抗金黄色葡萄球菌抗体的组合

背景技术

耐抗菌剂(AMR)细菌病原体引起的感染对公众健康的威胁增加。经验性广谱抗生素疗法部分刺激了AMR持续流行。这已引起对包括单克隆抗体(mAb)的病原体特定方法的探索以预防或治疗严重细菌感染。众多单克隆抗体目前正在研发用于预防或治疗耐抗生素细菌感染(参见例如迪吉安多梅尼科,A.(DiGiandomenico,A.)和B.R.塞尔曼(B.R.Sellman),微生物学新见(Curr.Opin.Microbiol.),27:78-85(2015))。此类被动免疫策略提供针对目标病原体的即时和有效的免疫球蛋白反应。理想地，单克隆抗体或单克隆抗体混合物提供多种作用机制以中和关键细菌毒性机制并加强宿主先天性免疫反应，由此提供临床成功的最大机会。

金黄色葡萄球菌为细菌病原体，其引起多种疾病，包括皮肤和软组织感染、心内膜炎、骨髓炎、肺炎和菌血症(洛伊,F.D.(Lowy,F.D.),新英格兰医学杂志(N.Engl.J.Med.),339(8):520-32(1998))。临床前研究指示基于单克隆抗体的方法具有针对金黄色葡萄球菌感染的预防和辅助疗法的前景(参见例如哈曾博斯(Hazenbos)等人,公共科学图书馆：病原体(PLoS Pathog.),9(10):e1003653.doi:10.1371/journal.ppat.10036532013(2013)；罗哈,H.(Rouha,H.),MAbs,7(1):243-254(2015)；福莱蒂(Foletti)等人,分子生物学杂志(J.Mol.Biol.),425(10):1641-1654(2013)；卡拉祖姆(Karauzum)等人,生物化学杂志(JBiol Chem.),287(30):25203-15(2012)；和华(Hua)等人,抗微生物剂与化疗(AntimicrobAgents Chemother.),58(2):1108-17(2014))。然而，用个别抗体治疗可能不足以解决所有金黄色葡萄球菌感染。因此，仍需要用于治疗金黄色葡萄球菌感染，尤其对目前市售抗生素具抗性并覆盖广泛疾病和菌株的感染的组合物和方法。本公开提供此类组合物和方法。

发明内容

如本文中所证实，经由互补作用机制标靶若干不同细菌毒性因子的抗体组合可涵盖广泛菌株和广泛疾病。图1提供示例性动物模型，其支持涵盖于本文所提供的抗体组合内的菌株和疾病涵盖广度。

本文提供治疗或预防受试者的金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus/S.aureus)感染的方法，其包含向所述受试者投与(a)结合于金黄色葡萄球菌α毒素(AT)的抗体或其抗原结合片段、(b)结合于金黄色葡萄球菌凝集因子A(ClfA)的抗体或其抗原结合片段和(c)结合于至少一种金黄色葡萄球菌白细胞毒素的抗体或其抗原结合片段。

本文还提供治疗或预防受试者的金黄色葡萄球菌感染的方法，其包含向所述受试者投与结合于至少一种金黄色葡萄球菌白细胞毒素的抗体或其抗原结合片段，和(a)结合于金黄色葡萄球菌α毒素(AT)的抗体或其抗原结合片段，或(b)结合于金黄色葡萄球菌凝集因子A(ClfA)的抗体或其抗原结合片段。

本文还提供包含以下的组合物：(a)结合于金黄色葡萄球菌AT的抗体或其抗原结合片段，(b)结合于金黄色葡萄球菌ClfA的抗体或其抗原结合片段，和(c)结合于至少一种金黄色葡萄球菌白细胞毒素的抗体或其抗原结合片段。

本文还提供以下组合物，其包含结合于至少一种金黄色葡萄球菌白细胞毒素的抗体或其抗原结合片段，和(a)结合于金黄色葡萄球菌AT的抗体或其抗原结合片段，或(b)结合于金黄色葡萄球菌ClfA的抗体或其抗原结合片段。

在某些情况下，组合物用于治疗或预防受试者的金黄色葡萄球菌感染。

本文还提供结合于金黄色葡萄球菌AT的抗体和其抗原结合片段，其用于与结合于金黄色葡萄球菌ClfA的抗体或其抗原结合片段和结合于至少一种金黄色葡萄球菌白细胞毒素的抗体或其抗原结合片段组合治疗或预防受试者的金黄色葡萄球菌感染。

本文还提供结合于金黄色葡萄球菌ClfA的抗体和其抗原结合片段，其用于与结合于金黄色葡萄球菌AT的抗体或其抗原结合片段和结合于至少一种金黄色葡萄球菌白细胞毒素的抗体或其抗原结合片段组合治疗或预防受试者的金黄色葡萄球菌感染。

本文还提供结合于至少一种金黄色葡萄球菌白细胞毒素的抗体和其抗原结合片段，其用于与结合于金黄色葡萄球菌AT的抗体或其抗原结合片段和/或结合于金黄色葡萄球菌ClfA的抗体或其抗原结合片段组合治疗或预防受试者的金黄色葡萄球菌感染。

在某些情况下，组合物用于制备供治疗或预防受试者的金黄色葡萄球菌感染用的药剂。

本文还提供结合于金黄色葡萄球菌AT的抗体或其抗原结合片段的用途，其用于制备供与结合于金黄色葡萄球菌ClfA的抗体或其抗原结合片段和结合于至少一种金黄色葡萄球菌白细胞毒素的抗体或其抗原结合片段组合治疗或预防受试者的金黄色葡萄球菌感染用的药剂。

本文还提供结合于金黄色葡萄球菌ClfA的抗体或其抗原结合片段的用途，其用于制备供与结合于金黄色葡萄球菌AT的抗体或其抗原结合片段和结合于至少一种金黄色葡萄球菌白细胞毒素的抗体或其抗原结合片段组合治疗或预防受试者的金黄色葡萄球菌感染用的药剂。

本文还提供结合于金黄色葡萄球菌白细胞毒素的抗体或其抗原结合片段的用途，其用于制备供与结合于金黄色葡萄球菌AT的抗体或其抗原结合片段和/或结合于金黄色葡萄球菌ClfA的抗体或其抗原结合片段组合治疗或预防受试者的金黄色葡萄球菌感染用的药剂。

在本文提供的方法、组合物、抗体或其抗原结合片段或用途的某些情况下，结合于金黄色葡萄球菌AT的抗体或其抗原结合片段与包含含SEQ ID NO:19的氨基酸序列的VH和含SEQ ID NO:33的氨基酸序列的VL的抗体，结合于相同的金黄色葡萄球菌AT表位。在某些情况下，结合于金黄色葡萄球菌AT的抗体或其抗原结合片段竞争性地抑制包含含SEQ IDNO:19的氨基酸序列的VH和含SEQ ID NO:33的氨基酸序列的VL的抗体与金黄色葡萄球菌AT的结合。在某些情况下，结合于金黄色葡萄球菌AT的抗体或其抗原结合片段包含含SEQ IDNO:1的氨基酸序列的可变重链(VH)互补决定区(CDR)1、含SEQ ID NO:2的氨基酸序列的VHCDR2、含SEQ ID NO:3的氨基酸序列的VH CDR3、含SEQ ID NO:10的氨基酸序列的可变轻链(VL)CDR1、含SEQ ID NO:11的氨基酸序列的VL CDR2、和含SEQ ID NO:12的氨基酸序列的VLCDR3。在某些情况下，结合于金黄色葡萄球菌AT的抗体或其抗原结合片段包含含SEQ IDNO:19的氨基酸序列的VH。在某些情况下，结合于金黄色葡萄球菌AT的抗体或其抗原结合片段包含含SEQ ID NO:33的氨基酸序列的VL。在某些情况下，结合于金黄色葡萄球菌AT的抗体或其抗原结合片段包含含SEQ ID NO:47的氨基酸序列的重链。在某些情况下，结合于金黄色葡萄球菌AT的抗体或其抗原结合片段包含含SEQ ID NO:52的氨基酸序列的轻链。在某些情况下，结合于金黄色葡萄球菌AT的抗体或其抗原结合片段包含MEDI4893的VH CDR1、VHCDR2、VH CDR3、VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3。在某些情况下，CDR为卡巴特(Kabat)定义的CDR、科西亚(Chothia)定义的CDR或AbM定义的CDR。在某些情况下，结合于金黄色葡萄球菌AT的抗体或抗原结合片段进一步包含重链恒定区。在某些情况下，重链恒定区选自由以下组成的群组：人类免疫球蛋白IgG

在本文提供的方法、组合物、抗体或其抗原结合片段或用途的某些情况下，结合于金黄色葡萄球菌ClfA的抗体或其抗原结合片段作为含SEQ ID NO:20的氨基酸序列的VH和含有SEQ ID NO:34的氨基酸序列的VL的抗体，结合于相同的金黄色葡萄球菌ClfA表位。在某些情况下，结合于金黄色葡萄球菌ClfA的抗体或其抗原结合片段竞争性地抑制包含含SEQ ID NO:20的氨基酸序列的VH和含SEQ ID NO:34的氨基酸序列的VL的抗体与金黄色葡萄球菌ClfA的结合。在某些情况下，结合于金黄色葡萄球菌ClfA的抗体或其抗原结合片段包含含SEQ ID NO:4的氨基酸序列的VH CDR1、含SEQ ID NO:5的氨基酸序列的VH CDR2、含SEQ ID NO:6的氨基酸序列的VH CDR3、含SEQ ID NO:13的氨基酸序列的VL CDR1、含SEQ IDNO:14的氨基酸序列的VL CDR2和含SEQ ID NO:15的氨基酸序列的VL CDR3。在某些情况下，结合于金黄色葡萄球菌ClfA的抗体或其抗原结合片段包含含SEQ ID NO:20的氨基酸序列的VH。在某些情况下，结合于金黄色葡萄球菌ClfA的抗体或其抗原结合片段包含含SEQ IDNO:34的氨基酸序列的VL。在某些情况下，结合于金黄色葡萄球菌ClfA的抗体或其抗原结合片段包含含CSYHLC(SEQ ID NO:55)的氨基酸序列的重链恒定结构域。在某些情况下，重链恒定结构域包含氨基酸序列MHEACSYHLCQKSLSLS(SEQ ID NO:56)。在某些情况下，结合于金黄色葡萄球菌ClfA的抗体或其抗原结合片段包含含SEQ ID NO:49的氨基酸序列的重链。在某些情况下，结合于金黄色葡萄球菌ClfA的抗体或其抗原结合片段包含含SEQ ID NO:53的氨基酸序列的轻链。在某些情况下，结合于金黄色葡萄球菌ClfA的抗体或其抗原结合片段包含SAR114-N3Y的VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3、VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3。在某些情况下，结合于金黄色葡萄球菌ClfA的抗体或其抗原结合片段包含11H10、SAR72、SAR80、SAR113、SAR132、SAR352、SAR372、SAR510、SARR547、SAS1、SAS19或SAS203的VH CDR1、VHCDR2、VH CDR3、VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3。在某些情况下，CDR为卡巴特定义的CDR、科西亚定义的CDR或AbM定义的CDR。在某些情况下，结合于金黄色葡萄球菌ClfA的抗体或其抗原结合片段包含VH和VL，其中VH包含SEQ ID NO:21-31和68中的任一个中所示的氨基酸序列。在某些情况下，结合于金黄色葡萄球菌ClfA的抗体或其抗原结合片段包含VH和VL，其中VL包含SEQ ID NO:35-45和69中的任一个中所示的氨基酸序列。在某些情况下，结合于金黄色葡萄球菌ClfA的抗体或其抗原结合片段包含含以下中所示的氨基酸序列的VH和VL序列：(a)分别为SEQ ID NO:21和35，(b)分别为SEQ ID NO:22和36，(c)分别为SEQ ID NO:23和37，(d)分别为SEQ ID NO:24和38，(e)分别为SEQ ID NO:25和39，(f)分别为SEQ ID NO:26和40，(g)分别为SEQ ID NO:27和41，(h)分别为SEQ ID NO:28和42，(i)分别为SEQ ID NO:29和43，(j)分别为SEQ ID NO:30和44，(k)分别为SEQ ID NO:31和45，或(l)SEQ ID NO:68和69。在某些情况下，结合于金黄色葡萄球菌ClfA的抗体或抗原结合片段进一步包含重链恒定区。在某些情况下，重链恒定区选自由以下组成的群组：人类免疫球蛋白IgG

在本文提供的方法、组合物、抗体或其抗原结合片段或用途的某些情况下，结合于至少一种金黄色葡萄球菌白细胞毒素的抗体或其抗原结合片段结合于LukF、LukD和/或HlgB，和/或其中抗体或其抗原结合片段中和LukF、LukD和/或HlgB。在某些情况下，结合于至少一种金黄色葡萄球菌白细胞毒素的抗体或其抗原结合片段结合于LukF、LukD和HlgB，和/或其中抗体或其抗原结合片段中和LukF、LukD和HlgB。在某些情况下，结合于至少一种金黄色葡萄球菌白细胞毒素的抗体或其抗原结合片段与包含含SEQ ID NO:32的氨基酸序列的VH和含SEQ ID NO:46的氨基酸序列的VL的抗体，结合于相同的金黄色葡萄球菌白细胞毒素表位。在某些情况下，结合于至少一种金黄色葡萄球菌白细胞毒素的抗体或其抗原结合片段竞争性地抑制包含含SEQ ID NO:32的氨基酸序列的VH和含SEQ ID NO:46的氨基酸序列的VL的抗体与金黄色葡萄球菌白细胞毒素的结合。在某些情况下，结合于至少一种金黄色葡萄球菌白细胞毒素的抗体或其抗原结合片段包含含SEQ ID NO:7的氨基酸序列的VHCDR1、含SEQ ID NO:8的氨基酸序列的VH CDR2、含SEQ ID NO:9的氨基酸序列的VH CDR3、含SEQ ID NO:16的氨基酸序列的VL CDR1、含SEQ ID NO:17的氨基酸序列的VL CDR2、含SEQID NO:18的氨基酸序列的VL CDR3。在某些情况下，结合于至少一种金黄色葡萄球菌白细胞毒素的抗体或其抗原结合片段包含含SEQ ID NO:32的氨基酸序列的VH。在某些情况下，结合于至少一种金黄色葡萄球菌白细胞毒素的抗体或其抗原结合片段包含含SEQ ID NO:46的氨基酸序列的VL。在某些情况下，结合于至少一种金黄色葡萄球菌白细胞毒素的抗体或其抗原结合片段包含含SEQ ID NO:50的氨基酸序列的重链。在某些情况下，结合于至少一种金黄色葡萄球菌白细胞毒素的抗体或其抗原结合片段包含含SEQ ID NO:54的氨基酸序列的轻链。在某些情况下，结合于至少一种金黄色葡萄球菌白细胞毒素的抗体或其抗原结合片段包含SAN481-SYT的VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3、VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3。在某些情况下，CDR为卡巴特定义的CDR、科西亚定义的CDR或AbM定义的CDR。在某些情况下，结合于至少一种金黄色葡萄球菌白细胞毒素的抗体或抗原结合片段进一步包含重链恒定区。在某些情况下，重链恒定区选自由以下组成的群组：人类免疫球蛋白IgG

在本文提供的方法、组合物、抗体或其抗原结合片段或用途的某些情况下，金黄色葡萄球菌感染为败血症。在本文提供的方法、组合物、抗体或其抗原结合片段或用途的某些情况下，金黄色葡萄球菌感染为菌血症。在本文提供的方法、组合物、抗体或其抗原结合片段或用途的某些情况下，金黄色葡萄球菌感染为肺炎。在本文提供的方法、组合物、抗体或其抗原结合片段或用途的某些情况下，金黄色葡萄球菌感染为ICU肺炎。在本文提供的方法、组合物、抗体或其抗原结合片段或用途的某些情况下，金黄色葡萄球菌感染为皮肤或软组织感染(SSTI)。在本文提供的方法、组合物、抗体或其抗原结合片段或用途的某些情况下，金黄色葡萄球菌感染为糖尿病下肢感染。在本文提供的方法、组合物、抗体或其抗原结合片段或用途的某些情况下，金黄色葡萄球菌感染为糖尿病性足溃疡(DFU)。在某些情况下，DFU未感染。在某些情况下，DFU经感染。在某些情况下，DFU为1级、2级或3级DFU。在本文提供的方法、组合物、抗体或其抗原结合片段或用途的某些情况下，金黄色葡萄球菌感染为骨或关节感染。在本文提供的方法、组合物、抗体或其抗原结合片段或用途的某些情况下，金黄色葡萄球菌感染为关节感染、装置感染、伤口感染、手术部位感染或骨髓炎。

在本文提供的方法、组合物、抗体或其抗原结合片段或用途的某些情况下，受试者为手术受试者。

在本文提供的方法、组合物、抗体或其抗原结合片段或用途的某些情况下，金黄色葡萄球菌感染包含耐抗生素金黄色葡萄球菌。

在本文提供的方法、组合物、抗体或其抗原结合片段或用途的某些情况下，受试者患有糖尿病。在本文提供的方法、组合物、抗体或其抗原结合片段或用途的某些情况下，受试者为人类。

在本文提供的方法、组合物、抗体或其抗原结合片段或用途的某些情况下，治疗或预防金黄色葡萄球菌感染包含抑制金黄色葡萄球菌凝集、毒素中和、诱导调理吞噬作用(opsonophagocytosis)、抑制金黄色葡萄球菌血纤维蛋白原结合、抑制金黄色葡萄球菌凝集、抑制血栓栓塞病变形成、抑制金黄色葡萄球菌相关的败血症或前述任何组合。

