一种糠酸莫米松乳膏有关物质的检测方法

技术领域

本发明属于分析化学技术领域，具体涉及一种糠酸莫米松乳膏有关物质的检测方法。

背景技术

局部用皮质甾类具有抗炎、止痒和血管收缩作用，用于缓解牛皮癣、特应性皮炎(特应性湿疹)、其他皮肤病引起的发红、皮肤水肿(肿胀)、搔痒、皮肤变硬、剥落、起泡、裂开、渗出和不舒适感，其中，其他皮肤病包括接触性皮炎、脂溢性皮炎、干性湿疹、盘状湿疹、静脉性湿疹、疱疹样皮炎、神经性皮炎、自体湿疹化等。糠酸莫米松是一种皮质甾类，是人工合成的糖皮质激素药，糠酸莫米松乳膏有减轻炎症和瘙痒的作用，适用于对糖皮质激素有效的皮肤病，具有疗效强、肾上皮质功能抑制低的特点。

中国专利申请201811344989.2公开了一种糠酸莫米松凝胶的制备方法，由下述重量配比的原辅料制成：糠酸莫米松1.0g、卡波姆8.0-10.0g、三乙醇胺4.0-6.0g、药用乙醇50.0g、甘油150.0g、羟苯乙酯0-1.5g，加纯化水至总重量为1000g；其中糠酸莫米松凝胶pH值为5.5-6.5，三乙醇胺与卡波姆的质量比值为0.40-0.55；糠酸莫米松凝胶单个未知杂质不超过0.2％，总杂质不大于1.0％，在高温光照条件下更加稳定；同时本发明发现添加独活、卷柏、侧柏叶、白花蛇舌草、药用辅料、氮酮、米浆水对治疗脚开裂具有良好疗效。

中国专利申请201110297265.9公开了一种糠酸莫米松凝胶及其制备方法,糠酸莫米松凝胶，由下述重量配比的原辅料制成：糠酸莫米松1份、甘油150份、卡波姆7.5份、海藻酸钠1份、月桂氮卓酮5份、三乙醇胺10份、药用乙醇50份、羟苯乙酯2份、加余量的纯化水至总重量为1000份；本发明的优点：使用卡波姆作为水溶性基质，三乙醇胺作为稠度调节剂，使本品具有在皮肤表面附着性强，涂展性好，延长药物在皮肤表面的滞留时间的优点，增强了药物的作用；本品易于涂展和洗涤、无油腻感、能吸收组织渗出液、不妨碍皮肤的正常功能。本品易清洗、不污染衣物稳定性好；外观光滑、透明细腻；局部无刺激性；稠度、粘度适宜，易于涂布使用；携带、运输、贮藏方便等优势。

对于该类产品，现行标准缺乏对药品有关物质的检测监控，药品安全难以保证，加上糠酸莫米松类药物种类繁多，不同药物使用的辅料又不尽相同，已有方法通用性较差，对于不同类型药物的提取，可能需要准备不同的试剂，进行不同的操作，干扰后续测试，不利于该类产品的质量检测。所以如何快速的检测糠酸莫米松类药物中有关物质，将杂质控制在安全、合理的限度范围之内，保证药品的质量及安全性，对于产品的生产和储存、市场的抽检都具有重要意义。

有鉴于此，本发明提供一种糠酸莫米松乳膏中有关物质的检测方法，解决现行标准缺乏对药品有关物质的检测监控的问题。

发明内容

本发明的目的是提供一种糠酸莫米松乳膏中有关物质的检测方法，将杂质控制在安全、合理的限度范围之内，保证药品的质量及安全性，解决现行标准无有关物质监测监控问题。

为实现上述发明目的，本发明的技术方案如下：

一种糠酸莫米松乳膏中有关物质的检测方法，包括以下步骤：

(1)制备对照品溶液：取糠酸莫米松对照品和丙酸倍氯米松对照品，用乙腈溶解制备储备液溶液，储备液溶液再用乙腈稀释，得对照品溶液；

制备供试品溶液：取待测糠酸莫米松乳膏，加入乙腈加热熔化，冷却后离心，上清液即为供试品溶液；

制备对照溶液：取供试品溶液，加乙腈稀释，得对照溶液；

(2)取对照品溶液、供试品溶液、对照溶液，注入液相色谱仪，色谱条件为：

色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶填充的色谱柱，包括但不限于Thermo HypersilGold、Diamonsil C18等。

