抗FLT3抗体和组合物
文献发布时间：2023-06-19 18:35:48
相关申请的交叉参考
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序列表
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发明背景
FMS样酪氨酸激酶3(FLT3)或CD135，是一种表达在早期造血祖细胞表面的III类受体酪氨酸激酶，其在免疫系统的发展中发挥重要作用。与细胞因子FLT3配体(FLT3L)结合后，FLT3二聚体化并激活控制细胞分化、增殖和存活的多条信号通路。
也发现FLT3由树突状细胞(DC)表达，树突状细胞是一类专职抗原呈递细胞。与抗原接触后，树突状细胞内化并加工抗原，并将抗原与MHC II类复合物一起呈现给T细胞，导致T细胞激活。FLT3信号传导在树突状细胞的分化和扩增中起着主要作用。FLT3或FLT3配体(FLT3L)缺陷的小鼠显示出减少的DC数量，而用FLT3L治疗的小鼠显示出增加的DC数量。这些观察表明FLT3在稳态DC发育中起着至关重要的作用。
发明概述
本公开提供了可以刺激树突状细胞活性的抗FTL3抗体。所述抗体可以用于增强有需要的患者(例如，患有癌症或免疫缺陷的患者)的免疫应答。也提供了包含一种或多种这些抗体的药物组合物，以及这些抗体和药物组合物用于治疗癌症的用途。本文所述的抗体和组合物可用于治疗患者癌症的方法中；可用于制造用于治疗患者癌症的药物；或可用于治疗患者的癌症中。与目前可用的此类癌症的治疗(包括抗体治疗)相比，预期本文所述的抗体和组合物可单独或与另一种癌症治疗剂组合提供优异的临床反应。
在一些实施方案中，本公开提供这样的抗FLT3抗体或其抗原结合部分，其与抗体17566,17526,17667,17667-0,17679,17494,17543或17497竞争或交叉竞争与人FLT3的相同表位的结合同表位的。在某些实施方案中，抗FLT3抗体或抗原结合部分由所述抗体的六个CDR、重链和轻链可变结构域，或重链和轻链的氨基酸序列来限定。
在一些实施方案中，本公开提供了抗FLT3抗体或其抗原结合部分，其中
a)所述抗体的重链包含：
i)分别包含SEQ ID NO:5-7的氨基酸序列的重链互补决定区(H-CDR)-1-3；
ii)包含与SEQ ID NO:3的氨基酸序列至少90％同一的氨基酸序列的重链可变结构域(VH)；
iii)包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列的VH；或
iv)包含SEQ ID NO:3和75的氨基酸序列的重链(HC)；和
b)所述抗体的轻链包含：
i)分别包含SEQ ID NO:8-10的氨基酸序列的轻链互补决定区(L-CDR)-1-3；
ii)包含与SEQ ID NO:4的氨基酸序列至少90％同一的氨基酸序列的轻链可变结构域(VL)；
iii)包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列的VL；或
iv)包含SEQ ID NO:4和76的氨基酸序列的轻链(LC)。
在一些实施方案中，本公开提供了抗FLT3抗体或其抗原结合部分，其中
a)所述抗体的重链包含：
i)分别包含SEQ ID NO:15-17的氨基酸序列的H-CDR-1-3；
ii)包含与SEQ ID NO:13的氨基酸序列至少90％同一的氨基酸序列的VH；
iii)包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列的VH；或
iv)包含SEQ ID NO:13和75的氨基酸序列的HC；和
b)所述抗体的轻链包含：
i)分别包含SEQ ID NO:18-20的氨基酸序列的L-CDR-1-3；
ii)包含与SEQ ID NO:14的氨基酸序列至少90％同一的氨基酸序列的VL；
iii)包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列的VL；或
iv)包含SEQ ID NO:14和76的氨基酸序列的LC。
在一些实施方案中，本公开提供了抗FLT3抗体或其抗原结合部分，其中
a)所述抗体的重链包含：
i)分别包含SEQ ID NO:25-27的氨基酸序列的H-CDR-1-3；
ii)包含与SEQ ID NO:23的氨基酸序列至少90％同一的氨基酸序列的VH；
iii)包含SEQ ID NO:23的氨基酸序列的VH；或
iv)包含SEQ ID NO:23和75的氨基酸序列的HC；和
b)所述抗体的轻链包含：
i)分别包含SEQ ID NO:28-30的氨基酸序列的L-CDR-1-3；
ii)包含与SEQ ID NO:24的氨基酸序列至少90％同一的氨基酸序列的VL；
iii)包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的VL；或
iv)包含SEQ ID NO:24和76的氨基酸序列的LC。
在一些实施方案中，本公开提供了抗FLT3抗体或其抗原结合部分，其中
a)所述抗体的重链包含：
i)分别包含SEQ ID NO:35-37的氨基酸序列的H-CDR-1-3；
ii)包含与SEQ ID NO:33的氨基酸序列至少90％同一的氨基酸序列的VH；
iii)包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列的VH；或
iv)包含SEQ ID NO:33和75的氨基酸序列的HC；和
b)所述抗体的轻链包含：
i)分别包含SEQ ID NO:38-40的氨基酸序列的L-CDR-1-3；
ii)包含与SEQ ID NO:34的氨基酸序列至少90％同一的氨基酸序列的VL；
iii)包含SEQ ID NO:34的氨基酸序列的VL；或
iv)包含SEQ ID NO:34和76的氨基酸序列的LC。
在一些实施方案中，本公开提供了抗FLT3抗体或其抗原结合部分，其中
a)所述抗体的重链包含：
i)分别包含SEQ ID NO:45-47的氨基酸序列的H-CDR-1-3；
ii)包含与SEQ ID NO:43的氨基酸序列至少90％同一的氨基酸序列的VH；
iii)包含SEQ ID NO:43的氨基酸序列的VH；或
iv)包含SEQ ID NO:43和75的氨基酸序列的HC；和
b)所述抗体的轻链包含：
i)分别包含SEQ ID NO:48-50的氨基酸序列的L-CDR-1-3；
ii)包含与SEQ ID NO:44的氨基酸序列至少90％同一的氨基酸序列的VL；
iii)包含SEQ ID NO:44的氨基酸序列的VL；或
iv)包含SEQ ID NO:44和76的氨基酸序列的LC。
在一些实施方案中，本公开提供了抗FLT3抗体或其抗原结合部分，其中
a)所述抗体的重链包含：
i)分别包含SEQ ID NO:55-57的氨基酸序列的H-CDR-1-3；
ii)包含与SEQ ID NO:53的氨基酸序列至少90％同一的氨基酸序列的VH；
iii)包含SEQ ID NO:53的氨基酸序列的VH；或
iv)包含SEQ ID NO:53和75的氨基酸序列的HC；和
b)所述抗体的轻链包含：
i)分别包含SEQ ID NO:58-60的氨基酸序列的L-CDR-1-3；
ii)包含与SEQ ID NO:54的氨基酸序列至少90％同一的氨基酸序列的VL；
iii)包含SEQ ID NO:54的氨基酸序列的VL；或
iv)包含SEQ ID NO:54和76的氨基酸序列的LC。
在一些实施方案中，本公开提供了抗FLT3抗体或其抗原结合部分，其中
a)所述抗体的重链包含：
i)分别包含SEQ ID NO:65-67的氨基酸序列的H-CDR-1-3；
ii)包含与SEQ ID NO:63的氨基酸序列至少90％同一的氨基酸序列的VH；
iii)包含SEQ ID NO:63的氨基酸序列的VH；或
iv)包含SEQ ID NO:63和75的氨基酸序列的HC；和
b)所述抗体的轻链包含：
i)分别包含SEQ ID NO:68-70的氨基酸序列的L-CDR-1-3；
ii)包含与SEQ ID NO:64的氨基酸序列至少90％同一的氨基酸序列的VL；
iii)包含SEQ ID NO:64的氨基酸序列的VL；或
iv)包含SEQ ID NO:64和76的氨基酸序列的LC。
在一些实施方案中，本公开提供了抗FLT3抗体或其抗原结合部分，其中
a)所述抗体的重链包含：
i)分别包含SEQ ID NO:25-27的氨基酸序列的H-CDR-1-3；
ii)包含与SEQ ID NO:73的氨基酸序列至少90％同一的氨基酸序列的VH；
iii)包含SEQ ID NO:73的氨基酸序列的VH；或
iv)包含SEQ ID NO:73和75的氨基酸序列的HC；和
b)所述抗体的轻链包含：
i)分别包含SEQ ID NO:28-30的氨基酸序列的L-CDR-1-3；
ii)包含与SEQ ID NO:74的氨基酸序列至少90％同一的氨基酸序列的VL；
iii)包含SEQ ID NO:74的氨基酸序列的VL；或
iv)包含SEQ ID NO:74和76的氨基酸序列的LC。
本公开还提供了分离的核酸分子、载体和宿主细胞，其包含编码本文所述的抗FLT3抗体或抗原结合部分的重链或其抗原结合部分、轻链或其抗原结合部分或两者的核苷酸序列。此外，本公开提供了通过培养所述宿主细胞来生产本文所述的抗FLT3抗体或抗原结合部分的方法，以及通过混合本文所述的抗体或抗原结合部分来生产抗体组合物的方法。
本发明的其他特征、目的和优点在下面的详述中是显而易见的。然而，应该理解的是，详述虽然指示了本发明的实施方案和方面，但仅以说明而不是限制的方式给出。通过详述，本领域技术人员将清楚本发明范围内的各种变化和修改。
附图简述
图1是显示用所述抗FLT3抗体处理后EOL-1细胞增殖的图。数据归一化为未处理的对照，每条柱代表平均值±SEM(n＝3)。
图2是一组图表，显示所述抗FLT3抗体或对照组与CHO-S细胞上表达的人FLT3(左上)、食蟹猴FLT3(左下)或小鼠FLT3(右上)的结合。模拟转染的CHO-S细胞(右下)作为阴性对照。数据以平均值±SEM表示。
图3是显示所述抗FLT3L抗体的FLT3L阻断特性的传感图。将His标记的FLT3(FLT3-his)固定在penta-his生物传感器("penta-his"公开为SEQ ID NO:79)上，在FLT3L和抗FLT3抗体(FLT3L+mAb)结合之前，将抗FLT3抗体(mAb)结合His标记的FLT3。平行地测量总FLT3L与FLT3的结合(仅FLT3L)。
图4是一组图表，显示所述抗FLT3抗体阻断FLT3L-Fc与CHO-S细胞上表达的人FLT3(左上)、食蟹猴FLT3(右上)或小鼠FLT3(下)结合的能力。数据以平均值±SEM表示。
图5是显示用所述抗体或FLT3配体处理的EOL-1细胞的增殖情况的图。"对照mAb"是针对IgG
图6A和6B是显示用所述抗体处理的EOL-1细胞(图6A)或OCI-AML5细胞(图6B)的增殖的图。数据归一化为未处理的对照，且曲线上的每个数据点代表平均值±SEM(n＝3)。
图7是显示用所述抗体或FLT3配体处理的人原代CD34
图8A-8C是一组图，显示用所述抗体或FLT3配体处理的来自两个供者的人原代CD34
图9A和9B是一组图，显示用所述抗体或FLT3L治疗后，与使用载剂相比，Balb/c小鼠的脾脏树突状细胞亚群的绝对细胞数的倍数增加。图9A，左小图：cDC；右小图：cDC1。图9B，左小图：cDC2；右小图：pDC。抗体处理是以剂量为0.1mg/kg,1mg/kg或10mg/kg施用每种抗体(n＝5只/组)。采用Kruskal-Wallis与Dunn的多重比较检验。数据以平均值±SEM表示，*p<0.05。
图10A-10D是几组图，显示在CD34人源化的NCG小鼠中，用IgG
图11是一对图，显示用IgG
图12是显示所述抗FLT3抗体的竞争模式和表位分仓的示意图。连接的黑线表示交叉阻断活性。圆圈代表在两个方向测试的抗体，而方块代表在一个方向的测试。抗体根据与其他抗FLT3抗体的竞争模式进行分组。
图13是一系列结构，显示抗体17566(小图A)和17497(小图B)的结合表位映射到FLT3配体受体复合物的结构(PDB条目：3QS9)。两个FLT3受体(浅灰色)和FLT3配体(白色)以卡通形式表示。FLT3的结构域1以表面呈现表示(深灰色)。线性表位显示为白色，接触残基显示为黑色。如图所示，以不同的方向观看这些结构。从FLT3受体的N端顶部来观看，表位之间的距离大约为
发明详述
本公开提供了新的激动性抗人FLT3抗体，其可用于刺激患者(如癌症患者)中的FLT3活性。除非另有说明，如本文所用，“FLT3”是指人FLT3。人FLT3多肽序列可依据UniProt登录号P36888(FLT3_HUMAN)(SEQ ID NO:77)获得，如下所示：
如本文所用，术语“抗体”(Ab)或“免疫球蛋白”(Ig)是指包含通过二硫键相互连接的两条重(H)链(约50-70kDa)和两条轻(L)链(约25kDa)的四聚体。每条重链由重链可变区(VH)和重链恒定区(CH)组成。每条轻链由轻链可变区(VL)和轻链恒定区(CL)组成。VH和VL结构域可以进一步细分为高变区，称为“互补决定区”(CDR)，散布有更保守的区域，称为“框架区”(FR)。每个VH和VL由三个CDR(本文中H-CDR表示来自重链的CDR；本文中的L-CDR表示来自轻链的CDR)和四个FR组成，从氨基末端到羧基末端以以下顺序排列：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。重链或轻链中氨基酸编号以及FR和CDR区的分配可以根据
术语“重组抗体”是指从包含编码抗体的核苷酸序列的细胞或细胞系表达的抗体，其中所述核苷酸序列不与细胞天然结合。
术语“分离的蛋白质”、“分离的多肽”或“分离的抗体”是指如下的蛋白质、多肽或抗体：其来源或衍生来源(1)与其天然相关状态伴随的天然相关成分不相关，(2)不含来自同一物种的其他蛋白质，(3)由来自不同物种的细胞表达，和/或(4)在自然界中不存在。因此，化学合成或在不同于其天然来源的细胞的细胞系统中合成的多肽将与其天然相关成分中“分离”。也可以使用本领域熟知的蛋白质纯化技术通过分离使蛋白质基本上不含天然相关的成分。
术语“亲和力”是指抗原和抗体之间的吸引力的量度。抗体对抗原的内在吸引力通常表示为特定抗体-抗原相互作用的结合亲和力平衡常数(KD)。K
如本文所用的，术语“表位”是指特异性结合抗体或相关分子(如双特异性结合分子)的抗原的一部分(决定簇)。表位决定簇通常由诸如氨基酸或碳水化合物或糖侧链的分子的化学活性表面组组成，并且通常具有特定的三维结构特征以及特定的电荷特征。表位可以是“线性的”或“构象的”。在线性表位中，蛋白质(如抗原)和相互作用分子(如抗体)之间的所有相互作用点沿蛋白质的一级氨基酸序列线性发生。在构象表位中，相互作用点发生在蛋白质上在一级氨基酸序列中彼此分开的氨基酸残基上。一旦确定了抗原上所需的表位，就可以使用本领域众所周知的技术产生针对表位的抗体。例如，可以产生针对线性表位的抗体，例如，通过用具有线性表位的氨基酸残基的肽免疫动物。可以产生针对构象表位的抗体，例如，通过用含有构象表位的相关氨基酸残基的微型结构域免疫动物。也可以产生针对特定表位的抗体，例如，通过用目标靶分子(例如，FLT3)或其相关部分免疫动物，然后筛选与表位的结合。
