一种治疗跌打肿痛的中药制剂及其制备方法

技术领域

本发明属于中药制剂技术领域，具体涉及一种治疗跌打肿痛的中药制剂及其制备方法。

背景技术

急性软组织损伤是指人体受到外来暴力间接或直接作用后，造成皮肤以下骨骼之外的组织包括肌肉、韧带、筋膜、肌腱、关节囊、滑膜等组织以及周围神经、血管的急性损伤。临床表现多以局部病理改变为主，表现为局部疼痛、肿胀、血肿及瘀斑、肢体功能障碍等，是临床常见损伤。跌打肿痛扭挫伤的发生既伤及肢体又伤及气血，出现气滞血淤现象，由于人们生活节奏的加快，跌打碰撞以及创伤的情况屡有发生。

目前急性软组织损伤、跌打肿痛的治疗方法多种多样，现代医学主要采取抗炎镇痛药的治疗，包括非甾体抗炎免疫药，甾体抗炎免疫药，合成类固醇等，但该类药物副作用较大，长期大量服用会影响器官和系统的功能。中医外治法治疗急性软组织损伤、跌打肿痛已有很悠久的历史，且疗效确切，应用广泛，常用外用活血化瘀、消肿止痛药物，内服活血、行气止痛、滋补药物，以达到标本兼治的效果，所以在治疗急性软组织损伤、跌打肿痛领域中药复方制剂具有独特的优势和特色。

在治疗急性软组织损伤、跌打肿痛的中药复方制剂方面，检索到相关的文献如：申请号为202111048807.9的中国专利公开了一种治疗急性软组织损伤的药物组合物及制剂，包括如下质量份数的中药原料：大黄5～20份、黄柏3～15份、川木通3～15份、延胡索3～15份、地肤子1～10份、血竭0.1～5份；该发明发挥中药复方制剂的优点，满足临床的需求，对治疗各种急性软组织损伤有较好的疗效。又如申请号为 201710572967.0的中国专利公开了一种治疗跌打肿痛的药酒及其制备方法和应用，该药酒按照重量份的原料包括：接骨丹65-75份、独定子45-55份、重楼25-35份、野山药60-70份、羌活45-55份、高原红景天25-35份、当归70-80份、鬼臼75-85份、骨碎补25-35份、磁石15-25份、青稞酒4800-5200份；该发明对于跌打肿痛的治疗，确定疗效显著。

目前市场上治疗软组织损伤、跌打肿痛的药物有很多，如跌打丸、三七片等，经过大量病例观察发现，多数药物治疗周期长，不能直接作用于患处，且存在效果不够理想或使用不方便、对急性软组织损伤的治疗效果一般等问题。《中国药典》2020年版一部及《卫生部药品标准中药成方制剂》中收载的现市场上销售的关于治疗急性软组织损伤的中成药有78种，其中43个成方制剂为口服制剂，35个为外用制剂。口服制剂中91%的药物含有毒性饮片；外用制剂中80%的药物含有毒性饮片。治疗跌打损伤的中成药中含毒性药材的比例高达86%，所以，开发机理明确、安全有效、疗效显著、质量可控的用于急性软组织损伤、治疗跌打肿痛的的现代中药复方制剂具有重要意义。

发明内容

本发明的目的在于一种治疗跌打肿痛的中药制剂及其制备方法，该治疗跌打肿痛的中药制剂具有活血化瘀，消肿止痛的功效，外用于局部，能有效地缓解急性软组织损伤引起的局部疼痛、肿胀、血肿及瘀斑、肢体功能障碍等症状；可以有效治疗急性软组织损伤、治疗跌打肿痛，而且安全有效、温和无刺激。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种治疗跌打肿痛的中药制剂，由以下重量份数的中药材原料制成：丁香茄子30-100份，苏木 20-70份，三七 20-70份，杜仲10-35份，大黄 10-35份，乳香 10-35份。

优选的，所述的治疗跌打肿痛的中药制剂，由以下重量份数的中药材原料制成：丁香茄子 60份、苏木 40份 、三七 40份、杜仲 20份、大黄 20份、乳香 20份。

本发明所述的治疗跌打肿痛的中药制剂，以所述重量份数的中药材为原料，按照药剂学中常规的制药方法，配以医药学上可接受的辅料，制成酊剂、喷雾剂、外用水剂、凝胶剂、搽剂、涂膜剂、贴膏剂或其它药剂学上可接受的外用剂型。