检测波长：245-265nm；

柱温：20-40℃；

流速：0.8-1.2mL/min；

进样量：15-25μL；

流动相：乙腈-水，流动相比例41-51:46-59；

系统适应性：糠酸莫米松与丙酸倍氯米松峰间分离度不小于6，理论塔板数按糠酸莫米松对照品色谱峰计算不得低于1000。

优选的，步骤(1)中，糠酸莫米松对照品和丙酸倍氯米松对照品的质量比为1：3。

进一步优选的，步骤(1)中，对照品溶液中糠酸莫米松含量为5μg/ml，丙酸倍氯米松含量为15μg/ml。

更进一步优选的，步骤(1)中，制备对照品溶液具体为：取糠酸莫米松对照品与丙酸倍氯米松对照品，用乙腈溶解并定容制成1ml含0.2mg糠酸莫米松和0.6mg丙酸倍氯米松的储备液溶液，再取上述储备液溶液，加乙腈稀释成1ml溶液含5μg糠酸莫米松对照品和15μg丙酸倍氯米松对照品的溶液，作为对照品溶液。

优选的，步骤(1)中，制备供试品溶液具体为：取待测糠酸莫米松乳膏，加入乙腈，60℃水浴加热熔化，强力振摇或超声处理，摇匀，置冰浴冷却10min，离心，上清液放至室温作为供试品溶液。

优选的，步骤(1)中，对照溶液中，供试品溶液的体积分数为1％。

进一步优选的，步骤(1)中，制备对照溶液具体为：取供试品溶液，加乙腈稀释100倍，摇匀，作为对照溶液。

优选的，步骤(2)中，色谱条件为：

色谱柱：Thermo Hypersil GOLD；

检测波长：249-259nm；

柱温：27-33℃；

流速：1.0-1.1mL/min；

进样量：18-22μL；

流动相：乙腈-水，流动相比例46-51：54-59；

进一步优选的，步骤(2)中，色谱条件为：

色谱柱：Thermo Hypersil GOLD。

检测波长：254nm；

柱温：30℃；

流速：1.0mL/min；

进样量：20μL

流动相：乙腈-水，流动相比例46:54。

与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：

本发明提供了糠酸莫米松乳膏中有关物质的检测方法，该方法操作简便，专属性高，抗干扰性强，线性良好，精密度和回收率高，耐用性好，可有效保证药品的质量及安全性，解决现行标准无有关物质监测监控问题。

附图说明

图1为本申请色谱图，图中，1-对照溶液色谱图；2-供试品溶液色谱图；3-对照品溶液色谱图；4-空白溶液色谱图。

具体实施方式

为了使本发明实现的技术手段、创作特征、达成目的与功效易于明白了解，下面结合具体实施例，进一步阐明本发明，但下述实施例仅为本发明的优选实施例，并非全部。为了清楚，不描述实际实施例的全部特征。在下列描述中，不详细描述公知的功能和结构，因为它们会使本发明由于不必要的细节而混乱。应当认为在任何实际实施例的开发中，必须做出大量实施细节以实现开发者的特定目标。基于实施方式中的实施例，本领域技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所获得其它实施例，都属于本发明的保护范围。

下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法，下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

下述实施例中，所用糠酸莫米松乳膏为自制，具体为：

配方：按照重量份：糠酸莫米松1、磷酸0.27、十六十八醇100、轻质液体石蜡40、甘油80、单双硬脂酸甘油酯100、95％乙醇70、二氧化钛2、聚山梨酯80 40、羟苯乙酯0.5、纯化水566.23。

