含TGF-β受体的融合蛋白与紫杉类、核苷类似物联合在制备治疗胰腺癌药物中的用途

技术领域

本公开属于制药领域，具体的涉及一种含有TGF-β受体的融合蛋白与紫杉类化合物、核苷类似物联合在制备治疗胰腺癌的药物中的用途。

背景技术

程序性死亡受体1(programmed death 1,PD-1)为CD28超家族成员。PD-1表达于活化的T细胞，B细胞及髓系细胞，其有两个配体，即程序性死亡配体-1(programmed deathligand 1,PD-L1)和PD-L2。PD-L1与T细胞上的受体PD-1相互作用，在免疫应答的负调控方面发挥着重要作用。在许多人类肿瘤组织中均可检测到PD-L1蛋白的表达，肿瘤部位的微环境可诱导肿瘤细胞上的PD-L1的表达，表达的PD-L1有利于肿瘤的发生和生长，诱导抗肿瘤T细胞的凋亡。PD-1/PD-L1通路抑制剂可以阻断PD-1与PD-L1的结合，阻断负向调控信号，使T细胞恢复活性，从而增强免疫应答，因此，以PD-1/PD-L1为靶点的免疫调节对肿瘤抑制有重要的意义。

转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)属于调节细胞生长和分化的TGF-β超家族。TGF-β通过异源四聚体受体复合物传递信号，这个受体复合物是由两个I型和两个II型的跨膜丝氨酸/苏氨酸激酶受体组成。

研究发现阻断TGF-β信号传导通路能够减少肿瘤的转移。运用截短的Smad2/3显负性突变体抑制乳腺肿瘤细胞系的TGF-β信号通路，结果发现肿瘤细胞的转移能力被抑制。结肠癌的微卫星不稳定性研究发现，TGF-βRII无活性的突变，使转移减少，增加了患者术后的存活率。但总体而言，抑制TGF-β信号通路的抑制剂单用在临床治疗中效果微弱，可能跟TGF-β主要在肿瘤细胞内异常性高表达，而单纯的TGF-β信号通路的抑制剂很难集中靶向于肿瘤导致药效不高或信号通路抑制剂生物利用度有关。

因此，在靶向中和肿瘤微环境的TGF-β基础上抑制PD-1/PD-L1通路，可以使T细胞恢复活性，增强免疫应答，更有效地提高抑制肿瘤发生和发展的效果。Merck公司开发的PD-L1/TGF-β双抗M-7824目前已经进入临床II期，除单药用于治疗肿瘤外，该产品还开发了与艾日布林甲磺酸盐联用治疗转移性三阴性乳腺癌(NCT03579472)；与吉西他滨联用治疗在先接受过治疗的晚期胰腺腺癌(NCT03451773)；与拓扑替康或者替莫唑胺联用治疗复发性小细胞肺癌(NCT0-3554473)等适应症。WO2018205985A公开了一种新的PD-L1/TGF-β融合蛋白。

胰腺癌恶性程度较高、进展迅速,但起病隐匿、早期症状不典型，临床就诊时大部分患者已属于中晚期。胰腺癌的治疗是一个系统性的工程，常常需要多学科会诊模式(MDT)，主要包括手术治疗、放射治疗、化学治疗、介入治疗和支持治疗，其中手术切除是胰腺癌获得治愈和长期生存的唯一机会。对于1线治疗失败的晚期胰腺癌，可选的治疗方案有限，根据患者的身体功能状态及肿瘤进展情况，可以选择以吉西他滨或者氟尿嘧啶为基础的单药化疗或者联合化疗。对于高微卫星不稳定(MSI-H)/错配修复缺陷(dMMR)类型的晚期或转移性胰腺癌患者的二线治疗，PD-1单抗派姆单抗(Pembrolizumab)目前已获得美国国立综合癌症网络(NCCN)指南2类的推荐。

因此，寻找更为有效的治疗新途径或药物组合，为胰腺癌临床治疗提供新的循证医学证据，从而指导患者的临床诊疗综合当前国际国内研究新进展，具有重要的临床意义。

发明内容

本公开涉及一种含有TGF-β受体的融合蛋白与核苷类似物、紫杉类化合物联合在制备治疗肿瘤或癌症的药物中的用途。以及，一种含有TGF-β受体的融合蛋白与核苷类似物、紫杉类化合物联合治疗肿瘤或癌症的方法。

在某些实施方式中，所述的核苷类似物选自吉西他滨、巯嘌呤、奈拉滨(nelarabine)、氟达拉滨(fludarabine)、克拉屈滨(cladribine)、氯法拉滨(clofarabine)、阿扎胞苷、安西他滨、曲沙他滨、卡培他滨、地西他滨或上述相关药物的可药用盐。某些具体实施方式中，核苷类似物为吉西他滨或其可药用盐。

