一种磷酸奥司他韦药物组合物中硬酯富马酸钠的测定方法
文献发布时间：2023-06-19 19:28:50
技术领域
本发明属于药物分析技术领域，具体涉及一种磷酸奥司他韦药物组合物中硬酯富马酸钠的测定方法。
背景技术
硬脂富马酸钠(Sodium stearyl fumarate)是以硬脂醇与马来酸酐反应，将该反应产物同分异构化继而成的盐，又为(E)～丁烯二酸十八醇酯钠盐，为白色或类白色粉末，可带扁平的球形颗粒聚结物。硬脂富马酸钠是一种亲水性润滑剂，用作药物辅料中润滑剂，它能克服与硬脂酸镁有关的许多问题，如主药受到影响、过分润滑。硬脂富马酸钠能在泡腾片中形成保护膜，可以改善崩解，促进溶出，从而提高生物利用度。
根据《中国药典》四部药用辅料中规定，硬脂富马酸钠的含量测定法为电位滴定法，但电位滴定法对仪器的精度要求很高，设备投入的成本更高，而且滴定结果的准确度也会受到标准滴定溶液浓度是否准确的影响。专利CN113267584A公开了一种医药物质的HPLC有关物质分析方法，制备所述医药物质的原料包括具有吡啶取代基的活性物质和硬脂富马酸钠，该专利技术方案存在明显不足，对于在药物组合物中测定硬脂富马酸钠含量专属性较差。
本磷酸奥司他韦药物组合物包括磷酸奥司他韦和硬脂富马酸钠，为固体制剂，口服给药后，发生崩解、释放。硬酯富马酸钠的添加保证了在工艺过程中制剂中间体粉末具有更好的流动性，但会影响药物的释放。在研发过程中，通过精确测定产品中硬脂富马酸钠的含量及药物的溶出释放能得出最合适的硬脂富马酸钠添加量。因此，有必要建立一种专属性强的磷酸奥司他韦药物组合物中硬酯富马酸钠的测定方法，为确定药物组合物中最佳硬酯富马酸钠添加量提供依据，以保证药物组合物具有最适的理化性质同时还具有最优的生物利用度与临床疗效。
发明内容
因此，本发明旨在解决现有技术中测定磷酸奥司他韦药物组合物中硬脂富马酸钠含量方法专属性较差的问题，提供一种专属性强的磷酸奥司他韦药物组合物中硬酯富马酸钠的测定方法，能精准测定磷酸奥司他韦药物组合物中的硬酯富马酸钠。
为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：
一种磷酸奥司他韦药物组合物中硬酯富马酸钠的测定方法，其特征在于，所述测定方法包括在供试品中加入甲醇以制备供试品溶液，将供试品溶液注入高效液相色谱仪中进行检测得到色谱图。
优选地，所述供试品溶液的制备包括在供试品中加入甲醇，超声处理以制备供试品溶液。
进一步优选地，所述供试品溶液的制备为：精密称取内容物适量(约相当于硬脂富马酸钠5mg)，置100mL量瓶中，加入甲醇80mL，超声20～30分钟，取出放冷，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液。
最优选地，所述供试品溶液的制备：精密称取内容物适量(约相当于硬脂富马酸钠5mg)，置100mL量瓶中，加入甲醇80mL，超声20分钟，取出放冷，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液。
优选地，所述高效液相色谱仪检测的色谱条件包括以流动相A和流动相B制备流动相，所述流动相A选自含有改性剂的水溶液，流动相B为乙腈溶液。
优选地，所述改性剂选自磷酸、磷酸盐、全氟取代的直链有机酸中的至少一种或多种。
优选地，所述改性剂选自磷酸、三氟乙酸。
更优选地，所述流动相A为0.1％磷酸溶液。
优选地，所述高效液相色谱仪检测的色谱条件包括用所述流动相以等度洗脱的方式进行洗脱。
优选地，流动相A与流动相B等度洗脱的比例为10：90～14：86。
优选地，流动相A与流动相B等度洗脱的比例为12：88。
优选地，所述测定方法还包括采用硬脂富马酸钠制备对照品溶液的步骤以及将对照品溶液注入高效液相色谱仪进行检测得到对照品图谱的步骤。
进一步优选地，对照品溶液的制备包括取硬脂富马酸钠适量，精密称定，加甲醇溶解并定量稀释制成每1mL含硬脂富马酸钠约50μg的溶液。
优选地，所述色谱条件还包括采用十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱，柱温为28℃～32℃，流速为0.8mL/min～1.2mL/min，波长为210nm。
更优选地，所述色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(XBridge C1850×4.6mm，3.5μm或性能相当的色谱柱)，柱温：30℃，检测波长：210nm，流速1.0mL/min，流动相：0.1％磷酸溶液～乙腈溶液(12：88)，进样量：5μL。
优选地，所述测定方法检测硬脂富马酸钠在浓度23.77μg/mL～72.32μg/mL浓度范围内具有良好的线性关系。
