一种玫瑰组合物及其应用

技术领域

本发明属于发酵及功能性化妆品技术领域，尤其涉及一种玫瑰组合物及其应用。

背景技术

作为药食同源的中药材，新鲜玫瑰花或者干花泡茶饮用，具有清热解毒、润肠通便、调经活血、促进代谢等独特功能，玫瑰花还应用于临床药品和部分保健品中。墨红玫瑰(Rose chinensis Jacq“Crimsin Glory”H.T.)属于蔷薇科(Rosaceae)蔷薇属(Rosa)的落叶灌木，原产地是中国，栽培历史悠久，墨红玫瑰除了具有观赏和文化价值以外，还具有食用和药用功能。墨红玫瑰提取物在化妆品中的主要作用是抗氧化、美白祛斑以及促进皮肤渗透，能消除自由基，同时有很强的渗透力，帮助其他营养成分被皮肤吸收；有一定的酪氨酸酶抑制作用，可辅助美白。由于其气味清香，在化妆品中常用于香精香料的配制。

玫瑰花活性物质繁多，含有维生素、蛋白质、氨基酸、挥发油、色素、多酚、黄酮和微量元素等。目前，对玫瑰中有效成分的提取主要是醇回流提取技术、超声波提取技术以及用解吸-热提两步法等物理和化学提取手段，利用微生物发酵技术对活性成分进行提取报道较少。

玫瑰花瓣中含有纤维素和果胶等成分，现有常用的乳酸菌、酵母菌和醋酸菌很少产纤维素酶和果胶酶，发酵前必须用0.01-0.03％的果胶酶和纤维素酶破碎，而商品化的酶纯度无法达到100％，会为发酵体系中掺入杂质，不利于化妆品原料纯净性的要求，也难以和常用的植物提取物完美复配，作为化妆品中的美白成分发挥功效。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是缺乏能与植物提取物复配的玫瑰组合物，克服以上背景技术中提到的不足和缺陷，提供一种玫瑰组合物及其应用。

为解决上述技术问题，本发明提出的技术方案为：

一种玫瑰组合物，其特征在于，所述玫瑰组合物由玫瑰发酵物与植物提取物按照1：0.05-2的质量比进行复配得到，所述玫瑰发酵物由玫瑰原料经灵芝菌种(拉丁文名称Ganoderma lucidum)发酵、提取后得到。

由玫瑰原料经灵芝菌种(拉丁文名称Ganoderma lucidum)发酵、提取得到的玫瑰发酵物提取而成玫瑰组合物与其他市售的精油和纯露混合，在抗衰老和美白活性方面具有协同增效的效果。

优选的，所述植物提取物包括精油和/或纯露，所述精油包含植物醇类物质，所述纯露为精油提炼过程中分离出的蒸馏原液。

优选的，所述精油、纯露和植物花、茎、叶水提物包括檀香纯露、檀香精油、茉莉精油、茉莉纯露、玫瑰精油和玫瑰纯露中的一种或多种。

所述玫瑰发酵物与玫瑰精油、茉莉精油、檀香精油进行复配，复配质量比具体为：玫瑰发酵物：玫瑰精油：茉莉精油：檀香精油＝1：0.05-0.1：0.05-0.1：0.05-0.1；更优选的，玫瑰发酵物：玫瑰精油:茉莉精油：檀香精油＝1：0.05：0.05：0.05。

优选的，所述灵芝菌种来源于中国普通微生物菌株保藏中心，保藏号为CGMCC5.1817。

优选的，所述玫瑰发酵物的制备方法包括如下步骤：

(1)活化灵芝菌种，中国普通微生物菌株保藏中心，保藏号为CGMCC 5.1817；

(2)发酵培养：将玫瑰干花灭菌处理，接入活化后的灵芝菌种，发酵培养7-14天；

(3)提取：将步骤(2)中得到的产物按照1:20-40的质量比进行提取，得到玫瑰发酵物。

本申请选择的灵芝菌种与玫瑰进行发酵培养，玫瑰花中的多酚和黄酮，灵芝中的多糖和三萜都具有良好的护肤效果，两者发酵培养互相作用，得到的玫瑰发酵物DPPH自由基清除率(稀释200倍)、超氧阴离子清除率、羟自由基清除率、ABTS自由基清除率(稀释200倍)、酪氨酸酶活性抑制率、总还原力均很高，能作为抗衰老和美白活性成分发挥优秀的效果。

