一种用于制备纳米药物的离子液体及其制备方法和用途

技术领域

本发明属于药物制剂技术领域，涉及一种离子液体及其制备方法和用途，具体涉及一种用于制备纳米药物的离子液体及其制备方法和用途，尤其涉及利用离子液体作为溶剂制备药物纳米颗粒、控制颗粒粒径的用途。

背景技术

现有技术公开了药物纳米颗粒是指主要由药物组成、粒径在50～1000nm范围的颗粒，可以是药物结晶也可以是药物的无定形颗粒。研究显示，当将药物的粒径降低到纳米尺度的时候，体系的比表面积和曲率显著提高，使得药物具有更快的溶出速率。因此，对于难溶性药物，制备其纳米颗粒口服给药，可以提高其溶出度和口服生物利用度，目前已有十余种基于该技术的药物制剂应用于临床，取得了显著的成功。由于具有载药量大，体内外性质稳定的优势，难溶性药物纳米颗粒在注射给药、经皮给药、眼部给药和肺部给药方面均展现出巨大的应用前景。纳米颗粒作用的发挥与其粒径及粒径分布密切相关，而且对于静脉注射等给药途径，粒径还关系到用药的安全性。因此，发展药物纳米颗粒可控制备技术对于其应用至关重要。

药物纳米颗粒制备技术主要分为top-down(自上而下)和bottom-up(自下而上)两大类。Top-down技术采用高能机械力将药物晶体破碎至纳米尺度，目前上市的纳米颗粒制剂基本均采用该技术制备。该技术的优点是方法简单、生产规模扩展能力强。但是，该技术对于粒径的控制并不理想，往往需要长时间(数小时到数天)的研磨和均化处理才能将药物晶体的平均粒径降低到纳米尺度，即使如此，粒径分布也可能较为宽泛；持续的能量输入也增加了研磨介质脱落、杂质污染的风险。这极大地限制了纳米颗粒的应用前景，也不适用于热不稳定的药物。Bottom-up方法是从溶液中生长药物颗粒的技术，最常用的是药物溶剂和非溶剂混合析出沉淀的方法。相较之下，bottom-up方法具有省时节能、适合温敏性药物的优点。然而，bottom-up工艺中有机溶剂的使用会对环境造成极大负担，不符合目前“绿色化学”的发展要求，体系中残留的有机溶剂也会对产品的稳定性和安全性造成极大损害。更为重要的是，bottom-up工艺在控制颗粒粒径及其分布方面极具挑战，因为该方法涉及到晶核的形成与生长，快速成核和慢速生长是获得小而均匀纳米结晶的关键。在bottom-up工艺中，药物溶剂与非溶剂混合形成药物的过饱和溶液，促进药物晶核的形成，随后晶核自发生长，直到药物浓度降低到其溶解度则停止生长。成核速度越快，生成的晶核越多，则消耗的溶质越多，晶核的生长也将受到抑制；如果这些晶核是同时形成的，它们同时生长，则得到小而均匀的结晶。过饱和度是促进成核的唯一动力，为了促进成核，往往需要更大的过饱和度，然而，由于有机溶剂扩散较快，在与非溶剂混合的过程中即已在局部形成药物过饱和溶液，并产生晶核，不同步的成核过程，使得晶核先后生长，造成结晶粒径分布不均，该现象在批量越大的情况下越突出。

离子液体(ionic liquids,ILs)，通常是指熔点低于100℃、完全由阴阳离子所组成的盐。由于其不挥发、不易燃、热化学性质稳定、溶剂化能力强、可设计性高等优点，ILs被普遍认为是一种绿色溶剂，并被广泛地应用于化工领域。ILs也可以作为药物溶剂或非溶剂，通过溶剂-非溶剂混合沉淀的方法制备药物结晶(CrystEngComm,2014,16,10797；Cryst.Growth Des.2013,13,31-39；Cryst.Growth Des.2010,10,3044；Cryst.GrowthDes.2016,16,1829-1836；Cryst.Growth Des.2017,17,428-432)。上述研究主要利用结晶过程中药物与ILs的相互作用，以获得在普通有机溶剂中无法获得的药物晶型，并不涉及对结晶粒径的控制。