在某些实施方式中，所述的紫杉类化合物选自紫杉醇、紫杉醇白蛋白、紫杉醇脂质体，多西他赛或其可药用盐。在某些具体实施方式中，为紫杉醇白蛋白。

在某些实施方式中，所述的含有TGF-β受体的融合蛋白包含抗PD-L1抗体或其抗原结合片段和TGF-β受体部分，其中所述TGF-β受体部分为TGF-βRII胞外区的N端截短形式。

在某些实施方式中，所述含有TGF-β受体的融合蛋白如通式(I)所示：

Ab-L-TGF-βRII ECD(I)

其中TGF-βRII ECD为TGF-βRII胞外区的截短形式；

Ab为抗PD-L1抗体或其抗原结合片段；

L为连接序列。

在某些实施方式中，所述的连接序列为(G

在某些实施方式中，所述的抗PD-L1抗体或其抗原结合片段包含：

分别如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3，和分别如SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3，

其中，前面所述的各CDR序列如下所示：

其中X1为G，X2为F。

在某些实施方式中，所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段为嵌合抗体或其功能片段、人源化抗体或其功能片段或人抗体或其功能片段。

在某些实施方式中，所述人源化抗PD-L1抗体重、轻链的序列如下所示：

抗PD-L1抗体重链可变区：

抗PD-L1抗体轻链可变区：

注：顺序为FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4，序列中斜体为FR序列；下划线为CDR序列。

在某些实施方案中，所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段的重链氨基酸序列如SEQID NO：9所示或与SEQ ID NO：9所示的序列具有至少85％，86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％的序列同一性，所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段的轻链氨基酸序列如SEQ ID NO：10所示或与SEQ ID NO：10所示的序列具有至少85％，86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％的序列同一性，其中

抗PD-L1抗体重链序列：IgG4(AA)(S228P)

QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYWMHWVRQAPGQGLEWMGRIGPNSGFTSYNEKFKNRVT

SEQ ID NO：9

抗PD-L1抗体轻链序列：

DIVLTQSPASLAVSPGQRATITCRASESVSIHGTHLMHWYQQKPGQPPKLLIYAASNLESGVPARFSGS

SEQ ID NO：10

在本公开中，TGF-βRII胞外区的N端截短形式选自在TGF-βRII胞外区的N端上有26个以下连续氨基酸的缺失，例如14-26个连续氨基酸的缺失，又例如14-21个连续氨基酸的缺失，又例如包含14-21个连续氨基酸的缺失。

在某些实施方案中，TGF-βRII胞外区的序列如SEQ ID NO：11所示，例如包含SEQID NO：12、13或14所示的序列，例如包含SEQ ID NO：12所示的序列。

本公开中TGF-βRII胞外结构域及其截短形式的非限制性实施例序列如下：

TGF-βRII胞外结构域序列：ECD(1-136)

IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPD

SEQ ID NO：11

TGF-βRII胞外结构域序列在N端有19个氨基酸的截短或缺失：ECD(20-136)

GAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPD

SEQ ID NO：12

TGF-βRII胞外结构域序列在N端有21个氨基酸的截短或缺失：ECD(22-136)

VKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPD

SEQ ID NO：13

TGF-βRII胞外结构域序列在N端有14个氨基酸的截短或缺失：ECD(15-136)

VTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPD

SEQ ID NO：14

利用同源重组技术将抗PD-L1抗体的重链C末端氨基酸通过(G

表1.抗PD-L1抗体/TGF-βRII胞外区融合蛋白

注：Ab为本公开所述抗PD-L1抗体，序列描述中ECD(n-136)为TGF-βRII胞外区的全长或截短形式，n为TGF-βRII胞外区截短后的氨基酸起始位数。N19A表示TGF-βRII胞外区的第19位氨基酸突变为A。

此处全文引入WO2018205985A中的PD-L1/TGF-β融合蛋白，包括其结构和制备方法。

某些具体实施方案中，含有TGF-β受体的融合蛋白中的抗PD-L1抗体或其抗原结合片段的重链氨基酸序列如SEQ ID NO：9所示、轻链氨基酸序列如SEQ ID NO：10所示，连接序列L为(G

在某些实施方式中，所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段选自avelumab、atezolizumab、durvalumab、CS-1001、M-7824、KL-A167、CX-072、、BGB-A333、GNS-1480、CA-170、BMS-936559，优选avelumab、atezolizumab、durvalumab。

