一种具有抗氧化活性的益生菌及其用途

技术领域

本发明属于益生菌技术领域，具体地说，涉及一种具有抗氧化活性的益生菌及其用途。

背景技术

氧化应激与损伤能够导致机体系统性和代谢性疾病发生，例如阿尔茨海默病、帕金森病、肌萎缩性脊髓侧索硬化症、哮喘、过敏、慢性炎症、糖尿病等。在氧化应激状态下，细胞中的促氧化物与抗氧化的平衡受到干扰，导致DNA羟化、蛋白质变性、脂质过氧化和细胞凋亡，最终损害细胞的生存能力。人体的抗氧化系统是一个可与免疫系统相比拟的、具有完善和复杂功能的系统，机体抗氧化的能力越强，就越健康，生命也越长。因此，如何提高机体抗氧化能力，改善氧化应激引起的并发症或预防并发症的发生成为本领域亟待解决的技术问题。

而益生菌是指对人体健康有益的微生物的统称，主要是指乳酸菌。乳酸菌不仅能够调节机体肠道菌群，还有抗肿瘤、增强免疫和降低血清胆固醇等作用，研究表明这些作用可能与菌株代谢产生的抗氧化物质有关。

例如，中国发明专利，申请号：CN201810540534.1，公开号：CN108771241A，公开了一种具有抗氧化作用的益生菌组合物及其用途，其中提供的具有抗氧化作用的益生菌组合物，按质量百分比计包括：嗜酸乳杆菌35％、植物乳杆菌37％、木糖醇8％、菊糖20％。但上述益生菌组合物，面临两大问题，其一是嗜酸乳杆菌和植物乳杆菌很容易在木糖醇、菊糖的混合物中失活，其二是嗜酸乳杆菌和植物乳杆菌两种粉剂，不利于直接服用。

发明内容

1、要解决的问题

针对上述现有技术存在的问题，本发明提供一种具有抗氧化活性的益生菌及其用途，创造性引入四种益生菌及稳定剂，四种益生菌之间协同增效，对小鼠的抗氧化水平及免疫功能有着增效的作用，同时，稳定剂对于益生菌起到辅助稳定作用，协助增强其提升抗氧化水平、免疫功能的作用。

2、技术方案

为解决上述问题，本发明采用如下的技术方案。

一种具有抗氧化活性的益生菌，所述的益生菌为嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、鼠李糖乳杆菌及醋酸乳杆菌的混合物，

其中所述的嗜酸乳杆菌、所述的干酪乳杆菌、所述的鼠李糖乳杆菌、所述的醋酸乳杆菌四者之间的用量比为1：2：4：5；

其中所述的嗜酸乳杆菌为冻干粉，贮藏温度为-20℃；

其中所述的干酪乳杆菌为冻干粉，贮藏温度为-20℃；

其中所述的鼠李糖乳杆菌为冻干粉，贮藏温度为-20℃；

其中所述的醋酸乳杆菌为冻干粉，贮藏温度为-20℃。

上述所述的具有抗氧化活性的益生菌中，

其中所述的嗜酸乳杆菌保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期为2013年8月16日，保藏编号为CGMCC NO.8043。

上述所述的具有抗氧化活性的益生菌中，

其中所述的干酪乳杆菌保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期为2011年11月18日，保藏编号为CGMCC No.6733。

上述所述的具有抗氧化活性的益生菌中，

其中所述的鼠李糖乳杆菌保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期为2018年4月9日，保藏编号为CGMCC No.15573。

上述所述的具有抗氧化活性的益生菌中，

其中所述的醋酸乳杆菌保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期为2018年9月10日，保藏编号为CGMCC No.16448。

一种如上述所述的具有抗氧化活性的益生菌的用途中，

所述的益生菌在提高免疫能力及抗氧化能力上的应用。

上述所述的具有抗氧化活性的益生菌的用途中，

所述的益生菌的剂型为药学上可接受的剂型。

上述所述的具有抗氧化活性的益生菌的用途中，

所述的益生菌的剂型为冻干粉，其贮藏温度为-20℃。

上述所述的具有抗氧化活性的益生菌的用途中，

所述的益生菌的剂型为悬浮液。

上述所述的具有抗氧化活性的益生菌的用途中，

所述的悬浮液的制备方法如下：

选择嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、鼠李糖乳杆菌及醋酸乳杆菌加稳定液进行溶解，溶解的温度为8℃，溶解后密封放置低温冰箱保藏，保藏的温度为4℃；