在本文提供的方法、组合物、抗体或其抗原结合片段或用途的某些情况下，结合于金黄色葡萄球菌AT的抗体或其抗原结合片段和结合于金黄色葡萄球菌ClfA的抗体或其抗原结合片段在同一药物组合物中投与。在本文提供的方法、组合物、抗体或其抗原结合片段或用途的某些情况下，结合于金黄色葡萄球菌AT的抗体或其抗原结合片段和结合于金黄色葡萄球菌ClfA的抗体或其抗原结合片段在独立药物组合物中投与。在本文提供的方法、组合物、抗体或其抗原结合片段或用途的某些情况下，结合于金黄色葡萄球菌AT的抗体或其抗原结合片段和结合于至少一种金黄色葡萄球菌白细胞毒素的抗体或其抗原结合片段在同一药物组合物中投与。在本文提供的方法、组合物、抗体或其抗原结合片段或用途的某些情况下，结合于金黄色葡萄球菌AT的抗体或其抗原结合片段和结合于至少一种金黄色葡萄球菌白细胞毒素的抗体或其抗原结合片段在独立药物组合物中投与。在本文提供的方法、组合物、抗体或其抗原结合片段或用途的某些情况下，结合于金黄色葡萄球菌ClfA的抗体或其抗原结合片段和结合于至少一种金黄色葡萄球菌白细胞毒素的抗体或其抗原结合片段在同一药物组合物中投与。在本文提供的方法、组合物、抗体或其抗原结合片段或用途的某些情况下，结合于金黄色葡萄球菌ClfA的抗体或其抗原结合片段和结合于至少一种金黄色葡萄球菌白细胞毒素的抗体或其抗原结合片段在独立药物组合物中投与。在本文提供的方法、组合物、抗体或其抗原结合片段或用途的某些情况下，独立药物组合物同时投与。在本文提供的方法、组合物、抗体或其抗原结合片段或用途的某些情况下，独立药物组合物依序投与。在本文提供的方法、组合物、抗体或其抗原结合片段或用途的某些情况下，结合于金黄色葡萄球菌AT的抗体或其抗原结合片段、结合于金黄色葡萄球菌ClfA的抗体或其抗原结合片段和结合于至少一种金黄色葡萄球菌白细胞毒素的抗体或其抗原结合片段在同一药物组合物中投与。

本文还提供治疗或预防患有糖尿病的受试者的金黄色葡萄球菌感染的方法，其包含向受试者投与结合于金黄色葡萄球菌AT的抗体或其抗原结合片段。

本文还提供结合于金黄色葡萄球菌AT的抗体或其抗原结合片段，其用于治疗或预防患有糖尿病的受试者的金黄色葡萄球菌感染。

本文还提供结合于金黄色葡萄球菌AT的抗体或其抗原结合片段的用途，其用于制备供治疗或预防患有糖尿病的受试者的金黄色葡萄球菌感染用的药剂。

在本文提供的方法、组合物、抗体或其抗原结合片段或用途的某些情况下，结合于金黄色葡萄球菌AT的抗体或其抗原结合片段与包含含SEQ ID NO:19的氨基酸序列的VH和含SEQ ID NO:33的氨基酸序列的VL的抗体，结合于相同的金黄色葡萄球菌AT表位。

在本文提供的方法、抗体或其抗原结合片段或用途的某些情况下，结合于金黄色葡萄球菌AT的抗体或其抗原结合片段竞争性地抑制包含含SEQ ID NO:19的氨基酸序列的VH和包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列的VL的抗体与金黄色葡萄球菌AT的结合。

在本文提供的方法、抗体或其抗原结合片段或用途的某些情况下，结合于金黄色葡萄球菌AT的抗体或其抗原结合片段包含含SEQ ID NO:1的氨基酸序列的VH CDR1、含SEQID NO:2的氨基酸序列的VH CDR2、含SEQ ID NO:3的氨基酸序列的VH CDR3、含SEQ ID NO:10的氨基酸序列的VL CDR1、含SEQ ID NO:11的氨基酸序列的VL CDR2和含SEQ ID NO:12的氨基酸序列的VL CDR3。

在本文提供的方法、抗体或其抗原结合片段或用途的某些情况下，结合于金黄色葡萄球菌AT的抗体或其抗原结合片段包含含SEQ ID NO:19的氨基酸序列的VH。

在本文提供的方法、抗体或其抗原结合片段或用途的某些情况下，结合于金黄色葡萄球菌AT的抗体或其抗原结合片段包含含SEQ ID NO:33的氨基酸序列的VL。

在本文提供的方法、抗体或其抗原结合片段或用途的某些情况下，结合于金黄色葡萄球菌AT的抗体或其抗原结合片段包含含SEQ ID NO:47的氨基酸序列的重链。

在本文提供的方法、抗体或其抗原结合片段或用途的某些情况下，结合于金黄色葡萄球菌AT的抗体或其抗原结合片段包含含SEQ ID NO:52的氨基酸序列的轻链。

在本文提供的方法、抗体或其抗原结合片段或用途的某些情况下，结合于金黄色葡萄球菌AT的抗体或其抗原结合片段包含MEDI4893的VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3、VLCDR1、VL CDR2和VL CDR3。在某些情况下，CDR为卡巴特定义的CDR、科西亚定义的CDR或AbM定义的CDR。

在本文提供的方法、抗体或其抗原结合片段或用途的某些情况下，结合于金黄色葡萄球菌AT的抗体或抗原结合片段进一步包含重链恒定区。在某些情况下，重链恒定区选自由以下组成的群组：人类免疫球蛋白IgG

在本文提供的方法、抗体或其抗原结合片段或用途的某些情况下，结合于金黄色葡萄球菌AT的抗体或抗原结合片段进一步包含轻链恒定区。在某些情况下，轻链恒定区选自由以下组成的群组：人类免疫球蛋白IgGκ和IgGλ轻链恒定区。在某些情况下，轻链恒定区为人类IgGκ轻链恒定区。

在本文提供的方法、抗体或其抗原结合片段或用途的某些情况下，结合于金黄色葡萄球菌AT的抗体或其抗原结合片段为IgG抗体或其抗原结合片段。

在本文提供的方法、抗体或其抗原结合片段或用途的某些情况下，结合于金黄色葡萄球菌AT的抗体或其抗原结合片段包含已经工程改造以改进半衰期的Fc区。

在本文提供的方法、抗体或其抗原结合片段或用途的某些情况下，结合于金黄色葡萄球菌AT的抗体或其抗原结合片段包含具有YTE突变的Fc区。

在本文提供的方法、抗体或其抗原结合片段或用途的某些情况下，结合于金黄色葡萄球菌AT的抗体或抗原结合片段为单克隆抗体或抗原结合片段。

在本文提供的方法、抗体或其抗原结合片段或用途的某些情况下，结合于金黄色葡萄球菌AT的抗体或抗原结合片段为全长抗体。

在本文提供的方法、抗体或其抗原结合片段或用途的某些情况下，结合于金黄色葡萄球菌AT的抗体或抗原结合片段为抗原结合片段。在某些情况下，抗原结合片段包含Fab、Fab'、F(ab')

在本文提供的方法、抗体或其抗原结合片段或用途的某些情况下，结合于金黄色葡萄球菌AT的抗体或其抗原结合片段对金黄色葡萄球菌AT的亲和力为80-100pM。

在本文提供的方法、抗体或其抗原结合片段或用途的某些情况下，金黄色葡萄球菌感染为败血症。在本文提供的方法、抗体或其抗原结合片段或用途的某些情况下，金黄色葡萄球菌感染为菌血症。在本文提供的方法、抗体或其抗原结合片段或用途的某些情况下，金黄色葡萄球菌感染为肺炎。在本文提供的方法、抗体或其抗原结合片段或用途的某些情况下，金黄色葡萄球菌感染为ICU肺炎。在本文提供的方法、抗体或其抗原结合片段或用途的某些情况下，金黄色葡萄球菌感染为SSTI。在本文提供的方法、抗体或其抗原结合片段或用途的某些情况下，金黄色葡萄球菌感染为糖尿病下肢感染。在本文提供的方法、抗体或其抗原结合片段或用途的某些情况下，金黄色葡萄球菌感染为DFU。在某些情况下，DFU未感染。在某些情况下，DFU经感染。在某些情况下，DFU为1级、2级或3级DFU。在本文提供的方法、抗体或其抗原结合片段或用途的某些情况下，金黄色葡萄球菌感染为骨或关节感染。

附图说明

图1为展示一系列动物模型支持使用针对α毒素(AT)、凝集因子A(ClfA)和白细胞毒素的抗体组合以实现涵盖广泛菌株和疾病的示意图。

图2为展示与单独针对AT的抗体(MEDI4893*)的功效和针对ClfA的抗体(SAR114)与白细胞毒素的抗体(SAN481-SYT*)组合的功效相比，针对AT、ClfA和白细胞毒素的抗体组合(MEDI6389)抑制红细胞(RBC)溶血的功效的图式。(参见实例1)

图3为展示，与单独针对白细胞毒素的抗体(SAN481-SYT*)的功效和针对AT的抗体(MEDI4893*)与ClfA的抗体(SAR114)组合的功效相比，针对AT、ClfA和白细胞毒素的抗体组合(MEDI6389)维持单核细胞活力的功效的图式。(参见实例1)

图4为展示，与单独针对ClfA的抗体(SAR114)和针对AT的抗体(MEDI4893*)与白细胞毒素的抗体(SAN481-SYT*)组合的功效相比，针对AT、ClfA和白细胞毒素的抗体组合(MEDI6389)抑制血纤维蛋白原(Fg)结合的功效的图式。(参见实例1)

图5提供展示SAN481-SYT*和MEDI4893*组合在具有金黄色葡萄球菌伤口分离株的皮肤坏死(dermonecrosis)模型中优于SAN481-SYT*或MEDI4893*单独活性的图式和图像。(参见实例2)

图6提供展示AT、ClfA和白细胞毒素的中和对兔菌血症模型保护的必需性的图式。(参见实例3)

图7提供比较针对AT、ClfA和白细胞毒素的抗体组合(MEDI6389)针对以下两种不同细菌血流感染的抗体的功效的图式：HA-MRSA NRS382(上图)和CA-MRSA SF8300(下图)。(参见实例4)

图8提供展示金黄色葡萄球菌(SA)、绿脓杆菌(PA)和酿脓链球菌(SP)的混合感染与单独SA感染相比，引起糖尿病小鼠皮肤坏死模型中皮肤病变延迟闭合的图式和图像。图像展示在皮内攻击后第43天时的病变。(参见实例5)

图9提供展示针对AT、ClfA和白细胞毒素的抗体组合(MEDI6389)改善由病原菌感染引起的伤口愈合的图式和图像。(参见实例5)

图10提供HIgB(SEQ ID NO:59)、LukF(SEQ ID NO:60)和LukD(SEQ ID NO:61)的序列比对。

图11A-G展示葡萄糖含量升高与金黄色葡萄球菌感染较严重相关。(A和B)在感染金黄色葡萄球菌后，糖尿病db/db(A)和STZ(B)小鼠与非糖尿病对照相比死亡率增加。(C)在感染金黄色葡萄球菌后，糖尿病db/db小鼠在其肾脏中具有与非糖尿病对照组类似含量的金黄色葡萄球菌。(D)在感染金黄色葡萄球菌后，糖尿病STZ小鼠在其肾脏中具有与非糖尿病对照组类似含量的金黄色葡萄球菌。(E、F和G)感染金黄色葡萄球菌之前用罗格列酮处理1周，使循环葡萄糖减少(E)并且存活率增加(F)，但不影响肾脏中的细菌负荷(G)。(参见实例7)

图12A-D展示糖尿病宿主的全身性感染引起循环NET的AT依赖性增加。(A)在感染金黄色葡萄球菌后，与非糖尿病对照组相比，ELISA检测到糖尿病小鼠中血清NET增加。(B)使用抗α毒素单克隆抗体MEDI4893*中和金黄色葡萄球菌α毒素(AT)显著减少糖尿病小鼠感染后48小时的血清中NEDNA复合物的数目。(C)在感染金黄色葡萄球菌后，蛋白质印迹法(Western blot)展示与非糖尿病对照组相比，糖尿病小鼠中的瓜氨酸化组蛋白H3(H3cit)增加。(D)金黄色葡萄球菌AT的中和增加感染金黄色葡萄球菌的糖尿病小鼠的存活率。(参见实例8)

图13A-D展示糖尿病db/db小鼠低密度嗜中性粒细胞(LDN)增加。(A)在感染金黄色葡萄球菌后，与未感染的db/db小鼠或非糖尿病对照组相比，感染糖尿病db/db小鼠血液中的LDN量显著增加。(B)在感染金黄色葡萄球菌之前用罗格列酮处理1周，感染后48小时LDN减少。(C和D)在感染前在糖尿病db/db小鼠中中和金黄色葡萄球菌AT减少了LDN(C)，但不影响嗜中性粒细胞总数目(D)。(参见实例9)

图14展示，在感染金黄色葡萄球菌后，糖尿病STZ小鼠的低密度嗜中性粒细胞LDN增加。(参见实例9)

图15A-D展示在感染前递送中和TGFβ的抗体对糖尿病小鼠具有保护性。(A)TGFβ显著增加糖尿病db/db血液中LDN数目，但不增加非糖尿病对照组血液中LDN数目。(B和C)递送在金黄色葡萄球菌感染前提供的中和TGFβ的抗体减少了血液中的LDN(B)，但不影响肾脏中的细菌量(C)。(D)递送在感染前提供的中和TGFβ的抗体增加了糖尿病db/db小鼠存活率。(参见实例10)

图16A-E展示在感染前阻断αVβ6/8路径对糖尿病小鼠具有保护性。(A)在感染后，糖尿病db/db小鼠而非C57BKS小鼠的肝脏中β8阳性发炎性单核细胞和树突状细胞(DC)增加。(B)单核细胞表面上的整合素表达增加，并且DC的总数目(不为DC上β8的密度)增加。(C)与投与抗αVβ6抗体或对照抗体(c-IgG)相比，感染前中和αVβ6/8减少血流中的LDN。(D)在感染前中和αVβ6/8不影响肾脏中的细菌量。(E)与投与对照抗体(c-IgG)相比，感染前中和αVβ6/8增加存活率。(参见实例10)

图17A-C展示AT影响TGFβ活化与先天性免疫细胞上的αVβ8表达无关。(A)与未处理的糖尿病小鼠和感染非糖尿病的小鼠相比，感染糖尿病小鼠的肝脏中pSMAD含量较高。(B)中和AT显著降低肝脏中的pSMAD含量。(C)中和AT不改变表达先天性免疫细胞的αVβ8数目。(参见实例11)

具体实施方式

本公开提供结合于金黄色葡萄球菌α毒素(AT)、凝集因子A(ClfA)和至少一种白细胞毒素的抗体和其抗原结合片段(例如单克隆抗体和其抗原结合片段)的组合。本公开还提供在例如金黄色葡萄球菌感染的治疗或预防中使用此类组合的方法。

I.定义

如本文所用，术语“α毒素”或“AT”是指细菌α毒素多肽，包括(但不限于)天然α毒素多肽和α毒素多肽的同工型。“α毒素”涵盖未经处理的全长α毒素多肽以及由细胞内处理产生的α毒素多肽形式。如本文所用，术语“金黄色葡萄球菌α毒素”是指包含adsdiniktgttdigsnttvktgdlvtydkengmhkkvfysfiddknhnkkllvirtkgtiagqyrvyseeganksglawpsafkvqlqlpdnevaqisdyyprnsidtkeymstltygfngnvtgddtgkiggliganvsightlkyvqpdfktilesptdkkvgwkvifnnmvnqnwgpydrdswnpvygnqlfmktrngsmkaadnfldpnkassllssgfspdfatvitmdrkaskqqtnidviyervrddyqlhwtstnwkgtntkdkwtdrsserykidwekeemtn氨基酸序列(SEQ ID NO:57)的多肽。金黄色葡萄球菌α毒素H35L突变体具有序列adsdiniktgttdigsnttvktgdlvtydkengmlkkvfysfiddknhnkkllvirtkgtiagqyrvyseeganksglawpsafkvqlqlpdnevaqisdyyprnsidtkeymstltygfngnvtgddtgkiggliganvsightlkyvqpdfktilesptdkkvgwkvifnnmvnqnwgpydrdswnpvygnqlfmktrngsmkaadnfldpnkassllssgfspdfatvitmdrkaskqqtnidviyervrddyqlhwtstnwkgtntkdkwtdrsserykidwekeemtn(SEQ ID NO:58)。

“α毒素聚核苷酸”、“α毒素核苷酸”或“α毒素核酸”是指编码α毒素的聚核苷酸。

如本文所用，术语“凝块因子A”或“ClfA”是指细菌凝集因子A多肽，包括(但不限于)天然凝集因子A多肽和凝集因子A多肽的同工型。“凝集因子A”涵盖未经处理的全长凝集因子A多肽以及由细胞内处理产生的凝集因子A多肽形式。“凝集因子A聚核苷酸”、“凝集因子A核苷酸”、或“凝集因子A核酸”是指编码α毒素的聚核苷酸。

如本文所用，术语“白细胞毒素”是指细菌白细胞毒素多肽，包括(但不限于)天然白细胞毒素多肽和白细胞毒素多肽的同工型。“白细胞毒素”涵盖未经处理的全长白细胞毒素多肽以及由细胞内处理产生的白细胞毒素多肽形式。白细胞毒素包括LukSF、白细胞毒素ED(LukED)、HlgAB、HlgCB)和白细胞毒素AB(LukAB，也称为LukGH)。如本文所用，术语“金黄色葡萄球菌HIgB”是指包含SEQ ID NO:59的氨基酸序列的多肽。如本文所用，术语“金黄色葡萄球菌LukF”是指包含SEQ ID NO:60的氨基酸序列的多肽。如本文所用，术语“金黄色葡萄球菌LukD”是指包含SEQ ID NO:61的氨基酸序列的多肽。如本文所用，术语“金黄色葡萄球菌HIgB”是指包含SEQ ID NO:59的氨基酸序列的多肽。(参见图10)“白细胞毒素聚核苷酸”、“白细胞毒素核苷酸”、或“白细胞毒素核酸”是指编码白细胞毒素的聚核苷酸。

术语“抗体”意指经由免疫球蛋白分子的可变区内的至少一个抗原识别位点，识别并特异性结合于目标，如蛋白质、多肽、肽、碳水化合物、聚核苷酸、脂质或上述的组合的免疫球蛋白分子。如本文所用，只要抗体呈现所需生物活性，则术语“抗体”涵盖完整多克隆抗体、完整单克隆抗体、嵌合抗体、人源化抗体、人类抗体、包含抗体的融合蛋白和任何其它经修饰的免疫球蛋白分子。抗体可基于其重链恒定结构域(分别称为α、δ、ε、γ和μ)的一致性而具有任何五个主要类别的免疫球蛋白：IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，或其子类(同种型)(例如，IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2)。免疫球蛋白的不同类别具有不同并且熟知的次单元结构和三维构型。抗体可为裸抗体或与如毒素、放射性同位素等其它分子结合。

如本文所用的术语“单克隆抗体”是指由B细胞的单一克隆产生并结合于相同的表位的抗体。与此相比，术语“多克隆抗体”是指由不同B细胞产生并结合于相同的抗原的不同表位的抗体群体。