通过使用本领域已知的方法，包括但不限于竞争测定法、表位分仓(binning)和丙氨酸扫描，可以确定抗体是否与本公开的抗FLT3抗体结合相同的表位或竞争结合。在一些实施方案中，允许本公开的抗FLT3抗体在饱和条件下结合FLT3，并随后测量测试抗体结合FLT3的能力。如果测试抗体能够与参考抗FLT3抗体同时结合FLT3，则测试抗体与参考抗FLT3抗体结合不同的表位。然而，如果测试抗体不能同时结合FLT3，则测试抗体结合相同的表位、重叠的表位或与本公开的抗FLT3抗体结合的表位非常接近的表位。这个实验可以使用例如ELISA、RIA、BIACORE
术语“人抗体”是指其中可变区和恒定区序列源自人序列的抗体。该术语涵盖具有源自人基因但已被修饰的序列的抗体，例如以降低免疫原性、增加亲和力和/或增加稳定性。此外，该术语包括在非人细胞中重组产生的抗体，其可赋予人细胞不典型的糖基化。该术语还包括在具有人抗体基因的转基因非人生物体(例如，
如本文所用的，术语抗体的“抗原结合部分”(或简称为“抗体部分”)是指保留特异性结合抗原(例如，人FLT3，或其部分)能力的抗体的一个或多个部分或片段。已经表明了全长抗体的某些片段可以执行抗体的抗原结合功能。包括在术语“抗原结合部分”内的结合片段的实例包括(i)Fab片段：由VL、VH、CL和CH1结构域组成的单价片段；(ii)F(ab')2片段：包含在铰链区通过二硫键连接的两个Fab片段的二价片段；(iii)由VH和CH1结构域组成的Fd片段；(iv)由抗体单臂的VL和VH结构域组成的Fv片段，(v)VH结构域组成的dAb片段；和(vi)能够特异性结合抗原的分离的互补决定区(CDR)。此外，尽管Fv片段的两个结构域VL和VH由不同的基因编码，但它们可以使用重组方法通过合成接头连接，从而使它们能够制成单个蛋白质链，其中VL和VH结构域配对形成单价分子(称为单链Fv(scFv))。本公开内容内还包括包含VH和/或VL的抗原结合分子。在VH的情况下，分子还可以包含CH1、铰链、CH2或CH3区中的一个或多个。此类单链抗体也意欲包含在术语抗体的“抗原结合部分”内。还包括其他形式的单链抗体，如双抗体。双抗体是二价双特异性抗体，其中VH和VL结构域在单个多肽链上表达，但使用的接头太短而无法在同一链上的两个结构域之间配对，从而迫使结构域与另一条链的互补结构域配对并形成两个抗原结合位点。
抗体部分，如Fab和F(ab')
抗FLT3抗体的类别(同种型)和亚类可以通过本领域已知的任何方法来确定。一般而言，抗体的类别和亚类可以使用特定抗体类别和亚类特异性的抗体来确定。此类抗体可商购获得。类别和亚类可以通过ELISA或Western印迹以及其他技术来确定。或者，可以通过对抗体的重链和/或轻链的全部或部分恒定区进行测序，将它们的氨基酸序列与各种类别和亚类的免疫球蛋白的已知氨基酸序列进行比较来确定类别和亚类，并确定抗体的类别和亚类。
除非另有说明，否则本公开中提及的所有抗体氨基酸残基编号均为依据
抗FLT3抗体
本公开提供了针对FLT3的抗体及其抗原结合部分。在一个具体的实施方案中，本文公开的抗体是从能够产生由重排的人抗体基因编码的抗体的转基因动物(例如大鼠)产生的人抗体。在某些实施方案中，人抗体可以含有某些突变，例如，以将源自引物的突变变回种系序列(参见例如表1中的“Symplex校正的”变体序列)。
在一些实施方案中，本公开的抗FLT3抗体在Fc区具有“LALA”突变(L234A/L235A)。这些突变阻碍了抗体与人FcγR(Fcγ受体)的结合。此类抗体是有利的，因为它们具有低水平的次级效应功能，并且因此不会耗尽效应T细胞或靶向其他非恶性细胞。
在一些实施方案中，抗FLT3抗体或抗原结合部分与如下的抗体竞争或交叉竞争与人FLT3的结合，或与人FLT3的相同表位的结合，所述抗体包括：
a)包含SEQ ID NO:3和75的氨基酸序列的重链(HC)和包含SEQ ID NO:4和76的氨基酸序列的轻链(LC)；
b)包含SEQ ID NO:13和75的氨基酸序列的HC和包含SEQ ID NO:14和76的氨基酸序列的LC；
c)包含SEQ ID NO:23和75的氨基酸序列的HC和包含SEQ ID NO:24和76的氨基酸序列的LC；
d)包含SEQ ID NO:33和75的氨基酸序列的HC和包含SEQ ID NO:34和76的氨基酸序列的LC；
e)包含SEQ ID NO:43和75的氨基酸序列的HC和包含SEQ ID NO:44和76的氨基酸序列的LC；
f)包含SEQ ID NO:53和75的氨基酸序列的HC和包含SEQ ID NO:54和76的氨基酸序列的LC；
g)包含SEQ ID NO:63和75的氨基酸序列的HC和包含SEQ ID NO:64和76的氨基酸序列的LC；或
h)包含SEQ ID NO:73和75的氨基酸序列的HC和包含SEQ ID NO:74和76的氨基酸序列的LC。
在一些实施方案中，抗FLT3抗体或抗原结合部分具有SEQ ID NO:7、17、27、37、47、57或67的重链CDR3(H-CDR3)。
在一些实施方案中，抗FLT3抗体或抗原结合部分具有分别包含SEQ ID NO:5-7、15-17、25-27、35-37、45-47、55-57或65-67的氨基酸序列的重链CDR1-3(H-CDR 1-3)。
在一些实施方案中，抗FLT3抗体或抗原结合部分具有与SEQ ID NO:3、13、23、33、43、53、63或73的氨基酸序列为至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％同一的(例如，至少90％同一的)重链可变结构域(VH)氨基酸序列。
在一些实施方案中，抗FLT3抗体或抗原结合部分具有包含SEQ ID NO:3、13、23、33、43、53、63或73的氨基酸序列的VH。
在一些实施方案中，抗FLT3抗体具有与SEQ ID NO:3、13、23、33、43、53、63或73的氨基酸序列为至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％同一的(例如，至少90％同一的)VH氨基酸序列；和与SEQ ID NO:75的氨基酸序列为至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％同一的(例如，至少90％同一的)重链恒定区氨基酸序列。
在一些实施方案中，抗FLT3抗体包含SEQ ID NO:3、13、23、33、43、53、63或73的VH氨基酸序列和SEQ ID NO:75的重链恒定区氨基酸序列。
在一些实施方案中，抗FLT3抗体或抗原结合部分具有SEQ ID NO:10、20、30、40、50、60或70的轻链CDR3(L-CDR3)氨基酸序列。
在一些实施方案中，抗FLT3抗体或抗原结合部分具有分别包含SEQ ID NO:8-10、18-20、28-30、38-40、48-50、58-60或68-70的氨基酸序列的轻链CDR1-3(L-CDR 1-3)。
在一些实施方案中，抗FLT3抗体或抗原结合部分具有与SEQ ID NO:4、14、24、34、44、54、64或74的氨基酸序列为至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％同一的(例如，至少90％同一的)轻链可变结构域(VL)氨基酸序列。
在一些实施方案中，抗FLT3抗体或抗原结合部分具有包含SEQ ID NO:4、14、24、34、44、54、64或74的氨基酸序列的VL。
在一些实施方案中，抗FLT3抗体具有与SEQ ID NO:4、14、24、34、44、54、64或74的氨基酸序列为至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％同一的(例如，至少90％同一的)VL氨基酸序列；和与SEQ ID NO:76的氨基酸序列为至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％同一的(例如，至少90％同一的)轻链恒定区氨基酸序列。
在一些实施方案中，抗FLT3抗体包含SEQ ID NO:4、14、24、34、44、54、64或74的VL氨基酸序列和SEQ ID NO:76的轻链恒定区氨基酸序列。
在某些实施方案中，抗FLT3抗体包含上述任一个的重链和上述任一个的轻链。
在一些实施方案中，本公开的抗FLT3抗体或抗原结合部分包含如下的H-CDR 1-3和L-CDR 1-3氨基酸序列：
a)分别地，SEQ ID NO:5-10；
b)分别地，SEQ ID NO:15-20；
c)分别地，SEQ ID NO:25-30；
d)分别地，SEQ ID NO:35-40；
e)分别地，SEQ ID NO:45-50；
f)分别地，SEQ ID NO:55-60；或
g)分别地，SEQ ID NO:65-70。
在一些实施方案中，本公开的抗FLT3抗体或抗原结合部分包含与以下的氨基酸序列为至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％同一的(例如，至少90％同一的)VH和VL：
a)分别地，SEQ ID NO:3和4；
b)分别地，SEQ ID NO:13和14；
c)分别地，SEQ ID NO:23和24；
d)分别地，SEQ ID NO:33和34；
e)分别地，SEQ ID NO:43和44；
f)分别地，SEQ ID NO:53和54；
g)分别地，SEQ ID NO:63和64；或
h)分别地，SEQ ID NO:73和74。
在一些实施方案中，本公开的抗FLT3抗体或抗原结合部分包含VH和VL，其包含以下的氨基酸序列：
a)分别地，SEQ ID NO:3和4；
b)分别地，SEQ ID NO:13和14；
c)分别地，SEQ ID NO:23和24；
d)分别地，SEQ ID NO:33和34；
e)分别地，SEQ ID NO:43和44；
f)分别地，SEQ ID NO:53和54；
g)分别地，SEQ ID NO:63和64；或
h)分别地，SEQ ID NO:73和74。
在一些实施方案中，本公开的抗FLT3抗体包含：
a)包含SEQ ID NO:3和75的氨基酸序列的HC和包含SEQ ID NO:4和76的氨基酸序列的LC；
b)包含SEQ ID NO:13和75的氨基酸序列的HC和包含SEQ ID NO:14和76的氨基酸序列的LC；
c)包含SEQ ID NO:23和75的氨基酸序列的HC和包含SEQ ID NO:24和76的氨基酸序列的LC；
d)包含SEQ ID NO:33和75的氨基酸序列的HC和包含SEQ ID NO:34和76的氨基酸序列的LC；
e)包含SEQ ID NO:43和75的氨基酸序列的HC和包含SEQ ID NO:44和76的氨基酸序列的LC；
f)包含SEQ ID NO:53和75的氨基酸序列的HC和包含SEQ ID NO:54和76的氨基酸序列的LC；
g)包含SEQ ID NO:63和75的氨基酸序列的HC和包含SEQ ID NO:64和76的氨基酸序列的LC；或
h)包含SEQ ID NO:73和75的氨基酸序列的HC和包含SEQ ID NO:74和76的氨基酸序列的LC。
本公开还提供了与抗体17566、17526、17667、17667-0、17679、17494、17543或17497竞争或交叉竞争与相同表位的结合或结合相同表位的抗FLT3抗体或其抗原结合部分。
在一些实施方案中，本公开的抗FLT3抗体或抗原结合部分包含抗体17566、17526、17667、17667-0、17679、17494、17543或17497的H-CDR 1-3和L-CDR 1-3。
在一些实施方案中，本公开的抗FLT3抗体或抗原结合部分包含分别与抗体17566、17526、17667、17667-0、17679、17494、17543或17497的VH和VL为至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％同一的(例如，至少90％同一的)VH和VL。
在一些实施方案中，本公开的抗FLT3抗体或抗原结合部分包含分别是抗体17566、17526、17667、17667-0、17679、17494、17543或17497的VH和VL的VH和VL。
在一些实施方案中，本公开的抗FLT3抗体是抗体17566、17526、17667、17667-0、17679、17494、17543或17497，或与所述抗体具有相同氨基酸序列的抗体。
通过本文所述的方法获得的抗FLT3抗体的类别可以改变或转换为另一个类别或亚类。在本公开的一些实施方案中，使用本领域熟知的方法分离编码VL或VH的核酸分子，使得其不包括分别编码CL或CH的核酸序列。然后将编码VL或VH的核酸分子有效连接分别编码来自不同类别的免疫球蛋白分子的CL或CH的核酸序列。这可以使用包含CL或CH序列的载体或核酸分子来实现，如上所述。例如，最初为IgM的抗FLT3抗体可能被类别转换为IgG。此外，类别转换可用于将一种IgG亚类转化为另一种，例如从IgG1到IgG2。可以将κ轻链恒定区改变为例如λ轻链恒定区，反之亦然。用于产生具有所需Ig同种型的本公开的抗体的示例性方法包括以下步骤：分离编码抗FLT3抗体重链的核酸分子和编码抗FLT3抗体轻链的核酸分子，获得重链的可变区，将重链可变区的编码序列与所需同种型的重链恒定区的编码序列连接，在细胞中表达由连接的序列编码的轻链和重链，并收集具有所需同种型的抗FLT3抗体。
本公开的抗FLT3抗体可以是IgG、IgM、IgE、IgA或IgD分子，但通常是IgG同种型，例如，IgG亚类IgG
在一些实施方案中，抗FLT3抗体可以在Fc区中包含至少一个突变。各种不同的Fc突变是已知的，其中这些突变改变了抗体的效应子功能。例如，在一些实施方案中，抗FLT3抗体在Fc区包含至少一个降低效应子功能的突变，例如，在位置228、233、234和235的一个或多个突变，其中氨基酸位置根据
在一些实施方案中，例如，在抗体是IgG
在一些实施方案中，例如，在抗体是IgG
在一些实施方案中，本公开的抗FLT3抗体或抗原结合部分具有激动作用。
在一些实施方案中，抗FLT3抗体或抗原结合部分在体外(例如，在5、10、15、20、25、30、35、40、45或50μg/mL或更低的浓度下，例如在25μg/mL或更低的浓度下)刺激EOL-1细胞的增殖。
在一些实施方案中，抗FLT3抗体或抗原结合部分在体外(例如，在5、10、15、20、25、30、35、40、45或50μg/mL或更低的浓度下，例如在25μg/mL或更低的浓度下)刺激OCI-AML5细胞的增殖。
在一些实施方案中，抗FLT3抗体或抗原结合部分特异性地与(例如，在CHO-S细胞上表达的)人FLT3和食蟹猴FLT3结合。在一些实施方案中，抗FLT3抗体或抗原结合部分特异性地与(例如，在CHO-S细胞上表达的)人FLT3、食蟹猴FLT3和小鼠FLT3结合。
在一些实施方案中，抗FLT3抗体或抗原结合部分在体外不阻断FLT3L与人FLT3的结合。在某些实施方案中，抗FLT3抗体或抗原结合部分在饱和条件下不阻断FLT3L与固定化FLT3的结合。
在一些实施方案中，抗FLT3L抗体或抗原结合部分在体外(例如，在至少0.1、0.5、1、5、10、30、50或100μg/mL的浓度，例如在至少30μg/mL的浓度)不阻断FLT3L-Fc与细胞展示的人、食蟹猴和/或小鼠FLT3蛋白的结合。
在一些实施方案中，抗FLT3抗体或抗原结合部分(例如，在5、10、15、20、25、30、35、40、45或50μg/mL或更低的浓度，例如在25μg/mL或更低的浓度)刺激原代人CD34
