一种杀菌组合物及应用

技术领域：

本发明属于农药技术领域，具体涉及一种以多粘类芽孢杆菌和甲基营养型芽孢杆菌为主要活性成分的杀菌组合物及应用。

背景技术

草莓叶角斑病，俗称草莓空心病，2017年初首次在我国发现，近两年来迅速成为危害草莓种植行业的头号杀手，为草莓生产上的一种毁灭性病害，在全国多地草莓种植区爆发，北京、辽宁、河北、陕西、山东、浙江、甘肃、云南、河南等，全国大部分草莓种植区都出现这种“空心病”。发病多在现蕾后，并且只要发病均为大面积的，症状为茎部易断，水渍状，严重时有菌脓。发病时期错过补苗的最佳时间，损失无法弥补。草莓叶角斑病病原体为草莓黄叶角斑病假单胞菌(Xanthomonas fragariae)，是一种生长缓慢、革兰氏阴性、能运动的细菌性病害。

甲基营养型芽孢杆菌是2010年Munusamy Madhaiyan等人报道的新种。甲基营养型芽孢杆菌BAC-9912是由中国科学院沈阳应用生态研究所胡江春等人从辽宁渤海海域的海泥样品中成功筛选、分离出的一株海洋细菌，简称BAC-9912。室内活性测定结果表明，甲基营养型芽孢杆菌9912经培养后产生的物质对植物真菌等类病害具有较强的抗菌活性。

多粘类芽孢杆菌是一种产芽孢且具有固氮能力的细菌，美国环境保护署(EPA)将其列为可商业上应用的微生物种类之一，我国农业农村部也将其列为免做安全鉴定的一级菌种，对植物黄萎病、鹰嘴豆枯萎病、油菜腐烂病、黑松根腐病等多种植物病害均具有一定的控制作用。

草莓叶角斑病为近两年新爆发的病害，至今在我国尚未有有效的防治药剂登记生产，常规化学药剂大多已产生较高的抗性，对细菌性病害防治效果欠佳，甲基营养型芽孢杆菌和多粘类芽孢杆菌均为微生物类天然菌种，单独使用对细菌性病害有一定的防治作用，二者复配作用机理较新，对草莓生产和病害防治有较大意义。

发明内容

本发明的目的在于提供一种防治草莓叶角斑病的杀菌组合物，可减少常规化学药剂的用量，减缓抗药性。

本发明技术方案如下：

一种杀菌组合物，该杀菌组合物的有效成份是由多粘类芽孢杆菌(Paenibacilluspolymyxa)和甲基营养型芽孢杆菌(Bacillus methylotroph-icus)组成，所述多粘类芽孢杆菌与甲基营养型芽孢杆菌的克数比为：(1～40)×200亿CFU/克：(40～1)×200亿CFU/克。

进一步方案，多粘类芽孢杆菌与甲基营养型芽孢杆菌的数比为：20×200亿CFU/克：20×200亿CFU/克。

进一步方案，所述的杀菌组合物中还包括助剂，其中有效成份含量为1～8000亿CFU/克。

进一步方案，所述杀菌组合物的剂型为可湿性粉剂。

本发明的另一个发明目的是提供上述的杀菌组合物在防治草莓叶角斑病(假单胞菌)上的应用。

假单胞菌致病机理主要是通过产生一种附着在细胞膜上的菌黄素对寄主植物新陈代谢产生影响。多粘类芽孢杆菌的抑菌机理为产生作用于细菌细胞膜的抗菌活性物质，并在在根、茎、叶等植物体内具有很强的定殖能力，可通过位点竞争阻止病原菌侵染植物。甲基营养型芽孢杆菌可分泌出有抑菌能力的代谢产物如抗菌蛋白、抗菌肽、蛋白酶、纤维素酶、β-1，3-葡聚糖酶、嗜铁素等，以从不同的途径对相应病原菌进行抑制。二者可通过不同代谢模式菌黄素产生协同抑制作用。对本发明通过实验发现，多粘类芽孢杆菌与甲基营养型芽孢杆菌复配有显著增效作用，防治效果非常好，并可减少化学农药的使用量，减少环境污染。

多粘类芽孢杆菌/甲基营养型芽孢杆菌可湿性粉剂有稳定的化学防治效果，克服了微生物制剂产品普遍初期无效果，长期防效不佳的缺点，有较强的创新性，微生物药剂残留较低，安全环保，可以作为替代常规化学药剂的合适药剂选择。

具体实施方式

申请人通过大量的室内筛选试验，发现多粘类芽孢杆菌与甲基营养型芽孢杆菌混配对草莓叶角斑病假单胞菌具有协同增效作用。

为了更好的理解发明的实质，下面结合实例对本发明的技术内容作详细的说明，但本发明的内容并不局限如此，不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。

