一种迷迭香酸的新用途及其含迷迭香酸的凝胶剂与制备方法

技术领域

本发明属于医药技术领域，具体涉及一种迷迭香酸的新用途及其含迷迭香酸的凝胶剂与制备方法。

背景技术

皮肤癣菌，主要包括毛癣菌属、小孢子菌属和表皮癣菌属，侵犯人和动物的皮肤、毛发、甲板，引起的感染统称为皮肤癣菌病，简称癣。皮肤癣菌病仍按发病部位命名如头癣、体癣、股癣、手癣、足癣等，夏季多发。近年来，越来越多关于皮肤癣的病例被报道，虽然现在已经有很多临床治疗效果极佳的药物，比如特比萘芬、伊曲康唑治疗顽固复发性皮肤癣病，但是随着这些药物大规模的使用，造成了耐药菌的产生，特比萘芬耐药的须癣毛癣菌感染的患者体癣难以根治，由于squaleneepoxidase(SQLE)基因突变导致了多种皮肤癣菌对特比萘芬耐药，且将近一半耐特比萘芬毛癣菌的SQLE基因中检测到Leu397Phe发生了改变，这些耐药菌的产生使得皮肤癣不能根治，屡次复发。现有临床药物虽然能治疗皮肤癣病，但有着不小的副作用，有证据表明，头癣患儿在服用抗真菌药物后出现肝功能障碍，此外，接受氟康唑治疗会导致4β-hydroxycholesterol的升高。随着我们对中药的进一步开发，一些天然化合物与经典抗真菌药物联合使用可以增加皮肤癣菌对抗菌药的敏感性，甚至能逆转耐药性，一些天然化合物能从不同与现有抗真菌药的机制抑制耐药皮肤癣菌。因此，需要发现更多的天然抑菌化合物，达到可以减缓耐药菌的进化，降低药物的使用剂量和提高治疗的效果。

发明内容

本发明旨在至少在一定程度上解决上述技术问题之一或至少提供一种有用的商业选择。为此，本发明的第一个方面在于提供一种迷迭香酸的新用途。本申请的发明人发现，迷迭香酸不仅抑制人体毛癣菌的生长，而且能够彻底杀灭毛癣菌，本发明所述的迷迭香酸可对人体皮肤癣菌的须癣毛癣菌和红色毛癣菌具有抑制和杀死作用。

根据本发明的实施例，一种迷迭香酸的新用途，其可用于制备成预防和/或治疗人体皮肤癣的药物，所述人体皮肤癣为毛癣菌，所述毛癣菌为须癣毛癣菌或红色毛癣菌。

迷迭香酸(rosmarinicacid,分子式C

本申请的发明人对迷迭香酸的体外抗真菌活性进行了研究和分析。使用体外抑菌实验对来源于人体的五种实验真菌皮肤癣菌(须癣毛癣菌或红色毛癣菌)1078、1079、130、1413、ATCC9533(均受赠于武汉市第一医院)检测后发现迷迭香酸表现出抗真菌能力。本申请的发明人意外的发现，迷迭香对实验真菌的抑制作用呈剂量依赖性，1078和1079的MIC值为1000μg/mL，130为125μg/mL，1413为250μg/mL。经平板培养后观察到迷迭香酸对1078和1079的MBC值为2000μg/mL，对130的MBC值为250μg/mL，对1413的MBC值为250μg/mL。迷迭香酸的斑点试验结果显示出其不仅以剂量依赖的方式抑制了毛癣菌的生长，而且在2MIC的浓度下能够彻底杀灭毛癣菌。在本实验中，MIC指的是药物处理后的生长速度低于空白组的20％的药物浓度。

本发明的第二个方面在于提供一种迷迭香酸凝胶剂，其包含：迷迭香酸、凝胶基质、pH调节剂、保湿剂、稳定剂、还原剂、防腐剂。本发明所述的该迷迭香酸凝胶剂的处方及配比科学合理，制备工艺简单、质量可控，且携带使用方便，稠度适宜，有利于药物释放，便于制剂与成型，保障了迷迭香酸凝胶剂临床应用的安全有效、质量可控性，提高了迷迭香酸作为局部外用制剂药物的疗效。

根据本发明的实施例，本发明所述的迷迭香酸凝胶剂的凝胶基质为选自：卡波姆940、卡波姆941、卡波姆934、羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙甲纤维素的至少一种。

根据本发明的实施例，本发明所述的迷迭香酸凝胶剂的凝胶基质优选为选自：卡波姆940、卡波姆941、卡波姆934的至少一种。

根据本发明的实施例，本发明所述的迷迭香酸凝胶剂的凝胶基质更优选为：卡波姆940。

根据本发明的实施例，在本发明的迷迭香酸凝胶剂中，pH调节剂可以选自为：三乙醇胺、氢氧化钠、氢氧化钾的至少一种，优选三乙醇胺。

根据本发明的一些具体示例，应用pH调节剂调节迷迭香酸凝胶pH值为5.0-6.9。

根据本发明的一些具体示例，优选本发明应用pH调节剂调节迷迭香酸凝胶pH值为5.5-6.5，此时得到的凝胶剂具有最优的粘度和稠度。

发明人惊奇地发现，采用卡波姆940作为本发明凝胶剂的凝胶基质，卡波姆浓度过低导致凝胶无法成型，浓度过高则涂展性较差。溶胀卡波姆的液体加入过少会使得卡波姆溶胀程度不够，有部分卡波姆未溶胀，导致凝胶分布不均匀，溶胀卡波姆的液体加入过多使凝胶流动性增高，且稳定性较差。本发明所述的pH调节剂三乙醇胺，其通过与卡波姆的羧基中和，形成稳定的高分子结构，达到增稠和保湿的应用效果，本发明的发明人通过响应面优化设计，优选本发明处方中所述的卡波姆浓度为1.359％、三乙醇胺浓度为2.0％、纯化水用量为86.451％。也即优选本发明处方中所述的卡波姆为1.359重量份、三乙醇胺为2.0重量份、纯化水用量为86.451重量份。