在一些实施方案中，抗FLT3抗体或抗原结合部分(例如，在5、10、15、20、25、30、35、40、45或50μg/mL或更低的浓度，例如在25μg/mL或更低的浓度)刺激原代人CD34
在一些实施方案中，抗FLT3抗体或抗原结合部分(例如，在5、10、15、20、25、30、35、40、45或50μg/mL或更低的浓度，例如在25μg/mL或更低的浓度)增加树突状细胞亚群，例如CD14
在一些实施方案中，抗FLT3抗体或抗原结合部分在免疫功能正常的小鼠如Balb/c小鼠中诱导树突状细胞扩增和/或动员(例如，以0.1、1或10mg/kg或更少的剂量，每周两次施用)。
在一些实施方案中，抗FLT3抗体或抗原结合部分在用人CD34
在一些实施方案中，抗FLT3抗体或抗原结合部分与人FLT3结合，其K
在一些实施方案中，抗FLT3抗体或抗原结合部分与人FLT3的胞外结构域(ECD)的结构域1(D1)结合。在某些实施方案中，该抗体或部分与D1的C端残基结合(例如，相对于FLT3配体在D1的内表面)。在某些实施方案中，抗体或部分与相对于FLT3配体在D1外表面的残基结合。在特定的实施方案中，FLT3配体/受体复合物中每个D1上的两个表位之间的距离为
在一些实施方案中，抗FLT3抗体或抗原结合部分与包含人FLT3氨基酸序列的残基78-87、78-97或138-147的线性表位结合。在一些实施方案中，抗FLT3抗体或抗原结合部分与包含人FLT3氨基酸序列的残基A79，组合有残基A80和/或V81，的表位结合。在特定的实施方案中，抗FLT3抗体或抗原结合部分与包含人FLT3氨基酸序列的下列残基的表位结合：
a)A79,A80,V81,T157,R161；
b)A79,A80,V81,I89,T90,R161；
c)A79,V81；
d)A79,V81,V83,A87,I89,V125,T157；或
e)N100,L104-V106,H109-S111,E140,L142,N151,T153。
该抗体或抗原结合部分可以与例如表8中所示抗体17566,17526,17667,17667-0,17679,17494,17543或17497的表位结合。在某些实施方案中，该抗体或抗原结合部分不结合与抗体IMC-EB10相同的表位。
本公开还考虑了具有上述特性的任何组合的本文所述的抗FLT3抗体或抗原结合部分。
在一些实施方案中，本文所述的抗FLT3抗体或抗原结合部分具有以下特性中的至少一个(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或全部11个)特性：
a)在体外刺激EOL-1细胞的增殖；
b)在体外刺激OCI-AML5细胞的增殖；
c)与人FLT3结合，K
d)与食蟹猴FLT3特异性结合；
e)与小鼠FLT3特异性结合；
f)在体外不阻断FLT3配体与人FLT3的结合；
g)在体外不阻断FLT3L-Fc与细胞展示的人、食蟹猴或小鼠FLT3蛋白的结合；
h)刺激原代人CD34
i)刺激原代人CD34
j)在Balb/c小鼠体内诱导树突状细胞的动员；和
k)在用人CD34
例如，在某些实施方案中，本文所述的抗FLT3抗体或抗原结合部分可以具有a)和c)-h)；a)、c)、d)和f)-i)；a)、c)、d)和f)-h)；a)、c)和f)-h)；a)-c)、h)、i)和k)；a)-c)、h)和i)；或a)-c)和j)的特性。
在一些实施方案中，本文所述的抗FLT3抗体或抗原结合部分可以提高患者的树突状细胞增殖和/或激活。在一些实施方案中，本文所述的抗FLT3抗体或抗原结合部分可增强树突状细胞摄取肿瘤抗原的能力。
在一些实施方案中，本文所述的抗FLT3抗体或抗原结合部分可以在体内抑制肿瘤生长和/或诱导肿瘤生长消退。在一些实施方案中，本文所述的抗FLT3抗体或抗原结合部分可以减缓或逆转癌症患者中的转移。在一些实施方案中，本文所述的抗FLT3抗体或抗原结合部分可以延长癌症患者的存活。还考虑了以上特性的任意组合。
在某些实施方案中，本公开的抗体或其抗原结合部分可以是较大的免疫粘附素分子的一部分，所述免疫粘附素分子通过抗体或抗体部分与一个或多个其他蛋白质或肽通过共价或非共价连接形成。这样的免疫粘附素分子的实例包括使用链霉亲和素核心区来制备四聚scFc分子(Kipriyanov等，Human Antibodies and Hybridomas(1995)6:93-101)和使用半胱氨酸残基、标记肽和C-末端聚组氨酸标签来制备二价和生物素化的scFv分子(Kipriyanov等，Mol.Immunol.(1994)31:1047-1058)。其他实例包括其中一个或多个来自抗体的CDR共价或非共价地结合到分子中使其成为特异性地结合目的抗原的免疫粘附素。在这样的实施方案中，CDR可以作为较大多肽链的一部分掺入、可以共价连接另一条多肽链，或可以非共价结合。
在另一实施方案中，可以制得包含连接另一个多肽的本公开的抗FLT3抗体的全部或一部分的融合抗体或免疫粘附素。在某些实施方案中，只有抗FLT3抗体的可变结构域连接多肽。在某些实施方案中，抗FLT3抗体的VH结构域连接第一个多肽，而抗FLT3抗体的VL结构域连接第二个多肽，第二个多肽以使得VH和VL结构域可以彼此相互作用形成抗原结合位点的方式与第一多肽结合。在一些实施方案中，通过接头将VH结构域与VL结构域分开，使得VH和VL结构域可以彼此相互作用(例如，单链抗体)。然后VH-接头-VL抗体可以连接目的多肽。此外，可以形成融合抗体，其中两个(或更多个)单链抗体彼此连接。如果想要在单条多肽链上形成二价或多价抗体，或如果想要形成双特异性抗体，这是有用的。
为了形成单链抗体(scFv)，将编码VH和VL的DNA片段有效连接另一个编码柔性接头的片段，例如，编码氨基酸序列(Gly
在其他实施方案中，可以使用编码抗FLT3抗体的核酸分子制备其他修饰抗体。例如，可以按照说明书的教导使用标准分子生物技术制备“κ体”(Ill等，Protein Eng.10:949-57(1997))，“迷你体”(Martin等，EMBO J.(1994)13:5303-9)，“二体”(Holliger等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA(1993)90:6444-6448)，或“Janusins”(Traunecker等，EMBO J.(1991)10:3655-3659和Traunecker等，Int.J.Cancer(Suppl.)(1992)7:51-52)。
本公开的抗FLT3抗体或抗原结合部分可以衍生化或连接至另一分子(例如，另一个肽或蛋白质)。通常，将抗体或其部分衍生化，使得FLT3结合不受衍生化或标记的不利影响。因此，本公开的抗体和抗体部分旨在包括完整和修饰形式的本文所述的人抗FLT3抗体。例如，本公开的抗体或抗体部分可以功能性地连接(通过化学偶联、遗传融合、非共价结合等)一个或多个其他分子实体，如另一个抗体(例如，双特异性抗体或二体)、检测剂、药剂和/或可以介导抗体或抗体部分与另一个分子(如链霉亲和素核心区或多组氨酸标签)结合的蛋白质或肽。
通过交联两个或更多个抗体(相同类型或不同类型的，以形成双特异性抗体)产生一种类型的衍生化抗体。合适的交联剂包括是杂双功能的、具有由合适的间隔物(例如，m-马来酰亚胺苯甲酰基-N-羟基琥珀酰亚胺酯)分开的两个不同的反应基团或是同双功能(例如，双琥珀酰亚胺辛二酸)的那些。这样的接头例如可从Pierce Chemical Company，Rockford，IL获得。
还可以用化学基团，如聚乙二醇(PEG)、甲基或乙基基团，或碳水化合物基团，来衍生化抗FLT3抗体或抗原结合部分。这些基团可用于提高抗体的生物特征，例如，以提高血清半衰期。
根据本公开的抗体或抗原结合部分也可以标记。如本文使用的，术语“标记”或“标记的”是指在抗体中掺入另一个分子。在一些实施方案中，标记是可检测标记，例如，掺入放射性标记的氨基酸或连接可以通过标记的抗生物素蛋白检测的生物部分的多肽(例如，含有可以通过光学或比色方法检测的荧光标志物或酶活性的链霉亲和素)。在一些实施方案中，标记或标志物可以是治疗性的，例如，药物缀合物或毒素。各种标记多肽和糖蛋白的方法是本领域已知的并可使用。用于多肽的标记的实例包括但不限于以下的：放射性同位素或放射性核素(例如，3H、14C、15N、35S、90Y、99Tc、111In、125I、131I)、荧光标记(例如，FITC、罗丹明、镧系磷光体)、酶标记(例如，辣根过氧化物酶、β半乳糖苷酶、荧光素酶、碱性磷酸酶)、化学发光标志物、生物素基团、被二级报告基因识别的预定多肽表位(例如亮氨酸拉链对序列、二抗的结合位点、金属结合结构域、表位标签)、磁性试剂(如钆螯合物)、毒素(如百日咳毒素)、紫杉醇、细胞松弛素B、短杆菌肽D、溴化乙锭、依米汀、丝裂霉素、依托泊苷、替诺泊苷、长春新碱、长春碱、秋水仙碱、多柔比星、柔红霉素、二羟基蒽二酮、米托蒽醌、光神霉素、放线菌素D、1-脱氢睾酮、糖皮质激素、普鲁卡因、丁卡因、利多卡因、普萘洛尔和嘌呤霉素及其类似物或同系物。在一些实施方案中，标记通过各种长度的间隔臂连接以减少潜在的空间位阻。
在一些实施方案中，根据本公开的抗体或抗原结合部分可以与细胞毒性剂缀合以形成免疫缀合物。在一些实施方案中，根据本公开的抗体或抗原结合部分可以与放射性同位素缀合。
在某些实施方案中，本公开的抗体可以以天然形式(包括两性离子形式)呈现或作为正电荷或负电荷物质呈现。在一些实施方案中，抗体可以与反离子复合以形成可药用的盐。
抗FLT3抗体组合物
本公开还提供了包含本文所述的一个、两个、三个、四个或更多抗FLT3抗体或其抗原结合部分的联合疗法(例如，组合物)。在某些实施方案中，联合疗法(例如，组合物)包含两种抗FLT3抗体或抗原结合部分。联合疗法可以采用例如使用所述抗体或抗原结合部分或包含所述抗体或抗原结合部分的药物组合物的治疗方法的形式。
在一些实施方案中，本公开提供了包含第一抗FLT3抗体或其抗原结合部分和第二抗FLT3抗体或其抗原结合部分的组合物，其中第一和第二抗体是：
-分别地，抗体17566和17526；
-分别地，抗体17566和17667(或17667-0)；
-分别地，抗体17566和17679；
-分别地，抗体17566和17494；
-分别地，抗体17566和17543；
-分别地，抗体17566和17497；
-分别地，抗体17526和17667(或17667-0)；
-分别地，抗体17526和17679；
-分别地，抗体17526和17494；
-分别地，抗体17526和17543；
-分别地，抗体17526和17497；
-分别地，抗体17667(或17667-0)和17679；
-分别地，抗体17667(或17667-0)和17494；
-分别地，抗体17667(或17667-0)和17543；
-分别地，抗体17667(或17667-0)和17497；
-分别地，抗体17679和17494；
-分别地，抗体17679和17543；
-分别地，抗体17679和17497；
-分别地，抗体17494和17543；
-分别地，抗体17494和17497；
-分别地，抗体17543和17497；或
-分别地，抗体17667和17667-0。
在一些实施方案中，组合物包含与所述第一和第二抗体结合相同表位或与所述第一和第二抗体竞争结合的抗体或其抗原结合部分。
在一些实施方案中，组合物包含含有所述第一抗体的H-CDR 1-3和L-CDR 1-3的抗体或其抗原结合部分，和包含所述第二抗体的H-CDR 1-3和L-CDR 1-3氨基酸序列的抗体或其抗原结合部分。
在一些实施方案中，组合物包含含有具有分别与所述第一抗体的VH和VL氨基酸序列为至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％同一的(例如，至少90％同一的)氨基酸序列的VH和VL的抗体或其抗原结合部分，和含有具有分别与所述第二抗体的VH和VL氨基酸序列为至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％同一的(例如，至少90％同一的)氨基酸序列的VH和VL的抗体或其抗原结合部分。
在一些实施方案中，组合物包含含有所述第一抗体的VH和VL氨基酸序列的抗体或其抗原结合部分和包含所述第二抗体的VH和VL氨基酸序列的抗体或其抗原结合部分。
在一些实施方案中，组合物包含含有所述第一抗体的HC和LC氨基酸序列的抗体或其抗原结合部分和含有所述第二抗体的HC和LC氨基酸序列的抗体或其抗原结合部分。
在某些实施方案中，所述组合物可以包含选自以下的一个、两个或更多抗体或其抗原结合部分：
a)包含分别含有SEQ ID NO:5-7、15-17、25-27、35-37、45-47、55-57或65-67的氨基酸序列的H-CDR 1-3的抗体；
b)其VH序列与SEQ ID NO:3、13、23、33、43、53、63或73的氨基酸序列至少90％同一的抗体；
c)其VH包含SEQ ID NO:3、13、23、33、43、53、63或73的序列的抗体；
d)其HC包含SEQ ID NO:3和75、13和75、23和75、33和75、43和75、53和75、63和75或73和75的氨基酸序列的抗体；
e)包含分别含有SEQ ID NO:8-10、18-20、28-30、38-40、48-50、58-60或68-70的氨基酸序列的L-CDR 1-3的抗体；
f)其VL序列与SEQ ID NO:4、14、24、34、44、54、64或74的氨基酸序列至少90％同一的抗体；
g)其VL包含SEQ ID NO:4、14、24、34、44、54、64或74的序列的抗体；
h)其LC包含SEQ ID NO:4和76、14和76、24和76、34和76、44和76，54和76、64和76、或74和76的氨基酸序列的抗体；
i)其H-CDR 1-3和L-CDR 1-3分别包含SEQ ID NO:5-10、15-20、25-30、35-40、45-50、55-60或65-70的抗体；
j)包含分别包含与SEQ ID NO:3和4、13和14、23和24、33和34、43和44、53和54、63和64、或73和74的氨基酸序列至少90％同一的VH和VL的抗体；
k)包含分别包含SEQ ID NO:3和4、13和14、23和24、33和34、43和44、53和54、63和64、或73和74的氨基酸序列的VH和VL的抗体；
l)包含分别包含与3和75，以及4和76；13和75，以及14和76；23和75，以及24和76；33和75，以及34和76；43和75，以及44和76；53和75，以及54和76；63和75，以及64和76；或73和75，以及74和76的氨基酸序列的HC和LC的抗体。
在一些实施方案中，本文所述的抗FLT3抗体组合物可以在体内抑制肿瘤生长和/或诱导肿瘤生长消退。在一些实施方案中，本文所述的抗FLT3抗体组合物可延缓或逆转癌症患者的转移。在一些实施方案中，本文所述的抗FLT3抗体组合物可延长癌症患者的生存期。
本公开还提供了用于生产本文所述的抗FLT3抗体组合物的方法，包括提供第一抗FLT3抗体或抗原结合部分和第二抗FLT3抗体或抗原结合部分，并将两个抗体或部分混合。
双特异性结合分子
本公开还提供了具有本文所述的抗FLT3抗体的结合特异性(例如，包含抗原结合部分，如六个CDR或VH和VL)的双特异性结合部分。在一些实施方案中，双特异性结合部分另外具有另一个不同的抗FLT3抗体(例如，本文所述的另一个抗FLT3抗体)或靶向不同蛋白质(如，癌症抗原或其活性介导病况(如癌症)的另一个细胞表面分子)的抗体的结合特异性。这样的双特异性结合分子是本领域已知的，并且本文别处给出了不同类型的双特异性结合分子的实例。
