一种防治慢加急性肝衰竭的中药组合物及其制备方法和应用

技术领域

本发明属于中医药技术领域，特别是涉及一种防治慢加急性肝衰竭的中药组合物及其制备方法和应用。

背景技术

慢加急性肝衰竭(ACLF)是在慢性肝病基础上出现的急性肝功能失代偿。ACLF需要一种促发事件，伴有慢性肝病，并迅速发展为以短期高死亡率为特征的多器官功能障碍。

现阶段内科治疗尚缺乏特效药物和手段。原则上强调早期诊断、早期治疗，针对不同病因采取相应的综合治疗措施，并积极防治各种并发症；人工肝是指通过体外的机械、物理化学或生物装置，清除各种有害物质，补充必需物质，改善内环境，暂时替代衰竭肝脏部分功能的治疗方法，能为肝细胞再生及肝功能恢复创造条件或等待机会进行肝移植；肝移植是治疗晚期肝衰竭最有效的治疗手段。

传统医学认为肝衰竭病机是感受时行疫毒，毒热炽盛，湿浊内闭，导致脉络瘀阻，正虚邪陷。正虚乃致病之根本，湿(痰)热乃致病之病因，血瘀乃病理之产物。治疗上清热祛湿，活血化瘀，更注重补虚扶正。即不单纯着眼于抗病毒、改善微循环作用，更强调调整机体的免疫功能。

但当前对慢加急性肝衰竭的预防或治疗仍是空白的，尚无统一、规范化的防治标准，更无基于慢加急性肝衰竭对肝细胞进行保护的预防或治疗药物，无法通过预防或治疗性用药减轻慢加急性肝衰竭的严重程度、降低死亡率，改善预后。

发明内容

为了解决上述问题，本发明提供了一种防治慢加急性肝衰竭的中药组合物及其制备方法和应用。本发明提供的中药组合物健脾补血治本，清热、利湿、理气治标，标本兼治，共奏固本祛邪之效，在动物实验中能够有效降低慢加急性肝衰竭模型大鼠的肝损伤相关指标，如谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)和总胆红素(TBil)等，提升模型大鼠的慢加急性肝衰竭免疫功能，如外周血CD8

本发明提供了一种防治慢加急性肝衰竭的中药组合物，包括以下质量份的原料：炙黄芪10～30份、太子参10～30份、当归5～10份、麸炒女贞子5～10份、茯苓5～10份、炒白术10～30份、陈皮5～10份、酒黄芩5～10份和炙甘草3份。

优选的，所述中药组合物包括以下质量份的原料：炙黄芪30份、太子参30份、当归10份、麸炒女贞子10份、茯苓10份、炒白术30份、陈皮10份、酒黄芩10份和炙甘草3份。

本发明还提供了上述中药组合物的制备方法，包括以下步骤：将上述原料与水混合后进行煎煮获得混合药液，浓缩混合药液得到浓缩液，将浓缩液进行干燥得到中药组合物。

优选的，所述煎煮包括：

对上述原料进行第一煎煮，过滤，得到第一滤渣和第一滤液；

将第一滤渣与水混合后进行第二煎煮，过滤，得到第二滤渣和第二滤液；

将第二滤渣与水混合后进行第三煎煮，过滤，得到第三滤渣和第三滤液；

合并第一滤液、第二滤液和第三滤液得到混合药液；

所述第一煎煮中，原料与水的质量比为1:(1～10)，煎煮的时间为煮沸后45～60min；所述第二煎煮中，原料与水的质量比为1:(1～9)，煎煮的时间为煮沸后35～55min；所述第三煎煮中，原料与水的质量比为1:(1～8)，煎煮的时间为煮沸后30～50min。