根据本发明的实施例，在本发明的迷迭香酸凝胶剂的保湿剂可以选自为：甘油、1,2-戊二醇、透明质酸的至少一种，优选保湿剂选自甘油。

根据本发明的实施例，在本发明的迷迭香酸凝胶剂的稳定剂选自依地酸二钠(EDTA)。

根据本发明的实施例，在本发明的迷迭香酸凝胶剂的还原剂选自亚硫酸钠。

根据本发明的实施例，在本发明的迷迭香酸凝胶剂的防腐剂选自为：尼泊金乙酯、或尼泊金丙酯的至少一种，优选防腐剂选自尼泊金乙酯、或尼泊金乙酯与尼泊金丙酯以重量比为1:1的组合。

根据本发明的实施例，按照重量份数，本发明的迷迭香酸凝胶剂包括：所述迷迭香酸0.025-0.1重量份、所述凝胶基质1.0-2.0重量份、所述pH调节剂1.0-2.5重量份、所述保湿剂5-15重量份、所述稳定剂0.01-0.1重量份、所述还原剂0.01-0.05重量份、所述防腐剂0.01-0.2重量份，纯化水81.491-92.92重量份，加至共100重量份。

根据本发明的具体实施例，按照重量份数，本发明所述的迷迭香酸凝胶剂包含：迷迭香酸0.025重量份、卡波姆9401.36重量份、三乙醇胺2.0重量份、甘油10重量份、依地酸二钠0.1重量份、亚硫酸钠0.025重量份、尼泊金乙酯0.01重量份，纯化水86.48重量份，加至共100重量份。

根据本发明的具体实施例，按照重量份数，本发明所述的迷迭香酸凝胶剂包含：迷迭香酸0.05重量份、卡波姆9401.0重量份、三乙醇胺1.0重量份、甘油5重量份、依地酸二钠0.01重量份、亚硫酸钠0.01重量份、尼泊金乙酯0.01重量份，纯化水92.92重量份，加至共100重量份。

根据本发明的具体实施例，按照重量份数，本发明所述的迷迭香酸凝胶剂包含：迷迭香酸0.05重量份、卡波姆9401.5重量份、三乙醇胺1.5重量份、甘油5重量份、依地酸二钠0.01重量份、亚硫酸钠0.01重量份、尼泊金乙酯0.01重量份，纯化水91.92重量份，加至共100重量份。

根据本发明的具体实施例，按照重量份数，本发明所述的迷迭香酸凝胶剂包含：迷迭香酸0.05重量份、卡波姆9402.0重量份、三乙醇胺2.0重量份、甘油5重量份、依地酸二钠0.01重量份、亚硫酸钠0.01重量份、尼泊金乙酯0.01重量份，纯化水90.92重量份，加至共100重量份。

根据本发明的具体实施例，按照重量份数，本发明所述的迷迭香酸凝胶剂包含：迷迭香酸0.05重量份、卡波姆9401.5重量份、三乙醇胺1.5重量份、甘油5重量份、依地酸二钠0.01重量份、亚硫酸钠0.01重量份、尼泊金乙酯0.01重量份，纯化水91.92重量份，加至共100重量份。

根据本发明的具体实施例，按照重量份数，本发明所述的迷迭香酸凝胶剂包含：迷迭香酸0.05重量份、卡波姆9401.5重量份、三乙醇胺1.5重量份、甘油5重量份、依地酸二钠0.05重量份、亚硫酸钠0.01重量份、尼泊金乙酯0.01重量份，纯化水91.83重量份，加至共100重量份。

根据本发明的具体实施例，按照重量份数，本发明所述的迷迭香酸凝胶剂包含：迷迭香酸0.05重量份、卡波姆9401.5重量份、三乙醇胺1.5重量份、甘油5重量份、依地酸二钠0.1重量份、亚硫酸钠0.01重量份、尼泊金乙酯0.01重量份，纯化水91.83重量份

根据本发明的具体实施例，按照重量份数，本发明所述的迷迭香酸凝胶剂包含：迷迭香酸0.05重量份、卡波姆9401.5重量份、三乙醇胺1.5重量份、甘油5重量份、依地酸二钠0.1重量份、亚硫酸钠0.03重量份、尼泊金乙酯0.01重量份，纯化水91.81重量份，加至共100重量份。

根据本发明的具体实施例，按照重量份数，本发明所述的迷迭香酸凝胶剂包含：迷迭香酸0.05重量份、卡波姆9401.5重量份、三乙醇胺1.5重量份、甘油5重量份、依地酸二钠0.1重量份、亚硫酸钠0.05重量份、尼泊金乙酯0.01重量份，纯化水91.79重量份，加至共100重量份。

根据本发明的具体实施例，按照重量份数，本发明所述的迷迭香酸凝胶剂包含：迷迭香酸0.05重量份、卡波姆9401.5重量份、三乙醇胺1.5重量份、甘油5重量份、依地酸二钠0.1重量份、亚硫酸钠0.03重量份、尼泊金乙酯0.1重量份，纯化水91.72重量份，加至共100重量份。

根据本发明的具体实施例，按照重量份数，本发明所述的迷迭香酸凝胶剂包含：迷迭香酸0.05重量份、卡波姆9401.5重量份、三乙醇胺1.5重量份、甘油5重量份、依地酸二钠0.1重量份、亚硫酸钠0.03重量份、尼泊金乙酯0.2重量份，纯化水91.62重量份，加至共100重量份。

根据本发明的具体实施例，按照重量份数，本发明所述的迷迭香酸凝胶剂包含：迷迭香酸0.05重量份、卡波姆9401.5重量份、三乙醇胺1.5重量份、甘油5重量份、依地酸二钠0.1重量份、亚硫酸钠0.03重量份、尼泊金乙酯0.01重量份，纯化水91.81重量份，加至共100重量份。

根据本发明的具体实施例，按照重量份数，本发明所述的迷迭香酸凝胶剂包含：迷迭香酸0.05重量份、卡波姆9401.5重量份、三乙醇胺1.5重量份、甘油10重量份、依地酸二钠0.1重量份、亚硫酸钠0.03重量份、尼泊金乙酯0.01重量份，纯化水86.81重量份，加至共100重量份。

根据本发明的具体实施例，按照重量份数，本发明所述的迷迭香酸凝胶剂包含：迷迭香酸0.05重量份、卡波姆9401.5重量份、三乙醇胺1.5重量份、甘油15重量份、依地酸二钠0.1重量份、亚硫酸钠0.03重量份、尼泊金乙酯0.01重量份，纯化水81.81重量份，加至共100重量份。

