一种缓解体力疲劳的组合物及其制备方法
文献发布时间：2023-06-19 16:04:54
技术领域
本发明涉及属于海洋生物技术领域，特别涉及一种缓解体力疲劳的组合物及其制备方法。
背景技术
随着生活节奏的加快和工作压力的增加，体力疲劳已成为非常常见的公共健康问题。 WHO调查显示，全球有35％以上的人处于疲劳状态。长时间的体力疲劳，容易引起注意力不集中、睡眠障碍，甚至于抑郁等精神系统症状，从而影响正常的工作、学习和生活。长期处于疲劳状态，还会导致免疫失调、激素紊乱、器质性疾病等。
水母属于腔肠动物，我国已记录的水母多达400多种，约占全球已记录种类的三分之一。水母资源丰富，分布广，从海南岛、广东沿海一直到山东、辽宁沿海均有分布。近年来，由于受全球气候变化等因素影响，水母暴发已成为除赤潮外，最严重的海洋生物灾害。水母中含有丰富的蛋白，现阶段对水母中蛋白的研究，主要集中于通过酸、碱、热水或酶法促溶提取胶原蛋白，将胶原蛋白酶解为胶原蛋白肽。在水母胶原蛋白的提取过程中，有大量的酸溶性或碱溶性蛋白被弃除，导致水母蛋白的利用率低。如何高效的利用水母中的蛋白，是建立水母资源高值化利用及水母防灾减灾技术的核心。
虽然现有技术中也有公开一些利用水母肽的相关技术，然而这些公开的资料中具体的生物对象相对单一，而应用成分的提取技术复杂、提取率低。
发明内容
为解决上述技术问题，本发明提供了一种缓解体力疲劳的组合物及其制备方法，以达到提高水母中蛋白的利用率，并将水母多肽和西洋参提取物复配，制备具有缓解体力疲劳的组合物的目的。
为达到上述目的，本发明的技术方案如下：
一种缓解体力疲劳的组合物，包括水母多肽和西洋参提取物，所述水母多肽的质量分数为80～90％，西洋参提取物的质量分数为10～20％；所述水母多肽为脱盐水母伞部或口腕部的酶解物。
上述方案中，所述水母多肽中蛋白含量高于70％，所述蛋白中的多肽含量占总量的60％以上，其中分子量>5000Da的多肽小于5％，分子量3000Da 上述方案中，所述水母多肽的制备方法如下：取脱盐水母的伞部或口腕部，清洗干净后匀浆，取匀浆物按照固液比1:3～6加水，然后加酶进行酶解，按匀浆物计的加酶量为1500～3000 U/g，酶解温度45～65℃，酶解时间3～8小时，在pH 5～7的酶解体系下进行酶解，酶解结束后，在100℃下煮沸10分钟灭酶；离心，除去残渣，上清液旋转蒸发浓缩至初始体积的1/4～1/5 后，冷冻干燥，得到水母多肽。 进一步的技术方案中，所述酶为木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶、碱性蛋白酶、中性蛋白酶、风味蛋白酶、胰蛋白酶、糜蛋白酶、胶原蛋白酶中的一种或几种组合。 上述方案中，所述西洋参提取物中的多糖含量>10％，皂甙含量>20％。 一种如上所述的缓解体力疲劳的组合物的制备方法，将水母多肽按照质量分数80～90％、西洋参提取物按照质量分数10～20％混合均匀，即得到组合物。 通过上述技术方案，本发明提供的一种缓解体力疲劳的组合物及其制备方法具有如下有益效果： 本发明提供的缓解体力疲劳的组合物，是将海洋源的水母多肽和陆源的西洋参提取物两者组合，效果好、易吸收、无毒、无副作用。本发明提供的组合物制备方法中直接将脱盐的水母酶解为水母多肽，水母蛋白的利用率高，且操作简便、无污染。本发明从水母原料的利用率和产品高附加值两方面提高了水母资源的价值。 具体实施方式 下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。 水母多肽的制备： 实施例1 取脱盐沙海蜇的伞部，清洗干净后匀浆，取匀浆物按照固液比1:6加水，然后加入木瓜蛋白酶，加酶总量为2600U/g(按匀浆物计)，酶解温度60℃，酶解时间4小时，酶解体系pH 6，酶解结束后100℃煮沸10分钟灭酶。