一种大麦HvFRF1基因、蛋白、表达载体以及用途

技术领域

本发明属于基因工程技术领域，尤其涉及一种大麦HvFRF1基因、蛋白、表达载体以及用途。

背景技术

干旱是影响人类生产和作物生长最主要的气候灾害，其发生频率高、持续时间长、波及范围广(Mosley等，2015；Caine等，2019年)。近年来随着全球变暖和极端气候变化异常，干旱日益加剧，己成为全世界粮食生产最重要的限制因素，严重威胁粮食安全。根据紧急灾难数据库(EM-DAT，https://www.emdat.be/)资料显示，干旱发生的频次占全球自然灾害的二十分之一，带来的直接损失占所有自然灾害直接损失的三分之一以上。因此，作物干旱研究受到全世界的特别关注，而培育抗旱作物品种提高作物的抗旱能力，对于充分利用土地与自然资源、促进农业可持续发展具有非常重要的现实意义。

大麦(Hordeum vulgare L.)是世界上最古老的二倍体作物之一，适于在高海拔、寒凉、干旱、盐碱、瘠薄土地种植(Carter等，2019；Kebede等，2019)，不与主粮作物竞争耕地资源，在应对全球气候变化以及保障区域性粮食安全方面意义重大。过去五年，我国大麦年均种植面积基本稳定在90～100万公顷，总产量450～500万吨，而大麦年消费量近1500万吨，年最大进口量超过1000万吨(FAOSTAT，http://faostat.fao.org/)。大麦的用途广泛，集食用、饲用、酿造、药用等多种功用于一身。由于大麦营养丰富，又有保健疗效，已成为加工大众化、经济型、方便型、食疗型食品的理想原料。因此，挖掘大麦抗旱种质及关键抗旱基因，明确其抗旱机制，对开发抵御干旱胁迫新途径，提高作物抗旱能力及产量具有重要意义。

FRS是一类新的转录因子，由一个或多个失去功能的MULE转座子经过“分子驯化”而产生(Lin等，2007)，其家族成员通过转录激活或抑制不同靶基因的表达来调节各种细胞过程，在植物生长发育和抗逆过程中发挥着重要功能(Ouyang等，2011；Li等，2016；Ritter等，2017)。

通过上述分析，现有技术存在的问题及缺陷为：

FRF是一类截短的FRS，与FRS竞争DNA结合位点，进而调控靶基因的表达。然而，关于这类基因的研究主要集中在拟南芥上，有关作物的FRF基因现有技术尚鲜有报道。不能为大麦抗旱育种与生产提供理论依据；因此鉴定大麦FRF基因，探究其调控干旱胁迫的功能，对提高作物抵御干旱胁迫能力和作物的遗传改良具有重要意义。

发明内容

为克服相关技术中存在的问题，本发明公开实施例提供了一种大麦HvFRF1基因、蛋白、表达载体以及用途。具体涉及一种大麦HvFRF1基因及其用途。

所述技术方案如下：一种大麦HvFRF1基因，该大麦HvFRF1基因的核苷酸序列如SEQID NO.1所示。

在一实施例中，该大麦HvFRF1基因为从大麦中克隆得到的基因。

本发明的另一目的在于提供一种所述的大麦HvFRF1基因编码的蛋白，所述蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

本发明的另一目的在于提供根据所述大麦HvFRF1基因通过同源重组构建的拟南芥过表达载体super1300:HvFRF1。核苷酸序列如SEQ ID NO.26所示。

本发明的另一目的在于提供一种根据所述大麦HvFRF1基因通过Gateway方法构建的大麦过表达载体pBract214:HvFRF1。核苷酸序列如SEQ ID NO.29所示。

本发明的另一目的在于提供一种大麦HvFRF1基因在获取具有抗旱性拟南芥株系上的应用。

本发明的另一目的在于提供一种大麦HvFRF1基因在获取具有抗旱性大麦株系上的应用。

本发明的另一目的在于提供一种大麦HvFRF1基因受干旱胁迫诱导下在大麦根系中组织表达上的应用。

本发明的另一目的在于提供一种大麦HvFRF1基因在调控拟南芥和大麦抗旱性筛选拟南芥品种和大麦品种上的用途。

结合上述的所有技术方案，本发明所具备的优点及积极效果为：

第一、针对上述现有技术存在的技术问题以及解决该问题的难度，紧密结合本发明的所要保护的技术方案以及研发过程中结果和数据等，详细、深刻地分析本发明技术方案如何解决的技术问题，解决问题之后带来的一些具备创造性的技术效果。具体描述如下：

随着全球变暖导致干旱频发且日益加剧，干旱己成为全世界粮食生产最重要的限制因素，严重威胁粮食安全，作物抗旱研究受到全世界的广泛关注。挖掘作物抗旱相关基因、培育抗旱作物品种，以应对全球气候变化和人口增长对抗旱作物的需求，对于农业可持续发展和保障粮食安全具有重要的意义。然而，由于抗旱性状的遗传复杂性，已成为解析作物抗旱遗传基础和培育突破性强抗(耐)旱作物品种的重要瓶颈。大麦是世界上第四大禾谷类作物，适于在干旱、盐碱、瘠薄等土地种植，是挖掘优异抗旱基因的重要材料。本发明通过对大麦HvFRF1基因的克隆和分析，并结合拟南芥和大麦转基因过表达技术对该基因进行功能验证，结果显示，过表达HvFRF1基因能够显著提高拟南芥和大麦的抗旱性。本发明可为大麦及其他作物抗旱遗传改良提供优异的基因资源，创新和丰富作物抗旱遗传调控理论，对选育优良的抗旱作物新品种亦具有重要指导意义。

第二、把技术方案看作一个整体或者从产品的角度，本发明所要保护的技术方案具备的技术效果和优点，具体描述如下：

本发明公开了大麦HvFRF1基因及其在调控拟南芥和大麦对干旱胁迫的耐受性方面的用途，所述大麦HvFRF1基因的CDS区核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，本发明通过对大麦HvFRF1基因的克隆和分析，并结合拟南芥和大麦转基因技术在拟南芥和大麦上对该基因功能验证。发现过表达HvFRF1基因能显著提高拟南芥和大麦植株对干旱胁迫的耐受性。本发明为大麦抗旱育种与生产提供了理论依据和相关基因。

附图说明

此处的附图被并入说明书中并构成本说明书的一部分，示出了符合本公开的实施例，并与说明书一起用于解释本公开的原理。

图1是本发明实施例提供的发明实施例提供一种super1300:HvFRF1载体构建方法流程图；

图2A是本发明实施例提供的HvFRF1功能域与保守序列分析中HvFRF1功能域预测结果，含有一个典型的FAR1功能域图；

图2B是本发明实施例提供的HvFRF1功能域与保守序列分析中大麦HvFRF1与拟南芥AtFRF1、AtFRF2、AtFRF3、AtFRF4蛋白序列比对结果图，方框标注了FAR1功能域所在位置，三角标注了FAR1功能域中保守的氨基酸；

图3A是本发明实施例提供的HvFRF1基因的进化分析和响应干旱胁迫表达分析中HvFRF1与拟南芥、水稻、小麦中同源蛋白的进化树分析图，该基因与拟南芥和水稻中的FRF成员亲缘关系较近；

图3B是本发明实施例提供的HvFRF1基因的进化分析和响应干旱胁迫表达分析中干旱胁迫7天和14天后HvFRF1基因的表达情况图，随着干旱胁迫时间的延长，HvFRF1基因受诱导上调表达倍数越大；

图4A是本发明实施例提供的HvHRF1基因的表达分析中qRT-PCR分析HvHRF1基因在大麦苗期和分蘖期的表达情况图，该基因在大麦根中的表达量更高；

图4B是本发明实施例提供的HvHRF1基因的表达分析中HvFRF1基因在拟南芥原生质体亚细胞水平的定位情况图，该基因主要定位在细胞核中，红色荧光为细胞核定位标记；Bar＝10μm；

图4C是本发明实施例提供的HvHRF1基因的表达分析中原位PCR分析HvHRF1基因在大麦根和叶片中的表达部位图，该基因主要在根的表皮细胞、根和叶片的维管束中高表达；e,epidermis,表皮；c,cortex,皮层薄壁细胞；en,endodermis,内皮层；x,xylem,木质部；xp,xylem parenchyma,木质部薄壁组织；p,phloem,韧皮部；bs,Bundle sheath；维管束鞘；xv,xylem vessel,木质部导管；pv,phloem vessel,韧皮部导管；ms,mesophyll,叶肉；Bar＝50μm；

图5A是本发明实施例提供的拟南芥表达载体构建示意图以及正常浇水和干旱处理条件下HvFRF1转基因拟南芥株系和WT的苗期表型中拟南芥过表达载体super1300:HvFRF1的构建示意图；super启动子驱动HvFRF1基因，35S启动子驱动抗性基因潮霉素(Hygromycin)，NOS表示终止子；

图5B是本发明实施例提供的拟南芥表达载体构建示意图以及正常浇水和干旱处理条件下HvFRF1转基因拟南芥株系和WT的苗期表型中过表达拟南芥株系OE1、OE2、OE3和WT在干旱处理后的抗旱表型；

图5C是本发明实施例提供的拟南芥表达载体构建示意图以及正常浇水和干旱处理条件下HvFRF1转基因拟南芥株系和WT的苗期表型中过表达拟南芥株系OE1、OE2、OE3和WT在干旱处理后的MDA含量图；

图5D是本发明实施例提供的拟南芥表达载体构建示意图以及正常浇水和干旱处理条件下HvFRF1转基因拟南芥株系和WT的苗期表型中过表达拟南芥株系OE1、OE2、OE3和WT在干旱处理后的脯氨酸含量图；

图6A是本发明实施例提供的大麦过表达载体构建示意图以及正常浇水和干旱处理下转基因大麦株系和WT的苗期表型中大麦过表达载体pBract214:HvFRF1的构建示意图；35S启动子驱动抗性基因潮霉素(Hygromycin)，玉米Ubi启动子(ZmUbi)驱动HvFRF1基因，attR1和attR2是Gateway方法中LR反应交换位置，NOS表示终止子；

图6B是本发明实施例提供的大麦过表达载体构建示意图以及正常浇水和干旱处理下转基因大麦株系和WT的苗期表型中过表达大麦株系OE1、OE2和WT在干旱处理后的抗旱表型；

图6C是本发明实施例提供的大麦过表达载体构建示意图以及正常浇水和干旱处理下转基因大麦株系和WT的苗期表型中过表达大麦株系OE1、OE2和WT中HvFRF1基因的表达量；

图6D是本发明实施例提供的大麦过表达载体构建示意图以及正常浇水和干旱处理下转基因大麦株系和WT的苗期表型中过表达大麦株系OE1、OE2和WT在干旱处理后的地上部干重。

具体实施方式

为使本发明的上述目的、特征和优点能够更加明显易懂，下面结合附图对本发明的具体实施方式做详细的说明。在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本发明。但是本发明能够以很多不同于在此描述的其他方式来实施，本领域技术人员可以在不违背本发明内涵的情况下做类似改进，因此本发明不受下面公开的具体实施的限制。

一、解释说明实施例：

本发明实施例提供一种从大麦中克隆得到的具有抗旱特性的基因，为培育抗旱大麦品种提供相关基因及理论基础。

本发明实施例还提供一种大麦HvFRF1基因在调控拟南芥和大麦抗旱性中筛选拟南芥品种和大麦品种上的用途，所述大麦HvFRF1基因的CDS区核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，HvFRF1基因编码的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

其中相关序列包括：

CDS核苷酸序列SEQ ID NO.1：ATGCCGGAGGTGATGTCCACGCCACAGCAACCCACAGCCATGATGAGATTTGACACTCTTGAGGATGCTGAGAAACACTACAAACTGTATGCGAGGCAGAAAGGTTTTGGAGTAAGGTATTGTTTCCGAAAAAGGTCAGAGGCTAGTGGTGAACTGATAAGAGCATCACTTGTCTGCCATAGAGCTGGGTTGAAGATCAAGAGGAAAGTAGACACCCAAAACCCGCAACCTATTGCCCCTGAGAGGAGTAGGAATACAACTGAAAGAACAAACTGCCCAGCCCGTATGTTTGTGAAGCGAAGAGATAATGCCTGGGTTGTAACAGAAATAAATGACAACCATAACCACCCTCTCATAAAGAAATGGTCGCTGACAGGATACCTACGATCACATAGACATATCCCTGAAGAAGAACAACAGTTTGTGAAGTTGCTTCATTCGTGCAATCTAGAACCTTCTAGACAGATGCAGTTGTTGACAGAGTTGCATGGCCAACGTGAAGCCATTGGTTACACTGACAAAGACTTGGCAAATTTGCTAGCAAAGTTCCGGGCTGAGCACAAATACACTGATATGCAGGACACGATTGAGTACTTCAAAAGCAGTCAACAGCTTGATAAAGACTTTTTTTACAAGTACAAGCTTGATGATGAAAATAAGGTCCAATGCATTTACTGGATTGATGGTTCAGCGAGAAGGGCTTACAAGTTTTTCAGTGATTGTGTCTCTTTTGACACAACATACTTGACCAATATATACAAGATGCCTTGTGCCCGTTTATTGGTATAA。

氨基酸序列SEQ ID NO.2：MPEVMSTPQQPTAMMRFDTLEDAEKHYKLYARQKGFGVRYCFRKRSEASGELIRASLVCHRAGLKIKRKVDTQNPQPIAPERSRNTTERTNCPARMFVKRRDNAWVVTEINDNHNHPLIKKWSLTGYLRSHRHIPEEEQQFVKLLHSCNLEPSRQMQLLTELHGQREAIGYTDKDLANLLAKFRAEHKYTDMQDTIEYFKSSQQLDKDFFYKYKLDDENKVQCIYWIDGSARRAYKFFSDCVSFDTTYLTNIYKMPCARLLV。

本发明实施例还提供一种过表达载体super1300:HvFRF1和pBract214:HvFRF1。

其中，super1300为本实验室保存的拟南芥过表达载体，pBract214是英国格拉斯哥大学Peter Dominy博士提供的大麦过表达载体。本发明分别通过同源重组和Gateway方法将HvFRF1基因连入上述这两个载体，成功构建了HvFRF1基因的拟南芥过表达载体super1300:HvFRF1(SEQ ID NO.26)和大麦过表达载体pBract214:HvFRF1(SEQ ID NO.29)，可分别在拟南芥和大麦上验证HvFRF1基因的功能。

如图1所示，本发明实施例提供一种super1300:HvFRF1载体构建方法，包括以下步骤：

S101，以保存的pEASY:HvFRF1质粒为模板，设计一对引物HvFRF1-OE-F1和HvFRF1-OE-R1扩增HvFRF1基因的ORF片段；引物序列为：SEQ ID NO.15、SEQ ID NO.16；

S102，采用

S103，将上述质粒转化农杆菌感受态细胞EHA105，涂布利福平+卡那霉素抗性的YEB平板，28℃培养40-48h左右，PCR验证阳性克隆；将阳性克隆菌液加入等体积的30％无菌甘油，混匀后液氮快速冷冻，保存于-80℃备用。

本发明实施例还提供一种pBract214:HvFRF1载体构建方法包括以下步骤：

采用Gateway方法构建HvFRF1基因的过表达载体，即pBract214:HvFRF1。以保存的pEASY:HvFRF1质粒为模板，设计一对引物HvFRF1-OE-F2和HvFRF1-OE-R2扩增HvFRF1基因的ORF片段。引物序列为：SEQ ID NO.21、SEQ ID NO.22；