核酸分子和载体
本公开还提供了编码本文所述的抗FLT3抗体或其抗原结合部分的核酸分子和序列。在一些实施方案中，不同的核酸分子编码抗FLT3抗体或抗原结合部分的重链和轻链氨基酸序列。在某些实施方案中，相同的核酸分子编码抗FLT3抗体或抗原结合部分的重链和轻链氨基酸序列。
提及核苷酸序列包括其补体，除非另外指出。因此，提及具有特定序列的核酸应当理解为包括其互补链，及其互补序列。如本文提及的术语“多核苷酸”表示至少10个碱基长度的核苷酸的聚合形式，核糖核苷酸或脱氧核糖核苷酸或修饰形式的任一种核苷酸。术语包括单链和双链形式。
在一些实施方案中，本公开提供了包含编码本文所述的抗FLT3抗体或其抗原结合部分的重链或其抗原结合部分的核苷酸序列，或编码本文所述的抗FLT3抗体或其抗原结合部分的轻链或其抗原结合部分的核苷酸序列，或两者的核酸分子。
本公开还提供了与本文所述的一个或多个核苷酸序列为至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％同一的(例如，至少90％同一的)核苷酸序列，本文所述的一个或多个核苷酸序列例如选自SEQ ID NO:1、2、11、12、21、22、31、32、41、42、51、52、61、62、71和72，或编码选自SEQ ID NO:3、4、13、14、23、24、33、34、43、44、53、54、63、64、73和74的氨基酸序列的核苷酸序列。在核苷酸序列内容中的术语“序列同一性百分比”是指针对最大一致性比对时两个序列中相同的残基。序列同一性比较的长度可以是在至少约九个核苷酸的片段上，通常至少约18个核苷酸，更常见为至少24个核苷酸，通常至少约28个核苷酸，更常见为至少约32个核苷酸，且优选至少约36、48或更多个核苷酸。存在各种本领域已知的不同算法，其可以用于测量核苷酸序列同一性。例如，可以使用FASTA、Gap或Bestfit比较多核苷酸序列，其是Wisconsin Package Version 10.0，Genetics Computer Group(GCG)，Madison，Wisconsin中的程序，FASTA，其包括例如程序FASTA2和FASTA3，其提供询问序列和搜索序列之间最佳重叠区域的比对和序列同一性百分比(参见，例如，Pearson,MethodsEnzymol.183:63-98(1990)；Pearson,Methods Mol.Biol.132:185-219(2000)；Pearson,Methods Enzymol.266:227-258(1996)；和Pearson,J.Mol.Biol.276:71-84(1998)；按引用并入)。除非另外指出，否则使用用于特定程序或算法的默认参数。例如，可以使用其默认参数的FASTA(6的字长和用于评分矩阵的NOPAM因子)或使用如GCG版本6.1中提供的其默认参数的Gap(按引用并入)来确定两个核酸序列之间的序列同一性百分比。
在一些实施方案中，本公开提供了包含选自SEQ ID NO:1、2、11、12、21、22、31、32、41、42、51、52、61、62、71和72的核苷酸序列的核酸分子。在某些实施方案中，核酸分子包含SEQ ID NO:1和2、11和12、21和22、31和32、41和42、51和52、61和62、或71和72的核苷酸序列。
在以上任一个实施方案中，核酸分子可以是分离的。在本文中成为“分离的”或“纯化的”核酸分子是(1)已经与其初始来源的基因组DNA或细胞RNA的核酸分离的核酸；和/或(2)不是在自然界中产生的核酸。
在再一个实施方案中，本公开了提供了适用于表达本文所述的抗体或其抗原结合部分的一条或两条链的载体。如本文使用的术语“载体”表示能够将已经与其连接的另一个核酸转运的核酸分子。在一些实施方案中，载体是质粒，即，其中可以连接另外的DNA区段的环状双链DNA部分。此外，某些载体能够指引与其有效连接的基因的表达。这样的载体在本文中成为“重组表达载体”(或简单地，“表达载体”)。
本公开提供了包含编码如本文所述的抗FLT3抗体或其抗原结合部分的重链、轻链或重链和轻链两者的核酸分子的载体。在某些实施方案中，本公开的载体包含本文所述的核酸分子。本公开进一步提供了包含编码融合蛋白、修饰的抗体、抗体片段及其探针的核酸分子的载体。载体可以进一步包含表达控制序列。
如本文使用的术语“表达控制序列”是指实现与其连接的编码序列的表达和加工需要的多核苷酸序列。表达控制序列包括合适的转录启动、终止、启动子和增强子序列；有效的RNA加工信号，如剪接和多腺苷酸化信号；稳定胞质mRNA的序列；增强翻译效率的序列(即，Kozak共有序列)；增强蛋白质稳定性的序列；以及需要时，增强蛋白质分泌的序列。此类控制序列的性质根据宿主生物体而不同；在原核生物中，此类控制序列通常包括启动子、核糖体结合位点和转录终止序列；在真核生物中，此类控制序列通常包括启动子和转录终止序列。术语“控制序列”旨在至少包括其存在对于表达和加工是必需的所有组分，并且还可以包括其存在是有利的其他组分，例如，前导序列和融合伴侣序列。
在一些实施方案中，本文所述的核酸分子包含在框内连接编码来自任何来源的重链恒定区的核苷酸序列的编码来自本文所述的抗FLT3抗体或抗原结合部分的VH结构域的核苷酸序列。相似地，本文所述的核酸分子可以包含在框内连接编码来自任何来源的轻链恒定区的核苷酸序列的编码来自本文所述的抗FLT3抗体或抗原结合部分的VL结构域的核苷酸序列。
在本公开的再一个实施方案中，编码VH和/或VL的核酸分子可以“转化”成全长抗体基因。在一些实施方案中，编码VH或VL结构域的核酸分子通过插入已经分别编码重链恒定区(CH)或轻链恒定区(CL)的表达载体中来转化成全长抗体基因，使得VH区段有效连接载体内的CH区段，和/或VL区段有效连接载体内的CL区段。在另一个实施方案中，可以使用标准分子生物学技术，通过将编码VH和/或VL结构域的核酸分子连接(例如，接合)编码CH和/或CL区的核酸分子，将编码VH和/或VL结构域的核酸分子转换成全长抗体基因。随后可以从其中已经引入了核酸分子的细胞表达编码全长重链和/或轻链的核酸分子，并分离抗FLT3抗体。
在一些实施方案中，将框架区突变，使得所得的框架区具有相应种系基因的氨基酸序列。可以在框架区或恒定区中形成突变，例如，以增加抗FLT3抗体的半衰期。参见，例如，PCT公开WO 00/09560。也可以在框架区或恒定区中形成突变，以改变抗体的免疫原型，和/或提供用于共价或非共价结合另一个分子的位点。根据本公开，抗体可以在可变结构域的任何一个或多个CDR或框架区中或在恒定区中具有突变。
宿主细胞以及抗体和抗体组合物生产方法
本公开还提供了用于生产本文所述的抗体组合物以及抗体及其抗原结合部分的方法。在一些实施方案中，本公开设计用于生产本文所述的抗FLT3抗体或抗原结合部分的方法，包括提供包含编码本文所述的抗FLT3抗体或抗原结合部分的重链或其抗原结合部分的核苷酸序列和编码本文所述的抗FLT3抗体或抗原结合部分的轻链或其抗原结合部分的核苷酸序列的宿主细胞(例如，重组宿主细胞)；在适于抗体或抗原结合部分表达的条件下培养所述宿主细胞；和分离所得抗体或抗原结合部分。在此类重组宿主细胞中通过这样的表达产生的抗体或抗原结合部分在本文中称为“重组”抗体或结合部分。本公开还提供了此类宿主细胞的子代细胞，以及由其产生的抗体或抗原结合部分。
如本文使用的术语“重组宿主细胞”(或简单的“宿主细胞”)是指其中已经引入了重组表达载体的细胞。通过定义，重组宿主细胞不在自然界中出现。本公开提供了可以包含例如本文所述的载体的宿主细胞。本公开还提供了包含例如编码本文所述的抗FLT3抗体或其抗原结合部分的重链或其抗原结合部分的核苷酸、编码本文所述的抗FLT3抗体或其抗原结合部分的轻链或其抗原结合部分的核苷酸，或两者的宿主细胞。应当理解“重组宿主细胞”和“宿主细胞”不仅表示特定的所述细胞，而且还包含该细胞的子代。因为由于突变或环境影响，某些修饰可以发生在下一代中，这样的子代实际上可能与亲本细胞不同，但仍然包括在如本文使用的术语“宿主细胞”的范围内。
编码抗FLT3抗体及其抗原结合部分的核酸分子和包含这些核酸分子的载体可以用于转染合适的哺乳动物、植物、细菌或酵母宿主细胞。转染可以通过任何已知的用于将多核苷酸引入宿主细胞中的方法。用于将异源多核苷酸引入哺乳动物细胞的方法是本领域公知的并且包括葡聚糖介导的转染、磷酸钙沉淀、聚凝胺(polybrene)介导的转染、原生质体融合、电穿孔、脂质体中多核苷酸的包封以及将DNA直接微注射至核中。此外，可以通过病毒载体将核酸分子引入哺乳动物细胞中。
可能通过不同的细胞系或在转基因动物中表达的抗体将彼此具有不同的糖基化模式。然而，通过本文提供的核酸分子编码的或包含本文提供的核酸分子的所有抗体是本公开的一部分，与抗体的糖基化状态无关，并且更一般地，与存在或不存在翻译后修饰无关。
药物组合物
本发明的另一个实施方案是包含本公开的抗FLT3抗体或其抗原结合部分、抗体组合物或双特异性结合分子作为活性成分(或作为唯一的活性成分)的药物组合物。药物组合物可以另外包含可药用的赋形剂。在一些实施方案中，药物组合物旨在用于改善、预防和/或治疗癌症，例如本文所述的癌症。在某些实施方案中，癌症存在于组织中，如皮肤、肺、肠、结肠、卵巢、脑、前列腺、肾、软组织、造血系统、头颈、肝、骨、膀胱、乳房、胃、子宫、子宫颈和胰腺。
本公开的药物组合物将包含本公开的一个或多个抗FLT3抗体、抗原结合部分、抗体组合物，或双特异性结合分子，例如，一个或两个抗FLT3抗体、抗原结合部分，或双特异性结合分子。在一些实施方案中，所述组合物包含本公开的单一抗FLT3抗体或其抗原结合部分。在另一个实施方案中，组合物包含本公开的两个不同的抗FLT3抗体或其抗原结合部分。
在一些实施方案中，药物组合物可以包含本公开的至少一个抗FLT3抗体或其抗原结合部分，例如，一个抗FLT3抗体或部分，以及一个或多个靶向一种或多种相关细胞表面受体(例如，一种或多种癌症相关受体)的其他抗体。
在一些实施方案中，药物组合物可以包含至少一种本公开的抗FLT3抗体或其抗原结合部分，例如，包含一种抗FLT3抗体或部分，以及一种或多种选自例如免疫刺激剂、疫苗、化学治疗剂、抗肿瘤剂、抗血管生成剂和酪氨酸激酶抑制剂的额外药剂。
通常，本公开的抗体、抗原结合部分和双特异性结合分子适宜作为结合一种或多种可药用的赋形剂的制剂来施用，如以下所述的。
术语“赋形剂”在本文中用于描述除本公开的一种或多种化合物之外的任何成分。赋形剂的选择在很大程度上取决于诸如特定的给药方式、赋形剂对溶解度和稳定性的影响以及剂型的性质等因素。如本文所用的，“可药用的赋形剂”包括生理相容的任何和所有溶剂、分散介质、包衣、抗菌剂和抗真菌剂、等渗剂和吸收延迟剂等。可药用的赋形剂的一些实例是水、盐水、磷酸盐缓冲盐水、葡萄糖、甘油、乙醇等，及其组合。在许多情况下，优选在组合物中包括等渗剂，例如糖、多元醇(如甘露糖醇、山梨糖醇)或氯化钠。可药用的物质的其他实例是润湿剂或少量辅助物质，如润湿剂或乳化剂、防腐剂或缓冲剂，它们可提高抗体的保质期或有效性。
本公开的药物组合物及其制备方法对于本领域技术人员将是显而易见的。此类组合物及其制备方法可参见例如Remington’s Pharmaceutical Sciences，第19版(MackPublishing Company，1995)。药物组合物优选在GMP(良好生产规范)条件下生产。
本公开的药物组合物可以作为单一单位剂量或作为多个单一单位剂量批量制备、包装或出售。如本文所用的，“单位剂量”是包含预定量的活性成分的药物组合物的离散量。活性成分的量通常等于将施用于受试者的活性成分的剂量或该剂量的方便部分，例如该剂量的二分之一或三分之一。
适用于肠胃外给药的药物组合物的制剂通常包含与可药用的载剂(如无菌水或无菌等渗盐水)组合的活性成分。此类制剂可以以适合于推注给药或连续给药的形式制备、包装或销售。可注射制剂可以以单位剂型制备、包装或出售，例如在安瓿中或在含有防腐剂的多剂量容器中。用于肠胃外给药的制剂包括但不限于悬浮液、溶液、油性或水性载剂中的乳剂、糊剂等。此类制剂还可包含一种或多种其他成分，包括但不限于悬浮剂、稳定剂或分散剂。在用于肠胃外给药的制剂的一些实施方案中，活性成分以干燥(即，粉末或颗粒)形式提供，用于重构的组合物在肠胃外给药前用合适的载剂(例如，无菌无热原水)重构。肠胃外制剂还包括水溶液，其可以含有赋形剂，如盐、碳水化合物和缓冲剂(优选pH为3至9)，但对于某些应用，它们可能更适合配制成无菌的非水溶液或作为干燥形式与合适的载剂(如无菌、无热原水)结合使用。示例性的肠胃外给药形式包括无菌水溶液中的溶液或悬浮液，例如丙二醇水溶液或葡萄糖溶液。如果需要，可以适当地缓冲这种剂型。其他可用的肠胃外给药制剂包括包含微晶形式或脂质体制剂中的活性成分的那些。
本公开的抗体和组合物的治疗用途
在一些实施方案中，本公开的抗FLT3抗体及其抗原结合部分、抗FLT3抗体组合物和双特异性结合分子用于例如通过刺激FLT3活性增强或激活有需要的患者(例如，哺乳动物，如人类)的免疫系统。在某些实施方案中，患者是免疫抑制的。在某些实施方案中，医生可以通过施用本文所述的抗FLT3抗体或其抗原结合部分、组合物或双特异性结合分子，提高患者自身免疫系统的抗癌活性。例如，医生可以通过单独或与其他治疗剂(顺序地或同时地)联合施用本公开的抗FLT3抗体或其抗原结合部分、抗体组合物或双特异性结合分子，来提高患者的抗肿瘤活性。
在某些实施方案中，本公开的抗体或其抗原结合部分、组合物和双特异性结合分子用于治疗癌症，例如，FLT3阳性癌症。癌症可以存在于一种或多种组织中，如皮肤、肺、肠、结肠、卵巢、脑、前列腺、肾、软组织、造血系统、头颈、肝、骨、膀胱、乳房、胃、子宫、宫颈和胰腺。在一些实施方案中，本公开的抗体或其抗原结合部分、组合物或双特异性结合分子用于治疗低的免疫细胞浸润(如树突状细胞浸润)的肿瘤。
在一些实施方案中，通过本公开的抗FLT3抗体、抗原结合部分、组合物和双特异性结合分子治疗的癌症可以包括例如黑素瘤(例如，皮肤、粘膜或眼部黑素瘤、晚期或转移性黑素瘤)、皮肤基底细胞癌、胶质母细胞瘤、神经胶质瘤、胶质肉瘤、星形细胞瘤、脑膜瘤、神经母细胞瘤、肾上腺皮质癌、头颈部鳞状细胞癌、口腔癌、唾液腺癌、鼻咽癌、乳腺癌、肺癌(例如，非小细胞肺癌(NSCLC)，小细胞肺癌、鳞状细胞肺癌)、食管癌、胃食管结合部癌、胃癌、胃肠癌、原发性腹膜癌、肝癌、肝细胞癌、胆道癌、结肠癌、直肠癌、结直肠癌、卵巢癌、输卵管癌、膀胱癌、上尿路癌、尿路上皮癌、肾细胞癌、肾癌、泌尿生殖系统癌、宫颈癌、前列腺癌、纤维肉瘤、脂肪肉瘤、横纹肌肉瘤、骨肉瘤、组织细胞瘤、胰腺癌、子宫内膜癌、阑尾癌、晚期默克尔细胞癌、多发性骨髓瘤、肉瘤、绒毛膜癌、红白血病、急性淋巴细胞白血病、急性单核细胞白血病、急性早幼粒细胞白血病、急性粒细胞白血病、慢性粒细胞白血病、慢性淋巴细胞白血病、急性淋巴细胞白血病、肥大细胞白血病、小淋巴细胞淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、单核细胞淋巴瘤、HTLV相关的T细胞白血病/淋巴瘤、间皮瘤和实体瘤。例如，癌症可能处于早期、中期、晚期、局部晚期或转移阶段，并且可能会复发或其他疗法(例如，其他抗FLT3疗法，或检查点抑制剂)难治的，或者可能没有可用的标准疗法。
