一种琥珀安神丸的质量控制方法

技术领域

本发明涉及一种中成药琥珀安神丸(水蜜丸)的质量控制方法，属于中药制剂分析与质量控制技术领域。

背景技术

琥珀安神丸(水蜜丸)具有育阴养血、补心安神。用于心血不足、怔仲健志，心悸失眠，虚烦不安的功效，主要成分和含量如下：

其制备方法为：以上十八味原料药粉碎成细粉，过筛，混匀。每100g粉末加炼蜜15～20g制成水蜜丸，干燥，即得，所得产品为棕色至棕褐色的水蜜丸，味甘、微酸、辛。

原琥珀安神丸为9克/丸的大蜜丸，原标准(WS

发明内容

本发明的目的在于提供一种琥珀安神丸(水蜜丸)的质量控制方法，该方法专属性强、稳定可靠、重现性好，能够较为全面、准确地分析药物活性组分，有利于对琥珀安神丸(水蜜丸)的生产过程和产品质量进行有效地质量控制，有利于稳定产品的质量，确保临床用药安全性和有效性，保证琥珀安神丸的临床疗效，更好地满足医疗和市场的需要。

在研究时，本发明参考《中国药典》2020年版一部及相关制剂项下的薄层鉴别方法，对处方中的当归、五味子、人参、远志、甘草(蜜炙)、地黄、酸枣仁(炒)、麦冬、茯苓、丹参、玄参、桔梗12味原料药进行了薄层鉴别研究，经研究最终建立了3味药材(五味子、甘草、酸枣仁)的显微鉴别和5味药材(当归、五味子、人参、远志、甘草)的薄层(TLC)鉴别方法，具有方法简单、专属性强等优点。

高效液相色谱(HPLC)具有快速、灵敏、分离效能高等优点，在中药定性和定量分析中，采用HPLC法分离特征成分后，用检测器进行检测分析，是全面评价中药组合物质量的有效方法。在上述显微鉴别和薄层鉴别的基础上，本发明同时采用HPLC法测定琥珀安神丸(水蜜丸)中的五味子醇甲的含量，引入五味子醇甲含量作为质量控制指标，更好的控制产品质量，该方法分离效能高、灵敏、准确、专属性好、耐用性强，稳定性好，重现性好，且阴性无干扰，能够有效保证产品质量的稳定性和可控性。

本发明详细技术方案如下：

一种琥珀安神丸的质量控制方法，所述琥珀安神丸为水蜜丸，该方法以显微鉴别法鉴别琥珀安神丸中的五味子、甘草、酸枣仁；以薄层色谱法鉴别琥珀安神丸中的当归、五味子、人参、远志和甘草；采用HPLC法测定琥珀安神丸中五味子醇甲的含量。通过这三个定性和定量指标的有机结合，能够更为全面、准确的反映琥珀安神丸的质量，便于对琥珀安神丸进行有效的质量控制。

进一步的，所述显微鉴别法的操作步骤为：将琥珀安神丸与水合氯醛混合制片，所得片剂放在显微镜下，观察片剂中五味子、甘草和酸枣仁的性状。

进一步的，显微镜观察时，种皮表皮石细胞，淡黄棕色表面观类多角形，壁较厚，孔沟细密，胞腔内含暗棕色物(五味子)；纤维束周围薄壁细胞含草酸钙方晶，形成晶纤维(甘草)；种皮栅状细胞棕红色，表面观多角形，直径约15μm，壁厚，木化，胞腔小。侧面观，细胞一列，呈长方形，长60～80μm(酸枣仁)。五味子、甘草和酸枣仁均有很突出的显微特征，专属性强，阴性无干扰，能够简便、快捷的对琥珀安神丸的质量情况进行检测。

进一步的，以薄层色谱法鉴别琥珀安神丸中当归的步骤为：

1)供试品溶液的制备：取琥珀安神丸10g，研细，加乙酸乙酯50ml，超声处理15分钟，过滤取滤液，将滤液挥干溶剂，剩余物加乙酸乙酯lml使其溶解，作为供试品溶液；

2)对照品溶液的制备：取当归对照药材0.5g，研细，加乙酸乙酯10ml，超声处理15分钟，过滤取滤液，将滤液挥干溶剂，剩余物加乙酸乙酯lml使其溶解，作为对照品溶液；

