一种抗衰组合物及其制备方法与应用

技术领域

本发明涉及化妆品领域，尤其涉及一种抗衰组合物及其制备方法与应用。

背景技术

羟丙基四氢吡喃三醇，又名玻色因，它具有广泛的生物潜能，能促进透明质酸的生成，促进胶原蛋白的合成，帮助表皮与真皮的紧密联合，并能促进粘多糖的合成，帮助真皮维持弹性，因此玻色因被一些消费者视为抗衰老的“神仙成分”。从玻色因的一些文献来看，玻色因的生物活性较弱，需要达到一定的浓度才会起作用。配方中玻色因的质量浓度基本在3%~10%之间，浓度高于3%，就可以发生效果了，但也不是浓度越高越有效。事实上，玻色因的效果，不单单取决于添加的浓度，还要取决于皮肤对它的吸收率。当浓度高，首先会使粘度可能增加，导致肤感变差；其次玻色因含有四个羟基，会富集在皮肤表面及角质层内，仅有少量的玻色因能进入到真皮层中，还易被皮肤中的相关蛋白酶分解，那就致使玻色因的生物利用度低，成本升高等。

“国货黑马”的米加超分子玻色因面霜，其玻色因成分含量较高，此产品也围绕玻色因申请了专利CN115737515A，将玻色因与二肽二氨基丁酰苄基酰胺二乙酸盐等活性成分复配。专利CN112402310A，致力于将玻色因与多肽例如六肽-9、棕榈酰五肽-4等复配成抗皱眼霜。专利CN111588657A，将玻色因与蓝铜肽复配成精华液，解决皮肤衰老问题。这些产品都是利用玻色因搭配其他成分来实现抗衰的效果，但并未解决玻色因的肤感、吸收的问题，由此可见，发现一种可以提高玻色因生物利用度的方法是重中之重。

因此，现有技术还有待于改进和发展。

发明内容

鉴于上述现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种抗衰组合物及其制备方法与应用，旨在解决现有组合物中玻色因浓度高时存在肤感差、玻色因生物利用度低的问题。

本发明的技术方案如下：

本发明的第一方面，提供一种组合物，其中，包括以下组分：玻色因、去离子水、戊二醇和超分子溶剂，所述超分子溶剂包括脯氨酸-鼠李糖-甘油和甜菜碱-乳酸，所述脯氨酸-鼠李糖-甘油由脯氨酸、鼠李糖和甘油经混合并加热搅拌得到，所述甜菜碱-乳酸由甜菜碱和乳酸经混合并加热搅拌得到。

可选地，按重量份计，所述组合物包括以下组分：10-30份玻色因、40-60份去离子水、5-10份戊二醇、1-20份脯氨酸-鼠李糖-甘油和1-20份甜菜碱-乳酸。

可选地，按重量份计，所述组合物由以下组分组成：30份玻色因、52份去离子水、6份戊二醇、10份脯氨酸-鼠李糖-甘油和2份甜菜碱-乳酸。

本发明主要是利用两款超分子溶剂脯氨酸-鼠李糖-甘油和甜菜碱-乳酸对玻色因进行了递送，有效促进了玻色因的吸收，解决了玻色因肤感与吸收的问题。超分子溶剂脯氨酸-鼠李糖-甘油和甜菜碱-乳酸也是化妆品功效活性物中的成分，在促进活性物吸收的同时，也能保护活性物结构并且起到协同增效的作用，增加玻色因的抗衰、修复、保湿的效果。在玻色因使用相同量的时候，本发明该组合物相比于现有不含超分子溶剂的组合物具有更好的抗衰、修复、保湿效果。

脯氨酸-鼠李糖-甘油：脯氨酸，它通常被称为“蛋白质的基本组成部分”。它是参与胶原合成的主要氨基酸，若胶原中缺乏脯氨酸，不能羟基化，会影响胶原三螺旋的结构的稳定，从而影响整体胶原蛋白的合成。鼠李糖不仅有非常好的保湿功效，可以增强皮肤的天然保护屏障功能，减少皮肤的炎症反应，同时还可以促进皮成纤维细胞的活性，从而促进胶原蛋白的合成，改善皮肤的光滑度和紧致度；甘油具有保湿作用，将三者形成超分子溶剂，既保留了各自的功效，又能递送玻色因，起到协同增效的效果。