优选的，步骤(1)中所述活化灵芝菌种具体方法为：25-28℃条件下将灵芝菌种在MEA，培养基成分优选为麦芽提取物1.2-2％，琼脂1-2％，葡萄糖1-2％，培养基中培养5-7天进行菌种活化。

MEA培养基适宜本申请灵芝菌种生长，培养基优选的成分能够在最佳条件下培养真菌，培养出的灵芝菌种适宜玫瑰干花的发酵。

优选的，步骤(2)中所述玫瑰干花为墨红玫瑰干花。

本申请的灵芝菌种属于白腐真菌，分泌出的酶决定其能在花上生长，适合墨红玫瑰干花发酵。

优选的，步骤(2)中所述灭菌处理的温度为115-121℃，时间为4-6h；所述灵芝菌种接种量为玫瑰干花质量的5-10％；所述发酵培养温度为25-28℃；步骤(3)中所述提取为乙醇提取，乙醇浓度为60-90％，提取温度为50-70℃，提取时间为3-5h。

在同一个技术构思下，本申请还提供一种玫瑰组合物的应用，所述玫瑰组合物作为化妆品的活性成分应用。

与现有技术相比，本发明的有益效果为：

(1)筛选了适合玫瑰发酵的菌种，得到的玫瑰发酵物抗衰老和美白活性更好；

(2)玫瑰发酵物与其他市售的檀香纯露、檀香精油、茉莉花精油等混合得到玫瑰组合物，应用在化妆品中，在抗衰老和美白活性方面具有协同增效的效果。

具体实施方式

为了便于理解本发明，下文将结合较佳的实施例对本发明做更全面、细致地描述，但本发明的保护范围并不限于以下具体实施例。

除非另有定义，下文中所使用的所有专业术语与本领域技术人员通常理解含义相同。本文中所使用的专业术语只是为了描述具体实施例的目的，并不是旨在限制本发明的保护范围。

除非另有特别说明，本发明中用到的各种原材料、试剂、仪器和设备等均可通过市场购买得到或者可通过现有方法制备得到，本发明实施例、对比例中选用的菌种均为商业渠道能够购买得到的生物材料。

实施例1：

本实施例选取墨红玫瑰，采用如下方法制备玫瑰组合物：

1、灵芝菌种活化

灵芝菌种，中国普通微生物菌株保藏中心(CGMCC 5.1817)，拉丁文名称Ganodermalucidum，上述灵芝菌种可在中国普通微生物菌株保藏中心通过检索(CGMCC 5.1817)购买；在28℃条件下将灵芝菌种在MEA(麦芽提取物1.2％，琼脂2％，葡萄糖1％)培养基中，培养7天进行菌种活化；

2、墨红玫瑰发酵物的发酵：

取6g墨红玫瑰干花装于9*9cm的平皿中，121℃灭菌4小时后接入已经活化好的灵芝，接种量为5％，于28℃培养7-14天；

3、墨红玫瑰发酵物的醇提：

发酵后的墨红玫瑰按照1：20质量比进行醇提，乙醇浓度为60％，提取温度为70度，提取时间为3小时。

制备完成后，得到本实施例的墨红玫瑰发酵物；将墨红玫瑰发酵物及其与市售的檀香纯露、檀香精油、茉莉精油、茉莉纯露、玫瑰精油和玫瑰纯露混合，得到墨红玫瑰组合物，市售的檀香纯露、檀香精油等均来自于Oshadhi.，经以下方法提取得到其精油含醇量。

植物精油的提取：本实验采用水蒸气蒸馏法对实施例选用的部分植物精油进行提取。将中药饮片粉碎，过80目，浸泡2h后，按料液比1∶20加入加热蒸馏4h，获得溜出液后加入适量NaCl，使水层与油层分离。将油层分离，并加入少量无水硫酸钠进行干燥，过滤，得到植物精油。

以下含量均为质量体积比(每100ml中的克含量)

玫瑰精油：香茅醇含量为20-34％；橙花醇含量5-12％，香叶醇含量15-22％；

檀香精油：Z-α-檀香醇含量为20-30.2％，反式-α-香柠檬醇含量为5-12.1％，表-β-檀香醇含量为12-18.9％，Z-β-檀香醇含量为15-28.3％；