在某些实施方式中，所述核苷类似物(例如吉西他滨)的给药剂量选自1-1600mg/m

1400mg/m

在某些实施方案中，核苷类似物(例如吉西他滨在一个周期期间施用至少一次。在某些实施方案中，核苷类似物(例如吉西他滨)在一个周期期间施用至少两次。在某些实施方案中，核苷类似物(例如吉西他滨)在一个周期期间施用至少三次。在某些实施方案中，一个周期为14天。在某些实施方案中，一个周期为21天。在某些实施方案中，一个周期为28天。在某些实施方案中，吉西他滨每周施用至少一次。在某些实施方案中，核苷类似物(例如吉西他滨)每两周施用至少一次。在某些实施方案中，核苷类似物(例如吉西他滨)每三周施用至少一次。在某些实施方案中，核苷类似物(例如吉西他滨)每三周施用至少两次。在某些实施方案中，核苷类似物(例如吉西他滨)每四周施用至少一次。在某些实施方案中，核苷类似物(例如吉西他滨)在28天周期的第1天、第8天和第15天施用。在某些实施方案中，核苷类似物(例如吉西他滨)在21天周期的第1天、第8天施用。

某些实施方案中，核苷类似物(例如吉西他滨)的给药剂量为400mg/m

在某些实施方案中，所述紫杉类化合物为紫杉醇白蛋白。

在某些实施方案中，所述紫杉醇白蛋白中白蛋白与紫杉醇具有1:1～18:1之间的重量比。在某些实施方案中，所述紫杉醇白蛋白中白蛋白与紫杉醇具有1:1～10:1之间的重量比。在某些实施方案中，所述紫杉醇白蛋白中白蛋白与紫杉醇具有1:1～9:1之间的重量比，例如9：1。在某些实施方案中，所述紫杉醇白蛋白中白蛋白与紫杉醇具有1:1～5:1之间的重量比。在某些实施方案中，所述紫杉醇白蛋白中白蛋白与紫杉醇具有1:1～2:1之间的重量比。

在某些实施方式中，紫杉类化合物(例如紫杉醇白蛋白)的给药剂量选自10～400mg/m

在某些具体实施方式中，紫杉类化合物(例如紫杉醇白蛋白)的给药剂量为25～300mg/m

在某些实施方式中，紫杉类化合物(例如紫杉醇白蛋白)的给药频率为一日两次，一日一次，每两日一次，每三日一次，每四日一次，每五日一次，每六日一次，每周一次，每两周一次，每三周一次，每四周一次，每周两次、每两周两次、每三周两次或每四周两次，优选每三周两次。

某些实施方式中，所述紫杉类化合物(例如紫杉醇白蛋白)的给药剂量为50mg/m

在某些实施方案中，紫杉类化合物(例如紫杉醇白蛋白)在一个周期期间施用至少一次。在某些实施方案中，紫杉类化合物(例如紫杉醇白蛋白)在一个周期期间施用至少两次。在某些实施方案中，紫杉类化合物(例如紫杉醇白蛋白)在一个周期期间施用至少三次。在某些实施方案中，一个周期为14天。在某些实施方案中，一个周期为21天。在某些实施方案中，一个周期为28天。在某些实施方案中，紫杉类化合物(例如紫杉醇白蛋白)每周施用至少一次。在某些实施方案中，紫杉类化合物(例如紫杉醇白蛋白)每两周施用至少一次。在某些实施方案中，紫杉类化合物(例如紫杉醇白蛋白)每三周施用至少一次。在某些实施方案中，紫杉类化合物(例如紫杉醇白蛋白)每三周施用至少两次。在某些实施方案中，紫杉类化合物(例如紫杉醇白蛋白)每四周施用至少一次。在某些实施方案中，紫杉类化合物(例如紫杉醇白蛋白)在28天周期的第1天、第8天和第15天施用。在某些实施方案中，紫杉类化合物(例如紫杉醇白蛋白)在21天周期的第1天、第8天施用。

