一种干预慢性肾炎及尿毒症的长双歧杆菌膳食组合及应用

技术领域

本发明涉及保健食品领域，具体的讲是一种干预慢性肾炎及尿毒症的长双歧杆菌膳食组合及应用。

背景技术

基于发病率和患病率，慢性肾炎已成为世界范围内的一个主要公共卫生问题，在过去4年中，慢性肾炎患病率增长了约5%，该疾病的总体平均流行率达到了13.4%。

慢性肾炎会促进体内有机残留物的积累，这些残留物会带来一系列机体负面作用，包括加重炎症状态、氧化应激、心血管功能障碍和死亡风险。目前尚无较好的慢性肾炎药物控制方法，为了控制这种积累，一般是对患有慢性肾炎的个体限制某些食物群的摄入，如水果、蔬菜和谷物，进行干预。而对这些食物的摄入限制往往会影响微量营养素、膳食纤维和具有抗氧化和抗炎活性的植物化学物质的补充。现在研究表明益生菌制剂的补充可以改善宿主抗氧化和抗炎活性，并能利于宿主营养的吸收，但是目前尚缺乏用益生菌相关制剂干预慢性肾炎及尿毒症的技术和应用。

因此设计一种干预慢性肾炎及尿毒症的长双歧杆菌膳食组合及应用是十分有必要的。

发明内容

本发明突破了现有技术的难题，设计了一种干预慢性肾炎及尿毒症的长双歧杆菌膳食组合及应用。

为了达到上述目的，本发明设计了一种干预慢性肾炎及尿毒症的长双歧杆菌膳食组合及应用，包括100mL长双歧杆菌BL-G301益生菌牛乳和40g谷物粉压片。

长双歧杆菌BL-G301益生菌牛乳的制备方法如下：

步骤1：将-80℃冷冻保藏的长双歧杆菌BL-G301 益生菌菌粉，取出备用，所述的长双歧杆菌BL-G301益生菌粉中的活菌数≥1×10

步骤2：温度至室温后，将益生菌菌粉加至巴氏灭菌牛乳中，至活菌数为7.4 ×10

谷物粉压片包括10%白糖和0.5%的氯化钠。

长双歧杆菌BL-G301益生菌菌粉的制备方法如下：

步骤1：将-80℃冷冻保藏的长双歧杆菌菌株接种在基础培养基中，并在37℃的温度下培养12h，得到活化的种子培养基；

步骤2：将活化的种子培养基以2%~5%的接种量分别接种在发酵培养基中，在37℃的温度下培养8~10h，得到发酵好的菌液；

步骤3：收集菌液，采用冷冻离心机进行离心，离心条件为：温度4℃，转速6000r/min，时间10min，离心后将菌泥和保护剂，按照1：2的比例进行乳化，并真空冷冻干燥12h，冻干机的冷阱温度为-80℃，获得菌粉；

步骤4：将固体培养基加热完全融化后，冷却至50 ℃ 左右，取合适的稀释梯度的稀释液0.5 mL于灭菌培养皿中，倾注BMD培养基后混匀，每个梯度取 3 个平行样，37 ℃厌氧培养48h 后统计菌落总数。

步骤1中的基础培养基成分为：乳糖20 g/L、蛋白胨 10g/L、牛肉浸粉10 g/L、酵母膏5 g/L、L-半胱氨酸 1 g/L、磷酸氢二钾2 g/L、柠檬酸氢二胺2 g/L、乙酸钠5 g/L、七水硫酸镁 0. 25 g/L、一水硫酸锰0. 05 g/L、吐温－80 1 g/L。

步骤2中的发酵培养基成分：葡萄糖20 g/L、蛋白胨10g/L、牛肉浸粉10 g/L、酵母膏5 g/L、磷酸氢二钾2 g/L、柠檬酸氢二胺2 g/L、乙酸钠5 g/L、七水硫酸镁 4.92 g/L、L-半胱氨酸 1 g/L、色氨酸0.4 g/L，天冬氨酸0.4 g/L，一水硫酸锰0. 05 g/L、吐温-80 1 g/L。

步骤3中的保护剂成分为：脱脂奶粉110g/L、蔗糖40 g/L、味精20 g/L。

步骤4中的BMD培养基组成：乳糖 5 g/L、胰蛋白胨 10g/L、牛肉浸粉4 g/L、酵母膏3 g/L、氯化钠4 g/L、半胱氨酸盐酸盐1 g/L、莫匹罗星锂盐 25 mg/L、吐温－80 1 g/L；0.8 g/L 琼脂粉。