茉莉精油：芳樟醇含量为15-33.5％，乙酸顺-3-己烯酯含量为7.5-15.5％，杜松醇含量为3.8-7.6％，橙花醇含量为2-5.2％；

本实施例可以选用植物花、茎、叶水提物与墨红玫瑰组合物进行复配，以下为植物花、茎、叶水提物的制备方法：

茉莉花水提物的制备方法：1g茉莉花加20毫升水，90℃提取3小时，9000转离心后取上清液；

檀香水提物的制备方法：1g檀香木加20毫升水，90℃提取3小时，9000转离心后取上清液。

实施例的墨红玫瑰组合物选用墨红玫瑰发酵物其与市售精油、纯露混合进行性能测试，混合比例分别为：

①墨红玫瑰发酵物：檀香纯露＝1:1；

②墨红玫瑰发酵物：茉莉纯露＝1:1；

③墨红玫瑰发酵物：茉莉纯露：玫瑰精油＝1:1：0.05；

④墨红玫瑰发酵物：茉莉纯露：玫瑰精油:茉莉精油＝1:1：0.05：0.05；

⑤墨红玫瑰发酵物：茉莉纯露：玫瑰精油:茉莉精油：檀香精油＝1:1：0.05：0.05：0.05；

⑥墨红玫瑰发酵物：玫瑰精油:茉莉精油：檀香精油＝1：0.05：0.05：0.05。

对比例1：

本对比例采用乳酸菌和酵母菌对墨红玫瑰进行发酵，具体制备方式如下：

采用如下方法制备玫瑰组合物：

1、发酵菌种活化

酵母菌：保藏编号为CCTCC No：M 20191046的单胞酿酒酵母菌ZLG-6；

乳酸菌：植物乳杆菌，保藏编号为CCTCC No：M 20191045的植物乳杆菌Picp-2；

酵母菌活化：将菌种接种于YPD培养基中，于30℃恒温培养36-48h，连续传代3次，使菌种充分活化至活菌数在1.0×107CFU/mL以上；

乳酸菌活化：将菌种接种于MRS培养基中，于35℃恒温培养24h，连续传代3次，使菌种充分活化至活菌数在1.0×108CFU/mL以上。

2、墨红玫瑰发酵物的发酵：

粗酶液体(果胶酶和纤维素酶1:1)：墨红玫瑰干粉＝20:1的比例，果胶酶酶活：2500U/mL，纤维素酶酶活：3000U/mL，50℃提取3小时，9000r/min离心15min，得到墨红玫瑰酶解物，取上清液用于指标检测。

墨红玫瑰酶解物分装在250mL的蓝盖试剂瓶中(200mL/瓶)，115℃灭菌30min后接入活化好的乳酸菌菌种，接种量为玫瑰干花体积的5％，于37℃培养7天；再按照玫瑰干花体积1％的比例接种酵母菌，发酵7天后，9000r/min离心15min得到玫瑰花发酵物用于指标检测。

3、墨红玫瑰发酵物的醇提：

发酵后的墨红玫瑰按照1：20质量比进行醇提，乙醇浓度为60％，提取温度为70度，提取时间为3小时。

制备完成后，得到本对比例的墨红玫瑰发酵物。

将对比例1得到的墨红玫瑰发酵物与市售精油、纯露进行复配，复配比例为：

⑦墨红玫瑰发酵物：茉莉纯露：玫瑰精油:茉莉精油：檀香精油＝1:1：0.05：0.05：0.05。

对比例2：

本对比例采用米曲霉菌种对墨红玫瑰进行发酵，具体制备方式如下：

采用如下方法制备玫瑰组合物：

1、发酵菌种活化

米曲霉菌种来自中国普通微生物菌株保藏中心(CGMCC 3.13905)，在28℃条件下将米曲霉孢子接种到液体培养基(葡萄糖2％、蛋白胨1％、KH2PO40.1％、MgSO40.05％及NaCl 0.05％)培养基中，培养7天进行菌种活化。

