一种银耳多糖及其制备延缓衰老组合物的用途

技术领域

本发明涉及到一种银耳多糖及其制备延缓衰老组合物的用途，属于多糖技术领域。

背景技术

银耳，是药食两用的传统中药材，味甘、淡，性平、无毒，具有提高免疫调节能力，辅助抑制肿瘤，延缓衰老，调节血糖、血脂，保护胃黏膜，抗辐射等功能。银耳多糖为银耳主要的功效成分，不同的原料来源、加工工艺制备的银耳多糖在分子量、单糖组成、糖苷键的连接方式等方面存在差异，其表现出来的生物活性不同。

银耳多糖的提取方法，目前主要有酸水解法、过氧化氢氧化降解、酶解、机械力物理降解等方法，制备低分子量银耳多糖或其低聚糖。然而，现有技术只在提取过程中进行低分子量银耳多糖的制备，虽然生产成本较低，但产品分子量分布不均一，产品活性被破坏、提取率低等问题。

发明内容

针对上述现有技术中存在的技术问题，本发明提供一种银耳多糖及其制备延缓衰老组合物的用途，提高产品的品质和原料的提取率。

本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：

一种银耳多糖的制备方法，包括以下步骤：

S1：银耳的预处理

银耳在40-50℃烘干，粉碎至60目得到银耳粉；

银耳粉加入到浓度0.5-1.2 mol/L盐酸溶液中，用量比按照质量份数为，10-30份银耳粉，20-60份盐酸溶液；搅拌均匀，处理4-8h，将处理后的银耳粉抽滤，水洗，直到水洗液的pH为中性；

再加入60-120份的水中，并加入复合酶在45-55℃条件下酶解1.5-2.5h，然后酶灭活；

S2：多糖浸提

将酶解后的银耳粉，每次再加入100-150份去离子水，在50-60℃条件下提取2次，每次1-3h，合并两次的提取液，过滤收集上清液；

在6000-8000r/min条件下离心10-15min，获得的上清液，在50-60℃条件下浓缩，浓缩至提取液总体积的1.5-2.5%；

浓缩液加入质量份数75-155份的体积浓度95％乙醇，搅拌均匀，4℃条件下冷藏8-12h，取出后在4500-5000r/min条件下离心，收集沉淀并冷冻干燥2天，研磨得到粗多糖粉末；

S3：多糖提纯

用55-65℃水溶解，得到浓度为1-5mg/mL的粗多糖溶液；

向粗多糖溶液加入乙醇-硫酸铵混合溶液，置于漩涡混合器内充分混合，然后静置至，直到上下相体积不再发生变化，将双水相体系两相分离并萃取，萃取结束后将两相分离，保留下相物质，得到浸提液；

S4：超滤分级

浸提液用截留分子量为100 KDa超滤膜超滤，收集透过液；超滤压力0.6-1.5 Mpa，当多糖溶液体积超滤浓缩至浸提液体积的1/4，向浓缩液中补3/4浸提液体积的蒸馏水，继续超滤至浓缩液体积恢复为补水前体积，同样方法重复补水，直至总补水体积为浸提液体积的25倍；

收集的透过液再进行截留分子量为10 KDa超滤膜超滤，收集浓缩液；超滤压力0.8-1.2 Mpa，当透过液体积浓缩至浸提液体积的1/8-1/4时，停止超滤；

冷冻干燥，得到银耳纯多糖。

所述的乙醇-硫酸铵混合溶液中乙醇和硫酸铵的质量比20-30：15-25。

所述复合酶为蛋白酶、纤维素酶、果胶酶的混合物，质量比为0.5:1.1:1.8。

所述复合酶的用量为银耳粉质量的0.05-0.15%。

本发明还包括所述方法制备得到的银耳多糖。

所述的银耳多糖在制备抗衰老组合物中的应用。

具体的，一种抗衰老组合物，包括所述的银耳多糖，还包括抗氧化活性肽、活性因子；所述的银耳多糖、抗氧化活性肽、活性因子按照质量份数为3-5:2-4:1-3；所述活性因子为丹参和银杏提取物。

进一步的，本发明提供一种银耳多糖的抗衰老面膜，由以下原料按照质量制成：20-40份的有效溶液和60-80份的面膜基液；

所述的有效溶液包括权利要求6所述的抗衰老组合物，还包括黄原胶和水，以质量份计，所述的抗衰老组合物的质量分数为4-8份，黄原胶的质量分数为0.5-3份，水80-92份，在40-80℃条件下混合5-8min；