用1％的琼脂糖凝胶电泳检测PCR扩增产物，对目标产物进行胶回收纯化，测量回收产物浓度。随后采用Gateway BP Clonase II enzyme mix(Invitrogen，美国)将已知浓度的基因回收产物与pDONR(Zeo)入门载体进行BP重组反应。

25℃反应4h，加入1μL的Proteinase K，37℃继续反应10min，反应产物立即转化大肠杆菌DH5α感受态细胞，涂布博来霉素抗性的LB固体培养基，37℃培养16h左右，挑取单克隆，摇菌进行菌液PCR，将阳性克隆的菌液送往公司测序，测序正确的单克隆进行扩繁，菌液甘油保存和提质粒保存，质粒命名为pDONR(Zeo):HvFRF1。

采用Gateway LR Clonase II enzyme mix(Invitrogen，美国)将上述已知浓度的质粒与目标载体pBract214(由英国格拉斯哥大学Peter Dominy博士提供)进行LR重组反应。

25℃反应4h，加入1μl的Proteinase K，37℃继续反应10min，反应产物立即转化大肠杆菌DH5α感受态细胞，涂布卡那霉素抗性的LB固体培养基，37℃培养16h左右，挑取单克隆，摇菌进行菌液PCR，将有目的条带的菌液送往公司测序，测序正确的单克隆进行扩繁，菌液甘油保存和提质粒保存，质粒分别命名为pBract214:HvFRF1；

将测序正确的pBract214:HvFRF1质粒和pSoup质粒共同转化农杆菌感受态细胞AGL1，涂布利福平+卡那霉素抗性的YEB平板，28℃培养40-48h左右，PCR验证阳性克隆。取阳性克隆菌液100μL加入到10mL的MG培养液(含25μg/mL利福平，50μg/mL卡那霉素，pH＝7.2)中培养，28℃，180rpm/min，摇菌至OD600＝0.6-0.7，加入等体积的30％无菌甘油，混匀后液氮快速冷冻，保存于-80℃备用。

实施例1

本发明实施例从大麦抗旱品种Hindmarsh中鉴定克隆到了具有抗旱特性的基因HvFRF1，Hindmarsh为来源于澳大利亚的抗旱高产栽培品种。

HvFRF1基因的克隆与生物信息学分析：基于大麦FRS基因家族分析和qRT-PCR分析，鉴定到干旱处理下高表达的FRF成员，从Hindmarsh中克隆了该基因的全长CDS区序列，命名为HvFRF1。该基因的CDS区核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

HvFRF1基因CDS区全长789bp，编码一个262aa的蛋白序列，该蛋白分子量为31kDa，等电点PI＝9.2。本发明还提供了所述的大麦HvFRF1基因编码的蛋白质，其氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。HvFRF1蛋白序列功能域预测分析，结果显示该蛋白含有1个FAR1功能域，因此，将该基因分类为FRS基因家族中的FRF成员。多序列比对结果显示HvFRF1蛋白含有FAR1功能域HMM logo图中的保守氨基酸。将HvFRF1蛋白序列进行进化树分析，结果显示该蛋白与水稻中3个FRF成员位于同一进化枝上。

HvFRF1基因的表达分析：研究结果表明，HvFRF1基因在大麦根、茎、叶中均有表达，但在根中的表达量最高；该基因受干旱胁迫诱导显著上调表达。亚细胞定位结果显示HvFRF1基因定位在细胞核中；组织定位结果显示HvFRF1基因主要在根系的表皮细胞和维管束中表达，在叶片的维管束中表达，表明该基因与水分的吸收和运输有关。

HvFRF1基因的功能鉴定：通过同源重组方法，将HvFRF1基因的全长CDS(带终止密码子)连入过表达载体super1300，构建了HvFRF1基因的拟南芥过表达载体super1300:HvFRF1，转化拟南芥Columbia，获得了稳定的转基因株系。干旱处理条件下HvFRF1转基因拟南芥株系的抗旱性显著强于野生型。

干旱处理条件下HvFRF1转基因拟南芥株系中丙二醛(MDA)含量显著低于野生型，脯氨酸含量显著高于野生型，表明HvFRF1基因过表达拟南芥可以通过降低膜脂过氧化程度和积累渗透调节物质脯氨酸增强植株的抗旱性。通过Gateway方法，将HvFRF1基因的全长CDS(带终止密码子)连入过表达载体pBract214，构建了HvFRF1基因的大麦过表达载体pBract214:HvFRF1，转化大麦Golden Promise，获得了稳定的转基因株系。

干旱处理条件下HvFRF1转基因大麦株系的抗旱性显著强于野生型，干旱处理条件下HvFRF1转基因大麦株系地上部干重显著高于野生型，能够保持更高的生物量。

实施例2

本发明以澳大利亚抗旱和高产栽培品种Hindmarsh为主要材料，克隆和分析调控大麦抗旱性的关键基因，对阐明大麦响应干旱胁迫的分子机理和大麦抗旱育种及生产工作具有重要的指导意义。

在本发明实施例中，HvFRF1基因CDS区克隆和分析包括：

(1)HvFRF1基因CDS区序列的克隆

基于大麦FRS基因家族分析和qRT-PCR表达分析结果，鉴定到一个响应干旱胁迫的FRF成员，从Hindmarsh中克隆了该基因的全长CDS区序列(如SEQ ID NO.1所示)，将其命名为HvFRF1。

使用SteadyPure植物RNA提取试剂盒(艾科瑞，中国)提取Hindmarsh叶片总RNA，并用DNaseI去除总RNA中基因组DNA污染，用Evo M-MLV Plus 1st Strand cDNA SynthesisKit反转录试剂盒(艾科瑞，中国)将提取的总RNA反转录成单链的cDNA。根据Blast到的序列进行特异性引物设计，具体引物序列为：

SEQ ID NO.3：HvFRF1-CDS-F：

5'-GGTTTTGTATGTTATGCAGATCGTGAGAC-3'；

SEQ ID NO.4：

HvFRF1-CDS-R：5'-CCAAACTGAATTGACTGTCCATGGTTG-3'；

采用KOD OneTM PCR Master Mix-Blue(东洋纺，日本)扩增基因的CDS区。PCR体系：

PCR程序：首先94℃预变性2min，然后98℃变性10s，58℃退火5s，68延伸5s，变性退火延伸循环35次，再68延伸5min。将扩增出来的产物，连接到pEASY(全式金，中国)载体，转化大肠杆菌DH5α，挑取阳性克隆送公司测序，测序正确的分别进行提质粒和甘油保存，所得质粒命名为pEASY:HvFRF1质粒。PCR引物合成和基因测序工作由北京擎科生物科技有限公司完成。

(2)HvFRF1基因的序列分析

将HvFRF1蛋白序列通过SMART(https://smart.embl.de/)网站进行功能域的预测和分析，结果显示该蛋白含有一个FAR1功能域(图2A)。说明HvFRF1为FAR1-RELATEDSEQUENCES-RELATED FACTOR(FRF)。将HvFRF1蛋白序列与拟南芥的AtFRF1、AtFRF2、AtFRF3、AtFRF4蛋白序列进行保守域分析，结果显示，上述蛋白序列均含有FAR1的保守氨基酸(图2B)，通过HMM logo图也可以显示相同的保守氨基酸，字母越大表示该氨基酸越保守。

通过Clustal W和MEGA 7软件将包含了HvFRF1蛋白序列在内的拟南芥中的FHY3和FAR1与12个FRS、4个FRF和水稻中1个FRS、3个FRF以及小麦中1个FRS蛋白序列构建系统进化树，结果显示HvFRF1确实属于FRF亚族，在进化上与水稻和拟南芥的FRF位于同一进化分枝(图3A)。

3.HvFRF1基因响应干旱胁迫表达情况

选取饱满一致的大麦Hindmarsh种子播种于装有等量营养土的5L塑料培养盆中，每盆播种6粒种子，播种前每盆浇一次等量的营养液，发芽后7天每盆定苗4株，期间每盆等量浇水。两叶一心期进行干旱处理，设两个处理：对照，在整个过程中每盆正常等量浇水，保持土壤水分含量为30-40％；干旱处理，停止浇水使幼苗遭受干旱胁迫。于停止浇水后7天和14天分别取对照和干旱处理植株的功能叶进行HvFRF1基因响应干旱胁迫表达分析。

采用SteadyPure植物RNA提取试剂盒(艾科瑞，中国)分别提取各样本的总RNA，用Evo M-MLV RT Kit with gDNA Clean for qPCRⅡ反转录试剂盒(艾科瑞，中国)将各样本总RNA分别反转录成单链cDNA。用SYBR绿色荧光酶复合物(艾科瑞，中国)和CFX ConnectReal-Time System PCR仪(Bio-Red，美国)对相应样本中HvFRF1基因的表达进行qRT-PCR分析，并用一个内参基因Actin对表达值进行矫正处理。PCR体系为：

PCR程序为：首先94℃预变性30s，然后95℃变性5s，60℃延伸30s，变性延伸循环40次。溶解曲线程序为：60℃-95℃，每步反应5s，按0.5℃递增。利用2

SEQ ID NO.5：HvFRF1-qRT-PCR-F：5'-CCCAAAACCCGCAACCTATTG-3'；

SEQ ID NO.6：HvFRF1-qRT-PCR-R：5'-GTAGGTATCCTGTCAGCGACC-3'；

SEQ ID NO.7：Actin-F：5'-TCGCTCCACCTGAGAGGAAG-3'；

SEQ ID NO.8：Actin-R：5'-GCTAGGATGGACCCTCCGAT-3'；

qRT-PCR结果显示，HvFRF1基因受干旱诱导上调表达，并且随着干旱胁迫程度加强，诱导上调表达倍数越高(图3B)，说明HvFRF1基因响应干旱胁迫。

(3)HvFRF1基因的亚细胞定位情况

以保存的pEASY:HvFRF1质粒为模板，设计一对引物HvFRF1-super promoter-GFP-F和HvFRF1-super promoter-GFP-R扩增HvFRF1基因的ORF片段(去除终止密码子TAA)，用于亚细胞定位分析。引物序列为(下划线标出的部分为酶切位点)：

SEQ ID NO.9：HvFRF1-super promoter-GFP-F：5'-CCAAATCGACTCTAG

SEQ ID NO.10：HvFRF1-super promoter-GFP-R：5'-GCCCTTGCTCACCAT

采用

取3-4周苗龄拟南芥的叶片置于50ml三角瓶，加入5-10ml酶解液(1.5％Cellulase R10，0.75％ Macerozyme R10，0.6M Mannitol，10mM MES，40％2-Hydroxy-1-ethanethio)使叶片全部浸泡，抽真空后用封口膜包好，23℃弱光酶解3h。用40μm尼龙纱布过滤酶解产物，收集原生质体至2ml离心管中，4℃低温400rpm/min离心5min收集沉淀，并用预冷的W5溶液(154mM NaCl，125mM CaCl

结果显示，HvFRF1基因定位在细胞核上，与细胞核定位marker的信号重叠(图4B)。

(4)HvFRF1基因的组织定位情况

Hindmarsh种子用2％的H

结果显示HvFRF1基因在植株根、茎、叶中都有表达，但在根中的表达量更高(图4A)。

取三叶期水培Hindmarsh根和叶，分别切取1厘米左右组织片段，立即放入新鲜的甲醛固定液(63％ Ethanol，5％acetic acid，2％formaldehyde)并抽真空。Wash Buffer 1(63％ Ethanol，5％glacial acetic acid)洗涤三次，分别用5％琼脂糖和5％低熔点琼脂糖对叶和根进行包埋。采用震荡切片机对包埋组织切片(50-80μm)，将切好的各组织样本放入含有RNase抑制剂(Takara，日本)的PCR管，经RNase free DNase I(Takara，日本)37℃消解过夜。采用PrimeScript

SEQ ID NO.11：In situ HvFRF1-F：

5'-AACACTACAAACTGTATGCG-3'；

SEQ ID NO.12：In situ HvFRF1-R：

5'-GTTCTAGATTGCACGAATGA-3'；

SEQ ID NO.13：In situ Hv18S-F：

5'-GGTAATTCCAGCTCCAAT-3'；

SEQ ID NO.14：In situ Hv18S-R：

5'-GTTTATGGTTGAGACTAG-3'；

以各组织切片为模板，用含地高辛标记的dUTP(Roche，德国)扩增该基因，PCR体系：

PCR程序：首先95℃预变性2min，然后98℃变性10s，58℃退火5s，68延伸5s，变性退火延伸循环30次，再68延伸5min。PCR后的组织切片用1×PBS缓冲液(10mM Na

结果显示，蓝色主要出现在根的表皮细胞、根和叶片的维管束，说明HvFRF1基因主要在这些组织部位表达，而表皮细胞和维管束与植株对水的吸收和运输密切相关，表明HvFRF1基因的表达有利于大麦对水分的吸收和利用。

实施例3

在本发明实施例中，HvFRF1基因功能验证包括：

(1)super1300:HvFRF1载体构建

以保存的pEASY:HvFRF1质粒为模板，设计一对引物HvFRF1-OE-F1和HvFRF1-OE-R1扩增HvFRF1基因的ORF片段。引物序列为：

SEQ ID NO.15：HvFRF1-OE-F1：5'-CGACTCTAGTCTAGAAAGCTTATGCCGGAGGTGATGTCC-3'；

SEQ ID NO.16：HvFRF1-OE-R1：5'-CGATCGGGGAAATTCGAGCTCTTATACCAATAAACGGGC-3'；

采用

将上述质粒转化农杆菌感受态细胞EHA105，涂布利福平+卡那霉素抗性的YEB平板，28℃培养40-48h左右，PCR验证阳性克隆。将阳性克隆菌液加入等体积的30％无菌甘油，混匀后液氮快速冷冻，保存于-80℃备用。

(2)拟南芥遗传转化和阳性植株验证：

将含有super1300:HvFRF1质粒的农杆菌接种于5ml含有利福平+卡那霉素抗生素的液体LB培养基中，28℃暗培养条件下，220rpm/min摇菌过夜(约18h)。按1:100的比例，取过夜菌1ml，接种于100ml含有利福平+卡那霉素抗生素的液体LB培养液中，28℃暗培养条件下，220rpm/min培养至OD值＝1.2-2.0，倒入灭菌的50ml离心管中，5000rpm/min，28℃离心8min，收集菌体，弃掉上清培养液。用转化渗透液(1/2MS，5％蔗糖，20％silwet L-77，0.05％ MES，1％ AS，1％6BA)重悬收集的菌体，使OD600值为0.8-1.0。将土培开花期野生型拟南芥(哥伦比亚型)的花蕾部位置于上述渗透液中浸泡1-2h。侵染结束后，植株侧向倒置于湿润的托盘内，避光黑暗放置48小时后，再正放培养(23℃，16/8h，白天/黑夜)。最后尽量多地收集种子，收集的种子为T1代。T1代种子消毒后，于含有25mg/L潮霉素的平板上大量铺板，选取根系生长良好且健壮的苗转移至营养钵中(营养土:蛭石:珍珠盐＝6:3:1)继续培养。抽薹之前提取叶片DNA进行阳性植株验证，以superl300:HvFRF1质粒为阳性对照，以野生型拟南芥为阴性对照。验证为阳性的植株，提取叶片RNA并反转录，进行表达量分析，以拟南芥的Actin作为内参基因。阳性植株验证引物和表达量分析引物序列为：