术语“抗体片段”是指完整抗体的一部分。“抗原结合片段”、“抗原结合结构域”、或“抗原结合区”是指结合于抗原的完整抗体的一部分。抗原结合片段可含有完整抗体的抗原决定区(例如互补决定区(CDR))。抗体的抗原结合片段的实例包括(但不限于)Fab、Fab'、F(ab')2和Fv片段、线性抗体和单链抗体。抗体的抗原结合片段可源于任何动物物种，如啮齿动物(例如小鼠、大鼠或仓鼠)和人类或可人工产生。

完整的抗体通常由四个多肽组成：重(H)链多肽的两个一致拷贝和轻(L)链多肽的两个一致拷贝。重链中的每一个含有一个N端可变(VH)区和三个C端恒定(CHI、CH2和CH3)区，并且每一轻链含有一个N端可变(VL)区和一个C端恒定(CL)区。每对轻链和重链的可变区形成抗体的抗原结合位点。VH区和VL区具有相同通式结构，其中每一区包含四个框架区，其序列相对保守。如本文所用，术语“框架区”是指位于高变区或互补决定区(CDR)之间的可变区内相对保守的氨基酸序列。在每一可变结构域中存在四个框架区，称为FR1、FR2、FR3和FR4。框架区形成提供可变区的结构框架的β片(参见例如C.A.詹韦(C.A.Janeway)等人(编),免疫学(Immunobiology),第5版,加兰德出版公司(Garland Publishing),纽约,NY(2001))。称为CDR1、CDR2和CDR3的三个CDR形成抗体的“高变区”，其负责抗原结合。

术语“VL”和“VL结构域”可互换地用于指抗体的轻链可变区。

术语“VH”和“VH结构域”可互换地用于指抗体的重链可变区。

术语“卡巴特编号”和类似术语在所属领域中得到认可，并且是指编号抗体或其抗原结合片段的重链和轻链可变区中的氨基酸残基的系统。在某些方面，CDR可根据卡巴特编号系统确定(参见例如卡巴特EA和武TT(Wu TT)(1971)纽约科学院学报(Ann NY Acad Sci)190:382-391和卡巴特EA等人,(1991)免疫相关蛋白的序列(Sequences of Proteins ofImmunological Interest),第五版,美国卫生和公共服务部(U.S.Department of Healthand Human Services),NIH出版社(NIH Publication)第91-3242页)。使用卡巴特编号系统，抗体重链分子内的CDR通常存在于氨基酸位置31至35处，其任选地在35之后可包括一个或两个额外氨基酸(在卡巴特编号方案中称为35A和35B)(CDR1)；氨基酸位置50至65处(CDR2)；和氨基酸位置95至102处(CDR3)。使用卡巴特编号系统，抗体轻链分子内的CDR通常存在于氨基酸位置24至34处(CDR1)、氨基酸位置50至56处(CDR2)和氨基酸位置89至97处(CDR3)。在一特定实施例中，本文所述抗体的CDR根据卡巴特编号方案确定。

而科西亚提及结构环的位置(科西亚和莱斯克(Lesk),分子生物学杂志196:901-917(1987))。在使用卡巴特编号约定进行编号时，科西亚CDR-H1环末端在H32与H34之间变化，其取决于环的长度(这是因为卡巴特编号方案将插入置于H35A和H35B处；如果既不存在35A，也不存在35B，那么环末端位于32处；如果仅存在35A，那么环末端位于33处；如果35A与35B皆存在，那么环末端位于34处)。AbM高变区代表卡巴特CDR与科西亚结构环之间的折衷，并用于牛津分子(Oxford Molecular)的AbM抗体模型化软件中。

如本文所用，术语“恒定区”或“恒定结构域”为可互换的并具有其在所属领域中的共同含义。恒定区为抗体部分，例如不与抗体与抗原的结合直接相关但可展现各种效应功能(如与Fc受体的相互作用)的轻和/或重链的羧基端部分。相对于免疫球蛋白可变结构域，免疫球蛋白分子的恒定区的氨基酸序列一般较保守。

如本文所用，术语“重链”当在关于抗体使用时，基于恒定结构域的氨基酸序列，可指任何不同类型，例如阿尔法(alpha，α)、德耳塔(delta，δ)、伊普西隆(epsilon，ε)、伽玛(gamma，γ)和米欧(mu，μ)，其分别产生抗体的IgA、IgD、IgE、IgG和IgM类别，包括IgG的子类，例如IgG

如本文所用，术语“轻链”当在关于抗体使用时，基于恒定结构域的氨基酸序列，可指任何不同类型，例如卡帕(kappa，κ)或拉姆达(lambda，λ)。轻链氨基酸序列为所属领域中熟知的。在特定实施例中，轻链为人类轻链。

“嵌合”抗体是指包含人类和非人类区域两者的抗体或其片段。“人源化”抗体为包含人类抗体骨架和至少一个由非人类抗体获得或源于非人类抗体的CDR的抗体。非人类抗体包括从任何非人类动物、如啮齿动物(例如小鼠或大鼠)分离的抗体。人源化抗体可包含由非人类抗体获得或源于非人类抗体的一个、两个或三个CDR。完全人类抗体不含任何由非人类动物获得或源于非人类动物的氨基酸残基。应了解，完全人类和人源化抗体比小鼠或嵌合抗体在人类中诱发免疫反应的风险较低(参见例如哈丁(Harding)等人,mAbs,2(3):256-26(2010))。

如本文所用，“表位”为所属领域中的术语并且是指抗体或其抗原结合片段可特异性结合的抗原的局部区域。表位可为例如多肽的相邻氨基酸(线性或相邻表位)，或表位可例如由一个或多个多肽的两个或更多个非相邻区域一起形成(构形、非线性、非连续或非相邻表位)。在某些实施例中，抗体或其抗原结合片段结合的表位可通过例如NMR光谱分析、X射线衍射结晶学研究、ELISA分析、氢/氘交换质谱分析联用(例如液相色谱电喷雾质谱分析)、基于阵列的寡肽扫描分析，和/或突变诱发定位(例如定点突变诱发定位)来确定。对于X射线结晶学，结晶可使用所属领域中已知的方法中任一种实现(例如吉戈R(GiegéR)等人,(1994)晶体学报D辑：生物晶体学(Acta Crystallogr D Biol Crystallogr)50(Pt 4):339-350；麦克弗森A(McPherson A)(1990)欧洲生物化学杂志(Eur J Biochem)189:1-23；查彦NE(Chayen NE)(1997)结构(Structure)5:1269-1274；麦克弗森A(1976)欧洲生物化学杂志251:6300-6303)。抗体/其抗原结合片段：抗原晶体可使用熟知X射线衍射技术研究并可使用计算机软件，如X-PLOR(耶鲁大学(Yale University),1992,由分子模拟公司(Molecular Simulations,Inc.)发布；参见例如酶学方法(Meth Enzymol)(1985)第114&115卷,怀科夫HW(Wyckoff HW)等人编；U.S.2004/0014194)和BUSTER(布赖科尼G(BricogneG)(1993)晶体学报D辑：生物晶体学49(Pt 1):37-60；布赖科尼G(1997)酶学方法276A:361-423,编者卡特CW(Carter CW)；罗韦西P(Roversi P)等人,(2000)晶体学报D辑：生物晶体学56(Pt 10):1316-1323)精化。突变诱发定位研究可使用所属领域技术人员已知的任何方法来实现。参见例如钱普M(Champe M)等人,(1995)生物化学杂志270:1388-1394和坎宁安BC(Cunningham BC)和威尔斯JA(Wells JA)(1989)科学244:1081-1085关于突变诱发技术的描述，包括丙氨酸扫描突变诱发技术。

作为参考抗体“结合于相同的表位”的抗体是指作为参考抗体结合于相同的氨基酸残基的抗体。抗体作为参考抗体结合于相同的表位的能力可通过氢/氘交换分析(见科尔斯(Coales)等人质谱学快讯(Rapid Commun.Mass Spectrom.)2009；23:639-647)或x射线结晶学来确定。

如本文所用，术语“免疫特异性结合”、“免疫特异性识别”、“特异性结合”和“特异性识别”为在抗体或其抗原结合片段的上下文中的类似术语。这些术语指示抗体或其抗原结合片段经由其抗原结合结构域结合于表位，并且所述结合需要抗原结合结构域与表位之间的一些互补性。因此，举例来说，如通过例如放射免疫分析(radioimmunoassay，RIA)、酶联免疫吸附分析(enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)、BiaCore或octet结合分析所测量，“特异性结合”于第一金黄色葡萄球菌白细胞毒素的抗体也可结合于其它金黄色葡萄球菌白细胞毒素，但与无关的非白细胞毒素蛋白质的结合程度小于抗体与第一金黄色葡萄球菌白细胞毒素的结合的约10％。

如果抗体以一种致使抗体在某种程度上阻断参考抗体与表位的结合的程度优先结合于表位或重叠表位，那么所述抗体称为“竞争性地抑制”参考抗体与给定表位的结合。竞争性地抑制可通过所属领域中已知的任何方法，例如竞争ELISA分析来确定。抗体可称为竞争性地抑制参考抗体与给定表位的结合至少90％、至少80％、至少70％、至少60％或至少50％。

术语“核酸序列”意图涵盖DNA或RNA的聚合物，即聚核苷酸，其可为单链或双链的并且可含有非天然或改变的核苷酸。如本文所用，术语“核酸”和“聚核苷酸”是指任何长度的核苷酸，核糖核苷酸(RNA)或去氧核糖核苷酸(DNA)的聚合形式。这些术语是指分子的一级结构，并且因此包括双链和单链DNA以及双链和单链RNA。所述术语包括由核苷酸类似物和经修饰的聚核苷酸(如但不限于甲基化和/或封端聚核苷酸)制成的RNA或DNA类似物作为等效物。尽管所属领域中已知许多其它键(例如硫代磷酸酯、硼烷磷酸酯等)，但核酸通常经由磷酸酯键连接以形成核酸序列或聚核苷酸。

金黄色葡萄球菌感染可例如以皮肤或软组织感染(SSTI)或菌血症形式发生。金黄色葡萄球菌细菌可穿过血流并感染体内部位，引起肺炎、ICU肺炎、糖尿病下肢感染、糖尿病性足溃疡(DFU)、骨或关节感染、装置感染、伤口感染、手术部位感染或骨髓炎。

如本文所用，“转染”、“转化”或“转导”是指通过使用物理或化学方法将一种或多种外源聚核苷酸引入到宿主细胞中。许多转染技术为所属领域中已知的并包括例如磷酸钙DNA共沉淀(参见例如默雷E.J.(Murray E.J.)(编),分子生物学方法(Methods inMolecular Biology),第7卷,基因转移和表达方案(Gene Transfer and ExpressionProtocols),胡玛纳出版社(Humana Press)(1991))；DEAE-聚葡萄糖；电穿孔；阳离子脂质体介导的转染；钨粒子促进的微粒轰击(约翰斯顿(Johnston),自然(Nature),346:776-777(1990))；和磷酸锶DNA共沉淀(布拉什(Brash)等人,分子与细胞生物学(Mol.Cell Biol.),7:2031-2034(1987))。在感染性颗粒在适合的包装细胞中生长之后，可将噬菌体或病毒载体引入到宿主细胞中，其中许多为市售的。

如本文所用，术语“治疗(treatment/treating)”等是指获得所需药理学和/或生理学作用。在一实施例中，所述作用为治疗性的，即所述作用部分或完全地治愈疾病和/或可归因于所述疾病的不良症状。

“治疗有效量”是指在必需剂量下并在必需时间段内有效实现所需治疗结果(例如治疗金黄色葡萄球菌感染)的量。治疗有效量可根据以下因素而变化，如个体的疾病病况、年龄、性别和体重，以及抗体或抗原结合片段在个体中引发所需反应的能力。

“预防有效量”是指在必需剂量下并在必需时间段内有效实现所需预防结果(例如预防金黄色葡萄球菌感染或疾病发作)的量。

如本文所用，术语“投与(administer/administering/administration)”等是指可用于使得药物(例如抗金黄色葡萄球菌抗体或其抗原结合片段的组合)能够递送到所需生物作用部位(例如静脉内投与)的方法。可与本文所述的试剂和方法一起采用的投与技术见于例如戈德曼(Goodman)和吉尔曼(Gilman),治疗学的药理学基础(ThePharmacological Basis of Therapeutics),现行版,培格曼(Pergamon)；和雷明顿的医药科学(Remington's,Pharmaceutical Sciences),现行版,马克出版公司(Mack PublishingCo.),宾夕法尼亚州伊斯顿(Easton,Pa)中。

与一种或多种其它治疗剂“组合”投与包括以任何次序同时(同步)或连续投与。

除非上下文另外清楚指出，否则如本公开和权利要求书中所用，单数形式“一(a/an)”和“所述”包括复数形式。

除非上下文有特别规定或显而易见，否则如本文所用，术语“或”应理解为包括性的。如本文“A和/或B”短语中所用的术语“和/或”意图包括“A和B”两者、“A或B”、“A”和“B”。同样，如“A、B和/或C”短语中所用的术语“和/或”意图涵盖以下实施例中的每一个：A、B和C；A、B或C；A或C；A或B；B或C；A和C；A和B；B和C；A(单独)；B(单独)；和C(单独)。

II.抗金黄色葡萄球菌抗体和其组合

如本文所提供，结合于金黄色葡萄球菌蛋白质的抗体和其抗原结合片段(例如单克隆抗体和片段)可组合使用。确切地说，结合于金黄色葡萄球菌α毒素(AT)蛋白质的抗体和其抗原结合片段、结合于金黄色葡萄球菌凝集因子A(ClfA)蛋白质的抗体和其抗原结合片段，和结合于至少一种金黄色葡萄球菌白细胞毒素蛋白质的抗体和其抗原结合片段可有利地组合使用。

α毒素(AT)为若干金黄色葡萄球菌疾病中的关键毒性因子，包括肺炎、皮肤和软组织感染(SSTI)和菌血症(布贝克·沃登伯格,J.(Bubeck Wardenburg,J.)和O.施内温德(O.Schneewind),实验医学杂志(J.Exp.Med.),205:287-294(2008)；因岛(Inoshima)等人,研究性皮肤病学杂志(J.Invest.Dermatol.),132:1513-1516(2012)；和福莱蒂等人,同上)。用抗AT单克隆抗体进行被动免疫降低肺炎和皮肤坏死模型的疾病严重程度(华等人,抗微生物剂与化疗,58:1108-1117(2014)；特卡奇克(Tkaczyk)等人,临床与疫苗免疫学(Clin.Vaccine Immunol.),19:377-385(2012)；和拉格尔,B.E.(Ragle,B.E.)和J.布贝克·沃登伯格,感染与免疫(Infect.Immun.),77:2712-2718(2009))，并且在小鼠致死性菌血症和肺炎模型中用含有H35L突变(ATH35L)的AT类毒素接种疫苗，保护小鼠致死性菌血症和肺炎模型免于死亡(布贝克·沃登伯格,同上,福莱蒂等人,同上,华等人,同上,拉格尔,同上,孟席斯,B.E.(Menzies,B.E.)和D.S克诺德尔(D.S Kernodle),感染与免疫,77:2712-2718(2009)；和阿迪卡里(Adhikari)等人,公共科学图书馆：综合(PLoS One),7:e38567(2012))。AT促成在菌血症和败血症期间的金黄色葡萄球菌发病机制的多个方面，包括刺激败血症诱发性反应特征和激活ADAM10介导的内皮紧密接面分裂，从而引起血管完整性损失(鲍尔斯(Powers)等人,传染病杂志(J Infect.Dis.),206:352-356(2012)；威尔克,G.A.(Wilke,G.A.)和J.布贝克·沃登伯格,美国国家科学院院刊(Proc.Natl.Acad.Sci.USA),107:13473-13478(2010)；和贝克(Becker)等人,先天性免疫杂志(J Innate Immun.),6:619-631(2014))。还已证实AT标靶血小板，经由血小板-嗜中性粒细胞聚集体形成防止修复受损内皮屏障和促成器官功能障碍(鲍尔斯等人,細胞宿主和微生物(Cell HostMicrobe),17:775-787(2015))。α毒素结构和功能详述于例如帕迪,S.(Bhakdi,S.)和J.特拉纳姆-詹森(J.Tranum-Jensen),微生物学和分子生物学评论(Microbiol.Mol.Biol.Rev.),55(4):733-751(1991)中。

结合AT的单克隆和多克隆抗体为所属领域中已知的(参见例如华等人,抗微生物剂与化疗,58(2):1108-1117(2014)；和奥加尼扬(Oganesyan)等人,生物化学杂志(J.Biol.Chem.),289:29874-29880(2014))并可购自以下来源，如西格玛奥德里奇(SigmaAldrich)(密苏里州圣路易斯(St.Louis,MO))和艾博抗(AbCam)(马萨诸塞州剑桥(Cambridge,MA))。结合于AT的示例性抗体公开于例如WO 2012/109285和WO 2014/074540(两者均以全文引用的方式并入本文中)中。

在一情况下，特异性结合于金黄色葡萄球菌α毒素(AT)的抗体或抗原结合片段(例如单克隆抗体或片段)包含以下、基本上由以下组成或由以下组成：(i)包含SEQ ID NO:1的CDR1氨基酸序列、SEQ ID NO:2的CDR2氨基酸序列和SEQ ID NO:3的CDR3氨基酸序列的重链多肽，和(ii)包含SEQ ID NO:10的CDR1氨基酸序列、SEQ ID NO:11的CDR2氨基酸序列和SEQID NO:12的CDR3氨基酸序列的轻链多肽。在另一情况下，特异性结合于金黄色葡萄球菌AT的抗体或抗原结合片段(例如单克隆抗体或片段)的重链多肽包含SEQ ID NO:19的可变区氨基酸序列、基本上由所述可变区氨基酸序列组成或由所述可变区氨基酸序列组成。在另一情况下，特异性结合于金黄色葡萄球菌AT的抗体或抗原结合片段(例如单克隆抗体或片段)的轻链多肽包含SEQ ID NO:33的可变区氨基酸序列、基本上由所述可变区氨基酸序列组成或由所述可变区氨基酸序列组成。在另一情况下，特异性结合于金黄色葡萄球菌AT的抗体或抗原结合片段(例如单克隆抗体或片段)包含以下、基本上由以下组成或由以下组成：包含SEQ ID NO:19的氨基酸序列、基本上由所述氨基酸序列组成或由所述氨基酸序列组成的可变重链和包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列、基本上由所述氨基酸序列组成或由所述氨基酸序列组成的轻链可变区。在另一情况下，特异性结合于金黄色葡萄球菌AT的抗体或抗原结合片段(例如单克隆抗体或片段)包含以下、基本上由以下组成或由以下组成：包含SEQ ID NO:47的氨基酸序列、基本上由所述氨基酸序列组成或由所述氨基酸序列组成的重链和/或包含SEQ ID NO:52的氨基酸序列、基本上由所述氨基酸序列组成或由所述氨基酸序列组成的轻链可变区。