3)点样、展开：参照中国药典中记载的薄层色谱法(中国药典2020年版通则0502)试验，吸取供试品溶液和对照品溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比4:1的正己烷-乙酸乙酯为展开剂进行展开，展开后取出硅胶G薄层板，晾干，在紫外光(365nm)下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

进一步的，以薄层色谱法鉴别琥珀安神丸中五味子的步骤为：

1)供试品溶液的制备：取琥珀安神丸10g，研细，加三氯甲烷100ml，加热回流30分钟，过滤取滤液，将滤液挥干溶剂，剩余物加三氯甲烷lml使其溶解，作为供试品溶液；

2)对照品溶液的制备：取五味子对照药材lg，研细，加三氯甲烷100ml，加热回流30分钟，过滤取滤液，将滤液挥干溶剂，剩余物加三氯甲烷lml使其溶解，作为对照品溶液；

3)点样、展开：参照中国药典中记载的薄层色谱法(中国药典2020年版通则0502)试验，吸取供试品溶液和对照品溶液各2μl，分别点于同一硅胶GF

进一步的，以薄层色谱法鉴别琥珀安神丸中人参的步骤为：

1)供试品溶液的制备：取琥珀安神丸20g，研细，加三氯甲烷100ml，加热回流1小时，过滤取药渣，将药渣挥干溶剂，加水2ml搅拌湿润，加水饱和正丁醇50ml，超声处理30分钟，吸取上清液加3体积倍量氨试液(将400ml浓氨溶液加水溶解成1000ml制得)，摇匀，放置分层，取上层液蒸干，剩余物加甲醇lml使其溶解，作为供试品溶液；

2)对照品溶液的制备：取人参对照药材0.5g，研细，加三氯甲烷100ml，加热回流1小时，过滤取药渣，将药渣挥干溶剂，加水2ml搅拌湿润，加水饱和正丁醇50ml，超声处理30分钟，吸取上清液加3体积倍量氨试液，摇匀，放置分层，取上层液蒸干，剩余物加甲醇lml使其溶解，作为对照品溶液；

3)点样、展开：参照中国药典中记载的薄层色谱法(中国药典2020年版通则0502)试验，吸取供试品溶液和对照品溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比15∶40∶22∶10的三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水在10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开后将硅胶G薄层板取出，晾干，喷以10wt％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色淸晰，置日光下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

进一步的，以薄层色谱法鉴别琥珀安神丸中远志的步骤为：

1)供试品溶液的制备：取琥珀安神丸20g，研细，加70wt％甲醇100ml，超声处理30分钟，过滤取滤液，滤液挥干溶剂，剩余物加甲醇2ml使其溶解，作为供试品溶液；

2)对照品溶液的制备：取远志对照药材0.5g，研细，加70wt％甲醇100ml，超声处理30分钟，过滤取滤液，滤液挥干溶剂，剩余物加甲醇2ml使其溶解，作为对照品溶液；

3)点样、展开：参照中国药典中记载的薄层色谱法(中国药典2020年版通则0502)试验，吸取供试品溶液和对照品溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比7∶3∶1的三氯甲烷-甲醇-水的下层溶液为展开剂，展开后取出硅胶G薄层板，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

进一步的，以薄层色谱法鉴别琥珀安神丸中甘草的步骤为：

1)供试品溶液的制备：取琥珀安神丸20g，研细，加乙醚100ml，加热回流1小时，过滤取药渣，将药渣加甲醇50ml，加热回流1小时，过滤取滤液，将滤液挥干溶剂，剩余物加水40ml使其溶解，然后用正丁醇提取3次，每次20ml，合并正丁醇提取液，用水洗涤3次，弃去水液，然后将正丁醇液蒸干，剩余物加甲醇1ml使其溶解，作为供试品溶液；

2)对照品溶液的制备：取甘草对照药材0.5g，研细，加乙醚100ml，加热回流1小时，过滤取药渣，将药渣加甲醇50ml，加热回流1小时，过滤取滤液，将滤液挥干溶剂，剩余物加水40ml使其溶解，然后用正丁醇提取3次，每次20ml，合并正丁醇提取液，用水洗涤3次，弃去水液，然后将正丁醇液蒸干，剩余物加甲醇1ml使其溶解，作为对照品溶液；