优选的，所述混合药液浓缩至相对密度为1.02～1.25时得到浓缩液；

所述干燥包括依次进行的冷冻和真空冷冻干燥，所述冷冻的温度为-10℃～-50℃；所述真空冷冻干燥的压强为1.3～13Pa。

本发明还提供了上述中药组合物或上述制备方法制备得到中药组合物在制备防治慢加急性肝衰竭的药物中的应用。

本发明还提供了上述中药组合物或上述制备方法制备得到中药组合物在改善慢加急性肝衰竭的肝脏功能的药物中的应用。

本发明还提供了上述中药组合物或上述制备方法制备得到中药组合物在制备改善慢加急性肝衰竭的免疫功能的药物中的应用。

本发明提供了一种防治慢加急性肝衰竭的中药组合物，包括以下原料：炙黄芪、太子参、当归、麸炒女贞子、茯苓、炒白术、陈皮、酒黄芩和炙甘草。本发明提供的中药组合物在中医理论的指导下，选择炙黄芪，太子参，当归，麸炒女贞子，茯苓，炒白术，陈皮，酒黄芩，炙甘草九味中药进行组方：其中黄芪在本方中重用，益气健脾，以补益为主，太子参补气健脾兼可生津，助黄芪强化气阴两虚的改善；共为君药。当归养血活血，与黄芪配伍，补气活血，使有形之血生于无形之气；女贞子滋补肝肾阴精，为臣药。白术、茯苓、陈皮、黄芩进一步健脾、同时理气、清热、利湿，补而不滞，为佐药。炙甘草调和诸药，为使药。全方健脾补血治本，清热、利湿、理气治标，标本兼治，共奏固本祛邪之效。由实施例可知，本发明提供的中药组合物，在动物实验中能够有效降低慢加急性肝衰竭模型大鼠的肝损伤相关指标，如谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)和总胆红素(TBil)等，提升模型大鼠的慢加急性肝衰竭免疫功能，如外周血CD8

附图说明

图1为本发明提供的中药组合物对CCl

图2为本发明提供的中药组合物的制备方法的流程示意图；

图3为本发明提供的中药组合物不同浓度对CCl

图4为本发明提供的中药组合物不同浓度对CCl

图5为本发明提供的中药组合物的网络药理学分析成分、靶点、通路的预测结果的示意图。

具体实施方式

本发明提供了一种防治慢加急性肝衰竭的中药组合物，包括以下质量份的原料：炙黄芪10～30份、太子参10～30份、当归5～10份、麸炒女贞子5～10份、茯苓5～10份、炒白术10～30份、陈皮5～10份、酒黄芩5～10份和炙甘草3份。本发明提供的中药组合物，在动物实验中能够有效降低慢加急性肝衰竭模型大鼠的肝损伤相关指标，如谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)和总胆红素(TBil)等，提升模型大鼠的慢加急性肝衰竭免疫功能，如外周血CD8