步骤1，油相的配制：按重量称取十六十八醇、轻质液状石蜡、单双硬脂酸甘油酯置于油相加热罐中，开启夹层蒸汽加热至85℃，搅拌溶解，85℃保温备用；

步骤2，水相的配制：按重量称取纯化水、甘油、处方量二分之一的聚山梨酯80置于水相加热罐中，开启夹层蒸汽加热至85℃，搅拌均匀，85℃保温备用；

步骤3，磷酸溶液的配制：按重量称取磷酸，加纯化水制成1.0％的磷酸溶液，备用；

步骤4，主药溶液的配制：取剩余的聚山梨酯80于移动配制罐中，加入处方量的羟苯乙酯、糠酸莫米松，初步分散均匀，再加入95％乙醇，搅拌使溶解，备用；

步骤5，混合乳化：

a将水相抽入真空乳化机，加入二氧化钛，搅拌使其分散均匀，85℃保温备用；

b将油相抽入真空乳化机中，启动均质器(2000rpm，10分钟)，同时慢速搅拌(80rpm)制成乳剂型基质，降温至50℃-55℃，保温；

c将1.0％磷酸溶液抽入真空乳化机中，启动均质器(2000rpm，5分钟)，同时慢速搅拌(80rpm，5分钟)，50℃-55℃保温；

d将主药溶液抽入真空乳化机中，搅拌均匀，启动均质器(2000rpm，5分钟)，同时慢速搅拌(80rpm，25分钟)，冷却至50℃以下搅拌出膏。

下述实施例中，若无特殊说明，按照以下方法准备溶液和检测：

对照品溶液：取糠酸莫米松对照品与丙酸倍氯米松对照品适量，精密称定，用乙腈溶解并定容制成1ml含0.2mg糠酸莫米松和0.6mg丙酸倍氯米松的对照品溶液。再取上述储备液溶液，加乙腈稀释成1ml溶液含5μg糠酸莫米松对照品和15μg丙酸倍氯米松对照品的溶液，作为对照品溶液。

供试品溶液：取待测糠酸莫米松乳膏适量，相当于2.0mg糠酸莫米松，精密称定，置50ml量瓶中，精密加入乙腈20ml，置60℃水浴加热熔化，超声处理5min，摇匀，置冰浴冷却10min，迅速离心，滤过，上清液放至室温作为供试品溶液。

对照溶液：精密吸取供试品溶液，加乙腈稀释100倍，摇匀，作为对照溶液。

测定法：吸取对照品溶液、供试品溶液、对照溶液各20μL，注入液相色谱仪，记录图谱。

色谱条件：

色谱柱：Thermo Hypersil GOLD；

检测波长：254nm；

柱温：30℃；

流速：1.0mL/min；

进样量：20μL

流动相：乙腈-水，流动相比例46:54

实施例1系统适应性

取对照品溶液进样，测定系统适用性。如表1所示，结果显示，主峰与丙酸倍氯米松分离度＞6，符合规定。

表1.

实施例2方法专属性(破坏试验)

未破坏：取待测糠酸莫米松乳膏适量，相当于2.0mg糠酸莫米松，精密称定，置于50ml容量瓶中，精密加入乙腈20ml，置60℃水浴加热熔化，超声处理5min，摇匀，置冰浴冷却10min，迅速离心，滤过，上清液放至室温作为供试品溶液；

高温破坏：取待测糠酸莫米松乳膏适量，相当于2.0mg糠酸莫米松，精密称定，置于50ml容量瓶中，置150℃条件下加热90分钟，精密加入乙腈20ml，置60℃水浴加热熔化，超声处理5min，摇匀，置冰浴冷却10min，迅速离心，滤过，上清液放至室温作为供试品溶液；

酸破坏：取待测糠酸莫米松乳膏适量，相当于2.0mg糠酸莫米松，精密称定，置于50ml容量瓶中，精密加入6mol/L盐酸溶液2ml，振摇，室温放置1小时，精密加入6mol/L氢氧化钠溶液2ml中和，振摇，精密加入乙腈16ml，置60℃水浴加热熔化，超声处理5min，摇匀，置冰浴冷却10min，迅速离心，滤过，上清液放至室温作为供试品溶液；

碱破坏：取待测糠酸莫米松乳膏适量，相当于2.0mg糠酸莫米松，精密称定，置于50ml容量瓶中，精密加入6mol/L氢氧化钠溶液2ml，振摇，室温放置35min，精密加入6mol/L盐酸溶液2ml中和，振摇，精密加入乙腈16ml，置60℃水浴加热熔化，超声处理5min，摇匀，置冰浴冷却10min，迅速离心，滤过，上清液放至室温作为供试品溶液；

光照破坏：取待测糠酸莫米松乳膏适量，相当于2.0mg糠酸莫米松，平铺于50ml量瓶中，置4500lx灯下照射72小时，然后直接精密加入乙腈20ml，置60℃水浴加热熔化，超声处理5min，摇匀，置冰浴冷却10min，迅速离心，滤过，上清液放至室温作为供试品溶液；

氧化破坏：取待测糠酸莫米松乳膏适量，相当于2.0mg糠酸莫米松，精密称定，置于50ml容量瓶中，精密加入30％双氧水2ml，振摇，室温放置48小时，振摇，精密加入乙腈18ml，置60℃水浴加热熔化，超声处理5min，摇匀，置冰浴冷却10min，迅速离心，滤过，上清液放至室温作为供试品溶液。

分别取上述专溶液进样，按测定法测定，记录图谱。破坏后主峰面积％应在80％～90％之间，各杂质峰纯度角度值应小于纯度阈值，物料平衡计算结果应符合要求(98％～102％)。结果如表2。

表2.