在许多金黄色葡萄球菌表面黏附素中，已证实凝集因子A(ClfA)在严重血流感染中起重要作用(福斯特(Foster)等人,自然综述：微生物学(Nat.Rev.Microbiol.),12:49-62(2014)；和(Murphy)等人,人类疫苗(Hum.Vaccin.),7(增刊):51-59(2011))。ClfA结合血纤维蛋白原，并促进细菌附着于血纤维蛋白原和细菌凝集两者，这两者均为金黄色葡萄球菌血流感染发展中的关键属性(沃道克斯(Vaudaux)等人,感染与免疫,63:585-590(1995)；麦克德维特(McDevitt)等人,分子微生物学(Mol.Microbiol.),11:237-248(1994)；和麦克德维特等人,欧洲生物化学杂志,247:416-424(1997))。在损伤部位处结合于纤维蛋白或血纤维蛋白原或在留置装置上涂布的ClfA可促进细菌定殖(福斯特等人,同上)和细菌凝集，其被认为增强了细菌侵袭性(麦克德维特等人,欧洲生物化学杂志,247:416-424(1997)；姆卡多夫(McAdow)等人,公共科学图书馆：病原体,7:e1002307(2011)；弗立克(Flick)等人,血液(Blood),121:1783-1794(2013)；和罗斯福克(Rothfork)等人,免疫学杂志(J.Immunol.),171:5389-5395(2003))。还报告了ClfA损害调理吞噬活性细菌杀灭(opsonophagocytic bacterial killing，OPK)所需的补体沉积(海尔(Hair)等人,感染与免疫,78:1717-1727(2010))。与这些观察结果一致，同基因ΔclfA突变体在感染模型中呈现毒性降低(姆卡多夫等人,同上；约瑟夫森(Josefsson)等人,公共科学图书馆：综合,3:e2206(2008)；和约瑟夫森等人,传染病杂志,184:1572-1580(2001))。另外，用富含人类抗ClfA的静脉内(i.v.)免疫球蛋白(Ig)(INH-A21或维罗那(Veronate))或单克隆抗体(特非珠单抗(tefibazumab)或奥雷西斯(Aurexis))进行被动免疫改善患有金黄色葡萄球菌血流感染的患者的疾病结果(韦纳奇(Vernachio)等人,抗微生物剂与化疗,47:3400-3406(2003)；和韦纳奇等人,抗微生物剂与化疗,50:511-518(2006))。然而，这些抗体制剂在用万古霉素进行预防或辅助疗法以预防或治疗极低出生体重婴儿的金黄色葡萄球菌菌血症的临床研究中未能改善结果(齐库赫(DeJonge)等人,小儿科杂志(J.Pediatr.),151:260-265(2007)；卡帕雷利(Capparelli)等人,抗微生物剂与化疗,49:4121-4127(2005)；和布鲁姆(Bloom)等人,小儿传染病杂志(Pediatr.Infect.Dis.),24:858-866(2005))。ClfA结构和功能详述于例如麦克德维特等人,分子微生物学,11:237-248(1994))中。

结合ClfA的单克隆和多克隆抗体为所属领域中已知的(参见例如美国专利7,364,738；霍尔(Hall)等人,感染与免疫,71(12):6864-6870(2003)；和韦纳奇等人,抗微生物剂与化疗,47(11):3400-3406(2003))并可购自以下来源，如创新生物实验室(CreativeBiolabs)(纽约州雪莉(Shirley,NY))。结合于ClfA的示例性抗体公开于例如WO 2014/074540和US 62/702,762(两者均以全文引用的方式并入本文中)中。

在一情况下，特异性结合于金黄色葡萄球菌凝集因子A(ClfA)的抗体或抗原结合片段(例如单克隆抗体或片段)包含以下、基本上由以下组成或由以下组成：(i)包含SEQ IDNO:4的CDR1氨基酸序列、SEQ ID NO:5的CDR2氨基酸序列和SEQ ID NO:6的CDR3氨基酸序列的重链多肽，和(ii)包含SEQ ID NO:13的CDR1氨基酸序列、SEQ ID NO:14的CDR2氨基酸序列和SEQ ID NO:15的CDR3氨基酸序列的轻链多肽。在另一情况下，特异性结合于金黄色葡萄球菌ClfA的抗体或抗原结合片段(例如单克隆抗体或片段)的重链多肽包含SEQ ID NO:20的可变区氨基酸序列、基本上由所述可变区氨基酸序列组成或由所述可变区氨基酸序列组成。在另一情况下，特异性结合于金黄色葡萄球菌ClfA的抗体或抗原结合片段(例如单克隆抗体或片段)的轻链多肽包含SEQ ID NO:34的可变区氨基酸序列、基本上由所述可变区氨基酸序列组成或由所述可变区氨基酸序列组成。在另一情况下，特异性结合于金黄色葡萄球菌ClfA的抗体或抗原结合片段(例如单克隆抗体或片段)包含以下、基本上由以下组成或由以下组成：包含SEQ ID NO:20的氨基酸序列、基本上由所述氨基酸序列组成或由所述氨基酸序列组成的可变重链和包含SEQ ID NO:34的氨基酸序列、基本上由所述氨基酸序列组成或由所述氨基酸序列组成的轻链可变区。在某些情况下，特异性结合于金黄色葡萄球菌ClfA的抗体或抗原结合片段(例如单克隆抗体或片段)包含重链恒定结构域，所述重链恒定结构域包含CSYHLC(SEQ ID NO:55)、MHEACSYHLCQKSLSLS(SEQ ID NO:56)或SEQ ID NO:49的氨基酸233-454的氨基酸序列。在另一情况下，特异性结合于金黄色葡萄球菌ClfA的抗体或抗原结合片段(例如单克隆抗体或片段)包含以下、基本上由以下组成或由以下组成：包含SEQ ID NO:49的氨基酸序列、基本上由所述氨基酸序列组成或由所述氨基酸序列组成的重链和/或包含SEQ ID NO:53的氨基酸序列、基本上由所述氨基酸序列组成或由所述氨基酸序列组成的轻链可变区。

在另一情况下，在血纤维蛋白原结合抑制分析中，特异性结合于金黄色葡萄球菌ClfA的抗体或抗原结合片段(例如单克隆抗体或片段)(例如具有SAR114-N3Y的CDR、VH和/或VL或重链和/或轻链的抗体)对于ClfA001、ClfA002和ClfA004的IC50在2μg/ml内。举例来说，抗体或其抗原结合片段对于ClfA001、ClfA002和ClfA004的IC

在另一情况下，特异性结合于金黄色葡萄球菌ClfA的抗体或抗原结合片段(例如单克隆抗体或片段)(例如具有SAR114-N3Y的CDR、VH和/或VL或重链和/或轻链的抗体)在23℃暴露于常规白光2kLux/小时14天后，其单体纯度降低不超过5％。

白细胞毒素为另一类型的金黄色葡萄球菌毒性因子。白细胞毒素标靶大范围的免疫细胞进行破坏。白细胞毒素包括潘顿-华伦丁(Panton-Valentine)杀白细胞素(LukSF-PV，也称为LukSF)、白细胞毒素ED(LukED)、γ溶血素(其以两种毒素形式存在：HlgAB和HlgCB)和白细胞毒素AB(LukAB，也称为LukGH)。在某些情况下，结合于至少一种白细胞毒素的抗体或其抗原结合片段结合于LukF、LukD和/或HIgAB。在某些情况下，结合于至少一种白细胞毒素的抗体或其抗原结合片段结合于LukF、LukD和HIgB。

在一情况下，特异性结合于至少一种金黄色葡萄球菌白细胞毒素的抗体或抗原结合片段(例如单克隆抗体或片段)包含以下、基本上由以下组成或由以下组成：(i)包含SEQID NO:7的CDR1氨基酸序列、SEQ ID NO:8的CDR2氨基酸序列和SEQ ID NO:9的CDR3氨基酸序列的重链多肽，和(ii)包含SEQ ID NO:16的CDR1氨基酸序列、SEQ ID NO:17的CDR2氨基酸序列和SEQ ID NO:18的CDR3氨基酸序列的轻链多肽。在另一情况下，特异性结合于至少一种金黄色葡萄球菌白细胞毒素的抗体或抗原结合片段(例如单克隆抗体或片段)的重链多肽包含SEQ ID NO:32的可变区氨基酸序列、基本上由所述可变区氨基酸序列组成或由所述可变区氨基酸序列组成。在另一情况下，特异性结合于至少一种金黄色葡萄球菌白细胞毒素的抗体或抗原结合片段(例如单克隆抗体或片段)的轻链多肽包含SEQ ID NO:46的可变区氨基酸序列、基本上由所述可变区氨基酸序列组成或由所述可变区氨基酸序列组成。在另一情况下，特异性结合于至少一种金黄色葡萄球菌白细胞毒素的抗体或抗原结合片段(例如单克隆抗体或片段)包含以下、基本上由以下组成或由以下组成：包含SEQ ID NO:32的氨基酸序列、基本上由所述氨基酸序列组成或由所述氨基酸序列组成的可变重链，和包含SEQ ID NO:46的氨基酸序列、基本上由所述氨基酸序列组成或由所述氨基酸序列组成的轻链可变区。在另一情况下，特异性结合于至少一种金黄色葡萄球菌白细胞毒素的抗体或抗原结合片段(例如单克隆抗体或片段)包含以下、基本上由以下组成或由以下组成：包含SEQ ID NO:50的氨基酸序列、基本上由所述氨基酸序列组成或由所述氨基酸序列组成的重链，和/或包含SEQ ID NO:54的氨基酸序列、基本上由所述氨基酸序列组成或由所述氨基酸序列组成的轻链可变区。

下文提供示例性抗AT、抗ClFA和抗白细胞毒素抗体的序列。其它抗AT抗体提供于例如美国专利第9,527,905号中，其以全文引用的方式并入本文中。在某些情况下，本文所述的抗体或其抗原结合片段结合于AT、ClfA或至少一种白细胞毒素并包含下表列出的抗体的六个CDR(即抗体的三个VH CDR列于第一个表中，和相同抗体的三个VL CDR列于第二个表中)。

抗AT抗体MEDI4893为先前国际专利申请公开WO 2012/109285和WO 2014/074540(两者均以全文引用的方式并入本文中)中所述的MEDI4893*或“LC10”的半衰期延长(YTE)版本。抗ClfA抗体SAR114-N3Y描述于美国临时申请第62/702,762号中。抗白细胞毒素抗体SAN481-SYT为SAN481-SYT*的半衰期延长(YTE)版本。SAN481-SYT*不含YTE突变。

VH CDR氨基酸序列

VL CDR氨基酸序列

在某些情况下，本文所述的抗体或其抗原结合片段结合于AT、ClfA或至少一种白细胞毒素并包含下表中列出的(例如)与VL组合的抗体VH。

可变重链(VH)氨基酸序列

在某些情况下，本文所述的抗体或其抗原结合片段结合于AT、ClfA或至少一种白细胞毒素并包含下表列出的(例如)与VH，任选地与前述表中列出的相同抗体VH组合的抗体VL。

可变轻链(VL)氨基酸序列

在某些情况下，本文所述的抗体或其抗原结合片段结合于AT、ClfA或至少一种白细胞毒素并包含下表列出的(例如)与轻链组合的抗体重链。

全长重链氨基酸序列

在某些情况下，本文所述的抗体或其抗原结合片段结合于AT、ClfA或至少一种白细胞毒素并包含下表列出的(例如)与重链、任选地与前述表中列出的相同抗体重链组合的抗体轻链。

全长轻链氨基酸序列

在某些方面，抗体或其抗原结合片段的CDR可根据科西亚编号方案确定，其是指免疫球蛋白结构环的位置(参见例如科西亚C和莱斯克AM,(1987),分子生物学杂志196:901-917；拉兹卡尼B(Al-Lazikani B)等人,(1997)分子生物学杂志273:927-948；科西亚C等人,(1992)分子生物学杂志227:799-817；特拉蒙塔诺A(Tramontano A)等人,(1990)分子生物学杂志215(1):175-82；和美国专利第7,709,226号)。通常，当使用卡巴特编号约定时，科西亚CDR-H1环存在于重链氨基酸26至32、33或34处，科西亚CDR-H2环存在于重链氨基酸52至56处，并且科西亚CDR-H3环存在于重链氨基酸95至102处，而科西亚CDR-L1环存在于轻链氨基酸24至34处，科西亚CDR-L2环存在于轻链氨基酸50至56处，并且科西亚CDR-L3环存在于轻链氨基酸89至97处。在使用卡巴特编号约定进行编号时，科西亚CDR-H1环末端在H32与H34之间变化，其取决于环的长度(这是因为卡巴特编号方案将插入置于H35A和H35B处；如果既不存在35A，也不存在35B，那么环末端位于32处；如果仅存在35A，那么环末端位于33处；如果35A与35B皆存在，那么环末端位于34处)。

在某些方面，本文提供抗体和其抗原结合片段的组合，其包含MEDI4893、SAR114-N3Y和/或SAN481-SYT抗体的科西亚VH和VL CDR。在某些实施例中，抗体或其抗原结合片段包含一个或多个CDR，其中科西亚和卡巴特CDR具有相同氨基酸序列。在某些实施例中，本文提供包含卡巴特CDR和科西亚CDR的组合的抗体和其抗原结合片段。

在某些方面，抗体或其抗原结合片段的CDR可根据IMGT编号系统确定，如以下文献中所述：勒弗朗M-P(Lefranc M-P),(1999)免疫学家(The Immunologist)7:132-136和勒弗朗M-P等人,(1999)核酸研究(Nucleic Acids Res)27:209-212。根据IMGT编号方案，VH-CDR1在位置26至35处，VH-CDR2在位置51至57处，VH-CDR3在位置93至102处，VL-CDR1在位置27至32处，VL-CDR2在位置50至52处，并且VL-CDR3在位置89至97处。在一特定实施例中，本文提供抗体和其抗原结合片段的组合，其包含MEDI4893、SAR114-N3Y和/或SAN481-SYT抗体的IMGT VH和VL CDR，例如如以下中所述：勒弗朗M-P(1999)同上和勒弗朗M-P等人,(1999)同上。

在某些方面，抗体或其抗原结合片段的CDR可根据麦卡勒姆RM(MacCallum RM)等人,(1996)分子生物学杂志262:732-745确定。还参见例如，马丁A.(Martin A.),“蛋白质序列和抗体可变结构域的结构分析(Protein Sequence and Structure Analysis ofAntibody Variable Domains)”,在抗体工程改造(Antibody Engineering)中,康特曼(Kontermann)和杜贝尔(Dübel)编,第31章,第422-439页,施普林格出版社(Springer-Verlag),柏林(Berlin)(2001)。在一特定实施例中，本文提供抗体或其抗原结合片段的组合，其包含通过麦卡勒姆RM等人中的方法所确定的MEDI4893、SAR114-N3Y和/或SAN481-SYT抗体的VH和VL CDR。

在某些方面，抗体或其抗原结合片段的CDR可根据AbM编号方案确定，所述AbM编号方案指代表卡巴特CDR与科西亚结构环之间的折中的AbM高变区，并且由牛津分子AbM抗体建模软件(牛津分子有限公司)使用。在一特定实施例中，本文提供抗体或抗原结合片段的组合，其且包含如通过AbM编号方案所确定的MEDI4893、SAR114-N3Y和/或SAN481-SYT抗体的VH和VL CDR。

在另一方面，本文所述的抗体或其抗原结合片段(例如单克隆抗体或片段)可包含任何适合的类别(例如IgG、IgA、IgD、IgM和IgE)的恒定区(Fc)，所述恒定区(Fc)经修饰以便改进抗体或抗原结合片段(例如单克隆抗体或片段)的半衰期。举例来说，本文所述的抗体或其抗原结合片段(例如单克隆抗体或片段)可包含Fc，所述Fc相对于无突变的相同抗体包含延长半衰期的突变。

Fc区工程改造广泛用于所属领域中以延长治疗性抗体的半衰期并保护其免于体内分解。在一些实施例中，IgG抗体或抗原结合片段的Fc区可经修饰以增加IgG分子对Fc新生受体(FcRn)的亲和力，Fc新生受体介导IgG代谢并保护IgG分子免于分解。适合的Fc区氨基酸取代或修饰为所属领域中已知的并包括例如三重取代M252Y/S254T/T256E(称为“YTE”)(参见例如美国专利7,658,921；美国专利申请公开2014/0302058；和于(Yu)等人,抗微生物剂与化疗,61(1):e01020-16(2017))。在某些方面，结合于金黄色葡萄球菌AT的抗体或抗原结合片段(例如单克隆抗体或片段)包含含YTE突变的Fc区。在某些方面，结合于至少一种金黄色葡萄球菌白细胞毒素的抗体或抗原结合片段(例如单克隆抗体或片段)包含含YTE突变的Fc区。在某些方面，结合于金黄色葡萄球菌AT的抗体或抗原结合片段(例如单克隆抗体或片段)包含含YTE突变的Fc区，并结合于至少一种金黄色葡萄球菌白细胞毒素的抗体或抗原结合片段(例如单克隆抗体或片段)包含含YTE突变的Fc区。

在另一方面，Fc区可包含序列CSYHLC(称为“N3Y”；SEQ ID NO:55)。在某些方面，结合于金黄色葡萄球菌ClfA的抗体或抗原结合片段(例如单克隆抗体或片段)包含Fc区，所述Fc区包含N3Y Fc变异体。