根据本发明的具体实施例，按照重量份数，本发明所述的迷迭香酸凝胶剂包含：迷迭香酸0.05重量份、卡波姆9402.0重量份、三乙醇胺2.0重量份、甘油10重量份、依地酸二钠0.1重量份、亚硫酸钠0.03重量份、尼泊金乙酯0.01重量份，纯化水85.81重量份，加至共100重量份。

根据本发明的具体实施例，按照重量份数，本发明所述的迷迭香酸凝胶剂包含：迷迭香酸0.05重量份、卡波姆9401.5重量份、三乙醇胺2.5重量份、甘油10重量份、依地酸二钠0.1重量份、亚硫酸钠0.03重量份、尼泊金乙酯0.01重量份，纯化水85.81重量份，加至共100重量份。

根据本发明的具体实施例，按照重量份数，本发明所述的迷迭香酸凝胶剂包含：迷迭香酸0.05重量份、卡波姆9401.5重量份、三乙醇胺2.0重量份、甘油10重量份、依地酸二钠0.1重量份、亚硫酸钠0.03重量份、尼泊金乙酯0.01重量份，纯化水86.31重量份，加至共100重量份。

根据本发明的具体实施例，按照重量份数，本发明所述的迷迭香酸凝胶剂包含：迷迭香酸0.05重量份、卡波姆9402.0重量份、三乙醇胺1.5重量份、甘油10重量份、依地酸二钠0.1重量份、亚硫酸钠0.03重量份、尼泊金乙酯0.01重量份，纯化水86.31重量份，加至共100重量份。

根据本发明的具体实施例，按照重量份数，本发明所述的迷迭香酸凝胶剂包含：迷迭香酸0.05重量份、卡波姆9401.0重量份、三乙醇胺2.0重量份、甘油10重量份、依地酸二钠0.1重量份、亚硫酸钠0.03重量份、尼泊金乙酯0.01重量份，纯化水86.81重量份，加至共100重量份。

根据本发明的具体实施例，按照重量份数，本发明所述的迷迭香酸凝胶剂包含：迷迭香酸0.05重量份、卡波姆9402.0重量份、三乙醇胺2.5重量份、甘油10重量份、依地酸二钠0.1重量份、亚硫酸钠0.03重量份、尼泊金乙酯0.01重量份，纯化水85.31重量份，加至共100重量份。

根据本发明的具体实施例，按照重量份数，本发明所述的迷迭香酸凝胶剂包含：迷迭香酸0.05重量份、卡波姆9402.0重量份、三乙醇胺2.0重量份、甘油10重量份、依地酸二钠0.1重量份、亚硫酸钠0.03重量份、尼泊金乙酯0.01重量份，纯化水85.81重量份，加至共100重量份。

根据本发明的具体实施例，按照重量份数，本发明所述的迷迭香酸凝胶剂包含：迷迭香酸0.05重量份、卡波姆9401.0重量份、三乙醇胺2.5重量份、甘油10重量份、依地酸二钠0.1重量份、亚硫酸钠0.03重量份、尼泊金乙酯0.01重量份，纯化水86.31重量份，加至共100重量份。

根据本发明的具体实施例，按照重量份数，本发明所述的迷迭香酸凝胶剂包含：迷迭香酸0.05重量份、卡波姆9401.5重量份、三乙醇胺2.5重量份、甘油10重量份、依地酸二钠0.1重量份、亚硫酸钠0.03重量份、尼泊金乙酯0.01重量份，纯化水85.81重量份，加至共100重量份。

根据本发明的具体实施例，按照重量份数，本发明所述的迷迭香酸凝胶剂包含：迷迭香酸0.05重量份、卡波姆9401.5重量份、三乙醇胺2.0重量份、甘油10重量份、依地酸二钠0.1重量份、亚硫酸钠0.03重量份、尼泊金乙酯0.01重量份，纯化水86.31重量份，加至共100重量份。

根据本发明的具体实施例，按照重量份数，本发明所述的迷迭香酸凝胶剂包含：迷迭香酸0.05重量份、卡波姆9401.0重量份、三乙醇胺1.5重量份、甘油10重量份、依地酸二钠0.1重量份、亚硫酸钠0.03重量份、尼泊金乙酯0.01重量份，纯化水87.31重量份，加至共100重量份。

根据本发明的具体实施例，按照重量份数，本发明所述的迷迭香酸凝胶剂包含：迷迭香酸0.05重量份、卡波姆9401.0重量份、三乙醇胺2.0重量份、甘油10重量份、依地酸二钠0.1重量份、亚硫酸钠0.03重量份、尼泊金乙酯0.01重量份，纯化水86.81重量份，加至共100重量份。

根据本发明的具体实施例，按照重量份数，本发明所述的迷迭香酸凝胶剂包含：迷迭香酸0.05重量份、卡波姆9401.359重量份、三乙醇胺2.0重量份、甘油10重量份、依地酸二钠0.1重量份、亚硫酸钠0.03重量份、尼泊金乙酯0.01重量份，纯化水86.451重量份，加至共100重量份。

根据本发明的具体实施例，按照重量份数，本发明所述的迷迭香酸凝胶剂包含：迷迭香酸0.05重量份、卡波姆9401.359重量份、三乙醇胺2.0重量份、甘油15重量份、依地酸二钠0.05重量份、亚硫酸钠0.03重量份、尼泊金乙酯0.02重量份，纯化水81.491重量份，加至共100重量份。

根据本发明的具体实施例，按照重量份数，本发明所述的迷迭香酸凝胶剂包含：迷迭香酸0.05重量份、卡波姆9401.359重量份、三乙醇胺2.0重量份、甘油5重量份、依地酸二钠0.1重量份、亚硫酸钠0.03重量份、尼泊金乙酯0.01重量份，纯化水91.451重量份，加至共100重量份。

根据本发明的具体实施例，按照重量份数，本发明所述的迷迭香酸凝胶剂包含：迷迭香酸0.1重量份、卡波姆9401.5重量份、三乙醇胺2.5重量份、甘油10重量份、依地酸二钠0.05重量份、亚硫酸钠0.03重量份、尼泊金乙酯0.01重量份，纯化水85.81重量份，加至共100重量份。