3)点样、展开：参照中国药典中记载的薄层色谱法(中国药典2020年版通则0502)试验，吸取供试品溶液和对照品溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比13∶7∶2三氯甲烷-甲醇-水在10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开后取出硅胶G薄层板，晾干，喷以10wt％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，置日光下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

进一步的，HPLC法测定五味子醇甲含量的步骤为：

1)供试品溶液的制备：取琥珀安神丸适量，研细，混匀，精密称取1.5-2g，置研钵中，加硅藻土4g，研匀，转移至具塞锥形瓶中，精密加入甲醇20ml，密塞，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，过滤，取滤液，即为供试品溶液；

2)对照品溶液的制备：取五味子醇甲对照品适量，精密称定，加甲醇制成每20μg/ml的溶液，即为对照品溶液；

3)HPLC色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积比55∶45的甲醇-水为流动相；检测波长为250nm；流速为1ml/min；柱温为室温；理论板数按五味子醇甲峰计算不低于6000；

4)测定方法：分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，根据峰面积计算五味子醇甲含量。

进一步的，HPLC法检测中，超声功率为100W，超声频率为40kHz。

进一步的，琥珀安神丸中含五味子以五味子醇甲(C

为了对琥珀安神丸(水蜜丸)质量进行全面检测，有效对其质量进行控制，发明人经过大量试验，对制剂中药材及药材有效成分进行了定性和定量检测，建立了中药琥珀安神丸(水蜜丸)新的质量控制方法。本发明采用显微鉴别法鉴别制剂中五味子、甘草、酸枣仁；以薄层色谱法鉴别制剂中当归、五味子、人参、远志、甘草；同时采用HPLC测定制剂中五味子的五味子醇甲含量，从而实现了对琥珀安神丸(水蜜丸)质量的全面评价和控制，为琥珀安神丸(水蜜丸)的真伪鉴别和内在质量检测提供了全面、可靠的依据，保证了产品质量的稳定性及临床用药的安全性、有效性，更好地满足医疗和市场的需要。

附图说明

图1琥珀安神丸(水蜜丸)中五味子醇甲的紫外扫描图；

图2五味子药材的HPLC色谱图；

图3不含五味子阴性样品的HPLC色谱图；

图4琥珀安神丸(水蜜丸)样品的HPLC色谱图；

图5五味子醇甲对照品的HPLC色谱图；

图6琥珀安神丸(水蜜丸)的五味子醇甲峰面积与浓度线性关系图；

图7琥珀安神丸(水蜜丸)的五味子显微鉴别图；

图8琥珀安神丸(水蜜丸)的甘草显微鉴别图；

图9为琥珀安神丸(水蜜丸)的酸枣仁显微鉴别图；

图10为琥珀安神丸(水蜜丸)的当归TLC色谱；

图11为琥珀安神丸(水蜜丸)的五味子TLC色谱图；

图12为琥珀安神丸(水蜜丸)的人参TLC色谱图；

图13为琥珀安神丸(水蜜丸)的远志TLC色谱；

图14为琥珀安神丸(水蜜丸)的甘草TLC色谱图；

图15为琥珀安神丸(水蜜丸)的地黄TLC色谱图；

图16为琥珀安神丸(水蜜丸)的酸枣仁TLC色谱图；

图17为琥珀安神丸(水蜜丸)的麦冬TLC色谱图；

图18为琥珀安神丸(水蜜丸)的茯苓TLC色谱图；

图19为琥珀安神丸(水蜜丸)的丹参TLC色谱图；

图20为琥珀安神丸(水蜜丸)的桔梗TLC色谱图；

图21为琥珀安神丸(水蜜丸)的玄参TLC色谱图。

具体实施方式

下面通过具体的实施例对本发明进行进一步详细说明，本实施例以本发明技术方案为前提进行实施，给出了详细的实施方式和具体的操作过程，但本发明的保护范围不限于下述的实施例。