其中，所述的治疗跌打肿痛的中药制剂，酊剂的制备方法为：按重量份数称取丁香茄子、三七、苏木、大黄、乳香、杜仲六味药材，粉碎成粗粉，混匀，加入6-6.5倍量、体积浓度为48%-55%的乙醇，浸渍20天，用200目滤布滤过，滤液加适量48%-55%的乙醇补足滤液总量至规定量（酊剂的通则要求1000ml药液相当200g药材），搅拌均匀，分装，密封，即得。

所述的治疗跌打肿痛的中药制剂也可按如下方法制备：按重量份数称取丁香茄子、三七、苏木、大黄、乳香、杜仲六味药材，粉碎成粗粉，混匀，加体积浓度为50％～65％的乙醇进行渗漉提取或回流提取2～3次，合并提取液，回收乙醇并浓缩至稠膏，作为中药提取物；或者按重量份数称取丁香茄子、三七、苏木、大黄、乳香、杜仲六味药材，粉碎，加水煎煮2～3次，合并煎液，滤过、浓缩至稠膏，烘干，粉碎，作为中药提取物；将得到的中药提取物按照药剂学中常规的制剂方法加入适量辅料制备成喷雾剂、外用水剂、凝胶剂、搽剂、涂膜剂、贴膏剂或其它药剂学上可接受的外用剂型。

本发明所用的各味中药的药性如下：

丁香茄子,为旋花科植物丁香茄Calonyction muricatum(L)G.Don的干燥成熟种子，又名华佗豆，天茄子。性味：苦，寒。功能主治：泻下，解蛇毒；种子外用治跌打损伤。天茄种子生物碱成分对金黄色化脓微球菌、枯草芽胞杆菌、绿脓杆菌、大肠杆菌等有较强的抗细菌、真菌活性。本发明所用的丁香茄子应符合《广西壮族自治区中药材标准》第二册第1页“丁香茄子”项下的有关规定。

苏木，为豆科植物苏木Caesalpinia sappan L.的干燥心材。性味：甘、咸，平。功效：具有通龙路火路、活血祛瘀，消肿止痛的作用，用于跌打损伤，骨折筋伤，瘀滞肿痛，经闭痛经，产后瘀阻，胸腹刺痛，痈疽肿痛。可用于腊胴尹（腹痛）、核尹(腰痛)、经尹（痛经）、发旺（痹病）、林得叮相（跌打损伤）等病证。苏木煎剂有镇静、催眠作用，并能对抗士的宁和可卡因的中枢兴奋作用。苏木煎液和浸煎剂对白喉杆菌、金黄色葡萄球菌、伤寒杆菌等有抑制作用。苏木尚有抗癌、抗炎、免疫抑制等作用。本发明所用的苏木应符合《中国药典》2020年版一部第171页“苏木”项下的有关规定。

三七，为五加科植物三七

杜仲，为杜仲科植物杜仲Eucommia ulmoides Oliv.的干燥树皮。其味甘，性温；有补益肝肾、强筋壮骨、调理冲任、固经安胎的功效；可治疗肾阳虚引起的腰腿痛或酸软无力，肝气虚引起的胞胎不固，阴囊湿痒等症。杜仲树皮含多种木脂素及其甙类成分，杜仲对免疫系统、内分泌系统、中枢神经系统、循环系统和泌尿系统都有不同程度的调节作用，杜仲能兴奋垂体-肾上腺皮质系统，增强肾上腺皮质功能。本发明所用的杜仲应符合《中国药典》2020年版一部第172页“杜仲”项下的有关规定。

大黄，为蓼科植物掌叶大黄Rheum palmatum L.、唐古特大黄 Rheum tanguticumMax1m. ex Bal£.或药用大黄 Rheum officinale Bail1.的干燥根和根茎。性味：苦，寒；功能主治：泻热通肠，凉血解毒，逐瘀通经；用于实热便秘，积滞腹痛，泻痢不爽，湿热黄疸，血热吐衄，目赤，咽肿，肠痈腹痛，痈肿疔疮，瘀血经闭，跌打损伤，外治水火烫伤；上消化道出血。大黄的抗菌作用强，抗菌谱广。本发明所用的大黄应符合《中国药典》2020年版一部第24页“大黄”项下的有关规定。