所述的面膜基液，包括油相和水相，以质量份计，所述的油相为12-24份，所述的水相为48-56份；分别加热融化后混合乳化，加热融化温度为50-80℃，乳化时间为5-10min。

以质量份计，所述的油相包括甘油聚丙烯酸酯3-5份、甘油5-10份、聚二甲基硅氧烷2-5份、甘油聚醚-26 1-3份、乙基己基甘油0.30-0.50份；

以质量份计，所述水相包括甜菜碱4-7份、丙二醇4-7份、辛酸3-6份、海藻糖2-4份、1,2-己二醇0.01-0.02份、尿囊素2-4份、聚丙烯酸1-3份、三乙醇胺0.10-0.30份、透明质酸钠0.5-2份、燕麦肽0.5-1份、羟苯甲酯钠1-3份。

进一步的，本发明提供一种银耳多糖的抗衰老口服液，以质量份计，包括权利要求6所述的抗衰老组合物5-13份，还包括浓缩蔬菜汁或果汁8-12份、木糖醇5-8份、柠檬酸0.04-0.1份、山梨酸钾0.2-0.4份、桃胶0.10-0.15份、水50-58份。

本发明提供的一种银耳多糖及其制备延缓衰老组合物的用途，具有以下技术效果：

1、本发明提供的制备方法，通过乙醇、无机盐组成双水相提取体系，除去银耳多糖中的蛋白质，提高了了银耳多糖提取效率。

2、本发明提供的制备方法，分离纯化银耳多糖，工艺安全，并且产品的纯度高，纯度可以达到90-95％。

3、本发明提供的制备方法，避免了对多糖活性的损害，能够对多糖的活性进行最大化的保持。

4、本发明提供的抗衰老组合物，银耳多糖具有增强免疫力、增强免疫系统的调节能力等功效，作为护肤品的添加剂，具备吸湿保湿性，还能增加真皮和表皮水分渗透，保护皮肤，并且具有抗氧化性，提高角质层更新速度、改善皮肤紧密度、抵御紫外线，降低表面活性剂对皮肤的损伤等作用。作为食品添加剂，能够有清除自由基、延缓衰老、调节血糖血脂水平，从而起到抗衰老美容的作用。

具体实施方式

结合实施例说明本发明的具体技术方案。

实施例1

一种银耳多糖的制备方法，包括以下步骤：

S1：银耳的预处理

银耳在45℃烘干，粉碎至60目得到银耳粉；

银耳粉加入到浓度0.5mol/L盐酸溶液中，用量比按照质量份数为，12份银耳粉，55份盐酸溶液；搅拌均匀，处理8h，将处理后的银耳粉抽滤，水洗，直到水洗液的pH为中性；

再加入114份的水中，并加入复合酶在55℃条件下酶解1.5h，所述复合酶为蛋白酶、纤维素酶、果胶酶的混合物，质量比为0.5:1.1:1.8；所述复合酶的用量为银耳粉质量的0.05-0.15%；然后酶灭活；

S2：多糖浸提

将酶解后的银耳粉，每次再加入147份去离子水，在55℃条件下提取2次，每次2.5h，合并两次的提取液，过滤收集上清液；

在6000-8000r/min条件下离心15min，获得的上清液，在50℃条件下浓缩，浓缩至提取液总体积的1.5%；

浓缩液加入质量份数155份的体积浓度95％乙醇，搅拌均匀，4℃条件下冷藏10h，取出后在4500r/min条件下离心，收集沉淀并冷冻干燥2天，研磨得到粗多糖粉末；

S3：多糖提纯

用55℃水溶解，得到浓度为4.3mg/mL的粗多糖溶液；

向粗多糖溶液加入乙醇-硫酸铵混合溶液，所述的乙醇-硫酸铵混合溶液中乙醇和硫酸铵的质量比22：17；置于漩涡混合器内充分混合，然后静置至，直到上下相体积不再发生变化，将双水相体系两相分离并萃取，萃取结束后将两相分离，保留下相物质，得到浸提液；

S4：超滤分级

浸提液用截留分子量为100 KDa超滤膜超滤，收集透过液；超滤压力1.5 Mpa，当多糖溶液体积超滤浓缩至浸提液体积的1/4，向浓缩液中补3/4浸提液体积的蒸馏水，继续超滤至浓缩液体积恢复为补水前体积，同样方法重复补水，直至总补水体积为浸提液体积的25倍；

