可夹取式多凹面细胞培养片

技术领域

本发明涉及一种可夹取式多凹面细胞培养片。

背景技术

常规细胞培养为贴壁二维培养方式，但由于细胞间通讯很少，使得细胞群无法具备类似于体内的结构及生理生化特征。比如，肝脏细胞在进行贴壁培养下，数天后即丢失了肝脏胆小管结构以及分泌白蛋白/尿素的功能，或者癌细胞在二维培养下缺乏体内的生物标志物。相比之下，细胞的三维培养能够有效的提高并模拟体内环境，比如肝细胞三维培养具有天然肝脏的三维结构与肝功能，获得更为准确的肝毒性数据；癌细胞在三维培养下，可重现一些生物标志物以及一定的转移与浸润功能。因此，细胞三维培养的重要性不言而喻。

然而，目前的三维培养的方法过于复杂，经济成本高昂(比如支架法)，使得三维培养无法让普通科研人员广泛接受；或者缺乏高通量特点，比如在96孔板中使用琼脂糖法或者超低吸附板的方法，一个孔内只能形成一个细胞三维球；由于每个细胞球仅有1000个左右的细胞量，而细胞球染色、Western Blot蛋白检测、mRNA转录水平的qPCR定量以及基于检测试剂盒的方法都需要至少50K以上的细胞才能获得较可靠的数据。

因此，细胞三维培养在实际市场推动的过程中，由于预处理方式复杂、经济成本高以及成球数量少、缺乏高通量特征，促使经简单处理即可使用的三维细胞球多凹面培养片的出现，但是目前，将培养的的细胞球收集到所需的容器中时，转移培养片存在困难，操作不便。

发明内容

本发明的目的在于提供一种可夹取式多凹面细胞培养片，其结构简单且方便提取移动。

为达到上述目的，本发明提供如下技术方案：一种可夹取式多凹面细胞培养片，用以放置在细胞培养用具内，所述可夹取式多凹面细胞培养片包括培养片本体、若干个自所述培养片本体的表面向内凹陷形成的凹面、培养片外周向外凸伸形成的凸环、以及自所述培养片本体的表面向外凸伸形成的凸起，握持所述凸起以提取所述可夹取式多凹面细胞培养片。

进一步地，所述凸起设置在所述培养片本体的表面的中心位置。

进一步地，所述凸起的直径为0.5-2.0mm，高度为1.0-3.0mm。

进一步地，所述培养片本体的外周向外凸伸形成有凸环，所述凸环与所述培养片表面围设形成有收容空间。

进一步地，所述凸环的高度为0.2-2.0mm。

进一步地，所述凹面为倒四棱台结构或倒四棱锥结构，所述凹面的横截面的形状为倒梯形或倒三角形。

进一步地，所述凹面的深度范围为0.2-2.5mm，于可夹取式多凹面细胞培养片的高度方向上，所述凹面的上底面的边长为0.4-5.0mm，所述凹面的下底面的边长为0-2.0mm。

进一步地，所述凹面具有凹面末端，所述凹面末端的横截面的形状为半圆形、弧形、矩形或锥形。

进一步地，所述凹面还包括用以增加所述凹面深度的柱状空腔或锥状空腔，于可夹取式多凹面细胞培养片的高度方向上，所述凹面末端位于所述柱状空腔或锥状空腔的下方且与所述柱状空腔或锥状空腔连接。

进一步地，所述可夹取式多凹面细胞培养片一体注塑形成，所述可夹取式多凹面细胞培养片的光滑度为纳米级。

本发明的有益效果在于：培养片凹面用以培养三维细胞球，凸起方便镊子夹取该多凹面细胞培养片，凸环与培养片表面围设形成有收容空间用以辅助细胞聚集在培养片的表面上而不掉落于培养片与细胞培养用具的间隙。培养片的凹面提供了两种设计方案，包括圆底及锥形底，其中锥形底凹面在满足细胞成球的基础上，大大增加了凹面数量与密集度，也避免了细胞落于凹面以外的位置而无法成球的情况。且该可夹取式多凹面细胞培养片可直接置于细胞培养用具内，经简单处理即可获得大量的细胞球，适合对细胞量需求较高的机制研究。该可夹取式多凹面细胞培养片能大量获得细胞球，使用方法简单，且具有可夹取的便捷性，有利于将得到的细胞球收集到所需的容器中，从而扩大了三维细胞培养的接受度，降低了三维细胞球的培养成本。