甜菜碱-乳酸：甜菜碱具有保湿的作用，乳酸是一种十分有效的去角质成分，可以松动角质层，将二者形成超分子溶剂，既保留了各自的功效，又能递送玻色因，起到协同增效的效果。

经实验发现，利用其它超分子溶剂时，如：脯氨酸-木糖醇-甘油，甜菜碱-丙二醇-甘油，甜菜碱-乳酸，脯氨酸-鼠李糖-甘油的递送效果都较差，本发明这两款超分子溶剂脯氨酸-鼠李糖-甘油和甜菜碱-乳酸的组合对玻色因进行递送，由于乳酸可以松动角质层，鼠李糖与角质细胞有很高的亲和力，通过自身与细胞膜的相容性，在受损细胞膜上形成仿生膜，可通过限制角质细胞释放炎症信号和修护细胞膜，发挥健康的细胞膜作用，有效抗击外界刺激的侵袭。两种超分子溶剂加成，降本增效，显著提高了玻色因的吸收效果，大大提高了玻色因的生物利用度，同时也说明并非所有的超分子溶剂对玻色因都具有促渗作用，其具有高度的选择性。

本发明的第二方面，提供一种抗衰组合物的制备方法，其中，包括步骤：

将玻色因、去离子水、戊二醇进行混合，得到玻色因溶液；

将所述玻色因溶液与超分子溶剂进行混合，并搅拌，得到抗衰组合物；

其中，所述超分子溶剂包括脯氨酸-鼠李糖-甘油和甜菜碱-乳酸，所述脯氨酸-鼠李糖-甘油由脯氨酸、鼠李糖和甘油经混合并加热搅拌得到，所述甜菜碱-乳酸由甜菜碱和乳酸经混合并加热搅拌得到。

可选地，所述抗衰组合物的制备方法，包括步骤：

将10-30份玻色因、40-60份去离子水、5-10份戊二醇进行混合，得到玻色因溶液；

将所述玻色因溶液与1-20份脯氨酸-鼠李糖-甘油、1-20份甜菜碱-乳酸进行混合，并搅拌，得到抗衰组合物。

可选地，所述抗衰组合物的制备方法，包括步骤：

将30份玻色因、52份去离子水、6份戊二醇进行混合均匀，得到玻色因溶液；

将所述玻色因溶液与10份脯氨酸-鼠李糖-甘油、2份甜菜碱-乳酸进行混合，并搅拌均匀，得到抗衰组合物。

可选地，所述脯氨酸-鼠李糖-甘油的制备方法，包括步骤：

将脯氨酸和甘油混合，在第一预设温度下搅拌第一预设时间，然后降温至50-60℃，加入鼠李糖，在第二预设温度下搅拌第二预设时间后，再超声10-30分钟，得到所述脯氨酸-鼠李糖-甘油。