根据本发明的具体实施例，应用pH调节剂调节迷迭香酸凝胶pH值为5.5-6.5。

在本发明的第三个方面，本发明提供了一种迷迭香酸凝胶剂的制备方法。

根据本发明的实施例，本发明所述迷迭香酸凝胶剂的制备方法包含如下步骤：

步骤(1)：取纯化水处方量75.173％的纯化水置烧杯A中，加入处方量卡波姆940，溶胀10-12h；

步骤(2)：另取处方量尼泊金酯、EDTA和亚硫酸钠置烧杯B中，加入处方量甘油与纯化水处方量24.827％的纯化水，搅拌使其溶解，将烧杯B中液体加入烧杯A中，边加边搅拌，加入完毕后停止搅拌，加入处方量三乙醇胺，搅拌10-15min使成透明凝胶；

步骤(3)：加入处方量的迷迭香酸，搅拌均匀，即得迷迭香酸凝胶剂。

在符合本领域常识的基础上，上述各优选条件，可任意组合，即得本发明各较佳实例。本发明所用试剂和原料均市售可得。

根据本发明的具体实施例，本发明所述的重量份，其重量单位可为吨、可为千克、可为克、可为毫克、可为微克等。

根据本发明的第四个方面，本发明提供了一种测定迷迭香酸凝胶剂中迷迭香酸的有关物质及其含量的方法。

根据本发明的实施例，本发明采用等度洗脱法测定迷迭香酸凝胶剂中迷迭香酸的有关物质及其含量。

检测波长的选择：取迷迭香酸原料药适量，用乙腈稀释成浓度约为10μg/mL的溶液，在200-400nm的范围内扫描最大吸收波长，结果显示在329nm处有最大吸收峰，将329nm作为迷迭香酸的检测波长。

色谱条件：色谱柱为FortisXIC

在本发明的第五个方面，本发明提供了一种迷迭香酸凝胶剂的用途，该迷迭香酸凝胶剂不仅抑制人体毛癣菌的生长，而且能够彻底杀灭毛癣菌，可用于制备成预防和/或治疗人体皮肤癣的药物，所述人体皮肤癣为毛癣菌。任选地，其可用于制备成抑制毛癣菌生长的药物，或用于制备成杀灭毛癣菌的药物。所述毛癣菌为须癣毛癣菌或红色毛癣菌。

根据本发明的实施例，所述迷迭香酸凝胶剂用于制备成抑制须癣毛癣菌或红色毛癣菌生长的药物。

根据本发明的实施例，所述迷迭香酸凝胶剂用于制备成杀灭须癣毛癣菌或红色毛癣菌的药物。

根据本发明的实施例制备得到的迷迭香酸凝胶剂，其对皮肤无刺激性作用。

本发明的积极进步效果在于：

(1)本发明的发明人首次提出了RosA对于来源于人皮肤癣菌(特别是针对须癣毛癣菌和红色毛癣菌)具有抑制和杀死作用。本发明用实验证明了迷迭香酸对毛癣菌皮肤真菌的抑制效果，并对其进行了最小抑菌浓度与最小杀菌浓度的测定，此为全新的抑菌机制，获得了宝贵的实验数据，为后续研究皮肤癣的研究人员提供了新的思路，首次将迷迭香酸作为局部外用的药物制剂，用于预防和/或治疗人体皮肤癣，药物的疗效显著，为抗真菌药物的研发奠定了基础，为相关耐药菌的治疗增加了新的途径。

(2)本发明的发明人，首次制备得到了迷迭香酸凝胶剂，该凝胶剂可用于预防和/或治疗人体皮肤癣，尤其用于预防和/或治疗须癣毛癣菌和红色毛癣菌。具体为通过对迷迭香酸凝胶剂的外观、均匀程度、分层现象等参数进行评价，得到较为适宜的迷迭香酸凝胶处方，并制备得到了迷迭香酸凝胶剂，建立了迷迭香酸等度洗脱的HPLC条件，并首次建立了迷迭香酸凝胶剂的含量测定方法，以检测迷迭香酸凝胶剂中的有关物质含量，该方法操作简便，可准确测定迷迭香酸凝胶中主药的含量。本发明提供了一种全新的制备迷迭香酸凝胶剂与其含量测定的方案。

附图说明

图1为本发明实施例1所述迷迭香对皮肤癣菌的抑制作用；其中图1-A为生长曲线，随着迷迭香酸浓度的增加，真菌的生长逐渐被抑制；图1-B为抑制率，第六天各浓度的迷迭香酸处理组与对照组的比率；图1-C为在用各浓度药物处理的平板上生长六天后的真菌活性，随着迷迭香酸浓度的增加，其杀真菌活性逐渐增加；

图2为本发明实施例4的迷迭香酸标准曲线；

图3为本发明实施例8的迷迭香酸凝胶剂抑菌效果，(A)正常组；(B)迷迭香酸组。

具体实施方式

下面通过实施例的方式进一步说明本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规方法和条件，或按照商品说明书选择。

仪器：万分之一天平(FA3104，上海菁海仪器有限公司)、多功能酶标仪(xMark-1681150，BIO-RAD)、落地式洁净工作台(SW-CJ-1D，上海力辰邦西仪器)、电热恒温培养箱(HN-25，上海力辰邦西仪器)、冷冻气浴恒温振荡器(ZD-88，天竞实验仪器厂)、电热恒温鼓风干燥箱(DHG-9070A型，上海一恒科技有限公司)、实验室pH计(ST2100，奥豪斯仪器(常州)有限公司)、流变仪(Viscotester iQ AIR，Thermo Fisher)、紫外可见光检测器(SPD-20A，SHIMADZU)、溶液输送单元(LC-20AD，SHIMADZU)、Fortis XI C18(X18-050905，Fortis)。

药品与试剂：迷迭香酸(上海普誉科贸有限公司，批号：170405)、RPMI-1640medium(赛维尔,批号：GP21050131369)、胎牛血清(四季青,批号：21090706)、Penicillin-Streptomycin(HyClone,批号：J142070)、Tween-20(Aspen,批号：606662)、PDA(青岛海博,批号：HB0233)、三乙醇胺(天津风船，批号：20100308)、甘油(国药，批号：10010618)、卡波姆940(麦克林，批号：C12058025)、尼泊金乙酯(麦克林，批号：C10107393)、EDTA(BioFrox，批号：EZ7890A276)、亚硫酸钠(国药，批号：10020718)、甲醇(天津市富宇精细化工，批号：67-56-1)、乙腈(Xingmake Chemicals，批号：2022011001)、氢氧化钠(国药，批号：10019718)、盐酸(国药，批号：10011018)、双氧水(国药，批号：10011208)，甲醇、乙腈为色谱纯，其他试剂为分析纯。

