吉西他滨联合吉非替尼在膀胱癌治疗中的应用

技术领域

本发明属于生物医药领域，具体涉及吉西他滨联合吉非替尼在膀胱癌治疗中的应用。

背景技术

膀胱癌是泌尿系常见的恶性肿瘤之一。

吉西他滨(gemcitabine)是膀胱癌治疗过程中的常用药物,可用于肌层浸润性膀胱癌和非肌层浸润性膀胱癌，但患者易出现吉西他滨耐药的情况，导致膀胱癌复发及转移，生存率降低。因此有必要开发新的对膀胱癌的治疗策略。

吉非替尼(gefitinib)系第一代表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂，与细胞膜上的表皮生长因子受体特异性结合，可抑制肿瘤的生长，转移和血管生长，并增加肿瘤细胞的凋亡。目前尚未见有吉西他滨与吉非替尼联合用药在膀胱癌治疗中的应用的报道。

发明内容

本发明的第一个目的在于，提供吉西他滨联合吉非替尼在制备用于膀胱癌的治疗药物中的应用。

本发明的第二个目的在于，提供吉西他滨联合吉非替尼在制备用于耐药的膀胱癌的治疗药物中的应用。

本发明的第三个目的在于，提供吉西他滨联合吉非替尼在制备用于吉西他滨耐药的膀胱癌的治疗药物中的应用。

本发明的第四个目的在于，提供吉西他滨联合吉非替尼在制备用于复发转移的膀胱癌的治疗药物中的应用。

本发明的优点在于，

(1)吉西他滨及吉非替尼对T24GR细胞(吉西他滨耐药的T24细胞)和UM-UC-3GR细胞(吉西他滨耐药的UM-UC-3细胞)的IC

(2)吉西他滨及吉非替尼对T24GR和UM-UC-3GR细胞耐药性研究实验结果表明，吉非替尼能够在一定程度上逆转吉西他滨耐药细胞株T24GR和UM-UC-3GR的耐药性。

附图说明

图1为吉西他滨、吉非替尼及两者联用对T24GR细胞相对活性的统计图。

图2为吉西他滨、吉非替尼及两者联用对UM-UC-3GR细胞相对活性的统计图。

具体实施方式

下面结合附图和具体实施方式来对本发明作更进一步的说明，以便本领域的技术人员更了解本发明，但并不以此限制本发明。

实施例1吉西他滨、吉非替尼及两者联用对T24GR和UM-UC-3GR细胞的增殖抑制作用

细胞来源

T24GR细胞使用含10％胎牛血清+100nM吉西他滨的RPMI-1640培养基培养，每隔2d传代1次。细胞培养箱设置条件为：CO

UM-UC-3GR细胞使用含10％胎牛血清+100nM吉西他滨的RPMI-1640培养基培养，每隔2d传代1次。细胞培养箱设置条件为：CO

细胞活性检测

将悬浮的T24GR和UM-UC-3GR细胞接种于96孔板(3000个/孔/100μL)，孵育24h后，加入吉西他滨(设定浓度：0,100，200，300，400，和500nM)或吉非替尼(设定浓度：0,250，500，750，1000，2000，3000，4000，和5000nM)，继续孵育48h。每孔加入10μL CCK-8溶液，将培养板放入培养箱中孵育2h后用酶标仪测定450nm处的吸光值(OD)。细胞活性(％)＝[(实验孔吸光度-空白孔吸光度)/(对照孔吸光度-空白孔吸光度)]*100％。Graphpad计算吉西他滨及吉非替尼对T24GR和UM-UC-3GR细胞的IC

吉西他滨联合吉非替尼对T24GR和UM-UC-3GR细胞的增殖抑制作用

将悬浮的T24GR和UM-UC-3GR细胞接种于96孔板(3000个/孔/100μL)，孵育24h后，分别加入吉非替尼(400nM或700nM)和吉西他滨(设定浓度：0,100，200，300，400，和500nM)，继续孵育48h。每孔加入10μL CCK-8溶液，将培养板放入培养箱中孵育2h后酶标仪测定450nm处的吸光值(OD)。细胞活性(％)＝[(实验孔吸光度-空白孔吸光度)/(对照孔吸光度-空白孔吸光度)]*100％。Graphpad计算IC

吉西他滨和吉非替尼相互作用采用两药相互作用系数(Coefficient of druginteraction,CDI)来评价。CDI的计算公式为：CDI＝AB/(A×B)。按照OD值来计算，AB表示联合用药组OD值与对照组OD值的比值,A或B表示两药物单独使用OD值与对照组OD值的比值。当CDI<1时，两药有协同作用；当CDI＝1时，两药的作用为相加；当CDI>1时，两药的作用为拮抗或无协同作用。

统计分析

采用GraphPad Prism 8.0软件计算IC

实验结果

吉西他滨及吉非替尼对T24GR和UM-UC-3GR细胞的IC

为了研究吉西他滨联合吉非替尼使用对人膀胱癌细胞是否具有药物协同作用，首先采用CCK-8法检测不同浓度的吉西他滨联合吉非替尼作用于膀胱癌细胞48h后的细胞毒性，结果发现随着药物浓度的升高，细胞活性逐渐降低。通过GraphPad Prism 8.0软件计算，吉西他滨在T24GR和UM-UC-3GR细胞的IC

表1.吉西他滨、吉非替尼及两者联用在T24GR和UM-UC-3GR细胞中的IC

为进一步明确吉西他滨和吉非替尼的联合作用，计算吉非替尼(400nm或700nm)联合吉西他滨在T24GR和UM-UC-3GR细胞中的CDI,T24GR细胞实验结果见表2；UM-UC-3GR细胞实验结果见表3，结果显示吉非替尼与吉西他滨联用具有协同作用。

表2.吉非替尼(400nM)和吉西他滨联用在T24GR细胞中CDI计算。

表3.吉非替尼(700nM)和吉西他滨联用在UM-UC-3GR细胞中CDI计算。

实施例2吉西他滨及吉非替尼对T24GR和UM-UC-3GR细胞耐药性

为了进一步研究吉非替尼对吉西他滨耐药细胞T24GR和UM-UC-3GR耐药性的影响，采用cck-8法检测加入吉非替尼(400nM)前后T24GR细胞的逆转倍数,加入吉非替尼(400nM)前后UM-UC-3GR细胞的耐药指数(RI)的变化。结果发现，在T24GR细胞的实验中，未加入吉非替尼前，测得IC

表4.吉西他滨联合吉非替尼在T24GR和UM-UC-3GR细胞中的逆转倍数计算。

研究结论

吉非替尼具有协同增敏及逆转膀胱癌细胞株对吉西他滨耐药的特性。