其中，脯氨酸作为氢键受体，鼠李糖和甘油作为氢键供体，将所述氢键受体和氢键供体混合，在加热条件下搅拌一定时间，得到所述脯氨酸-鼠李糖-甘油。

可选地，所述脯氨酸、鼠李糖和甘油的摩尔比为1：1：1-5：10：10。

可选地，所述第一预设温度为60-85℃，如60℃、65℃、70℃、75℃、85℃，所述第一预设时间为1-5小时，如1小时、2小时、3小时、4小时、5小时。

可选地，所述第二预设温度为50-60℃，如50℃、55℃、60℃，所述第二预设时间为30-50分钟，如30分钟、40分钟、50分钟。

可选地，所述甜菜碱-乳酸的制备方法，包括步骤：

将甜菜碱和乳酸混合，在第三预设温度下搅拌第三预设时间，得到所述甜菜碱-乳酸。

其中，甜菜碱作为氢键受体，乳酸作为氢键供体，将所述氢键受体和氢键供体混合，在加热条件下搅拌一定时间，得到所述甜菜碱-乳酸。

可选地，所述甜菜碱和乳酸的摩尔比为1：1-5：10。

可选地，所述第三预设温度为50-80℃，如50℃、55℃、65℃、70℃、75℃、80℃，所述第三预设时间为1-3小时，如1小时、2小时、3小时。

本发明的第三方面，提供一种本发明所述的抗衰组合物在化妆品中的应用。

附图说明

图1为脯氨酸-鼠李糖-甘油的

图2为脯氨酸-鼠李糖-甘油的二维核磁氢NOESY（核欧佛豪瑟效应频谱）谱图，其中氘代试剂为D

图3为脯氨酸-乳酸的

图4为脯氨酸-乳酸的二维核磁氢NOESY谱图，其中氘代试剂为D

图5为脯氨酸-鼠李糖-甘油、脯氨酸-乳酸的红外谱图。

图6为不同时间点玻色因单位面积累积渗透量结果图。

图7为第24h玻色因单位面积皮内滞留量结果图。

图8为人角质细胞相对存活率趋势示意图。

图9为人真皮成纤维细胞相对存活率趋势示意图。

图10为不同组人I型胶原蛋白含量对比图。

图11为不同组MMP-1（基质金属蛋白酶-1）相对含量对比图。

图12为不同组APQ3蛋白（水通道蛋白3）含量对比图。

图13为不同组APQ3蛋白表达免疫荧光结果对比图。

图14为不同组HA（透明质酸）含量对比图。

图15为不同组SDS（十二烷基硫酸钠）损伤HaCaT细胞（人永生化角质形成细胞）后细胞增殖相对含量对比图。

图16为不同组相对迁移率柱形图对比图。

图17为不同组细胞迁移图片对比图。

具体实施方式

本发明提供一种抗衰组合物及其制备方法与应用，为使本发明的目的、技术方案及效果更加清楚、明确，以下对本发明进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

首先需说明的是，下面实施例和对比例中涉及的脯氨酸-鼠李糖-甘油通过以下方法制备得到：

将1摩尔脯氨酸和9摩尔甘油混合，在70℃下搅拌3小时，然后降温至55℃，加入1摩尔鼠李糖，在55℃下搅拌40分钟后，再超声20分钟，得到所述脯氨酸-鼠李糖-甘油。所述脯氨酸-鼠李糖-甘油的

下面实施例和对比例中涉及的甜菜碱-乳酸通过以下方法制备得到：

将1摩尔甜菜碱和1.709摩尔乳酸混合，在65℃下搅拌2小时，得到所述甜菜碱-乳酸。所述甜菜碱-乳酸的

实施例1：

按重量份计，在室温下，将30份玻色因粉末、54份去离子水、6份戊二醇进行混合均匀，得到玻色因溶液1。将玻色因溶液1与10份甘油进行混合，搅拌均匀，得到抗衰组合物。

实施例2：

按重量份计，在室温下，将30份玻色因粉末、49份去离子水、6份戊二醇进行混合均匀，得到玻色因溶液2。将玻色因溶液2与5份甜菜碱-乳酸、10份甘油进行混合，搅拌均匀，得到抗衰组合物。

实施例3：

在室温下，将30份玻色因粉末、44份去离子水、6份戊二醇进行混合均匀，得到玻色因溶液3。将玻色因溶液3与20份脯氨酸-鼠李糖-甘油进行混合，搅拌均匀，得到抗衰组合物。

实施例4：

按重量份计，在室温下，将30份玻色因粉末、52份去离子水、6份戊二醇进行混合均匀，得到玻色因溶液4。将玻色因溶液4与10份脯氨酸-鼠李糖-甘油、2份甜菜碱-乳酸进行混合，搅拌均匀，得到抗衰组合物。

对比例1：

按重量份计，在室温下，将30份玻色因粉末、44份去离子水、6份戊二醇进行混合均匀，得到玻色因溶液5。将玻色因溶液5与20份甜菜碱-丙二醇-甘油进行混合，搅拌均匀，得到抗衰组合物。

对比例2：

按重量份计，在室温下，将30份玻色因粉末、44份去离子水、6份戊二醇进行混合均匀，得到玻色因溶液6。将玻色因溶液6与20份脯氨酸-木糖醇-甘油进行混合，搅拌均匀，得到抗衰组合物。