实施例1

五味子醇甲的HPLC方法学研究

1、仪器和试剂

仪器：AG135型电子分析天平(瑞士METTLER)，岛津高效液相色谱仪LC-15C型泵，SPD-15C检测器，Agilent HC-C

对照品：五味子醇甲(含量测定用，中国食品药品检定研究院，20mg，110857-201815，纯度：99.7％)。

供试品：琥珀安神丸(水蜜丸)。

2、色谱条件的选择

2.1检测波长选择：精密称取五味子醇甲对照品适量，加甲醇制成每1ml含20μg的溶液，照紫外分光光度法(《中国药典》2020年版四部通则0401)，在波长200～400nm的范围内扫描，五味子醇甲在波长222nm、250nm处有最大吸收(图1)，因此选择检测波长为250nm。

2.2流动相的确定：参考《中国药典》2020年版一部天王补心丸中五味子醇甲的含量测定方法，确定以甲醇-水(55∶45)为流动相。

3、提取方法选择：

3.1提取方法选择试验：

对照品溶液制备：取五味子醇甲对照品(110857-201815)10.11mg，置50ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，作为对照品贮备液；精密量取对照品贮备液1ml置10ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液。

供试品溶液制备：取琥珀安神丸(批号：20201101)约2g，研细，共4份，精密称定，置研钵中，加硅藻土4g，研匀，转移至具塞锥形瓶中，精密加入甲醇20ml，密塞，称定重量，两份超声处理(功率100W，频率40kHz)30min，两份回流提取30min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪测定，色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积比55∶45的甲醇-水为流动相；检测波长为250nm；流速为1ml/min；柱温为室温；理论板数按五味子醇甲峰计算不低于6000。根据峰面积计算五味子醇甲含量，结果见表1。

表1不同提取方法的比较

结果：超声处理和回流提取含量基本一致，超声处理方法简便，故提取方法确定为超声处理。

3.2提取时间选择试验：

对照品溶液制备：精密量取3.1项下对照品贮备液1ml置10ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。

供试品溶液制备：取琥珀安神丸(批号：20201101)约2g，研细，共6份，精密称定，置研钵中，加硅藻土4g，研匀，转移至具塞锥形瓶中，精密加入甲醇20ml，密塞，称定重量，两份超声处理(功率100W，频率40kHz)20min，两份超声处理(功率100W，频率40kHz)30min，两份超声处理(功率100W，频率40kHz)40min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，色谱条件同上，即得，结果见表2。

表2五味子醇甲含量测定提取时间选择结果表

结果：超声处理20、30和40分钟含量基本一致，为保证五味子醇甲提取完全，故确定超声处理时间为30分钟。

3.3提取溶剂选择试验：

对照品溶液制备：精密量取3.1项下对照品贮备液1ml置10ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。

供试品溶液制备：取琥珀安神丸(批号：20201101)约2g，研细，共6份，精密称定，置研钵中，加硅藻土4g，研匀，转移至具塞锥形瓶中，两份精密加入乙醇20ml，两份精密加入70％甲醇20ml，两份精密加入甲醇20ml，密塞，称定重量，超声处理(功率100W，频率40kHz)30min，放冷，再称定重量，分别用相应溶剂补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，色谱条件同上，即得，结果见表3。

表3五味子醇甲含量测定提取溶剂选择结果表

结果：用甲醇提取即可提取完全，乙醇、70％甲醇均不能提取完全，因此，选择甲醇作为提取溶剂。

3.4溶剂用量选择试验：

对照品溶液制备：精密量取3.1项下对照品贮备液1ml置10ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。

供试品溶液制备：取琥珀安神丸(批号：20201101)约2g，研细，共6份，精密称定，置研钵中，加硅藻土4g，研匀，转移至具塞锥形瓶中，两份精密加入甲醇10ml，两份精密加入甲醇20ml，两份精密加入甲醇30ml，密塞，称定重量，超声处理(功率100W，频率40kHz)30min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，色谱条件同上，即得，结果见表4。

表4五味子醇甲含量溶剂用量选择结果表

结果：提取溶剂为20ml、30ml时含量变化不大，10ml时含量较低，不能充分提取，为便于试验，选择20ml。

3.5根据上述筛选，确定的最佳供试品溶液制备方法为：

取本品1.5-2g，研细，精密称定，置研钵中，加硅藻土4g，研匀，转移至具塞锥形瓶中，精密加入甲醇20ml，密塞，称定重量，超声处理(功率100W，频率40kHz)30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

4、稳定性试验：

对照品溶液制备：取五味子醇甲对照品(110857-201815)9.85mg置50ml量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液，精密量取对照品贮备液1ml置10ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。