收集的透过液再进行截留分子量为10 KDa超滤膜超滤，收集浓缩液；超滤压力0.8Mpa，当透过液体积浓缩至浸提液体积的1/5倍时，停止超滤；

冷冻干燥，得到银耳纯多糖。

实施例2

一种银耳多糖的制备方法，包括以下步骤：

S1：银耳的预处理

银耳在40℃烘干，粉碎至60目得到银耳粉；

银耳粉加入到浓度0.6mol/L盐酸溶液中，用量比按照质量份数为，25份银耳粉，38份盐酸溶液；搅拌均匀，处理6h，将处理后的银耳粉抽滤，水洗，直到水洗液的pH为中性；

再加入80份的水中，并加入复合酶在45℃条件下酶解2.5h，所述复合酶为蛋白酶、纤维素酶、果胶酶的混合物，质量比为0.5:1.1:1.8；所述复合酶的用量为银耳粉质量的0.10%；然后酶灭活；

S2：多糖浸提

将酶解后的银耳粉，每次再加入150份去离子水，在60℃条件下提取2次，每次1h，合并两次的提取液，过滤收集上清液；

在6000r/min条件下离心15min，获得的上清液，在60℃条件下浓缩，浓缩至提取液总体积的2.5%；

浓缩液加入质量份数75份的体积浓度95％乙醇，搅拌均匀，4℃条件下冷藏8h，取出后在4500r/min条件下离心，收集沉淀并冷冻干燥2天，研磨得到粗多糖粉末；

S3：多糖提纯

用55℃水溶解，得到浓度为1mg/mL的粗多糖溶液；

向粗多糖溶液加入乙醇-硫酸铵混合溶液，所述的乙醇-硫酸铵混合溶液中乙醇和硫酸铵的质量比25：21；置于漩涡混合器内充分混合，然后静置至，直到上下相体积不再发生变化，将双水相体系两相分离并萃取，萃取结束后将两相分离，保留下相物质，得到浸提液；

S4：超滤分级

浸提液用截留分子量为100 KDa超滤膜超滤，收集透过液；超滤压力1 Mpa，当多糖溶液体积超滤浓缩至浸提液体积的1/4，向浓缩液中补3/4浸提液体积的蒸馏水，继续超滤至浓缩液体积恢复为补水前体积，同样方法重复补水，直至总补水体积为浸提液体积的25倍；

收集的透过液再进行截留分子量为10 KDa超滤膜超滤，收集浓缩液；超滤压力0.8-1.2 Mpa，当透过液体积浓缩至浸提液体积的1/6时，停止超滤；

冷冻干燥，得到银耳纯多糖。

实施例3

一种银耳多糖的制备方法，包括以下步骤：

S1：银耳的预处理

银耳在40℃烘干，粉碎至60目得到银耳粉；

银耳粉加入到浓度0.5mol/L盐酸溶液中，用量比按照质量份数为，30份银耳粉，60份盐酸溶液；搅拌均匀，处理8h，将处理后的银耳粉抽滤，水洗，直到水洗液的pH为中性；

再加入60份的水中，并加入复合酶在45℃条件下酶解2.5h，所述复合酶为蛋白酶、纤维素酶、果胶酶的混合物，质量比为0.5:1.1:1.8；所述复合酶的用量为银耳粉质量的0.05%；然后酶灭活；

S2：多糖浸提

将酶解后的银耳粉，每次再加入150份去离子水，在60℃条件下提取2次，每次1-3h，合并两次的提取液，过滤收集上清液；

在8000r/min条件下离心15min，获得的上清液，在60℃条件下浓缩，浓缩至提取液总体积的2.5%；

浓缩液加入质量份数75份的体积浓度95％乙醇，搅拌均匀，4℃条件下冷藏8h，取出后在4500r/min条件下离心，收集沉淀并冷冻干燥2天，研磨得到粗多糖粉末；

S3：多糖提纯

用55℃水溶解，得到浓度为5mg/mL的粗多糖溶液；

向粗多糖溶液加入乙醇-硫酸铵混合溶液，所述的乙醇-硫酸铵混合溶液中乙醇和硫酸铵的质量比20：25；置于漩涡混合器内充分混合，然后静置至，直到上下相体积不再发生变化，将双水相体系两相分离并萃取，萃取结束后将两相分离，保留下相物质，得到浸提液；