结果显示，破坏试验出现降解杂质B、C、D、G、H，需对其进行线性考察和质量控制。

实施例3检测限和定量限

取糠酸莫米松对照品适量，精密称定，加乙腈稀释至约100μg/ml的糠酸莫米松对照品储备液，取对照品储备液适量，用乙腈稀释后，测定杂质的检测限(S/N＝3:1)与定量限(S/N＝10:1)，并将定量限连续进样6次，测定峰面积，并计算保留时间和峰面积的相对标准偏差，结果如下：

表3.

实施例4加样回收率试验

取糠酸莫米松乳膏适量(相当于糠酸莫米松1mg)，共9份，精密称定，分别置50ml量瓶，精密吸取糠酸莫米松对照品溶液(0.1033mg/ml)7.5ml、10ml、12.5ml各三份于上述中，再对应精密加入乙腈12.5ml、10ml、7.5ml各三份，混匀，置60℃水浴加热熔化，超声处理5min，摇匀，置冰浴冷却10min，迅速离心，滤过，上清液放至室温作为供试品溶液。取供试品溶液进样，计算加样回收率。结果显示，三个梯度9个样品(80％～120％)，回收率RSD％＝0.7％，符合要求。表4.

实施例5杂质定量的线性

取糠酸莫米松对照品适量，精密称定，加乙腈稀释至约100μg/ml的糠酸莫米松线性储备液；取杂质B、C、D、H、G对照品适量，分别用乙腈稀释至约100μg/ml的杂质B、C、D、H、G对照品储备液；精密吸取上述糠酸莫米松线性储备液4ml，与杂质B、C、D、H、G对照品储备液各1ml，置于20ml容量瓶中，加乙腈稀释至刻度，摇匀，制成含糠酸莫米松约20μg/ml，各杂质约5μ/ml的混合对照品溶液，作为线性混合储备液。分别吸取上述线性混合储备液0.2ml、0.4ml、0.8ml、1.2ml、2ml于10ml容量瓶中，用乙腈稀释至刻度，摇匀，分别吸取20μL，注入液相色谱仪，记录图谱。结果如下：

表5.

实施例6精密度

6.1重复性试验

取糠酸莫米松乳膏适量，测定各杂质，重复测定6次，计算，既得，结果如下表：

表6.

6.2中间精密度实验

由不同人员，在不同实验室、不同时间测定各杂质，结果如下表：

表7.

实施例7耐用性试验

取本品适量，测定各杂质，杂质峰与其他成分峰必须达到基线分离；各杂质条件下的杂质含量数据的相对标准偏差不大于2.0％，杂质含量的绝对值在±0.1％以内。

7.1不同流速

吸取对照品溶液、供试品溶液、对照溶液各20μl，注入液相色谱仪，记录图谱，按流速0.9ml/min、1.0ml/min、1.1ml/min，分别检测。结果如下表：

表8.

表9.

可以看出，流速为0.9ml/min时，在第三针出现了未知杂峰，而流速1.0-1.1ml/min之间更符合检验要求。

7.2不同色谱柱

取不同柱子，吸取对照品溶液、供试品溶液、对照溶液各20μl，注入液相色谱仪，记录图谱，结果如下表：

表10.

表11.

结果显示，使用Thermo Hypersil GOLD色谱柱效果最好，而更换为AgilentZORBAX C-18色谱柱，保留时间差异太大，使用Thermo ODS-2Hypersil色谱柱时，系统适用性最后一针图谱异常，效果同样不如Thermo Hypersil GOLD色谱柱。

7.3不同柱温

吸取对照品溶液、供试品溶液、对照溶液各20μl，注入液相色谱仪，记录图谱，柱温分别为27℃、30℃、33℃。结果如下表：

表12.

表13.

结果显示，在柱温为27、30℃时，系统适用性试验结果均能满足要求；柱温为33℃时，系统适用性第三针出现图谱异常，相对效果较差。

7.4不同流动相比例

吸取对照品溶液、供试品溶液、对照溶液各20μl，注入液相色谱仪，记录图谱，流动性比例分别为乙腈：水(51:46)、乙腈：水(46:54)、乙腈：水(41:59)。结果如下表：

表14.

表15.

结果显示，流动相为乙腈：水(41:59)时，分离度RSD偏高，流动相为乙腈：水(46:54)～乙腈：水(51:49)之间时，效果更好。

7.5不同检测波长

吸取对照品溶液、供试品溶液、对照溶液各20μl，注入液相色谱仪，记录图谱，检查波长分别为249nm、254nm、259nm。结果如下表：

表16.

表17.

结果显示，在三种检测波长下，均能符合检验要求。

上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。