在某些实施方式中，所述含有TGF-β受体的融合蛋白的给药剂量选自0.1-500mg/kg，例如1mg/kg、2mg/kg、3mg/kg、4mg/kg、5mg/kg、6mg/kg、7mg/kg、8mg/kg、9mg/kg、10mg/kg、11mg/kg、12mg/kg、13mg/kg、14mg/kg、15mg/kg、16mg/kg、17mg/kg、18mg/kg、19mg/kg、20mg/kg、21mg/kg、22mg/kg、23mg/kg、24mg/kg、25mg/kg、26mg/kg、27mg/kg、28mg/kg、29mg/kg、30mg/kg、31mg/kg、32mg/kg、33mg/kg、34mg/kg、35mg/kg、36mg/kg、37mg/kg、38mg/kg、39mg/kg、40mg/kg、41mg/kg、42mg/kg、43mg/kg、44mg/kg、45mg/kg、46mg/kg、47mg/kg、48mg/kg、49mg/kg、50mg/kg、51mg/kg、52mg/kg、53mg/kg、54mg/kg、55mg/kg、56mg/kg、57mg/kg、58mg/kg、59mg/kg、60mg/kg、61mg/kg、62mg/kg、63mg/kg、64mg/kg、65mg/kg、66mg/kg、67mg/kg、68mg/kg、69mg/kg、70mg/kg、71mg/kg、72mg/kg、73mg/kg、74mg/kg、75mg/kg、76mg/kg、77mg/kg、78mg/kg、79mg/kg、80mg/kg、81mg/kg、82mg/kg、83mg/kg、84mg/kg、85mg/kg、86mg/kg、87mg/kg、88mg/kg、89mg/kg、90mg/kg、91mg/kg、92mg/kg、93mg/kg、94mg/kg、95mg/kg、96mg/kg、97mg/kg、98mg/kg、99mg/kg、100mg/kg、105mg/kg、110mg/kg、115mg/kg、120mg/kg、125mg/kg、130mg/kg、135mg/kg、140mg/kg、145mg/kg、150mg/kg、155mg/kg、160mg/kg、165mg/kg、170mg/kg、175mg/kg、180mg/kg、185mg/kg、190mg/kg、195mg/kg、200mg/kg、205mg/kg、210mg/kg、215mg/kg、220mg/kg、225mg/kg、230mg/kg、235mg/kg、240mg/kg、245mg/kg、250mg/kg、260mg/kg、270mg/kg、280mg/kg、290mg/kg、300mg/kg、310mg/kg、320mg/kg、330mg/kg、340mg/kg、350mg/kg、360mg/kg、370mg/kg、380mg/kg、390mg/kg、400mg/kg、410mg/kg、420mg/kg、430mg/kg、440mg/kg、450mg/kg、460mg/kg、470mg/kg、480mg/kg、490mg/kg、500mg/kg或两数值之间任意数值，优选1mg/kg、3mg/kg、10mg/kg、15mg/kg、20mg/kg、25mg/kg、30mg/kg、35mg/kg、40mg/kg、45mg/kg、50mg/kg、55mg/kg、60mg/kg或两数值之间任意数值，更优选10mg/kg、20mg/kg、30mg/kg、40mg/kg、50mg/kg、60mg/kg或两数值之间任意数值，最优选20mg/kg或30mg/kg。在某些实施方案中，所述含有TGF-β受体的融合蛋白的给药频率为每周一次，每两周一次，每三周一次或每四周一次，优选每三周一次。

在某些实施方式中，所述含有TGF-β受体的融合蛋白的给药剂量选自0.1-200mg/kg，给药频率为每周一次，每两周一次，每三周一次或每四周一次。

在某些实施方式中，所述含有TGF-β受体的融合蛋白的给药剂量选自0.1-100mg/kg，给药频率为每周一次，每两周一次，每三周一次或每四周一次。

在某些实施方式中，所述含有TGF-β受体的融合蛋白的给药剂量选自1mg/kg、2mg/kg、3mg/kg、4mg/kg、5mg/kg、6mg/kg、7mg/kg、8mg/kg、9mg/kg、10mg/kg、11mg/kg、12mg/kg、13mg/kg、14mg/kg、15mg/kg、16mg/kg、17mg/kg、18mg/kg、19mg/kg、20mg/kg、21mg/kg、22mg/kg、23mg/kg、24mg/kg、25mg/kg、26mg/kg、27mg/kg、28mg/kg、29mg/kg、30mg/kg、31mg/kg、32mg/kg、33mg/kg、34mg/kg、35mg/kg、36mg/kg、37mg/kg、38mg/kg、39mg/kg、40mg/kg、41mg/kg、42mg/kg、43mg/kg、44mg/kg、45mg/kg、46mg/kg、47mg/kg、48mg/kg、49mg/kg、50mg/kg、51mg/kg、52mg/kg、53mg/kg、54mg/kg、55mg/kg、56mg/kg、57mg/kg、58mg/kg、59mg/kg、60mg/kg，给药频率为每两周一次，每三周一次或每四周一次。

在某些实施方式中，所述含有TGF-β受体的融合蛋白的给药剂量选自1mg/kg、3mg/kg、10mg/kg、15mg/kg、20mg/kg、25mg/kg、30mg/kg、35mg/kg、40mg/kg、45mg/kg、50mg/kg、55mg/kg、60mg/kg，给药频率为每两周一次，每三周一次或每四周一次。

在某些实施方式中，所述含有TGF-β受体的融合蛋白的给药剂量选自10mg/kg、20mg/kg、30mg/kg、40mg/kg、50mg/kg、60mg/kg，给药频率为每两周一次，每三周一次或每四周一次。