乳香，为橄榄科植物乳香树Boswellia carterii Birdw.及同属植物Boswelliabhaw-dajiana Birdw.树皮渗出的树脂。性温，味辛、苦。功效与作用：调气活血、定痛、消肿、生肌；属活血化瘀药下分类的活血止痛药。有较显著的镇痛作用．以乳香为首味药的子宫丸比多种抗菌素有更强烈的抑菌作用，且能有效地杀灭滴虫。本发明所用的乳香应符合《中国药典》2020年版一部第233页“乳香”项下的有关规定。

本发明的中药配伍原理如下：

本发明治疗跌打肿痛的中药制剂的药方来源于临床经验方，由丁香茄子、三七、苏木、大黄、乳香和杜仲6味药组成，具有活血化瘀、消肿止痛之功效。方中丁香茄子（跌打豆）、苏木（棵苏木）、三七（棵点镇）具有调龙路火路、止血、化瘀毒、消肿痛的功效，是为主药；杜仲通龙路火路，补虚，强筋骨；大黄、乳香加强主药通调龙路火路的功效，共为帮药。诸药合用，共奏通龙路火路、疗伤接骨、止痛消肿之功。用于跌打、筋骨扭伤、局部肿痛等。组方中药物多为壮族民间长期使用、壮族地区盛产的品种，其中苏木（棵苏木）、三七（棵点镇）、杜仲（棵杜仲）收入《广西壮族自治区壮药质量标准》，符合壮药“民族性、传统性、地域性”的判断标准。整个组方符合壮医“毒虚理论”和“调气解毒补虚”治疗原则。

此外，本发明治疗跌打肿痛的中药制剂的剂型-酊剂，方中配用酒精泡制诸药。酒精既能有效地将各种药物的有效成分渗透出来，本身也有通龙路火路的作用，并引导诸药直达病所，是为带药。

本发明治疗跌打肿痛的中药制剂，诸药配合，通龙路火路，止疼痛，消肿块，活经脉，外用于局部，能有效地缓解急性软组织损伤引起的局部疼痛、肿胀、血肿及瘀斑、肢体功能障碍等症状，能较好地减轻患者痛苦，提高其生活质量，无明显副作用。本发明治疗跌打肿痛的中药制剂的剂型-酊剂，命名为“复方跌打肿痛酊”，制得的酊剂为棕至棕红色的液体，久置有浑浊或轻微沉淀，气微香；具有制备工艺稳定、易于保存、使用方便、质量稳定等优点，制成酊剂后能更好发挥中医药在急性软组织损伤方面的优势作用；使用时外用，喷涂敷患处即可；因疗效好、使用方便、经济负担小，深受患者和医生的欢迎。

采用本发明治疗跌打肿痛的中药制剂进行了与功能主治有关的主要药效学研究，通过小鼠耳廓肿胀试验、小鼠棉球肉芽肿试验、冰醋酸致小鼠扭体试验、小鼠热板试验、重物撞击致小鼠软组织损伤试验，观察本发明治疗跌打肿痛的中药制剂-酊剂（复方跌打肿痛酊）局部皮肤给药的药效学实验。结果：复方跌打肿痛酊局部用药，对二甲苯所致小鼠耳肿胀有显著的抑制作用，能明显抑制小鼠棉球肉芽肿的增生，对冰醋酸、热板所致小鼠疼痛有明显镇痛作用，对小鼠急性外伤性瘀血肿胀也有明显抑制作用。结论：本发明治疗跌打肿痛的中药制剂具有抗炎、镇痛、活血散瘀作用。

通过采用本发明治疗跌打肿痛的中药制剂-酊剂（复方跌打肿痛酊）进行家兔完整皮肤和破损皮肤用药急性毒性试验和多次给药刺激性试验，采用复方跌打肿痛酊进行豚鼠皮肤过敏试验。结果显示：复方跌打肿痛酊对家兔局部皮肤及全身均无急性毒性反应，对家兔皮肤无刺激反应；复方跌打肿痛酊对豚鼠皮肤无致敏反应。

本发明的有益效果为：

本发明治疗跌打肿痛的中药制剂的药方，是在壮族民间验方的基础上的经多年临床总结的处方。本发明治疗跌打肿痛的中药制剂具有活血化瘀，消肿止痛的功效，用于跌打肿痛、骨折、运动性损伤等。经过试验和多年的临床应用证实该中药制剂能有效地通龙路火路，止疼痛，消肿块，活经脉，外用于局部，能有效地缓解急性软组织损伤引起的局部疼痛、肿胀、血肿及瘀斑、肢体功能障碍等症状；可以有效治疗急性软组织损伤、治疗跌打肿痛，而且安全有效、温和无刺激。

