一种自发性早产的外周血蛋白标记物的筛选方法

技术领域

本发明属于生物标记物的筛选技术领域，尤其涉及一种自发性早产的外周血蛋白标记物的筛选方法。

背景技术

目前，早产即妊娠不满37周的分娩，在全球的发生率约为12％，其中30％左右的不明原因的无征兆的早产，称为自发性早产，是产前住院治疗的最主要原因。自发性早产分娩包括早产发动，未足月胎膜早破(PPROM)和宫颈薄弱，不包括有孕妇和胎儿指征的早产分娩。大部分诱发自发性早产的病理生理事件未知，目前已知的主要包括蜕膜出血(早剥)，机械因素(子宫过度扩张或宫颈机能不全)和激素改变(可能由于胎儿或者孕妇应激介导)。世卫组织2015年报道，早产在新生儿和5岁以内幼儿死因中高居榜首。

早产儿即便存活，其新生儿期感染性疾病，出血性疾病，神经发育障碍以及呼吸道和胃肠道并发症，甚至成年后疾病的发生率也显著高于足月分娩儿，所以降低早产发生率，成为迫切需求。

但是由于取材和伦理学限制，对于自发性早产的预测和预防是困扰临床实践的一个重要难题。

当前诊断早产的方法，存在准确性差，检出率低，或者假阳性高的问题，均无法满足当前医疗诊治需求。

无创产前诊断是近年来兴起的一项血浆分子检测，基于母体外周血中含有胎儿的DNA、RNA信息，对母体外周血DNA或RNA测序，目前广泛地应用于胎儿染色体异常疾病的产前诊断。由于其无创性和简便性，可以避免早产检测涉及的各种伦理学问题和技术难题，因此，为早产预测提供了新的切入点。目前已有通过血浆多种RNA、细胞外囊泡的脂质分子预测早产的报道，以及通过血浆代谢物预测妊娠时间的报道。孕妇血浆蛋白含量丰富，检测更简单，但尚未有关于血浆蛋白预测早产的相关报道。

通过上述分析，现有技术存在的问题及缺陷为：现有技术尚未有关于血浆蛋白预测早产的相关报道；现有的诊断早产的方法，存在准确性差，检出率低，或者假阳性高的问题。

发明内容

针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种自发性早产的外周血蛋白标记物的筛选方法。

本发明是这样实现的，一种自发性早产的外周血蛋白标记物的筛选方法，所述自发性早产的外周血蛋白标记物的筛选方法包括：

通过获取孕妇的临床样本数据，基于获取的孕妇临床样本数据筛选可用于早产无创诊断的血浆生物标记物。

进一步，所述自发性早产的外周血蛋白标记物的筛选方法包括以下步骤：

步骤一，获取孕妇的临床样本数据，并运用iTRAQ方法定量分析差异蛋白；

步骤二，利用ELISA验证孕妇血浆中蛋白的表达。

进一步，所述运用iTRAQ方法定量分析差异蛋白包括：iTRAQ定量分析足月临产、足月未临产以及早产的差异蛋白。

进一步，所述自发性早产的外周血蛋白标记物的筛选方法还包括：利用ROC曲线检验标记物的预测能力，并得到预测模型。

本发明的另一目的在于提供一种利用所述自发性早产的外周血蛋白标记物的筛选方法筛选得到的自发性早产的外周血蛋白标记物。

进一步，所述自发性早产的外周血蛋白标记物为血清类粘蛋白(ORM1；又名：α-酸性糖蛋白，AGP1)。

本发明的另一目的在于提供一种用于诊断自发性早产试剂盒，所述用于诊断自发性早产的试剂盒包含所述的自发性早产的外周血蛋白标记物。

结合上述的技术方案和解决的技术问题，请从以下几方面分析本发明所要保护的技术方案所具备的优点及积极效果为：

第一、针对上述现有技术存在的技术问题以及解决该问题的难度，紧密结合本发明的所要保护的技术方案以及研发过程中结果和数据等，详细、深刻地分析本发明技术方案如何解决的技术问题，解决问题之后带来的一些具备创造性的技术效果。具体描述如下：

本发明通过病人临床样本，筛选验证可用于自发性早产无创诊断的血浆生物标记物，并将其应用在自发性早产的鉴别与诊断中。

第二，把技术方案看做一个整体或者从产品的角度，本发明所要保护的技术方案具备的技术效果和优点，具体描述如下：

本发明利用血浆生物标记物进行自发性早产的鉴别，准确性高，检出率高且假阳性率低。

附图说明

图1是本发明实施例提供的自发性早产的外周血蛋白标记物的筛选方法流程图；

图2是本发明实施例提供的iTRAQ蛋白定量显示在不同组孕妇中有差异的蛋白示意图；图中：TIL表示足月临产；TNIL表示足月未临产；PTL表示早产(n＝4)；

图3是本发明实施例提供的ELISA检验在母体外周血中ORM1的含量示意图；图中：N(TNIL)＝14，N(TIL)＝13，N(PTL)＝9,*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001；

图4是本发明实施例提供的ROC曲线检验外周血蛋白标记物的预测能力示意图。

具体实施方式

为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

一、解释说明实施例。为了使本领域技术人员充分了解本发明如何具体实现，该部分是对权利要求技术方案进行展开说明的解释说明实施例。

本发明实施例提供的自发性早产的外周血蛋白标记物的筛选方法包括：

通过获取孕妇的临床样本数据，基于获取的孕妇临床样本数据筛选可用于早产无创诊断的血浆生物标记物。

本发明实施例提供的自发性早产的外周血蛋白标记物的筛选方法包括以下步骤：

S101，获取孕妇的临床样本数据，并运用iTRAQ定量分析差异蛋白；

S102，利用ELISA验证孕妇血浆中蛋白的表达；利用ROC曲线检验标记物的预测能力，并得到预测模型。

如图1-图2所示，本发明实施例提供的运用iTRAQ定量分析差异蛋白包括：iTRAQ定量分析足月临产、足月未临产以及早产的差异蛋白。

本发明实施例提供的自发性早产的外周血蛋白标记物为ORM1。

1、iTRAQ定量差异蛋白：如表1所述，ORM1在早产组中特异升高

表1

2、ELISA验证外周血差异蛋白，如图3所示。

3、ROC曲线检验标记物的预测能力，如图4及表2所示，代表预测真实性达到0.94，效果较好。

表2

二、应用实施例。为了证明本发明的技术方案的创造性和技术价值，该部分是对权利要求技术方案进行具体产品上或相关技术上的应用实施例。

本发明的应用实施例提供了一种自发性早产的外周血蛋白标记物在制备用于诊断自发性早产的试剂盒中的应用。

本发明的应用实施例提供的单独预测模型如下：

注：β

表3

表4

以上所述，仅为本发明的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，都应涵盖在本发明的保护范围之内。