在另一方面，本文所述的抗体或其抗原结合片段(例如单克隆抗体或片段)可包含任何适合的类别(IgG、IgA、IgD、IgM和IgE)的恒定区(Fc)，所述任何适合的类别经修饰以便改进效应功能(例如调理吞噬活性细菌杀灭(OPK))，任选地其中还改进抗体或抗原结合片段(例如单克隆抗体或片段)的半衰期。举例来说，本文所述的抗体或其抗原结合片段(例如单克隆抗体或片段)可包含Fc，所述Fc相对于无突变的相同抗体包含延长半衰期的突变，并且其中相对于突变的相同抗体或抗原结合片段，所述突变不抑制OPK活性。确切地说，与YTE变异体相比，N3Y Fc变异体呈现增强的药物动力学(PK)特性(例如血清持久性)和效应功能(例如调理吞噬活性细菌杀灭(OPK))。

本文所述的抗体或抗原结合片段(例如单克隆抗体或片段)可为或可由以下获得：人类抗体、人源化抗体、非人类抗体或嵌合抗体。在一个方面，本文所述的抗体或其抗原结合片段为完全人类抗体。

人类抗体、非人类抗体、嵌合抗体或人源化抗体可通过任何方式获得，包括经由体外来源(例如重组产生抗体的融合瘤或细胞系)和体内来源(例如啮齿动物、人类扁桃体)。用于产生抗体的方法为所属领域中已知的并描述于例如科勒

III.核酸、载体和宿主细胞

本文还提供一种或多种经分离的核酸序列，其编码结合于AT的抗体或其抗原结合片段、结合于ClfA的抗体或其抗原结合片段或结合于至少一种白细胞毒素的抗体或其抗原结合片段(任选地其中抗体或其抗原结合片段中的一种或多种为单克隆抗体或片段)。

本公开进一步提供一种或多种载体，其包含一种或多种编码结合于AT的抗体或其抗原结合片段、结合于ClfA的抗体或其抗原结合片段和/或结合于至少一种白细胞毒素的抗体或其抗原结合片段(任选地其中抗体或其抗原结合片段中的一种或多种为单克隆抗体或片段)的核酸序列。载体可为例如质粒、游离基因体、粘粒、病毒载体(例如反转录病毒或腺病毒)或噬菌体。适合的载体和载体制备方法为所属领域中熟知的(参见例如桑布鲁克(Sambrook)等人,分子克隆实验指南(Molecular Cloning,a Laboratory Manual),第3版,冷泉港出版社(Cold Spring Harbor Press),冷泉港(Cold Spring Harbor),N.Y.(2001),和奥苏博尔(Ausubel)等人,分子生物学实验指南(Current Protocols in MolecularBiology),格林出版公司和约翰威利父子公司(Greene Publishing Associates and JohnWiley&Sons),纽约,N.Y.(1994))。

除编码结合于AT的抗体或其抗原结合片段、结合于ClfA的抗体或其抗原结合片段和/或结合于至少一种白细胞毒素的抗体或其抗原结合片段(任选地其中抗体或其抗原结合片段中的一种或多种为单克隆抗体或片段)的核酸序列以外，载体理想地包含表达控制序列，如启动子、强化子、聚腺苷酸化信号、转录终止子、内部核糖体入口位点(internalribosome entry site，IRES)等，提供编码序列于宿主细胞中表达。示例性表达控制序列为所属领域中已知并描述于例如(Goeddel),基因表达技术：酶学方法(Gene ExpressionTechnology:Methods in Enzymology),第185卷,学术出版社(Academic Press),加利福尼亚州圣地亚哥(San Diego,Calif.)(1990)。

包含编码结合于AT的抗体或其抗原结合片段、结合于ClfA的抗体或其抗原结合片段或结合于至少一种白细胞毒素的抗体或其抗原结合片段(任选地其中抗体或其抗原结合片段中的一种或多种为单克隆抗体或片段)的核酸的载体可引入宿主细胞中，所述宿主细胞可表达由此编码的多肽，包括任何适合的原核或真核生物细胞。因此，本公开提供一种包含所述载体的经分离的细胞。可使用的宿主细胞包括可以容易并且可靠地生长、具有合理的快速生长速率、具有良好特征的表达系统并且可容易和有效地转化或转染的宿主细胞。适合的原核细胞的实例包括(但不限于)来自芽孢杆菌属(Bacillus)(如枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)和短芽孢杆菌(Bacillus brevis))、埃希氏菌属(Escherichia)(如大肠杆菌)、假单胞菌属(Pseudomonas)、链霉菌属(Streptomyces)、沙门氏菌属(Salmonella)和伊文氏杆菌属(Erwinia)的细胞。尤其有用的原核细胞包括大肠杆菌的各种菌株(例如K12、HB101(ATCC第33694号)、DH5a、DH10、MC1061(ATCC第53338号)和CC102)。适合的真核细胞为所属领域中已知并包括例如酵母细胞、昆虫细胞和哺乳动物细胞。在一个实施例中，所述载体于哺乳动物细胞中表达。许多适合的哺乳动物宿主细胞为所属领域中已知，并且许多可由美国菌种保藏中心(American Type Culture Collection；ATCC，弗吉尼亚州马纳萨斯(Manassas,VA))获得。适合哺乳动物细胞的实例包括(但不限于)中国仓鼠卵巢细胞(Chinese hamster ovary cells，CHO)(ATCC第CCL61号)、CHO DHFR细胞(乌尔劳布(Urlaub)等人,美国国家科学院院刊,97:4216-4220(1980))、人类胚肾(humanembryonic kidney，HEK)293或293T细胞(ATCC第CRL1573号)和3T3细胞(ATCC第CCL92号)。其它适合的哺乳动物细胞系为猴COS-1(ATCC第CRL1650号)和COS-7细胞系(ATCC第CRL1651号)以及CV-1细胞系(ATCC第CCL70号)。哺乳动物细胞理想为人类细胞。举例来说，哺乳动物细胞可为人类淋巴或淋巴衍生细胞系，如前B淋巴细胞来源的细胞系，

可通过转染、转化或转导将本文所述的编码抗体或抗原结合片段(任选地为单克隆抗体或片段)中的任一种的氨基酸的核酸序列引入细胞中。

IV.药物组合物和使用抗金黄色葡萄球菌抗体的组合的方法

本公开提供一种组合物，其包含有效量的本文所述的抗体或其抗原结合片段中的任一种或组合和药学上可接受的载剂。举例来说，在一实施例中，如上文所述，组合物可包含特异性结合于金黄色葡萄球菌α毒素蛋白质的第一抗体或其抗原结合片段(任选地为单克隆)、特异性结合于金黄色葡萄球菌ClfA蛋白质的第二抗体或其抗原结合片段(任选地为单克隆)和特异性结合于至少一种如上文所述金黄色葡萄球菌白细胞毒素的第三抗体或其抗原结合片段(任选地为单克隆)和药学上可接受的载剂。或者，所述组合物可包含药学上可接受的载剂和以下中的任一种或任两种：(i)特异性结合于金黄色葡萄球菌AT的抗体或其抗原结合片段、(ii)特异性结合于金黄色葡萄球菌ClfA的抗体或其抗原结合片段、(iii)特异性结合于至少一种金黄色葡萄球菌白细胞毒素的抗体或其抗原结合片段。

在另一方面，组合物可包含编码AT结合抗体或抗原结合片段、ClfA结合抗体或抗原结合片段和/或白细胞毒素结合抗体或抗原结合片段的核酸序列，或一个或多个包含此类核酸序列的载体。在一个方面，组合物为药学上可接受(例如生理学上可接受)的组合物，其包含载剂，如药学上可接受(例如生理学上可接受)的载剂和AT结合抗体或抗原结合片段，ClfA结合抗体或抗原结合片段，和/或抗白细胞毒素抗体或抗原结合片段核酸序列，或载体。

在本公开的上下文内可使用任何适合的载剂，并且此类载剂为所属领域中熟知的。载剂的选择将部分通过可投与组合物的特定部位和用于投与组合物的特定方法来确定。组合物任选地可为无菌的。组合物可冷冻或冻干以便储存并在使用之前在适合的无菌载剂中复原。可根据以下文献中所述的常规技术产生组合物，例如雷明顿：医药科学,第21版,利平科特威廉姆斯和维尔金斯出版社(Lippincott Williams&Wilkins),宾夕法尼亚州费城(Philadelphia,PA)(2001)。

组合物宜包含呈可有效治疗或预防金黄色葡萄球菌感染的量的AT结合抗体或抗原结合片段、ClfA结合抗体或抗原结合片段和白细胞毒素结合抗体或抗原结合片段。在另一方面，组合物包含呈可有效治疗或预防金黄色葡萄球菌感染的量的AT结合抗体或抗原结合片段与ClfA结合抗体或抗原结合片段和白细胞毒素结合抗体或抗原结合片段的组合。在另一方面，组合物包含与AT结合抗体或抗原结合片段和白细胞毒素结合抗体或抗原结合片段组合的呈可有效治疗或预防金黄色葡萄球菌感染的量的ClfA结合抗体或抗原结合片段。在另一方面，组合物包含与AT结合抗体或抗原结合片段和ClfA结合抗体或抗原结合片段组合的呈可有效治疗或预防金黄色葡萄球菌感染的量的白细胞毒素结合抗体或抗原结合片段。在另一方面，组合物包含与白细胞毒素结合抗体或抗原结合片段组合的呈可有效治疗或预防金黄色葡萄球菌感染的量的AT结合抗体或抗原结合片段和ClfA结合抗体或抗原结合片段。在另一方面，组合物包含与ClfA结合抗体或抗原结合片段组合的呈可有效地治疗或预防金黄色葡萄球菌感染的量的AT结合抗体或抗原结合片段和白细胞毒素结合抗体或抗原结合片段。在另一方面，组合物包含与AT结合抗体或抗原结合片段组合的呈可有效治疗或预防金黄色葡萄球菌感染的量的ClfA结合抗体或抗原结合片段和白细胞毒素结合抗体或抗原结合片段。

为此目的，所公开的方法包含投与治疗有效量或预防有效量的AT结合抗体或其抗原结合片段、ClfA结合抗体或其抗原结合片段和白细胞毒素结合抗体或其抗原结合片段，或含前述抗体或片段(包括单克隆抗体或片段)中的任一种或任何组合的组合物。

本公开提供一种治疗或预防受试者(例如人类)的金黄色葡萄球菌感染的方法，其包含向有需要其的受试者投与本文所述的AT结合抗体或抗原结合片段、ClfA结合抗体或抗原结合片段和/或白细胞毒素结合抗体或抗原结合片段，随即治疗或预防受试者的金黄色葡萄球菌感染。本公开还提供本文中所述的AT结合抗体或抗原结合片段、ClfA结合抗体或抗原结合片段和/或白细胞毒素结合抗体或抗原结合片段或含本文中所述的抗体或其片段中的任一种或组合的组合物的用途，其用于制造供治疗或预防金黄色葡萄球菌感染用的药剂。

如本文所论述，金黄色葡萄球菌为引起广泛临床感染的主要人类病原体。金黄色葡萄球菌为菌血症和感染性心内膜炎以及骨关节、皮肤和软组织、胸膜肺和装置相关感染的主要原因。约30％的人类群体受金黄色葡萄球菌定殖(沃特海姆(Wertheim)等人,柳叶刀-传染病(Lancet Infect.Dis.),5:751-762(2005))。金黄色葡萄球菌皮肤感染的症状包括例如疖子、蜂窝组织炎和脓疱。金黄色葡萄球菌还可引起食物中毒、血液中毒(也称为菌血症)、毒性休克综合征和败血性关节炎。金黄色葡萄球菌感染的流行病学、病理生理学和临床表现详述于例如佟(Tong)等人,临床微生物学评论(Clin.Microbiol.Rev.),28(3):603-661(2015)，并且已对若干不同金黄色葡萄球菌菌株的基因组测序(参见例如GenBank/EMBL寄存编号BX571856、BX571857、BX571858、FN433596、FN433597、FN433598、HE681097、FR821777、FR821778、FR821779和FR821780)。如本文所论述，受试者(例如，人类受试者)可患有糖尿病。

在某些情况下，AT结合抗体或抗原结合片段、ClfA结合抗体或抗原结合片段和/或白细胞毒素结合抗体或抗原结合片段的治疗有效量为抑制人类的金黄色葡萄球菌相关的败血症、抑制金黄色葡萄球菌凝集、抑制血栓栓塞病变形成、中和α毒素、中和LukSF、HlgAB、HlgCB和LukED、诱导调理吞噬作用、抑制金黄色葡萄球菌血纤维蛋白原结合、抑制金黄色葡萄球菌凝集或前述的任何组合的量。

或者，药理学和/或生理学作用可为预防性的，即所述作用完全或部分预防疾病或其症状。就此来说，所公开的方法包含投与“预防有效量”的AT结合抗体或抗原结合片段、ClfA结合抗体或抗原结合片段和/或白细胞毒素结合抗体或抗原结合片段(包括单克隆抗体或片段)。

可通过定期评估所治疗患者来监测治疗或预防功效。对于经数天或更长时间的重复投与，视病况而定，可重复治疗直到出现对期望的对疾病症状的抑制。然而，其它给药方案可为适用的并在本公开的范围内。所需剂量可通过单次快速投与组合物、通过多次快速投与组合物或通过连续输注投与组合物来递送。

治疗或预防金黄色葡萄球菌感染的方法可包含在相同组合物中或在独立组合物中投与AT结合抗体或抗原结合片段、ClfA结合抗体或抗原结合片段和/或白细胞毒素结合抗体或抗原结合片段。当向受试者投与独立组合物时，组合物中的每一种可同时或按任何次序依序投与。

包含有效量的本文所述抗体中的任一种或组合或其抗原结合片段、编码前述任一种的核酸序列或含核酸序列的载体的组合物可使用标准投与技术，包括静脉内、腹膜内、皮下和肌肉内投与途径向受试者，如人类投与。组合物可适于肠胃外投与。如本文所用，术语“肠胃外”包括静脉内、肌肉内、皮下和腹膜内投与。在一些实施例中，使用周边全身性递送，通过静脉内、腹膜内或皮下注射来向受试者投与组合物。

可单独投与AT结合抗体或抗原结合片段、ClfA结合抗体或抗原结合片段和/或白细胞毒素结合抗体或抗原结合片段或包含其的组合物，或与常规用于治疗金黄色葡萄球菌感染的其它药物(例如作为佐剂)组合投与。包含AT结合抗体或抗原结合片段、ClfA结合抗体或抗原结合片段和/或白细胞毒素结合抗体或抗原结合片段的组合物可与例如一种或多种抗生素组合使用，所述抗生素如青霉素酶-抗β-内酰胺抗生素(例如苯唑西林(oxacillin)或氟氯西林(flucloxacillin))。庆大霉素可用于治疗严重感染，如心内膜炎。然而，大部分金黄色葡萄球菌菌株现在对青霉素具有抗性，并且每100人中有两人携带耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)菌株。MRSA感染通常用万古霉素治疗，并且轻微皮肤感染可用三重抗生素软膏治疗。

以下实例进一步说明本发明，但当然不应解释为以任何方式限制其范围。

实例1

本实例证实当组合使用时，结合于α毒素(AT)、凝集因子A(ClfA)和白细胞毒素的抗体不会干扰彼此的体外活性。

进行若干实验以确定组合使用结合于AT、ClfA和白细胞毒素的抗体是否将干扰这些个别分析中的任一种的活性。在这些实验中，MEDI4893*、SAR114和SAN481-SYT*抗体组合使用并且统称为“MEDI6389”。

进行红细胞(RBC)溶血抑制分析以确定抗ClfA SAR114或抗白细胞毒素SAN481-SYT*抗体是否干扰MEDI4893*的活性。如图2所指示，将经洗涤的兔红细胞(50μl)与天然α毒素(0.1μg/ml，25μl)和25μl MEDI4893*、SAN481_SYT*+SAR114或mAb三重组合(MEDI6389)的连续稀释液一起培育。不相关mAb c-IgG用作阴性对照。在37℃下培育2小时之后，在50ml上清液中在OD450 nm下测量血色素释放。溶血抑制％经测量为：100*[(OD

进行单核细胞活力分析以确定抗AT MEDI4893*或抗ClfA SAR114抗体是否干扰SAN481-SYT*的活性。如图3所指示，在37℃下，将人类单核细胞性细胞系HL-60(5e4/孔/25μl)与LukS+LukF(各100ng/ml)和SAN481_SYT*、MEDI4893*+SAR114或mAb三重组合(MEDI6389)的连续稀释液的混合物一起培育2小时。不相关mAb c-IgG用作阴性对照。遵照公司说明书通过测量Cell Glo分析(普洛麦格(Promega))中的发光信号来定量细胞活力。活力％按以下计算：100*[(OD

进行血纤维蛋白原结合抑制分析以确定抗AT MEDI4893*或抗白细胞毒素SAN481-SYT*抗体是否干扰SAR114的活性。涂有血纤维蛋白原的96孔板(4μg/ml)用PBS 2％BSA阻断，并在洗涤之后在室温下与生物素标记ClfA001(2μg/ml)和SAR114、MEDI4893*+SAN481_SYT*或mAb三重组合(MEDI6389)的连续稀释液培育1小时，如图4上所指示。洗涤3次后，将板与链霉亲和素-藻红素以1:10000一起培育1小时，并在添加100μl TMB后并接着添加100μlH

表1.