上述说明仅是本发明技术方案的概述，为了能够更清楚了解本发明的技术手段，并可依照说明书的内容予以实施，以下以本发明的较佳实施例并配合附图详细说明如后。

附图说明

图1为本发明第一实施例所示的可夹取式多凹面细胞培养片的结构示意图；

图2为图1中所示的可夹取式多凹面细胞培养片在另一方向上的结构示意图；

图3为图1中所示的可夹取式多凹面细胞培养片的剖面图；

图4为图3中所示的可夹取式多凹面细胞培养片的布局放大图；

图5为本发明第二实施例所示的可夹取式多凹面细胞培养片的结构示意图；

图6为图5中所示的可夹取式多凹面细胞培养片的剖面图；

图7为图6中所示的可夹取式多凹面细胞培养片的布局放大图。

具体实施方式

下面将结合附图对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

此外，下面所描述的本发明不同实施方式中所涉及的技术特征只要彼此之间未构成冲突就可以相互结合。

请参见图1至图4，本发明第一实施例中所示的可夹取式多凹面细胞培养片100，可放置在细胞培养用具(未图示)内。该细胞培养用具为6孔板、12孔板、24孔板、48孔板、96孔板以及35mm细胞培养皿、60mm细胞培养皿中的任一种，诚然，在其他实施例中，该细胞培养用具也可为其他，根据实际情况而定，在此不做具体限定。可夹取式多凹面细胞培养片100的直径大小根据细胞培养用具的规格而定，例如当细胞培养用具为24孔板时，可夹取式多凹面细胞培养片100的直径范围为14.5-15.5mm，优选为15.0mm。诚然，在其他实施例中，可夹取式多凹面细胞培养片100的直径也可为其他，在此不做具体限定，根据实际情况而定。可夹取式多凹面细胞培养片100的厚度在此不做具体限定，可根据实际需要进行选择。

可夹取式多凹面细胞培养片100包括培养片本体1、若干个自培养片本体1的表面向内凹陷形成的凹面2、以及自培养片本体1的表面向外凸伸形成的凸起3，握持凸起3以提取可夹取式多凹面细胞培养片100。需要说明的是，凸起3和凹面2形成在培养片本体1的同一个表面上。将可夹取式多凹面细胞培养片100可直接放置于细胞培养用具内，经简单处理即可在细胞培养用具的单个孔洞内获得大量细胞球，方便快速产生128、472个细胞球，以满足细胞球染色、Western Blot定量、mRNA转录水平qPCR定量等检测需要，操作方法简单，使用过程方便快捷。

本实施例中，培养片本体1为圆形结构，其直径为15.0mm，高1.45mm。若干个凹面2均匀分布在培养片本体1的表面上。诚然，在其他实施例中，若干个凹面2也可不均匀分布，关于若干凹面2在培养片本体1上的排列方式，在此不做具体限定，根据实际情况而定。在本实施例中，凹面2的个数为128个。关于凹面2的数量在此不做具体限定，诚然，在其他实施例中，凹面2的数量也可为其他，在此不做具体限定，根据实际情况而定。

每个凹面2具有凹面末端21。其中，凹面末端21的横截面的形状为半圆形、弧形、矩形或锥形或其他，在此不做具体限定，根据实际情况而定。当凹面末端21的横截面的形状为弧形时，其形成细胞球的效果最好，在一实施例中，弧形可为半圆形。凹面末端21的直径范围为0.4-5.0mm，凹面末端21的深度范围为0.2-2.5mm。诚然，在其他实施例中，凹面末端21的直径范围和深度范围也可为其他，根据实际情况而定，在此不做具体限定。凹面2还包括用以增加凹面2深度的柱状空腔22或锥状空腔22，于可夹取式多凹面细胞培养片100的高度方向上，凹面末端21位于柱状空腔22或锥状空腔22的下方且与柱状空腔22或锥状空腔22连接。其中，柱状空腔22或锥状空腔22的深度范围为0-2.0mm，即柱状空腔22或锥状空腔22可设置有也可设置无，根据实际需求而定。柱状空腔22或锥状空腔22也可以为其他形状的空腔，在此不做具体限定，根据实际情况而定。

本实施例中，凸起3设置在培养片本体1的表面的中心位置，从而方便在握持该凸起3将培养片提取时，培养片能够保持在水平方向上的平衡，避免位于培养片本体1表面的物质流出，利于将得到的细胞球收集到所需的容器中。诚然，在其他实施例中，凸起3可设置在培养片本体1的表面的其他位置处，在此不做具体限定。该凸起3可为圆柱形结构，凸起3的直径为0.5-2.0mm，高度为1.0-3.0mm。关于凸起3的形状和尺寸，在此不做具体限定，还可以为其他形状和尺寸，比如长方体等结构。在一较佳实施例中，凸起3的直径为1.2mm，高度为1.5mm。