在某些实施方式中，所述含有TGF-β受体的融合蛋白的给药剂量为20mg/kg、30mg/kg，给药频次为每三周一次，在第1天给药。

在某些实施方式中，所述含有TGF-β受体的融合蛋白的剂量为1-4000mg，例如25mg、50mg、75mg、100mg、150mg、200mg、250mg、300mg、350mg、400mg、450mg、500mg、550mg、600mg、650mg、700mg、750mg、800mg、850mg、900mg、950mg、1000mg、1050mg、1100mg、1150mg、1200mg、1250mg、1300mg、1350mg、1400mg、1450mg、1500mg、1550mg、1600mg、1650mg、1700mg、1750mg、1800mg、1850mg、1900mg、1950mg、2000mg、2050mg、2100mg、2150mg、2200mg、2250mg、2300mg、2350mg、2400mg、2450mg、2500mg、2550mg、2600mg、2650mg、2700mg、2750mg、2800mg、2850mg、2900mg、2950mg、3000mg、3050mg、3100mg、3150mg、3200mg、3250mg、3300mg、3350mg、3400mg、3450mg、3500mg、3550mg、3600mg、3650mg、3700mg、3750mg、3800mg、3850mg、3900mg、3950mg、4000mg或两数值之间任意数值，优选300mg、600mg、900mg、1200mg、1500mg、1800mg、2100mg、2400mg、2700mg、3000mg、3300mg、3600mg或两数值之间任意数值，更优选600mg、1200mg、1800mg、2400mg、3000mg或两数值之间任意数值。在某些实施方案中，给药频率为每周一次，每两周一次，每三周一次或每四周一次，优选每两周一次或每三周一次，更优选每三周一次。

在某些实施方式中，所述含有TGF-β受体的融合蛋白的剂量为300mg、600mg、900mg、1200mg、1500mg、1800mg、2100mg、2400mg、2700mg、3000mg、3300mg、3600mg，给药频率为每两周一次，每三周一次或每四周一次。

在某些实施方式中，所述含有TGF-β受体的融合蛋白的剂量为600mg、1200mg、1800mg、2400mg、3000mg，给药频率为每两周一次或每三周一次。某些具体实施方式中，所述含有TGF-β受体的融合蛋白的给药频次为每三周一次，在第1天给药。

可选的实施方案中，所述的含有TGF-β受体的融合蛋白以注射的方式给药，例如皮下或静脉注射，注射前需将含有TGF-β受体的融合蛋白配制成可注射的形式，含有TGF-β受体的融合蛋白的可注射形式可以是注射液或冻干粉针，其包含含有TGF-β受体的融合蛋白、缓冲剂、稳定剂，任选地还含有表面活性剂。缓冲剂可选自醋酸盐、柠檬酸盐、琥珀酸盐、以及磷酸盐中的一种或几种。稳定剂可选自糖或氨基酸，优选二糖，例如蔗糖、乳糖、海藻糖、麦芽糖。表面活性剂选自聚氧乙烯氢化蓖麻油、甘油脂肪酸酯、聚氧乙烯山梨醇酐脂肪酸酯等。

本公开提供一种治疗肿瘤或癌症的方法，包括向患者施用有效量上述核苷类似物、紫杉类化合物和上述有效量的含有TGF-β受体的融合蛋白。

可选的实施方案中，本公开提供的治疗肿瘤或癌症的方法，所述患者为人类。

本公开中所述肿瘤或癌症选自以下部位的肿瘤或癌症：结直肠、乳腺、卵巢、胰腺、胃、前列腺、肾、宫颈、骨髓瘤、淋巴瘤、白血病、甲状腺、子宫内膜、子宫、膀胱、神经内分泌、头部颈部、肝、鼻咽、睾丸、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、黑素瘤、基底细胞皮肤癌、鳞状细胞皮肤癌、隆突性皮肤纤维肉瘤、梅克尔细胞癌、成胶质细胞瘤、胶质瘤、肉瘤、间皮瘤，和骨髓增生异常综合征。

某些具体实施方案中，所述肿瘤或癌症为胰腺癌。

某些具体实施方案中，胰腺癌为晚期胰腺癌。

某些具体实施方案中，胰腺癌为转移性胰腺癌。

某些具体实施方案中，胰腺癌为导管腺癌或腺泡细胞癌。

在本公开可选的实施方案中，所述胰腺癌是未经受过化学治疗的。另某些实施方案中，所述胰腺癌是经受过化学治疗的。

在本公开可选的实施方案中，其中所述化疗的药物选自铂类药物、表阿霉素、5-FU、伊立替康、核苷类似物或紫杉类化合物中的至少一种。

本公开所述的铂类药物包括但不限于卡铂、顺铂、奥沙利铂、奈达铂(Nedaplatin)、乐铂(lobaplatin)、沙铂(satraplatin)、环铂(cycloplatin)、米铂(Miboplatin)、Enloplatin、Iproplatin、Dicycloplatin。

