一种外周血C反应蛋白在制备人格解体障碍诊断相关产品的用途

技术领域

本发明涉及生物技术技术领域，尤其涉及一种外周血C反应蛋白在制备人格解体障碍诊断相关产品的用途。

背景技术

人格解体障碍（depersonalization disorder，DPD），因多与现实解体并见，又称为人格解体-现实解体障碍（depersonalization/derealization disorder），在DSM-V和ICD-11中被划分为分离障碍的一种，而在ICD-10中被称为人格解体-现实解体综合征（depersonalization-derealization syndrom），属于神经症性障碍的范畴。在DSM-5及ICD-11中属于分离障碍范畴。人格解体障碍患者主要临床表现是在意识清楚的情况下，存在持续性非现实感和自我与身体分离感。人格解体障碍在人群中的患病率约为1%～2%，而与其他精神障碍共病的患病率则更高。大部分患者起病于青春期（15-19岁），持续时间为几分钟到几个月，病程倾向于慢性化。现有研究表明，人格解体患者可能会存在认知功能损害，且可能是疾病本身导致的，而认知功能损害可导致社会功能下降。

现阶段对于人格解体障碍的诊断主要依赖于临床医生的主观经验及量表辅助诊断，存在误诊率、漏诊率高的问题。

发明内容

基于背景技术存在的技术问题，本发明提出了一种外周血C反应蛋白在制备人格解体障碍诊断相关产品的用途。

本发明提出的一种外周血C反应蛋白在制备人格解体障碍诊断相关产品的用途，本发明提供了CRP或检测CRP的试剂在制备用于诊断或早期诊断人格解体障碍的实际或试剂盒中的用途,所述试剂盒选自生化诊断试剂盒、免疫诊断试剂盒或分子诊断试剂盒；优选地，所述试剂盒选择Western印记试剂盒、酶联免疫吸附测定（ELISA）试剂盒、放射免疫测定（RIA）试剂盒、放射免疫扩散试剂盒、二维双相免疫扩散试剂盒、火箭免疫电泳试剂盒、免疫组织化学染色试剂盒、免疫沉淀测试试剂盒、补体结合测定试剂盒、荧光激活细胞分选（FACS）试剂盒、适体芯片试剂盒、微阵列试剂盒和蛋白质芯片试剂盒中的一种或两种以上。

优选地，所述试剂盒包含人格解体障碍评价量表；优选地，所诉人格解体障碍评价量表选自剑桥人格解体障碍量表（CDS）、分离障碍量表（DES）、分离障碍诊断量表（DDIS）中的一种或两种以上；更优选地，所述人格解体障碍评价量表为剑桥人格解体障碍量表（CDS）。

优选地，所述诊断人格解体障碍包括如下步骤：

S1:测定受试者外周血C反应蛋白的浓度；

S2：将步骤1测得的C反应蛋白的浓度与标准浓度进行比较；

S3：评估患有人格解体障碍的风险。

优选地，S2中，所述标准浓度为正常人群中的外周血C反应蛋白的浓度。

优选地，所述试剂盒包含C反应蛋白的试剂和人格解体障碍评价量表，所述人格解体障碍评价量表选自剑桥人格解体障碍量表（CDS）、分离障碍量表（DES）、分离障碍诊断量表（DDIS）中的一种或两种以上，所述人格解体障碍评价量表为剑桥人格解体障碍量表（CDS）。

优选地，所述检测C反应蛋白地实际选自C反应蛋白及其亚基配体或C反应蛋白及其亚基配体地抗体、C反应蛋白及其亚基抗体、显色试剂、发光标志物、染料、荧光标志物、标准品、衍生化试剂、内标和外标物中地一种或两种以上；优选的，所述标准品选自血清C反应蛋白。

本发明中，

1、本发明通过检测C反应蛋白的水平作为人格解体障碍诊断的依据，并提供了饿相应的诊断试剂，相较于传统的依靠症状描述及持续时间并排除其他疾病后才能凭临床经验判断的诊断方法，对人格解体障碍诊断有较高的灵敏度和特异性；

2、本发明C反应蛋白生物标记为外周血指标，可方便获取，其为较正常人群减少，与其他精神疾病及免疫疾病等相较于正常人群增加具有明显差异，可以用于诊断。同时，所述以C反应蛋白作为诊断的方法，还可以联合其他检测方式得出更可靠的结果。