培养片本体1的外周向外凸伸形成有凸环4，凸环4与培养片本体1的表面围设形成有收容空间，可辅助细胞落入培养片的中央区域，不易从培养片上滑落至细胞培养用具与培养片的间隙中造成部分细胞未参与成球。凸环4的高度为0.2-2.0mm，关于凸环4的具体高度，在此不做具体限定，可根据实际需要进行选择。在一较佳实施例中，凸环4的高度为0.5mm。

请参见图5至图7，本发明的第二实施例中所示的可夹取式多凹面细胞培养片200，其与第一实施例中所示的可夹取式多凹面细胞培养片100的结构基本相同，不同点为：凹面2为倒四棱台结构或倒四棱锥结构，凹面2的横截面的形状为倒梯形或倒三角形。凹面2的深度范围为0.2-2.5mm，于可夹取式多凹面细胞培养片200的高度方向上，凹面2的上底面的边长为0.4-5.0mm，凹面2的下底面的边长为0-2.0mm。在本实施例中，凹面2的个数为472个，472个凹面2相邻紧密排布，以此充分利用培养片本体1表面的空间，凹面2的深度为0.5mm，凹面2的上底面的边长为0.55mm，，凹面2的下底面的边长为0.18mm。

关于凹面2的具体结构，在此不做具体限定，还可以为其他，在此不一一列举。

可夹取式多凹面细胞培养片一体注塑形成，快捷简单且方便，简化了制造工艺，且降低了生产成本，可扩大生产规模，即可批量生产细胞培养片，改变传统细胞培养方式。且注塑方法可方便调节培养片的尺寸，满足各种实际应用。

可夹取式多凹面细胞培养片的光滑度为纳米级，大大降低细胞在可夹取式多凹面细胞培养片表面的吸附性，因此能够顺利的滑向凹面，提高细胞成球的效率和质量。

本发明还提供了一种三维细胞球的培养方法，采用如上的可夹取式多凹面细胞培养片，该方法包括：

将可夹取式多凹面细胞培养片放置于细胞培养用具内；

向细胞培养用具内加入乙醇溶液，以对可夹取式多凹面细胞培养片进行浸润及灭菌处理；

加入细胞培养基洗去乙醇溶液，并重复此操作三次；

再次加入细胞培养基以使得细胞培养基浸润可夹取式多凹面细胞培养片，并预留0.2-2ml的细胞培养基；

向细胞培养用具内加入细胞悬液，静置48h，细胞在重力作用下沉降在凹面内以形成细胞球。

其中，“向细胞培养用具内加入乙醇溶液，以对可夹取式多凹面细胞培养片进行浸润及灭菌处理”具体为：

向细胞培养用具内加入乙醇溶液，使得乙醇溶液没过可夹取式多凹面细胞培养片，并保持15分钟，使得乙醇溶液对可夹取式多凹面细胞培养片浸润和灭菌。诚然，在其他实施例中，也可用其他溶液进行浸润及灭菌效果，根据实际情况而定，在此不做具体限定。

乙醇溶液的浓度范围为75％-100％，乙醇溶液的体积范围为0.2ml-2ml。诚然，在其他实施例中，乙醇的浓度及体积也可为其他，在此不做具体限定，根据实际情况而定。使用乙醇溶液的目的在于：既可灭菌也可浸润凹面，以移除可能存在凹面中的气泡防止影响细胞成球。

综上，培养片凹面用以培养三维细胞球，凸起方便镊子夹取该多凹面细胞培养片，凸环与培养片表面围设形成有收容空间用以辅助细胞聚集在培养片的表面上而不掉落于培养片与细胞培养用具的间隙。培养片的凹面提供了两种设计方案，包括圆底及锥形底，其中锥形底凹面在满足细胞成球的基础上，大大增加了凹面数量与密集度，也避免了细胞落于凹面以外的位置而无法成球的情况。且该可夹取式多凹面细胞培养片可直接置于细胞培养用具内，经简单处理即可获得大量的细胞球，适合对细胞量需求较高的机制研究。该可夹取式多凹面细胞培养片能大量获得细胞球，使用方法简单，且具有可夹取的便捷性，有利于将得到的细胞球收集到所需的容器中，从而扩大了三维细胞培养的接受度，降低了三维细胞球的培养成本。

以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。

以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。