使用三种抗体(MEDI6389)的组合不抑制RBC分析中MEDI4893的活性、单核细胞活力分析中SAN481*的活性或SAR114的Fg结合。

实例2

本实例证实在伤口愈合模型中结合于α毒素(AT)和白细胞毒素的抗体组合优于任一单独抗体。

在这些实验中，6-7周龄雌性Balb/c小鼠(n＝5)用以下进行腹膜内免疫：(i)0.5mg/kg对照抗体(c-IgG)，(ii)0.1mg/kg抗AT抗体MEDI4893*，(iii)0.5mg/kg抗白细胞毒素抗体SAN481-SYT*，或(iv)MEDI4893*(0.1mg/kg)和SAN481-SYT*(0.5mg/Kg)两者。24小时后小鼠接着用伤口分离株1447526(5e7cfu于50μl PBS中)进行皮内感染。

在17天内监测病变，结果展示于图5中。用抗AT与抗白细胞毒素抗体组合处理的小鼠中的病变大小显著小于用任一单独抗体处理的小鼠中的病变大小(p<0.05并用(*)指示)。图5的图片展示感染后第7天的病变。

实例3

本实例证实中和α毒素(AT)、凝集因子A(ClfA)和白细胞毒素对兔菌血症模型的体内保护均为必需的。

在这些实验中，3月龄雌性兔(n＝7)接受静脉内投与(i)对照IgG抗体，(ii)抗白细胞毒素抗体SAN481-SYT*，(iii)SAN481-SYT*和抗ClfA抗体SAR114，(iv)SAR114和抗AT抗体MEDI4893*，(v)SAN481-SYT*和MEDI4893*，或(vi)SAN481-SYT*、SAR114和MEDI4893*，即MEDI6389。除对照抗体(以15mg/kg投与)以外，所有抗体均以5mg/kg投与。12小时后接着用静脉内CA-MRSA SF8300感染兔。

在攻击之后四天监测存活率，并且SAN481-SYT*、SAR114和MEDI4893*的组合(MEDI6389)或MEDI4893*+SAN481_SYT*与c-IgG相比显著提高存活率，如通过对数秩曼特尔科克斯统计测试(Log Rank Mantel-Cox statistical test)所展示(p＝0.0001)。结果展示于图6中。值得注意地，既不标靶AT和ClfA也不标靶白细胞毒素足以保护这一致死性菌血症兔模型。

实例4

本实例证实中和α毒素(AT)、凝集因子A (ClfA)和白细胞毒素对兔血流感染模型的体内保护均为必需的。

在这些实验中，3月龄雌性兔(n＝12)接受15mg/kg静脉内投与(i)对照IgG抗体，(ii)抗白细胞毒素抗体SAN481-SYT*，(iii)抗ClfA抗体SAR114和抗SYAT抗体MEDI4893*，(iv)SAN481-SYT*和MEDI4893*，或(vi)SAN481-SYT*、SAR114和MEDI4893*，即MEDI6389。12小时后接着用静脉内HA-MRSA NRS382或CA-MRSA SF8300感染兔。

在攻击之后四天监测存活率，并且结果展示于图7中。SAN481-SYT*、SAR114和MEDI4893*的组合(MEDI6389)或MEDI4893*+SAN481_SYT*与c-IgG相比显著提高存活率，如通过对数秩曼特尔科克斯统计测试所展示(对于NRS382，p＝0.0015，并且对于SF8300，p＝0.0001)，结果为用HA-MRSA NRS382或CA-MRSA SF8300提高存活率最有效。

实例5

本实例证实结合于α毒素(AT)、凝集因子A(ClfA)和白细胞毒素(MEDI6389)的抗体组合改善由糖尿病小鼠皮肤坏死模型中的混合细菌感染引起的伤口愈合。

比较混合细菌感染与由七周雄性(n＝10)2型糖尿病小鼠(BKS.Cg-m+/+Lepr

检测MEDI6389组合(包含抗AT mAb MEDI4893*、抗ClfA mAb SAR114和抗白细胞毒素mAb SAN481_SYT*)对伤口闭合和细菌负荷的时间的作用。用MEDI6389(每一mAb为15mg/kg)或对照IgG c-IgG(15mg/kg)对小鼠进行腹膜内被动免疫并且24小时后用SA/SP/PA进行腹膜内感染。随后病变历经43天，并在皮肤病变第7天、第14天和第21天计算细菌数。图9中所示的结果证实MED6389提高这一糖尿病小鼠皮肤坏死模型的混合细菌皮肤病变中的伤口愈合率并减少细菌数。

实例6

本实例提供用于实例7-11中的材料和方法。

将金黄色葡萄球菌USA300菌株SF8300的冷冻储备培养物解冻，并在无菌PBS，pH7.2(英杰(Invitrogen))中稀释成适当接种液(华等人,抗微生物剂与化疗58:1108-17(2014))。短暂麻醉不含特定病原体的7至8周龄雌性BKS.Cg-Dok7+/+Lepr、db>/J(db/db)、C57BKS、C57BL/6J-STZ和C57BL/6J小鼠(杰克逊实验室(The Jackson Laboratory))，并用氧以3L/分钟使其维持在3％异氟醚(Butler Schein

为测量NET，使用2种不同ELISA试剂盒的混合物。最初用抗弹性蛋白酶捕捉抗体(R&D系统公司(R&D Systems))涂布板。将新鲜血清样品添加到经涂布的孔中，接着培育并洗涤。随后，使用抗DNA-POD抗体(罗氏(Roche))检测孔中捕获的蛋白质中的DNA。用ABTS溶液和ABTS停止溶液显影板。在板读取器上使用SoftMax Pro软件在405nm下测量吸收率。

从全血分离高密度和低密度嗜中性粒细胞(HDN和LDN)。处死之后，收集血液并用黑斯托派克1077(histopaque 1077)(西格玛奥德里奇)分层。通过离心(500g，30分钟)分离细胞。用ACK溶解缓冲液(赛默飞世尔科技(Thermo Fisher Scientific))处理下部级份以从高密度嗜中性粒细胞去除红细胞。上部(PBMC)级份用PBS洗涤2次，并且低密度嗜中性粒细胞用EasySep小鼠嗜中性粒细胞富集试剂盒(干细胞技术公司(StemcellTechnologies))分离。将经纯化的细胞群溶解以进行蛋白质或RNA分析。

在冰冷FAC缓冲液(具有5％胎牛血清和0.1％叠氮化钠的PBS)中洗涤全血或纯化低密度细胞两次。Fc受体用抗小鼠CD16/CD32(电子生物科学公司(eBioscience))阻断，并且细胞用针对小鼠CD45(PE结合、克隆FA-11)、CD11c(APC-Cy5.5或FITC结合，克隆N418)、CD11b(BV605结合，克隆M1/70)、Ly6G(BV421或PECy7结合，克隆1A8)和Ly6-C的抗体染色。细胞使用LSR II流式细胞仪(碧迪生物科学公司(BD Biosciences))成像并用FlowJo分析。向每一样品中添加已知浓度的计数珠粒(邦斯实验室公司(Bangs Laboratories))以计算细胞数目。

用含有完全蛋白酶抑制剂(西格玛)的Ripa缓冲液(赛默飞世尔科技)溶解细胞并冷冻。在所选实验中，使用抗IP3R(艾博抗cat#ab5804)和戴诺磁珠(Dynabeads)蛋白G免疫沉淀试剂盒(赛默飞世尔科技)对IP3R进行免疫沉淀。在4-12％bis-Tris NuPage凝胶上分离等量的蛋白质并转移到PVDF薄膜(赛默飞世尔科技)。使用抗H3Cit(艾博抗cat#ab5103)、抗乳铁传递蛋白(艾博抗cat#ab77705)、抗MMP9(艾博抗cat#ab38898)、抗IP3R(艾博抗cat#ab5804)、抗P-Ser/Thr(艾博抗cat#ab17464)和抗肌动蛋白(西格玛cat#A3854)进行免疫检测。用奥德赛(Odyssey)成像系统(Li-COR)观察蛋白质。

实例7

本实例证实葡萄糖含量升高与较严重的金黄色葡萄球菌感染相关。

使用两个鼠类糖尿病模型(STZ诱发和db/db)来研究糖尿病对全身性金黄色葡萄球菌感染的全身性反应的影响。在每一模型中，糖尿病小鼠具有大于450dg/mL的非空腹葡萄糖含量，而非糖尿病对照组含量小于200dg/mL。小鼠感染5e7 CFU金黄色葡萄球菌(USA300、SF8300)。感染后48小时从肾脏收集CFU，并监测死亡14天。与非糖尿病对照组相比，在STZ(P＝0.0011)和db/db(P＝0.0241)模型中观察到死亡率增加(图11A和11B)。值得注意地，这与感染后48小时从肾回收的细菌CFU的差异并不相关(图11C和11D)。为了证实死亡率增加为糖尿病宿主中葡萄糖升高的结果，在感染前1周用罗格列酮处理小鼠以降低循环葡萄糖含量(图11E)。在感染金黄色葡萄球菌后，罗格列酮显著减少死亡率(P＝0.0041)，然而肾脏中的细菌负荷不受影响(图11F和11G)。

值得注意地，与非糖尿病对照组相比，在糖尿病小鼠中未观察到缺陷清除。这强调过度发炎或放大宿主反应对死亡率增加的作用。

实例8

本实例证实NEToisis升高发生于糖尿病小鼠中。

糖尿病宿主中或在葡萄糖含量升高存在下的嗜中性粒细胞愈来愈倾于NETosis。在糖尿病群体中，NET释放已展示损害小鼠伤口愈合，并且血清中NET的存在与患者的非愈合伤口相关(法蒂尼,G.P.(Fadini,G.P.)等人,糖尿病(Diabetes)65:1061-1071(2016)和黄,S.L.(Wong,S.L.)等人,自然-医学(Nat Med)21:815-819(2015))。嗜中性粒细胞还针对细菌感染释放NET，因此假设金黄色葡萄球菌感染将使得糖尿病小鼠中全身性NET释放增加。嗜中性粒细胞弹性蛋白酶和双链DNA的复合物用作测量NET形成并通过ELISA(法蒂尼,G.P.等人,糖尿病65:1061-1071(2016))定量。在经静脉内感染金黄色葡萄球菌24小时的糖尿病小鼠中观察到血清NET显著增加(P＝0.0003)，而在非糖尿病对照小鼠中未观察到显著增加(图12A)。循环NET含量在未感染的糖尿病和非糖尿病小鼠中不不同。

在由金黄色葡萄球菌释放后，α毒素(AT)结合于血小板表面上的受体ADAM10。(嗜中性粒细胞不表达ADAM10。)针对AT，血小板聚集并结合于循环嗜中性粒细胞，引起卡斯蛋白酶1介导的信号传导的活化和NET产生(鲍尔斯,M.E.(Powers,M.E.)等人,細胞宿主和微生物17:775-787(2015)和苏瓦德,B.G.J.(Surewaard,B.G.J.)等人(細胞宿主和微生物24:271-284(2018))。与这些研究结果一致，用单克隆抗体MEDI4893*中和AT显著减少糖尿病动物感染后48小时的血清中的NE-DNA复合物的数目(图12B)。如通过蛋白质印迹法检测出，在肝脏中通过增加的瓜氨酸化组蛋白H3(H3cit)确认感染后48小时AT依赖性NET产量增加(图12C)。用抗Ly6G以免疫组织化学方式染色以标记嗜中性粒细胞和抗H3cit的肝脏切片的观察结果还展示增加的AT依赖性NET(即，在接受MEDI4893*的小鼠肝脏中的较少抗H3cit染色)(科恩TS(Cohen TS)等人,金黄色葡萄球菌驱使糖尿病小鼠中低密度嗜中性粒细胞扩增(Staphylococcus aureus drives expansion of low density neutrophils indiabetic mice).JCI 2019待刊)。AT的中和显著增加感染金黄色葡萄球菌的糖尿病小鼠的存活率(P＝0.0255)(图12D)。这些数据指示糖尿病宿主的全身性感染引起可由MEDI4893*抑制的循环NET中的AT依赖性增加。

实例9

本实例证实低密度嗜中性粒细胞与增加的NETosis相关。

类似于巨噬细胞，嗜中性粒细胞可基于功能特征分成不同类别。已展示严重灼伤改变循环嗜中性粒细胞的表型并改变TLR表达、细胞因子产量和其驱动巨噬细胞极化的能力(津田,Y.(Tsuda,Y.)等人免疫力(Immunity)21:215-226(2004))。嗜中性粒细胞独特之处在于其还可通过细胞密度区分。高密度嗜中性粒细胞为抗肿瘤、吞噬细胞，而认为低密度嗜中性粒细胞为促肿瘤吞噬缺陷细胞(pro-tumor phagocytic defective cell)(萨基夫,J.Y.(Sagiv,J.Y.)等人细胞报告(Cell Rep)10:562-573(2015))。虽然津田等人并未测量从易受金黄色葡萄球菌感染的小鼠分离的嗜中性粒细胞的密度，但这些嗜中性粒细胞中的细胞核形状类似于低密度细胞中的细胞核形状(萨基夫,J.Y.等人细胞报告10:562-573(2015)和弗里德兰德,Z.G.(Fridlender,Z.G.)等人癌细胞(Cancer Cell)16:183-194(2009))。取自非糖尿病小鼠和糖尿病小鼠的嗜中性粒细胞中的细胞核形状也具有惊人差异。从非糖尿病小鼠分离的细胞中的细胞核为小叶或圆形的，而在糖尿病小鼠的血液中观察到大量细胞为环形细胞核(科恩TS等人,金黄色葡萄球菌驱使糖尿病小鼠中低密度嗜中性粒细胞扩增.JCI 2019待刊)。这些结构类似于由津田等人报告的在从易受金黄色葡萄球菌感染的小鼠分离的细胞中发现的结构，其指示糖尿病小鼠的低密度或免疫受损嗜中性粒细胞数目增加。

高NET产量为低密度嗜中性粒细胞(LDN)的特征，并假设受感染糖尿病小鼠中的更高数目的LDN引起NET增加(维拉努埃瓦,E.(Villanueva,E.)等人免疫学杂志187:538-552(2011))。在静脉内感染48小时后，从C57BKS和db/db小鼠收集血液并分析LDN的存在。与未感染的db/db小鼠(P<0.0001)以及感染C57BKS对照小鼠(P＝0.0003)相比，感染db/db小鼠血液中的LDN量显著增加(图13A)。未在C57BKS小鼠中观察到LDN的增加(图13A)。在STZ诱发的糖尿病小鼠中观察到类似增加，而在C57BL/6对照组中未观察到(图14)。感染前用罗格列酮降低葡萄糖含量，感染后48小时，所述葡萄糖含量显著(P＝0.0116)减少LDN(图13B)。

为确保观察结果不基于脱粒嗜中性粒细胞，LDN和高密度嗜中性粒细胞(HDN)从感染db/db小鼠的血液分离，并且乳铁传递蛋白(第二颗粒)和MMP9(第三颗粒)的量通过蛋白质印迹法测量。观察到等效量的两者，指示LDN具有与HDN相比类似的颗粒含量(科恩TS等人,金黄色葡萄球菌驱使糖尿病小鼠中低密度嗜中性粒细胞扩增.JCI 2019待刊)。中和AT防止全身性NET释放，因此评定AT对LDN数目的影响。测量感染clIgG或MEDI4893*之前经24小时处理和感染金黄色葡萄球菌48小时的db/db小鼠血液中的LDN。观察到用MEDI4893*预防性处理的小鼠中的LDN显著减少(图13C)，而嗜中性粒细胞的总数目不受影响(图13D)，其指示AT促成LDN的增加。

这些数据指示LDN促成与糖尿病性金黄色葡萄球菌感染相关的病理并且这些LDN与肝脏(全身性感染的关键目标器官)中和血液中全身性两者的过量NET释放相关。此外，MEDI4893*减少糖尿病小鼠中的LDN。

实例10

本实例证实TGFβ驱使LDN扩增。

TGFβ已被认为是嗜中性粒细胞表型的中央调节因子，并在肿瘤模型中其可驱使高密度至低密度嗜中性粒细胞的表型转换(萨基夫,J.Y.等人细胞报告10:562-573(2015)和弗里德兰德,Z.G.等人癌细胞16:183-194(2009)。Sagiv等人证实，将TGFβ添加到来自肿瘤携带小鼠而非未处理小鼠的血液中将增加体外LDN数目(同上)。用来自非糖尿病和糖尿病小鼠的血液重复这一研究。向糖尿病血液中添加TGFβ显著增加(P＝0.0021)LDN的数目(图15A)。在非糖尿病血液中未观察到相同结果。基于此证实TGFβ可增加LDN数目的体外证据，测试TGFβ通过体内阻断来使LDN诱发的必要性。在感染金黄色葡萄球菌之前24小时，用中和TGFβ抗体预防性处理糖尿病小鼠。通过抑制TGFβ，血流中的LDN数目显著减少(P＝0.0003)，而肾脏中的细菌数目在各组之间类似(图15B和15C)。通过中和TGFβ，存活率得到显著改善(P＝0.0072)(图15D)。当中和TGFβ时，观察到肝脏中的NET证实NET损失(科恩TS等人,金黄色葡萄球菌驱使糖尿病小鼠中低密度嗜中性粒细胞扩增.JCI 2019待刊)。这些数据表明通过阻断TGFβ来减少LDN可促进存活率。

TGFβ作为前体形式蛋白质(原TGFβ)分泌并且需要裂解来活化。通过αVβ8整合素结合原TGFβ与其结肠炎的活化和预防相关，并且其在树突状细胞和单核细胞亚群上的表达针对炎症而增加(特拉维斯,M.A.(Travis,M.A.)等人自然449:361-365(2007)和凯里,A.(Kelly,A.)等人实验医学杂志(J Exp Med),doi:10.1084/jem.20171491(2018))。为确定金黄色葡萄球菌感染是否影响αVβ8整合素表达，在感染24小时后从C57BKS和db/db小鼠的肝脏和脾脏分离先天性免疫细胞，并通过流式细胞术分析αVβ8的表达。感染后，在db/db小鼠而非C57BKS小鼠的肝脏中，β8阳性发炎性单核细胞和树突状细胞的数目增加(图16A)。有趣地，尽管整合素表达在单核细胞表面上增加，但DC的总数目而非β8的密度增加(图16B)。为了证实这一模型中αVβ8的功能相关性，小鼠用抗体中和αVβ6/8、αVβ6或c-IgG预防性地处理并感染金黄色葡萄球菌。与c-IgG相比，感染后四十八小时LDN在用αVβ6/8中和抗体处理的小鼠中的血流中显著减少(P＝0.0090)(图16C)。单独αVβ6的中和并未减少这些细胞的数目。整合素抑制不影响感染后48小时肾脏中的细菌数目(图16D)。与c-IgG处理的小鼠相比，用抗αVβ6/8抗体处理的小鼠的存活率显著提高(图16E)。因此，与直接中和TGFβ一致，阻断负责活化这一路径的整合素对糖尿病小鼠具有保护性。

这些数据展示中和αVβ6/8或TGFβ防止LDN增加并减少死亡率。这些数据还展示树突状细胞由于其活化TGFβ和促进LDN扩增的能力而在糖尿病感染的发病机制中起主要作用。

实例11

本实例证实，AT驱使TGFβ活化。

假设AT通过影响TGFβ路径影响LDN数目。在其活化后，TGFβ结合于其受体复合物，活化SMAD转录因子并驱使下游基因表达。因此，SMAD信号传导的活化常用作TGFβ活化的替代测量方法。分析在感染金黄色葡萄球菌(24小时)的糖尿病和非糖尿病小鼠的肝脏中的pSMAD含量。与未处理的糖尿病小鼠(P<0.0001)和经感染非糖尿病小鼠(P＝0.0338)相比，在感染糖尿病小鼠的肝脏中观察到显著增加的pSMAD(图17A)。在糖尿病小鼠中，MEDI4893*显著降低(P<0.0001)肝脏中的pSMAD含量，其指示AT促进TGFβ信号传导的活化(图17B)。中和AT不改变表达先天性免疫细胞的αVβ8数目(图17C)。这些数据指示，AT经由与先天性免疫细胞上的αVβ8表达无关的机制影响TGFβ的活化。因此，中和为关键金黄色葡萄球菌毒性因子的AT限制TGFβ信号传导的活化，并随后减少LDN数目和NET释放。