中国专利(ZL201611020389.1)公开了二氢槲皮素新晶型及其制备方法，以1-丁基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐为溶剂、二氯甲烷为非溶剂，采用溶剂-非溶剂混合沉淀的方法制备。韩国专利(KR20130139256)公开了氯吡格雷硫酸氢盐多晶型I的制备方法以乙醇为溶剂、1-烯丙基-3-乙基咪唑四氟硼酸为非溶剂，通过溶剂-非溶剂沉淀制备。所述专利中均不涉及对药物颗粒粒径的控制，主要利用ILs提供的离子环境，诱发药物新晶型的产生。另外，上述专利中所使用的离子液体均与水不相混溶，需要使用二氯甲烷、乙醇等有机溶剂作为非溶剂，并不符合“绿色化学”的发展要求，体系中残留的有机溶剂也会对产品的稳定性和安全性造成极大损害。更为重要的是，难溶性药物在上述有机溶剂中均有一定的溶解度，并不易于结晶析出，故而上述专利中二氢槲皮素和氯吡格雷硫酸氢盐均有一定的水溶性，并不属于难溶性药物的范畴。

中国发明专利申请(CN201811347234.8)公开了以溴化1-己基-3-甲基咪唑为溶剂、去离子水为非溶剂的溶剂-非溶剂混合沉淀制备紫杉醇新晶型的方法。新晶型相较于原料药溶解度增加近6倍，溶出速率得到显著提高。该离子液体咪唑上取代烷基的碳链较长，具有一定的表面活性，与水混合可以形成胶束，进而诱导新晶型的产生。然而，这类具有表面活性的离子液体并不适合控制纳米颗粒的粒径，因为胶束的形成反而阻碍药物晶核的形成，不利于控制结晶粒径，故而该专利中新晶型均是数微米以上的长条状。另外，虽然该专利使用了水溶性的IL，避免了有机溶剂的使用，但咪唑类ILs仍然具有一定的毒性。

基于现有技术的现状及存在的缺陷，本申请的发明人拟提供一种离子液体及其制备方法和用途，具体涉及一种用于制备纳米药物的离子液体及其制备方法和用途，尤其涉及利用离子液体作为溶剂制备药物纳米颗粒、控制颗粒粒径的用途。

发明内容

本发明的目的在于基于现有技术的现状及存在的缺陷，提供一种离子液体及其制备方法和新用途，具体涉及一种用于制备纳米药物的离子液体及其制备方法和用途，尤其是利用制得的离子液体为溶剂，通过溶剂-非溶剂混合沉淀的方法制备难溶性药物纳米颗粒的新用途。

本发明的目的是提供一种可制备药物纳米颗粒的离子液体。

本发明经研究显示，相对于传统有机溶剂，离子液体更能控制药物纳米颗粒的粒径。分析其原因为，离子液体对难溶性药物具有良好的增溶能力，可以作为难溶性药物的溶剂并在溶剂-非溶剂混合沉淀过程中提供较高的过饱和度；同时，离子液体具有较大的粘度，与水混合时，可在一定程度上保持对难溶性药物的增溶，进一步分散使得离子液体完全解离成阴、阳离子而失去增溶能力，使得晶核同步形成，同步生长，而高过饱和度促进了成核，消耗更多溶质而抑制晶体的生长程度，得到小而均匀的纳米颗粒。