离心，除去残渣，上清液旋转蒸发浓缩至初始体积的1/4～1/5后，冷冻干燥，得到水母多肽。 实施例2 取脱盐白色霞水母的伞部，清洗干净后匀浆，取匀浆物按照固液比1:3加水，然后加入中性蛋白酶，加酶总量为1500U/g(按匀浆物计)，酶解温度55℃，酶解时间6小时，酶解体系pH 7，酶解结束后100℃煮沸10分钟灭酶。离心，除去残渣，上清液旋转蒸发浓缩至初始体积的1/4～1/5后，冷冻干燥，得到水母多肽。 实施例3 取脱盐黄斑海蜇的伞部，清洗干净后匀浆，取匀浆物按照固液比1:3加水，然后加入菠萝蛋白酶，加酶总量为2000U/g(按匀浆物计)，酶解温度50℃，酶解时间8小时，酶解体系 pH 7，酶解结束后100℃煮沸10分钟灭酶。离心，除去残渣，上清液旋转蒸发浓缩至初始体积的1/4～1/5后，冷冻干燥，得到水母多肽。 实施例4 取脱盐沙海蜇的伞部，清洗干净后匀浆，取匀浆物按照固液比1:4加水，然后加入菠萝蛋白酶和胰蛋白酶，加酶总量为2200U/g(按匀浆物计)，其中菠萝蛋白酶1000U/g，胰蛋白酶1200U/g，酶解温度50℃，酶解时间3小时，酶解体系pH 6，酶解结束后100℃煮沸10 分钟灭酶。离心，除去残渣，上清液旋转蒸发浓缩至初始体积的1/4～1/5后，冷冻干燥，得到水母多肽。 实施例5 取脱盐白色霞水母的伞部，清洗干净后匀浆，取匀浆物按照固液比1:3加水，然后加入糜蛋白酶和碱性蛋白酶，加酶总量为2000U/g(按匀浆物计)，其中糜蛋白酶1000U/g，碱性蛋白酶1000U/g，酶解温度50℃，酶解时间5小时，酶解体系pH 6，酶解结束后100℃煮沸10分钟灭酶。离心，除去残渣，上清液旋转蒸发浓缩至初始体积的1/4～1/5后，冷冻干燥，得到水母多肽。 实施例6 取脱盐黄斑海蜇的伞部，清洗干净后匀浆，取匀浆物按照固液比1:3加水，然后加入风味蛋白酶和胶原蛋白酶，加酶总量为1800U/g(按匀浆物计)，其中风味蛋白酶1000U/g，胶原蛋白酶800U/g，酶解温度60℃，酶解时间3.5小时，酶解体系pH 6.5，酶解结束后100℃煮沸10分钟灭酶。离心，除去残渣，上清液旋转蒸发浓缩至初始体积的1/4～1/5后，冷冻干燥，得到水母多肽。 上述实施例中，对离心、浓缩、冻干条件不做限制，根据本领域常规的方法即可。 根据国标GB/T 22492(大豆肽粉)中的方法对水母多肽蛋白含量、多肽含量及分子量分布进行测定，结果见表1。 表1水母多肽蛋白含量、多肽含量及分子量分布
组合物的制备： 将上述实施例制得的水母多肽和西洋参提取物按照表2所示混合均匀后，即得到组合物。本发明组合物的混匀方法不做限制，根据本领域常规的方法即可。 本发明中对西洋参提取物的提取方法不做特殊限定，可以根据本领域常规的方法制备得到，例如将西洋参根部粉碎，加入乙醇提取，或者热水提取，过滤除去残渣，上清液浓缩后喷雾干燥或者冷冻干燥制得。也可从市面上购买获得。本发明中对西洋参提取物中多糖和皂苷含量的测定方法不作特殊限定，可以根据本领域常规手段进行测试即可，例如分光光度法、高效液相色谱法等方式进行测试得到。本发明所用西洋参提取物的多糖含量为15％，皂甙含量为26％。 表2组合物的制备实施例及对比例
上述组合物中，组合物1-6为在本发明所限定的范围内的实施例，组合物7-9为超出本发明所限定的范围的对比例。 缓解体力疲劳功效评价： 1.负重游泳实验 1.1受试物 制备的组合物1-9。 1.2实验动物 昆明种小鼠48只，雄性，体重为18-22克，随机分为4组，每组12只。 1.3剂量设计和分组 受试物的推荐剂量为成人(按体重60kg计算)2.1g/d，按人体推荐量的10倍即350mg/kg.d 对小鼠进行灌胃给药，空白对照组灌胃蒸馏水，给药频率为1次/日，给药时间为30天。 1.4实验步骤 末次给受试样品30min后，将尾根部负荷5％体重铅皮的小鼠置于游泳箱中游泳。水深不少于30cm，水温25℃±1.0℃，记录小鼠自游泳开始至死亡的时间，即小鼠负重游泳时间，结果见表3。 表3各组合物对小鼠力竭游泳时间的影响(n＝10)