以质量份计，本发明所述中药组合物的原料包括炙黄芪10～30份，进一步优选为20～30份，最优选为30份。

以所述炙黄芪的质量份为基准，本发明所述中药组合物的原料包括炙太子参10～30份，进一步优选为20～30份，最优选为30份。

在本发明中，所述炙黄芪益气健脾，太子参则补气健脾兼可生津，助黄芪强化气阴两虚的改善，二者共为君药。

以所述炙黄芪的质量份为基准，本发明所述中药组合物的原料包括当归5～10份，进一步优选为8～10份，最优选为10份。

以所述炙黄芪的质量份为基准，本发明所述中药组合物的原料包括麸炒女贞子5～10份，进一步优选为8～10份，最优选为10份。

在本发明中，所述当归与女贞子均为臣药，当归养血活血，与黄芪配伍，补气活血，使有形之血生于无形之气，女贞子滋补肝肾阴精。

以所述炙黄芪的质量份为基准，本发明所述中药组合物的原料包括茯苓5～10份，进一步优选为8～10份，最优选为10份。

以所述炙黄芪的质量份为基准，本发明所述中药组合物的原料包括炒白术10～30份，进一步优选为8～10份，最优选为10份。

以所述炙黄芪的质量份为基准，本发明所述中药组合物的原料包括陈皮5～10份，进一步优选为8～10份，最优选为10份。

以所述炙黄芪的质量份为基准，本发明所述中药组合物的原料包括酒黄芩5～10份，进一步优选为8～10份，最优选为10份。

在本发明中，所述白术、茯苓、陈皮和黄芩均为佐药，共同起到进一步健脾、理气、清热、利湿的作用，使本发明提供的中药组合物补而不滞。

在本发明中，所述炙甘草调和诸药，为使药。

本发明提供的中药组合物优选随患者实证变化而加减：

瘀偏重者，优选在上述提供的基本方的基础上添加益母草10份、丹参10份和桃仁6份；

湿热证热偏重者，优选在上述提供的基本方的基础上添加栀子10份、金钱草10份和赤芍10份；

湿热证湿偏重者，优选在上述提供的基本方的基础上添加茵陈30份、虎杖10份和生大黄10份。

本发明对上述原料的来源没有特殊的限定，采用本领域技术人员熟知的常规市售产品即可。

本发明还提供了上述中药组合物的制备方法，包括以下步骤：将上述原料与水混合后进行煎煮获得混合药液，浓缩混合药液得到浓缩液，将浓缩液进行干燥得到中药组合物。

在本发明中，所述制备方法优选包括以下步骤：

本发明将上述原料与水混合后进行煎煮获得混合药液；本发明优选将上述原料进行第一煎煮，过滤，得到第一滤渣和第一滤液；所述第一煎煮中，原料与水的质量比优选为1:(1～10)，进一步优选为1:10，煎煮的时间优选为煮沸后45～60min，进一步优选为60min；

将第一滤渣与水混合后进行第二煎煮，过滤，得到第二滤渣和第二滤液；所述第二煎煮中，原料与水的质量比优选为1:(1～9)，进一步优选为1:9，煎煮的时间优选为煮沸后35～55min，进一步优选为45min；

将第二滤渣与水混合后进行第三煎煮，过滤，得到第三滤渣和第三滤液；所述第三煎煮中，原料与水的质量比优选为1:(1～8)，进一步优选为1:8，煎煮的时间优选为煮沸后30～50min，进一步优选为40min；

合并第一滤液、第二滤液和第三滤液得到混合药液。

得到混合药液后，本发明浓缩混合药液得到浓缩液；在本发明中，所述混合药液优选浓缩至相对密度为1.02～1.25得到浓缩液。

得到浓缩液后，本发明将浓缩液进行干燥得到中药组合物；在本发明中，所述干燥优选包括依次进行的冷冻和真空冷冻干燥，所述冷冻的温度优选为-10℃～-50℃；所述真空冷冻干燥的压强优选为1.3～13Pa。

中药组合物的制备方法的流程示意图如图2所示。

本发明还提供了上述中药组合物或上述制备方法制备得到中药组合物在制备防治慢加急性肝衰竭的药物中的应用。本发明提供的应用在临床上能够有效提高慢加急性肝衰竭的治疗有效率，改善慢加急性肝衰竭患者的肝功能指标，提升患者的免疫功能。

本发明还提供了上述中药组合物或上述制备方法制备得到中药组合物在改善慢加急性肝衰竭的肝脏功能的药物中的应用。本发明提供的应用能够有效降低四氯化碳+脂多糖+D-半乳糖诱导的慢加急性肝衰竭大鼠模型血清中ALT、AST、TBil等数值，起到改善肝脏功能的作用。

本发明还提供了上述中药组合物或上述制备方法制备得到中药组合物在制备改善慢加急性肝衰竭的免疫功能的药物中的应用。本发明提供的应用能够有效提高四氯化碳+脂多糖+D-半乳糖诱导的慢加急性肝衰竭模型大鼠CD8

在本发明中，所述药物包括上述中药组合物或上述制备方法制备得到中药组合物和药学上可接受的辅料；所述药物的剂型包括口服液、颗粒剂、胶囊剂和片剂。

为了进一步说明本发明，下面结合附图和实施例对本发明提供的一种防治慢加急性肝衰竭的中药组合物及其制备方法和应用进行详细地描述，但不能将它们理解为对本发明保护范围的限定。

实施例1

按照以下质量份备料：炙黄芪10份、太子参10份、当归5份、麸炒女贞子5份、茯苓5份、炒白术5份、陈皮5份、酒黄芩5份和炙甘草3份。

取炙黄芪10g、太子参10g、当归5g、麸炒女贞子5g、茯苓5g、炒白术5g、陈皮5g、酒黄芩5g和炙甘草3g。

将上述原料按照以下方法进行制备：

(1)称取上述原料，加入原料重量10倍量的水，煮沸后，煎煮60min滤出第一药液；向药渣中加入原料重量9倍量的水，煮煎45min后滤出第二药液；向药渣中再次加入原料重量8倍量的水，煎煮40min后滤出第三药液；