本发明治疗跌打肿痛的中药制剂组方合理，配伍得当，原料来源广，简单易得，制得的中药制剂产品通过皮肤给药的方式，疗效好，作用快，而且避免了有毒中药的毒副作用。本发明治疗跌打肿痛的中药制剂机理明确、安全有效、见效快、疗程短、疗效显著、质量可控，具有较高的开发价值，临床应用前景广阔。

具体实施方式

实施例1

一种治疗跌打肿痛的中药制剂，酊剂的制备方法为：按重量份数称取丁香茄子60g、苏木 40g 、三七 40g、杜仲 20g、大黄 20g、乳香 20g，以上六味药材，用粉碎机粉碎成粗粉，混匀，将药材粗粉投入浸泡罐内，加入6.5倍量、体积浓度为50%的乙醇，浸渍20天，浸渍结束用200目滤布滤过，滤液加适量50%乙醇调整至1000ml，搅拌均匀，按90ml/瓶的装量将滤液分装，密封，即得。

实施例2

一种治疗跌打肿痛的中药制剂，酊剂的制备方法为：按重量份数称取丁香茄子30g、苏木20g 、三七 20g、杜仲 10g、大黄 10g、乳香 10g，以上六味药材，用粉碎机粉碎成粗粉，混匀，将药材粗粉投入浸泡罐内，加入6.0倍量、体积浓度为55%的乙醇，浸渍20天，浸渍结束用200目滤布滤过，滤液加适量55%乙醇调整至500ml，搅拌均匀，分装，密封，即得。

实施例3

按重量份数称取丁香茄子100份，苏木 70份，三七 70份，杜仲35份，大黄 35份，乳香 35份，六味药材，粉碎成粗粉，混匀，加10倍量、体积浓度为60％的乙醇进行回流提取3次，合并提取液，回收乙醇并浓缩至稠膏，作为中药提取物，将得到的中药提取物按照药剂学中常规的制药方法加入适量辅料制备成喷雾剂。

实施例4

按重量份数称取丁香茄子95份，苏木 65份，三七 65份，杜仲31份，大黄 21份，乳香 32份，六味药材，粉碎成粗粉，混匀，加体积浓度为50％的乙醇进行渗漉提取2次，合并提取液，回收乙醇并浓缩至稠膏，作为中药提取物，将得到的中药提取物按照药剂学中常规的制药方法加入适量辅料制备成凝胶剂或贴膏剂。

实施例5

按重量份数称取丁香茄子90份、苏木 60份 、三七 60份、杜仲 30份、大黄 30份、乳香30份，六味药材，粉碎，按药材重量加8倍量的水煎煮2次，每次1.5h,合并煎液，滤过、浓缩至稠膏，烘干，粉碎，作为中药提取物；将得到的中药提取物按照药剂学中常规的制药方法加入适量辅料制成外用水剂、凝胶剂、贴膏剂等其它外用剂型。

实验研究与临床研究资料：

一、主要药效学试验资料

1、药物与试剂：采用实施例1方法制得的酊剂-复方跌打肿痛酊，0.2g总药材/mL，在材料中描述为复方跌打肿痛酊低剂量组；2倍浓度复方跌打肿痛酊，0.4g总药材/mL，在材料中描述为复方跌打肿痛酊中剂量组；4倍浓度复方跌打肿痛酊，0.8g总药材/mL，在材料中描述为复方跌打肿痛酊高剂量组。溶剂为50%乙醇，以上均由来宾市人民医院提供。阳性对照药为花红消肿止痛酊，批号：20210111，广西壮族自治区花红药业集团股份公司生产，具有舒筋活络、消肿止痛之功效，用于跌打扭伤，风湿骨痛。

动物：SPF级KM小鼠，由广西医科大学实验动物中心提供，许可证号：SCXK桂2020-0003。饲养于20～25℃、相对湿度60±10%环境中，颗粒饲料喂养，自由饮水。