供试品溶液：取琥珀安神丸(批号：20201101)约2g，精密称定，置研钵中，加硅藻土4g，研匀，转移至具塞锥形瓶中，精密加入甲醇20ml，密塞，称定重量，超声处理(功率100W，频率40kHz)30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

精密吸取上述对照品溶液和供试品溶液各10μl，分别于0小时、2小时、4小时、6小时、8小时，12小时时，注入液相色谱仪，色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积比55∶45的甲醇-水为流动相；检测波长为250nm；流速为1ml/min；柱温为室温；理论板数按五味子醇甲峰计算不低于6000。结果见表5。

表5五味子醇甲含量测定稳定性试验结果表

结果：对照品溶液和供试品溶液在12小时内峰面积RSD分别为1.32％和1.68％，证明对照品溶液和供试品溶液在12小时内稳定性良好。

5、精密度试验：

对照品溶液制备：精密吸取稳定性项下对照品贮备液1ml置10ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。

精密吸取五味子醇甲对照品溶液10μl，注入液相色谱仪，色谱条件同稳定性试验，并记录色谱图。连续进样6次，计算峰面积积分值的RSD，结果见表6。

表6五味子醇甲含量测定精密度试验结果表

结果表明：对照品RSD为1.32％，证明仪器精密度良好。

6、线性关系考察：

线性溶液的制备：取五味子醇甲对照品(110857-201815)9.85mg(纯度99.7％)置50ml量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液，分别精密量取0.2ml、0.6ml、1.0ml、1.5ml、2.0ml和3.0ml储备液置10ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。

分别精密吸取上述溶液各10μl，注入液相色谱仪，色谱条件同稳定性试验，并记录色谱峰面积，表7所示。

表7五味子醇甲对照品线性范围测定结果

以峰面积值(A)为纵坐标，以对照品溶液浓度(c)为横坐标，进行线性回归，得线性回归方程为：A＝19680c+6974.3，r＝0.99905(图6)。结果表明：五味子醇甲在3.9282～58.9227μg/ml范围内与峰面积的线性关系良好。

7、重复性试验：

对照品溶液制备：取“稳定性”项下对照品贮备液，精密量取1ml置10ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。

供试品溶液制备：取琥珀安神丸(批号：20201101)约2g，按“稳定性”项下供试品溶液制备方法制备，即得，同法配制6份。

分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，色谱条件同上，即得。结果见表8。

表8五味子醇甲含量测定重复性试验结果表

结果表明：本试验方法的重复性良好。

8、加样回收率试验：

供试品溶液制备：取同一批已知含量的琥珀安神丸(批号：20201101，含量：0.22mg/g)约1g，精密称定，共6份，置研钵中，加入硅藻土2g，研匀，分别精密加入五味子醇甲对照品溶液(196.409μg/ml)1ml，精密加入甲醇19ml，密塞，称定重量，超声处理30分钟(功率100W，频率40kHz)，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，即得。结果见表9。

计算公式：回收率(％)＝(测得量－样品含量)/对照品加入量×100％

表9五味子醇甲含量测定加样回收率试验结果表

结果表明：试验方法的回收率良好。

9、专属性：

供试品溶液制备：取琥珀安神丸(批号：20201101)约2g，精密称定，按“稳定性”项下供试品溶液制备方法处理，即得。

对照品溶液制备：精密吸取稳定性项下对照品贮备液1ml置10ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。