S4：超滤分级

浸提液用截留分子量为100 KDa超滤膜超滤，收集透过液；超滤压力1.5 Mpa，当多糖溶液体积超滤浓缩至浸提液体积的1/4，向浓缩液中补3/4浸提液体积的蒸馏水，继续超滤至浓缩液体积恢复为补水前体积，同样方法重复补水，直至总补水体积为浸提液体积的25倍；

收集的透过液再进行截留分子量为10 KDa超滤膜超滤，收集浓缩液；超滤压力0.82 Mpa，当透过液体积浓缩至浸提液体积的1/8时，停止超滤；

冷冻干燥，得到银耳纯多糖。

实施例4

提供一种银耳多糖的抗衰老面膜，由以下原料按照质量制成：27份的有效溶液和58份的面膜基液；

所述的有效溶液包括抗衰老组合物，还包括黄原胶和水，以质量份计，所述的抗衰老组合物的质量分数为7.4份，黄原胶的质量分数为1.4份，水87份，在50℃条件下混合5min；

其中，抗衰老组合物，包括所述的银耳多糖，还包括抗氧化活性肽、活性因子；所述的银耳多糖、抗氧化活性肽、活性因子按照质量份数为3.8:3.2:2.4；所述活性因子为丹参和银杏提取物。

所述的面膜基液，包括油相和水相，以质量份计，所述的油相为18.2份，所述的水相为52.6份；分别加热融化后混合乳化，加热融化温度为60℃，乳化时间为8min。

以质量份计，所述的油相包括甘油聚丙烯酸酯4.2份、甘油6.3份、聚二甲基硅氧烷2.3份、甘油聚醚-26 2.4份、乙基己基甘油0.41份；

以质量份计，所述水相包括甜菜碱5.1份、丙二醇6.2份、辛酸4.9份、海藻糖3.1份、1,2-己二醇0.01份、尿囊素2.7份、聚丙烯酸2.6份、三乙醇胺0.10份、透明质酸钠0.2份、燕麦肽0.8份、羟苯甲酯钠2.7份。

实施例5

提供一种银耳多糖的抗衰老口服液，以质量份计，包括抗衰老组合物13份，还包括浓缩蔬菜汁或果汁8份、木糖醇5份、柠檬酸0.04份、山梨酸钾0.4份、桃胶0.10份、水58份。

其中，抗衰老组合物，包括所述的银耳多糖，还包括抗氧化活性肽、活性因子；所述的银耳多糖、抗氧化活性肽、活性因子按照质量份数为4.3:2.4:1.2；所述活性因子为丹参和银杏提取物。

相关性能检测：

1.银耳多糖的提取率，计算公式为：

银耳多糖的提取率(％)＝喷雾干燥得到的银耳多糖含量(g)/干银耳的质量(g)×100％

结果见表1，本发明的提取率基本保持在20%以上。

2.高温稳定性

分别将实施例1-3获得的银耳多糖在120℃高温蒸煮40min，分别测试高温蒸煮前后的动力粘度，并计算粘度的变化率：

粘度的变化率(％)＝(初始动力粘度-高温蒸煮后动力粘度)/初始动力粘度×100％

其中，粘度的变化率在1-3％，记为优；粘度的变化率在3-8％(不包括3％)记为良，粘度大于8％记为差。结果见表1。

3.面膜试用

本发明实施例4的面膜进行用户评价，选择10名试用人员，试用人员具有不同年龄、性别分布，并且有化妆品基础知识，对化妆品的各项指标逐项评分。10名试用人员对面膜各项指标的给分情况如表2。

评价指标包括：光亮度，透明度，铺展性，保湿性，黏滞感，厚重感，滑爽度，黏起感；

评价等级：非常差0-2)，略差2-4，一般4-6，较好6-8，极好8-9。

由此可知10名用户评价银耳多糖抗衰老面膜较好。

4、银耳多糖口服液试用

征集年龄18-65岁的志愿者100名，品尝本发明各实施例5制备得到的银耳多糖口服液半个月，每天两支，每支30ml，并评价其口感和试用效果。持续试用半个月后统计效果，对皮肤红润细腻、毛孔变小、精神饱满三个指标进行统计打分，评分等级标准为：非常差0-20，略差20-40，一般40-60，较好60-80，非常好80-100，具体如表3所示。

说明总体上试用人员对该口服液的效果是认可的。

以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而未脱离本发明技术方案的精神和范围，其均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。