对比例3：

按重量份计，在室温下，将30份玻色因粉末、49份去离子水、6份戊二醇进行混合均匀，得到玻色因溶液7。将玻色因溶液7与10份脯氨酸-木糖醇-甘油，5份HEPES（4-羟乙基哌嗪乙磺酸）进行混合，搅拌均匀，得到抗衰组合物。

为了验证玻色因的生物利用度，进行了以下表征：

测试各实施例所得抗衰组合物在体外透皮情况下的透过率。体外透皮实验采用Franz扩散池法，具体步骤如下：采用TP-6智能透皮扩散仪进行透皮扩散试验，试验仪同时设置6个扩散池，池口面积为2.5cm，各池体积为7.5mL。用0.9%生理盐水作为接受液，透皮率以6个池内样品的平均值计。以小香猪的皮肤作为渗透皮肤，去除猪皮的皮下脂肪，清除杂毛后，无菌生理盐水清洗，上扩散池进行检测。

实验结果如下：

从图6和图7可知：

总体的透皮效果：实施例4>对比例1>实施例1>对比例2>实施例2>对比例3>实施例3。

选取实施例4的抗衰组合物（下文中也简称样品）进行功效性验证，且与玻色因溶液（30份玻色因粉末+6份戊二醇+64份去离子水，作为空白组）进行功效对比，具体测试如下：

测试例1

对实施例4制得的抗衰组合物进行安全性测试

1、人角质细胞毒性检测、人真皮成纤维细胞毒性检测

样品在人角质细胞上开展细胞毒性检测试验：将样品用最低必需培养基（MEM培养基）稀释为各个体积浓度后，以噻唑蓝（MTT）模型进行检测，检测结果见图8所示；

样品在人真皮成纤维细胞上开展细胞毒性检测试验：将样品用低糖DMEM培养基稀释为各个体积浓度后，以MTT模型进行检测，检测结果见图9所示。

结论：

从图8-图9可知：

基于人角质细胞，该样品的IC50=10.59%（95%CI：9.481~12.03%），IC90=0.892%；

基于人真皮成纤维细胞，该样品的IC50=7.095%（95%CI：5.369~10.43%），IC90=0.184%。

测试例2

基于人真皮成纤维细胞对实施例4的抗衰组合物进行抗皱功效评价

1、I型胶原蛋白含量测定

抗衰组合物在人真皮成纤维细胞上开展I型胶原蛋白含量检测试验，通过酶联免疫吸附测定法（ELISA法）进行检测，检测结果如图10所示。

实验结论：

与NC组相比，PC组的人I型胶原蛋白含量显著上升（P<0.05），说明本次测试阳性对照有效；

与NC组相比，抗衰组合物在0.25%、0.125%、0.06%的测试浓度（体积浓度）下，人I型胶原蛋白含量显著上升（P<0.05），上调率分别为29.94%、51.89%、22.45%，则表示抗衰组合物在0.25%、0.125%、0.06%的浓度下有促进人1型胶原蛋白合成的能力，在0.06%浓度下，具有促进人1型胶原蛋白合成的能力效果要好于玻色因（空白组），更好的达到抗皱、紧致功效。

2、MMP-1的释放量测试

采用UVA刺激成纤维细胞，对成纤维细胞进行RNAiso Plus处理后收样，根据HAELISA试剂盒的操作说明书，开展RNA提取、反转录及荧光定量PCR操作。

MMP为基质金属蛋白酶，主要作用是降解胶原，MMP含量降低后，胶原的降解程度下降，从而达到一定的抗皱作用。

结果如图11所示，从图11可知：

与BC组相比，NC组的MMP-1相对含量显著上升，说明本次测试刺激有效；

与NC组相比，PC组的MMP-1相对含量显著下降，说明本次测试阳性对照有效；

与NC组相比，抗衰组合物在0.25%、0.125%、0.06%的体积浓度下，MMP-1相对含量均有显著下降（P<0.05），抑制率分别为52.20%、27.72%、19.32%，则表示抗衰组合物在0.25%、0.125%、0.06%的浓度下，有抑制MMP-1含量释放作用，且在0.25%、0.125%的浓度下，抗衰组合物的抗衰效果要比0.25%玻色因（空白）效果好，因此可以更好的达到抗皱功效。