SEQ ID NO.17：super1300-F：

5'-GCTCGCGGTGACGCCATTTCGCCTTTTC-3'；

SEQ ID NO.18：HvFRF1-R1：

5'-GTGTAACCAATGGCTTCACGTTGGCCATG-3'；

SEQ ID NO.19：AtActin-F：

5'-AGGAAGGATCTGTACGGTAAC-3'；

SEQ ID NO.20：AtActin-R：

5'-TTCTGTGAACGATTCCTGGAC-3'；

选取HvFRF1基因表达量高的阳性植株单株收种，得到T2种子。取T2种子铺于含有25mg/L潮霉素的平板上，按成苗率记录抗性表现，阳性苗:阴性苗符合3:1的分离比的株系留用。从T2代留用株系的培养皿中选择健壮苗转移至营养钵中继续培养，成熟后单株收获T3种子。T3代株系各取100粒种子铺于含有25mg/L潮霉素的平板上，按成苗率记录抗性表现，卡方检验符合95:5的株系留用。

(3)HvFRF1基因过表达拟南芥株系的抗旱表型鉴定：

取野生型拟南芥和过表达株系OE1、OE2和OE3的种子用75％酒精消毒2min，再加入10％次氯酸钠，消毒5min，用灭菌水清洗4-5次，每次2min。将消毒后的种子均匀铺于1/2MS固体培养基上(含1.5％蔗糖、0.4％植物凝胶、pH5.8)，吸掉培养基表面多余水分。将播好种子的1/2MS培养皿放于4℃条件下春化3天后，置于拟南芥培养室中培养(23℃，16/8h，白天/黑暗)，于四叶期移栽于营养钵中。移栽后15天进行干旱处理，设两个处理：对照，在整个过程中每盆正常等量浇水，保持土壤水分含量为30-40％；干旱处理，停止浇水使幼苗遭受干旱胁迫。于停止浇水后第12天对植株进行抗旱表型观察，并取对照和干旱处理植株的功能叶进行生理指标测定。

结果显示在对照条件下，野生型和过表达拟南芥的长势没有明显差异，但是，干旱胁迫后过表达植株的长势明显好于野生型，表现出较小的萎蔫程度(图5B)。干旱处理后，野生型拟南芥MDA含量显著升高，而过表达株系中MDA含量显著降低(图5C)。另外，过表达株系中脯氨酸的积累量显著高于野生型(图5D)。

以上结果说明HvFRF1基因的表达可以降低膜脂过氧化程度和积累渗透调节物质脯氨酸增强植株的抗旱性。

实施例4

本发明实施例提供一种pBract214:HvFRF1载体构建方法：

采用Gateway方法构建HvFRF1基因的过表达载体，即pBract214:HvFRF1。以保存的pEASY:HvFRF1质粒为模板，设计一对引物HvFRF1-OE-F2和HvFRF1-OE-R2扩增HvFRF1基因的ORF片段。引物序列为：

SEQ ID NO.21：HvFRF1-OE-F2：

5'-GGGGACAAGTTTGTACAAAAAAGCAGGCTTCACCATGCCGGAGGTGATGTCCACGCC-3'；

SEQ ID NO.22：HvFRF1-OE-R2：

5'-GGGGACCACTTTGTACAAGAAAGCTGGGTGTTATACCAATAAACGGGCACAAG-3'；

用1％的琼脂糖凝胶电泳检测PCR扩增产物，对目标产物进行胶回收纯化，测量回收产物浓度。随后采用Gateway BP Clonase II enzyme mix(Invitrogen，美国)将已知浓度的基因回收产物与pDONR(Zeo)入门载体进行BP重组反应。BP重组反应体系：

25℃反应4h，加入1μL的Proteinase K，37℃继续反应10min，反应产物立即转化大肠杆菌DH5α感受态细胞，涂布博来霉素抗性的LB固体培养基，37℃培养16h左右，挑取单克隆，摇菌进行菌液PCR，将阳性克隆的菌液送往公司测序，测序正确的单克隆进行扩繁，菌液甘油保存和提质粒保存，质粒命名为pDONR(Zeo):HvFRF1。

采用Gateway LR Clonase II enzyme mix(Invitrogen，美国)将上述已知浓度的质粒与目标载体pBract214(SEQ ID NO.28)(由英国格拉斯哥大学Peter Dominy博士提供)进行LR重组反应。LR重组反应体系：

25℃反应4h，加入1μl的Proteinase K，37℃继续反应10min，反应产物立即转化大肠杆菌DH5α感受态细胞，涂布卡那霉素抗性的LB固体培养基，37℃培养16h左右，挑取单克隆，摇菌进行菌液PCR，将有目的条带的菌液送往公司测序，测序正确的单克隆进行扩繁，菌液甘油保存和提质粒保存，质粒分别命名为pBract214:HvFRF1(图6A)。

将测序正确的pBract214:HvFRF1质粒和pSoup质粒共同转化农杆菌感受态细胞AGL1，涂布利福平+卡那霉素抗性的YEB平板，28℃培养40-48h左右，PCR验证阳性克隆。取阳性克隆菌液100μL加入到10mL的MG培养液(含25μg/mL利福平，50μg/mL卡那霉素，pH＝7.2)中培养，28℃，180rpm/min，摇菌至OD600＝0.6-0.7，加入等体积的30％无菌甘油，混匀后液氮快速冷冻，保存于-80℃备用。

实施例5

本发明实施例提供一种大麦幼胚遗传转化方法包括：

选取开花后2-3周栽培大麦黄金希望(Golden Promise)的幼胚为遗传转化材料。将符合标准的籽粒从穗上剥离，去除芒，种子用70％酒精表面消毒30s，用灭菌水洗涤数次。再用10％次氯酸钠浸泡4min，用灭菌水洗涤数次。于无菌滤纸上，进行未成熟胚的分离，除去胚轴，盾板朝上置于愈伤组织诱导培养基上，23-24℃黑暗培养2-3d。将保存的农杆菌菌液400μL加入到10mL不含抗生素的MG液体培养基中，28℃，180rpm/min，摇菌至OD600＝1.3-1.4，用于幼胚侵染。将准备好的农杆菌侵染液滴加在每一个幼胚上，晾干。用封口膜封住平板，23-24℃黑暗共培养2d。将幼胚转移到新鲜的愈伤组织诱导培养基平板上进行选择培养(含50mg/L潮霉素，160mg/L特泯菌)。23-24℃，暗培养56d后(每14d更换一次培养基平板)，将由幼胚分离得到的愈伤组织转移到转移培养基上，在24℃弱光下，培养21d，此时将产生绿点。将绿点转移到继代培养基中继续培养，当地上部叶子达到2-3cm时，根开始建成。将小苗转移到生根培养基中，不添加任何生长调节剂，抗生素不变。之后将根系建成的小苗取出，洗掉培养基，转移到含有蛭石和营养基质的塑料培养盆中，在人工气候室中生长(22℃/18℃，白天/夜间)，直至收获种子。

在本发明实施例中，转基因植株的验证及HvFRF1过表达大麦株系的表型鉴定包括：

采用CTAB法提取苗期转基因植株叶片DNA，以野生型Golden Promise为阴性对照，pBract214-HvFRF1质粒为阳性对照，验证携带目的片段的载体是否转入大麦基因组。选取DNA验证阳性的植株，提取叶片RNA并反转录，以野生型Golden Promise中HvFRF1基因的表达量为参照，通过荧光定量PCR对HvFRF1基因的表达量进行验证，从中选出两个表达量比较高的株系OE1和OE2(图6C)。验证阳性植株表达量的qRT-PCR引物同“HvFRF1基因响应干旱胁迫表达情况”部分中的HvFRF1-qRT-PCR-F、HvFRF1-qRT-PCR-R、Actin-F和Actin-R引物。验证阳性植株的DNA扩增引物序列为：

SEQ ID NO.23：pBract214-HvFRF1-F：5'-ACAAGTTTGTACAAAAAAGCAGGCTTC-3'；

SEQ ID NO.24：pBract214-HvFRF1-R：

5'-TTATACCAATAAACGGGCACAAG-3'；

对三叶期的大麦野生型Golden Promise和稳定的HvFRF1过表达株系进行土培干旱胁迫试验，结果显示在对照条件下，野生型和过表达植株的长势没有明显差异，但是，干旱胁迫后过表达植株的长势明显好于野生型，表现出较小的萎蔫程度(图6B)和较大的生物量积累(图6D)，说明HvFRF1基因正调控大麦的抗旱性。

综上所述，通过对大麦HvFRF1基因的分离克隆和分析，结合异源和同源过表达技术在大麦GP上对该基因进行功能验证，结果发现，HvFRF1过表达显著增强植株的抗旱性。本发明为大麦抗旱育种与生产提供了理论依据和相关基因。

其中，super1300载体序列SEQ ID NO.25，其中，多克隆位点的序列包括：TCTAGAAAGCTTCTGCAGGGGCCCGGGGTCGACATTTAAATACTAGTGGATCCGGTACCGAGCTC；