本公开中所述“联合”或“联用”一种给药方式，是指在一定时间期限内给予至少一种剂量的紫杉类化合物、核苷类似物和至少一种剂量的含有TGF-β受体的融合蛋白，其中两种物质都显示药理学作用。所述的时间期限可以是一个给药周期内，可选4周内，3周内，2周内，1周内，24小时以内，2小时以内。可以同时或依次给予紫杉类化合物、核苷类似物和含有TGF-β受体的融合蛋白。这种期限包括这样的治疗，其中通过相同给药途径或不同给药途径给予紫杉类化合物、核苷类似物和含有TGF-β受体的融合蛋白。本公开所述联合的给药方式选自同时给药、独立地配制并共给药或独立地配制并相继给药。

在某些实施方式中，每两周一个治疗周期，每三周一个治疗周期或每四周一个治疗周期，优选每三周一个治疗周期。

在某些实施方式中，每个周期第1天、第8天和/或第15天给予药物治疗。

在某些具体实施方式中，每个周期第1天、第8天给予药物治疗。

在某些具体实施方式中，每个周期第1天给予含有TGF-β受体的融合蛋白，紫杉类化合物和核苷类似物，第8天只给予紫杉类化合物和核苷类似物治疗；在某些更具体的实施方式中，含有TGF-β受体的融合蛋白，紫杉类化合物和核苷类似物同时给药或相继给药。

在某些具体实施方式中，先给予含有TGF-β受体的融合蛋白的静脉滴注，再给予紫杉类化合物，最后给予核苷类似物。在某些具体实施方式中，先给予含有TGF-β受体的融合蛋白的静脉滴注，再给予核苷类似物，最后给予紫杉类化合物。在某些具体实施方式中，先给予含有TGF-β受体的融合蛋白的静脉滴注，再同时给予核苷类似物和紫杉类化合物。

在某些具体实施方式中，先给予核苷类似物静脉滴注，再给予紫杉类化合物，最后给予含有TGF-β受体的融合蛋白。在某些具体实施方式中，先给予核苷类似物静脉滴注，再给予含有TGF-β受体的融合蛋白，最后给予紫杉类化合物。在某些具体实施方式中，先给予核苷类似物静脉滴注，再同时给予含有TGF-β受体的融合蛋白和紫杉类化合物。

在某些具体实施方式中，先给予紫杉类化合物静脉滴注，再给予核苷类似物，最后给予含有TGF-β受体的融合蛋白。在某些具体实施方式中，先给予紫杉类化合物静脉滴注，再给予含有TGF-β受体的融合蛋白，最后给予核苷类似物。在某些具体实施方式中，先给予紫杉类化合物静脉滴注，再同时给予核苷类似物和含有TGF-β受体的融合蛋白。

在某些实施方案中，每种药物可间隔至少30min给药。

在某些具体的实施方式中，每三周为一个治疗周期，每个周期第1天按顺序给予药物治疗，先给予TGF-β受体融合蛋白静脉滴注，间隔至少30min后，再给予紫杉醇白蛋白，最后给予吉西他滨；每个周期第8天先给予紫杉醇白蛋白，再给予吉西他滨。

在某些实施方式中，TGF-β受体融合蛋白和化疗用药尽量保持一致。

本公开所述的“抗体”指免疫球蛋白，是由两条相同的重链和两条相同的轻链通过链间二硫键连接而成的四肽链结构。

在本公开中，本公开所述的抗体轻链可进一步包含轻链恒定区，所述的轻链恒定区包含人源或鼠源的κ、λ链或其变体。

在本公开中，本公开所述的抗体重链可进一步包含重链恒定区，所述的重链恒定区包含人源或鼠源的IgG1、IgG2、IgG3、IgG4或其变体。

抗体重链和轻链靠近N端的约110个氨基酸的序列变化很大，为可变区(Fv区)；靠近C端的其余氨基酸序列相对稳定，为恒定区。可变区包括3个高变区(HVR)和4个序列相对保守的骨架区(FR)。3个高变区决定抗体的特异性，又称为互补性决定区(CDR)。每条轻链可变区(LCVR)和重链可变区(HCVR)由3个CDR区4个FR区组成，从氨基端到羧基端依次排列的顺序为：FR1，CDR1，FR2，CDR2，FR3，CDR3，FR4。轻链的3个CDR区指LCDR1、LCDR2、和LCDR3；重链的3个CDR区指HCDR1、HCDR2和HCDR3。本公开所述的抗体或抗原结合片段的LCVR区和HCVR区的CDR氨基酸残基在数量和位置符合已知的Kabat编号规则(LCDR1-3，HCDR1-3)，或者符合kabat和chothia的编号规则(HCDR1)。