(2)将前述步骤(1)制备所得的第一药液、第二药液、第三药液合并得到混合药液，煎煮浓缩至稠厚状(相对密度为1.02～1.25)即浓缩液；

(3)取步骤(2)所制备得到的浓缩液，进行冷冻(-10℃～-50℃)和真空(1.3～13Pa)干燥，得到粉状中药组合物。

实施例2

按照以下质量份备料：炙黄芪20份、太子参20份、当归8份、麸炒女贞子8份、茯苓8份、炒白术8份、陈皮8份、酒黄芩8份和炙甘草3份、

炙黄芪20g、太子参20g、当归8g、麸炒女贞子8g、茯苓8g、炒白术8g、陈皮8g、酒黄芩8g和炙甘草3g。

制备方法同实施例1。

实施例3

按照以下质量份备料：炙黄芪30份、太子参30份、当归10份、麸炒女贞子10份、茯苓10份、炒白术30份、陈皮10份、酒黄芩10份、炙甘草3份、

炙黄芪30g、太子参30g、当归10g、麸炒女贞子10g、茯苓10g、炒白术30g、陈皮10g、酒黄芩10g和炙甘草3g。

制备方法同实施例1。

实施例4

1、病例选择

选择南京市第二医院肝病科2011年1月至2016年12月收住入院的HBV-ACLF早期患者共97例，其中男83例，女14例；上述患者随机分为对照组和治疗组，其中治疗组31例，对照组66例。对照组男性54例，女性12例，平均年龄(45.61±12.06)岁；治疗组男性24例，女性7例，平均年龄(41.13±12.06)岁，两组性别、年龄分布、主要症候积分、终末期肝病(MELD)评分及外周血淋巴细胞百分比(Lym％)差异无统计学意义(P＞0.05)。

2、分组给药

对照组采用西医内科常规治疗，包括一般支持治疗、抗病毒、保肝、促肝细胞生长、调节肠道菌群等；

治疗组在对照组给予的西医内科治疗基础上结合本发明提供的中药组合物。基本方为实施例3提供的中药组方。随患者实证变化而加减：(1)瘀偏重者加益母草10g、丹参10g和桃仁6g；(2)湿热证热偏重者加栀子10g、金钱草10g和赤芍10g；(3)湿热证湿偏重者加茵陈30g、虎杖10g和生大黄10g。

治疗组患者在治疗期间，服用上方每日1剂，水煎至200m1，分早晚2次温服，疗程为4周。

3、主要观察指标

检测治疗前和治疗4周时证候积分、肝功能、凝血功能、MELD评分和外周血淋巴细胞百分比(Lym％)等，检测使用生化检测试剂盒，实验操作方法按照生化检测试剂盒说明书。

4、疗效评定标准

参照中华医学会感染病学分会肝衰竭与人工肝学组制定的《肝衰竭诊疗指南》，本研究分为有效、无效。有效：指患者症状、体征较治疗前明显恢复，肝功能、凝血功能、MELD评分明显改善。无效：指患者症状、体征及肝功能、凝血功能、MELD评分无明显好转；或病情进一步加重，甚至出现多器官功能衰竭等表现。检测结果如表1及表2所示。

表1治疗后两组综合疗效的比较

注：*与对照组比较，P＜0.05。

表2治疗后两组证候积分、总胆红素(TBil)和终末期肝病模型(MELD)评分和淋巴细胞百分比(Lym％)比较(x±s)

注：*与对照组比P＜0.05，**与对照组比P＜0.01。

由表1和表2可知，本发明实施例3提供的中药组方对于慢加急性肝衰竭患者肝功能指标(TBil、MELD)具有明显的改善作用，对于低下的免疫功能(Lym％)有明显提升作用，明显改善预后，临床有效率明显提高。

实施例5

改善四氯化碳(CCl

1、CCl

取Sprague-Dawley大鼠(雄性，180～220g)。实验前，大鼠进行一周的适应性饲养，饲养在标准条件下，室温为20±2℃，相对湿度为40±5％，光照/黑暗循环为12小时，可以自由获取食物和水。

使用四氯化碳(CCl

2、分组与给药

将Sprague-Dawley大鼠随机分成正常对照组(1.Control)，ACLF模型组(2.CCl4，LPS，D-gal-induced acute on chronic liver failure(ACLF))、实施例1低剂量干预组(3.ACLF+YQJPF low dose)、实施例2中剂量干预组(4.ACLF+YQJPF medium dose)、实施例3高剂量干预组(5.ACLF+YQJPF high dose)，用CCl