这些数据指示，除血小板上结合于ADAM10以外，AT可经由改变嗜中性粒细胞表型和随后对金黄色葡萄球菌感染起反应的第二路径起作用。在糖尿病宿主中，TGFβ信号传导的AT依赖性活化驱使LDN扩增。因此，AT促进自发性释放NET的LDN群体扩增和活化血小板，所述AT可结合并进一步活化嗜中性粒细胞。

本文中所引用的所有参考文献(包括公开、专利申请和专利)均以引用的方式并入本文中，所述引用程度如同各参考文献单独地并特定地指示以引用的方式并入并且全文阐述于本文中。

除非本文中另外指示或与上下文明显矛盾，否则在描述本发明的上下文中(尤其在以下权利要求书的上下文中)使用术语“一(a/an)”和“所述”和“至少一个(种)”和类似参照物应解释为涵盖单数和复数两者。除非本文中另外指示或与上下文明显矛盾，否则应将后接一个或多个条目的列表(例如“A和B中的至少一个(种)”)的术语“至少一个(种)”的使用理解为意指选自所列条目的一个条目(A或B)或所列条目中的两个或更多的任何组合(A和B)。除非另外指出，否则术语“包含”、“具有”、“包括”和“含有”应理解为开端式术语(即，意指“包括(但不限于)”)。除非另外指示，否则本文中值范围的列举仅意图充当单独提及属于所述范围内的各独立值的简写方法，并且各独立值并入本说明书中，如同在本文中单独列举一般。除非本文另外指示或另外与上下文明显矛盾，否则本文所述的所有方法均可以任何适合次序进行。除非另外要求，否则使用本文所提供的任何和所有实例或示例性语言(例如，“如”)仅意图较好地阐明本发明而不对本发明的范围造成限制。本说明书中的语言不应理解为指示实践本发明所必需的任何未要求的要素。

本发明的优选实施例描述于本文中，包括本发明人已知用于实施本发明的最佳模式。在阅读前文描述之后，所述优选实施例的变化对于所属领域的一般技术人员可变得显而易见。本发明人期望技术人员适当时采用所述变化，并且本发明人意图以不同于本文中特定描述的其它方式来实施本发明。因此，如果适用法律允许，那么本发明包含在随附于本文的权利要求书中所叙述的标的物的所有修改和等效物。此外，除非本文另外指示或另外与上下文明显矛盾，否则本发明涵盖上述要素在其所有可能变化中的任何组合。

序列表

<110> 免疫医疗有限责任公司(MEDIMMUNE, LLC)

<120> 抗金黄色葡萄球菌抗体的组合

<130> 2943.102PC03

<150> US 62/833,297

<151> 2019-04-12

<150> US 62/743,490

<151> 2018-10-09

<160> 70

<170> PatentIn版本3.5

<210> 1

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

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<213> 人工序列

<220>

<223> VH CDR2

<400> 2

Gly Ile Gly Thr Ala Gly Asp Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys Gly

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<210> 3

<211> 14

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VH CDR3

<400> 3

Asp Arg Tyr Ser Pro Thr Gly His Tyr Tyr Gly Met Asp Val

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<210> 4

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VH CDR1

<400> 4

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<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

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<400> 6

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Gly

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<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VH CDR3

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<210> 10

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VL CDR1

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Lys Ala Ser Ser Leu Glu Ser

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

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Arg Ala Ser Gln Ser Ile Thr Ser Tyr Leu Asn

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<213> 人工序列

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

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<213> 人工序列

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VL CDR2

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Arg Ser Ile Gln Arg Pro Ser

1 5

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<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VL CDR3

<400> 18

Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu Arg Ala Trp Val

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<211> 122

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VH氨基酸序列

<400> 19

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser His

20 25 30

Asp Met His Trp Val Arg Gln Ala Thr Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Gly Ile Gly Thr Ala Gly Asp Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Glu Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu

65 70 75 80

Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Gly Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Arg Asp Arg Tyr Ser Pro Thr Gly His Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 20

<211> 124

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VH氨基酸序列

<400> 20

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Gln Asn Ser

20 25 30

Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Tyr Leu Tyr Ser Ser Gly Arg Thr Asn Tyr Thr Pro Ser Leu Lys

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Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu

65 70 75 80

Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Arg Thr His Leu Gly Gly Phe His Tyr Gly Gly Gly Phe Trp Phe Asp

100 105 110

Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 21

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<212> PRT

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<220>

<223> VH氨基酸序列

<400> 21

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Val Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Arg Asn Ala

20 25 30

Leu Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Gly Arg Ser Lys Thr Asp Gly Gly Thr Thr Asp Tyr Ala Ala Pro Val

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Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

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Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

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Thr Thr Gly Pro Gly Gly Gly Pro Pro Gly Asp Tyr Tyr Tyr Asp Gly

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Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

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<210> 22

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VH氨基酸序列

<400> 22

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Lys Pro Gly Gly

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Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Ala

20 25 30

Trp Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Gly Arg Ile Arg Ser Lys Thr Ala Gly Gly Thr Thr Asp Tyr Ala Ala

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Pro Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr

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Leu Tyr Leu Gln Met Thr Ser Leu Lys Ile Glu Asp Thr Ala Leu Tyr

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Tyr Cys Met Thr Asp Gly Leu Gly Leu Leu Asn Phe Gly Asp Ser Asp

100 105 110

Pro His His Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Arg Val Thr Val Ser Ser

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<210> 23

<211> 122

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VH氨基酸序列

<220>

<221> misc_feature

<222> (25)..(25)

<223> Xaa可为任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> misc_feature

<222> (28)..(28)

<223> Xaa可为任何天然存在的氨基酸

<400> 23

Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu

1 5 10 15

Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Ala Xaa Gly Tyr Xaa Phe Thr Ser Tyr

20 25 30

Trp Ile Gly Trp Val Arg Gln Val Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Ile Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Thr Arg His Ser Pro Ser Phe

50 55 60

Gln Gly Gln Val Thr Ile Ser Val Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Ser Ala Met Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg His Gln Ser Gly Ser His Gly Phe Asp Ala Phe Glu Ile Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 24

<211> 119

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VH氨基酸序列

<400> 24

Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu

1 5 10 15

Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Asn Phe Thr Asn Tyr

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Trp Ile Ala Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met

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Gly Ile Ile Tyr Ser Gly Asp Ser Asp Thr Arg Tyr Ser Pro Ser Phe

50 55 60

Leu Gly Gln Val Ser Ile Ser Val Asp Lys Ser Phe Thr Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Trp Arg Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys

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Ala Arg Arg Pro Gly Gly Gln Lys Pro Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly

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<212> PRT

<213> 人工序列

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<223> VH氨基酸序列

<400> 25

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Asn Ala

20 25 30

Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Gly Arg Ile Lys Ser Glu Thr Ala Gly Gly Thr Thr Asp Tyr Ala Ala

50 55 60

Pro Val Lys Gly Arg Phe Ser Ile Ser Arg Asp Asp Ser Arg Asn Thr

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Leu Tyr Leu Glu Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr

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Tyr Cys Thr Thr Asp Ser Tyr Thr Pro Leu Glu Glu Pro Cys Pro Asn

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Gly Val Cys Tyr Thr Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln

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Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

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<210> 26

<211> 119

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VH氨基酸序列

<400> 26

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ile Phe Asn Arg Tyr

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Ser Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Tyr Ile Ser Ser Ser Ser Ser Pro Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

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<212> PRT

<213> 人工序列

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<223> VH氨基酸序列

<400> 27

Gln Val Thr Leu Arg Glu Ser Gly Pro Ala Leu Val Lys Pro Thr Gln

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Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Ser

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Gly Met Cys Val Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu

35 40 45

Trp Leu Ala Leu Ile Glu Trp Asp Asp Asp Lys Tyr Tyr Asn Thr Ser

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Leu Lys Thr Arg Leu Ser Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val

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Val Leu Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Gly Thr Tyr Tyr

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Cys Ala Arg His Ser Ser Ser Ser Arg Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln

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Gly Ala Leu Val Thr Val Ser Ser

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<210> 28

<211> 121

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VH氨基酸序列

<400> 28

Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu

1 5 10 15

Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Thr Tyr

20 25 30

Trp Ile Ala Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Ile Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Thr Arg Tyr Ser Pro Ser Phe

50 55 60

Gln Gly Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Thr Ala Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Trp Ser Ser Leu Asn Ala Ser Asp Ser Ala Met Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gln Gly Gly Ser His Gly Tyr Asp Ala Phe His Met Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 29

<211> 112

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VH氨基酸序列

<400> 29

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Thr Tyr

20 25 30

Ala Leu Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Gly Ile Asn Gly Thr Gly Tyr Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Arg Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Thr

65 70 75 80

Leu Glu Met Asn Ser Leu Arg Val Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys

85 90 95

His Lys Val Pro Trp Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Ser Val Ser Ser

100 105 110

<210> 30

<211> 128

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VH氨基酸序列

<400> 30

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Arg Leu Val Lys Pro Ser Glu

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Phe Val Ser Gly Gly Ser Ile Asn Asn Ser

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Tyr Trp Thr Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile

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Gly Phe Val Phe Ser Ser Gly Arg Thr Asn Tyr Ser Pro Ser Leu Lys

50 55 60

Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Leu Phe Ser Leu

65 70 75 80

Arg Leu Thr Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys Ala

85 90 95

Arg Gln Val His Tyr Asp Phe Trp Ser Gly Tyr Ser Leu Thr Lys Thr

100 105 110

Asn Trp Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 31

<211> 128

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VH氨基酸序列

<400> 31

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Val Val Ser Gly Gly Ser Ile Asn Asn Ser

20 25 30

Tyr Trp Thr Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Phe Val Tyr Ser Ser Gly Arg Thr Tyr Tyr Ser Pro Ser Leu Lys

50 55 60

Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Phe Phe Ser Leu

65 70 75 80

Arg Leu Asn Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys Ala

85 90 95

Arg Gln Val His Tyr Asp Leu Trp Ser Gly Tyr Ser Leu Thr Lys Thr

100 105 110

Asn Trp Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 32

<211> 121

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VH氨基酸序列

<400> 32

Gln Leu Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Ala Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Thr Tyr

20 25 30

Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Arg Gly Leu Glu Trp Val

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Ala Val Thr Ser Phe Asp Gly Ser Asn Glu Tyr Tyr Ile Asp Ser Val

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Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Thr Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Thr Gly Leu Arg Val Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Phe Cys

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Ala Arg Asp Glu Tyr Thr Gly Gly Trp Tyr Ser Val Gly Tyr Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 33

<211> 106

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VL氨基酸序列

<400> 33

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Lys Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Lys Gln Tyr Ala Asp Tyr Trp Thr

85 90 95

Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 34

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VL氨基酸序列

<400> 34

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Thr Ser Tyr

20 25 30

Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ala Ser Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Glu Ser Tyr Ser Thr Pro Pro

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 35

<211> 106

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VL氨基酸序列

<400> 35

Ser Tyr Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ser Pro Gly Gln

1 5 10 15

Thr Ala Arg Ile Thr Cys Ser Gly Asp Ala Val Pro Lys Lys Tyr Ala

20 25 30

Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Ile Tyr

35 40 45

Glu Asp Lys Lys Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser

50 55 60

Ser Ser Gly Thr Met Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Ala Gln Val Glu

65 70 75 80

Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Tyr Ser Thr Asp Ser Ser Glu Gly Val

85 90 95

Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu

100 105

<210> 36

<211> 106

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VL氨基酸序列

<400> 36

Ser Tyr Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ser Pro Gly Gln

1 5 10 15

Thr Ala Arg Ile Thr Cys Ser Gly Asp Ala Leu Pro Lys Lys Tyr Ala

20 25 30

Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Ile His

35 40 45

Glu Asp Thr Lys Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser

50 55 60

Ser Ser Gly Thr Met Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Ala Gln Val Glu

65 70 75 80

Asp Glu Ala Asp Tyr His Cys Tyr Ser Thr Asp Ser Ser Gly Val Val

85 90 95

Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu

100 105

<210> 37

<211> 113

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VL氨基酸序列

<400> 37

Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Gly Val Leu Ser Arg

20 25 30

Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln

35 40 45

Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val

50 55 60

Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr

65 70 75 80

Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln

85 90 95

Tyr Tyr Asn Asn Leu Arg Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile

100 105 110

Arg

<210> 38

<211> 106

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VL氨基酸序列

<400> 38

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Arg Ile Ser Asn Trp

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Lys Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Lys Ala Ser Thr Leu Glu Ser Glu Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Asp Asp Leu Ala Thr Tyr Tyr Cys His Gln Tyr Ile Ser Tyr Tyr Thr

85 90 95

Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 39

<211> 111

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VL氨基酸序列

<400> 39

Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Ala Ala Pro Gly Glu

1 5 10 15

Lys Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ala Asn

20 25 30

Ser Val Ser Trp Tyr Gln Gln Phe Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu

35 40 45

Ile Tyr Asp Asn Asp Lys Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Thr Leu Gly Ile Thr Gly Leu Gln

65 70 75 80

Thr Gly Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gly Thr Trp Val Gly Ile Leu

85 90 95

Ser Ala Gly Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu

100 105 110

<210> 40

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VL氨基酸序列

<400> 40

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Asn

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Lys Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Leu Arg Ser Asn Trp Ala Tyr

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 41

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VL氨基酸序列

<400> 41

Ser Tyr Gly Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ser Pro Gly Gln

1 5 10 15

Thr Ala Arg Ile Thr Cys Ser Gly Asp Ala Leu Ala Lys Gln Tyr Val

20 25 30

Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Ile Asp

35 40 45

Lys Asp Arg Glu Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser

50 55 60

Ser Ser Gly Thr Thr Val Thr Leu Thr Ile Ser Gly Val Gln Ala Glu

65 70 75 80

Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Ala Asp Ser Ser Arg Thr Tyr

85 90 95

Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu

100 105

<210> 42

<211> 112

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VL氨基酸序列

<400> 42

Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly

1 5 10 15

Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser

20 25 30

Asp Gly Asn Thr Tyr Leu Asn Trp Phe Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Arg Arg Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Asp Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Gly

85 90 95

Thr His Leu Thr Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 43

<211> 113

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VL氨基酸序列

<400> 43

Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Glu Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Phe Phe Lys

20 25 30

Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln

35 40 45

Pro Pro Lys Val Ile Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val

50 55 60

Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr

65 70 75 80

Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Phe Cys His Gln

85 90 95

Tyr Tyr Ser Thr Gln Tyr Ser Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile

100 105 110

Lys

<210> 44

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VL氨基酸序列

<400> 44

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Thr Val Thr Ile Thr Cys Arg Thr Ser Gln Ser Ile Ser Asn Phe

20 25 30

Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Val Asn Gly

50 55 60

Ser Thr Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Leu Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Trp

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 45

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VL氨基酸序列

<400> 45

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Thr Val Thr Ile Thr Cys Arg Thr Ser Gln Ser Ile Ser Asn Phe

20 25 30

Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Asn Gly

50 55 60

Ser Thr Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Leu Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Trp

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 46

<211> 110

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VL氨基酸序列

<400> 46

Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln

1 5 10 15

Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Tyr Asn Ile Gly Ser Asn

20 25 30

Tyr Val Tyr Trp Tyr Gln Gln Phe Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu

35 40 45

Ile Ser Arg Ser Ile Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Ser Lys Ser Val Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg

65 70 75 80

Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu

85 90 95

Arg Ala Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu

100 105 110

<210> 47

<211> 452

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 全长重链氨基酸序列

<400> 47

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser His

20 25 30

Asp Met His Trp Val Arg Gln Ala Thr Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Gly Ile Gly Thr Ala Gly Asp Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Glu Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu

65 70 75 80

Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Gly Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Arg Asp Arg Tyr Ser Pro Thr Gly His Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro

115 120 125

Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr

130 135 140

Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr

145 150 155 160

Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro

165 170 175

Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr

180 185 190

Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn

195 200 205

His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser

210 215 220

Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu

225 230 235 240

Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu

245 250 255

Tyr Ile Thr Arg Glu Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser

260 265 270

His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu

275 280 285

Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr

290 295 300

Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn

305 310 315 320

Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro

325 330 335

Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln

340 345 350

Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val

355 360 365

Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val

370 375 380

Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro

385 390 395 400

Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr

405 410 415

Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val

420 425 430

Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu

435 440 445

Ser Pro Gly Lys

450

<210> 48

<211> 452

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 全长重链氨基酸序列

<400> 48

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser His

20 25 30

Asp Met His Trp Val Arg Gln Ala Thr Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Gly Ile Gly Thr Ala Gly Asp Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Glu Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu

65 70 75 80

Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Gly Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Arg Asp Arg Tyr Ser Pro Thr Gly His Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro

115 120 125

Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr

130 135 140

Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr

145 150 155 160

Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro

165 170 175

Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr

180 185 190

Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn

195 200 205

His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser

210 215 220

Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu

225 230 235 240

Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu

245 250 255

Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser

260 265 270

His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu

275 280 285

Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr

290 295 300

Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn

305 310 315 320

Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro

325 330 335

Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln

340 345 350

Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val

355 360 365

Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val

370 375 380

Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro

385 390 395 400

Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr

405 410 415

Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val

420 425 430

Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu

435 440 445

Ser Pro Gly Lys

450

<210> 49

<211> 454

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 全长重链氨基酸序列

<400> 49

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Gln Asn Ser

20 25 30

Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Tyr Leu Tyr Ser Ser Gly Arg Thr Asn Tyr Thr Pro Ser Leu Lys

50 55 60

Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu

65 70 75 80

Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Arg Thr His Leu Gly Gly Phe His Tyr Gly Gly Gly Phe Trp Phe Asp

100 105 110

Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys

115 120 125

Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly

130 135 140

Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro

145 150 155 160

Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr

165 170 175

Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val

180 185 190

Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn

195 200 205

Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro

210 215 220

Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu

225 230 235 240

Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp

245 250 255

Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp

260 265 270

Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly

275 280 285

Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn

290 295 300

Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp

305 310 315 320

Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro

325 330 335

Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu

340 345 350

Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn

355 360 365

Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile

370 375 380

Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr

385 390 395 400

Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys

405 410 415

Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys

420 425 430

Ser Val Met His Glu Ala Cys Ser Tyr His Leu Cys Gln Lys Ser Leu

435 440 445

Ser Leu Ser Pro Gly Lys

450

<210> 50

<211> 451

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 全长重链氨基酸序列

<400> 50

Gln Leu Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Ala Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Thr Tyr