具体序列如下：

GGATCCCTGAAAGCGACGTTGGATGTTAACATCTACAAATTGCCTTTTCTTATCGACCATGTACGTAAGCGCTTACGTTTTTGGTGGACCCTTGAGGAAACTGGTAGCTGTTGTGGGCCTGTGGTCTCAAGATGGATCATTAATTTCCACCTTCACCTACGATGGGGGGCATCGCACCGGTGAGTAATATTGTACGGCTAAGAGCGAATTTGGCCTGTAGGATCCCTGAAAGCGACGTTGTGTTAACATCTACAAATTGCCTTTTCTTATCGACCATGTACGTAAGCGCTTACGTTTTTGGTGGACCCTTGAGGAAACTGGTAGCTGTTGTGGGCCTGTGGTCTCAAGATGGATCATTAATTTCCACCTACGATGGGGGGCATCGCACCGGTGAGTAATATTGTACGGCTAAGAGCGAATTTGGCCTGTAGGATCCCTGAAAGCGACGTTGGATGTTAACATCTACAAATTGCCTTTTCTTATCGACCATGTACGTAAGCGCTTACGTTTTTGGTGGACCCTTGAGGAAACTGGTAGCTGTTGTGGGCCTGTGGTCTCAAGATGGATCATTAATTTCCACCTTCACCTACGATGGGGGGCATCGCACCGGTGAGTAATATTGTACGGCTAAGAGCGAATTTGGCCTGTAGGATCCGCGAGCTGCTCAATCCCATTGCTTTTGAAGCAGCTCAACATTGATCTCTTTCTCGATCGAGGGAGATTTTTCAAATCAGTGCGCAAGACGTGACGTAAGTATCCGAGTCAGTTTTTATTTTTCTACTAATTTGGTCGTTTATTTCGGCGTGTAGGACATGGCAACCGGGCCTGAATTTCGCGGGTATTCTGTTTCTATTCCAACTTTTTCTTGATCCGCAGCCATTAACGACTTTTGAATAGATACGCTGACACGCCAAGCCTCGCTAGTCAAAAGTGTACCAAACAACGCTTTACAGCAAGAACGGAATGCGCGTGACGCTCGCGGTGACGCCATTTCGCCTTTTCAGAAATGGATAAATAGCCTTGCTTCCTATTATATCTTCCCCCAAATTACCAATACATTACACTAGCATCTGAATTTCATAACCAATCTCGATACACCAAATCGACTCTAGTCTAGAAAGCTTCTGCAGGGGCCCGGGGTCGACATTTAAATACTAGTGGATCCGGTACCGAGCTCGAATTTCCCCGATCGTTCAAACATTTGGCAATAAAGTTTCTTAAGATTGAATCCTGTTGCCGGTCTTGCGATGATTATCATATAATTTCTGTTGAATTACGTTAAGCATGTAATAATTAACATGTAATGCATGACGTTATTTATGAGATGGGTTTTTATGATTAGAGTCCCGCAATTATACATTTAATACGCGATAGAAAACAAAATATAGCGCGCAAACTAGGATAAATTATCGCGCGCGGTGTCATCTATGTTACTAGATCGGGAATTCGTAATCATGGTCATAGCTGTTTCCTGTGTGAAATTGTTATCCGCTCACAATTCCACACAACATACGAGCCGGAAGCATAAAGTGTAAAGCCTGGGGTGCCTAATGAGTGAGCTAACTCACATTAATTGCGTTGCGCTCACTGCCCGCTTTCCAGTCGGGAAACCTGTCGTGCCAGCTGCATTAATGAATCGGCCAACGCGCGGGGAGAGGCGGTTTGCGTATTGGCTAGAGCAGCTTGCCAACATGGTGGAGCACGACACTCTCGTCTACTCCAAGAATATCAAAGATACAGTCTCAGAAGACCAAAGGGCTATTGAGACTTTTCAACAAAGGGTAATATCGGGAAACCTCCTCGGATTCCATTGCCCAGCTATCTGTCACTTCATCAAAAGGACAGTAGAAAAGGAAGGTGGCACCTACAAATGCCATCATTGCGATAAAGGAAAGGCTATCGTTCAAGATGCCTCTGCCGACAGTGGTCCCAAAGATGGACCCCCACCCACGAGGAGCATCGTGGAAAAAGAAGACGTTCCAACCACGTCTTCAAAGCAAGTGGATTGATGTGATAACATGGTGGAGCACGACACTCTCGTCTACTCCAAGAATATCAAAGATACAGTCTCAGAAGACCAAAGGGCTATTGAGACTTTTCAACAAAGGGTAATATCGGGAAACCTCCTCGGATTCCATTGCCCAGCTATCTGTCACTTCATCAAAAGGACAGTAGAAAAGGAAGGTGGCACCTACAAATGCCATCATTGCGATAAAGGAAAGGCTATCGTTCAAGATGCCTCTGCCGACAGTGGTCCCAAAGATGGACCCCCACCCACGAGGAGCATCGTGGAAAAAGAAGACGTTCCAACCACGTCTTCAAAGCAAGTGGATTGATGTGATATCTCCACTGACGTAAGGGATGACGCACAATCCCACTATCCTTCGCAAGACCTTCCTCTATATAAGGAAGTTCATTTCATTTGGAGAGGACACGCTGAAATCACCAGTCTCTCTCTACAAATCTATCTCTCTCGAGCTTTCGCAGATCCGGGGGGGCAATGAGATATGAAAAAGCCTGAACTCACCGCGACGTCTGTCGAGAAGTTTCTGATCGAAAAGTTCGACAGCGTCTCCGACCTGATGCAGCTCTCGGAGGGCGAAGAATCTCGTGCTTTCAGCTTCGATGTAGGAGGGCGTGGATATGTCCTGCGGGTAAATAGCTGCGCCGATGGTTTCTACAAAGATCGTTATGTTTATCGGCACTTTGCATCGGCCGCGCTCCCGATTCCGGAAGTGCTTGACATTGGGGAGTTTAGCGAGAGCCTGACCTATTGCATCTCCCGCCGTGCACAGGGTGTCACGTTGCAAGACCTGCCTGAAACCGAACTGCCCGCTGTTCTACAACCGGTCGCGGAGGCTATGGATGCGATCGCTGCGGCCGATCTTAGCCAGACGAGCGGGTTCGGCCCATTCGGACCGCAAGGAATCGGTCAATACACTACATGGCGTGATTTCATATGCGCGATTGCTGATCCCCATGTGTATCACTGGCAAACTGTGATGGACGACACCGTCAGTGCGTCCGTCGCGCAGGCTCTCGATGAGCTGATGCTTTGGGCCGAGGACTGCCCCGAAGTCCGGCACCTCGTGCACGCGGATTTCGGCTCCAACAATGTCCTGACGGACAATGGCCGCATAACAGCGGTCATTGACTGGAGCGAGGCGATGTTCGGGGATTCCCAATACGAGGTCGCCAACATCTTCTTCTGGAGGCCGTGGTTGGCTTGTATGGAGCAGCAGACGCGCTACTTCGAGCGGAGGCATCCGGAGCTTGCAGGATCGCCACGACTCCGGGCGTATATGCTCCGCATTGGTCTTGACCAACTCTATCAGAGCTTGGTTGACGGCAATTTCGATGATGCAGCTTGGGCGCAGGGTCGATGCGACGCAATCGTCCGATCCGGAGCCGGGACTGTCGGGCGTACACAAATCGCCCGCAGAAGCGCGGCCGTCTGGACCGATGGCTGTGTAGAAGTACTCGCCGATAGTGGAAACCGACGCCCCAGCACTCGTCCGAGGGCAAAGAAATAGAGTAGATGCCGACCGGATCTGTCGATCGACAAGCTCGAGTTTCTCCATAATAATGTGTGAGTAGTTCCCAGATAAGGGAATTAGGGTTCCTATAGGGTTTCGCTCATGTGTTGAGCATATAAGAAACCCTTAGTATGTATTTGTATTTGTAAAATACTTCTATCAATAAAATTTCTAATTCCTAAAACCAAAATCCAGTACTAAAATCCAGATCCCCCGAATTAATTCGGCGTTAATTCAGTACATTAAAAACGTCCGCAATGTGTTATTAAGTTGTCTAAGCGTCAATTTGTTTACACCACAATATATCCTGCCACCAGCCAGCCAACAGCTCCCCGACCGGCAGCTCGGCACAAAATCACCACTCGATACAGGCAGCCCATCAGTCCGGGACGGCGTCAGCGGGAGAGCCGTTGTAAGGCGGCAGACTTTGCTCATGTTACCGATGCTATTCGGAAGAACGGCAACTAAGCTGCCGGGTTTGAAACACGGATGATCTCGCGGAGGGTAGCATGTTGATTGTAACGATGACAGAGCGTTGCTGCCTGTGATCACCGCGGTTTCAAAATCGGCTCCGTCGATACTATGTTATACGCCAACTTTGAAAACAACTTTGAAAAAGCTGTTTTCTGGTATTTAAGGTTTTAGAATGCAAGGAACAGTGAATTGGAGTTCGTCTTGTTATAATTAGCTTCTTGGGGTATCTTTAAATACTGTAGAAAAGAGGAAGGAAATAATAAATGGCTAAAATGAGAATATCACCGGAATTGAAAAAACTGATCGAAAAATACCGCTGCGTAAAAGATACGGAAGGAATGTCTCCTGCTAAGGTATATAAGCTGGTGGGAGAAAATGAAAACCTATATTTAAAAATGACGGACAGCCGGTATAAAGGGACCACCTATGATGTGGAACGGGAAAAGGACATGATGCTATGGCTGGAAGGAAAGCTGCCTGTTCCAAAGGTCCTGCACTTTGAACGGCATGATGGCTGGAGCAATCTGCTCATGAGTGAGGCCGATGGCGTCCTTTGCTCGGAAGAGTATGAAGATGAACAAAGCCCTGAAAAGATTATCGAGCTGTATGCGGAGTGCATCAGGCTCTTTCACTCCATCGACATATCGGATTGTCCCTATACGAATAGCTTAGACAGCCGCTTAGCCGAATTGGATTACTTACTGAATAACGATCTGGCCGATGTGGATTGCGAAAACTGGGAAGAAGACACTCCATTTAAAGATCCGCGCGAGCTGTATGATTTTTTAAAGACGGAAAAGCCCGAAGAGGAACTTGTCTTTTCCCACGGCGACCTGGGAGACAGCAACATCTTTGTGAAAGATGGCAAAGTAAGTGGCTTTATTGATCTTGGGAGAAGCGGCAGGGCGGACAAGTGGTATGACATTGCCTTCTGCGTCCGGTCGATCAGGGAGGATATCGGGGAAGAACAGTATGTCGAGCTATTTTTTGACTTACTGGGGATCAAGCCTGATTGGGAGAAAATAAAATATTATATTTTACTGGATGAATTGTTTTAGTACCTAGAATGCATGACCAAAATCCCTTAACGTGAGTTTTCGTTCCACTGAGCGTCAGACCCCGTAGAAAAGATCAAAGGATCTTCTTGAGATCCTTTTTTTCTGCGCGTAATCTGCTGCTTGCAAACAAAAAAACCACCGCTACCAGCGGTGGTTTGTTTGCCGGATCAAGAGCTACCAACTCTTTTTCCGAAGGTAACTGGCTTCAGCAGAGCGCAGATACCAAATACTGTCCTTCTAGTGTAGCCGTAGTTAGGCCACCACTTCAAGAACTCTGTAGCACCGCCTACATACCTCGCTCTGCTAATCCTGTTACCAGTGGCTGCTGCCAGTGGCGATAAGTCGTGTCTTACCGGGTTGGACTCAAGACGATAGTTACCGGATAAGGCGCAGCGGTCGGGCTGAACGGGGGGTTCGTGCACACAGCCCAGCTTGGAGCGAACGACCTACACCGAACTGAGATACCTACAGCGTGAGCTATGAGAAAGCGCCACGCTTCCCGAAGGGAGAAAGGCGGACAGGTATCCGGTAAGCGGCAGGGTCGGAACAGGAGAGCGCACGAGGGAGCTTCCAGGGGGAAACGCCTGGTATCTTTATAGTCCTGTCGGGTTTCGCCACCTCTGACTTGAGCGTCGATTTTTGTGATGCTCGTCAGGGGGGCGGAGCCTATGGAAAAACGCCAGCAACGCGGCCTTTTTACGGTTCCTGGCCTTTTGCTGGCCTTTTGCTCACATGTTCTTTCCTGCGTTATCCCCTGATTCTGTGGATAACCGTATTACCGCCTTTGAGTGAGCTGATACCGCTCGCCGCAGCCGAACGACCGAGCGCAGCGAGTCAGTGAGCGAGGAAGCGGAAGAGCGCCTGATGCGGTATTTTCTCCTTACGCATCTGTGCGGTATTTCACACCGCATATGGTGCACTCTCAGTACAATCTGCTCTGATGCCGCATAGTTAAGCCAGTATACACTCCGCTATCGCTACGTGACTGGGTCATGGCTGCGCCCCGACACCCGCCAACACCCGCTGACGCGCCCTGACGGGCTTGTCTGCTCCCGGCATCCGCTTACAGACAAGCTGTGACCGTCTCCGGGAGCTGCATGTGTCAGAGGTTTTCACCGTCATCACCGAAACGCGCGAGGCAGGGTGCCTTGATGTGGGCGCCGGCGGTCGAGTGGCGACGGCGCGGCTTGTCCGCGCCCTGGTAGATTGCCTGGCCGTAGGCCAGCCATTTTTGAGCGGCCAGCGGCCGCGATAGGCCGACGCGAAGCGGCGGGGCGTAGGGAGCGCAGCGACCGAAGGGTAGGCGCTTTTTGCAGCTCTTCGGCTGTGCGCTGGCCAGACAGTTATGCACAGGCCAGGCGGGTTTTAAGAGTTTTAATAAGTTTTAAAGAGTTTTAGGCGGAAAAATCGCCTTTTTTCTCTTTTATATCAGTCACTTACATGTGTGACCGGTTCCCAATGTACGGCTTTGGGTTCCCAATGTACGGGTTCCGGTTCCCAATGTACGGCTTTGGGTTCCCAATGTACGTGCTATCCACAGGAAAGAGACCTTTTCGACCTTTTTCCCCTGCTAGGGCAATTTGCCCTAGCATCTGCTCCGTACATTAGGAACCGGCGGATGCTTCGCCCTCGATCAGGTTGCGGTAGCGCATGACTAGGATCGGGCCAGCCTGCCCCGCCTCCTCCTTCAAATCGTACTCCGGCAGGTCATTTGACCCGATCAGCTTGCGCACGGTGAAACAGAACTTCTTGAACTCTCCGGCGCTGCCACTGCGTTCGTAGATCGTCTTGAACAACCATCTGGCTTCTGCCTTGCCTGCGGCGCGGCGTGCCAGGCGGTAGAGAAAACGGCCGATGCCGGGATCGATCAAAAAGTAATCGGGGTGAACCGTCAGCACGTCCGGGTTCTTGCCTTCTGTGATCTCGCGGTACATCCAATCAGCTAGCTCGATCTCGATGTACTCCGGCCGCCCGGTTTCGCTCTTTACGATCTTGTAGCGGCTAATCAAGGCTTCACCCTCGGATACCGTCACCAGGCGGCCGTTCTTGGCCTTCTTCGTACGCTGCATGGCAACGTGCGTGGTGTTTAACCGAATGCAGGTTTCTACCAGGTCGTCTTTCTGCTTTCCGCCATCGGCTCGCCGGCAGAACTTGAGTACGTCCGCAACGTGTGGACGGAACACGCGGCCGGGCTTGTCTCCCTTCCCTTCCCGGTATCGGTTCATGGATTCGGTTAGATGGGAAACCGCCATCAGTACCAGGTCGTAATCCCACACACTGGCCATGCCGGCCGGCCCTGCGGAAACCTCTACGTGCCCGTCTGGAAGCTCGTAGCGGATCACCTCGCCAGCTCGTCGGTCACGCTTCGACAGACGGAAAACGGCCACGTCCATGATGCTGCGACTATCGCGGGTGCCCACGTCATAGAGCATCGGAACGAAAAAATCTGGTTGCTCGTCGCCCTTGGGCGGCTTCCTAATCGACGGCGCACCGGCTGCCGGCGGTTGCCGGGATTCTTTGCGGATTCGATCAGCGGCCGCTTGCCACGATTCACCGGGGCGTGCTTCTGCCTCGATGCGTTGCCGCTGGGCGGCCTGCGCGGCCTTCAACTTCTCCACCAGGTCATCACCCAGCGCCGCGCCGATTTGTACCGGGCCGGATGGTTTGCGACCGTCACGCCGATTCCTCGGGCTTGGGGGTTCCAGTGCCATTGCAGGGCCGGCAGACAACCCAGCCGCTTACGCCTGGCCAACCGCCCGTTCCTCCACACATGGGGCATTCCACGGCGTCGGTGCCTGGTTGTTCTTGATTTTCCATGCCGCCTCCTTTAGCCGCTAAAATTCATCTACTCATTTATTCATTTGCTCATTTACTCTGGTAGCTGCGCGATGTATTCAGATAGCAGCTCGGTAATGGTCTTGCCTTGGCGTACCGCGTACATCTTCAGCTTGGTGTGATCCTCCGCCGGCAACTGAAAGTTGACCCGCTTCATGGCTGGCGTGTCTGCCAGGCTGGCCAACGTTGCAGCCTTGCTGCTGCGTGCGCTCGGACGGCCGGCACTTAGCGTGTTTGTGCTTTTGCTCATTTTCTCTTTACCTCATTAACTCAAATGAGTTTTGATTTAATTTCAGCGGCCAGCGCCTGGACCTCGCGGGCAGCGTCGCCCTCGGGTTCTGATTCAAGAACGGTTGTGCCGGCGGCGGCAGTGCCTGGGTAGCTCACGCGCTGCGTGATACGGGACTCAAGAATGGGCAGCTCGTACCCGGCCAGCGCCTCGGCAACCTCACCGCCGATGCGCGTGCCTTTGATCGCCCGCGACACGACAAAGGCCGCTTGTAGCCTTCCATCCGTGACCTCAATGCGCTGCTTAACCAGCTCCACCAGGTCGGCGGTGGCCCATATGTCGTAAGGGCTTGGCTGCACCGGAATCAGCACGAAGTCGGCTGCCTTGATCGCGGACACAGCCAAGTCCGCCGCCTGGGGCGCTCCGTCGATCACTACGAAGTCGCGCCGGCCGATGGCCTTCACGTCGCGGTCAATCGTCGGGCGGTCGATGCCGACAACGGTTAGCGGTTGATCTTCCCGCACGGCCGCCCAATCGCGGGCACTGCCCTGGGGATCGGAATCGACTAACAGAACATCGGCCCCGGCGAGTTGCAGGGCGCGGGCTAGATGGGTTGCGATGGTCGTCTTGCCTGACCCGCCTTTCTGGTTAAGTACAGCGATAACCTTCATGCGTTCCCCTTGCGTATTTGTTTATTTACTCATCGCATCATATACGCAGCGACCGCATGACGCAAGCTGTTTTACTCAAATACACATCACCTTTTTAGACGGCGGCGCTCGGTTTCTTCAGCGGCCAAGCTGGCCGGCCAGGCCGCCAGCTTGGCATCAGACAAACCGGCCAGGATTTCATGCAGCCGCACGGTTGAGACGTGCGCGGGCGGCTCGAACACGTACCCGGCCGCGATCATCTCCGCCTCGATCTCTTCGGTAATGAAAAACGGTTCGTCCTGGCCGTCCTGGTGCGGTTTCATGCTTGTTCCTCTTGGCGTTCATTCTCGGCGGCCGCCAGGGCGTCGGCCTCGGTCAATGCGTCCTCACGGAAGGCACCGCGCCGCCTGGCCTCGGTGGGCGTCACTTCCTCGCTGCGCTCAAGTGCGCGGTACAGGGTCGAGCGATGCACGCCAAGCAGTGCAGCCGCCTCTTTCACGGTGCGGCCTTCCTGGTCGATCAGCTCGCGGGCGTGCGCGATCTGTGCCGGGGTGAGGGTAGGGCGGGGGCCAAACTTCACGCCTCGGGCCTTGGCGGCCTCGCGCCCGCTCCGGGTGCGGTCGATGATTAGGGAACGCTCGAACTCGGCAATGCCGGCGAACACGGTCAACACCATGCGGCCGGCCGGCGTGGTGGTGTCGGCCCACGGCTCTGCCAGGCTACGCAGGCCCGCGCCGGCCTCCTGGATGCGCTCGGCAATGTCCAGTAGGTCGCGGGTGCTGCGGGCCAGGCGGTCTAGCCTGGTCACTGTCACAACGTCGCCAGGGCGTAGGTGGTCAAGCATCCTGGCCAGCTCCGGGCGGTCGCGCCTGGTGCCGGTGATCTTCTCGGAAAACAGCTTGGTGCAGCCGGCCGCGTGCAGTTCGGCCCGTTGGTTGGTCAAGTCCTGGTCGTCGGTGCTGACGCGGGCATAGCCCAGCAGGCCAGCGGCGGCGCTCTTGTTCATGGCGTAATGTCTCCGGTTCTAGTCGCAAGTATTCTACTTTATGCGACTAAAACACGCGACAAGAAAACGCCAGGAAAAGGGCAGGGCGGCAGCCTGTCGCGTAACTTAGGACTTGTGCGACATGTCGTTTTCAGAAGACGGCTGCACTGAACGTCAGAAGCCGACTGCACTATAGCAGCGGAGGGGTTGGATCAAAGTACTTTGATCCCGAGGGGAACCCTGTGGTTGGCATGCACATACAAATGGACGAACGGATAAACCTTTTCACGCCCTTTTAAATATCCGTTATTCTAATAAACGCTCTTTTCTCTTAGGTTTACCCGCCAATATATCCTGTCAAACACTGATAGTTTAAACTGAAGGCGGGAAACGACAATCTGATCCAAGCTCAAGCTGCTCTAGCATTCGCCATTCAGGCTGCGCAACTGTTGGGAAGGGCGATCGGTGCGGGCCTCTTCGCTATTACGCCAGCTGGCGAAAGGGGGATGTGCTGCAAGGCGATTAAGTTGGGTAACGCCAGGGTTTTCCCAGTCACGACGTTGTAAAACGACGGCCAGTGCC。

super1300:HvFRF1载体序列(红色为酶切位点，蓝色为HvFRF1基因序列)SEQ IDNO.26，其中，酶切位点包括：AAGCTT、GAGCTC；HvFRF1基因序列为：atgccggaggtgatgtccacgccacagcaacccacagccatgatgagatttgacactcttgaggatgctgagaaacactacaaactgtatgcgaggcagaaaggttttggagtaaggtattgtttccgaaaaaggtcagaggctagtggtgaactgataagagcatcacttgtctgccatagagctgggttgaagatcaagaggaaagtagacacccaaaacccgcaacctattgcccctgagaggagtaggaatacaactgaaagaacaaactgcccagcccgtatgtttgtgaagcgaagagataatgcctgggttgtaacagaaataaatgacaaccataaccaccctctcataaagaaatggtcgctgacaggatacctacgatcacatagacatatccctgaagaagaacaacagtttgtgaagttgcttcattcgtgcaatctagaaccttctagacagatgcagttgttgacagagttgcatggccaacgtgaagccattggttacactgacaaagacttggcaaatttgctagcaaagttccgggctgagcacaaatacactgatatgcaggacacgattgagtacttcaaaagcagtcaacagcttgataaagactttttttacaagtacaagcttgatgatgaaaataaggtccaatgcatttactggattgatggttcagcgagaagggcttacaagtttttcagtgattgtgtctcttttgacacaacatacttgaccaatatatacaagatgccttgtgcccgtttattggtataa；