所述的稳定液，以重量份计，包括以下组分：

水 85份，

甘油 8份，

甘露醇 5份，

卡拉胶 1份，

麦芽糊精 0.6份，

柠檬酸钠 0.2份；

所述的稳定液的制备方法如下：

向水中加入柠檬酸钠、卡拉胶及甘露醇，搅拌均匀，搅拌的转速为100rpm，搅拌的温度为60℃，接着加入甘油和麦芽糊精，均质后冷却至室温即可，其中均质的温度为40℃。

3、有益效果

相比于现有技术，本发明的有益效果为：

创造性引入四种益生菌及稳定剂，四种益生菌之间协同增效，对小鼠的抗氧化水平及免疫功能有着增效的作用，同时，稳定剂对于益生菌起到辅助稳定作用，协助增强其提升抗氧化水平、免疫功能的作用。经测试，与正常对照组相比，本发明的益生菌的淋巴细胞活力高达0.64%、T-AOC水平高达9.45U。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明进一步进行描述。

实施例1

本实施例的具有抗氧化活性的益生菌，所述的益生菌为嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、鼠李糖乳杆菌及醋酸乳杆菌的混合物，

其中所述的嗜酸乳杆菌、所述的干酪乳杆菌、所述的鼠李糖乳杆菌、所述的醋酸乳杆菌四者之间的用量比为1：2：4：5；

其中所述的嗜酸乳杆菌为冻干粉，贮藏温度为-20℃；

其中所述的干酪乳杆菌为冻干粉，贮藏温度为-20℃；

其中所述的鼠李糖乳杆菌为冻干粉，贮藏温度为-20℃；

其中所述的醋酸乳杆菌为冻干粉，贮藏温度为-20℃。

上述所述的具有抗氧化活性的益生菌中，

其中所述的嗜酸乳杆菌保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期为2013年8月16日，保藏编号为CGMCC NO.8043。

上述所述的具有抗氧化活性的益生菌中，

其中所述的干酪乳杆菌保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期为2011年11月18日，保藏编号为CGMCC No.6733。

上述所述的具有抗氧化活性的益生菌中，

其中所述的鼠李糖乳杆菌保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期为2018年4月9日，保藏编号为CGMCC No.15573。

上述所述的具有抗氧化活性的益生菌中，

其中所述的醋酸乳杆菌保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期为2018年9月10日，保藏编号为CGMCC No.16448。

如上述所述的具有抗氧化活性的益生菌的用途中，

所述的益生菌在提高免疫能力及抗氧化能力上的应用。

上述所述的具有抗氧化活性的益生菌的用途中，

所述的益生菌的剂型为药学上可接受的剂型。

上述所述的具有抗氧化活性的益生菌的用途中，

所述的益生菌的剂型为冻干粉，其贮藏温度为-20℃。

上述所述的具有抗氧化活性的益生菌的用途中，

所述的益生菌的剂型为悬浮液。

上述所述的具有抗氧化活性的益生菌的用途中，

所述的悬浮液的制备方法如下：

选择嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、鼠李糖乳杆菌及醋酸乳杆菌加稳定液进行溶解，溶解的温度为8℃，溶解后密封放置低温冰箱保藏，保藏的温度为4℃；

所述的稳定液，以重量份计，包括以下组分：

水 85份，

甘油 8份，

甘露醇 5份，

卡拉胶 1份，

麦芽糊精 0.6份，

柠檬酸钠 0.2份；

所述的稳定液的制备方法如下：

向水中加入柠檬酸钠、卡拉胶及甘露醇，搅拌均匀，搅拌的转速为100rpm，搅拌的温度为60℃，接着加入甘油和麦芽糊精，均质后冷却至室温即可，其中均质的温度为40℃。