本公开的抗体包括鼠源抗体、嵌合抗体、人源化抗体，优选人源化抗体。

本公开中所述的“抗体或其抗原结合”或“功能片段”，指具有抗原结合活性的Fab片段，Fab’片段，F(ab’)2片段，以及与抗体结合的Fv片段ScFv片段。Fv片段含有抗体重链可变区和轻链可变区，但没有恒定区，并具有全部抗原结合位点的最小抗体片段。一般地，Fv抗体还包含在VH和VL结构域之间的多肽接头，且能够形成抗原结合所需的结构。也可以用不同的连接物将两个抗体可变区连接成一条多肽链，称为单链抗体(single chainantibody)或单链Fv(sFv)。本公开的术语“与PD-L1结合”，指能与人PD-L1相互作用。本公开的术语“抗原结合位点”指抗原上不连续的，由本公开抗体或抗原结合片段识别的三维空间位点。

术语“鼠源抗体”在本公开中为根据本领域知识和技能制备的对人PD-L1的单克隆抗体。制备时用PD-L1抗原注射试验对象，然后分离表达具有所需序列或功能特性的抗体的杂交瘤。

术语“嵌合抗体(chimeric antibody)”，是将鼠源性抗体的可变区与人抗体的恒定区融合而成的抗体，可以减轻鼠源性抗体诱发的免疫应答反应。建立嵌合抗体，要先建立分泌鼠源性特异性单抗的杂交瘤，然后从小鼠杂交瘤细胞中克隆可变区基因，再根据需要克隆人抗体的恒定区基因，将小鼠可变区基因与人恒定区基因连接成嵌合基因后插入人载体中，最后在真核工业系统或原核工业系统中表达嵌合抗体分子。在本公开一个优选的实施方案中，所述的PCSK-9嵌合抗体的抗体轻链进一步包含人源κ、λ链或其变体的轻链恒定区。所述的PCSK-9嵌合抗体的抗体重链进一步包含人源IgG1、IgG2、IgG3、IgG4或其变体的重链恒定区。人抗体的恒定区可选自人源IgG1、IgG2、IgG3或IgG4或其变体的重链恒定区，优选包含人源IgG2或IgG4重链恒定区，或者使用氨基酸突变后无ADCC(antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity，抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用)毒性的IgG4。

术语“人源化抗体(humanized antibody)”，也称为CDR移植抗体(CDR-graftedantibody)，是指将小鼠的CDR序列移植到人的抗体可变区框架，即不同类型的人种系抗体构架序列中产生的抗体。可以克服嵌合抗体由于携带大量小鼠蛋白成分，从而诱导的强烈的抗体可变抗体反应。此类构架序列可以从包括种系抗体基因序列的公共DNA数据库或公开的参考文献获得。如人重链和轻链可变区基因的种系DNA序列可以在“VBase”人种系序列数据库(在因特网

本公开中所述“同一性”是指两个多核苷酸序列之间或两个多肽之间的序列相似性。本公开中的序列同一性可以至少为85％、90％或95％，优选至少为95％。非限制性实施例包括85％，86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％，100％。两个序列之间的序列比较和同一性百分比测定可以通过National CenterFor Biotechnology Institute网站上可得的BLASTN/BLASTP算法的默认设置来进行。

术语“TGF-β受体II”或“TGFβRII”或“转化生长因子β受体II”是指结合配体(包括但不限于TGFβ1、TGFβ2和TGFβ3)、并且由此引发细胞内的信号转导途径的细胞表面受体。

术语“PD-L1”是指程序性死亡配体1，也称为CD274和B7H1。PD-L1是具有胞外IgV样和IgC样结构域(全长PD-L1的氨基酸19-239)、跨膜结构域和约30个氨基酸的胞内结构域的290个氨基酸的蛋白质。PD-L1在许多细胞例如抗原呈递细胞(例如，树突细胞、巨噬细胞和B细胞)上以及造血细胞和非造血细胞(例如，血管内皮细胞、胰岛、和免疫赦免部位)上组成型表达。PD-L1也在多种肿瘤和病毒感染的细胞上表达，并且是免疫抑制环境(immunosuppressive milieu)的组成(Ribas 2012，NEJM 366：2517-2519)。PD-L1与两种T细胞共抑制剂PD-1和B7-1之一结合。

本公开中所述的融合蛋白是一种通过DNA重组得到的两个基因共表达的蛋白产物。现有技术中熟知生产和纯化抗体和抗原结合片段的方法，如冷泉港的抗体实验技术指南，5-8章和15章。例如，小鼠可以用人PD-L1或其片段免疫，所得到的抗体能被复性、纯化，并且可以用常规的方法进行氨基酸测序。抗原结合片段同样可以用常规方法制备。发明所述的抗体或抗原结合片段用基因工程方法在非人源的CDR区加上一个或多个人源FR区。人FR种系序列可以通过比对IMGT人类抗体可变区种系基因数据库和MOE软件，从ImMunoGeneTics(IMGT)的网站http://imgt.cines.fr得到，或者从免疫球蛋白杂志，2001ISBN012441351上获得。