本发明中实验显示，胆碱类ILs(cholinium-based ILs,Ch-ILs)可以作为难溶性药物紫杉醇的溶剂，以水为非溶剂，通过溶剂-非溶剂混合制备紫杉醇纳米结晶，而且，即使在提高的药物浓度下，同样能够控制纳米结晶的粒径及其分布。而常规有机溶剂乙醇仅能在药物浓度较低时制备得到紫杉醇纳米结晶，其粒径及粒径分布随着紫杉醇浓度的增加而增加。本申请的方法适用于槲皮素、美洛昔康、白藜芦醇、紫杉醇、水飞蓟宾、西罗莫司、辛伐他汀、熊去氧胆酸、桦木酸、姜黄素、尼卡地平等难溶性药物，也适用于氨基酸、甜菜碱、烟酰胺、葡甲胺等天然产物及其衍生物为阳离子的ILs。其原因在于，该些ILs能够溶解难溶性药物，但遇水后完全解离成阴、阳离子丧失增溶能力而生成沉淀，由于具有较强的增溶能力而可以获得较高的过饱和度，有利于促进成核。更为重要的是，相对于传统有机溶剂，这些ILs具有较大的粘度，在水中扩散能力差，因此，在与水混合的过程中，能够分散成微小的液滴而继续保持对难溶性药物的增溶能力，继续混合过程中，与水的相互作用加强使得ILs解离而丧失增溶能力，同时形成晶核，同步生长，得到小而均匀的纳米结晶。

本发明中，以胆碱、氨基酸、甜菜碱、烟酰胺、葡甲胺等天然产物及其衍生物为阳离子，以氨基酸或有机酸为阴离子的ILs具有良好的生物安全性。Ch-ILs对人类细胞的毒性比同阴离子的咪唑类ILs降低了至少一个数量级，且对其它真核细胞也均表现出低的细胞毒性。本申请经研究表明胆碱醋酸、胆碱水杨酸、胆碱碳酸氢盐等几乎不引起环境问题；部分Ch-ILs如胆碱丙酸、胆碱丁酸、胆碱柠檬酸等仅为“全球化学品统一分类和标签制度”中的第三类溶剂，即低毒性溶剂。

更具体的，

本发明提供了一种用于制备药物纳米颗粒的离子液体,所述离子液体由阳离子和阴离子构成，所述阳离子包含胆碱、磷酸二氢胆碱、磷脂酰胆碱、鞘磷脂、甜菜碱、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、脯氨酸、烟酰胺、葡甲胺中的一种或几种，所述阴离子为甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、天冬酰胺、半胱氨酸、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、谷氨酰胺、赖氨酸、精氨酸、组氨酸和有机酸中的一种或几种。

优选地，所述阳离子为胆碱。

优选地，所述阴离子为碳链长度小于等于6的有机酸中的一种或几种。

进一步优选地，有机酸为醋酸、羟基乙酸、乳酸、丙酸、丙二酸、草酸、苹果酸、琥珀酸、酒石酸、富马酸、柠檬酸、葡萄糖酸中的一种或几种。

进一步优选地，所述有机酸为乳酸、醋酸中的一种。

所述离子液体表面张力20-70mN/m。

优选表面张力30-70mN/m，进一步优选40-70mN/m。

所述离子液体，粘度为30-3000mPa·s，

优选粘度为50-700mPa·s，最优选90-450mPa·s。

所述阴离子与阳离子的摩尔比例为1:0.25-4。

本发明的进一步目的是提供一种通过所述的离子液体制备药物纳米颗粒的方法，所述得方法以制得的离子液体作为药物溶剂，采用溶剂-非溶剂混合的方法制备药物颗粒。

优选地，所述得通过所述的离子液体制备药物纳米颗粒的方法包括如下过程：

(1)将药物溶解于离子液体中，

(2)将离子液体作为药物溶剂，将溶剂与非溶剂混合，使药物析出沉淀，

(3)过滤，除掉离子液体，即得药物纳米颗粒。

进一步优选地，所述的制备药物纳米颗粒的方法，包括如下过程：

(1)将药物溶解于离子液体中，可适当加热以提高溶解度或加快溶解速度。

(2)将药物的离子液体溶剂与非溶剂混合，使药物沉淀析出。为了促进混合的效率，可采用搅拌、超声、高剪切、射流撞击、多进口涡流混合、高重力可控沉淀等方式或其组合方式。