对比例1

本实施例的具有抗氧化活性的益生菌，所述的益生菌为鼠李糖乳杆菌、醋酸乳杆菌的混合物，

其中所述的鼠李糖乳杆菌、所述的醋酸乳杆菌四者之间的用量比为4：5；

其中所述的嗜酸乳杆菌为冻干粉，贮藏温度为-20℃；

其中所述的干酪乳杆菌为冻干粉，贮藏温度为-20℃。

上述所述的具有抗氧化活性的益生菌中，

其中所述的鼠李糖乳杆菌保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期为2018年4月9日，保藏编号为CGMCC No.15573。

上述所述的具有抗氧化活性的益生菌中，

其中所述的醋酸乳杆菌保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期为2018年9月10日，保藏编号为CGMCC No.16448。

如上述所述的具有抗氧化活性的益生菌的用途中，

所述的益生菌在提高免疫能力及抗氧化能力上的应用。

上述所述的具有抗氧化活性的益生菌的用途中，

所述的益生菌的剂型为药学上可接受的剂型。

上述所述的具有抗氧化活性的益生菌的用途中，

所述的益生菌的剂型为冻干粉，其贮藏温度为-20℃。

上述所述的具有抗氧化活性的益生菌的用途中，

所述的益生菌的剂型为悬浮液。

上述所述的具有抗氧化活性的益生菌的用途中，

所述的悬浮液的制备方法如下：

选择鼠李糖乳杆菌、醋酸乳杆菌加稳定液进行溶解，溶解的温度为8℃，溶解后密封放置低温冰箱保藏，保藏的温度为4℃；

所述的稳定液，以重量份计，包括以下组分：

水 85份，

甘油 8份，

甘露醇 5份，

卡拉胶 1份，

麦芽糊精 0.6份，

柠檬酸钠 0.2份；

所述的稳定液的制备方法如下：

向水中加入柠檬酸钠、卡拉胶及甘露醇，搅拌均匀，搅拌的转速为100rpm，搅拌的温度为60℃，接着加入甘油和麦芽糊精，均质后冷却至室温即可，其中均质的温度为40℃。

对比例2

本实施例的具有抗氧化活性的益生菌，所述的益生菌为嗜酸乳杆菌、醋酸乳杆菌的混合物，

其中所述的嗜酸乳杆菌、所述的醋酸乳杆菌四者之间的用量比为1：5；

其中所述的嗜酸乳杆菌为冻干粉，贮藏温度为-20℃；

其中所述的醋酸乳杆菌为冻干粉，贮藏温度为-20℃。

上述所述的具有抗氧化活性的益生菌中，

其中所述的嗜酸乳杆菌保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期为2013年8月16日，保藏编号为CGMCC NO.8043。

上述所述的具有抗氧化活性的益生菌中，

其中所述的醋酸乳杆菌保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期为2018年9月10日，保藏编号为CGMCC No.16448。

如上述所述的具有抗氧化活性的益生菌的用途中，

所述的益生菌在提高免疫能力及抗氧化能力上的应用。

上述所述的具有抗氧化活性的益生菌的用途中，

所述的益生菌的剂型为药学上可接受的剂型。

上述所述的具有抗氧化活性的益生菌的用途中，

所述的益生菌的剂型为冻干粉，其贮藏温度为-20℃。

上述所述的具有抗氧化活性的益生菌的用途中，

所述的益生菌的剂型为悬浮液。

上述所述的具有抗氧化活性的益生菌的用途中，

所述的悬浮液的制备方法如下：

选择嗜酸乳杆菌、醋酸乳杆菌加稳定液进行溶解，溶解的温度为8℃，溶解后密封放置低温冰箱保藏，保藏的温度为4℃；

所述的稳定液，以重量份计，包括以下组分：

水 85份，

甘油 8份，

甘露醇 5份，

卡拉胶 1份，

麦芽糊精 0.6份，

柠檬酸钠 0.2份；

所述的稳定液的制备方法如下：

向水中加入柠檬酸钠、卡拉胶及甘露醇，搅拌均匀，搅拌的转速为100rpm，搅拌的温度为60℃，接着加入甘油和麦芽糊精，均质后冷却至室温即可，其中均质的温度为40℃。