长双歧杆菌BL-G301菌株的分类名为长双歧杆菌BL-G301

(Bifidobacterium longum BL-G301)，保藏单位为：中国典型培养物保藏中心（CCTCC），保藏单位地址为：中国武汉武汉大学，保藏编号为CCTCC NO：M2013689，保藏时间为：2013年12月23日。

将长双歧杆菌BL-G301益生菌牛乳的制备方法制备获得物和谷物粉压片一同作为膳食搭配，改善人体肠道内的氧化应激，降低人体内炎症因子和尿毒素水平。

本发明与现有技术相比，采用益生菌干预慢性肾炎，可以降低慢性肾炎患者氧化应激水平；改善慢性肾炎患者炎症因子水平和尿毒素水平；改善粪便pH值，提升粪便有机酸含量，肠道菌群更加健康，有益菌增多，有害菌减少，菌群结构更利于肠道健康。

附图说明

图1为本发明干预后患者血液中氧化应激标志物的浓度柱状图。

图2为本发明干预后患者血液中的炎症标志物的浓度柱状图。

图3为本发明干预后患者血液中尿毒症毒素的浓度柱状图。

图4为本发明干预后患者粪便样本的pH值和有机酸的浓度柱状图。

具体实施方式

现对本发明做进一步描述。

本发明中采用的长双歧杆菌BL-G301菌株的分类名为长双歧杆菌BL-G301

(Bifidobacterium longum BL-G301)，保藏单位为：中国典型培养物保藏中心（CCTCC），保藏单位地址为：中国武汉武汉大学，保藏编号为CCTCC NO：M2013689，保藏时间为：2013年12月23日。

本发明设计了一种干预慢性肾炎及尿毒症的长双歧杆菌膳食组合，包括100mL长双歧杆菌BL-G301益生菌牛乳和40g谷物粉压片。

长双歧杆菌BL-G301益生菌牛乳的制备方法如下：

步骤1：将-80℃冷冻保藏的长双歧杆菌BL-G301 益生菌菌粉，取出备用，所述的长双歧杆菌BL-G301益生菌粉中的活菌数≥1×10

步骤2：温度至室温后，将益生菌菌粉加至巴氏灭菌牛乳中，至活菌数为7.4 ×10

谷物粉压片包括10%白糖和0.5%的氯化钠。

长双歧杆菌BL-G301益生菌菌粉的制备方法如下：

步骤1：将-80℃冷冻保藏的长双歧杆菌菌株接种在基础培养基中，并在37℃的温度下培养12h，得到活化的种子培养基；

步骤2：将活化的种子培养基以2%~5%的接种量分别接种在发酵培养基中，在37℃的温度下培养8~10h，得到发酵好的菌液；

步骤3：收集菌液，采用冷冻离心机进行离心，离心条件为：温度4℃，转速6000r/min，时间10min，离心后将菌泥和保护剂，按照1：2的比例进行乳化，并真空冷冻干燥12h，冻干机的冷阱温度为-80℃，获得菌粉；

步骤4：将固体培养基加热完全融化后，冷却至50 ℃ 左右，取合适的稀释梯度的稀释液0.5 mL于灭菌培养皿中，倾注BMD培养基后混匀，每个梯度取 3 个平行样，37 ℃厌氧培养48h 后统计菌落总数。

步骤1中的基础培养基成分为：乳糖20 g/L、蛋白胨 10g/L、牛肉浸粉10 g/L、酵母膏5 g/L、L-半胱氨酸 1 g/L、磷酸氢二钾2 g/L、柠檬酸氢二胺2 g/L、乙酸钠5 g/L、七水硫酸镁 0. 25 g/L、一水硫酸锰0. 05 g/L、吐温－80 1 g/L。

步骤2中的发酵培养基成分：葡萄糖20 g/L、蛋白胨10g/L、牛肉浸粉10 g/L、酵母膏5 g/L、磷酸氢二钾2 g/L、柠檬酸氢二胺2 g/L、乙酸钠5 g/L、七水硫酸镁 4.92 g/L、L-半胱氨酸 1 g/L、色氨酸0.4 g/L，天冬氨酸0.4 g/L，一水硫酸锰0. 05 g/L、吐温-80 1 g/L。

步骤3中的保护剂成分为：脱脂奶粉110g/L、蔗糖40 g/L、味精20 g/L。

步骤4中的BMD培养基组成：乳糖 5 g/L、胰蛋白胨 10g/L、牛肉浸粉4 g/L、酵母膏3 g/L、氯化钠4 g/L、半胱氨酸盐酸盐1 g/L、莫匹罗星锂盐 25 mg/L、吐温－80 1 g/L；0.8 g/L 琼脂粉。