在一些实施方案中，通过本公开的抗FLT3抗体、抗原结合部分、组合物和双特异性结合分子治疗的疾病可以包括例如黑素瘤(例如，皮肤、粘膜或眼部黑素瘤)、胶质瘤、多形性胶质细胞瘤、头颈部鳞状细胞癌、乳腺癌、非小细胞肺癌、结直肠癌、肾细胞癌、肾癌、淋巴瘤(例如，B细胞淋巴瘤或非霍奇金淋巴瘤)、白血病(如，急性髓性白血病)、多发性骨髓瘤、浆细胞肿瘤、以及骨髓增生异常疾病和/或骨髓增生性疾病。
在一些实施方案中，本公开的抗体或其抗原结合部分、组合物、或双特异性结合分子用于治疗免疫性疾病。
在一些实施方案中，所述抗体或抗原结合部分、组合物或双特异性结合分子可用于治疗为或有风险成为免疫受损的患者(例如，由于化疗或放疗)。在一些实施方案中，所述抗体或抗原结合部分、组合物或双特异性结合分子可用于在干细胞移植后扩增患者的干细胞。
在一些实施方案中，所述抗体或抗原结合部分、组合物或双特异性结合分子用于治疗病毒和/或寄生虫感染，例如，当病原体抑制宿主免疫反应时。所述病原体可以是，例如。HIV、肝炎(甲型、乙型或丙型肝炎)、人乳头瘤病毒(HPV)、淋巴细胞性绒毛膜炎病毒(LCMV)、腺病毒、黄病毒、埃可病毒、鼻病毒、柯萨奇病毒、冠状病毒、呼吸道合胞病毒、腮腺炎病毒、轮状病毒、麻疹病毒、风疹病毒、副病毒、痘苗病毒、人T细胞亲淋巴病毒(HTLV)、人巨细胞病毒(HCMV)、登革热病毒、软疣病毒、脊髓灰质炎病毒、狂犬病病毒、约翰-坎宁安(JC)病毒、虫媒脑炎病毒、猿猴免疫缺陷病毒(SIV)、流感、疱疹、贾第虫、疟疾、利什曼病、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)或铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)。
“治疗(treat)”、“治疗(treating)”和“治疗(treatment)”是指减轻或消除生物障碍和/或其至少一种伴随症状的方法。如本文所用的，“减轻”疾病、失调或病症是指降低疾病、失调或病症的症状的严重性和/或发生频率。此外，本文提及的“治疗”包括提及治愈性、姑息性和预防性治疗。
“治疗有效量”是指将在一定程度上缓解所治疗疾病的一种或多种症状的所施用治疗剂的量。抗癌治疗剂的治疗有效量可例如导致延迟的肿瘤生长、肿瘤缩小、增加的存活、消除癌细胞、减缓或减少疾病进展、逆转转移或医疗保健专业人员所需的其他临床终点。
本文所述的抗FLT3抗体或其抗原结合部分、抗体组合物或双特异性结合分子可以单独施用或与一种或多种其他药物或抗体组合施用(或作为其任何组合)。因此，本文所述的药物组合物、方法和用途还包括与其他活性剂的组合(共同给药)的实施方案，如下文详述的。
如本文所用的，术语“共同施用”、“共同施用的”和“联合”是指本发明的抗FLT3抗体及其抗原结合部分、抗体组合物和双特异性结合分子与一种或多种其他治疗剂，旨在表示并且确实是指并包括以下内容：
a)将本公开的抗体/抗原结合部分/抗体组合物/双特异性结合分子和治疗剂的这种组合同时施用于需要治疗的患者，当这些组分一起配制成单一的基本上同时向所述患者释放所述组分的剂型，
b)将本公开的抗体/抗原结合部分/抗体组合物/双特异性结合分子和治疗剂的这种组合基本上同时施用于需要治疗的患者，当这些组分彼此分开配制成分开的剂型时，由所述患者基本上同时服用，因此所述组分基本上同时释放给所述患者，
c)将本公开的抗体/抗原结合部分/抗体组合物/双特异性结合分子和治疗剂的这种组合顺序施用于需要治疗的患者，当这些组分彼此分开配制成分开的剂型时，由所述患者连续服用，每次给药之间有明显的时间间隔，因此所述组分在基本上不同的时间释放给所述患者；和
d)将本公开的抗体/抗原结合部分/抗体组合物/双特异性结合分子和治疗剂的这种组合顺序施用于需要治疗的患者，当这些组分一起配制成单一剂型时，其以受控方式释放所述成分，因此它们在相同和/或不同时间同时、连续和/或重叠地释放给所述患者，其中每个部分可以通过相同或不同途径来给药。
本公开的抗FLT3抗体或其抗原结合部分、抗体组合物或双特异性结合分子可以在没有其他治疗处理的情况下施用，即作为独立疗法(单一疗法)。或者，用本公开的抗FLT3抗体或其抗原结合部分、抗体组合物或双特异性结合分子的治疗可以包括至少一种其他治疗性治疗(联合治疗)，例如另一免疫刺激剂、抗癌症剂(例如，化学治疗剂、抗肿瘤剂、抗血管生成剂或酪氨酸激酶抑制剂)，或疫苗(例如，肿瘤疫苗)。
在一些实施方案中，抗体或其抗原结合部分、抗体组合物或双特异性结合分子可以与用于治疗癌症的另一种药品/药物共同施用或配制。其他治疗处理可以包括例如免疫刺激剂、疫苗、化学治疗剂、抗肿瘤剂、或抗血管生成剂、酪氨酸激酶抑制剂和/或放射疗法。在一些实施方案中，其他治疗可以包括不同的抗癌抗体。
包含本文所述的抗FLT3抗体或其抗原结合部分、抗体组合物或双特异性结合分子和至少一种其他药剂(例如，化学治疗剂、抗肿瘤剂或抗血管生成剂)的药物制品可以是在癌症治疗中用作同时、单独或连续给药的联合治疗。其他药剂可以是适合于治疗所讨论的特定癌症的任何药剂，例如选自以下的药剂：烷化剂，例如铂衍生物，顺铂、卡铂和/或奥沙利铂；植物生物碱，例如紫杉醇、多西他赛和/或伊立替康；抗肿瘤抗生素，例如多柔比星(阿霉素)、柔红霉素、表柔比星、伊达比星、米托蒽醌、放线菌素、博来霉素、放线菌素、叶黄霉素和/或丝裂霉素；拓扑异构酶抑制剂，如拓扑替康；抗代谢物，例如氟尿嘧啶和/或其他氟嘧啶；FOLFOX；奥希替尼；环磷酰胺；蒽环类；达卡巴嗪；吉西他滨；或其任何组合。在一些实施方案中，本文所述的抗FLT3抗体或其抗原结合部分、抗体组合物或双特异性结合分子重新建立对其他药剂的反应性。
本公开的抗FLT3抗体或其抗原结合部分、抗体组合物或双特异性结合分子也可与其他抗癌疗法(如疫苗、细胞因子、酶抑制剂、免疫刺激化合物和T细胞疗法)联合使用。在疫苗的情况下，它可以是例如含有一种或多种与所治疗的癌症相关的抗原的蛋白质、肽或DNA疫苗，或含有树突状细胞和抗原的疫苗。合适的细胞因子包括例如IL-2、IFN-γ和GM-CSF。一种具有抗癌活性的酶抑制剂的实例是吲哚胺-2,3-双加氧酶(IDO)抑制剂，例如1-甲基-D-色氨酸(1-D-MT)。还考虑了过继性T细胞疗法，它指的是涉及扩大或工程化患者自身的T细胞以识别和攻击他们的肿瘤的各种免疫疗法技术。
还考虑了本公开的抗FLT3抗体或其抗原结合部分、抗体组合物或双特异性结合分子可与酪氨酸激酶抑制剂一起用于辅助治疗。这些是合成的，主要是喹唑啉衍生的低分子量分子，它们与受体的细胞内酪氨酸激酶结构域相互作用并抑制配体诱导的受体磷酸化，例如，通过竞争胞内Mg-ATP结合位点。
在一些实施方案中，抗体或其抗原结合部分、抗体组合物或双特异性结合分子可以与介导免疫系统激活的药物/药物联合使用，包括但不限于调节A2AR、A1AR、A2BR、A3AR、ADA、ALP、AXL、BTLA、B7-H3、B7-H4、CTLA-4、CD116、CD123、CD27、CD28、CD39、CD40、CD47、CD55、CD73、CD122、CD137、CD160、CGEN-15049、CHK1、CHK2、CTLA-3、CEACAM(例如，CEACAM-1和/或CEACAM-5)、EGFR、FLT3、FLT3L、GAL9、GITR、HVEM、LAG-3、LILRB1、LY108、LAIR1、ICOS、IDO、IL2R、IL4R、KIR、LAIR1、MET、NKG2A、PAP、PD-1/PD-L1/PD-L2、OX40、STING、TIGIT、TIM-3、TGFR-β、TLR1、TLR2、TLR3、TLR4、TLR5、TLR6、TLR7、TLR8、TLR9和TLR10、TNFR2、VEGF、VEGFR、VISTA、LILRB2、CMTM6和/或2B4的表达或活性的药剂。在一些实施方案中，该药剂增强树突状细胞的活性、分化、增殖或动员。在某些实施方案中，药剂是小分子抑制剂。在某些实施方案中，药剂是与上述分子之一结合的抗体或其抗原结合片段。还预期本公开的抗FLT3抗体或其抗原结合部分、抗体组合物或双特异性结合分子可与细胞因子(例如，IL-1、IL-2、IL-12、IL-15或IL-21)、EGFR抑制剂、VEGF抑制剂等联合使用。
在特定的实施方案中，所述抗体或其抗原结合部分、抗体组合物或双特异性结合分子可以用于与调节FLT3L、CD40、AXL、TLR或PD-1的表达或活性的药剂组合使用。
本公开还涵盖本文所述的抗FLT3抗体或抗原结合部分的序列(例如，六个CDR或VH和VL序列)在制备可用于CAR-T技术的嵌合抗原受体中的用途。
应当理解，本公开的抗体及其抗原结合部分、抗体组合物和双特异性结合分子可用于本文所述的治疗方法中，可用于本文所述的治疗中，和/或可用于制造用于本文所述治疗的药物中。
剂量和给药途径
本公开的抗体或其抗原结合部分、抗体组合物或双特异性结合分子可以以用于治疗所讨论的病症的有效量施用，即以实现所需结果的剂量和时间段施用。治疗有效量可根据以下因素而有所不同，如所治疗的特定病症、患者的年龄、性别和体重，以及抗体是作为独立治疗给药还是与一种或多种其他抗-癌症治疗联合给药。
可以调整剂量方案以提供最佳的所需反应。例如，可以施用单次推注，可以随时间施用几个分开的剂量，或者可以根据治疗情况的紧急性按比例减少或增加剂量。将肠胃外组合物配制成剂量单位形式是特别有利的，以便于给药和剂量的均匀性。如本文所用，剂量单位形式是指适合作为待治疗患者/受试者的单位剂量的物理离散单位；每个单位含有预定量的活性化合物，经计算可产生所需的治疗效果以及所需的药物载剂。本公开的剂量单位形式的规格通常由以下因素决定并且直接取决于以下因素：(a)治疗剂的独特特征和待实现的特定治疗或预防效果，和(b)本领域固有的针对个体敏感性复合这样的活性化合物的限制。
因此，本领域技术人员将理解，基于本文提供的公开内容，剂量和给药方案根据治疗领域熟知的方法进行调整。也就是说，可以容易地确定最大可耐受剂量，并且还可以确定给患者提供可检测的治疗益处的有效量，也可以确定施用每种药剂以向患者提供可检测的治疗益处的时间要求。因此，尽管本文举例说明了某些剂量和给药方案，但这些实例绝不限制在实施本公开时可以提供给患者的剂量和给药方案。
需要注意的是，剂量值可能会随着待缓解的病症的类型和严重程度而变化，并且可能包括单次或多次剂量。应进一步理解，对于任何特定受试者，应根据个体需要和施用或监督组合物施用的人的专业判断随时间调整特定的剂量方案，并且本文所述的剂量范围是示例性的仅且不旨在限制所体现的组合物的范围或实践。此外，本公开的组合物的给药方案可以基于多种因素，包括疾病的类型、患者的年龄、体重、性别、医学状况、病症的严重性、给药途径，以及使用的特定抗体。因此，给药方案可以有很大差异，但可以使用标准方法常规确定。例如，可以根据药代动力学或药效学参数调整剂量，这些参数可能包括临床效应，如毒性效应和/或实验室值。因此，本公开包括由技术人员确定的患者内剂量递增。确定合适的剂量和方案在相关领域是众所周知的，并且一旦提供本文公开的教导，本领域技术人员将被理解为包括在内。
肿瘤治疗的有效量可以通过其稳定疾病进展和/或改善患者症状的能力来测量，并且优选地逆转疾病进展，例如通过减小肿瘤大小。本公开的抗体、抗原结合部分、抗体组合物或双特异性结合分子抑制癌症的能力可以通过体外测定来评估，例如，如实施例中所述，以及在合适的预测在人肿瘤中的疗效的动物模型中。将选择合适的剂量方案以在每种特定情况下提供最佳治疗反应，例如，作为单次推注或作为连续输注给药，并根据每种情况的紧急情况调整剂量。
本公开的抗体或其抗原结合部分、抗体组合物或双特异性结合分子可以通过本领域接受的用于施用肽、蛋白质或抗体的任何方法施用，并且通常适合于肠胃外施用。如本文所用，“肠胃外给药”包括任何给药途径，其特征在于对受试者的组织进行物理破坏并通过组织中的缺口进行给药，因此通常导致直接给药到血流中、肌肉中或内部器官中。因此，肠胃外给药包括但不限于通过注射给药、通过手术切口施用、通过组织穿透性非手术伤口施用等。特别地，肠胃外给药包括但不限于皮下、腹膜内、肌内、胸骨内、脑池内、静脉内、动脉内、鞘内、尿道内、颅内、瘤内和滑膜内注射或输注。具体实施方案包括静脉内和皮下途径。
诊断用途和组合物
本公开的抗体和抗原结合部分也可用于诊断过程(例如，体外或离体(ex vivo))中。例如，抗体和抗原结合部分可用于检测和/或测量来自患者的样品(例如，组织样品或体液样品，如炎症渗出液、血液、血清、肠液、唾液或尿液)中的FLT3水平。合适的检测和测量方法包括免疫学方法，如流式细胞术、酶联免疫吸附测定(ELISA)、化学发光测定、放射免疫测定和免疫组织学。本公开进一步涵盖包含本文所述的抗体和抗原结合部分的试剂盒(例如，诊断试剂盒)。
制品和药盒
本公开还提供了制品，例如药盒，其包含一个或多个容器(例如，单次使用或多次使用的容器)，其含有本文所述的抗FLT3抗体或其抗原结合部分的药物组合物、组合物或双特异性结合分子、任选的其他生物活性分子(例如，另一种治疗剂)和使用说明。抗体或抗原结合部分、组合物或双特异性结合分子和任选的其他生物活性分子可以分开包装在合适的包装中，例如由非反应性玻璃或塑料制成的小瓶或安瓿。在某些实施方案中，小瓶或安瓿容纳抗体或抗原结合部分、组合物或双特异性结合分子和任选的生物活性分子的浓缩原液(例如，2×、5×、10×或更多)。在某些实施方案中，制品(如药盒)包括用于施用抗体或抗原结合部分、组合物或双特异性结合分子和/或生物活性分子的医疗装置(例如注射器和针头)；和/或适当的稀释剂(例如无菌水和生理盐水)。本公开还包括用于制造所述制品的方法。
除非本文另有定义，否则结合本公开使用的科学和技术术语应具有本领域普通技术人员通常理解的含义。下文描述了示例性方法和材料，尽管与本文描述的那些相似或等效的方法和材料也可以用于本公开的实践或测试。在冲突的情况下，以本说明书(包括定义)为准。
通常，本文所述的与细胞和组织培养、分子生物学、免疫学、微生物学、遗传学、分析化学、合成有机化学、药物和药物化学以及蛋白质和核酸化学和杂交结合使用的命名法和技术是那些众所周知并且在本领域中普遍使用。酶促反应和纯化技术根据制造商的说明书进行，如本领域通常完成的或如本文所述的。
此外，除非上下文另有要求，否则单数术语应包括复数，复数术语应包括单数。在整个说明书和实施例中，词语“具有(have)”和“包含(comprise)”或诸如“具有(has)”、“具有(having)”、“包含(comprises)”或“包含(comprising)”的变体将被理解为暗示包含所述整数或整数组，但不排除任何其他整数或整数组。
本文提及的所有出版物和其他参考文献通过引用整体并入。尽管本文引用了许多文件，但该引用并不构成承认任何这些文件构成本领域公知常识的一部分。
为了更好地理解本发明，列出以下实施例。这些实施例仅用于说明的目的并且不应被解释为以任何方式限制本公开的范围。
实施例
实施例1：从大鼠B细胞克隆抗FLT3抗体
材料和方法
从源自
将编码IgG
通过使用简并引物在编码抗体的cDNA片段的Symplex
抗体17566,17526,17667,17667-0,17679,17494,17543和17497的可变结构域、恒定区和互补决定区(CDR)的蛋白质序列分别显示在表2、表3和表4中。
结果
表1显示了编码抗体17566,17526,17667,17667-0,17679,17494,17543和17497的可变结构域的核苷酸序列。
表1：抗体17566,17526,17667,17667-0,17679,17494,17543和17497的可变结构域核苷酸序列
SEQ:SEQ ID NO.