试验分组：设空白对照、溶剂对照组、阳性药（花红消肿止痛酊）组、复方跌打肿痛酊低、中、高剂量组。

给药方法：采用与临床用药途径一致的涂抹方法。

统计学处理：采用SPSS22.0软件进行统计学分析，计量资料以均数±标准差

2、试验方法与结果

2.1小鼠热板疼痛试验 实验前进行初筛：选取体重18～22 g的雌性小鼠，热板温度在55士0.5℃范围内，测定痛阈值2次，以出现舔后足反应为指标，痛阈值平均值在5～30s内的为合格。选取合格小鼠60只，随机均分为6组，即空白组、溶剂对照组、花红消肿止痛酊组、复方跌打肿痛酊高、中、低剂量（4倍临床用量、2倍临床用量、临床用量）组，在小鼠足趾部涂药，1次/d，连续7d。于末次给药后30，60，120 min分别记录小鼠被放入热板至出现舔足的时间(s)作为痛阈值，各给药组与空白组痛阈值进行统计分析。结果见表1。

结果表明：与空白组比较，给予溶剂处理后痛阈值没有明显变化，花红消肿止痛酊组给药后痛阈值明显增高，差异有显著性（

2.2小鼠扭体实验取KM小鼠60只，雌雄各半，体重18～22 g，随机分为6组：即空白组、溶剂对照组、花红消肿止痛酊组、复方跌打肿痛酊高、中、低剂量（4倍临床用量、2倍临床用量、临床用量）组，每组10只。用剪刀剪去小鼠腹部毛，剪毛面积约为2×2 cm。在小鼠腹部涂药，1次/d，连续7d。于末次给药后1 h腹腔注射6 mL/ L的冰醋酸溶液0.2mL，观察记录15min内小鼠扭体反应的次数（扭体反应：腹部内凹，躯干与后腿伸展，臀部抬高）进行统计分析。结果见表2。

结果表明：与空白组比较，给予溶剂处理后扭体次数没有明显变化，花红消肿止痛酊组给药后扭体次数明显降低，差异有显著性（

2.3小鼠耳廓肿胀实验取KM小鼠60只，雌雄各半，体重18～22 g，随机分为6组：即空白组、溶剂对照组、花红消肿止痛酊组、复方跌打肿痛酊高、中、低剂量（4倍临床用量、2倍临床用量、临床用量）组，每组10只。各组涂相应药物或溶剂于小鼠左右耳正反面，空白组予以生理盐水，1次/d，连续7 d。末次给药后30 min，将致炎剂二甲苯以0.03 mL/只涂于小鼠右耳廓正反两面，左耳作为对照，致炎后0.5h处死小鼠，沿耳廓基线剪下两耳，双耳重叠，用直径8 mm的冲凿取耳片，称重，计算各组肿胀度（x）和肿胀抑制率（y）。

x=右耳片质量—左耳片质量，y = (空白组肿胀度一给药组肿胀度)/空白组肿胀度×100%。结果见表3。

结果表明：与空白组比较，给予溶剂处理后小鼠耳廓肿胀度没有明显变化，花红消肿止痛酊组给药后小鼠耳廓肿胀度明显降低，差异有显著性（

2.4小鼠棉球肉芽肿实验取KM小鼠60只，雌雄各半，体重18～22 g，随机分为6组：即空白组、溶剂对照组、花红消肿止痛酊组、复方跌打肿痛酊高、中、低剂量（4倍临床用量、2倍临床用量、临床用量）组，每组10只。试验时将小鼠乙醚麻醉，常规消毒后在小鼠右侧腹部切口，将已称重好的灭菌棉球（每个10mg），植入小鼠对侧腋下，缝合伤口。各组于手术当日开始涂相应药物或溶剂于腋下皮肤棉球植入部位，空白组予以生理盐水，1次/d，连续10d。末次给药后1h，将小鼠处死，取出棉球肉芽组织，在60℃烘箱内干燥4h，称重棉球肉芽肿重量，进行统计分析。结果见表4。

结果表明：与空白组比较，给予溶剂处理后棉球肉芽肿重量没有明显变化，花红消肿止痛酊组给药后棉球肉芽肿重量明显降低，差异有显著性（

2.5小鼠软组织撞击损伤试验取KM小鼠60只，雌雄各半，用圆筒冲击器（直径5cm，200砝码，高度25cm）造成小鼠后腿上段软组织损伤，数分钟后即见撞伤组织瘀血、水肿。将小鼠按体质量及损伤程度随机分为6组，即空白组、溶剂对照组、阳性药组、受试药物高、中、低剂量（4倍临床用量、2倍临床用量、临床用量）组，每组10只。于当日下午开始局部涂相应药物或溶剂，空白组涂以生理盐水，1次/d，连续5d。第6天解剖损伤部位，根据软组织损伤评分标准评价修复情况。参考文献制定软组织损伤标准：①痊愈：基本恢复同正常组织；②显效：表面无出血灶，切开组织见点状或瘀血灶，无水肿；③有效：表面见0.5～1.0cm

