Cox B1：柯萨奇B病毒菌株1；Cox B2：柯萨奇B病毒菌株2；Cox B3：柯萨奇B病毒菌株3；Cox B5：柯萨奇B病毒菌株5；Polio 1：脊髓灰质炎病毒菌株1。

表2

表3

使用0.5 mg/mL浓度的人肝微粒体进行体外CYP 3A4酶抑制测定。酮康唑用作参考抑制剂，而咪达唑仑用作CYP 3A4酶的选择性探针底物。在磷酸钾缓冲液(50 mM，pH 7.40)中制备测试物/对照物的系列稀释液，以获得八个浓度，每个浓度为1:4稀释模式。乙腈/DMSO的百分比在2.5X系列稀释的对照物/测试物溶液中分别保持在2.5%/0.25%。乙腈/DMSO的最终百分比分别为1%/0.1%。在磷酸钾缓冲液中制备中间体溶液，例如10X工作溶液(5mg/mL)人肝微粒体溶液、10X浓度的参考探针底物缓冲液、5X浓度的辅因子(5.0 mM NADP+、25.0 mM G-6-P、3.0 IU/mL G-6-PDH和10.0 mM MgCl

表4

药代动力学性质

称量10 mg化合物并转移到刻度管中。然后加入500 μL DMA (5% v/v)，充分涡旋混合，并超声处理，直到测试物完全溶解。然后加入5 mL的PEG 200 (50% v/v)，并充分涡旋混合。此后，以小增量加入无菌注射用水(SWFI)并充分涡旋混合。最后，用SWFI (45% v/v)将体积补充至10 mL，以获得具有1 mg/mL的最终制剂强度的澄清溶液。发现制剂的pH为6.51。在给予动物之前新制备制剂。

在最少3天的适应后，8-10周龄成年健康雄性Sprague Dawley大鼠用于实验。禁食动物通过口服途径以10 mg/kg体重的剂量和10 mL/kg体重的剂量体积给予在推荐的媒介物(5% DMA + 50% PEG 200 + 45% SWFI)中的测试化合物。

在温和的异氟烷麻醉下。在给药后的不同时间点，将血样收集到含有抗凝剂(K

表5

*脂质体制剂

代谢稳定性

代谢稳定性测定使用人/大鼠肝微粒体进行。该测定的最终组合物包括5 μM的由DMSO储液制备的测试物和对照物(双氯芬酸或依米帕明(Imipramine))，使得DMSO的最终浓度为0.1%，0.25 mg/mL微粒体蛋白和辅因子(5.0 mM G-6-P，0.06U/mL G-6-PDH，2.0 mMMgCl

在50 mM磷酸钾缓冲液(pH 7.4)中使用5 mM DMSO储液制备4X工作浓度的测试物(20 μM) /对照物(20 μM)。

使用人/大鼠肝微粒体储备溶液(20 mg/mL蛋白质浓度)，在50 mM磷酸钾缓冲液(pH 7.40)中制备10X工作浓度的人/大鼠肝微粒体溶液(2.5 mg/mL)。通过加入45 μL磷酸钾缓冲液、10 μL稀释的人/大鼠肝微粒体溶液(2.5 mg/mL)、25 μL测试物/对照物(20 μM)和20 μL辅因子/缓冲液来孵育100 μL (对于每个时间点)的反应混合物。将反应混合物在37℃下进一步孵育指定的孵育时间点(具有辅因子：0、15、30、60和120分钟；不具有辅因子：0和120分钟)。在指定的孵育时间点将100 μL测试物和对照物的孵育样品转移至相应的管中用于样品提取。

通过蛋白质沉淀法提取测试物和对照物试样。在每个时间点将100 μL孵育样品加入到含有200 μL冰冷的乙腈和50 μL氟哌啶醇溶液(0.5 μg/mL)的管中。然后将管充分涡旋混合，并在4℃下以10000 rpm离心10分钟。将200 μL样品的澄清的上清液进行LC-MS/MS分析。结果在表6中显示，以孵育60分钟后剩余的%表示。

表6

人和大鼠血浆蛋白结合

使用含有分子量截断为8,000道尔顿的透析膜的快速平衡透析(RED)装置进行血浆蛋白结合研究。每个透析插入物含有两个室。红色室用于血浆，而白色室用于缓冲液。使用10 mM DMSO储液(最终DMSO浓度为0.1%)以所需的10 μM的测试浓度在人/大鼠血浆(pH调节至7.40)中制备测试物和对照物(华法林和普萘洛尔)。将300 μL血浆样品加入到样品室中。将500 μL缓冲液加入到缓冲液室中。在用粘结剂膜密封RED装置之后，在37℃下以300rpm振动下孵育4小时。孵育后，从每个孔(血浆和缓冲液侧)去除50 μL的等分试样，并用等体积的相反基质稀释以消除基质作用，并进行样品提取。

通过加入200 μL冰冷的乙腈和50 μL内标(氟哌啶醇，0.1 μg/mL)溶液，通过蛋白质沉淀法提取所有样品。将管充分涡旋混合，并在4℃下以10000 rpm离心10分钟。将200 μL样品的澄清的上清液进行LC-MS/MS分析。结果在表7中显示，以血浆蛋白结合%表示。

表7