表2显示了抗体17566,17526,17667,17667-0,17679,17494,17543和17497的推导氨基酸序列。CDR以粗体/下划线显示。
表2：抗体17566,17526,17667,17679,17494,17543和17497的可变结构域氨基酸序列
SEQ:SEQ ID NO.
表3显示了重链和轻链恒定区氨基酸序列(分别为CH和CL)。“IgG
表3：抗体17566,17526,17667,17667-0,17679,17494,17543和17497的恒定区氨基酸序列
SEQ:SEQ ID NO.
表4显示了抗体17566,17526,17667,17667-0,17679,17494,17543和17497的重链和轻链CDR氨基酸序列，其中CDR根据
表4：抗体17566,17526,17667,17667-0,17679,17494,17543和17497的CDR氨基酸序列
SEQ:SEQ ID NO:
表5显示了抗体17566,17526,17667,17667-0,17679,17494,17543和174978的SEQID NO信息。除非另有说明，否则序列是氨基酸序列。
表5：抗体17566,17526,17667,17667-0,17679,17494,17543和17497的SEQ ID NO
nt：核苷酸
aa：氨基酸
实施例2：在EOL-1增殖测定法中抗FLT3抗体的体外功能筛选
本实施例描述了对一组抗FLT3单克隆抗体的体外功能评价，目的是鉴定具有激动活性的候选抗体。对这些抗体评估了它们刺激表达FLT3的癌细胞系EOL-1增殖的能力。
材料和方法
在体外评估了一组抗FLT3抗体诱导表达FLT3的癌细胞系EOL-1增殖的能力。将EOL-1细胞接种在补充有0.5％FBS和1％P/S的RPMI 1640Glutamax培养基中，并与终浓度为25μg/mL的所述抗体孵育5天。根据制造商的说明，使用WST-1细胞增殖试剂(Roche)对细胞增殖进行定量化。
结果
用抗FLT3抗体处理后的EOL-1细胞的增殖情况在图1中显示。诱导EOL-1细胞增殖的能力在测试的抗体之间有很大差异。一些抗体在该测定法中没有显示出效果，而其他抗体具有刺激能力，这表现在它们诱导EOL-1细胞增殖的能力。
实施例3：抗FLT3参考抗体类似物的克隆
材料和方法
编码表6中抗体类似物的重链和轻链可变结构域的氨基酸序列获自所列专利申请。使用人密码子使用将蛋白质序列反向翻译成DNA序列。相应的DNA序列被基因合成并克隆到含有人重链或轻链恒定区的表达载体中，导致全长抗体链的表达。选择用于表达的人抗体同种型列在抗体形式列中。使用标准蛋白质表达系统，用所得表达质粒转染CHO细胞。使用标准蛋白A纯化柱层析纯化相应的抗体上清液。
表6：基因合成的抗体类似物和相应的抗体形式的列表
实施例4：抗FLT3抗体与用人、食蟹猴或小鼠FLT3蛋白转染的CHO-S细胞的直接结合该实施例证明了抗FLT3抗体与细胞上瞬时表达的人、小鼠和食蟹猴FLT3蛋白的结合。
材料和方法
评估了七种抗FLT3抗体与CHO-S细胞上表达的人、食蟹猴或小鼠FLT3蛋白的结合，并与IMC-EB10类似物的结合进行了比较。
将抗FLT3抗体与瞬时表达人、食蟹猴或小鼠FLT3的仓鼠CHO-S细胞系在4℃孵育30分钟。将细胞洗涤两次，随后用AF647缀合的第二抗人IgG(H+L)抗体再孵育20分钟。洗涤步骤后，使用高通量流式细胞仪iQue Screener PLUS(Sartorius)检测抗体结合，测量每个孔中AF647信号的GeoMean。每种浓度一式三份测定，并为每种抗体生成12点滴定曲线。
结果
抗体与细胞上表达的人、食蟹猴或小鼠FLT3的结合曲线如图2所示。所测定的抗体以不同的效力和功效与细胞展示的人、食蟹猴或小鼠FLT3蛋白结合。
实施例5.七种抗FLT3抗体阻断FLT3配体与人FLT3的结合
材料和方法
通过Octet QK384仪器(ForteBio)上的生物层干涉法(Bio-layerInterferometry，BLI)测量抗FLT3抗体与重组人FLT3 ECD his标记的融合受体(Sino-Biological)的结合及它们对FLT3L的阻断/非阻断。将his标记的FLT3固定在预平衡的抗Penta-HIS(HIS1K)生物传感器(ForteBio)上600秒，随后500nM抗FLT3抗体600秒结合，100nM FLT3L和500nM mAb 300秒结合。平行测量对固定的FLT3的总FLT3L结合响应。在FortéBio数据分析(8.2)程序中进行数据分析。
结果
抗体17543,17494,17679,17667,17526,17566,17497和对照mAb的阻断曲线如图3所示。除了IMC-EB10类似物外，抗FLT3 mAb均未在饱和条件下阻断FLT3L与FLT3的结合，所述IMC-EB100类似物完全阻断配体与FLT3结合。
实施例6.通过七种抗FLT3抗体阻断FLT3配体Fc与用人、食蟹猴或小鼠FLT3蛋白转染的CHO-S细胞的结合
本实施例描述了通过抗FLT3抗体阻断FLT3配体Fc蛋白与CHO-S细胞上表达的人、食蟹猴或小鼠FLT3蛋白的结合。
材料和方法
评估了七种抗FLT3抗体与CHO-S细胞上表达的人、食蟹猴或小鼠FLT3蛋白的结合，并与FLT3配体Fc蛋白存在下IMC-EB10类似物进行了比较。
将抗FLT3抗体与瞬时表达人、食蟹猴或小鼠FLT3的仓鼠CHO-S细胞系4℃孵育30分钟。将细胞洗涤两次，随后用AF647缀合的FLT3配体Fc再孵育20分钟。洗涤步骤后，使用高通量流式细胞仪iQue Screener PLUS(Sartorius)检测AF647缀合的FLT3配体Fc蛋白的残留结合，测量每个孔中AF647信号的GeoMean。每种浓度一式三份测定，并为每种抗体生成12点滴定曲线。
结果
抗体对细胞上表达的人、食蟹猴或小鼠FLT3结合的阻断曲线如图4所示。所测定的抗体在任何测试浓度下都不阻断AF647缀合的FLT3L-Fc蛋白与细胞展示的人、食蟹猴或小鼠FLT3蛋白的结合。IMC-EB10类似物抗体部分阻断AF647缀合的FLT3配体Fc蛋白与细胞展示的人、食蟹猴或小鼠FLT3蛋白的结合。
实施例7.EOL-1增殖测定法中抗FLT3抗体的体外功能活性
本实施例描述了七种抗FLT3单克隆抗体的体外功能评估，目的是证明剂量依赖性激动活性。评估这些抗体刺激表达FLT3的癌细胞系EOL-1增殖的能力。包括FLT3配体用于比较。
材料和方法
在体外进一步详细评估了七种抗FLT3抗体诱导表达FLT3的癌细胞系EOL-1增殖的能力。将EOL-1细胞接种在补充有0.5％FBS和1％P/S的RPMI 1640Glutamax培养基中，并用25μg/mL开始的所示抗体的两倍滴定孵育5天。包括从1μg/mL开始的FLT3配体的两倍滴定用于比较。根据制造商的说明，使用WST-1细胞增殖试剂(Roche)对细胞增殖进行定量。
结果
用抗FLT3抗体处理后EOL-1细胞的增殖如图5所示。所有测试的七种抗体都显示了剂量依赖性刺激能力，如它们诱导EOL-1细胞增殖的能力所示。
实施例8.细胞增殖测定法中不同IgG形式的抗FLT3抗体的体外功能活性
本实施例描述了IgG
材料和方法
将EOL-1和OCI-AML5细胞接种在补充有0.5％FBS和1％P/S的RPMI 1640Glutamax培养基中，并用25μg/mL开始的所示抗体的两倍滴定孵育5天。根据制造商的说明，使用WST-1细胞增殖试剂(Roche)对细胞增殖进行定量。
结果
用抗FLT3抗体处理后EOL-1细胞和OCI-AML5细胞的增殖分别显示在图6A和图6B中。所选抗体的IgG
实施例9.抗FLT3抗体对原代人CD34
本实施例描述了七种抗FLT3单克隆抗体以及IgG
材料和方法
从美国典型培养物保藏中心(ATCC)获得原代人骨髓来源的CD34
结果
在用抗FLT3抗体处理后，原代人CD34
实施例10.抗FLT3抗体对人原代CD34
本实施例描述了IgG
材料和方法
从美国典型培养物保藏中心(ATCC)获得原代人骨髓来源的CD34
结果
通过两种抗FLT3抗体诱导原代人CD34
实施例11.Balb/c小鼠中抗FLT3抗体的体内功能活性
本实施例描述了IgG
材料和方法
将40只雌性Balb/c小鼠分为8个处理组，每组5只动物。处理于第0天开始，并于第13天结束。小鼠接受腹腔注射载剂；0.1mg/kg、1mg/kg或10mg/kg的抗FLT3抗体，每周两次；或每周五次腹腔注射10μg FLT3L。结束时，收获所有小鼠的脾脏并通过流式细胞术进行分析。用抗CD3-FITC,抗CD370-PE,抗CD8-PerCP-Cy5.5,抗CD11b-PE-Cy7,抗I-A/I-E-APC-Cy,抗CD11c-BV421,抗Ly6C-FITC,抗CD3-PerCP-Cy5.5和抗CD45R-APC抗体对细胞染色。ZombieAqua用于活细胞/死细胞识别。使用BD FACSVerse流式细胞仪和FacsDiva软件分析细胞。使用GraphPad Prism 5.0进行数据分析。
结果
根据IgG
实施例12.抗FLT3抗体在CD34人源化小鼠中的体内功能活性
本实施例描述了抗FLT3单克隆抗体的体内功能评估，目的是验证其在用人CD34+干细胞重构的免疫受损小鼠(“CD34人源化小鼠”)中诱导树突状细胞动员的能力。包括FLT3配体用于比较。
材料和方法
使用从人脐带血分离的造血干细胞(CD34+)对36只雌性NOD/Shi-SCID/IL-2Rγnull(NCG)小鼠进行人源化。只有人源化率(hCD45/总CD45)高于25％的小鼠用于研究。根据人源化率和CD34供体，将小鼠随机分为6个处理组，每组6只动物。处理开始于第0天，结束于第11天。小鼠每周两次接受腹腔注射载剂、1或10mg/kg的抗FLT3抗体，或每周五次腹腔注射10μgFLT3L。结束时，收获所有小鼠的脾脏和骨髓，并通过流式细胞术进行分析。用抗CD1c-BV421,抗CD11c-BV510,抗CD14-BV650,抗CD123-FITC,抗CD3-PerCPVio700,抗CD20-PerCPVio700,抗CD56-PerCPVio700,抗CD301-PE,抗CD141-PE-Vio615,抗hCD45-PE-Vio770,抗CD370-APC和抗HLA-DR-APC-Cy7抗体对细胞染色。固定黄(Fixable Yellow)用于活细胞/死细胞识别。使用Attune NxT流式细胞仪和FacsDiva软件分析细胞。使用GraphPadPrism 5.0进行数据分析。
结果
根据两种不同剂量诱导CD34人源化小鼠中DC动员的能力，评估IgG
实施例13.抗FLT3抗体和FLT3配体对人原代CD34
本实施例显示，用激动性抗FLT3抗体体外刺激人原代CD34+干细胞诱导与FLT3配体类似的基因表达变化，提供了类似刺激途径的证据。
材料和方法
从美国典型培养物保藏中心(ATCC)获得原代人骨髓来源的CD34
结果
如图11所示，IgG
实施例14.抗FLT3 Fab片段与人FLT3的结合动力学
该实施例评估了通过表面等离子体共振(SPR)测量的抗FLT3 Fab片段与人FLT3结构域1的结合。
材料和方法
合成编码人FLT3结构域1的cDNA(UniProt登录号P36888)，并将其克隆到含有CMV启动子和人Ig Fc序列(残基P101-K330)的载体中，产生Ig Fc与C端融合，并在ExpiCHO
结果
抗体17566,17526,17667,17543和17497的Fab片段与人FLT3结构域1的结合动力学如下表7所示。数据以平均值±SEM表示，n＝4。
表7：SPR测量的抗FLT3 Fab片段与人FLT3结构域1的结合动力学
实施例15.抗FLT3抗体的表位分仓
该实施例描述了表面等离子体共振(SPR)测量的基于成对竞争模式将抗FLT3抗体分组到表位仓中。属于不同表位仓(epitope bin)的抗体识别FLT3 ECD上的不同表位。
材料和方法
使用IBIS-MX96仪器(IBIS，荷兰)通过SPR进行成对抗体竞争的研究。将多个抗FLT3抗体在PBS中稀释至3μg/ml，并通过使用连续流动微点样仪(Continuous FlowMicrospotter)捕捉15分钟，将其点样到G-a-hu-IgG Fc
结果
图12显示了源自表位分仓分析的抗FLT3单抗17667、17566、17526和17543、IMC-EB10类似物和FLT3配体(FLT3L)的节点图。各抗FLT3抗体分布在三个离散的组或仓中。仓1(浅灰色)包括抗体17526、17543、17566和17667，它们都相互交叉阻断，表明这些抗体结合FLT3胞外域的类似表位。仓2(灰色)由IMC-EB10类似物组成，与公布的数据(美国专利公开号2011/0091470)一致地阻断FLT3L。仓3(白色)仅由抗体17497组成，表明该抗体识别与分析中的其他抗体不同的表位。
总之，除IMC-EB10类似物外，所有测试抗体均未阻断FLT3L。抗体17526、17543、17566和17667结合重叠的表位，而抗体17497结合单独的表位。
实施例16.抗FLT3抗体通过诱变和表面等离子体共振的表位作图
该实施例阐述了单克隆抗FLT3抗体17566、17526、17667、17543和17497识别的表位如何分布在FLT3胞外域(ECD)上。通过诱变方法和表面等离子体共振(SPR)对线性表位和构象表位进行了表征。
材料和方法
从UniProt(登录号分别为P36888和A0A0G2JW59)下载人和大鼠(Rattusnorvegicus)FLT3的蛋白质序列并进行比对。为了绘制线性表位，生成了人FLT3 ECD结构域1的Fc融合蛋白，其中，将10个氨基酸依次用以5个氨基酸重叠的片段的相应大鼠FLT3序列替换。通过FLT3结构域1的丙氨酸扫描突变来表征构象表位。
合成编码人FLT3结构域1的cDNA，并将其克隆到含有CMV启动子和人Ig Fc序列(残基P101-K330)的载体中，产生Ig Fc与C端融合。野生型(wt)和突变的人FLT3结构域1Fc融合构建体通过标准基因合成技术产生，并且蛋白质在ExpiCHO
结果
抗FLT3抗体17566、17526、17667、17543和17497的线性表位和构象表位如表8所示。
表8：抗FLT-3抗体表位
FLT3的胞外结构域由五个免疫球蛋白(Ig)样结构域(D1-D5)组成。本实施例中的抗FLT3抗体均结合FLT3 D1。如表8所示，抗体17566、17526、17667和17543结合类似的表位，而小鼠交叉反应抗体17497结合通过表位分仓预测的单独表位(实施例15)。
将表位映射到FLT3配体-受体复合物上(PDB条目：3QS9，图13)。该晶体结构由与FLT3配体(FLT3L)二价结合的两个受体分子组成，在FLT3 D3的尖端具有结合界面。该复合物形成开放的环状结构，其中N末端D1是高度柔性的，在D1和D2之间的连接区周围具有至少两个不同的取向，并且与该蛋白复合物的其余部分没有相互作用(Verstrate等人,Blood(2011)1:60–68)。
抗体17566、17526、17667和17543的表位中的共同部分位于D2开始之前的D1的C末端。该共享部分位于D1的内表面，而抗体17497的表位位于相对于FLT3L而言的D1的外表面。配体-受体复合物中每个D1上的表位之间的距离对于每个表位约为
总之，表位映射分析显示，抗体17566、17526、17667和17543的表位共享FLT3 D1内表面上的残基，而抗体17497结合D1外表面上的单独表位。位于FLT3 D1上的表位显然对于激动性抗FLT3抗体和受体激活是最佳的。
序列表
<110> 法国施维雅药厂
<120> 抗FLT3抗体和组合物
<130> 022675.WO047
<140>
<141>
<150> 63/009,578
<151> 2020-04-14
<160> 79
<170> PatentIn版本3.5
<210> 1
<211> 372
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释 =“人工序列的描述: 合成的
多核苷酸"
<400> 1
caagtgacac tgaaggagtc cggcccagtg ctggtgaagc ccaccgagac actgaccctg 60
acatgcaccg tgtctggctt ctcctttaac aatgccagga tgggagtgaa ctggatcagg 120
cagccacctg gcaaggccct ggagtggctg gctcacatct tcagcaatga cgagaagtcc 180
tacagcacat ctctgaagag caggctgacc atctctaagg atatctccaa gagccaggtg 240
gtgctgacaa tgaccaacat ggaccccgtg gatacagcca cctactattg tgctagaatc 300
gtgggatacg gatctggatg gaggctgctg ggcgactatt ggggacaggg cacactggtg 360
accgtctcga gt 372
<210> 2
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释 =“人工序列的描述: 合成的
多核苷酸"
<400> 2
gccatccaga tgacccagag cccttccagc ctgtccgcct ccgtgggcga cagggtgacc 60
atcacatgcc gggcctctca gggcatcaca aacgatctgg gctggtacca gcagaagccc 120
ggcaaggctc ctaagctgct gatctatgcc gcttcttccc tgcaatctgg cgtgccatcc 180
aggttctctg gatccggaag cggaaccgac tttaccctga caatcagctc tctgcaacca 240
gaggacttcg ccacatacta ttgtctgcaa gattacaatt atccctggac ctttggccag 300
ggcacaaagg tggagatcaa g 321
<210> 3
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释 =“人工序列的描述: 合成的
多肽"
<400> 3
Gln Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Val Leu Val Lys Pro Thr Glu
1 5 10 15
Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Phe Asn Asn Ala
20 25 30
Arg Met Gly Val Asn Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu
35 40 45
Trp Leu Ala His Ile Phe Ser Asn Asp Glu Lys Ser Tyr Ser Thr Ser
50 55 60
Leu Lys Ser Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Ile Ser Lys Ser Gln Val
65 70 75 80
Val Leu Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala Arg Ile Val Gly Tyr Gly Ser Gly Trp Arg Leu Leu Gly Asp
100 105 110
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 4
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
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多肽"
<400> 4
Ala Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Thr Asn Asp
20 25 30
Leu Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Asp Tyr Asn Tyr Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
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肽"
<400> 5
Gly Phe Ser Phe Asn Asn Ala Arg Met Gly
1 5 10
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<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
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肽"
<400> 6
Ile Phe Ser Asn Asp Glu Lys
1 5
<210> 7
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
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肽"
<400> 7
Cys Ala Arg Ile Val Gly Tyr Gly Ser Gly Trp Arg Leu Leu Gly Asp
1 5 10 15
Tyr Trp
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
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肽"
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Gln Gly Ile Thr Asn Asp
1 5
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
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肽"
<400> 9
Ala Ala Ser
1
<210> 10
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
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肽"
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Cys Leu Gln Asp Tyr Asn Tyr Pro Trp Thr Phe
1 5 10
<210> 11
<211> 369
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
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多核苷酸"
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caagtgacac tgaaggagtc tggcccagtg ctggtgaagc ccaccgagac actgaccctg 60
acatgcacca tctctggctt ctccctgggc aacgccagga tgggcgtgtc ctggatcagg 120
cagccacctg gcaaggccct ggagtggctg gctcacatct ttagcaatga cgagaagtcc 180
tacagcacct ctctgaagag cagactgaca atctctaagg atacctccaa gagccaggtg 240
gtgctgacaa tgaccaacat ggaccctgtg gatacagcca cctactattg tgctcgcatc 300
gtgggctacg tggactggct gctgccattc gattattggg gccagggcac actggtgacc 360
gtctcgagt 369
<210> 12
<211> 324
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释 =“人工序列的描述: 合成的
多核苷酸"
<400> 12
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ggacaggctc ctaggctgct gatctatggc gccagcacca gagctacagg aatccctgct 180
cgcttctctg gatccggaag cggcacagag tttaccctga caatctcttc cctgcaatct 240
gaggacttcg ccgtgtacta ttgtcagcaa tacaatcact ggccaatgta tacctttggc 300
cagggcacaa agctggagat caag 324
<210> 13
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释 =“人工序列的描述: 合成的
多肽"
<400> 13
Gln Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Val Leu Val Lys Pro Thr Glu
1 5 10 15
Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Ile Ser Gly Phe Ser Leu Gly Asn Ala
20 25 30
Arg Met Gly Val Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu
35 40 45
Trp Leu Ala His Ile Phe Ser Asn Asp Glu Lys Ser Tyr Ser Thr Ser
50 55 60
Leu Lys Ser Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Ser Gln Val