五味子药材溶液制备：取五味子药材0.1g，精密称定，按“稳定性”项下供试品溶液制备方法制备，即得。

阴性供试品溶液制备：取去除五味子水蜜丸作为阴性样品，取约2g，精密称定，按“稳定性”项下供试品溶液制备方法制备，即得。

分别精密吸取五味子药材溶液、阴性供试品溶液、供试品溶液、对照品溶液各10μl，注入液相色谱仪，色谱条件如上所述，并记录色谱图。

结果：五味子醇甲可有效检出，且除去五味子的阴性供试品无干扰(图2-图5)。

10、样品含量测定：取3批琥珀安神丸(水蜜丸)样品，按上述方法测定五味子醇甲含量，测定结果见表10。

表10琥珀安神丸样品中五味子醇甲含量测定结果表

本品3批样品以高效液相法五味子醇甲的平均含量为0.22mg/g。

根据上述试验结果，考虑药材来源，以及制剂生产、贮藏等因素，故暂定本品每克含五味子以五味子醇甲(C

实施例2琥珀安神丸(水蜜丸)中五味子、甘草、酸枣仁显微鉴别

取琥珀安神丸(水蜜丸)适量，以水合氯醛制片，置显微镜下观察制剂中各药物的性状，其中五味子、甘草、酸枣仁在显微镜下的形状较为突出。

1)五味子显微镜下形状：种皮表皮石细胞，淡黄棕色表面观类多角形，壁较厚，孔沟细密，胞腔内含暗棕色物，如图7所示。

2)甘草显微镜下形状：纤维束周围薄壁细胞含草酸钙方晶，形成晶纤维，如图8所示。

3)酸枣仁显微镜下形状：种皮栅状细胞棕红色，表面观多角形，直径约15μm，壁厚，木化，胞腔小。侧面观，细胞一列，呈长方形，长60～80μm，如图9所示。

结果：图7～9为琥珀安神丸(水蜜丸)中五味子、甘草、酸枣仁显微鉴别图，结果表明显微鉴别方法简便，专属性强，阴性无干扰，显微特征突出，可以作为琥珀安神丸(水蜜丸)中的质量控制指标。

实施例3琥珀安神丸(水蜜丸)中当归鉴别

1)供试品溶液的制备：取琥珀安神丸(水蜜丸)10g，研细，加乙酸乙酯50ml，超声处理15分钟，滤过，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯lml使溶解，作为供试品溶液。

2)阴性供试品溶液的制备：将琥珀安神丸中的当归去掉，作为阴性供试品。取阴性供试品10g，按照上述方法制成阴性供试品溶液。

3)对照品溶液的制备：取当归对照药材0.5g，研细，加乙酸乙酯10ml，超声处理15分钟，滤过，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯lml使溶解，作为对照品溶液。

4)点样、展开：照薄层色谱法(中国药典2020年版通则0502)试验，吸取上述3种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯(体积比4∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，在紫外光(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，在阴性供试品色谱相应的位置上，不显示相同颜色的荧光斑点(图10)，专属性强。

实施例4琥珀安神丸(水蜜丸)中五味子鉴别

1)供试品溶液的制备：取琥珀安神丸(水蜜丸)10g，研细，加三氯甲烷100ml，加热回流30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加三氯甲烷lml使溶解，作为供试品溶液；

2)阴性供试品溶液的制备：将琥珀安神丸中的五味子去掉，作为阴性供试品。取阴性供试品10g，按照上述方法制成阴性供试品溶液。

3)对照品溶液的制备：取五味子对照药材lg，研细，加三氯甲烷100ml，加热回流30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加三氯甲烷lml使溶解，作为对照品溶液；

4)点样、展开：照薄层色谱法(中国药典2020年版通则0502)试验，吸取上述3种溶液各2μl，分别点于同一硅胶GF

实施例5琥珀安神丸(水蜜丸)中人参鉴别

1)供试品溶液的制备：取琥珀安神丸(水蜜丸)20g，研细，加三氯甲烷100ml，加热回流1小时，弃去三氯甲烷液，药渣挥干溶剂，加水2ml搅拌湿润，加水饱和正丁醇50ml，超声处理30分钟，吸取上清液加3倍量氨试液，摇匀，放置分层，取上层液蒸干，残渣加甲醇lml使溶解，作为供试品溶液；

2)阴性供试品溶液的制备：将琥珀安神丸中的人参去掉，作为阴性供试品。取阴性供试品20g，按照上述方法制成阴性供试品溶液。

3)对照品溶液的制备：另取人参对照药材0.5g，研细，加三氯甲烷100ml，加热回流1小时，弃去三氯甲烷液，药渣挥干溶剂，加水2ml搅拌湿润，加水饱和正丁醇50ml，超声处理30分钟，吸取上清液加3倍量氨试液，摇匀，放置分层，取上层液蒸干，残渣加甲醇lml使溶解，作为对照品溶液；