实施例1：

试验对象为草莓叶角斑病的假单胞菌，试验药剂为多粘类芽孢杆菌、甲基营养型芽孢杆菌、多粘类芽孢杆菌与甲基营养型芽孢杆菌的组合物。

试验方法参照中华人民共和国农业行业标准《农药室内生物测定试验准则》杀菌剂NY/T 1156.16-2008，试验采用抑制细菌生长量试验浑浊度法。用DPS数据处理软件进行统计分析，计算各药剂的EC50等，以此来评价供试药剂活性。

混剂的共毒系数(CTC值)按下列公式计算：

CTC＝AT1/TTI*100％

式中：CTC－共毒系数；

AT1－混剂实测毒力指数；

TTI－混剂理论毒力指数。

其中：AT1＝S/M*100％，TTI＝TIA*PA+TIB*PB

式中：AT1－混剂实测毒力指数；

S－标准杀菌剂的EC50，单位为μg/ml；

M－混剂的EC50，单位为μg/ml；

TTI－混剂理论毒力指数；

TIA－A药剂的实测毒力指数；PA－A药剂在混剂中的百分含量，单位为％；

TIB－B药剂的实测毒力指数；PB－B药剂在混剂中的百分含量，单位为％。

以甲基营养型芽孢杆菌作为标准杀菌剂，则混剂的共毒系数CTC≥120表现为增效作用；CTC≤80表现为拮抗作用；80＜CTC＜120表现为相加作用。

表1：各单剂及其混剂对草莓叶角斑病的假单胞菌7d的毒力测定结果

结果如表1所示，室内毒力测定结果表明，多粘类芽孢杆菌与甲基营养型芽孢杆菌对草莓假单胞菌的EC50分别为：16.16、27.45mg/L。多粘类芽孢杆菌：甲基营养型芽孢杆菌质量比为40：1至1：40时(即多粘类芽孢杆菌分与甲基营养型芽孢杆菌克数比为：(40～1)×200亿CFU/克：(1～40)×200亿CFU/克时)，共毒系数(CTC)均大于120，说明各配比均具有增效作用，尤其是多粘类芽孢杆菌：甲基营养型芽孢杆菌质量比为20：1时(即多粘类芽孢杆菌与甲基营养型芽孢杆菌克数比为：20×200亿：20×200亿时)，共毒系数(CTC)最大，增效作用显著。

实施例2

一种可湿性粉剂，包括多粘类芽孢杆菌20％、甲基营养型芽孢杆菌20％、脂肪酸酯硫酸盐2％、烷基酚聚氧乙烯醚硫酸钠5％、十二烷基苯磺酸钠6％、拉开粉3％、轻质碳酸钙25％、白炭黑补足余量。

所述脂肪酸酯硫酸盐为甘油单酸酯二硫酸钠。

所述可湿性粉剂的制备方法包括以下步骤：根据配方将各组分加入到混合釜中混合均匀，通过气流粉碎机和超微粉碎机两道工序后，再次混合均匀，即可制得可湿性粉剂。

实施例3

400亿CFU/克多粘类芽孢杆菌/甲基营养型芽孢杆菌可湿性粉剂(20+20)防治草莓叶角斑病的田间小区药效试验。施药方法是兑水喷雾，在药后7天和20天分别调查草莓上的叶角斑病的危害情况，以评价其对叶角斑病的防效。

田间防治效果(安徽合肥)

由上表可知，400亿CFU/克多粘类芽孢杆菌/甲基营养型芽孢杆菌可湿性粉剂亩用有效成分为60g和30g，药后7和20天对莓叶角斑病当具有很好的效果。药后7天防效超过76％，药后20天防效超过81％；速效性与持效性均明显优于多粘类芽孢杆菌和甲基营养型芽孢杆菌单剂对照对莓叶角斑病的防治效果；并且在低用量(60a.i.g/亩)情况下，防效高于常规化学药剂5％噻霉酮微乳剂，且微生物剂型对环境安全，无残留，不易产生抗性。一般的微生物杀菌剂的防效比化学药剂差，而本发明防效高于常规化学药剂，证明400亿CFU/克多粘类芽孢杆菌/甲基营养型芽孢杆菌可湿性粉剂有稳定的化学防治效果，克服了微生物制剂产品普遍初期无效果，长期防效不佳的缺点，有较强的创新性，微生物药剂残留较低，安全环保，可以作为替代常规化学药剂的合适药剂选择。

以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非是对发明作其他形式的限制，任何熟悉本专业的技术人员可能利用上述揭示的技术内容加以变更或更改为等同变化的等效实施例，但是凡是未脱离本发明技术方案内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改，等同变化与改型，仍属于本发明技术方案的保护范围。