实施例1、采用微量肉汤稀释法检测药物的抗真菌活性

1、实验方法

(1)药物工作液和孢子悬浮液的制备

称取适量的迷迭香酸，将其溶解在含有10％FBS的RPMI-1640中，使终浓度为8mg/mL，然后过滤消毒。皮肤癣菌(须癣毛癣菌或红色毛癣菌)编号分别为：1078、1079、130、1413、ATCC9533，均受赠于武汉市第一医院(其中1078、1079、130、1413、ATCC9533分别来源于武汉市第一医院皮肤科临床患者)，皮肤癣菌每60天使用马铃薯培养基(PDA)传代一次，加入适量蒸馏水吹打经8层无菌纱布过滤后使用血细胞计数板计数，加入RPMI-1640含10％FBS稀释孢子浓度至2×10

(2)最小抑制浓度和最小杀菌浓度的测定

根据临床和实验室标准协会(CLSI)M38-A2的规定，采用微量肉汤稀释法检测药物的抗真菌活性。取无菌96孔板，每行第1孔中加入100μL含10％FBS的RPMI-1640作为空白对照。第2孔中加入200μL含有孢子悬液的迷迭香酸工作液。在第3-11孔中分别加入100μL的孢子悬液倍比稀释。每行第12孔不含药物，作为生长对照。药敏板在28℃恒温避光培养6d。与生长对照组相比，将80％以上生长受抑的最低药物浓度确定为MIC。采用平板回收法测定MBC，将第6d测量得到的整数倍MIC孔吸取100μL液体涂布至PDA平板上，28℃恒温培养5d，以无菌落生长平板所对应的药物浓度为MBC，所有试验进行三次生物学重复。

2、检测结果

在本实验中，MIC指的是药物处理后的生长速度低于空白组的20％的药物浓度。使用体外抑菌实验对五种实验真菌皮肤癣菌(须癣毛癣菌或红色毛癣菌)1078、1079、130、1413、ATCC9533(均受赠于武汉市第一医院)检测后发现迷迭香酸表现出抗真菌能力。迷迭香对实验真菌的抑制作用见图1，迷迭香对实验真菌的抑制作用呈剂量依赖性，1078和1079的MIC值为1000μg/mL，130为125μg/mL，1413为250μg/mL(图1所示的图1-A和图1-B)。经平板培养后观察到迷迭香酸对1078和1079的MBC值为2000μg/mL，对130的MBC值为250μg/mL，对1413的MBC值为250μg/mL(图1的1-C)。迷迭香酸的斑点试验结果显示出其不仅以剂量依赖的方式抑制了毛癣菌的生长，而且在2MIC的浓度下能够彻底杀灭毛癣菌。

实施例2：迷迭香酸凝胶剂的制备

1、凝胶剂单因素考察制备方法

步骤(1)：取纯化水处方量70％的纯化水置烧杯A中，加入处方量卡波姆940，溶胀10-12h；

步骤(2)：另取处方量尼泊金酯、EDTA和亚硫酸钠置烧杯B中，加入处方量甘油与纯化水处方量30％的纯化水，搅拌使其溶解，将烧杯B中液体加入烧杯A中，边加边搅拌，加入完毕后停止搅拌，加入处方量三乙醇胺，搅拌10-15min使成透明凝胶；

步骤(3)：加入处方量的迷迭香酸，搅拌均匀，即得迷迭香酸凝胶剂。

应用三乙醇胺调节凝胶的pH值为5.5-6.5之间。

2、辅料初步用量范围

各辅料用量范围，详情见表1、表3～表7。

表1辅料用量范围

首先确定凝胶基质用量，然后通过单因素筛选各辅料用量最佳比例，打分标准见表2。

表2单因素实验评分标准

表3卡波姆940用量

表4EDTA用量

表5亚硫酸钠用量

表6尼泊金乙酯用量

表7甘油用量

通过失水率来判断。

3、纯化水量的筛选

迷迭香酸凝胶制备中溶胀卡波姆940所需纯化水的用量进行筛选，选用范围见表8。

表8纯化水的用量

4、Box-behnken设计筛选最优条件

以卡波姆940浓度、三乙醇胺浓度以及溶胀卡波姆的纯水用量为自变量，以综合评分(R)为因变量(响应值)，使用Design-Expert12进行Box-behnken设计实验，设计方案见表9、表10。

表9Box-behnken编码水平

表10Box-behnken实验方案

实施例3：迷迭香酸凝胶剂的制备

迷迭香酸凝胶剂(批次20220101)的处方：

制备方法包含的步骤如下：

步骤(1)：取纯化水处方量75.173％的纯化水(65.055g)置烧杯A中，加入处方量卡波姆940，溶胀11h；

步骤(2)：另取处方量尼泊金酯、EDTA和亚硫酸钠置烧杯B中，加入处方量甘油与纯化水处方量24.827％的纯化水(21.486g)，搅拌使其溶解，将烧杯B中液体加入烧杯A中，边加边搅拌，加入完毕后停止搅拌，加入处方量三乙醇胺，调节凝胶的pH值为6.0，搅拌12min使成透明凝胶；

步骤(3)：加入处方量的迷迭香酸，搅拌均匀，即得迷迭香酸凝胶剂。

迷迭香酸凝胶剂(批次20220101)的处方、以及迷迭香酸凝胶剂(批次20220101)的处方，其投料量及制备方法同批次20220101，共制备得到三批样品。

实施例4：对本发明所述迷迭香酸凝胶剂的质量研究

1、主药含量

因目前迷迭香酸凝胶剂尚未被NMPA批准上市，因此市面上仍无迷迭香酸凝胶剂销售，故迷迭香酸凝胶剂中的主药含量无法确定。本发明的发明人采用HPLC法检测迷迭香酸水中溶解度，根据其最大溶解度确定主药含量。

2、迷迭香酸凝胶剂初步质量研究

因目前没有关于对迷迭香酸凝胶剂的质量研究测定方法的报道，因此自制迷迭香酸凝胶剂需进一步探索其属性，以用于积累可靠参数。故初步考察自制迷迭香酸凝胶剂的部分属性，并根据所建立的方法学对自制三批次凝胶剂进行相应的项目检测。参考中国药典2020版第四部凝胶剂相关内容，建立迷迭香酸凝胶剂的初步质量标准。