65 70 75 80
Val Leu Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala Arg Ile Val Gly Tyr Val Asp Trp Leu Leu Pro Phe Asp Tyr
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 14
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释 =“人工序列的描述: 合成的
多肽"
<400> 14
Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Asn
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn His Trp Pro Met
85 90 95
Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 15
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释 =“人工序列的描述: 合成的
肽"
<400> 15
Gly Phe Ser Leu Gly Asn Ala Arg Met Gly
1 5 10
<210> 16
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释 =“人工序列的描述: 合成的
肽"
<400> 16
Ile Phe Ser Asn Asp Glu Lys
1 5
<210> 17
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释 =“人工序列的描述: 合成的
肽"
<400> 17
Cys Ala Arg Ile Val Gly Tyr Val Asp Trp Leu Leu Pro Phe Asp Tyr
1 5 10 15
Trp
<210> 18
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释 =“人工序列的描述: 合成的
肽"
<400> 18
Gln Ser Val Ser Ser Asn
1 5
<210> 19
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释 =“人工序列的描述: 合成的
肽"
<400> 19
Gly Ala Ser
1
<210> 20
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释 =“人工序列的描述: 合成的
肽"
<400> 20
Cys Gln Gln Tyr Asn His Trp Pro Met Tyr Thr Phe
1 5 10
<210> 21
<211> 369
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释 =“人工序列的描述: 合成的
多核苷酸"
<400> 21
caagtgacac tgaaggagtc tggcccagtg ctggtgaagc ccaccgagac actgaccctg 60
acatgcaccg tgtccggctt ctccctgagc aacgccagga tgggcgtgag ctggatcagg 120
cagccacctg gcaaggccct ggagtggctg gctcacatct tttccaatga cgagagatct 180
tactccccca gcctgaagag ccgcctgaca atctctaagg gcacctctaa gtcccaggtg 240
gtgctgacaa tgaccaacat ggaccctgtg gatacagcca cctactattg tgctaggatc 300
gtgggctacg tggactggct gctgccattc gattattggg gccagggcac actggtgacc 360
gtctcgagt 369
<210> 22
<211> 324
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释 =“人工序列的描述: 合成的
多核苷酸"
<400> 22
gagatcgtga tgacccagtc tccagccaca ctgagcgtgt ctccaggaga gagggccacc 60
ctgtcctgca gagcttccca gagcgtgtcc agcaacctgg cttggtacca gcagaagcca 120
ggacaggctc ctaggctgct gatctatggc gccagcacca gagctacagg aatccctgct 180
cgcttctctg gatccggaag cggcacagag tttaccctga caatctcttc cctgcaatct 240
gaggacttcg ccgtgtacta ttgtcagcag tacaacaatt ggccaatgta tacctttggc 300
cagggcacaa agctggagat caag 324
<210> 23
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释 =“人工序列的描述: 合成的
多肽"
<400> 23
Gln Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Val Leu Val Lys Pro Thr Glu
1 5 10 15
Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Asn Ala
20 25 30
Arg Met Gly Val Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu
35 40 45
Trp Leu Ala His Ile Phe Ser Asn Asp Glu Arg Ser Tyr Ser Pro Ser
50 55 60
Leu Lys Ser Arg Leu Thr Ile Ser Lys Gly Thr Ser Lys Ser Gln Val
65 70 75 80
Val Leu Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala Arg Ile Val Gly Tyr Val Asp Trp Leu Leu Pro Phe Asp Tyr
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 24
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释 =“人工序列的描述: 合成的
多肽"
<400> 24
Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Asn
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Asn Trp Pro Met
85 90 95
Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 25
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释 =“人工序列的描述: 合成的
肽"
<400> 25
Gly Phe Ser Leu Ser Asn Ala Arg Met Gly
1 5 10
<210> 26
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释 =“人工序列的描述: 合成的
肽"
<400> 26
Ile Phe Ser Asn Asp Glu Arg
1 5
<210> 27
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释 =“人工序列的描述: 合成的
肽"
<400> 27
Cys Ala Arg Ile Val Gly Tyr Val Asp Trp Leu Leu Pro Phe Asp Tyr
1 5 10 15
Trp
<210> 28
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释 =“人工序列的描述: 合成的
肽"
<400> 28
Gln Ser Val Ser Ser Asn
1 5
<210> 29
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释 =“人工序列的描述: 合成的
肽"
<400> 29
Gly Ala Ser
1
<210> 30
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释 =“人工序列的描述: 合成的
肽"
<400> 30
Cys Gln Gln Tyr Asn Asn Trp Pro Met Tyr Thr Phe
1 5 10
<210> 31
<211> 363
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释 =“人工序列的描述: 合成的
多核苷酸"
<400> 31
caagtgcagc tgcaggagtc cggaccagga ctggtgaagc cttctcagac cctgtccctg 60
acctgcacag tgagcggagg atctatctcc agcggaggat actattggtc ctggatcaga 120
cagcacccag gcaagggcct ggagtggatc ggctacatct actatagcgg caggacaaac 180
tataatccct ccctgaagag ccgggtgacc atcagcgagg acacatctaa gaaccagttc 240
tctctgaagg tgtcttccgt gaccgccgct gatacagccg tgtactattg tgctcgcgac 300
caggatggct ccggctggta ctttgactat tggggccagg gcgccctggt gaccgtctcg 360
agt 363
<210> 32
<211> 318
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释 =“人工序列的描述: 合成的
多核苷酸"
<400> 32
gagatcgtgc tgacccagtc cccagccaca ctgtctctgt cccccggaga gagggccacc 60
ctgagctgca gggcctccca gtccgtgtcc tcctacctgg cctggtatca gcagaagccc 120
ggccaggctc ctaggctgct gatctacgac gccagcaaca gagctaccgg aatccctgct 180
cgcttctccg gaagcggatc tggcacagac tttaccctga caatcaggtc tctggagcca 240
gaggatttcg ccgtgtacta ttgtcagcag agatccaatt ggtggacctt tggccagggc 300
acaaaggtgg agatcaag 318
<210> 33
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释 =“人工序列的描述: 合成的
多肽"
<400> 33
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Gly
20 25 30
Gly Tyr Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln His Pro Gly Lys Gly Leu Glu
35 40 45
Trp Ile Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Arg Thr Asn Tyr Asn Pro Ser
50 55 60
Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Glu Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe
65 70 75 80
Ser Leu Lys Val Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala Arg Asp Gln Asp Gly Ser Gly Trp Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Ala Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 34
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释 =“人工序列的描述: 合成的
多肽"
<400> 34
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Arg Ser Leu Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp Trp Thr
85 90 95
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 35
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释 =“人工序列的描述: 合成的
肽"
<400> 35
Gly Gly Ser Ile Ser Ser Gly Gly Tyr Tyr
1 5 10
<210> 36
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释 =“人工序列的描述: 合成的
肽"
<400> 36
Ile Tyr Tyr Ser Gly Arg Thr
1 5
<210> 37
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释 =“人工序列的描述: 合成的
肽"
<400> 37
Cys Ala Arg Asp Gln Asp Gly Ser Gly Trp Tyr Phe Asp Tyr Trp
1 5 10 15
<210> 38
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释 =“人工序列的描述: 合成的
肽"
<400> 38
Gln Ser Val Ser Ser Tyr
1 5
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<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释 =“人工序列的描述: 合成的
肽"
<400> 39
Asp Ala Ser
1
<210> 40
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释 =“人工序列的描述: 合成的
肽"
<400> 40
Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp Trp Thr Phe
1 5 10
<210> 41
<211> 363
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释 =“人工序列的描述: 合成的
多核苷酸"
<400> 41
caagtgcagc tgcaggagag cggaccagga ctggtgaagc ctagccagac cctgtctctg 60
acctgcactg tgtccggagg aagcatctcc agcggaggat actattggtc ttggatcagg 120
cagcacccag gcaagggcct ggagtggatc ggctacatct actatagcgg ctctacatac 180
tataacccct ctctgaagtc ccgggtgacc atctccgtgg acacaagcaa gaatcagttc 240
tctctgaagc tgtcttccgt gaccgccgct gatacagccg tgtactattg tgctagggac 300
ctggatggct ccggctggta ctttgactat tggggccagg gcaccctggt gacagtctcg 360
agt 363
<210> 42
<211> 324
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释 =“人工序列的描述: 合成的
多核苷酸"
<400> 42
gagatcgtgc tgacccagtc tcctgccaca ctgagcctgt ctccaggaga gagggccacc 60
ctgtcctgca gagcttccca gagcgtgtcc agctacctgg cctggtatca gcaaaagcca 120
ggccaggctc ccaggctgct gatctacgac gccagcaaca gagctaccgg aatcccagct 180
cgcttctctg gatccggaag cggcacagac tttaccctga caatctcttc cctggagcct 240
gaggatttcg ccgtgtacta ttgtcagcag agatctaatt ggccccctct gacctttggc 300
ggcggcacaa aggtggagat caag 324
<210> 43
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释 =“人工序列的描述: 合成的
多肽"
<400> 43
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Gly
20 25 30
Gly Tyr Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln His Pro Gly Lys Gly Leu Glu
35 40 45
Trp Ile Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser
50 55 60
Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe
65 70 75 80
Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala Arg Asp Leu Asp Gly Ser Gly Trp Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 44
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释 =“人工序列的描述: 合成的
多肽"
<400> 44
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Pro
85 90 95
Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 45
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释 =“人工序列的描述: 合成的
肽"
<400> 45
Gly Gly Ser Ile Ser Ser Gly Gly Tyr Tyr
1 5 10
<210> 46
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释 =“人工序列的描述: 合成的
肽"
<400> 46
Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr
1 5
<210> 47
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释 =“人工序列的描述: 合成的
肽"
<400> 47
Cys Ala Arg Asp Leu Asp Gly Ser Gly Trp Tyr Phe Asp Tyr Trp
1 5 10 15
<210> 48
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释 =“人工序列的描述: 合成的
肽"
<400> 48
Gln Ser Val Ser Ser Tyr
1 5
<210> 49
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释 =“人工序列的描述: 合成的
肽"
<400> 49
Asp Ala Ser
1
<210> 50
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释 =“人工序列的描述: 合成的
肽"
<400> 50
Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Pro Leu Thr Phe
1 5 10
<210> 51
<211> 381
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释 =“人工序列的描述: 合成的
多核苷酸"
<400> 51
caagtgaccc tgaaggagtc cggcccagtg ctggtgaagc ccaccgagac actgaccctg 60
acatgcaccg tgtctggctt ctccctgatc aacgccagaa tgggagtgac atggatcagg 120
cagccacctg gcaaggccct ggagtggctg gctcacatct ttagcaatga cgagaagtcc 180
tacagcacct ctctgaagag caggctgaca atctctaagg atacctccaa gagccaggtg 240
gtgctgacaa tgaccaacat ggaccctgtg gatacagcca cctactattg tgctaggatc 300
ccaggctatt ctcggggctg ggactactat tactatggca tggacgtgtg gggccagggc 360
acaatggtga ccgtctcgag t 381
<210> 52
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释 =“人工序列的描述: 合成的
多核苷酸"
<400> 52
gacatccaga tgacacagtc cccttccagc ctgagcgcct ctgtgggcga cagggtgacc 60
atcacatgcc gggcctccca gggcatcaga aacgatctgg gctggtacca gcagaagccc 120
ggcaaggccc ctaagcgcct gatctatgct gcttccaccc tgcagagcgg agtgccatct 180
aggttctccg gcagcggctc tggcacagag tttaccctga caatctcttc cctgcagcca 240
gaggatttcg ctacctacta ttgtctgcag cacaattctt acccctggac ctttggccag 300
ggcacaaagg tggagatcaa g 321
<210> 53
<211> 127
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释 =“人工序列的描述: 合成的
多肽"
<400> 53
Gln Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Val Leu Val Lys Pro Thr Glu
1 5 10 15
Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ile Asn Ala
20 25 30
Arg Met Gly Val Thr Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu
35 40 45
Trp Leu Ala His Ile Phe Ser Asn Asp Glu Lys Ser Tyr Ser Thr Ser
50 55 60
Leu Lys Ser Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Ser Gln Val
65 70 75 80
Val Leu Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala Arg Ile Pro Gly Tyr Ser Arg Gly Trp Asp Tyr Tyr Tyr Tyr
100 105 110
Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 54
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释 =“人工序列的描述: 合成的
多肽"
<400> 54
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Asp
20 25 30
Leu Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln His Asn Ser Tyr Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 55