(3)过滤，滤饼以非溶剂冲洗，除掉离子液体。

(4)将滤饼重新置于水中，使分散均匀。

本发明中，所述的离子液体采用如下方法制备：

将提供阴离子和阳离子的化合物按一定摩尔比例混合，搅拌过夜；随后除去该复分解反应的副产物，即得。

所述药物与药物溶剂的质量比范围在0.001～0.1。

优选地，所述药物为难溶性药物。

进一步优选地，所述难溶性药物选自延胡索乙素、卡马西平、布洛芬、阿立哌唑、阿奇霉素、塞来昔布、尼卡地平、非诺贝特、吲哚美辛、酮康唑、槲皮素、美洛昔康、白藜芦醇、紫杉醇、水飞蓟宾、西罗莫司、辛伐他汀、熊去氧胆酸、桦木酸、桂利嗪、灰黄霉素、萘普生、姜黄素、纳比隆、阿瑞匹坦、盐酸右哌甲酯、帕潘立酮、醋酸甲地孕酮、茶碱中的一种。

进一步优选地，所述难溶性药物为槲皮素、美洛昔康、白藜芦醇、紫杉醇、水飞蓟宾、西罗莫司、辛伐他汀、熊去氧胆酸、桦木酸、姜黄素、尼卡地平。进一步优选地，所述难溶性药物为紫杉醇。

本发明中，所述的用于制备药物纳米颗粒的方法，所述非溶剂为能与离子液体混溶、并使药物溶解度降低析出沉淀的液体。

本发明中，所述的用于制备药物纳米颗粒的方法，所述非溶剂中可含有稳定剂，所述稳定剂包括但不限于泊洛沙姆、羟丙基甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇、吐温、十二烷基硫酸钠中的一种或多种。

优选地，所述的用于制备药物纳米颗粒的方法，所述非溶剂为水。

本发明中，所述的用于制备药物纳米颗粒的方法，所述药物溶剂还可以包含常规有机溶剂，以离子液体和常规有机溶剂的混合体系作为药物溶剂，所述有机溶剂为乙醇、二甲亚砜、丙酮、甲醇、乙腈中的一种或多种。

所述的用于制备药物纳米颗粒的方法，所述药物纳米颗粒粒径小于1000nm。本发明中，所制备的药物纳米颗粒，如附图1-附图3所示，颗粒粒径为50-1000nm，优选50-700nm，最优选50-500nm。

本发明中，所制备的药物纳米颗粒，药物为结晶或无定形，如附图4-附图6所示，优选结晶。

本发明的进一步目的是提供一种离子液体的新用途。

本发明进一步提供了所述的离子液体在制备药物纳米颗粒中的用途，所述离子液体可用于制备药物纳米颗粒。

本发明与现有技术相比，具有以下优点：

本发明以生物相容离子液体为药物溶剂，提出了一种绿色环保、粒径可控的纳米结晶制备技术。

本发明所涉及的离子液体新用途及使用方法适合于制备紫杉醇、辛伐他汀、槲皮素、熊去氧胆酸、水飞蓟宾、西罗莫司、桦木酸等难溶性药物的纳米颗粒，其粒径均小于1000nm，PDI均小于0.4。其中，以离子液体为溶剂时，紫杉醇浓度从3mg/mL增加至18mg/mL，所得纳米颗粒的粒径均在300nm以内，PDI均在0.2以内；比较现有技术采用乙醇为溶剂通过相同的方法制备时，所得纳米颗粒粒径和PDI均随紫杉醇的浓度增加而显著增加，当紫杉醇浓度提升到10mg/mL时，已无法制备得到纳米颗粒；以商业化离子液体溴化1-己基-3-甲基咪唑为溶剂时，紫杉醇浓度为3mg/mL时，无法制备得到纳米颗粒，所得颗粒粒径为微米级。