*表示实施例与对照相比，p<0.05，存在显著性差异； 2.血清尿素测定 2.1受试物 制备的组合物1-组合物9。 2.2实验动物 昆明种小鼠48只，雄性，体重为18-22克，随机分为4组，每组12只。 2.3剂量设计和分组 受试物的推荐剂量为成人(按体重60kg计算)2.1g/d，按人体推荐量的10倍即350mg/kg.d 对小鼠进行灌胃给药，空白对照组灌胃蒸馏水，给药频率为1次/日，给药时间为30天。 2.4实验方法 末次给受试样品30min后，在温度为30℃的水中不负重游泳90min，休息60min后采血。小鼠拔眼球采全血约0.5mL(不加抗凝剂)。置4℃冰箱约3h，血凝固后2000rpm/min离心15min，取血清备用。血清中的尿素在室温下可稳定24h，在4-6℃可稳定7天以上。用二乙酰-肟法测定血清尿素含量。 3肝糖原测定 3.1受试物 制备的组合物1-组合物9。 3.2实验动物 昆明种小鼠48只，雄性，体重为18-22克，随机分为4组，每组12只。 3.3剂量设计和分组 受试物的推荐剂量为成人(按体重60kg计算)2.1g/d，按人体推荐量的10倍即350mg/kg.d 对小鼠进行灌胃给药，空白对照组灌胃蒸馏水，给药频率为1次/日，给药时间为30天。 3.4实验方法 末次给受试样品30min后处死动物，取肝脏，蒽酮法测定肝糖原。 4乳酸测定 4.1受试物 制备的组合物1-组合物9。 4.2实验动物 昆明种小鼠48只，雄性，体重为18-22克，随机分为4组，每组12只。 4.3剂量设计和分组 受试物的推荐剂量为成人(按体重60kg计算)2.1g/d，按人体推荐量的10倍即350mg/kg.d 对小鼠进行灌胃给药，空白对照组灌胃蒸馏水，给药频率为1次/日，给药时间为30天。 4.4实验方法 末次给受试样品30min后采血，然后不负重在温度为30℃的水中游泳10min后停止。在游泳前各采血20μL加入40μL破膜液中，立即充分振荡破碎细胞；游泳后立即采血20μL加入40μL 破膜液中，立即充分振荡破碎细胞；休息20min后再各采血20μL加入40μL破膜液中，用乳酸仪测定。小鼠用毛细管从内眦采血。 上述实验结果见表4。 表4各组合物对小鼠血清尿素BUN、肝糖原、血乳酸LA的影响(n＝10)
*表示实施例与对照相比，p<0.05，存在显著性差异； 缓解体力疲劳功能判定： 负重游泳实验结果阳性，且血乳酸、血清尿素、肝糖原三项生化指标中任二项指标阳性，可判定该受试样品具有缓解体力疲劳功能的作用。从表3、表4可以看出，本发明产品与空白对照组相比，能够明显提高小鼠负重游泳时间，提高肝糖原含量，降低血清尿素和血乳酸含量，且p<0.05，并且，本发明与超出本发明所限定的范围的对比例组合物7-9相比，也能够明显提高小鼠负重游泳时间，提高肝糖原含量，降低血清尿素和血乳酸含量，说明在本发明所限定的保护范围内形成的组合物具有缓解体力疲劳的功效。 对所公开的实施例的上述说明，使本领域专业技术人员能够实现或使用本发明。对这些实施例的多种修改对本领域的专业技术人员来说将是显而易见的，本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下，在其它实施例中实现。因此，本发明将不会被限制于本文所示的这些实施例，而是要符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。