2.1性状

取迷迭香酸自制凝胶剂三批次小样，置于日光灯下检视，应为淡黄色半透明凝胶。

2.2检查

2.3pH值

按照中国药典2020版第三部通则0631pH值测定法，分别取三批自制迷迭香酸凝胶进行检测，pH值应在5.5-6.5之间。

2.4装量

按照中国药典2020版第四部通则0942最低装量法进行检查，取三批自制样品各3瓶，除去盖子和外壁标签，称量软膏管重量，除去管内凝胶，清洗干燥后放入70℃烘箱干燥，称量软膏管重量，计算得到三批次自制凝胶装量，每个容器装量不得小于标示装量的95％。

2.5黏度

按照中国药典2020版第四部0633进行检查，取转子没入自制迷迭香酸凝胶剂中，以恒定速度转动，记录仪器显示数据，得到自制迷迭香酸凝胶剂黏度数据。

2.6均匀性

取三批自制迷迭香酸凝胶剂各0.1g，使用玻璃棒均匀从左至右涂布于载玻片上，于光照强度1000lx、黑色背景环境中查看，凝胶应细腻均匀，无结团现象。

2.7有关物质

迷迭香酸凝胶剂中活性成分仅迷迭香酸一种，故采用等度洗脱法测定迷迭香酸凝胶剂中迷迭香酸的有关物质及其含量。

2.7.1检测波长的选择

取迷迭香酸原料药适量，用乙腈稀释成浓度约为10μg/mL的溶液，在200-400nm的范围内扫描最大吸收波长，结果显示在329nm处有最大吸收峰，将329nm作为迷迭香酸的检测波长。

2.7.2色谱条件

色谱条件：色谱柱为FortisXIC

2.7.3破坏实验

(1)破坏样品的制备

储备液配置：使用乙腈-醋酸水稀释迷迭香酸原料药，配置成600μg/mL溶液。

氧化破坏样品：向10mL容量瓶中加入2mL迷迭香酸原料药储备液，并加入0.1％过氧化氢溶液3mL充分混匀，避光储存10min，水浴锅加热至99℃将容量瓶放入1.5min后取出，加入乙腈-醋酸水稀释至刻度，震荡混匀后备用。

碱破坏样品：将NaOH配置成1mmol/L溶液，取稀释后的NaOH溶液1mL至10mL容量瓶中，加入迷迭香酸原料药储备液2mL，充分混匀后，置于阴凉避光处10min，再加入1mmol/L盐酸溶液中和盐酸，加入乙腈-醋酸水稀释至刻度，震荡混匀后备用。

酸破坏样品：将浓盐酸稀释至1mol/L，取稀释后的盐酸溶液1mL至10mL容量瓶中，加入迷迭香酸原料药储备液2mL，充分混匀后，置于阴凉避光处12h，再加入1mol/LNaOH溶液中和盐酸，加入乙腈-醋酸水稀释至刻度，震荡混匀后备用。

热破坏样品：将水浴锅加入适量水并加热至99℃，取迷迭香酸储备液2mL加入10mL容量瓶中，加入3mL乙腈-醋酸水混匀后水浴加热2h，冷却后加入乙腈-醋酸水稀释至刻度，混匀后备用。

氧化破坏样品：向10mL容量瓶中加入2mL迷迭香酸原料药储备液，并加入30％过氧化氢溶液3mL充分混匀，避光储存1h，水浴锅加热至99℃将容量瓶放入1.5min后取出，加入乙腈-醋酸水稀释至刻度，震荡混匀后备用。

光破坏样品：取迷迭香酸原料药储备液2mL，加入10mL容量瓶中，加入3mL乙腈-醋酸水混匀后放入培养箱中，调节温度至室温25℃±5℃避免其余因素干扰，调节培养箱光照强度于4000～5000lx，照射24h后，加入乙腈-醋酸水稀释至刻度，混匀后备用。

根据已建立的迷迭香酸色谱条件，分别精密量取1mL上述氧化、碱、酸、热和光破坏样品各20μL，根据6.7.2中迷迭香酸有关物质色谱条件，分别进样后记录色谱呈现情况。

(2)自制凝胶剂破坏

酸破坏样品：将浓盐酸稀释至1mol/L，取稀释后的盐酸溶液1mL至50mL容量瓶中，加入迷迭香酸凝胶1mL，加入25mL乙腈-醋酸水充分混匀后，置于阴凉避光处12h，再加入1mol/LNaOH溶液中和盐酸，加入乙腈-醋酸水稀释至刻度，震荡混匀后备用。

碱破坏样品：将NaOH配置成1mmol/L溶液，取稀释后的NaOH溶液1mL至50mL容量瓶中，加入迷迭香酸凝胶1mL，加入25mL乙腈-醋酸水充分混匀后，置于阴凉避光处10min，再加入1mmol/L盐酸溶液中和盐酸，加入乙腈-醋酸水稀释至刻度，震荡混匀后备用。

光破坏样品：取迷迭香酸凝胶1mL，加入50mL容量瓶中，加入25mL乙腈-醋酸水溶解，放入培养箱中，调节温度至室温25℃±5℃避免其余因素干扰，调节培养箱光照强度于4000～5000lx，照射24h后，加入乙腈-醋酸水稀释至刻度，混匀后备用。

热破坏样品：将水浴锅加入适量水并加热至99℃，取迷迭香酸凝胶1mL加入50mL容量瓶中加入25mL乙腈-醋酸水溶解，水浴加热2h，冷却后加入乙腈-醋酸水稀释至刻度，混匀后备用。

氧化破坏样品：向50mL容量瓶中加入1mL迷迭香酸凝胶，并加入30％过氧化氢溶液3mL，加入25mL乙腈-醋酸水充分混匀，避光储存1h，水浴锅加热至99℃将容量瓶放入1.5min后取出，加入乙腈-醋酸水稀释至刻度，震荡混匀后备用。

根据已建立的迷迭香酸色谱条件，分别精密量取1mL上述氧化、碱、酸、热和光破坏样品各20μL，根据6.7.2中迷迭香酸有关物质色谱条件，分别进样后记录色谱呈现情况。

2.8含量测定

2.8.1检测波长的选择

取迷迭香酸原料药适量，用乙腈稀释成浓度约为10μg/mL的溶液，在200-400nm的范围内扫描最大吸收波长，结果显示在329nm处有最大吸收峰，将329nm作为迷迭香酸的检测波长。