附图说明

图1为制备的药物纳米颗粒的粒径图。

图2为以胆碱类离子液体为溶剂制得的紫杉醇纳米颗粒粒径图。

图3为以胆碱乳酸为溶剂在各药物浓度条件下制得的紫杉醇纳米颗粒粒径图。

图4为制备的药物纳米颗粒的SEM图。

图5为制备的药物纳米颗粒的DSC图。

图6为制备的药物纳米颗粒的PXRD图。

具体实施方式

下面通过实施例进一步说明本发明。应该理解的是：本发明的实施例仅仅是用于说明本发明而给出，而不是对本发明的限制，所以，在本发明的前提下对本发明的简单改进均属于本发明要求保护的范围。

实施例1-6

按一定摩尔比例将胆碱碳酸氢盐水溶液分别缓慢滴入乳酸、醋酸、丁酸、丙二酸、苹果酸、琥珀酸溶液中，搅拌过夜；随后，反应液置于-80℃的冰箱中预冻12h，接着冷冻干燥48h，最终获得低含水量的离子液体。冻干过程中，系统压力为0.050mbar，冷凝器温度-89℃。

表1胆碱有机酸离子液体结构和性质

实施例7-16

按一定摩尔比例将乳酸分别缓慢滴入磷酸二氢胆碱、磷脂酰胆碱、鞘磷脂、甜菜碱、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、脯氨酸、烟酰胺、葡甲胺水溶液中，分别作为实施例7-16，若体系未形成澄清溶液，则加入适量乙醇，搅拌过夜；随后，反应液在60℃，90rpm条件下减压蒸发，除去体系中的水和有机溶剂，随后置于60℃的真空干燥箱中过夜干燥，即得。

表2其它生物相容离子液体结构

实施例17-18将等摩尔量的氨基酸加入氢氧化胆碱水溶液中，在室温条件下搅拌48h；随后，反应液在60℃，90rpm条件下减压蒸发，除去体系中的水。然后向体系中加入等体积的乙腈/甲醇(9:1，v/v)混合溶剂以沉淀未反应的氨基酸，磁力搅拌混合10min后，过滤。通过50℃，90rpm减压蒸发除去滤液中的有机溶剂，得到胆碱天冬氨酸(实施例17)和胆碱谷氨酸(实施例18)。

实施例19-24

称取一定量的紫杉醇溶解于胆碱乳酸(实施例1)，配制成紫杉醇的浓度为3、5、8、9.7、13和18mg/g的药物溶液，分别作为实施例19-24。以20mL水为非溶剂，水浴超声和1,200rpm机械搅拌条件下，将药物溶液快速注入水中，继续搅拌超声10min。反应结束后，用孔径为50nm的聚碳酸酯膜过滤，并用30mL去离子水洗涤滤饼，将收集到的结晶重新分散于3mL去离子水中，超声使分散均匀，即得。

实施例25-39

称取紫杉醇分别溶解于实施例2-18中的离子液体中，分别作为实施例25-39，配制成3mg/g的药物溶液，以20mL水为非溶剂，水浴超声和1,200rpm机械搅拌条件下，将药物溶液快速注入非溶剂中，继续搅拌超声10min；反应结束后，用孔径为50nm的聚碳酸酯膜过滤，并用30mL去离子水洗涤滤饼；将收集到的结晶重新分散于3mL去离子水中，超声使分散均匀，即得。

实施例40-57

其中，实施例40-41

称取100mg的药物溶解于1g胆碱醋酸中，作为药物溶液。称取20mg的泊洛沙姆188溶解于10mL水中，作为非溶剂。在冰水浴，400W探头超声条件下，将药物溶液快速注入非溶剂中，每5s超声工作时间均间隔5s，共运行10min；用0.22μm的纤维素膜过滤，超声将滤饼分散于非溶剂中，即得辛伐他汀纳米悬液(实施例40)和延胡索乙素纳米悬液(实施例41)