测试例3

1、人角质细胞中APQ3蛋白含量测定

样品设置2个体积浓度，在人角质细胞上开展APQ3蛋白表达检测，评价实施例4的抗衰组合物的功效。

结果如图12-图13所示，从图12-图13可知：

与BC组相比，PC组的APQ3相对含量显著上升（P<0.05），说明本次试验阳性对照有效；

与BC组相比，抗衰组合物在0.4%、0.2%的测试浓度（体积浓度）下，APQ3相对含量显著增加（P<0.05），上调率分别为58.07%、29.92%，则表示抗衰组合物在0.4%、0.2%的浓度下，有促进APQ3蛋白的表达，达到保湿功效，且效果要好于玻色因（空白）组。

人角质细胞透明质酸HA合成含量测定

设置样品体积浓度为0.8%，在人角质细胞开展HA合成含量测定实验，通过ELISA法进行检测。

结果如图14所示，从图14可知：

与NC组相比，PC组的HA合成含量显著上升（P<0.05），说明本次试验阳性对照有效；

与NC组相比，抗衰组合物在0.8%的体积浓度下，HA合成含量显著上升（P<0.05），上调率为3.36%；0.8%玻色因（空白），HA合成含量显著下降；则表示在0.8%的浓度下抗衰组合物促进透明质酸合成的能力优于0.8%玻色因（空白）。因此，可以达到保湿功效。

测试例4

1、SDS损伤HaCaT细胞后增殖检测实验

设置SDS浓度为60μg/mL进行细胞损伤处理，将样品体积浓度分别设置为0.4%、0.2%、0.1%，在人角质细胞上开展SDS损伤HaCaT细胞后增殖实验。

结果如图15所示，从图15可知：

与BC组相比，NC组的细胞数量显著下降（P<0.05），说明本次试验刺激条件有效；

与NC组相比，PC组的细胞数量明显增加（P<0.05），说明本次试验阳性对照有效；

与NC组相比，抗衰组合物在0.4%、0.2%、0.1%的测试浓度（体积浓度）下，细胞数量显著性增加（P<0.05），修护率分别为41.20%、35.40%、33.41%；玻色因（空白）在0.4%测试浓度下，细胞数量显著性增加（P<0.05），修护率为35.18%；则表示抗衰组合物在0.4%、0.2%、0.1%的浓度下对SDS损伤的HaCaT细胞有增殖作用，且在0.4%浓度下抗衰组合物的增殖作用优于玻色因（空白），因此抗衰组合物的修护作用更好。

2、人角质细胞划痕测试

样品在人角质细胞上开展细胞划痕实验，结果如图16-图17所示，从图16-图17可知：

与NC组相比，24h时PC组的相对迁移率增加（P<0.05），说明本次试验阳性对照有效；

与NC组相比，抗衰组合物在0.2%、0.1%的测试浓度（体积浓度）下，相对迁移率均显著增加（P<0.05），修护率分别为207%、144%，玻色因（空白）在0.2%的测试浓度下，相对迁移率显著增加，修护率为36%，则表示抗衰组合物在0.2%的浓度下的修护功效优于同浓度下的玻色因（空白）。

综上所述，本发明提供的一种抗衰组合物及其制备方法与应用，本发明主要是利用两款超分子溶剂脯氨酸-鼠李糖-甘油和甜菜碱-乳酸对玻色因进行了递送，有效促进了玻色因的吸收，解决了玻色因肤感与吸收的问题。超分子溶剂脯氨酸-鼠李糖-甘油和甜菜碱-乳酸也是化妆品功效活性物中的成分，在促进活性物吸收的同时，也能保护活性物结构并且起到协同增效的作用，增加玻色因的抗衰、修复、保湿的效果。在玻色因使用相同量的时候，本发明该组合物相比于现有不含超分子溶剂的组合物具有更好的抗衰、修复、保湿效果。

应当理解的是，本发明的应用不限于上述的举例，对本领域普通技术人员来说，可以根据上述说明加以改进或变换，所有这些改进和变换都应属于本发明所附权利要求的保护范围。