结果表明：与空白组比较，给予溶剂处理后小鼠的软组织损伤无明显改善，花红消肿止痛酊组和复方跌打肿痛酊各剂量组给药后小鼠的软组织损伤明显改善（

结论：复方跌打肿痛酊局部用药，能明显提高小鼠热板痛阈值，减少冰醋酸致小鼠扭体次数，抑制二甲苯致小鼠耳廓肿胀度，降低小鼠棉球肉芽肿重量，改善小鼠软组织损伤。提示复方跌打肿痛酊抗炎、镇痛、活血散瘀作用。

二、复方跌打肿痛酊急性毒性试验资料

1、受试药物：采用实施例1方法制得的酊剂-复方跌打肿痛酊，0.2g总药材/mL，在资料中描述为复方跌打肿痛酊低剂量组；4倍浓度复方跌打肿痛酊，0.8g总药材/mL，在资料中描述为复方跌打肿痛酊高剂量组；溶剂为50%乙醇，以上均由来宾市人民医院提供。

动物家兔，普通级，2.0～2.5kg，雌雄各半，由湖南太平生物科技有限公司提供。许可证号：SCXK（湘）2020-0005。饲养于20～25℃、相对湿度60±10%环境中，颗粒饲料喂养，自由饮水。

给药方法：采用与临床用药途径一致的涂抹法。

2、试验方法 选取家兔32只，雌、雄各半，按体重均匀分为8组，每组4只。即（1）完整皮肤空白对照组、（2）完整皮肤溶剂对照组、（3）完整皮肤复方跌打肿痛酊低剂量组、（4）完整皮肤复方跌打肿痛酊高剂量组、（5）破损皮肤空白对照组、（6）破损皮肤溶剂对照组、（7）破损皮肤复方跌打肿痛酊低剂量组、（8）破损皮肤复方跌打肿痛酊高剂量组。于给受试物前24h，将家兔背部脊柱一侧毛剃掉，去毛面积约为140cm

3、统计方法：试验结果用Excel2003软件记录，用SPSS19.0做t检验或卡方检验比较组间差异显著性。

4、试验结果

（1）全身毒性反应：观察期内，家兔进食正常，体重稳定增长，结果见表6。给药前后，全身状态、外观行为、四肢活动、呼吸毛发等均无明显差异。解剖取材后，肉眼观察各组家兔心、肝、脾、肺、肾、脑等组织未见有病变。与空白对照及溶剂对照相比，给药组家兔体重系数无明显差异，结果不具有统计学意义，结果见表7、表8。

（2）皮肤局部反应：观察期内空白对照组、溶剂对照组、复方跌打肿痛酊给药组家兔完整或破损受试区皮肤均无明显皮肤局部刺激反应，结果不具有统计学意义，见表9-11。

结论：复方跌打肿痛酊对家兔局部皮肤及全身均无急性毒性反应。

三、复方跌打肿痛酊皮肤过敏性试验资料

1、药物与试剂：采用实施例1方法制得的酊剂-复方跌打肿痛酊，0.2g总药材/mL，在资料中描述为复方跌打肿痛酊低剂量组；4倍浓度复方跌打肿痛酊，0.8g总药材/mL，在资料中描述为复方跌打肿痛酊高剂量组。溶剂为50%乙醇，以上均由来宾市人民医院提供。阳性药为2， 4-二硝基氯苯（DNCB），优级纯，批号：201403120，成都西亚化工股份有限公司。

动物： Hartley白化豚鼠，体重350～400g，普通级，雌雄各半，由湖南太平生物科技有限公司提供。许可证号：SCXK（湘）2020-0005。饲养于20～25℃、相对湿度60±10%环境中，颗粒饲料喂养，自由饮水。