实施例42称取50mg的槲皮素溶解于3g胆碱醋酸中，作为药物溶液。称取19.2mg的泊洛沙姆188溶解于120mL水中，作为非溶剂，放入4℃冰箱预冷。在4℃水浴超声，高剪切速度20,000rpm条件下，将药物溶液快速倒入50mL非溶剂中，反应5min后撤去高剪切装置，继续水浴超声10min，用孔径0.22μm的纤维素膜过滤以除去溶剂，超声将滤饼重分散于非溶剂中，即得。

实施例43称取0.1g的熊去氧胆酸溶于2g胆碱醋酸作为药物溶液。称取0.14g的HPMC E50溶于20mL水中，作为非溶剂。在室温、磁力搅拌速度700rpm、高剪切速度8,000rpm条件下，将药物溶液快速倾倒于非溶剂中，反应2min后，悬液用孔径0.22μm的纤维素膜过滤，超声将滤饼重悬于非溶剂中，即得。

实施例44称取4mg水飞蓟宾溶解于1g胆碱醋酸作为药物溶液，以0.8mg/mL的泊洛沙姆188水溶液为非溶剂。将药物溶液快速注入4mL非溶剂中，搅拌1min；随后4℃水浴超声15min，悬液用孔径0.22μm的纤维素膜过滤，超声将滤饼重悬于适量非溶剂中，即得。

实施例45配制10mg/mL的西罗莫司胆碱醋酸溶液，0.5mg/mL的PVP K-17和0.025mg/mL的SDS作为非溶剂。在16℃水浴和600rpm磁力搅拌条件下，将药物溶液快速注入20mL的非溶剂中，搅拌40min，悬液用孔径0.22μm的纤维素膜过滤，超声将滤饼重悬于适量非溶剂中，即得。

实施例46称取0.012g的姜黄素于0.4mL胆碱醋酸中，超声使其溶解，得到溶剂相；在磁力搅拌下，将溶液加入至4.6mL的0.1％HPMC E5溶液中，即得。

实施例47-48称取20mg的药物于2mL胆碱醋酸中，超声使其溶解，得到10mg/mL的溶剂相。在冰水浴、270rpm磁力搅拌条件下，将1mL药物溶液加入至40mL的0.3mg/mL HPMC E5水溶液中，搅拌5min，即得白藜芦醇纳米悬液(实施例47)和茶碱纳米悬液(实施例48)。

实施例49-51称取药物配制成3mg/g的药物胆碱醋酸溶液，以20mL水为非溶剂，水浴超声和1,200rpm机械搅拌条件下，将药物溶液快速注入非溶剂中，继续搅拌超声10min；反应结束后，用孔径为50nm的聚碳酸酯膜过滤，并用30mL去离子水洗涤滤饼；将收集到的结晶重新分散于3mL去离子水中，超声使分散均匀，即得桦木酸纳米结晶(实施例49)、萘普生纳米悬液(实施例50)和尼卡地平纳米结晶(实施例51)。

实施例52-53称取200mg的药物溶解于5g胆碱醋酸中，配制成4％(w/w)的药物溶液。在冰水浴，400W探头超声条件下，将2mL药物溶液快速注入8mL的0.5％(w/w)泊洛沙姆188水溶液中，每5s超声工作时间均间隔5s，共运行10min；用孔径0.22μm的纤维素膜过滤，超声将滤饼分散于非溶剂中，即得美洛昔康纳米悬液(实施例52)和布洛芬纳米悬液(实施例53)。

实施例54以10mg/mL的非诺贝特胆碱醋酸溶液为溶剂相；将10mg泊洛沙姆188和3.5mg的卵磷脂(PC-98T)溶解在10mL去离子水中，超声溶解作为非溶剂相。在冰水浴、600rpm磁力搅拌条件下，将1mL药物溶液快速注入10mL非溶剂相中，搅拌10min，即得。