本发明提供的磷酸奥司他韦药物组合物中硬酯富马酸钠的测定方法，有效的避免了水溶性辅料对硬脂富马酸钠检测的影响，专属性强、检测准确、耐用性好，采用甲醇制备供试品溶液，硬脂富马酸钠提取完全，检测成分含量相对较高，各特征峰分离效果相对较好，峰形佳，基线平稳，提取杂质少。同时通过超声提取，供试品超声时间20～30min，优选地超声20min，操作简便，节约时间。
本发明提供的磷酸奥司他韦药物组合物中硬酯富马酸钠的测定方法进一步对色谱条件进行优化，包括流动相的优化，以及流动相pH的优化，优选地使用0.1％磷酸溶液，更优选地使用0.1％磷酸溶液：乙腈溶液以12：88的比例等度洗脱时，有较好的峰形，可进行分析定量；其他峰与主峰分离良好；而且不使用缓冲盐，能避免缓冲盐在混合时析出影响实验结果；能够全面、清楚、有效地对硬酯富马酸钠进行测定。
本发明提供的磷酸奥司他韦药物组合物中硬酯富马酸钠的测定方法能够有效改善峰形，提高色谱峰分离度，在范围内线性良好、重复性好、准确度高、分析速率快、专属性强，能够精准测定磷酸奥司他韦药物组合物中的硬酯富马酸钠含量。
附图说明
图1为实施例1的HPLC检测图谱；
图2为实施例2方法1的HPLC检测图谱；
图3为实施例2方法2的HPLC检测图谱；
图4为实施例2方法3的HPLC检测图谱；
图5为实施例3色谱条件1的HPLC检测图谱；
图6为实施例3色谱条件2的HPLC检测图谱；
图7为实施例3色谱条件3的HPLC检测图谱；
图8为实施例3色谱条件4的HPLC检测图谱；
图9为实施例3色谱条件5的HPLC检测图谱；
图10为实施例4.5线性的HPLC检测图谱。
具体实施方式
为使本公开的目的、技术方案和优点更加清楚明白，以下结合具体实施例，对本公开进一步详细说明。在进一步描述本发明具体实施方式之前，应理解，本发明的保护范围不局限于下述特定的具体实施方案；还应当理解，本发明实施例中使用的术语是为了描述特定的具体实施方案，而不是为了限制本发明的保护范围。
除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。
实施例中未注明具体实验步骤或条件者，按照本领域内的文献所描述的常规实验步骤的操作或条件即可进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规试剂产品。
仪器
试剂
试药
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实施例1药物组合物中硬酯富马酸钠的测定
供试品溶液的制备：取211101批磷酸奥司他韦胶囊20粒，精密称定重量，倾出内容物，胶囊壳用小刷或其他适宜的用具拭净，再分别精密称定囊壳的重量，求出平均装量，混合均匀，精密称取内容物适量(约相当于硬脂富马酸钠5mg)，置100mL量瓶中，加入甲醇80mL，超声20分钟，取出放冷，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液。
对照品溶液的制备：取硬脂富马酸钠适量，精密称定，加甲醇溶解并定量稀释制成每1mL含硬脂富马酸钠约50μg的溶液，即得。
色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(XBridge C1850×4.6mm，3.5μm或性能相当的色谱柱)，柱温：30℃，检测波长：210nm，流速1.0mL/min，流动相：0.1％磷酸溶液～乙腈溶液(12：88)，进样量：5μL。
测定法：按上述色谱条件进行高效液相色谱分析，结果如图1、表1所示。
表1
主峰的保留时间为7min，其他峰与主峰分离良好，硬脂富马酸钠与其他杂质的分离度为25.9，理论板数按硬脂富马酸钠峰计为7016；
实施例2
供试品溶液的制备：
方法1：取211101批磷酸奥司他韦胶囊20粒，精密称定重量，倾出内容物，胶囊壳用小刷或其他适宜的用具拭净，再分别精密称定囊壳的重量，求出平均装量，混合均匀，精密称取内容物适量(约相当于硬脂富马酸钠5mg)，置100mL量瓶中，加入甲醇80mL，超声20分钟，取出放冷，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液。
方法2：取200901批磷酸奥司他韦胶囊20粒，精密称定重量，倾出内容物，胶囊壳用小刷或其他适宜的用具拭净，再分别精密称定囊壳的重量，求出平均装量，混合均匀，精密称取内容物适量(约相当于硬脂富马酸钠5mg)，置100mL量瓶中，加入50％甲醇水溶液80mL，超声20分钟，取出放冷，加50％甲醇水溶液稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液。