附图说明

图1为本发明提出的一种外周血C反应蛋白在制备人格解体障碍诊断相关产品的用途的健康对照和人格解体障碍患者血清C反应蛋白浓度示意图（基于质谱MRM方法）；

图2为本发明一种外周血C反应蛋白在制备人格解体障碍诊断相关产品的用途的ROC曲线示意图；

图3为本发明一种外周血C反应蛋白在制备人格解体障碍诊断相关产品的用途的健康对照和人格解体障碍患者血清C反应蛋白浓度（基于放射免疫法）示意图

图4为本发明一种外周血C反应蛋白在制备人格解体障碍诊断相关产品的用途的MRM分析技术路线图。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。

实施例1

参照图1-3，一种外周血C反应蛋白在制备人格解体障碍诊断相关产品的用途，本发明提供了CRP或检测CRP的试剂在制备用于诊断或早期诊断人格解体障碍的实际或试剂盒中的用途,试剂盒选自生化诊断试剂盒、免疫诊断试剂盒或分子诊断试剂盒；优选地，试剂盒选择Western印记试剂盒、酶联免疫吸附测定（ELISA）试剂盒、放射免疫测定（RIA）试剂盒、放射免疫扩散试剂盒、二维双相免疫扩散试剂盒、火箭免疫电泳试剂盒、免疫组织化学染色试剂盒、免疫沉淀测试试剂盒、补体结合测定试剂盒、荧光激活细胞分选（FACS）试剂盒、适体芯片试剂盒、微阵列试剂盒和蛋白质芯片试剂盒中的一种或两种以上。

试剂盒包含人格解体障碍评价量表；优选地，所诉人格解体障碍评价量表选自剑桥人格解体障碍量表（CDS）、分离障碍量表（DES）、分离障碍诊断量表（DDIS）中的一种或两种以上；更优选地，人格解体障碍评价量表为剑桥人格解体障碍量表（CDS）；

诊断人格解体障碍包括如下步骤：

S1:测定受试者外周血C反应蛋白的浓度；

S2：将步骤1测得的C反应蛋白的浓度与标准浓度进行比较；

S3：评估患有人格解体障碍的风险；

S2中，标准浓度为正常人群中的外周血C反应蛋白的浓度；

试剂盒包含C反应蛋白的试剂和人格解体障碍评价量表，人格解体障碍评价量表选自剑桥人格解体障碍量表（CDS）、分离障碍量表（DES）、分离障碍诊断量表（DDIS）中的一种或两种以上，人格解体障碍评价量表为剑桥人格解体障碍量表（CDS）；

检测C反应蛋白地实际选自C反应蛋白及其亚基配体或C反应蛋白及其亚基配体地抗体、C反应蛋白及其亚基抗体、显色试剂、发光标志物、染料、荧光标志物、标准品、衍生化试剂、内标和外标物中地一种或两种以上；优选的，标准品选自血清C反应蛋白。

实施例2

外周血的采集以及测定外周血C反应蛋白浓度的方法（基于质谱MRM）

1. 根据已通过的伦理审查实验方案以及诊断标准，筛选出健康对照人群、人格解体障碍人群

人格解体障碍纳入标准：（1）年龄18～40岁；（2）由2名受过专业训练的副主任及以上医师诊断，符合DSM-5人格解体诊断标准；（3）生命体征平稳，神志清楚，有一定表达能力；（4）剑桥人格解体量表评分＞70分；（5）右利手；（6）能理解问题内容，自愿签定知情同意书，同意参加本次研究；同时符合上述六项者，方可入选。

健康对照纳入标准：采用美国精神疾病诊断与统计手册第四版 (StructuredClinical

Interview for DSM Disorders-Fourth Edition，DSM-IV)临床定式访谈(Structured

Clinical Interview for DSM-IV Axis I disorders-Patient Edition，SCID-I/P)进行筛查显示无精神疾病，无精神病家族史人群。

2. MRM分析

MRM 技术是一种对目标分子进行靶向分析的质谱技术。该技术基于母子离子对信息，特异性地对目标母子离子对进行质谱信号采集，之后通过对数据的统 计分析而获取定量结果。MRM 技术的关键在于选择可代表目标蛋白的特异性肽段（母离子），以及代表该肽段的碎片离子，也称子离子，最后对选定的特异性母子离子对进行质谱采集。通过对母离子和子离子的双重筛选，可去除其他离子的干扰，增强结果的特异性。因此，基于三重四级杆质谱的 MRM 技术是进行目标分子靶向定量分析的金标准。技术路线图如图4所示。