SEQ ID NO.26具体序列为：

GGATCCCTGAAAGCGACGTTGGATGTTAACATCTACAAATTGCCTTTTCTTATCGACCATGTACGTAAGCGCTTACGTTTTTGGTGGACCCTTGAGGAAACTGGTAGCTGTTGTGGGCCTGTGGTCTCAAGATGGATCATTAATTTCCACCTTCACCTACGATGGGGGGCATCGCACCGGTGAGTAATATTGTACGGCTAAGAGCGAATTTGGCCTGTAGGATCCCTGAAAGCGACGTTGTGTTAACATCTACAAATTGCCTTTTCTTATCGACCATGTACGTAAGCGCTTACGTTTTTGGTGGACCCTTGAGGAAACTGGTAGCTGTTGTGGGCCTGTGGTCTCAAGATGGATCATTAATTTCCACCTACGATGGGGGGCATCGCACCGGTGAGTAATATTGTACGGCTAAGAGCGAATTTGGCCTGTAGGATCCCTGAAAGCGACGTTGGATGTTAACATCTACAAATTGCCTTTTCTTATCGACCATGTACGTAAGCGCTTACGTTTTTGGTGGACCCTTGAGGAAACTGGTAGCTGTTGTGGGCCTGTGGTCTCAAGATGGATCATTAATTTCCACCTTCACCTACGATGGGGGGCATCGCACCGGTGAGTAATATTGTACGGCTAAGAGCGAATTTGGCCTGTAGGATCCGCGAGCTGCTCAATCCCATTGCTTTTGAAGCAGCTCAACATTGATCTCTTTCTCGATCGAGGGAGATTTTTCAAATCAGTGCGCAAGACGTGACGTAAGTATCCGAGTCAGTTTTTATTTTTCTACTAATTTGGTCGTTTATTTCGGCGTGTAGGACATGGCAACCGGGCCTGAATTTCGCGGGTATTCTGTTTCTATTCCAACTTTTTCTTGATCCGCAGCCATTAACGACTTTTGAATAGATACGCTGACACGCCAAGCCTCGCTAGTCAAAAGTGTACCAAACAACGCTTTACAGCAAGAACGGAATGCGCGTGACGCTCGCGGTGACGCCATTTCGCCTTTTCAGAAATGGATAAATAGCCTTGCTTCCTATTATATCTTCCCCCAAATTACCAATACATTACACTAGCATCTGAATTTCATAACCAATCTCGATACACCAAATCGACTCTAGTCTAGAAAGCTTatgccggaggtgatgtccacgccacagcaacccacagccatgatgagatttgacactcttgaggatgctgagaaacactacaaactgtatgcgaggcagaaaggttttggagtaaggtattgtttccgaaaaaggtcagaggctagtggtgaactgataagagcatcacttgtctgccatagagctgggttgaagatcaagaggaaagtagacacccaaaacccgcaacctattgcccctgagaggagtaggaatacaactgaaagaacaaactgcccagcccgtatgtttgtgaagcgaagagataatgcctgggttgtaacagaaataaatgacaaccataaccaccctctcataaagaaatggtcgctgacaggatacctacgatcacatagacatatccctgaagaagaacaacagtttgtgaagttgcttcattcgtgcaatctagaaccttctagacagatgcagttgttgacagagttgcatggccaacgtgaagccattggttacactgacaaagacttggcaaatttgctagcaaagttccgggctgagcacaaatacactgatatgcaggacacgattgagtacttcaaaagcagtcaacagcttgataaagactttttttacaagtacaagcttgatgatgaaaataaggtccaatgcatttactggattgatggttcagcgagaagggcttacaagtttttcagtgattgtgtctcttttgacacaacatacttgaccaatatatacaagatgccttgtgcccgtttattggtataaGAGCTCGAATTTCCCCGATCGTTCAAACATTTGGCAATAAAGTTTCTTAAGATTGAATCCTGTTGCCGGTCTTGCGATGATTATCATATAATTTCTGTTGAATTACGTTAAGCATGTAATAATTAACATGTAATGCATGACGTTATTTATGAGATGGGTTTTTATGATTAGAGTCCCGCAATTATACATTTAATACGCGATAGAAAACAAAATATAGCGCGCAAACTAGGATAAATTATCGCGCGCGGTGTCATCTATGTTACTAGATCGGGAATTCGTAATCATGGTCATAGCTGTTTCCTGTGTGAAATTGTTATCCGCTCACAATTCCACACAACATACGAGCCGGAAGCATAAAGTGTAAAGCCTGGGGTGCCTAATGAGTGAGCTAACTCACATTAATTGCGTTGCGCTCACTGCCCGCTTTCCAGTCGGGAAACCTGTCGTGCCAGCTGCATTAATGAATCGGCCAACGCGCGGGGAGAGGCGGTTTGCGTATTGGCTAGAGCAGCTTGCCAACATGGTGGAGCACGACACTCTCGTCTACTCCAAGAATATCAAAGATACAGTCTCAGAAGACCAAAGGGCTATTGAGACTTTTCAACAAAGGGTAATATCGGGAAACCTCCTCGGATTCCATTGCCCAGCTATCTGTCACTTCATCAAAAGGACAGTAGAAAAGGAAGGTGGCACCTACAAATGCCATCATTGCGATAAAGGAAAGGCTATCGTTCAAGATGCCTCTGCCGACAGTGGTCCCAAAGATGGACCCCCACCCACGAGGAGCATCGTGGAAAAAGAAGACGTTCCAACCACGTCTTCAAAGCAAGTGGATTGATGTGATAACATGGTGGAGCACGACACTCTCGTCTACTCCAAGAATATCAAAGATACAGTCTCAGAAGACCAAAGGGCTATTGAGACTTTTCAACAAAGGGTAATATCGGGAAACCTCCTCGGATTCCATTGCCCAGCTATCTGTCACTTCATCAAAAGGACAGTAGAAAAGGAAGGTGGCACCTACAAATGCCATCATTGCGATAAAGGAAAGGCTATCGTTCAAGATGCCTCTGCCGACAGTGGTCCCAAAGATGGACCCCCACCCACGAGGAGCATCGTGGAAAAAGAAGACGTTCCAACCACGTCTTCAAAGCAAGTGGATTGATGTGATATCTCCACTGACGTAAGGGATGACGCACAATCCCACTATCCTTCGCAAGACCTTCCTCTATATAAGGAAGTTCATTTCATTTGGAGAGGACACGCTGAAATCACCAGTCTCTCTCTACAAATCTATCTCTCTCGAGCTTTCGCAGATCCGGGGGGGCAATGAGATATGAAAAAGCCTGAACTCACCGCGACGTCTGTCGAGAAGTTTCTGATCGAAAAGTTCGACAGCGTCTCCGACCTGATGCAGCTCTCGGAGGGCGAAGAATCTCGTGCTTTCAGCTTCGATGTAGGAGGGCGTGGATATGTCCTGCGGGTAAATAGCTGCGCCGATGGTTTCTACAAAGATCGTTATGTTTATCGGCACTTTGCATCGGCCGCGCTCCCGATTCCGGAAGTGCTTGACATTGGGGAGTTTAGCGAGAGCCTGACCTATTGCATCTCCCGCCGTGCACAGGGTGTCACGTTGCAAGACCTGCCTGAAACCGAACTGCCCGCTGTTCTACAACCGGTCGCGGAGGCTATGGATGCGATCGCTGCGGCCGATCTTAGCCAGACGAGCGGGTTCGGCCCATTCGGACCGCAAGGAATCGGTCAATACACTACATGGCGTGATTTCATATGCGCGATTGCTGATCCCCATGTGTATCACTGGCAAACTGTGATGGACGACACCGTCAGTGCGTCCGTCGCGCAGGCTCTCGATGAGCTGATGCTTTGGGCCGAGGACTGCCCCGAAGTCCGGCACCTCGTGCACGCGGATTTCGGCTCCAACAATGTCCTGACGGACAATGGCCGCATAACAGCGGTCATTGACTGGAGCGAGGCGATGTTCGGGGATTCCCAATACGAGGTCGCCAACATCTTCTTCTGGAGGCCGTGGTTGGCTTGTATGGAGCAGCAGACGCGCTACTTCGAGCGGAGGCATCCGGAGCTTGCAGGATCGCCACGACTCCGGGCGTATATGCTCCGCATTGGTCTTGACCAACTCTATCAGAGCTTGGTTGACGGCAATTTCGATGATGCAGCTTGGGCGCAGGGTCGATGCGACGCAATCGTCCGATCCGGAGCCGGGACTGTCGGGCGTACACAAATCGCCCGCAGAAGCGCGGCCGTCTGGACCGATGGCTGTGTAGAAGTACTCGCCGATAGTGGAAACCGACGCCCCAGCACTCGTCCGAGGGCAAAGAAATAGAGTAGATGCCGACCGGATCTGTCGATCGACAAGCTCGAGTTTCTCCATAATAATGTGTGAGTAGTTCCCAGATAAGGGAATTAGGGTTCCTATAGGGTTTCGCTCATGTGTTGAGCATATAAGAAACCCTTAGTATGTATTTGTATTTGTAAAATACTTCTATCAATAAAATTTCTAATTCCTAAAACCAAAATCCAGTACTAAAATCCAGATCCCCCGAATTAATTCGGCGTTAATTCAGTACATTAAAAACGTCCGCAATGTGTTATTAAGTTGTCTAAGCGTCAATTTGTTTACACCACAATATATCCTGCCACCAGCCAGCCAACAGCTCCCCGACCGGCAGCTCGGCACAAAATCACCACTCGATACAGGCAGCCCATCAGTCCGGGACGGCGTCAGCGGGAGAGCCGTTGTAAGGCGGCAGACTTTGCTCATGTTACCGATGCTATTCGGAAGAACGGCAACTAAGCTGCCGGGTTTGAAACACGGATGATCTCGCGGAGGGTAGCATGTTGATTGTAACGATGACAGAGCGTTGCTGCCTGTGATCACCGCGGTTTCAAAATCGGCTCCGTCGATACTATGTTATACGCCAACTTTGAAAACAACTTTGAAAAAGCTGTTTTCTGGTATTTAAGGTTTTAGAATGCAAGGAACAGTGAATTGGAGTTCGTCTTGTTATAATTAGCTTCTTGGGGTATCTTTAAATACTGTAGAAAAGAGGAAGGAAATAATAAATGGCTAAAATGAGAATATCACCGGAATTGAAAAAACTGATCGAAAAATACCGCTGCGTAAAAGATACGGAAGGAATGTCTCCTGCTAAGGTATATAAGCTGGTGGGAGAAAATGAAAACCTATATTTAAAAATGACGGACAGCCGGTATAAAGGGACCACCTATGATGTGGAACGGGAAAAGGACATGATGCTATGGCTGGAAGGAAAGCTGCCTGTTCCAAAGGTCCTGCACTTTGAACGGCATGATGGCTGGAGCAATCTGCTCATGAGTGAGGCCGATGGCGTCCTTTGCTCGGAAGAGTATGAAGATGAACAAAGCCCTGAAAAGATTATCGAGCTGTATGCGGAGTGCATCAGGCTCTTTCACTCCATCGACATATCGGATTGTCCCTATACGAATAGCTTAGACAGCCGCTTAGCCGAATTGGATTACTTACTGAATAACGATCTGGCCGATGTGGATTGCGAAAACTGGGAAGAAGACACTCCATTTAAAGATCCGCGCGAGCTGTATGATTTTTTAAAGACGGAAAAGCCCGAAGAGGAACTTGTCTTTTCCCACGGCGACCTGGGAGACAGCAACATCTTTGTGAAAGATGGCAAAGTAAGTGGCTTTATTGATCTTGGGAGAAGCGGCAGGGCGGACAAGTGGTATGACATTGCCTTCTGCGTCCGGTCGATCAGGGAGGATATCGGGGAAGAACAGTATGTCGAGCTATTTTTTGACTTACTGGGGATCAAGCCTGATTGGGAGAAAATAAAATATTATATTTTACTGGATGAATTGTTTTAGTACCTAGAATGCATGACCAAAATCCCTTAACGTGAGTTTTCGTTCCACTGAGCGTCAGACCCCGTAGAAAAGATCAAAGGATCTTCTTGAGATCCTTTTTTTCTGCGCGTAATCTGCTGCTTGCAAACAAAAAAACCACCGCTACCAGCGGTGGTTTGTTTGCCGGATCAAGAGCTACCAACTCTTTTTCCGAAGGTAACTGGCTTCAGCAGAGCGCAGATACCAAATACTGTCCTTCTAGTGTAGCCGTAGTTAGGCCACCACTTCAAGAACTCTGTAGCACCGCCTACATACCTCGCTCTGCTAATCCTGTTACCAGTGGCTGCTGCCAGTGGCGATAAGTCGTGTCTTACCGGGTTGGACTCAAGACGATAGTTACCGGATAAGGCGCAGCGGTCGGGCTGAACGGGGGGTTCGTGCACACAGCCCAGCTTGGAGCGAACGACCTACACCGAACTGAGATACCTACAGCGTGAGCTATGAGAAAGCGCCACGCTTCCCGAAGGGAGAAAGGCGGACAGGTATCCGGTAAGCGGCAGGGTCGGAACAGGAGAGCGCACGAGGGAGCTTCCAGGGGGAAACGCCTGGTATCTTTATAGTCCTGTCGGGTTTCGCCACCTCTGACTTGAGCGTCGATTTTTGTGATGCTCGTCAGGGGGGCGGAGCCTATGGAAAAACGCCAGCAACGCGGCCTTTTTACGGTTCCTGGCCTTTTGCTGGCCTTTTGCTCACATGTTCTTTCCTGCGTTATCCCCTGATTCTGTGGATAACCGTATTACCGCCTTTGAGTGAGCTGATACCGCTCGCCGCAGCCGAACGACCGAGCGCAGCGAGTCAGTGAGCGAGGAAGCGGAAGAGCGCCTGATGCGGTATTTTCTCCTTACGCATCTGTGCGGTATTTCACACCGCATATGGTGCACTCTCAGTACAATCTGCTCTGATGCCGCATAGTTAAGCCAGTATACACTCCGCTATCGCTACGTGACTGGGTCATGGCTGCGCCCCGACACCCGCCAACACCCGCTGACGCGCCCTGACGGGCTTGTCTGCTCCCGGCATCCGCTTACAGACAAGCTGTGACCGTCTCCGGGAGCTGCATGTGTCAGAGGTTTTCACCGTCATCACCGAAACGCGCGAGGCAGGGTGCCTTGATGTGGGCGCCGGCGGTCGAGTGGCGACGGCGCGGCTTGTCCGCGCCCTGGTAGATTGCCTGGCCGTAGGCCAGCCATTTTTGAGCGGCCAGCGGCCGCGATAGGCCGACGCGAAGCGGCGGGGCGTAGGGAGCGCAGCGACCGAAGGGTAGGCGCTTTTTGCAGCTCTTCGGCTGTGCGCTGGCCAGACAGTTATGCACAGGCCAGGCGGGTTTTAAGAGTTTTAATAAGTTTTAAAGAGTTTTAGGCGGAAAAATCGCCTTTTTTCTCTTTTATATCAGTCACTTACATGTGTGACCGGTTCCCAATGTACGGCTTTGGGTTCCCAATGTACGGGTTCCGGTTCCCAATGTACGGCTTTGGGTTCCCAATGTACGTGCTATCCACAGGAAAGAGACCTTTTCGACCTTTTTCCCCTGCTAGGGCAATTTGCCCTAGCATCTGCTCCGTACATTAGGAACCGGCGGATGCTTCGCCCTCGATCAGGTTGCGGTAGCGCATGACTAGGATCGGGCCAGCCTGCCCCGCCTCCTCCTTCAAATCGTACTCCGGCAGGTCATTTGACCCGATCAGCTTGCGCACGGTGAAACAGAACTTCTTGAACTCTCCGGCGCTGCCACTGCGTTCGTAGATCGTCTTGAACAACCATCTGGCTTCTGCCTTGCCTGCGGCGCGGCGTGCCAGGCGGTAGAGAAAACGGCCGATGCCGGGATCGATCAAAAAGTAATCGGGGTGAACCGTCAGCACGTCCGGGTTCTTGCCTTCTGTGATCTCGCGGTACATCCAATCAGCTAGCTCGATCTCGATGTACTCCGGCCGCCCGGTTTCGCTCTTTACGATCTTGTAGCGGCTAATCAAGGCTTCACCCTCGGATACCGTCACCAGGCGGCCGTTCTTGGCCTTCTTCGTACGCTGCATGGCAACGTGCGTGGTGTTTAACCGAATGCAGGTTTCTACCAGGTCGTCTTTCTGCTTTCCGCCATCGGCTCGCCGGCAGAACTTGAGTACGTCCGCAACGTGTGGACGGAACACGCGGCCGGGCTTGTCTCCCTTCCCTTCCCGGTATCGGTTCATGGATTCGGTTAGATGGGAAACCGCCATCAGTACCAGGTCGTAATCCCACACACTGGCCATGCCGGCCGGCCCTGCGGAAACCTCTACGTGCCCGTCTGGAAGCTCGTAGCGGATCACCTCGCCAGCTCGTCGGTCACGCTTCGACAGACGGAAAACGGCCACGTCCATGATGCTGCGACTATCGCGGGTGCCCACGTCATAGAGCATCGGAACGAAAAAATCTGGTTGCTCGTCGCCCTTGGGCGGCTTCCTAATCGACGGCGCACCGGCTGCCGGCGGTTGCCGGGATTCTTTGCGGATTCGATCAGCGGCCGCTTGCCACGATTCACCGGGGCGTGCTTCTGCCTCGATGCGTTGCCGCTGGGCGGCCTGCGCGGCCTTCAACTTCTCCACCAGGTCATCACCCAGCGCCGCGCCGATTTGTACCGGGCCGGATGGTTTGCGACCGTCACGCCGATTCCTCGGGCTTGGGGGTTCCAGTGCCATTGCAGGGCCGGCAGACAACCCAGCCGCTTACGCCTGGCCAACCGCCCGTTCCTCCACACATGGGGCATTCCACGGCGTCGGTGCCTGGTTGTTCTTGATTTTCCATGCCGCCTCCTTTAGCCGCTAAAATTCATCTACTCATTTATTCATTTGCTCATTTACTCTGGTAGCTGCGCGATGTATTCAGATAGCAGCTCGGTAATGGTCTTGCCTTGGCGTACCGCGTACATCTTCAGCTTGGTGTGATCCTCCGCCGGCAACTGAAAGTTGACCCGCTTCATGGCTGGCGTGTCTGCCAGGCTGGCCAACGTTGCAGCCTTGCTGCTGCGTGCGCTCGGACGGCCGGCACTTAGCGTGTTTGTGCTTTTGCTCATTTTCTCTTTACCTCATTAACTCAAATGAGTTTTGATTTAATTTCAGCGGCCAGCGCCTGGACCTCGCGGGCAGCGTCGCCCTCGGGTTCTGATTCAAGAACGGTTGTGCCGGCGGCGGCAGTGCCTGGGTAGCTCACGCGCTGCGTGATACGGGACTCAAGAATGGGCAGCTCGTACCCGGCCAGCGCCTCGGCAACCTCACCGCCGATGCGCGTGCCTTTGATCGCCCGCGACACGACAAAGGCCGCTTGTAGCCTTCCATCCGTGACCTCAATGCGCTGCTTAACCAGCTCCACCAGGTCGGCGGTGGCCCATATGTCGTAAGGGCTTGGCTGCACCGGAATCAGCACGAAGTCGGCTGCCTTGATCGCGGACACAGCCAAGTCCGCCGCCTGGGGCGCTCCGTCGATCACTACGAAGTCGCGCCGGCCGATGGCCTTCACGTCGCGGTCAATCGTCGGGCGGTCGATGCCGACAACGGTTAGCGGTTGATCTTCCCGCACGGCCGCCCAATCGCGGGCACTGCCCTGGGGATCGGAATCGACTAACAGAACATCGGCCCCGGCGAGTTGCAGGGCGCGGGCTAGATGGGTTGCGATGGTCGTCTTGCCTGACCCGCCTTTCTGGTTAAGTACAGCGATAACCTTCATGCGTTCCCCTTGCGTATTTGTTTATTTACTCATCGCATCATATACGCAGCGACCGCATGACGCAAGCTGTTTTACTCAAATACACATCACCTTTTTAGACGGCGGCGCTCGGTTTCTTCAGCGGCCAAGCTGGCCGGCCAGGCCGCCAGCTTGGCATCAGACAAACCGGCCAGGATTTCATGCAGCCGCACGGTTGAGACGTGCGCGGGCGGCTCGAACACGTACCCGGCCGCGATCATCTCCGCCTCGATCTCTTCGGTAATGAAAAACGGTTCGTCCTGGCCGTCCTGGTGCGGTTTCATGCTTGTTCCTCTTGGCGTTCATTCTCGGCGGCCGCCAGGGCGTCGGCCTCGGTCAATGCGTCCTCACGGAAGGCACCGCGCCGCCTGGCCTCGGTGGGCGTCACTTCCTCGCTGCGCTCAAGTGCGCGGTACAGGGTCGAGCGATGCACGCCAAGCAGTGCAGCCGCCTCTTTCACGGTGCGGCCTTCCTGGTCGATCAGCTCGCGGGCGTGCGCGATCTGTGCCGGGGTGAGGGTAGGGCGGGGGCCAAACTTCACGCCTCGGGCCTTGGCGGCCTCGCGCCCGCTCCGGGTGCGGTCGATGATTAGGGAACGCTCGAACTCGGCAATGCCGGCGAACACGGTCAACACCATGCGGCCGGCCGGCGTGGTGGTGTCGGCCCACGGCTCTGCCAGGCTACGCAGGCCCGCGCCGGCCTCCTGGATGCGCTCGGCAATGTCCAGTAGGTCGCGGGTGCTGCGGGCCAGGCGGTCTAGCCTGGTCACTGTCACAACGTCGCCAGGGCGTAGGTGGTCAAGCATCCTGGCCAGCTCCGGGCGGTCGCGCCTGGTGCCGGTGATCTTCTCGGAAAACAGCTTGGTGCAGCCGGCCGCGTGCAGTTCGGCCCGTTGGTTGGTCAAGTCCTGGTCGTCGGTGCTGACGCGGGCATAGCCCAGCAGGCCAGCGGCGGCGCTCTTGTTCATGGCGTAATGTCTCCGGTTCTAGTCGCAAGTATTCTACTTTATGCGACTAAAACACGCGACAAGAAAACGCCAGGAAAAGGGCAGGGCGGCAGCCTGTCGCGTAACTTAGGACTTGTGCGACATGTCGTTTTCAGAAGACGGCTGCACTGAACGTCAGAAGCCGACTGCACTATAGCAGCGGAGGGGTTGGATCAAAGTACTTTGATCCCGAGGGGAACCCTGTGGTTGGCATGCACATACAAATGGACGAACGGATAAACCTTTTCACGCCCTTTTAAATATCCGTTATTCTAATAAACGCTCTTTTCTCTTAGGTTTACCCGCCAATATATCCTGTCAAACACTGATAGTTTAAACTGAAGGCGGGAAACGACAATCTGATCCAAGCTCAAGCTGCTCTAGCATTCGCCATTCAGGCTGCGCAACTGTTGGGAAGGGCGATCGGTGCGGGCCTCTTCGCTATTACGCCAGCTGGCGAAAGGGGGATGTGCTGCAAGGCGATTAAGTTGGGTAACGCCAGGGTTTTCCCAGTCACGACGTTGTAAAACGACGGCCAGTGCC。