方法3：取200901批磷酸奥司他韦胶囊20粒，精密称定重量，倾出内容物，胶囊壳用小刷或其他适宜的用具拭净，再分别精密称定囊壳的重量，求出平均装量，混合均匀，精密称取内容物适量(约相当于硬脂富马酸钠5mg)，置100mL量瓶中，加入乙腈80mL，超声20分钟，取出放冷，加乙腈稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液。
色谱条件与系统适用性试验：色谱参数包括以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(XBridge C1850×4.6mm，3.5μm或性能相当的色谱柱)，柱温：30℃，检测波长：210nm，流速1.0mL/min，流动相：0.1％磷酸溶液～乙腈溶液(12：88)，进样量：5μL。
测定法：将上述三种方法制备的供试品溶液按上述色谱条件进行高效液相色谱分析。检测结果如图2～4、表2所示。
表2
检测结果显示：方法1主峰的保留时间为6.851min，其他峰与主峰分离良好，硬脂富马酸钠与其他杂质的分离度为25.9，理论板数按硬脂富马酸钠峰计为6906。方法2主峰的保留时间为4.034min，其他峰与主峰分离良好，硬脂富马酸钠与其他杂质的分离度为17.0，理论板数按硬脂富马酸钠峰计为5598，但硬脂富马酸钠明显无法完全提取。方法3主峰的保留时间为4.001min，其他峰与主峰分离良好，硬脂富马酸钠与其他杂质的分离度为23.9，理论板数按硬脂富马酸钠峰计为5665，但基线波动较大。
实施例3
供试品溶液的制备：取200901批磷酸奥司他韦胶囊20粒，精密称定重量，倾出内容物，胶囊壳用小刷或其他适宜的用具拭净，再分别精密称定囊壳的重量，求出平均装量，混合均匀，精密称取内容物适量(约相当于硬脂富马酸钠5mg)，置100mL量瓶中，加入甲醇80mL，超声20分钟，取出放冷，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液。
色谱条件与系统适用性试验：
色谱条件1：色谱参数包括以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(XBridge C1850×4.6mm，3.5μm或性能相当的色谱柱)，柱温：30℃，检测波长：210nm，流速1.0mL/min，流动相：0.1％磷酸溶液～乙腈溶液(12：88)，进样量：5μL。
色谱条件2：色谱参数包括以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(XBridge C1850×4.6mm，3.5μm或性能相当的色谱柱)，柱温：30℃，检测波长：210nm，流速1.0mL/min，流动相：0.1％三氟乙酸溶液～乙腈溶液(12：88)，进样量：5μL。
色谱条件3：色谱参数包括以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(XBridge C1850×4.6mm，3.5μm或性能相当的色谱柱)，柱温：30℃，检测波长：210nm，流速1.0mL/min，流动相：10mmol磷酸二氢钾(pH＝2.0)溶液～乙腈溶液(12：88)，进样量：5μL。
色谱条件4：色谱参数包括以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(XBridge C1850×4.6mm，3.5μm或性能相当的色谱柱)，柱温：30℃，检测波长：210nm，流速1.0mL/min，流动相：5mmol磷酸二氢钾(pH＝4.5)溶液～乙腈溶液(12：88)，进样量：5μL。
色谱条件5：色谱参数包括以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(XBridge C1850×4.6mm，3.5μm或性能相当的色谱柱)，柱温：30℃，检测波长：210nm，流速1.0mL/min，流动相：5mmol磷酸二氢钾(pH＝7.5)溶液～乙腈溶液(12：88)，进样量：5μL。
测定法：将制备的供试品溶液分别按上述5种色谱条件进行高效液相色谱分析。检测结果如图5～9、表3所示。
表3
检测结果显示：
色谱条件1主峰的保留时间为6.851min，其他峰与主峰分离良好，硬脂富马酸钠与其他杂质的分离度为25.9，理论板数按硬脂富马酸钠峰计为6906。
色谱条件2：按上述色谱条件进行高效液相色谱分析，结果主峰的保留时间为4.051min，其他峰与主峰分离良好，硬脂富马酸钠与其他杂质的分离度为8.7，理论板数按硬脂富马酸钠峰计为5389。
色谱条件3：按上述色谱条件进行高效液相色谱分析，结果主峰的保留时间为3.945min，其他峰与主峰分离良好，硬脂富马酸钠与其他杂质的分离度为16.7，理论板数按硬脂富马酸钠峰计为5111。