1）蛋白质提取

①proteinminer去除血清中高丰度蛋白

a) 离心柱子，1000g离心30-60s，除去柱子中的储液，弃收集管中的废液。 b ) 装上底盖，加入250µl wash buffer，并盖上顶盖。 在震荡器上震5min，使柱料充分与washbuffer混匀，并充分洗脱。 c) 去底盖，柱子放入收集管中1000g离心30-60s，弃废液。 d)重复b)-c)步 e) 盖上底盖，此时200µl的柱料已经活化好了。 f) 样品需要没有沉淀，10000g离心10min去沉淀。 g) 加上250µl样品，加上顶盖，在震荡器上室温震荡2小时。 h)去底盖，1000g离心30-60s，弃废液。 i) 加底盖，加入250µl wash buffer，加上顶盖，震5min。 j) 去底盖1000g离心30-60s，弃废液。 k) 重复i)-j)两次。每次加入wash buffer后用枪将壁上的柱料吸打到溶液中。 l) 加入250µl ddH2O。 m) 加盖，震1min。 n) 去顶盖和底盖，1000g离心30-60s，弃废液。 o) 上底，加入60µlElutionBuffer（4M尿素，1%（w/v）CHAPS, 5%醋酸）。 p) 上盖，漩涡震荡15min。 q) 去顶盖和底盖，1000g离心1min。r) 重复o)-q)步一到两次。-20度保存富集后的血清蛋白或直接进行下一步实验。

② 加入DTT至终浓度10mM。56度水浴1h。取出后，迅速加入IAM至终浓度55mM，暗室静置1h。4度20000g离心30min，取上清。 ③ 定量，使用bradford法对蛋白进行定量。

2）蛋白质的消化

① 每个样品取 30μg 蛋白体积，加入到 10K 超滤管中,14000g，4 度，离心40min，弃废液。 加入 200μl 50mM NH4HCO3,14000g，4 度，离心 40min,弃废液。 ② 重复上述步骤两遍。 ③ 加入 1μg/μL 的 Trypsin 1μL，37 度水浴 24h。 ④ 冻干消化液，然后使用 0.1%FA 复溶肽段。

3）MRM方法建立

① 将上述复溶肽段每个样本取 2μg 混合均匀，取混合样本 2μg 进行质谱检测（QE 质谱仪，shotgun 方法）。 ② 质谱扫描完毕，将 shotgun 得到的质谱结果导入到Thermofisher Proteome Discoverer 1.4 软件进行数据检索，得到蛋白鉴定结果。 ③ 根据鉴定结果，综合来源自 TMT 的预设靶标，进行 MRM 方法建立。

4）实验样本的MRM检测

① 实验样本每个取 1μg 分别进行相应靶标的 MRM 检测，并重复三次。 ② 检测结果为相应靶标信号响应图。③ 采用建立的 MRM 方法对本项目样本中的靶标蛋白进行MRM 数据采集，之后将数据导入 Skyline 软件中提取目标肽段的 MRM 峰。④ 对应峰面积积分结果即为 MRM 定量原始值。 ⑤ 通过样本间的外标进行校正。校正参比为每个肽段保留时间最接近的外标肽段。 ⑥ 校正后的肽段值，取多次检测的平均值作为肽段定量值。⑦同一蛋白的多个肽段定量值进行加和作为蛋白定量值。⑧ 用蛋白定量值计算组间蛋白差异的显著性 P 值及差异倍数（Ratio）。

实施例2： 外周血CRP用于外周血CRP用于人格解体障碍诊断（基于MRM法）

1. 本研究纳入性别年龄匹配的人格解体障碍患者和健康对照55人。

2. 基本特征见表1

表1 人格解体障碍与健康对照基本信息

3. 经过血清CRP检测，发现于健康对照组相比，人格解体障碍患者CRP水平明显降低（图1，P<0.05）。ROC曲线显示（图2），曲线下面积为0.718，诊断灵敏度和特异度分别为50.0%和93.3%。

实施例3：外周血CRP用于人格解体障碍诊断（基于免疫比浊法）

1. 本研究纳入性别年龄匹配的人格解体障碍患者和健康对照55人。

2. 基本特征见表2

表2人格解体障碍与健康对照基本信息

3.经过血清CRP检测，发现于健康对照组相比，人格解体障碍患者血清CRP明显下降（图3，P<0.05）

以上，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。