给药方法：采用与临床用药途径一致的皮肤涂抹方法。

2、试验分组：设溶剂（50%乙醇）对照组、阳性（1％DNCB）对照组、复方跌打肿痛酊低、高剂量（0.2、0.8g总药材/mL）组。

试验方法：选白豚鼠32只，雌、雄各半，按体重均匀分为4组，每组8只。即（1）复方跌打肿痛酊低剂量组、（2）复方跌打肿痛酊高剂量组、（3）溶剂对照组、（4）阳性对照组。每次药前或激发前24h将豚鼠背部脊柱两侧毛剃掉，去毛范围每侧约4cm×4cm，于左侧致敏接触用药。根据分组设置，每组按0.2 mL/只给予相应药物。第7天和第14天以同样方法各重复一次，共计3次。第28天（即末次致敏后14天）在豚鼠右侧去毛区激发接触给药1次（每组按0.2mL/只给予相应药物）。6h后用温蒸馏水洗去残留受试物，即刻观察，然后于24、48、72h再次观察皮肤过敏情况，评价其致敏程度。评价标准按照《中药、天然药物免疫毒性（过敏性、光过敏反应）研究的技术指导原则》的“皮肤过敏反应评分标准”进行，并计算致敏率。

3、统计方法：试验结果用Excel 2003软件记录，采用SPSS19.0做t检验或卡方检验比较组间差异显著性。

4、试验结果：如表12-14所示，阳性对照1％DNCB激发涂药6h后，豚鼠皮肤明显出现红斑、水肿，致敏率为 100％，致敏评价为极度致敏性；复方跌打肿痛酊低、高剂量组和溶剂对照组部分豚鼠在激发实验后0-48h出现轻微红斑或水肿皮肤过敏情况，但差异与溶剂对照组无统计学意义，致敏评价为无致敏性。

结论 复方跌打肿痛酊对豚鼠皮肤无致敏反应。

四、复方跌打肿痛酊皮肤刺激性试验资料

1、药物与试剂：采用实施例1方法制得的酊剂-复方跌打肿痛酊，0.2g总药材/mL，在资料中描述为复方跌打肿痛酊低剂量组；4倍浓度复方跌打肿痛酊，0.8g总药材/mL，在资料中描述为复方跌打肿痛酊高剂量组。溶剂为50%乙醇，以上均由来宾市人民医院提供。

动物：家兔，普通级，体重2.0～2.5kg，雌雄各半，湖南太平生物科技有限公司提供。许可证号：SCXK（湘）2020-0005。饲养于20～25℃、相对湿度60±10%环境中，颗粒饲料喂养，自由饮水。

给药方法：采用与临床用药途径一致的皮肤涂抹方法。

2、试验方法

复方跌打肿痛酊皮肤多次给药刺激性试验：选取家兔16只，雌、雄各半，按体重均匀分为4组，每组4只。第1-2组为完整皮肤组，第3-4组为破损皮肤组。于给受试物前24h，各组家兔背部脊柱两侧去毛，去毛面积左右侧各为20cm×14cm，破损皮肤组则在家兔背部去毛区用16号针头按“＃”字型破损皮肤，以渗血为度。给药采用左右侧自身对照，第1、3组家兔均在左侧去毛区涂抹低剂量复方跌打肿痛酊；第2、4组均在左侧去毛区涂抹高剂量复方跌打肿痛酊，各组家兔右侧去毛区涂抹溶媒对照。将家兔固定于兔盒中，以防舔食，保持药物与皮肤接触6h后，用温水洗去家兔皮肤残留的受试物。每日给药1次，连续给药7d。观察每次给药前和去除药物后1h给药部位有无红斑和水肿等情况，评分标准按照《中药、天然药物刺激性和溶血性研究的技术指导原则》、《中药新药研究指南》的“皮肤刺激性反应评分标准”及“皮肤刺激性强度评价标准”进行并对皮肤刺激反应积分的平均分值。末次给药去除药物后1h、24h、48h和72h肉眼观察并记录给药部位有无红斑和水肿等情况并进行评分，评分标准亦同。

3、统计方法：试验结果用Excel 2003软件统计，用SPSS 19.0版进行t检验或卡方检验比较组间差异显著性。

4、试验结果：复方跌打肿痛酊低、高剂量连续给药7d，每天1次，第2d-7d完整皮肤组、破损皮肤组个别家兔给予高剂量复方跌打肿痛酊后，出现轻度红斑、皮肤粗糙的情况，均可自行恢复；对各组评分进行统计学分析，差异无统计学意义，总体评价药物无刺激性。末次给药后继续观察72h，未见刺激情况，为无刺激性。结果见表15。

结论：复方跌打肿痛酊对家兔皮肤无刺激反应。