色谱条件4：按上述色谱条件进行高效液相色谱分析，硬酯富马酸钠主峰分裂成2个峰，无法进行定量分析。
色谱条件5：按上述色谱条件进行高效液相色谱分析，硬酯富马酸钠主峰基本无保留，与溶剂峰重合，无法进行定量测定。
实施例4方法学
4.1系统适用性
对照品溶液的制备：取硬脂富马酸钠约5mg，精密称定，置100mL量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
测定法：按实施例1色谱条件，连续测定6次对照品溶液，结果如表4所示。
表4系统适用性检测结果
结论：连续6针对照品溶液所得色谱图中硬脂富马酸钠峰的保留时间RSD应不得过1.0％，峰面积的RSD应不得过2.0％，理论塔板数按硬脂富马酸钠峰计算应不低于3000，说明该方法检测磷酸奥司他韦胶囊中硬脂富马酸钠含量系统适用性良好。
4.2精密度(重复性)
重复性供试品溶液的制备：取211101批磷酸奥司他韦胶囊20粒，倾出内容物，混合均匀，精密称取内容物适量(约相当于硬脂富马酸钠5mg)，置100mL量瓶中，加入甲醇80mL，超声20分钟，取出放冷，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液。平行配制6份。
测定法：按实施例1色谱条件进行测定，连续测定6次重复性供试品溶液，结果如表5所示。
表5重复性检测结果
结论：6份重复性供试品中硬脂富马酸钠含量RSD为1.0％，不大于2.0％，说明该分析方法检测磷酸奥司他韦胶囊中硬脂富马酸钠含量的重复性良好。
4.3专属性试验：
空白溶液：甲醇。
对照品溶液的制备：取硬脂富马酸钠约5mg，精密称定，置100mL量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
供试品溶液的制备：取211101批磷酸奥司他韦胶囊20粒，精密称定重量，倾出内容物，胶囊壳用小刷或其他适宜的用具拭净，再分别精密称定囊壳的重量，求出平均装量，混合均匀，精密称取细粉适量(约相当于硬脂富马酸钠5mg)，置100mL量瓶中，加入甲醇80mL，超声20分钟，取出放冷，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液。
不含硬脂富马酸钠的空白原辅料溶液的制备：取不含硬脂富马酸钠的空白原辅料约485mg，置100mL量瓶中，加入甲醇80mL，超声20分钟，取出放冷，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液。
测定法：按实施例1色谱条件进行测定，结果如表6所示。
表6专属性检测结果
结论：空白溶液、不含硬脂富马酸钠的空白原辅料溶液均无干扰，供试品溶液中硬脂富马酸钠的保留时间与对照品溶液中硬脂富马酸钠的保留时间一致，供试品溶液中硬脂富马酸钠峰与相邻杂质峰之间的分离度为25.9，大于1.5，说明该方法检测磷酸奥司他韦胶囊中硬脂富马酸钠含量的专属性良好。
4.4准确度试验
空白溶液：甲醇
不含硬脂富马酸钠的空白原辅料溶液的制备：取不含硬脂富马酸钠的空白原辅料约485mg，置100mL量瓶中，加入甲醇80mL，超声20分钟，取出放冷，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液。
对照品溶液1的制备：取硬脂富马酸钠约5mg，精密称定，置100mL量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
对照品溶液2的制备：取硬脂富马酸钠约5mg，精密称定，置100mL量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
60％回收率溶液的制备：取硬脂富马酸钠约3mg，精密称定，另取不含硬脂富马酸钠的空白原辅料约485mg，精密称定，置同一100mL量瓶中，加入甲醇80mL，超声20分钟，取出放冷，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。平行配制3份。
100％回收率溶液的制备：取硬脂富马酸钠约5mg，精密称定，另取不含硬脂富马酸钠的空白原辅料约485mg，精密称定，置同一100mL量瓶中，加入甲醇80mL，超声20分钟，取出放冷，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。平行配制3份。
120％回收率溶液的制备：取硬脂富马酸钠约6mg，精密称定，另取不含硬脂富马酸钠的空白原辅料约485mg，精密称定，置同一10mL量瓶中，加入甲醇80mL，超声20分钟，取出放冷，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。平行配制3份。