super promoter-HvFRF1-GFP SEQ ID NO.27，其中，酶切位点序列包括：TCTAGA、GGTACC，HvFRF1基因序列为：

atgccggaggtgatgtccacgccacagcaacccacagccatgatgagatttgacactcttgaggatgctgagaaacactacaaactgtatgcgaggcagaaaggttttggagtaaggtattgtttccgaaaaaggtcagaggctagtggtgaactgataagagcatcacttgtctgccatagagctgggttgaagatcaagaggaaagtagacacccaaaacccgcaacctattgcccctgagaggagtaggaatacaactgaaagaacaaactgcccagcccgtatgtttgtgaagcgaagagataatgcctgggttgtaacagaaataaatgacaaccataaccaccctctcataaagaaatggtcgctgacaggatacctacgatcacatagacatatccctgaagaagaacaacagtttgtgaagttgcttcattcgtgcaatctagaaccttctagacagatgcagttgttgacagagttgcatggccaacgtgaagccattggttacactgacaaagacttggcaaatttgctagcaaagttccgggctgagcacaaatacactgatatgcaggacacgattgagtacttcaaaagcagtcaacagcttgataaagactttttttacaagtacaagcttgatgatgaaaataaggtccaatgcatttactggattgatggttcagcgagaagggcttacaagtttttcagtgattgtgtctcttttgacacaacatacttgaccaatatatacaagatgccttgtgcccgtttattggta；

GFP基因序列为：

ATGGTGAGCAAGGGCGAGGAGCTGTTCACCGGGGTGGTGCCCATCCTGGTCGAGCTGGACGGCGACGTAAACGGCCACAAGTTCAGCGTGTCCGGCGAGGGCGAGGGCGATGCCACCTACGGCAAGCTGACCCTGAAGTTCATCTGCACCACCGGCAAGCTGCCCGTGCCCTGGCCCACCCTCGTGACCACCCTGACCTACGGCGTGCAGTGCTTCAGCCGCTACCCCGACCACATGAAGCAGCACGACTTCTTCAAGTCCGCCATGCCCGAAGGCTACGTCCAGGAGCGCACCATCTTCTTCAAGGACGACGGCAACTACAAGACCCGCGCCGAGGTGAAGTTCGAGGGCGACACCCTGGTGAACCGCATCGAGCTGAAGGGCATCGACTTCAAGGAGGACGGCAACATCCTGGGGCACAAGCTGGAGTACAACTACAACAGCCACAACGTCTATATCATGGCCGACAAGCAGAAGAACGGCATCAAGGTGAACTTCAAGATCCGCCACAACATCGAGGACGGCAGCGTGCAGCTCGCCGACCACTACCAGCAGAACACCCCCATCGGCGACGGCCCCGTGCTGCTGCCCGACAACCACTACCTGAGCACCCAGTCCGCCCTGAGCAAAGACCCCAACGAGAAGCGCGATCACATGGTCCTGCTGGAGTTCGTGACCGCCGCCGGGATCACTCTCGGCATGGACGAGCTGTACAAGTAA；