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释 =“人工序列的描述: 合成的
肽"
<400> 55
Gly Phe Ser Leu Ile Asn Ala Arg Met Gly
1 5 10
<210> 56
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释 =“人工序列的描述: 合成的
肽"
<400> 56
Ile Phe Ser Asn Asp Glu Lys
1 5
<210> 57
<211> 21
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释 =“人工序列的描述: 合成的
肽"
<400> 57
Cys Ala Arg Ile Pro Gly Tyr Ser Arg Gly Trp Asp Tyr Tyr Tyr Tyr
1 5 10 15
Gly Met Asp Val Trp
20
<210> 58
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释 =“人工序列的描述: 合成的
肽"
<400> 58
Gln Gly Ile Arg Asn Asp
1 5
<210> 59
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释 =“人工序列的描述: 合成的
肽"
<400> 59
Ala Ala Ser
1
<210> 60
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释 =“人工序列的描述: 合成的
肽"
<400> 60
Cys Leu Gln His Asn Ser Tyr Pro Trp Thr Phe
1 5 10
<210> 61
<211> 369
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释 =“人工序列的描述: 合成的
多核苷酸"
<400> 61
caagtgcagc tgcaggagtc tggaccagga ctggtgaagc catctggcac cctgtccctg 60
acatgcgccg tgagcggagg atctatctcc agcaccaact ggtggtcctg ggtgagacag 120
ccacctggca agggactgga gtggatcggc gagatcagcc acaggggctc taccaactac 180
aatccttccc tgaagagccg ggtgacaatc tccgtggaca agagcaagaa tcagttctcc 240
ctgaagctgt cttccgtgac cgccgctgac acagccgtgt actattgtgc tcgcgatcca 300
gagatgaccc tgtactatta ctatggcatg gacgtgtggg gccagggcac cacagtgaca 360
gtctcgagt 369
<210> 62
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释 =“人工序列的描述: 合成的
多核苷酸"
<400> 62
gacatccaga tgacccagag cccttccagc ctgtccgcca gcgtgggcga cagagtgacc 60
atcacatgca gggcttctcg gggcatcaga aacgatctgg gctggtacca gcagaagccc 120
ggcaaggccc ctaagcgcct gatctatgcc gcttcttccc tgcaatctgg cgtgccatcc 180
agattctctg gatccggaag cggaaccgag tttaccctga caatcagctc tctgcagcca 240
gaggatttcg ctacatacta ttgtctgcag cacaattcct accccctgac ctttggcggc 300
ggcacaaagg tggagatcaa g 321
<210> 63
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释 =“人工序列的描述: 合成的
多肽"
<400> 63
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gly
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Thr
20 25 30
Asn Trp Trp Ser Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
35 40 45
Ile Gly Glu Ile Ser His Arg Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu
50 55 60
Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Lys Ser Lys Asn Gln Phe Ser
65 70 75 80
Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Pro Glu Met Thr Leu Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 64
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释 =“人工序列的描述: 合成的
多肽"
<400> 64
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Arg Gly Ile Arg Asn Asp
20 25 30
Leu Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln His Asn Ser Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 65
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释 =“人工序列的描述: 合成的
肽"
<400> 65
Gly Gly Ser Ile Ser Ser Thr Asn Trp
1 5
<210> 66
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释 =“人工序列的描述: 合成的
肽"
<400> 66
Ile Ser His Arg Gly Ser Thr
1 5
<210> 67
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释 =“人工序列的描述: 合成的
肽"
<400> 67
Cys Ala Arg Asp Pro Glu Met Thr Leu Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp
1 5 10 15
Val Trp
<210> 68
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释 =“人工序列的描述: 合成的
肽"
<400> 68
Arg Gly Ile Arg Asn Asp
1 5
<210> 69
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释 =“人工序列的描述: 合成的
肽"
<400> 69
Ala Ala Ser
1
<210> 70
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释 =“人工序列的描述: 合成的
肽"
<400> 70
Cys Leu Gln His Asn Ser Tyr Pro Leu Thr Phe
1 5 10
<210> 71
<211> 369
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释 =“人工序列的描述: 合成的
多核苷酸"
<400> 71
caggtgcagc tacaggagtc tggtcctgtg ctggtgaaac ccacagagac cctcacgctg 60
acctgcaccg tctctgggtt ctcactcagc aatgctagaa tgggtgttag ctggatccgt 120
cagcccccag ggaaggccct ggagtggctt gcacacattt tttcaaatga cgaaagatcc 180
tacagtccat ctctgaagag caggctcacc atctccaagg gcacctccaa aagccaggtg 240
gtccttacca tgaccaacat ggaccctgtg gacacagcca catattactg tgcacggata 300
gtaggatatg ttgactggtt attacccttt gactactggg gccagggaac cctggtcacg 360
gtctcgagt 369
<210> 72
<211> 324
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释 =“人工序列的描述: 合成的
多核苷酸"
<400> 72
gaaacgacac tcacgcagtc tccagccacc ctgtctgtgt ctccagggga aagagccacc 60
ctctcctgca gggccagtca gagcgttagc agcaacttag cctggtacca gcagaaacct 120
ggccaggctc ccaggctcct catctatggt gcatccacca gggccactgg tatcccagcc 180
aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagag ttcactctca ccatcagcag cctgcagtct 240
gaagattttg cagtttatta ctgtcagcag tataataact ggcccatgta cacttttggc 300
caggggacca agctggagat taag 324
<210> 73
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释 =“人工序列的描述: 合成的
多肽"
<400> 73
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Val Leu Val Lys Pro Thr Glu
1 5 10 15
Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Asn Ala
20 25 30
Arg Met Gly Val Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu
35 40 45
Trp Leu Ala His Ile Phe Ser Asn Asp Glu Arg Ser Tyr Ser Pro Ser
50 55 60
Leu Lys Ser Arg Leu Thr Ile Ser Lys Gly Thr Ser Lys Ser Gln Val
65 70 75 80
Val Leu Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala Arg Ile Val Gly Tyr Val Asp Trp Leu Leu Pro Phe Asp Tyr
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 74
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释 =“人工序列的描述: 合成的
多肽"
<400> 74
Glu Thr Thr Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Asn
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Asn Trp Pro Met
85 90 95
Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 75
<211> 330
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释 =“人工序列的描述: 合成的
多肽"
<400> 75
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
225 230 235 240
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330
<210> 76
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释 =“人工序列的描述: 合成的
多肽"
<400> 76
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
1 5 10 15
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
20 25 30
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
35 40 45
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
50 55 60
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
65 70 75 80
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
85 90 95
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
100 105
<210> 77
<211> 993
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 77
Met Pro Ala Leu Ala Arg Asp Gly Gly Gln Leu Pro Leu Leu Val Val
1 5 10 15
Phe Ser Ala Met Ile Phe Gly Thr Ile Thr Asn Gln Asp Leu Pro Val
20 25 30
Ile Lys Cys Val Leu Ile Asn His Lys Asn Asn Asp Ser Ser Val Gly
35 40 45
Lys Ser Ser Ser Tyr Pro Met Val Ser Glu Ser Pro Glu Asp Leu Gly
50 55 60
Cys Ala Leu Arg Pro Gln Ser Ser Gly Thr Val Tyr Glu Ala Ala Ala
65 70 75 80
Val Glu Val Asp Val Ser Ala Ser Ile Thr Leu Gln Val Leu Val Asp
85 90 95
Ala Pro Gly Asn Ile Ser Cys Leu Trp Val Phe Lys His Ser Ser Leu
100 105 110
Asn Cys Gln Pro His Phe Asp Leu Gln Asn Arg Gly Val Val Ser Met
115 120 125
Val Ile Leu Lys Met Thr Glu Thr Gln Ala Gly Glu Tyr Leu Leu Phe
130 135 140
Ile Gln Ser Glu Ala Thr Asn Tyr Thr Ile Leu Phe Thr Val Ser Ile
145 150 155 160
Arg Asn Thr Leu Leu Tyr Thr Leu Arg Arg Pro Tyr Phe Arg Lys Met
165 170 175
Glu Asn Gln Asp Ala Leu Val Cys Ile Ser Glu Ser Val Pro Glu Pro
180 185 190
Ile Val Glu Trp Val Leu Cys Asp Ser Gln Gly Glu Ser Cys Lys Glu
195 200 205
Glu Ser Pro Ala Val Val Lys Lys Glu Glu Lys Val Leu His Glu Leu
210 215 220
Phe Gly Thr Asp Ile Arg Cys Cys Ala Arg Asn Glu Leu Gly Arg Glu
225 230 235 240
Cys Thr Arg Leu Phe Thr Ile Asp Leu Asn Gln Thr Pro Gln Thr Thr
245 250 255
Leu Pro Gln Leu Phe Leu Lys Val Gly Glu Pro Leu Trp Ile Arg Cys
260 265 270
Lys Ala Val His Val Asn His Gly Phe Gly Leu Thr Trp Glu Leu Glu
275 280 285
Asn Lys Ala Leu Glu Glu Gly Asn Tyr Phe Glu Met Ser Thr Tyr Ser
290 295 300
Thr Asn Arg Thr Met Ile Arg Ile Leu Phe Ala Phe Val Ser Ser Val
305 310 315 320
Ala Arg Asn Asp Thr Gly Tyr Tyr Thr Cys Ser Ser Ser Lys His Pro
325 330 335
Ser Gln Ser Ala Leu Val Thr Ile Val Glu Lys Gly Phe Ile Asn Ala
340 345 350
Thr Asn Ser Ser Glu Asp Tyr Glu Ile Asp Gln Tyr Glu Glu Phe Cys
355 360 365
Phe Ser Val Arg Phe Lys Ala Tyr Pro Gln Ile Arg Cys Thr Trp Thr
370 375 380
Phe Ser Arg Lys Ser Phe Pro Cys Glu Gln Lys Gly Leu Asp Asn Gly
385 390 395 400
Tyr Ser Ile Ser Lys Phe Cys Asn His Lys His Gln Pro Gly Glu Tyr
405 410 415
Ile Phe His Ala Glu Asn Asp Asp Ala Gln Phe Thr Lys Met Phe Thr
420 425 430
Leu Asn Ile Arg Arg Lys Pro Gln Val Leu Ala Glu Ala Ser Ala Ser
435 440 445
Gln Ala Ser Cys Phe Ser Asp Gly Tyr Pro Leu Pro Ser Trp Thr Trp
450 455 460
Lys Lys Cys Ser Asp Lys Ser Pro Asn Cys Thr Glu Glu Ile Thr Glu
465 470 475 480
Gly Val Trp Asn Arg Lys Ala Asn Arg Lys Val Phe Gly Gln Trp Val
485 490 495
Ser Ser Ser Thr Leu Asn Met Ser Glu Ala Ile Lys Gly Phe Leu Val
500 505 510
Lys Cys Cys Ala Tyr Asn Ser Leu Gly Thr Ser Cys Glu Thr Ile Leu
515 520 525
Leu Asn Ser Pro Gly Pro Phe Pro Phe Ile Gln Asp Asn Ile Ser Phe
530 535 540
Tyr Ala Thr Ile Gly Val Cys Leu Leu Phe Ile Val Val Leu Thr Leu
545 550 555 560
Leu Ile Cys His Lys Tyr Lys Lys Gln Phe Arg Tyr Glu Ser Gln Leu
565 570 575
Gln Met Val Gln Val Thr Gly Ser Ser Asp Asn Glu Tyr Phe Tyr Val
580 585 590
Asp Phe Arg Glu Tyr Glu Tyr Asp Leu Lys Trp Glu Phe Pro Arg Glu
595 600 605
Asn Leu Glu Phe Gly Lys Val Leu Gly Ser Gly Ala Phe Gly Lys Val
610 615 620
Met Asn Ala Thr Ala Tyr Gly Ile Ser Lys Thr Gly Val Ser Ile Gln
625 630 635 640
Val Ala Val Lys Met Leu Lys Glu Lys Ala Asp Ser Ser Glu Arg Glu
645 650 655
Ala Leu Met Ser Glu Leu Lys Met Met Thr Gln Leu Gly Ser His Glu
660 665 670
Asn Ile Val Asn Leu Leu Gly Ala Cys Thr Leu Ser Gly Pro Ile Tyr
675 680 685
Leu Ile Phe Glu Tyr Cys Cys Tyr Gly Asp Leu Leu Asn Tyr Leu Arg
690 695 700
Ser Lys Arg Glu Lys Phe His Arg Thr Trp Thr Glu Ile Phe Lys Glu
705 710 715 720
His Asn Phe Ser Phe Tyr Pro Thr Phe Gln Ser His Pro Asn Ser Ser
725 730 735
Met Pro Gly Ser Arg Glu Val Gln Ile His Pro Asp Ser Asp Gln Ile
740 745 750
Ser Gly Leu His Gly Asn Ser Phe His Ser Glu Asp Glu Ile Glu Tyr
755 760 765
Glu Asn Gln Lys Arg Leu Glu Glu Glu Glu Asp Leu Asn Val Leu Thr
770 775 780
Phe Glu Asp Leu Leu Cys Phe Ala Tyr Gln Val Ala Lys Gly Met Glu
785 790 795 800
Phe Leu Glu Phe Lys Ser Cys Val His Arg Asp Leu Ala Ala Arg Asn
805 810 815
Val Leu Val Thr His Gly Lys Val Val Lys Ile Cys Asp Phe Gly Leu
820 825 830
Ala Arg Asp Ile Met Ser Asp Ser Asn Tyr Val Val Arg Gly Asn Ala
835 840 845
Arg Leu Pro Val Lys Trp Met Ala Pro Glu Ser Leu Phe Glu Gly Ile
850 855 860
Tyr Thr Ile Lys Ser Asp Val Trp Ser Tyr Gly Ile Leu Leu Trp Glu
865 870 875 880
Ile Phe Ser Leu Gly Val Asn Pro Tyr Pro Gly Ile Pro Val Asp Ala
885 890 895
Asn Phe Tyr Lys Leu Ile Gln Asn Gly Phe Lys Met Asp Gln Pro Phe
900 905 910
Tyr Ala Thr Glu Glu Ile Tyr Ile Ile Met Gln Ser Cys Trp Ala Phe
915 920 925
Asp Ser Arg Lys Arg Pro Ser Phe Pro Asn Leu Thr Ser Phe Leu Gly
930 935 940
Cys Gln Leu Ala Asp Ala Glu Glu Ala Met Tyr Gln Asn Val Asp Gly
945 950 955 960
Arg Val Ser Glu Cys Pro His Thr Tyr Gln Asn Arg Arg Pro Phe Ser
965 970 975
Arg Glu Met Asp Leu Gly Leu Leu Ser Pro Gln Ala Gln Val Glu Asp
980 985 990
Ser
<210> 78
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释 =“人工序列的描述: 合成的
肽"
<400> 78
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
1 5 10 15
<210> 79
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释 =“人工序列的描述: 合成的
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<400> 79
His His His His His
1 5