对比例3

本实施例的具有抗氧化活性的益生菌，所述的益生菌为嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌的混合物，

其中所述的嗜酸乳杆菌、所述的干酪乳杆菌两者之间的用量比为1：2；

其中所述的嗜酸乳杆菌为冻干粉，贮藏温度为-20℃；

其中所述的干酪乳杆菌为冻干粉，贮藏温度为-20℃。

上述所述的具有抗氧化活性的益生菌中，

其中所述的嗜酸乳杆菌保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期为2013年8月16日，保藏编号为CGMCC NO.8043。

上述所述的具有抗氧化活性的益生菌中，

其中所述的干酪乳杆菌保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期为2011年11月18日，保藏编号为CGMCC No.6733。

如上述所述的具有抗氧化活性的益生菌的用途中，

所述的益生菌在提高免疫能力及抗氧化能力上的应用。

上述所述的具有抗氧化活性的益生菌的用途中，

所述的益生菌的剂型为药学上可接受的剂型。

上述所述的具有抗氧化活性的益生菌的用途中，

所述的益生菌的剂型为冻干粉，其贮藏温度为-20℃。

上述所述的具有抗氧化活性的益生菌的用途中，

所述的益生菌的剂型为悬浮液。

上述所述的具有抗氧化活性的益生菌的用途中，

所述的悬浮液的制备方法如下：

选择嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌加稳定液进行溶解，溶解的温度为8℃，溶解后密封放置低温冰箱保藏，保藏的温度为4℃；

所述的稳定液，以重量份计，包括以下组分：

水 85份，

甘油 8份，

甘露醇 5份，

卡拉胶 1份，

麦芽糊精 0.6份，

柠檬酸钠 0.2份；

所述的稳定液的制备方法如下：

向水中加入柠檬酸钠、卡拉胶及甘露醇，搅拌均匀，搅拌的转速为100rpm，搅拌的温度为60℃，接着加入甘油和麦芽糊精，均质后冷却至室温即可，其中均质的温度为40℃。

对比例4

本实施例的具有抗氧化活性的益生菌，所述的益生菌为嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、鼠李糖乳杆菌及醋酸乳杆菌的混合物，

其中所述的嗜酸乳杆菌、所述的干酪乳杆菌、所述的鼠李糖乳杆菌、所述的醋酸乳杆菌四者之间的用量比为1：2：4：5；

其中所述的嗜酸乳杆菌为冻干粉，贮藏温度为-20℃；

其中所述的干酪乳杆菌为冻干粉，贮藏温度为-20℃；

其中所述的鼠李糖乳杆菌为冻干粉，贮藏温度为-20℃；

其中所述的醋酸乳杆菌为冻干粉，贮藏温度为-20℃。

上述所述的具有抗氧化活性的益生菌中，

其中所述的嗜酸乳杆菌保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期为2013年8月16日，保藏编号为CGMCC NO.8043。

上述所述的具有抗氧化活性的益生菌中，

其中所述的干酪乳杆菌保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期为2011年11月18日，保藏编号为CGMCC No.6733。

上述所述的具有抗氧化活性的益生菌中，

其中所述的鼠李糖乳杆菌保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期为2018年4月9日，保藏编号为CGMCC No.15573。

上述所述的具有抗氧化活性的益生菌中，

其中所述的醋酸乳杆菌保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期为2018年9月10日，保藏编号为CGMCC No.16448。

如上述所述的具有抗氧化活性的益生菌的用途中，

所述的益生菌在提高免疫能力及抗氧化能力上的应用。

上述所述的具有抗氧化活性的益生菌的用途中，

所述的益生菌的剂型为药学上可接受的剂型。

上述所述的具有抗氧化活性的益生菌的用途中，

所述的益生菌的剂型为冻干粉，其贮藏温度为-20℃。

上述所述的具有抗氧化活性的益生菌的用途中，

所述的益生菌的剂型为悬浮液。

上述所述的具有抗氧化活性的益生菌的用途中，

所述的悬浮液的制备方法如下：

选择嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、鼠李糖乳杆菌及醋酸乳杆菌加稳定液进行溶解，溶解的温度为8℃，溶解后密封放置低温冰箱保藏，保藏的温度为4℃；