4)点样、展开：照薄层色谱法(中国药典2020年版通则0502)试验，吸取上述3种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水(体积比15∶40∶22∶10)在10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10wt％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色淸晰，置日光下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，在阴性供试品色谱相应的位置上，不显示相同颜色的斑点(图12)，专属性强。

实施例6琥珀安神丸(水蜜丸)中远志鉴别

1)供试品溶液的制备：取琥珀安神丸(水蜜丸)20g，研细，加70wt％甲醇100ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；

2)阴性供试品溶液的制备：将琥珀安神丸中的远志去掉，作为阴性供试品。取阴性供试品20g，按照上述方法制成阴性供试品溶液。

3)对照品溶液的制备：另取远志对照药材0.5g，研细，加70wt％甲醇100ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为对照品溶液；

4)点样、展开：照薄层色谱法(中国药典2020年版通则0502)试验，吸取上述3种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水(体积比7∶3∶1)的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，在阴性供试品色谱相应的位置上，不显示相同颜色的荧光斑点(图13)，专属性强。

实施例7琥珀安神丸(水蜜丸)中甘草鉴别

1)供试品溶液的制备：取琥珀安神丸(水蜜丸)20g，研细，加乙醚100ml，加热回流1小时，滤过，弃去醚液，药渣加甲醇50ml，加热回流1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水40ml使溶解，用正丁醇提取3次，每次20ml，合并正丁醇液，用水洗涤3次，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。

2)阴性供试品溶液的制备：将琥珀安神丸中的甘草去掉，作为阴性供试品。取阴性供试品20g，按照上述方法制成阴性供试品溶液。

3)对照品溶液的制备：取甘草对照药材0.5g，研细，加乙醚100ml，加热回流1小时，滤过，弃去醚液，药渣加甲醇50ml，加热回流1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水40ml使溶解，用正丁醇提取3次，每次20ml，合并正丁醇液，用水洗涤3次，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为对照品溶液。

4)点样、展开：照薄层色谱法(中国药典2020年版通则0502)试验，吸取上述3种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水(体积比13∶7∶2)在10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10wt％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，置日光下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，在阴性供试品色谱相应的位置上，不显示相同颜色的斑点(图14)，专属性强。

实施例8琥珀安神丸(水蜜丸)中地黄鉴别

参考《中国药典》2020年版一部地黄药材中鉴别项(3)，以中国食品药品检定研究院提供的地黄对照药材(121225-201003)作为对照，以去除地黄一味原料药的水蜜丸作为阴性供试品。取琥珀安神丸(水蜜丸)7g，剪碎，加80wt％甲醇60ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水5ml使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取4次，每次10ml，合并正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。另取缺地黄的阴性供试品7g，同法制成阴性供试品溶液。再取地黄对照药材，同法制成对照药材溶液。

照薄层色谱法(通则0502)试验，吸取上述三种溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-甲酸(体积比16∶0.5∶2)为展开剂，展开，取出，晾干，用0.1wt％的2，2-二苯基-1-苦肼基无水乙醇溶液浸板，晾干。结果在供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，但除去地黄的阴性对照有干扰(图15)，专属性不强，不宜将此项列入质量控制标准中。

实施例9琥珀安神丸(水蜜丸)中酸枣仁鉴别

参考《中国药典》2020年版一部“酸枣仁”药材鉴别(3)，以中国食品药品检定研究院提供的酸枣仁对照药材(121225-201003)作为对照，以去除酸枣仁一味原料药的水蜜丸作为阴性供试品。取琥珀安神丸(水蜜丸)30g，剪碎，加石油醚(沸程60-90℃)100ml，加热回流2小时，滤过，弃去石油醚液，药渣挥干，加甲醇60ml，加热回流1小时。滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取缺酸枣仁的阴性供试品30g，同法制成阴性供试品溶液。再取酸枣仁对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液。

吸取上述三种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以水饱和的正丁醇为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1wt％香草醛硫酸溶液，置紫外光灯(365nm)下检视。结果在与对照药材色谱相应的位置上，未显相同颜色的斑点(图16)，这说明酸枣仁薄层色谱鉴别专属性不强，不宜将此项列入质量控制标准中。