2.8.2色谱条件的选择

色谱条件：色谱柱为FortisXIC

2.8.3样品溶液的配置

空白溶液的配置：按照迷迭香酸凝胶的处方及制备工艺，准备不含迷迭香酸原料药的空白凝胶，取空白凝胶基质1g，溶解于烧杯中，转移至100mL容量瓶，加入乙腈-水稀释至刻度线，摇匀备用。

供试品溶液的配制：分别取三批次(20220101、20220102、20220103)自制凝胶各1g，分别溶解于编号1、2、3号烧杯中，转移至100mL容量瓶，加入乙腈-水稀释至刻度线，摇匀备用。

对照品工作液的配制：精密称取迷迭香酸对照品50mg，烧杯内溶解后转移至10mL容量瓶中，加入乙腈-水稀释至刻度线，振荡摇匀，即得迷迭香酸对照品储备液；吸取1mL迷迭香酸对照品储备液至10mL容量瓶中，加入乙腈-水稀释至刻度线，震荡摇匀，即得迷迭香酸对照品工作液。

2.8.4专属性实验

分别取空白凝胶基质溶液、迷迭香酸对照品溶液和迷迭香酸凝胶溶液各20μL，按照上述迷迭香酸色谱条件检测，记录图谱。

2.8.5精密度实验

取对照品溶液20μL，重复进样6次，分析色谱结果。

2.8.6标准曲线

配置浓度分别为2000、1000、500、250、125和62.5μg/mL的迷迭香酸标准溶液，各精确20μL高效液相色谱分析后以迷迭香酸峰面积(mAU·min)为纵坐标，迷迭香酸浓度(μg/mL)为横坐标，绘制标准曲线。

2.8.7迷迭香酸溶液稳定性

精密称取迷迭香酸对照品50mg，烧杯内溶解后转移至1mL容量瓶中，加入ddH

将工作液分为两组，一组置于4℃避光放置，另一组室温避光放置。分别于0、2、4、6、8、12h进样分析，记录结果。

2.8.8迷迭香酸回收率实验

精密称取迷迭香酸原料药适量，按照处方和制备工艺制成含有迷迭香酸处方量80％、100％、120％的凝胶，分别向其中加入0.2mg迷迭香酸对照品并混匀，每个浓度均制备三份重复。分别精密称取上述9个样品各1.0g置于10mL容量瓶中加适量乙腈-水缓冲液，超声稀释后定容。按照确定的液相条件测定含量。

2.8.9样品含量测定

精密称取迷迭香酸对照品50mg，烧杯内溶解后转移至1mL容量瓶中，加入ddH

迷迭香酸凝胶剂样品的制备：按照上述对照品制备方法，取三批迷迭香酸凝胶样品(20220101、20220102、20220103)配置成样品溶液，分别精密量取迷迭香酸对照品溶液与迷迭香酸自制凝胶样品溶液各20μL，按照上述色谱条件进行分析，计算迷迭香酸三批次凝胶中主药的含量。

2.9迷迭香酸凝胶的初步稳定性研究

2.9.1影响因素实验

参照2020年版中国药典四部通则9001和《化学药物制剂研究基本技术指导原则》中的药品稳定性考察指标，设计实验考察迷迭香酸凝胶的影响因素考察。将迷迭香酸凝胶各批次小试样品(20220101、20220102、20220103)置于适宜开口容器中，置于高温(50℃)、高湿(25℃，90％±5％RH)，光照(4500lx±500lx)的环境下，分别于第0天、第5天和第10天取样，并考察其外观、pH值、有关物质及主药含量。

2.9.2加速实验

取批号为20220101、20220102、20220103的三批凝胶除去外包装后，分别置于加速试验环境(40℃±2℃，75％±5％RH)中放置6个月。并于第0、1、2、3和6月定时取样，进行测定。

2.9.3长期实验

取批号为20220101、20220102、20220103的三批凝胶除去外包装后，分别置于长期试验环境(25℃±2℃，60％±5％RH)中放置9个月，并于第0、3、6和9月取样进行测定。

3实验结果

3.1迷迭香酸凝胶剂的制备结果

3.1.1辅料单因素考察结果，分别见表11～表15.

表11卡波姆940用量

表12EDTA用量

表13亚硫酸钠用量

表14尼泊金乙酯用量

表15甘油用量

其余条件不进行改变，当甘油的浓度分别为5.00％、10.00％和15.00％时，制备迷迭香酸凝胶，以综合评分和失水率为评价指标，来确定甘油的适宜浓度，失水率的测定方法为将适量凝胶放入干燥烧杯中，记录质量为M

S＝(M

其中，S：失水率；M

卡波姆浓度过低导致凝胶无法成型，浓度过高则涂展性较差，故初步选择卡波姆940浓度为1.50％，且卡波姆浓度对综合评分结果影响较大，后续应继续优化。

EDTA对于凝胶影响较小，且浓度为0.10％时综合评分较高，故将EDTA浓度确定为0.10％。

亚硫酸钠加入浓度过高会导致凝胶pH值过低，由综合评分可知亚硫酸钠浓度在0.03％时综合评分较高，故将亚硫酸钠浓度确定为0.03％。

尼泊金乙酯对凝胶pH有一定影响，由综合评分得知尼泊金乙酯浓度为0.01％时综合评分较高，故确定尼泊金乙酯浓度为0.01％。

甘油的浓度对综合评分影响较小，且甘油浓度越高失水率越低，考虑经济效益与保存后，将甘油浓度确定为10％。

3.2纯化水的考察结果，见表16.