SEQ ID NO.27具体序列为：

GGATCCCTGAAAGCGACGTTGGATGTTAACATCTACAAATTGCCTTTTCTTATCGACCATGTACGTAAGCGCTTACGTTTTTGGTGGACCCTTGAGGAAACTGGTAGCTGTTGTGGGCCTGTGGTCTCAAGATGGATCATTAATTTCCACCTTCACCTACGATGGGGGGCATCGCACCGGTGAGTAATATTGTACGGCTAAGAGCGAATTTGGCCTGTAGGATCCCTGAAAGCGACGTTGTGTTAACATCTACAAATTGCCTTTTCTTATCGACCATGTACGTAAGCGCTTACGTTTTTGGTGGACCCTTGAGGAAACTGGTAGCTGTTGTGGGCCTGTGGTCTCAAGATGGATCATTAATTTCCACCTACGATGGGGGGCATCGCACCGGTGAGTAATATTGTACGGCTAAGAGCGAATTTGGCCTGTAGGATCCCTGAAAGCGACGTTGGATGTTAACATCTACAAATTGCCTTTTCTTATCGACCATGTACGTAAGCGCTTACGTTTTTGGTGGACCCTTGAGGAAACTGGTAGCTGTTGTGGGCCTGTGGTCTCAAGATGGATCATTAATTTCCACCTTCACCTACGATGGGGGGCATCGCACCGGTGAGTAATATTGTACGGCTAAGAGCGAATTTGGCCTGTAGGATCCGCGAGCTGCTCAATCCCATTGCTTTTGAAGCAGCTCAACATTGATCTCTTTCTCGATCGAGGGAGATTTTTCAAATCAGTGCGCAAGACGTGACGTAAGTATCCGAGTCAGTTTTTATTTTTCTACTAATTTGGTCGTTTATTTCGGCGTGTAGGACATGGCAACCGGGCCTGAATTTCGCGGGTATTCTGTTTCTATTCCAACTTTTTCTTGATCCGCAGCCATTAACGACTTTTGAATAGATACGCTGACACGCCAAGCCTCGCTAGTCAAAAGTGTACCAAACAACGCTTTACAGCAAGAACGGAATGCGCGTGACGCTCGCGGTGACGCCATTTCGCCTTTTCAGAAATGGATAAATAGCCTTGCTTCCTATTATATCTTCCCCCAAATTACCAATACATTACACTAGCATCTGAATTTCATAACCAATCTCGATACACCAAATCGACTCTAGTCTAGAatgccggaggtgatgtccacgccacagcaacccacagccatgatgagatttgacactcttgaggatgctgagaaacactacaaactgtatgcgaggcagaaaggttttggagtaaggtattgtttccgaaaaaggtcagaggctagtggtgaactgataagagcatcacttgtctgccatagagctgggttgaagatcaagaggaaagtagacacccaaaacccgcaacctattgcccctgagaggagtaggaatacaactgaaagaacaaactgcccagcccgtatgtttgtgaagcgaagagataatgcctgggttgtaacagaaataaatgacaaccataaccaccctctcataaagaaatggtcgctgacaggatacctacgatcacatagacatatccctgaagaagaacaacagtttgtgaagttgcttcattcgtgcaatctagaaccttctagacagatgcagttgttgacagagttgcatggccaacgtgaagccattggttacactgacaaagacttggcaaatttgctagcaaagttccgggctgagcacaaatacactgatatgcaggacacgattgagtacttcaaaagcagtcaacagcttgataaagactttttttacaagtacaagcttgatgatgaaaataaggtccaatgcatttactggattgatggttcagcgagaagggcttacaagtttttcagtgattgtgtctcttttgacacaacatacttgaccaatatatacaagatgccttgtgcccgtttattggtaGGTACCATGGTGAGCAAGGGCGAGGAGCTGTTCACCGGGGTGGTGCCCATCCTGGTCGAGCTGGACGGCGACGTAAACGGCCACAAGTTCAGCGTGTCCGGCGAGGGCGAGGGCGATGCCACCTACGGCAAGCTGACCCTGAAGTTCATCTGCACCACCGGCAAGCTGCCCGTGCCCTGGCCCACCCTCGTGACCACCCTGACCTACGGCGTGCAGTGCTTCAGCCGCTACCCCGACCACATGAAGCAGCACGACTTCTTCAAGTCCGCCATGCCCGAAGGCTACGTCCAGGAGCGCACCATCTTCTTCAAGGACGACGGCAACTACAAGACCCGCGCCGAGGTGAAGTTCGAGGGCGACACCCTGGTGAACCGCATCGAGCTGAAGGGCATCGACTTCAAGGAGGACGGCAACATCCTGGGGCACAAGCTGGAGTACAACTACAACAGCCACAACGTCTATATCATGGCCGACAAGCAGAAGAACGGCATCAAGGTGAACTTCAAGATCCGCCACAACATCGAGGACGGCAGCGTGCAGCTCGCCGACCACTACCAGCAGAACACCCCCATCGGCGACGGCCCCGTGCTGCTGCCCGACAACCACTACCTGAGCACCCAGTCCGCCCTGAGCAAAGACCCCAACGAGAAGCGCGATCACATGGTCCTGCTGGAGTTCGTGACCGCCGCCGGGATCACTCTCGGCATGGACGAGCTGTACAAGTAAGAGCTCGAATTTCCCCGATCGTTCAAACATTTGGCAATAAAGTTTCTTAAGATTGAATCCTGTTGCCGGTCTTGCGATGATTATCATATAATTTCTGTTGAATTACGTTAAGCATGTAATAATTAACATGTAATGCATGACGTTATTTATGAGATGGGTTTTTATGATTAGAGTCCCGCAATTATACATTTAATACGCGATAGAAAACAAAATATAGCGCGCAAACTAGGATAAATTATCGCGCGCGGTGTCATCTATGTTACTAGATCGGGAATTCGTAATCATGGTCATAGCTGTTTCCTGTGTGAAATTGTTATCCGCTCACAATTCCACACAACATACGAGCCGGAAGCATAAAGTGTAAAGCCTGGGGTGCCTAATGAGTGAGCTAACTCACATTAATTGCGTTGCGCTCACTGCCCGCTTTCCAGTCGGGAAACCTGTCGTGCCAGCTGCATTAATGAATCGGCCAACGCGCGGGGAGAGGCGGTTTGCGTATTGGCTAGAGCAGCTTGCCAACATGGTGGAGCACGACACTCTCGTCTACTCCAAGAATATCAAAGATACAGTCTCAGAAGACCAAAGGGCTATTGAGACTTTTCAACAAAGGGTAATATCGGGAAACCTCCTCGGATTCCATTGCCCAGCTATCTGTCACTTCATCAAAAGGACAGTAGAAAAGGAAGGTGGCACCTACAAATGCCATCATTGCGATAAAGGAAAGGCTATCGTTCAAGATGCCTCTGCCGACAGTGGTCCCAAAGATGGACCCCCACCCACGAGGAGCATCGTGGAAAAAGAAGACGTTCCAACCACGTCTTCAAAGCAAGTGGATTGATGTGATAACATGGTGGAGCACGACACTCTCGTCTACTCCAAGAATATCAAAGATACAGTCTCAGAAGACCAAAGGGCTATTGAGACTTTTCAACAAAGGGTAATATCGGGAAACCTCCTCGGATTCCATTGCCCAGCTATCTGTCACTTCATCAAAAGGACAGTAGAAAAGGAAGGTGGCACCTACAAATGCCATCATTGCGATAAAGGAAAGGCTATCGTTCAAGATGCCTCTGCCGACAGTGGTCCCAAAGATGGACCCCCACCCACGAGGAGCATCGTGGAAAAAGAAGACGTTCCAACCACGTCTTCAAAGCAAGTGGATTGATGTGATATCTCCACTGACGTAAGGGATGACGCACAATCCCACTATCCTTCGCAAGACCTTCCTCTATATAAGGAAGTTCATTTCATTTGGAGAGGACACGCTGAAATCACCAGTCTCTCTCTACAAATCTATCTCTCTCGAGCTTTCGCAGATCCGGGGGGGCAATGAGATATGAAAAAGCCTGAACTCACCGCGACGTCTGTCGAGAAGTTTCTGATCGAAAAGTTCGACAGCGTCTCCGACCTGATGCAGCTCTCGGAGGGCGAAGAATCTCGTGCTTTCAGCTTCGATGTAGGAGGGCGTGGATATGTCCTGCGGGTAAATAGCTGCGCCGATGGTTTCTACAAAGATCGTTATGTTTATCGGCACTTTGCATCGGCCGCGCTCCCGATTCCGGAAGTGCTTGACATTGGGGAGTTTAGCGAGAGCCTGACCTATTGCATCTCCCGCCGTGCACAGGGTGTCACGTTGCAAGACCTGCCTGAAACCGAACTGCCCGCTGTTCTACAACCGGTCGCGGAGGCTATGGATGCGATCGCTGCGGCCGATCTTAGCCAGACGAGCGGGTTCGGCCCATTCGGACCGCAAGGAATCGGTCAATACACTACATGGCGTGATTTCATATGCGCGATTGCTGATCCCCATGTGTATCACTGGCAAACTGTGATGGACGACACCGTCAGTGCGTCCGTCGCGCAGGCTCTCGATGAGCTGATGCTTTGGGCCGAGGACTGCCCCGAAGTCCGGCACCTCGTGCACGCGGATTTCGGCTCCAACAATGTCCTGACGGACAATGGCCGCATAACAGCGGTCATTGACTGGAGCGAGGCGATGTTCGGGGATTCCCAATACGAGGTCGCCAACATCTTCTTCTGGAGGCCGTGGTTGGCTTGTATGGAGCAGCAGACGCGCTACTTCGAGCGGAGGCATCCGGAGCTTGCAGGATCGCCACGACTCCGGGCGTATATGCTCCGCATTGGTCTTGACCAACTCTATCAGAGCTTGGTTGACGGCAATTTCGATGATGCAGCTTGGGCGCAGGGTCGATGCGACGCAATCGTCCGATCCGGAGCCGGGACTGTCGGGCGTACACAAATCGCCCGCAGAAGCGCGGCCGTCTGGACCGATGGCTGTGTAGAAGTACTCGCCGATAGTGGAAACCGACGCCCCAGCACTCGTCCGAGGGCAAAGAAATAGAGTAGATGCCGACCGGATCTGTCGATCGACAAGCTCGAGTTTCTCCATAATAATGTGTGAGTAGTTCCCAGATAAGGGAATTAGGGTTCCTATAGGGTTTCGCTCATGTGTTGAGCATATAAGAAACCCTTAGTATGTATTTGTATTTGTAAAATACTTCTATCAATAAAATTTCTAATTCCTAAAACCAAAATCCAGTACTAAAATCCAGATCCCCCGAATTAATTCGGCGTTAATTCAGTACATTAAAAACGTCCGCAATGTGTTATTAAGTTGTCTAAGCGTCAATTTGTTTACACCACAATATATCCTGCCACCAGCCAGCCAACAGCTCCCCGACCGGCAGCTCGGCACAAAATCACCACTCGATACAGGCAGCCCATCAGTCCGGGACGGCGTCAGCGGGAGAGCCGTTGTAAGGCGGCAGACTTTGCTCATGTTACCGATGCTATTCGGAAGAACGGCAACTAAGCTGCCGGGTTTGAAACACGGATGATCTCGCGGAGGGTAGCATGTTGATTGTAACGATGACAGAGCGTTGCTGCCTGTGATCACCGCGGTTTCAAAATCGGCTCCGTCGATACTATGTTATACGCCAACTTTGAAAACAACTTTGAAAAAGCTGTTTTCTGGTATTTAAGGTTTTAGAATGCAAGGAACAGTGAATTGGAGTTCGTCTTGTTATAATTAGCTTCTTGGGGTATCTTTAAATACTGTAGAAAAGAGGAAGGAAATAATAAATGGCTAAAATGAGAATATCACCGGAATTGAAAAAACTGATCGAAAAATACCGCTGCGTAAAAGATACGGAAGGAATGTCTCCTGCTAAGGTATATAAGCTGGTGGGAGAAAATGAAAACCTATATTTAAAAATGACGGACAGCCGGTATAAAGGGACCACCTATGATGTGGAACGGGAAAAGGACATGATGCTATGGCTGGAAGGAAAGCTGCCTGTTCCAAAGGTCCTGCACTTTGAACGGCATGATGGCTGGAGCAATCTGCTCATGAGTGAGGCCGATGGCGTCCTTTGCTCGGAAGAGTATGAAGATGAACAAAGCCCTGAAAAGATTATCGAGCTGTATGCGGAGTGCATCAGGCTCTTTCACTCCATCGACATATCGGATTGTCCCTATACGAATAGCTTAGACAGCCGCTTAGCCGAATTGGATTACTTACTGAATAACGATCTGGCCGATGTGGATTGCGAAAACTGGGAAGAAGACACTCCATTTAAAGATCCGCGCGAGCTGTATGATTTTTTAAAGACGGAAAAGCCCGAAGAGGAACTTGTCTTTTCCCACGGCGACCTGGGAGACAGCAACATCTTTGTGAAAGATGGCAAAGTAAGTGGCTTTATTGATCTTGGGAGAAGCGGCAGGGCGGACAAGTGGTATGACATTGCCTTCTGCGTCCGGTCGATCAGGGAGGATATCGGGGAAGAACAGTATGTCGAGCTATTTTTTGACTTACTGGGGATCAAGCCTGATTGGGAGAAAATAAAATATTATATTTTACTGGATGAATTGTTTTAGTACCTAGAATGCATGACCAAAATCCCTTAACGTGAGTTTTCGTTCCACTGAGCGTCAGACCCCGTAGAAAAGATCAAAGGATCTTCTTGAGATCCTTTTTTTCTGCGCGTAATCTGCTGCTTGCAAACAAAAAAACCACCGCTACCAGCGGTGGTTTGTTTGCCGGATCAAGAGCTACCAACTCTTTTTCCGAAGGTAACTGGCTTCAGCAGAGCGCAGATACCAAATACTGTCCTTCTAGTGTAGCCGTAGTTAGGCCACCACTTCAAGAACTCTGTAGCACCGCCTACATACCTCGCTCTGCTAATCCTGTTACCAGTGGCTGCTGCCAGTGGCGATAAGTCGTGTCTTACCGGGTTGGACTCAAGACGATAGTTACCGGATAAGGCGCAGCGGTCGGGCTGAACGGGGGGTTCGTGCACACAGCCCAGCTTGGAGCGAACGACCTACACCGAACTGAGATACCTACAGCGTGAGCTATGAGAAAGCGCCACGCTTCCCGAAGGGAGAAAGGCGGACAGGTATCCGGTAAGCGGCAGGGTCGGAACAGGAGAGCGCACGAGGGAGCTTCCAGGGGGAAACGCCTGGTATCTTTATAGTCCTGTCGGGTTTCGCCACCTCTGACTTGAGCGTCGATTTTTGTGATGCTCGTCAGGGGGGCGGAGCCTATGGAAAAACGCCAGCAACGCGGCCTTTTTACGGTTCCTGGCCTTTTGCTGGCCTTTTGCTCACATGTTCTTTCCTGCGTTATCCCCTGATTCTGTGGATAACCGTATTACCGCCTTTGAGTGAGCTGATACCGCTCGCCGCAGCCGAACGACCGAGCGCAGCGAGTCAGTGAGCGAGGAAGCGGAAGAGCGCCTGATGCGGTATTTTCTCCTTACGCATCTGTGCGGTATTTCACACCGCATATGGTGCACTCTCAGTACAATCTGCTCTGATGCCGCATAGTTAAGCCAGTATACACTCCGCTATCGCTACGTGACTGGGTCATGGCTGCGCCCCGACACCCGCCAACACCCGCTGACGCGCCCTGACGGGCTTGTCTGCTCCCGGCATCCGCTTACAGACAAGCTGTGACCGTCTCCGGGAGCTGCATGTGTCAGAGGTTTTCACCGTCATCACCGAAACGCGCGAGGCAGGGTGCCTTGATGTGGGCGCCGGCGGTCGAGTGGCGACGGCGCGGCTTGTCCGCGCCCTGGTAGATTGCCTGGCCGTAGGCCAGCCATTTTTGAGCGGCCAGCGGCCGCGATAGGCCGACGCGAAGCGGCGGGGCGTAGGGAGCGCAGCGACCGAAGGGTAGGCGCTTTTTGCAGCTCTTCGGCTGTGCGCTGGCCAGACAGTTATGCACAGGCCAGGCGGGTTTTAAGAGTTTTAATAAGTTTTAAAGAGTTTTAGGCGGAAAAATCGCCTTTTTTCTCTTTTATATCAGTCACTTACATGTGTGACCGGTTCCCAATGTACGGCTTTGGGTTCCCAATGTACGGGTTCCGGTTCCCAATGTACGGCTTTGGGTTCCCAATGTACGTGCTATCCACAGGAAAGAGACCTTTTCGACCTTTTTCCCCTGCTAGGGCAATTTGCCCTAGCATCTGCTCCGTACATTAGGAACCGGCGGATGCTTCGCCCTCGATCAGGTTGCGGTAGCGCATGACTAGGATCGGGCCAGCCTGCCCCGCCTCCTCCTTCAAATCGTACTCCGGCAGGTCATTTGACCCGATCAGCTTGCGCACGGTGAAACAGAACTTCTTGAACTCTCCGGCGCTGCCACTGCGTTCGTAGATCGTCTTGAACAACCATCTGGCTTCTGCCTTGCCTGCGGCGCGGCGTGCCAGGCGGTAGAGAAAACGGCCGATGCCGGGATCGATCAAAAAGTAATCGGGGTGAACCGTCAGCACGTCCGGGTTCTTGCCTTCTGTGATCTCGCGGTACATCCAATCAGCTAGCTCGATCTCGATGTACTCCGGCCGCCCGGTTTCGCTCTTTACGATCTTGTAGCGGCTAATCAAGGCTTCACCCTCGGATACCGTCACCAGGCGGCCGTTCTTGGCCTTCTTCGTACGCTGCATGGCAACGTGCGTGGTGTTTAACCGAATGCAGGTTTCTACCAGGTCGTCTTTCTGCTTTCCGCCATCGGCTCGCCGGCAGAACTTGAGTACGTCCGCAACGTGTGGACGGAACACGCGGCCGGGCTTGTCTCCCTTCCCTTCCCGGTATCGGTTCATGGATTCGGTTAGATGGGAAACCGCCATCAGTACCAGGTCGTAATCCCACACACTGGCCATGCCGGCCGGCCCTGCGGAAACCTCTACGTGCCCGTCTGGAAGCTCGTAGCGGATCACCTCGCCAGCTCGTCGGTCACGCTTCGACAGACGGAAAACGGCCACGTCCATGATGCTGCGACTATCGCGGGTGCCCACGTCATAGAGCATCGGAACGAAAAAATCTGGTTGCTCGTCGCCCTTGGGCGGCTTCCTAATCGACGGCGCACCGGCTGCCGGCGGTTGCCGGGATTCTTTGCGGATTCGATCAGCGGCCGCTTGCCACGATTCACCGGGGCGTGCTTCTGCCTCGATGCGTTGCCGCTGGGCGGCCTGCGCGGCCTTCAACTTCTCCACCAGGTCATCACCCAGCGCCGCGCCGATTTGTACCGGGCCGGATGGTTTGCGACCGTCACGCCGATTCCTCGGGCTTGGGGGTTCCAGTGCCATTGCAGGGCCGGCAGACAACCCAGCCGCTTACGCCTGGCCAACCGCCCGTTCCTCCACACATGGGGCATTCCACGGCGTCGGTGCCTGGTTGTTCTTGATTTTCCATGCCGCCTCCTTTAGCCGCTAAAATTCATCTACTCATTTATTCATTTGCTCATTTACTCTGGTAGCTGCGCGATGTATTCAGATAGCAGCTCGGTAATGGTCTTGCCTTGGCGTACCGCGTACATCTTCAGCTTGGTGTGATCCTCCGCCGGCAACTGAAAGTTGACCCGCTTCATGGCTGGCGTGTCTGCCAGGCTGGCCAACGTTGCAGCCTTGCTGCTGCGTGCGCTCGGACGGCCGGCACTTAGCGTGTTTGTGCTTTTGCTCATTTTCTCTTTACCTCATTAACTCAAATGAGTTTTGATTTAATTTCAGCGGCCAGCGCCTGGACCTCGCGGGCAGCGTCGCCCTCGGGTTCTGATTCAAGAACGGTTGTGCCGGCGGCGGCAGTGCCTGGGTAGCTCACGCGCTGCGTGATACGGGACTCAAGAATGGGCAGCTCGTACCCGGCCAGCGCCTCGGCAACCTCACCGCCGATGCGCGTGCCTTTGATCGCCCGCGACACGACAAAGGCCGCTTGTAGCCTTCCATCCGTGACCTCAATGCGCTGCTTAACCAGCTCCACCAGGTCGGCGGTGGCCCATATGTCGTAAGGGCTTGGCTGCACCGGAATCAGCACGAAGTCGGCTGCCTTGATCGCGGACACAGCCAAGTCCGCCGCCTGGGGCGCTCCGTCGATCACTACGAAGTCGCGCCGGCCGATGGCCTTCACGTCGCGGTCAATCGTCGGGCGGTCGATGCCGACAACGGTTAGCGGTTGATCTTCCCGCACGGCCGCCCAATCGCGGGCACTGCCCTGGGGATCGGAATCGACTAACAGAACATCGGCCCCGGCGAGTTGCAGGGCGCGGGCTAGATGGGTTGCGATGGTCGTCTTGCCTGACCCGCCTTTCTGGTTAAGTACAGCGATAACCTTCATGCGTTCCCCTTGCGTATTTGTTTATTTACTCATCGCATCATATACGCAGCGACCGCATGACGCAAGCTGTTTTACTCAAATACACATCACCTTTTTAGACGGCGGCGCTCGGTTTCTTCAGCGGCCAAGCTGGCCGGCCAGGCCGCCAGCTTGGCATCAGACAAACCGGCCAGGATTTCATGCAGCCGCACGGTTGAGACGTGCGCGGGCGGCTCGAACACGTACCCGGCCGCGATCATCTCCGCCTCGATCTCTTCGGTAATGAAAAACGGTTCGTCCTGGCCGTCCTGGTGCGGTTTCATGCTTGTTCCTCTTGGCGTTCATTCTCGGCGGCCGCCAGGGCGTCGGCCTCGGTCAATGCGTCCTCACGGAAGGCACCGCGCCGCCTGGCCTCGGTGGGCGTCACTTCCTCGCTGCGCTCAAGTGCGCGGTACAGGGTCGAGCGATGCACGCCAAGCAGTGCAGCCGCCTCTTTCACGGTGCGGCCTTCCTGGTCGATCAGCTCGCGGGCGTGCGCGATCTGTGCCGGGGTGAGGGTAGGGCGGGGGCCAAACTTCACGCCTCGGGCCTTGGCGGCCTCGCGCCCGCTCCGGGTGCGGTCGATGATTAGGGAACGCTCGAACTCGGCAATGCCGGCGAACACGGTCAACACCATGCGGCCGGCCGGCGTGGTGGTGTCGGCCCACGGCTCTGCCAGGCTACGCAGGCCCGCGCCGGCCTCCTGGATGCGCTCGGCAATGTCCAGTAGGTCGCGGGTGCTGCGGGCCAGGCGGTCTAGCCTGGTCACTGTCACAACGTCGCCAGGGCGTAGGTGGTCAAGCATCCTGGCCAGCTCCGGGCGGTCGCGCCTGGTGCCGGTGATCTTCTCGGAAAACAGCTTGGTGCAGCCGGCCGCGTGCAGTTCGGCCCGTTGGTTGGTCAAGTCCTGGTCGTCGGTGCTGACGCGGGCATAGCCCAGCAGGCCAGCGGCGGCGCTCTTGTTCATGGCGTAATGTCTCCGGTTCTAGTCGCAAGTATTCTACTTTATGCGACTAAAACACGCGACAAGAAAACGCCAGGAAAAGGGCAGGGCGGCAGCCTGTCGCGTAACTTAGGACTTGTGCGACATGTCGTTTTCAGAAGACGGCTGCACTGAACGTCAGAAGCCGACTGCACTATAGCAGCGGAGGGGTTGGATCAAAGTACTTTGATCCCGAGGGGAACCCTGTGGTTGGCATGCACATACAAATGGACGAACGGATAAACCTTTTCACGCCCTTTTAAATATCCGTTATTCTAATAAACGCTCTTTTCTCTTAGGTTTACCCGCCAATATATCCTGTCAAACACTGATAGTTTAAACTGAAGGCGGGAAACGACAATCTGATCCAAGCTCAAGCTGCTCTAGCATTCGCCATTCAGGCTGCGCAACTGTTGGGAAGGGCGATCGGTGCGGGCCTCTTCGCTATTACGCCAGCTGGCGAAAGGGGGATGTGCTGCAAGGCGATTAAGTTGGGTAACGCCAGGGTTTTCCCAGTCACGACGTTGTAAAACGACGGCCAGTGCC。