所述的稳定液，以重量份计，包括以下组分：

水 85份，

甘油 8份，

麦芽糊精 0.6份，

柠檬酸钠 0.2份；

所述的稳定液的制备方法如下：

向水中加入柠檬酸钠，搅拌均匀，搅拌的转速为100rpm，搅拌的温度为60℃，接着加入甘油和麦芽糊精，均质后冷却至室温即可，其中均质的温度为40℃。

对比例5

本实施例的具有抗氧化活性的益生菌，所述的益生菌为嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、鼠李糖乳杆菌及醋酸乳杆菌的混合物，

其中所述的嗜酸乳杆菌、所述的干酪乳杆菌、所述的鼠李糖乳杆菌、所述的醋酸乳杆菌四者之间的用量比为1：2：4：5；

其中所述的嗜酸乳杆菌为冻干粉，贮藏温度为-20℃；

其中所述的干酪乳杆菌为冻干粉，贮藏温度为-20℃；

其中所述的鼠李糖乳杆菌为冻干粉，贮藏温度为-20℃；

其中所述的醋酸乳杆菌为冻干粉，贮藏温度为-20℃。

上述所述的具有抗氧化活性的益生菌中，

其中所述的嗜酸乳杆菌保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期为2013年8月16日，保藏编号为CGMCC NO.8043。

上述所述的具有抗氧化活性的益生菌中，

其中所述的干酪乳杆菌保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期为2011年11月18日，保藏编号为CGMCC No.6733。

上述所述的具有抗氧化活性的益生菌中，

其中所述的鼠李糖乳杆菌保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期为2018年4月9日，保藏编号为CGMCC No.15573。

上述所述的具有抗氧化活性的益生菌中，

其中所述的醋酸乳杆菌保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期为2018年9月10日，保藏编号为CGMCC No.16448。

如上述所述的具有抗氧化活性的益生菌的用途中，

所述的益生菌在提高免疫能力及抗氧化能力上的应用。

上述所述的具有抗氧化活性的益生菌的用途中，

所述的益生菌的剂型为药学上可接受的剂型。

上述所述的具有抗氧化活性的益生菌的用途中，

所述的益生菌的剂型为冻干粉，其贮藏温度为-20℃。

上述所述的具有抗氧化活性的益生菌的用途中，

所述的益生菌的剂型为悬浮液。

上述所述的具有抗氧化活性的益生菌的用途中，

所述的悬浮液的制备方法如下：

选择嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、鼠李糖乳杆菌及醋酸乳杆菌进行溶解，溶解的温度为8℃，溶解后密封放置低温冰箱保藏，保藏的温度为4℃。

对比例6

中国发明专利，申请号：CN201280073162.7，公开号：CN104284588A，公开一种益生菌/抗氧化剂组合物，如其说明书所述：

“抗氧化剂/益生菌组合物

在暴露于单一剂量的刺激之后，通过细胞因子释放的大小来测量发炎。通过组织的生存能力来测量皮肤模型的抗炎潜能。通过测量皮肤模型中MTT(3-(4,5-二甲基-2-噻唑基)-2,5-二苯基-2H-四氮唑鎓溴化物)的相对转换来确定组织的生存能力，其中该皮肤模型用抗氧化剂/益生菌组合物、单独的益生菌、单独的抗氧化剂，以及阴性/溶剂对照（无菌、去离子水）和阳性对照（氢化可的松乳膏）处理。

该皮肤模型是EpiDermTM皮肤模型（MatTek有限公司、阿什兰市，马萨诸塞州）。该皮肤模型被暴露于外敷到该皮肤模型的抗氧化剂/益生菌组合物、单独的益生菌、单独的抗氧化剂、以及将阴性/溶剂对照，在存有或缺少佛波醇-12-十四酸酯13-乙酸酯（PMA）的情况下暴露六个小时。通过MTT的NAD(P)H-依赖型微粒体酶的减少来测量所测试的样品的毒性”。