测定法：按实施例1色谱条件进行测定，结果如表7所示。
表7准确度检测结果
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结论：往不含硬脂富马酸钠的空白辅料中加入相当于对照品溶液浓度的60％～120％浓度范围内的硬脂富马酸钠，各回收率溶液的回收率应均在98.45％～100.51％之间，均在标准规定92％～105％范围内；平均回收率为99.7％，回收率的RSD为0.8％，小于2.0％，说明该分析方法检测具有良好的准确度。
4.5线性与范围
空白溶液：甲醇
线性溶液1(相当于供试品溶液浓度50％)的制备：精密称取硬脂富马酸钠约2.5mg，置100mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。
线性溶液2(相当于供试品溶液浓度60％)的制备：精密称取硬脂富马酸钠约3.0mg，置100mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。
线性溶液3(相当于供试品溶液浓度80％)的制备：精密称取硬脂富马酸钠约4.0mg，置100mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。
线性溶液4(相当于供试品溶液浓度100％)的制备：精密称取硬脂富马酸钠约5.0mg，置100mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。
线性溶液5(相当于供试品溶液浓度120％)的制备：精密称取硬脂富马酸钠约6.0mg，置100mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。
线性溶液6(相当于供试品溶液浓度150％)的制备：精密称取硬脂富马酸钠约7.5mg，置100mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。
测定法：按实施例1色谱条件进行测定，结果如图10、表8所示。
表8线性与范围检测结果
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结论：硬脂富马酸钠在浓度23.77μg/mL～72.32μg/mL浓度范围内，以浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标作标准曲线，所得线性方程为y＝12560x～7414.6，相关系数为1.000，大于0.998；响应因子的RSD为0.7％，小于2.0％；Y轴截距占100％响应值的1.2％，小于2.0％。说明该分析方法检测硬脂富马酸钠在浓度23.77μg/mL～72.32μg/mL浓度范围内具有良好的线性关系。
4.6耐用性
空白溶液：甲醇
对照品溶液1的制备：取硬脂富马酸钠约5mg，精密称定，置100mL量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
对照品溶液2的制备：取硬脂富马酸钠约5mg，精密称定，置100mL量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
耐用性供试品溶液：取211101批磷酸奥司他韦胶囊20粒，精密称定重量，倾出内容物，胶囊壳用小刷或其他适宜的用具拭净，再分别精密称定囊壳的重量，求出平均装量，混合均匀，精密称取内容物适量(约相当于硬脂富马酸钠5mg)，置100mL量瓶中，加入甲醇80mL，超声20分钟，取出放冷，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液。平行配制2份。
测定法：按表9色谱条件进行测定，结果表10所示。
表9耐用性实验的色谱条件改变情况
表10耐用性试验结果性考察
结论：在改变柱温28℃～32℃、流速0.8mL/min～1.2mL/min、乙腈-0.1％磷酸溶液比例86：14～90：10条件下，同一色谱参数不同条件下对照品理论塔板数按硬脂富马酸钠峰计算均大于3000，供试品中硬脂富马酸钠含量的RSD均小于2.0％，说明该分析方法检测磷酸奥司他韦胶囊中硬脂富马酸钠含量的耐用性良好。
本发明以0.1％磷酸溶液和乙腈为流动相对硬脂富马酸钠进行检测，用高效液相色谱法分析其稳定性，可用于硬脂富马酸钠的含量测定，该方法操作简单，专属性强，准确度高，线性良好，在含硬脂富马酸钠的生产制作、质量控制方面具有较强的实用性。
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。