2、墨红玫瑰发酵物的发酵：

取6g墨红玫瑰干花装于9*9cm的平皿中，121℃灭菌4h后接入已经活化好的米曲霉，接种量为10ml，于28℃培养7-14天；

3、墨红玫瑰发酵物的醇提：

发酵后的墨红玫瑰按照1：20质量比进行醇提，乙醇浓度为60％，提取温度为70摄氏度，提取时间为3h。

制备完成后，得到本对比例的墨红玫瑰发酵物。

将对比例2得到的墨红玫瑰发酵物与市售精油、纯露进行复配，复配比例为：

⑧墨红玫瑰发酵物：茉莉纯露：玫瑰精油:茉莉精油：檀香精油＝1:1：0.05：0.05：0.05。将以上实施例、对比例得到的墨红玫瑰发酵物及其复配物通过以下方法进行检测：

(1)DPPH自由基清除能力的测定：

实验组加入1ml样液+1ml 0.2mmol/L的DPPH。对照组加入1ml无水乙醇+1ml样液。空白组加入1ml无水乙醇+1ml 0.2mmol/L的DPPH，混匀室温(25℃)下静置30min。517nm下，吸取300ul，测定实验组吸光度，记为A

计算公式为：DPPH清除率(％)＝[1-(A

(2)超氧阴离子自由基清除能力测定：

在10mL试管中加入5.7mL Tris-HCl缓冲液(50mmol/L，pH＝8.2)，加入0.2mL样品进行混合之后放置在25℃保温箱中，10min后取出，再加0.1mL(10mmol/L)邻苯三酚溶液(已预热)，快速混匀后用多功能酶标仪测定320nm波长1min内吸光值的增加值(Aj)，线性范围内算出每1min吸光度的增加值，另取如上试剂，用等体积水替代样品，测定在320nm波长下，1min内吸光度的增加值(A

计算公式为：超氧阴根离子自由基清除率(％)＝(A

(3)羟基自由基(·OH)清除能力测定：

羟基自由基(·OH)清除测试方法参照Fenton反应方法，在试管中依次加入硫酸亚铁溶液(6mmol/L)、过氧化氢溶液(6mmol/L)、样品各2mL后静放置10min，之后再加入2mL水杨酸溶液(6mmol/L)，静放30min后在510nm处测定吸光度A

计算公式为：羟基自由基(·OH)清除率(％)＝(1-A

(4)ABTS清除力的测定：

0.2mL 7.4mmoL/LABTS与0.2mL 2.6mmoL/L K

将不同处理发酵样品稀释后，分别吸取0.2mL，加入0.8mL稀释后的工作液，混合均匀后静置反应6min，迅速测定734nm波长处的吸光值A

计算公式为：ABTS自由基清除率(％)＝1-A

(5)酪氨酸酶活性抑制率

用微量移液器分别按上表的体积准确吸取酪氨酸酶、PBS及样品的反应液分别置于4个10ml PE管中(每个样品都需要实验组1和实验组2，对照组可以与多个实验组形成对照)混匀，37恒温水浴10min，然后在四组中全部加入1ml的L-酪氨酸,37℃反应10min，快速置于冰水中冷却。用酶标仪在475nm处测定其吸光度。

计算公式为：酪氨酸酶活性抑制率＝1-(AT

AT

AT

AT

AT

(6)总还原力检测

移取1ml样品于10mlEP管中，随即快速加入2.5ml(0.2ml/L)的PBS溶液和2.5ml1％的铁氰化钾溶液，混匀后于50℃水浴锅中保温20min，取出后，加入2.5ml 10％的三氯乙酸溶液，加入三氯乙酸后若产生沉淀，则室温下3500r/min离心10min，吸取2.5ml的上清液，加入2.5ml蒸馏水；若加入三氯乙酸后无沉淀产生，吸取2.5ml溶液后加入2.5ml蒸馏水。加入0.5ml 0.1％的三氯化铁溶液，混匀后反应10min。对照组用等量蒸馏水代替样液，其他操作不变。结果:在700nm光度下测定吸光值，实验组与对照组的吸光度大小与还原力成正比。

实验结果如表1所示：

表1

由表1可知，与相同组分的市售精油、纯露进行复配，本申请采用灵芝活化的墨红玫瑰组合物各项性能测试结果更优，本申请的墨红玫瑰组合物能够发挥出协同增效的作用。