3、血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、直接胆红素(DBIL)等数据的检测

血清中肝损伤指标ALT、AST、DBIL等数据检测使用生化检测试剂盒，实验操作方法按照生化检测试剂盒说明书。检测结果如图3中的A、B、C、D和表4～7所示。

表3本发明提供的中药组合物对肝指数的影响(％)

注：#vs正常对照组，*vsACLF模型组；*P<0.05，**P<0.01；#P<0.05，##P<0.01，下表同。

表4本发明提供的中药组合物对ALT的影响(U/L)

表5本发明提供的中药组合物对AST的影响(U/L)

表6本发明提供的中药组合物对TBil的影响(μmol/L)

由图3和表3～6可知，随着中药组合物浓度的增加，大鼠血清中ALT、AST、DBIL等数据相比模型组明显减少。表明本发明实验例提供的中药组合物在四氯化碳、LPS和D-Gal诱导的大鼠慢加急性肝衰竭模型中，能够明显降低肝损伤指标ALT、AST、TBil等指标。

实施例6

改善CCl

1、CCl

Sprague-Dawley大鼠(雄性，180～220g)。实验前，动物进行一周的适应性饲养，饲养在标准条件下，室温为20±2℃，相对湿度为40±5％，光照/黑暗循环为12小时，可以自由获取食物和水。使用四氯化碳(CCl

2、分组与给药

将Sprague-Dawley大鼠随机分成正常对照组(1.Control)，ACLF模型组(2.CCl4，LPS，D-gal-induced acute on chronic liver failure(ACLF))、实施例1低剂量干预组(3.ACLF+YQJPF low dose)、实施例2中剂量干预组(4.ACLF+YQJPF medium dose)、实施例3高剂量干预组(5.ACLF+YQJPF high dose)，用CCl

3、CD8

大鼠称重腹腔注射2％戊巴比妥钠，麻醉后腹主动脉取血，医用抗凝采血管收集，加入红细胞裂解液室温裂解8min，加入PBS终止裂红，并离心洗涤一次，离心条件为400g，4℃，5min。弃上清重悬加入对应抗体(CD3-FITC、CD8PE-Cy7、CD4-APC)4℃孵育。PBS洗涤并重悬，离心。

4、用流式细胞仪进行外周血的免疫分型检测。

检测结果如图4和表7所示。

表7本发明提供的中药组合物对CD8

由上可知，CCl

经由上述试验可知，本发明实施例3提供的中药组合物药效最好。

实施例7

多靶点途径改善慢加急性肝衰竭肝细胞功能

1、网络数据库检索分析本发明实施例中药组合物的活性成分及靶点

通过TCMSP、TCMID数据库对本发明提供的中药组合物的潜在活性成分及其药物靶点进行筛选，其中主要根据成分的毒药物动力学(ADME)参数进行筛选，包括口服生物利用度(OB)≥30％，药物相似度(DL)≥0.18的药代动力学特性来筛选本发明提供的中药组合物中每种草药的有效成分。进而采用网络图像化软件Cytoscape3.7.构建“中药-活性成分-靶点”网络图。

2、网络数据库富集分析本发明实验例的本发明提供的中药组合物的可能作用通路。

将中药组合物主要化学成分作用靶点与慢加急性肝衰竭靶点数据集进行Venn分析，得到共同的基因集，通过使用Metascape插件对获得交集基因进行KEGG(KyotoEncyclopedia of Genes and Genomes)通路富集分析，进一步说明本发明提供的中药组合物的潜在作用机制。

分析结果如图5所示，图5中的A：YQJPF的网络药理学图，外圈的节点代表活性化合物，内部的方形节点代表分子靶点，节点的大小与它们的关联程度成正比，直线上的点代表两种以上草药的共同成分。

图5中的B：KEGG(Kyoto Encyclopedia ofGenes and Genomes)数据库富集分析，将发明实验例的中药组合物的作用靶点进行数据库分析，纵坐标代表各富集通路，横坐标代表各通路中靶点基因所占比例，圆的大小代表基因数目。

图5结果表明实验例提供的中药组合物具有多成分、多靶点的特点，可通过多种途径改善慢加急性肝衰竭的肝细胞功能。

虽然本发明已以较佳的实施例公开如上，但其并非用以限定本发明，任何熟悉此技术的人，在不脱离本发明的精神和范围内，都可以做各种改动和修饰，因此本发明的保护范围应该以权利要求书所界定的为准。