“有效量”或“有效治疗量”包含足以改善或预防医学疾病的症状或病症的量。有效量还意指足以允许或促进诊断的量。用于特定患者或兽医学受试者的有效量可依据以下因素而变化：例如，待治疗的病症、患者的总体健康情况、给药的方法途径和剂量以及副作用严重性。有效量可以是避免显著副作用或毒性作用的最大剂量或给药方案。

具体实施方式

以下结合实施例用于进一步描述本发明，但这些实施例并非限制本公开的范围。

实施例1、评价测试药物在人体内的安全性和有效性。

分别招募54-60例既往未经过晚期/转移性胰腺癌系统性治疗的受试者，初步评估TGF-β受体融合蛋白联合紫杉类化合物、核苷类似物在晚期/转移性胰腺癌中的疗效。

1、受试抗体和化合物

注射用重组TGF-β受体融合蛋白(融合蛋白9)

(生产厂家：苏州盛迪亚生物医药有限公司，规格：0.3g/6mL，避光，2-8℃保存和运输，勿冷冻或振摇，配置方法参照《药物手册》)：30mg/kg；20mg/kg

化疗药物：

紫杉类化合物：紫杉醇白蛋白(注射用紫杉醇(白蛋白结合型)，生产厂家：江苏恒瑞医药股份有限公司，规格：100mg/瓶，避光，20-30℃保存和运输)

核苷类似物：吉西他滨(生产厂家：江苏豪森药业股份有限公司，规格：1.0g，冻干粉针，密闭，干燥处保存)

2、入组受试者标准

1)组织学或细胞学证实为晚期/转移性胰腺癌；

2)既往未经过针对晚期/转移性胰腺癌系统性治疗；

3)年龄：18-70岁，男女均可。

3、给药方法

TGF-β受体融合蛋白：静脉给药，剂量30mg/kg或20mg/kg，3周给药1次，每3周为一周期，每周期第1天给药。建议通过输液泵给药，静脉滴注30-60分钟完成给药，不得静脉推注和快速推注，输液结束后，用足量的生理盐水或者5％的葡萄糖溶液冲洗输液管。

吉西他滨：1000mg/m

紫杉醇白蛋白：125mg/m

每三周为一个治疗周期，每个周期第1天按顺序给予药物治疗，先给予TGF-β受体融合蛋白(融合蛋白9)静脉滴注，间隔至少30min后，再给予紫杉醇白蛋白，最后给予吉西他滨。TGF-β受体融合蛋白和化疗用药尽量保持一致。

受试者出现符合实体瘤的疗效评价标准第1.1版(RECIST1.1)定义的进展后，如果研究者评估受试者临床获益并可耐受研究治疗且患者自愿的前提下，仍可继续TGF-β受体融合蛋白和紫杉类化合物、核苷类似物治疗。

实施例2、TGF-β受体融合蛋白联合紫杉类化合物、核苷类似物在晚期/转移性胰腺癌中的疗效

目的：选择组织学或细胞学证实不可切除的局部晚期或转移性胰腺癌，并且从未接受过针对晚期或转移性疾病的全身抗肿瘤治疗的患者。

采取如下给药方式：

TGF-β受体融合蛋白9：剂量30mg/kg，每3周为1个给药周期，每周期第1天静脉滴注给药。

吉西他滨：1000mg/m

紫杉醇白蛋白：125mg/m

研究结果：

在前6名患者中未观察到剂量限制性毒性。TGF-β受体融合蛋白9的RP2D为30mg/kg。

截至分析时的数据截止日期，共有56名患者入组，中位随访期为4.2个月(范围：0.2-10.6个月)，其中28名患者仍在接受治疗。在至少接受过一次基线后影像学评估的52名患者中，19名患者(36.5％，95％CI 23.6-51.0；13名患者确认客观缓解)达到客观缓解(ORR)，42名患者(80.8％，95％CI 67.5-90.4)实现稳定的疾病控制(DCR)。在接受至少一剂研究药物治疗的56名患者中，中位无进展生存期(PFS)为5.5个月(95％CI 4.7-6.9)，9个月时的总生存率(OS)为62.8％(95％CI 33.6-82.0)。

以上结果显示，TGF-β受体融合蛋白9联合吉西他滨和紫杉醇白蛋白，在未经治疗的局部晚期或转移性胰腺癌中显示出抗肿瘤活性。这种联合疗法耐受性良好，有助于克服晚期/转移性胰腺癌中至少一剂研究药物的治疗失败。