实施例55将50mg桂利嗪溶于2mL胆碱醋酸中，配制成25mg/mL的溶液相；以0.2％(w/w)PVA水溶液为非溶剂相。在3℃水浴超声条件下将1mL药物溶液注入40mL非溶剂中，反应15min，即得。

实施例56在900rpm磁力搅拌条件下，将阿立哌唑的胆碱醋酸溶液以0.5mL/min的速率注入到羟丙基纤维素水溶液中，反应时间15min；溶剂相/非溶剂为1/10(v/v)，稳定剂/药物为1/5(w/w)。

对比实施例1-5

称取一定量的紫杉醇溶解于乙醇，配制成紫杉醇的浓度为3、5、8、10和13mg/mL的药物溶液。以20mL水为非溶剂，水浴超声和1,200rpm机械搅拌条件下，将药物溶液快速注入非溶剂中，继续搅拌超声10min；反应结束后，用孔径为50nm的聚碳酸酯膜过滤，并用30mL去离子水洗涤滤饼，将收集到的结晶重新分散于3mL去离子水中，超声使分散均匀，即得。

对比实施例6

称取一定量的紫杉醇溶解于溴化1-己基-3-甲基咪唑，配制成紫杉醇的浓度为3mg/mL的药物溶液。以20mL水为非溶剂，水浴超声和1,200rpm机械搅拌条件下，将药物溶液快速注入非溶剂中，继续搅拌超声10min；反应结束后，用孔径为50nm的聚碳酸酯膜过滤，并用30mL去离子水洗涤滤饼，将收集到的结晶重新分散于3mL去离子水中，超声使分散均匀，即得。

测试实施例1粒径及其分布

将制得的纳米颗粒悬液稀释10倍后，取200μL加入测试皿中，采用MalvernZetasizer激光粒度仪测定颗粒粒径和PDI。设定测量温度为25℃，平衡时间为30s，每个样品均测定三次。测试结果的具体数据如表3-表5所示，分布图见图1-图3。

表3不同紫杉醇浓度制备的纳米颗粒粒径和PDI

表4以不同IL为溶剂制备的紫杉醇纳米颗粒粒径及其分布

表5不同难溶性药物纳米颗粒粒径和分布

测试实施例4 SEM

取新鲜制备的实施例19以及实施例40、42-45样品40μL，滴至50nm的聚碳酸酯膜上，抽干分散剂。水洗三次以除去样品中的稳定剂。样品于室温风干后用导电胶粘在样品台上，喷金60s，发射电压均为5.0kV，用SEM观察到的产物形态如图4所示。

测试实施例5 DSC

取新鲜制备的实施例19以及实施例40、42-45样品，经15,000rpm离心10min，收集沉淀，干燥后，取5-10mg样品于坩埚，以原料药、稳定剂及其物理混合物作为对照，进行DSC分析。所有测试中吹扫气流速20mL/min，升温速率均为10K/min，空白对照为Al

1)紫杉醇：45-320℃

2)辛伐他汀：50-200℃

3)槲皮素：40-350℃

4)熊去氧胆酸：50-300℃

5)水飞蓟宾：40-250℃

6)西罗莫司：30-220℃

测试结果如图5所示。

测试实施例6 XRD

取新鲜制备的实施例19以及实施例40、42-45样品，经15,000rpm离心10min，收集沉淀，室温干燥后进行XRD分析，并以原料药、稳定剂及其物理混合物作对照。所有样品测试过程均采用Cu-Kα射线，检测电压和电流分别为40kV、60mA，固定扫描步长0.02°。各药物的测试2θ范围和扫描速率如下：

1)紫杉醇：3-60°，5°/min

2)辛伐他汀：5-40°，5°/min

3)槲皮素：3-60°，2°/min

4)熊去氧胆酸：8-50°，5°/min

5)水飞蓟宾：5-60°，1°/min

6)西罗莫司：3-60°，5°/min

测试结果如图6所示。