表16烧杯A中纯化水用量

溶胀卡波姆的液体加入过少会使得卡波姆溶胀程度不够，有部分卡波姆未溶胀，导致凝胶分布不均匀，溶胀卡波姆的液体加入过多使凝胶流动性增高，且稳定性较差，故在单因素考察实验中采用70％的纯化水用量来溶胀卡波姆，具体更优处方后续进行BBD-响应面法优化。

3.3 Box-behnken设计筛选结果，见表17、表18.

表17响应面法结果评分

表18响应面法拟合结果

响应面法拟合方程为

Y＝88.40-9.62A+1.63B+7.50C+5.75AB+7.50AC-2.00BC-17.33A

3.4主药含量的确定

标准曲线R

3.5迷迭香酸凝胶质量研究结果

3.5.1性状结果

表19外观检查结果

三批次样品外观均为淡黄色半透明凝胶，符合标准。

3.5.2检查结果

3.5.3pH值结果

表20pH值测定结果

三批自制迷迭香酸凝胶pH值均符合标准。

3.5.3装量结果

表21装量值测定结果(n＝3)

三批自制迷迭香酸凝胶装量检查均符合标准。

3.5.4黏度结果

表22黏度测定结果

三批自制迷迭香酸凝胶黏度分别为41.0Pa·s、39.5Pa·s和39.7Pa·s。

3.5.5均匀性结果

三批自制迷迭香酸凝胶均符合标准。

3.5.6有关物质结果

3.5.6.1原料药破坏实验结果

原料药的酸、热、光破坏样品色谱进样后显示强制降解条件对迷迭香酸影响度在10％范围内，各降解产物和杂峰等对主峰干扰在可控范围内。预实验中碱与氧化破坏条件过于剧烈，故调整为较温和条件，以获得准确数据。

3.5.6.2自制迷迭香酸凝胶剂破坏实验结果

自制迷迭香酸凝胶剂破坏结果：强制降解对迷迭香酸自制凝胶影响度在10％范围内，各降解产物和杂峰等对主峰干扰在可控范围内。

3.5.7含量测定结果

3.5.7.1专属性实验结果

迷迭香酸在该色谱条件下专属性良好。

3.5.7.2精密度实验结果

表23迷迭香酸精密度结果

迷迭香酸在该色谱条件下精密度良好。

3.5.8迷迭香酸溶液稳定性结果

表24迷迭香酸溶液样品稳定性结果(4℃)

表25迷迭香酸溶液样品稳定性结果(25℃)

迷迭香酸溶液在4℃和25℃时稳定性良好。

3.5.9回收率实验结果

表26迷迭香酸回收率结果

迷迭香酸回收率在规定标准以内。

3.5.10含量测定结果

表27迷迭香酸凝胶含量测定结果

迷迭香酸凝胶剂含量测定在90.00％～110.00％范围内，符合标准。3.5.11迷迭香酸凝胶剂稳定性研究结果

3.5.11.1影响因素实验结果

表28影响因素第0天考察结果

表29影响因素第5天考察结果

表30影响因素第10天考察结果

由上述结果得知，迷迭香酸凝胶在强光、高温和高湿条件下，含量略有下降，总杂质略有增加，其中高温和强光的影响较大，故贮藏时应避光、密封，在阴凉处储存。

3.5.11.2加速实验结果

表31加速试验考察结果(批号：20220101)

表32加速试验考察结果(批号：20220102)

表33加速试验考察结果(批号：20220103)

加速试验考察结果表明，本发明所制备得到的迷迭香酸凝胶剂稳定性好、产品质量好。

3.5.11.3长期试验结果

表34长期试验考察结果(批号：20220101)

表35长期试验考察结果(批号：20220102)

表36长期试验考察结果(批号：20220103)

长期试验考察结果表明，本发明所制备得到的迷迭香酸凝胶剂稳定性好、产品质量好。因此，利用本发明实施例3的处方及制备方法得到的迷迭香酸凝胶剂，其处方及配比科学合理，制备工艺简单、质量可控，凝胶稠度适宜，质量可控，其产品质量好。

实施例5：迷迭香酸凝胶剂的制备

处方：

制备方法包含的步骤如下：

步骤(1)：取纯化水处方量70％的纯化水(57.044g)置烧杯A中，加入处方量卡波姆940，溶胀12h；

步骤(2)：另取处方量尼泊金酯、EDTA和亚硫酸钠置烧杯B中，加入处方量甘油与纯化水处方量30％的纯化水(24.447g)，搅拌使其溶解，将烧杯B中液体加入烧杯A中，边加边搅拌，加入完毕后停止搅拌，加入处方量三乙醇胺，调节凝胶的pH值为5.5，搅拌10min使成透明凝胶；

步骤(3)：加入处方量的迷迭香酸，搅拌均匀，即得迷迭香酸凝胶剂。

实施例6：迷迭香酸凝胶剂的制备

处方：

制备方法包含的步骤如下：

步骤(1)：取纯化水处方量78％的纯化水(71.332g)置烧杯A中，加入处方量卡波姆940，溶胀10h；

步骤(2)：另取处方量尼泊金酯、EDTA和亚硫酸钠置烧杯B中，加入处方量甘油与纯化水处方量22％的纯化水(20.119g)，搅拌使其溶解，将烧杯B中液体加入烧杯A中，边加边搅拌，加入完毕后停止搅拌，加入处方量三乙醇胺，调节凝胶的pH值为6.5，搅拌15min使成透明凝胶；

步骤(3)：加入处方量的迷迭香酸，搅拌均匀，即得迷迭香酸凝胶剂。

实施例7：迷迭香酸凝胶剂的制备

处方：

制备方法包含的步骤如下：

步骤(1)：取纯化水处方量75％的纯化水(64.733g)置烧杯A中，加入处方量卡波姆940，溶胀10h；

步骤(2)：另取处方量尼泊金酯、EDTA和亚硫酸钠置烧杯B中，加入处方量甘油与纯化水处方量25％的纯化水(21.578g)，搅拌使其溶解，将烧杯B中液体加入烧杯A中，边加边搅拌，加入完毕后停止搅拌，加入处方量三乙醇胺，调节凝胶的pH值为6.1，搅拌13min使成透明凝胶；

步骤(3)：加入处方量的迷迭香酸，搅拌均匀，即得迷迭香酸凝胶剂。

利用本发明实施例5、实施例6、实施例7的处方及制备方法得到的迷迭香酸凝胶剂，其处方及配比科学合理，制备工艺简单、质量可控，凝胶稠度适宜，质量可控，其产品质量好。

实施例8：本发明所述的迷迭香酸凝胶剂对毛癣菌的抑制效果评价

使用ddH

表37抑菌圈直径(单位：毫米)

在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不必须针对的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。此外，在不相互矛盾的情况下，本领域的技术人员可以将本说明书中描述的不同实施例或示例以及不同实施例或示例的特征进行结合和组合。

尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例，可以理解的是，上述实施例是示例性的，不能理解为对本发明的限制，本领域的普通技术人员在本发明的范围内可以对上述实施例进行变化、修改、替换和变型。