实施例10琥珀安神丸(水蜜丸)中麦冬鉴别

参考《中国药典》2020年版一部“麦冬”药材鉴别，以中国食品药品检定研究院提供的麦冬对照药材(121225-201003)作为对照，以去除麦冬一味原料药的水蜜丸作为阴性供试品。取琥珀安神丸(水蜜丸)30g，剪碎，加三氯甲烷-甲醇(体积比7∶3)混合溶液100ml，浸泡3小时，超声处理30分钟，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加三氯甲烷0.5ml使溶解，作为供试品溶液。另取缺麦冬的阴性供试品30g，同法制成阴性供试品溶液。再取麦冬对照药材2g，同法制成对照药材溶液。

吸取上述三种溶液各10μl，分别点于同一硅胶GF

实施例11琥珀安神丸(水蜜丸)中茯苓鉴别

参考《中国药典》2020年版一部“茯苓”药材鉴别(3)，以中国食品药品检定研究院提供的茯苓对照药材(121225-201003)作为对照，以去除茯苓一味原料药的水蜜丸作为阴性供试品。取琥珀安神丸(水蜜丸)30g，剪碎，加乙醚100ml，超声处理10分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取缺茯苓的阴性供试品30g，同法制成阴性供试品溶液，再取茯苓对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液。

吸取上述三种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(体积比20∶5∶0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2wt％香草醛硫酸溶液-乙醇(体积比4∶1)混合溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。结果在与对照药材色谱相应的位置，未显相同颜色的斑点(图18)，故不宜将此项列入质量控制标准中。

实施例12琥珀安神丸(水蜜丸)中丹参鉴别

参考《中国药典》2020年版一部“丹参”药材鉴别，以中国食品药品检定研究院提供的丹参对照药材(121225-201003)作为对照，以去除丹参一味原料药的水蜜丸作为阴性供试品。取琥珀安神丸(水蜜丸)30g，剪碎，加乙醚60ml，超声处理15分钟，滤过，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯lml使溶解，作为供试品溶液。另取缺丹参的阴性供试品30g，同法制成阴性供试品溶液。再取丹参对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液。

吸取上述三种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯(体积比4∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。结果供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，但除去丹参的阴性对照有干扰(图19)，专属性不强，故不宜将此项列入质量控制标准中。

实施例13琥珀安神丸(水蜜丸)中桔梗鉴别

参考《中国药典》2020年版一部“桔梗”药材鉴别(3)，以中国食品药品检定研究院提供的桔梗对照药材(121225-201003)作为对照，以去除桔梗一味原料药的水蜜丸作为阴性供试品。取琥珀安神丸(水蜜丸)30g，加7wt％硫酸乙醇-水(体积比1∶3)混合溶液100ml，加热回流3小时，放冷，用三氯甲烷振摇提取2次，每次20ml，合并三氯甲烷液，加水洗涤2次，每次30ml，弃去洗液，三氯甲烷液用无水硫酸钠脱水，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取缺桔梗的阴性供试品30g，同法制成阴性供试品溶液。再取桔梗对照药材1g，同法制成对照药材溶液。

吸取上述三种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙醚(体积比2∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10wt％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。结果供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置，未显相同颜色的斑点(图20)，方法不可行，故不宜将此项列入质量控制标准中。

实施例14琥珀安神丸(水蜜丸)中玄参鉴别

参考《中国药典》2020年版一部“玄参”药材鉴别(2)，以中国食品药品检定研究院提供的玄参对照药材(121225-201003)作为对照，以去除玄参一味原料药的水蜜丸作为阴性供试品。取琥珀安神丸(水蜜丸)30g，加甲醇100ml，浸泡1小时，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水25ml使溶解，用水饱和正丁醇振摇提取2次，每次30ml，合并正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液，另取缺玄参的阴性供试品30g，同法制成阴性供试品溶液。再取玄参对照药材1g，同法制成对照药材溶液。

吸取上述三种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水(体积比12∶4∶1)的下层溶液为展开剂，置用展开剂预饱和15分钟的展开缸内，展开，取出，晾干，喷以5wt％香草醛硫酸溶液，热风吹至斑点显色清晰。结果在与对照药材色谱相应的位置，未显相同颜色的斑点(图21)，方法不可行，故不宜将此项列入质量控制标准中。

以上所述仅为本发明的优选实施例，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制，应当指出，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理及构思的前提下，还可以做出若干修饰和改进，或直接或间接运用在其他相关的技术领域，均同理包括在本发明的专利保护范围内。