将长双歧杆菌BL-G301益生菌牛乳和谷物粉压片一同作为膳食搭配，改善人体肠道内的氧化应激，降低人体内炎症因子和尿毒素水平。

结合实例对本发明的具体实施方式做进一步说明。

实施例1：

将制备好的长双歧杆菌BL-G301益生菌牛乳和高粱粉挤压片作为实验组，每天使用量为100mL益生菌的牛乳搭配40 g高粱粉挤压片；对照组为不含益生菌的巴氏灭菌牛乳和玉米粉挤压片，每天使用量为100mL益生菌的牛乳搭配40 g玉米粉挤压片。

选取58个患有慢性肾炎的志愿者，参与者年龄超过18岁，每周进行三至四次血液透析，至少三个月。人员随机分为两组，实验组和对照组各29人。

血液样本的采集是在血液透析前由合格的专业人员收集的后，将血液样本离心，立即储存在-80°C的状态。

检测样本中超氧化物歧化酶的酶活性（SOD）、丙二醛（MDA）和总抗氧化能力（TAC）。

结合图1，在氧化应激方面，得到益生菌BL-G301的实验组（SG）干预后血清MDA下降(p＜0.05)，SOD和TAC与对照组（CG）相比增加(p＜0.05)。

实施例2：

将制备好的长双歧杆菌BL-G301益生菌牛乳和高粱粉挤压片作为实验组膳食搭配，每天使用量为100mL益生菌的牛乳搭配40 g高粱粉挤压片；对照组为不含益生菌的巴氏灭菌牛乳和玉米粉挤压片，每天使用量为100mL益生菌的牛乳搭配40 g玉米粉挤压片。

选取58个患有慢性肾炎的志愿者，参与者年龄超过18岁，每周进行三至四次血液透析，至少三个月。人员随机分为两组，实验组和对照组各29人。

血液样本的采集是在血液透析前由合格的专业人员收集的后，将血液样本离心，立即储存在-80°C的状态。

检测样本中能反应炎症因子浓度的IL-6、IL-10和TNF-α浓度和C反应蛋白浓度（CRP）。

结合图2，与对照组（CG）相比，实验组（SG）CRP浓度降低(p＜0.05)；而IL-6、IL-10和TNF-α细胞因子间无明显变化(p＞

0.05)。

实施例3：

将制备好的长双歧杆菌BL-G301益生菌牛乳和高粱粉挤压片作为实验组膳食搭配，每天使用量为100mL益生菌的牛乳搭配40 g高粱粉挤压片；对照组为不含益生菌的巴氏灭菌牛乳和玉米粉挤压片，每天使用量为100mL益生菌的牛乳搭配40 g玉米粉挤压片。

选取58个患有慢性肾炎的志愿者，参与者年龄超过18岁，每周进行三至四次血液透析，至少三个月。人员随机分为两组，实验组和对照组各29人。

血液样本的采集是在血液透析前由合格的专业人员收集的后，将血液样本离心，立即储存在-80°C的状态。

检测样本中代表尿毒症程度的三个指标：血清硫酸吲哚、硫酸对甲酚和吲哚3-乙酸。

结合图3，与对照组（CG）相比，实验组（SG）血清硫酸吲哚和硫酸对甲酚浓度更低(p＜0.05)；而吲哚3-乙酸的浓度无明显变化(p＞0.05)。

实施例4

将制备好的长双歧杆菌BL-G301益生菌牛乳和高粱粉挤压片作为实验组膳食搭配，每天使用量为100mL益生菌的牛乳搭配40 g高粱粉挤压片；对照组为不含益生菌的巴氏灭菌牛乳和玉米粉挤压片，每天使用量为100mL益生菌的牛乳搭配40 g玉米粉挤压片。

选取58个患有慢性肾炎的志愿者，参与者年龄超过18岁，每周进行三至四次血液透析，至少三个月。人员随机分为两组，实验组和对照组各29人。

粪便样本由志愿者采用无菌瓶收集，收集到的粪便样本快速冷冻保存在−18°。

检测粪便样本的pH值和乙酸，丙酸和丁酸等有机酸浓度。

结合图4，与对照组（CG）相比，实验组（SG）的终点粪便pH值更低(p＜0.05)，实验组（SG）的终点乙酸，丙酸和丁酸有机酸浓度更高。

结合图1~图4表明长双歧杆菌BL-G301益生菌牛乳的制备方法制备获得物和谷物粉压片一同作为膳食搭配可以降低慢性肾炎患者血液尿毒症毒素浓度的水平，同时可以降低慢性肾炎患者粪便pH值和提升粪便有机酸浓度。