对比例7

中国发明专利，申请号：CN201810540534.1，公开号：CN108771241A，公开一种具有抗氧化作用的益生菌组合物及其用途，如其说明书所述：

“本实施例提供的具有抗氧化作用的益生菌组合物，按质量百分比计包括：嗜酸乳杆菌35％、植物乳杆菌37％、木糖醇8％、菊糖20％”。

对比例8

中国发明专利，申请号：CN202011035475.6，公开号：CN112111430A，公开一种抗氧化与抗衰老双效益生菌及其应用，如其说明书所述：

“植物乳杆菌Lactobacillusplantarum H8的分离及鉴定于黑龙江地区从粘面子中分离得到H8菌株，活化2次后按2％接种量接种到MRS培养基中，37℃厌氧培养24h，用于后续实验。经16S rRNA鉴定，H8菌株为植物乳杆菌”。

实施例2

选择实施例1制备的益生菌以及对比例1-8制备的益生菌，进行如下实验：

借鉴下述实验方法并依托生工生物工程（上海）股份有限公司进行测试-肖雪筠,张奕,新华·那比.四种新疆发酵驼乳源益生菌对小鼠的免疫调节作用[J].食品工业科技,2017,38(4):337-341. DOI:10.13386/j.issn1002-0306.2017.04.055.

实验动物分组与模型制备

取Balb/c雄性小鼠200只，适应性饲养一周，随机分为正常对照组、实施例1组、对比例1组、对比例2组、对比例3组、对比例4组、对比例5组、对比例6组、对比例7组、对比例8组，共10组，每组20只。普通饲料喂养，除正常对照组以外，其余9组连续3d腹腔注射环磷酰胺（80mg/kg），自由进水。模型组（实施例1组、对比例1-8组）分别灌胃益生菌菌悬液（0.5×10

脾淋巴细胞增殖实验

采用CCK-8法测定小鼠脾淋巴细胞活力。取灌胃后各组小鼠，无菌条件下剖开小鼠腹腔取脾，剪碎，研棒研磨过200目筛网，收集分离的脾细胞悬液，1500r/min离心3min，弃上清。加红细胞裂解液8mL，混匀，静置5～6min，待红细胞完全破碎，2000r/min离心3min，弃上清，Hank’s液洗1～2遍，用RPMI-1640（含10%胎牛血清）重悬细胞，计数调整细胞浓度为5×10

表1 淋巴细胞活力测定

结果如表1所示，与正常对照组相比，实施例1组表现出脾淋巴细胞活力值显著性的提升，而对比例1-8组，相应的脾淋巴细胞活力表现较差，甚至出现脾淋巴细胞活力下降的情况。具体来说，对比例1-5组中分别设置了四种益生菌的缺失、稳定剂的缺失的试验，可以发现，四种益生菌，选择其中两种不能有效提升小鼠的免疫力功能，稳定剂的存在对四种益生菌起到增效作用，极大提升脾淋巴细胞活力。

血浆总抗氧化（T-AOC）水平的测定

眼眶取血，部分分离血浆；取适量血浆使用T-AOC检测试剂盒测定T-AOC水平，并严格按照说明书进行操作。其中T-AOC检测试剂盒采购自泉州市九邦生物科技有限公司。

表2 T-AOC水平测定

如表2所示，与正常对照组相比，实施例1组表现出抗氧化活力值显著性的提升，而对比例1-8组，相应的抗氧化活力表现较差。具体来说，对比例1-5组中分别设置了四种益生菌的缺失、稳定剂的缺失的试验，可以发现，四种益生菌，选择其中两种不能有效提升小鼠的抗氧化活力功能，稳定剂的存在对四种益生菌起到增效作用，极大提升抗氧化活力。

此外，经测试，本实施例1的益生菌在添加稳定剂一个月后，低温（4℃）储藏试验，总菌活力仅下降2.3%，而对比例5的益生菌，其总菌活力下降高达25.6%。

以上内容是结合具体实施方式对本发明作进一步详细说明，不能认定本发明具体实施只局限于这些说明，对于本发明所属技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明的构思的前提下，还可以做出若干简单的推演或替换，都应当视为属于本发明所提交的权利要求书确定的保护范围。