20 25 30

Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Arg Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Val Thr Ser Phe Asp Gly Ser Asn Glu Tyr Tyr Ile Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Thr Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Thr Gly Leu Arg Val Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Phe Cys

85 90 95

Ala Arg Asp Glu Tyr Thr Gly Gly Trp Tyr Ser Val Gly Tyr Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser

115 120 125

Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala

130 135 140

Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val

145 150 155 160

Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala

165 170 175

Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val

180 185 190

Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His

195 200 205

Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys

210 215 220

Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly

225 230 235 240

Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Tyr

245 250 255

Ile Thr Arg Glu Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His

260 265 270

Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val

275 280 285

His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr

290 295 300

Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly

305 310 315 320

Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile

325 330 335

Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val

340 345 350

Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser

355 360 365

Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu

370 375 380

Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro

385 390 395 400

Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val

405 410 415

Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met

420 425 430

His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser

435 440 445

Pro Gly Lys

450

<210> 51

<211> 451

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 全长重链氨基酸序列

<400> 51

Gln Leu Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Ala Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Thr Tyr

20 25 30

Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Arg Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Val Thr Ser Phe Asp Gly Ser Asn Glu Tyr Tyr Ile Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Thr Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Thr Gly Leu Arg Val Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Phe Cys

85 90 95

Ala Arg Asp Glu Tyr Thr Gly Gly Trp Tyr Ser Val Gly Tyr Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser

115 120 125

Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala

130 135 140

Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val

145 150 155 160

Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala

165 170 175

Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val

180 185 190

Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His

195 200 205

Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys

210 215 220

Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly

225 230 235 240

Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met

245 250 255

Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His

260 265 270

Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val

275 280 285

His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr

290 295 300

Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly

305 310 315 320

Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile

325 330 335

Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val

340 345 350

Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser

355 360 365

Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu

370 375 380

Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro

385 390 395 400

Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val

405 410 415

Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met

420 425 430

His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser

435 440 445

Pro Gly Lys

450

<210> 52

<211> 212

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 全长轻链氨基酸序列

<400> 52

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Lys Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Lys Gln Tyr Ala Asp Tyr Trp Thr

85 90 95

Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro

100 105 110

Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr

115 120 125

Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys

130 135 140

Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu

145 150 155 160

Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser

165 170 175

Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala

180 185 190

Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe

195 200 205

Asn Arg Gly Glu

210

<210> 53

<211> 214

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 全长轻链氨基酸序列

<400> 53

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Thr Ser Tyr

20 25 30

Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ala Ser Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Glu Ser Tyr Ser Thr Pro Pro

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala

100 105 110

Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly

115 120 125

Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala

130 135 140

Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln

145 150 155 160

Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser

165 170 175

Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr

180 185 190

Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser

195 200 205

Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210

<210> 54

<211> 216

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 全长轻链氨基酸序列

<400> 54

Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln

1 5 10 15

Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Tyr Asn Ile Gly Ser Asn

20 25 30

Tyr Val Tyr Trp Tyr Gln Gln Phe Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu

35 40 45

Ile Ser Arg Ser Ile Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Ser Lys Ser Val Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg

65 70 75 80

Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu

85 90 95

Arg Ala Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln

100 105 110

Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu

115 120 125

Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr

130 135 140

Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys

145 150 155 160

Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr

165 170 175

Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His

180 185 190

Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys

195 200 205

Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser

210 215

<210> 55

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> Fc区

<400> 55

Cys Ser Tyr His Leu Cys

1 5

<210> 56

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 重链恒定结构域

<400> 56

Met His Glu Ala Cys Ser Tyr His Leu Cys Gln Lys Ser Leu Ser Leu

1 5 10 15

Ser

<210> 57

<211> 293

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 金黄色葡萄球菌α毒素

<400> 57

Ala Asp Ser Asp Ile Asn Ile Lys Thr Gly Thr Thr Asp Ile Gly Ser

1 5 10 15

Asn Thr Thr Val Lys Thr Gly Asp Leu Val Thr Tyr Asp Lys Glu Asn

20 25 30

Gly Met His Lys Lys Val Phe Tyr Ser Phe Ile Asp Asp Lys Asn His

35 40 45

Asn Lys Lys Leu Leu Val Ile Arg Thr Lys Gly Thr Ile Ala Gly Gln

50 55 60

Tyr Arg Val Tyr Ser Glu Glu Gly Ala Asn Lys Ser Gly Leu Ala Trp

65 70 75 80

Pro Ser Ala Phe Lys Val Gln Leu Gln Leu Pro Asp Asn Glu Val Ala

85 90 95

Gln Ile Ser Asp Tyr Tyr Pro Arg Asn Ser Ile Asp Thr Lys Glu Tyr

100 105 110

Met Ser Thr Leu Thr Tyr Gly Phe Asn Gly Asn Val Thr Gly Asp Asp

115 120 125

Thr Gly Lys Ile Gly Gly Leu Ile Gly Ala Asn Val Ser Ile Gly His

130 135 140

Thr Leu Lys Tyr Val Gln Pro Asp Phe Lys Thr Ile Leu Glu Ser Pro

145 150 155 160

Thr Asp Lys Lys Val Gly Trp Lys Val Ile Phe Asn Asn Met Val Asn

165 170 175

Gln Asn Trp Gly Pro Tyr Asp Arg Asp Ser Trp Asn Pro Val Tyr Gly

180 185 190

Asn Gln Leu Phe Met Lys Thr Arg Asn Gly Ser Met Lys Ala Ala Asp

195 200 205

Asn Phe Leu Asp Pro Asn Lys Ala Ser Ser Leu Leu Ser Ser Gly Phe

210 215 220

Ser Pro Asp Phe Ala Thr Val Ile Thr Met Asp Arg Lys Ala Ser Lys

225 230 235 240

Gln Gln Thr Asn Ile Asp Val Ile Tyr Glu Arg Val Arg Asp Asp Tyr

245 250 255

Gln Leu His Trp Thr Ser Thr Asn Trp Lys Gly Thr Asn Thr Lys Asp

260 265 270

Lys Trp Thr Asp Arg Ser Ser Glu Arg Tyr Lys Ile Asp Trp Glu Lys

275 280 285

Glu Glu Met Thr Asn

290

<210> 58

<211> 293

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 金黄色葡萄球菌α毒素H35L突变体

<400> 58

Ala Asp Ser Asp Ile Asn Ile Lys Thr Gly Thr Thr Asp Ile Gly Ser

1 5 10 15

Asn Thr Thr Val Lys Thr Gly Asp Leu Val Thr Tyr Asp Lys Glu Asn

20 25 30

Gly Met Leu Lys Lys Val Phe Tyr Ser Phe Ile Asp Asp Lys Asn His

35 40 45

Asn Lys Lys Leu Leu Val Ile Arg Thr Lys Gly Thr Ile Ala Gly Gln

50 55 60

Tyr Arg Val Tyr Ser Glu Glu Gly Ala Asn Lys Ser Gly Leu Ala Trp

65 70 75 80

Pro Ser Ala Phe Lys Val Gln Leu Gln Leu Pro Asp Asn Glu Val Ala

85 90 95

Gln Ile Ser Asp Tyr Tyr Pro Arg Asn Ser Ile Asp Thr Lys Glu Tyr

100 105 110

Met Ser Thr Leu Thr Tyr Gly Phe Asn Gly Asn Val Thr Gly Asp Asp

115 120 125

Thr Gly Lys Ile Gly Gly Leu Ile Gly Ala Asn Val Ser Ile Gly His

130 135 140

Thr Leu Lys Tyr Val Gln Pro Asp Phe Lys Thr Ile Leu Glu Ser Pro

145 150 155 160

Thr Asp Lys Lys Val Gly Trp Lys Val Ile Phe Asn Asn Met Val Asn

165 170 175

Gln Asn Trp Gly Pro Tyr Asp Arg Asp Ser Trp Asn Pro Val Tyr Gly

180 185 190

Asn Gln Leu Phe Met Lys Thr Arg Asn Gly Ser Met Lys Ala Ala Asp

195 200 205

Asn Phe Leu Asp Pro Asn Lys Ala Ser Ser Leu Leu Ser Ser Gly Phe

210 215 220

Ser Pro Asp Phe Ala Thr Val Ile Thr Met Asp Arg Lys Ala Ser Lys

225 230 235 240

Gln Gln Thr Asn Ile Asp Val Ile Tyr Glu Arg Val Arg Asp Asp Tyr

245 250 255

Gln Leu His Trp Thr Ser Thr Asn Trp Lys Gly Thr Asn Thr Lys Asp

260 265 270

Lys Trp Thr Asp Arg Ser Ser Glu Arg Tyr Lys Ile Asp Trp Glu Lys

275 280 285

Glu Glu Met Thr Asn

290

<210> 59

<211> 300

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 金黄色葡萄球菌HIgB

<400> 59

Gly Glu Gly Lys Ile Thr Pro Val Ser Val Lys Lys Val Asp Asp Lys

1 5 10 15

Val Thr Leu Tyr Lys Thr Thr Ala Thr Ala Asp Ser Asp Lys Phe Lys

20 25 30

Ile Ser Gln Ile Leu Thr Phe Asn Phe Ile Lys Asp Lys Ser Tyr Asp

35 40 45

Lys Asp Thr Leu Val Leu Lys Ala Thr Gly Asn Ile Asn Ser Gly Phe

50 55 60

Val Lys Pro Asn Pro Asn Asp Tyr Asp Phe Ser Lys Leu Tyr Trp Gly

65 70 75 80

Ala Lys Tyr Asn Val Ser Ile Ser Ser Gln Ser Asn Asp Ser Val Asn

85 90 95

Val Val Asp Tyr Ala Pro Lys Asn Gln Asn Glu Glu Phe Gln Val Gln

100 105 110

Asn Thr Leu Gly Tyr Thr Phe Gly Gly Asp Ile Ser Ile Ser Asn Gly

115 120 125

Leu Ser Gly Gly Leu Asn Gly Asn Thr Ala Phe Ser Glu Thr Ile Asn

130 135 140

Tyr Lys Gln Glu Ser Tyr Arg Thr Thr Leu Ser Arg Asn Thr Asn Tyr

145 150 155 160

Lys Asn Val Gly Trp Gly Val Glu Ala His Lys Ile Met Asn Asn Gly

165 170 175

Trp Gly Pro Tyr Gly Arg Asp Ser Phe His Pro Thr Tyr Gly Asn Glu

180 185 190

Leu Phe Leu Ala Gly Arg Gln Ser Ser Ala Tyr Ala Gly Gln Asn Phe

195 200 205

Ile Ala Gln His Gln Met Pro Leu Leu Ser Arg Ser Asn Phe Asn Pro

210 215 220

Glu Phe Leu Ser Val Leu Ser His Arg Gln Asp Gly Ala Lys Lys Ser

225 230 235 240

Lys Ile Thr Val Thr Tyr Gln Arg Glu Met Asp Leu Tyr Gln Ile Arg

245 250 255

Trp Asn Gly Phe Tyr Trp Ala Gly Ala Asn Tyr Lys Asn Phe Lys Thr

260 265 270

Arg Thr Phe Lys Ser Thr Tyr Glu Ile Asp Trp Glu Asn His Lys Val

275 280 285

Lys Leu Leu Asp Thr Lys Glu Thr Glu Asn Asn Lys

290 295 300

<210> 60

<211> 302

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 金黄色葡萄球菌LukF

<400> 60

Gly Ala Gln His Ile Thr Pro Val Ser Glu Lys Lys Val Asp Asp Lys

1 5 10 15

Ile Thr Leu Tyr Lys Thr Thr Ala Thr Ser Asp Ser Asp Lys Leu Lys

20 25 30

Ile Ser Gln Ile Leu Thr Phe Asn Phe Ile Lys Asp Lys Ser Tyr Asp

35 40 45

Lys Asp Thr Leu Ile Leu Lys Ala Ala Gly Asn Ile Tyr Ser Gly Tyr

50 55 60

Thr Lys Pro Asn Pro Lys Asp Thr Ile Ser Ser Gln Phe Tyr Trp Gly

65 70 75 80

Ser Lys Tyr Asn Ile Ser Ile Asn Ser Asp Ser Asn Asp Ser Val Asn

85 90 95

Val Val Asp Tyr Ala Pro Lys Asn Gln Asn Glu Glu Phe Gln Val Gln

100 105 110

Gln Thr Val Gly Tyr Ser Tyr Gly Gly Asp Ile Asn Ile Ser Asn Gly

115 120 125

Leu Ser Gly Gly Gly Asn Gly Ser Lys Ser Phe Ser Glu Thr Ile Asn

130 135 140

Tyr Lys Gln Glu Ser Tyr Arg Thr Ser Leu Asp Lys Arg Thr Asn Phe

145 150 155 160

Lys Lys Ile Gly Trp Asp Val Glu Ala His Lys Ile Met Asn Asn Gly

165 170 175

Trp Gly Pro Tyr Gly Arg Asp Ser Tyr His Ser Thr Tyr Gly Asn Glu

180 185 190

Met Phe Leu Gly Ser Arg Gln Ser Asn Leu Asn Ala Gly Gln Asn Phe

195 200 205

Leu Glu Tyr His Lys Met Pro Val Leu Ser Arg Gly Asn Phe Asn Pro

210 215 220

Glu Phe Ile Gly Val Leu Ser Arg Lys Gln Asn Ala Ala Lys Lys Ser

225 230 235 240

Lys Ile Thr Val Thr Tyr Gln Arg Glu Met Asp Arg Tyr Thr Asn Phe

245 250 255

Trp Asn Gln Leu His Trp Ile Gly Asn Asn Tyr Lys Asp Glu Asn Arg

260 265 270

Ala Thr His Thr Ser Ile Tyr Glu Val Asp Trp Glu Asn His Thr Val

275 280 285

Lys Leu Ile Asp Thr Gln Ser Lys Glu Lys Asn Pro Met Ser

290 295 300

<210> 61

<211> 302

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 金黄色葡萄球菌LukD

<400> 61

Gly Ala Gln His Ile Thr Pro Val Ser Glu Lys Lys Val Asp Asp Lys

1 5 10 15

Ile Thr Leu Tyr Lys Thr Thr Ala Thr Ser Asp Asn Asp Lys Leu Asn

20 25 30

Ile Ser Gln Ile Leu Thr Phe Asn Phe Ile Lys Asp Lys Ser Tyr Asp

35 40 45

Lys Asp Thr Leu Val Leu Lys Ala Ala Gly Asn Ile Asn Ser Gly Tyr

50 55 60

Lys Lys Pro Asn Pro Lys Asp Tyr Asn Tyr Ser Gln Phe Tyr Trp Gly

65 70 75 80

Gly Lys Tyr Asn Val Ser Val Ser Ser Glu Ser Asn Asp Ala Val Asn

85 90 95

Val Val Asp Tyr Ala Pro Lys Asn Gln Asn Glu Glu Phe Gln Val Gln

100 105 110

Gln Thr Leu Gly Tyr Ser Tyr Gly Gly Asp Ile Asn Ile Ser Asn Gly

115 120 125

Leu Ser Gly Gly Leu Asn Gly Ser Lys Ser Phe Ser Glu Thr Ile Asn

130 135 140

Tyr Lys Gln Glu Ser Tyr Arg Thr Thr Ile Asp Arg Lys Thr Asn His

145 150 155 160

Lys Ser Ile Gly Trp Gly Val Glu Ala His Lys Ile Met Asn Asn Gly

165 170 175

Trp Gly Pro Tyr Gly Arg Asp Ser Tyr Asp Pro Thr Tyr Gly Asn Glu

180 185 190

Leu Phe Leu Gly Gly Arg Gln Ser Ser Ser Asn Ala Gly Gln Asn Phe

195 200 205

Leu Pro Thr His Gln Met Pro Leu Leu Ala Arg Gly Asn Phe Asn Pro

210 215 220

Glu Phe Ile Ser Val Leu Ser His Lys Gln Asn Asp Thr Lys Lys Ser

225 230 235 240

Lys Ile Lys Val Thr Tyr Gln Arg Glu Met Asp Arg Tyr Thr Asn Gln

245 250 255

Trp Asn Arg Leu His Trp Val Gly Asn Asn Tyr Lys Asn Gln Asn Thr

260 265 270

Val Thr Phe Thr Ser Thr Tyr Glu Val Asp Trp Gln Asn His Thr Val

275 280 285

Lys Leu Ile Gly Thr Asp Ser Lys Glu Thr Asn Pro Gly Val

290 295 300

<210> 62

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VH CDR1

<400> 62

Ser Phe Ala Met Ser

1 5

<210> 63

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VH CDR2

<400> 63

Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 64

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VH CDR3

<400> 64

Ile Ala Phe Asp Ile

1 5

<210> 65

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VL CDR1

<400> 65

Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Asp Leu Gly

1 5 10

<210> 66

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VL CDR2

<400> 66

Val Ala Ser Ser Leu Gln Ser

1 5

<210> 67

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VL CDR3

<400> 67

Leu Gln His Asn Ser Tyr Pro Phe Thr

1 5

<210> 68

<211> 114

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VH氨基酸序列

<400> 68

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Phe

20 25 30

Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Lys Ile Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val

100 105 110

Ser Ser

<210> 69

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VL氨基酸序列

<400> 69

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Asp

20 25 30

Leu Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Leu Ile

35 40 45

Tyr Val Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln His Asn Ser Tyr Pro Phe

85 90 95

Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys

100 105

<210> 70

<211> 454

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 全长轻链氨基酸序列

<400> 70

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Gln Asn Ser

20 25 30

Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Tyr Leu Tyr Ser Ser Gly Arg Thr Asn Tyr Thr Pro Ser Leu Lys

50 55 60

Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu

65 70 75 80

Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Arg Thr His Leu Gly Gly Phe His Tyr Gly Gly Gly Phe Trp Phe Asp

100 105 110

Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys

115 120 125

Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly

130 135 140

Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro

145 150 155 160

Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr

165 170 175

Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val

180 185 190

Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn

195 200 205

Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro

210 215 220

Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu

225 230 235 240

Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp

245 250 255

Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp

260 265 270

Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly

275 280 285

Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn

290 295 300

Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp

305 310 315 320

Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro

325 330 335

Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu

340 345 350

Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn

355 360 365

Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile

370 375 380

Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr

385 390 395 400

Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys

405 410 415

Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys

420 425 430

Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu

435 440 445

Ser Leu Ser Pro Gly Lys

450