pBract214载体SEQ ID NO.28，attR臂的序列包括：ACAAGTTTGTACAAAAAAGCTGAAC，GTTCAGCTTTCTTGTACAAAGTGG；

SEQ ID NO.28的具体序列为：

TTTTTATCCCCGGAAGCCTGTGGATAGAGGGTAGTTATCCACGTGAAACCGCTAATGCCCCGCAAAGCCTTGATTCACGGGGCTTTCCGGCCCGCTCCAAAAACTATCCACGTGAAATCGCTAATCAGGGTACGTGAAATCGCTAATCGGAGTACGTGAAATCGCTAATAAGGTCACGTGAAATCGCTAATCAAAAAGGCACGTGAGAACGCTAATAGCCCTTTCAGATCAACAGCTTGCAAACACCCCTCGCTCCGGCAAGTAGTTACAGCAAGTAGTATGTTCAATTAGCTTTTCAATTATGAATATATATATCAATTATTGGTCGCCCTTGGCTTGTGGACAATGCGCTACGCGCACCGGCTCCGCCCGTGGACAACCGCAAGCGGTTGCCCACCGTCGAGCGCCAGCGCCTTTGCCCACAACCCGGCGGCCGGCCGCAACAGATCGTTTTATAAATTTTTTTTTTTGAAAAAGAAAAAGCCCGAAAGGCGGCAACCTCTCGGGCTTCTGGATTTCCGATCCCCGGAATTAGATCTTGGCAGGATATATTGTGGTGTAACGTATCACAAGTTTGTACAAAAAAGCAGGCTCCGCGGCCGCCCCCTTCACCTAGACTCGACGCGTCCTAGAGATCCGTCAACATGGTGGAGCACGACACTCTCGTCTACTCCAAGAATATCAAAGATACAGTCTCAGAAGACCAAAGGGCTATTGAGACTTTTCAACAAAGGGTAATATCGGGAAACCTCCTCGGATTCCATTGCCCAGCTATCTGTCACTTCATCAAAAGGACAGTAGAAAAGGAAGGTGGCACCTACAAATGCCATCATTGCGATAAAGGAAAGGCTATCGTTCAAGATGCCTCTGCCGACAGTGGTCCCAAAGATGGACCCCCACCCACGAGGAGCATCGTGGAAAAAGAAGACGTTCCAACCACGTCTTCAAAGCAAGTGGATTGATGTGATATCTCCACTGACGTAAGGGATGACGCACAATCCCACTATCCTTCGCAAGACCCTTCCTCTATATAAGGAAGTTCATTTCATTTGGAGAGGACGACCCCGATATGAAAAAGCCTGAACTCACCGCGACGTCTGTCGAGAAGTTTCTGATCGAAAAGTTCGACAGCGTCTCCGACCTGATGCAGCTCTCGGAGGGCGAAGAATCTCGTGCTTTCAGCTTCGATGTAGGAGGGCGTGGATATGTCCTGCGGGTAAATAGCTGCGCCGATGGTTTCTACAAAGATCGTTATGTTTATCGGCACTTTGCATCGGCCGCGCTCCCGATTCCGGAAGTGCTTGACATTGGGGAATTCAGCGAGAGCCTGACCTATTGCATCTCCCGCCGTGCACAGGGTGTCACGTTGCAAGACCTGCCTGAAACCGAACTGCCCGCTGTTCTGCAGGTAAATTTCTAGTTTTTCTCCTTCATTTTCTTGGTTAGGACCCTTTTCTCTTTTTATTTTTTTGAGCTTTGATCTTTCTTTAAACTGATCTATTTTTTAATTGATTGGTTATGGTGTAAATATTACATAGCTTTAACTGATAATCTGATTACTTTATTTCGTGTGTCTATGATGATGATGATAACTGCAGCCGGTCGCGGAGGCCATGGATGCGATCGCTGCGGCCGATCTTAGCCAGACGAGCGGGTTCGGCCCATTCGGACCGCAAGGAATCGGTCAATACACTACATGGCGTGATTTCATATGCGCGATTGCTGATCCCCATGTGTATCACTGGCAAACTGTGATGGACGACACCGTCAGTGCGTCCGTCGCGCAGGCTCTCGATGAGCTGATGCTTTGGGCCGAGGACTGCCCCGAAGTCCGGCACCTCGTGCACGCGGATTTCGGCTCCAACAATGTCCTGACGGACAATGGCCGCATAACAGCGGTCATTGACTGGAGCGAGGCGATGTTCGGGGATTCCCAATACGAGGTCGCCAACATCTTCTTCTGGAGGCCGTGGTTGGCTTGTATGGAGCAGCAGACGCGCTACTTCGAGCGGAGGCATCCGGAGCTTGCAGGATCGCCGCGGCTCCGGGCGTATATGCTCCGCATTGGTCTTGACCAACTCTATCAGAGCTTGGTTGACGGCAATTTCGATGATGCAGCTTGGGCGCAGGGTCGATGCGACGCAATCGTCCGATCCGGAGCCGGGACTGTCGGGCGTACACAAATCGCCCGCAGAAGCGCGGCCGTCTGGACCGATGGCTGTGTAGAAGTACTCGCCGATAGTGGAAACCGACGCCCCAGCACTCGTCCGAGGGCAAAGGAATAGAGTAGATGCCGACCGGGATCCGGAGAGCTCGAATTTCCCCGATCGTTCAAACATTTGGCAATAAAGTTTCTTAAGATTGAATCCTGTTGCCGGTCTTGCGATGATTATCATATAATTTCTGTTGAATTACGTTAAGCATGTAATAATTAACATGTAATGCATGACGTTATTTATGAGATGGGTTTTTATGATTAGAGTCCCGCAATTATACATTTAATACGCGATAGAAAACAAAATATAGCGCGCAAACTAGGATAAATTATCGCGCGCGGTGTCATCTATGTTACTAGATCGGGAATTCATCGATGATATCAGATCAAGGGTGGGCGCGCCGAACCAGCTTTCTTGTACAAAGTGGTGATCCCCCTCGAGGTCGACGGTATCGATAAGCTTGATATCGAATTCCGTGCAGCGTGACCCGGTCGTGCCCCTCTCTAGAGATAATGAGCATTGCATGTCTAAGTTATAAAAAATTACCACATATTTTTTTTGTCACACTTGTTTGAAGTGCAGTTTATCTATCTTTATACATATATTTAAACTTTACTCTACGAATAATATAATCTATAGTACTACAATAATATCAGTGTTTTAGAGAATCATATAAATGAACAGTTAGACATGGTCTAAAGGACAATTGAGTATTTTGACAACAGGACTCTACAGTTTTATCTTTTTAGTGTGCATGTGTTCTCCTTTTTTTTTGCAAATAGCTTCACCTATATAATACTTCATCCATTTTATTAGTACATCCATTTAGGGTTTAGGGTTAATGGTTTTTATAGACTAATTTTTTTAGTACATCTATTTTATTCTATTTTAGCCTCTAAATTAAGAAAACTAAAACTCTATTTTAGTTTTTTTATTTAATAATTTAGATATAAAATAGAATAAAATAAAGTGACTAAAAATTAAACAAATACCCTTTAAGAAATTAAAAAAACTAAGGAAACATTTTTCTTGTTTCGAGTAGATAATGCCAGCCTGTTAAACGCCGTCGACGAGTCTAACGGACACCAACCAGCGAACCAGCAGCGTCGCGTCGGGCCAAGCGAAGCAGACGGCACGGCATCTCTGTCGCTGCCTCTGGACCCCTCTCGAGAGTTCCGCTCCACCGTTGGACTTGCTCCGCTGTCGGCATCCAGAAATTGCGTGTCGGACGGCAGACGTGAGCCGGCACGGCAGGCGGCCTCCTCCTCCTCTCACGGCACCGGCAGCTACGGGGGATTCCTTTCCCACCGCTCCTTCGCTTTCCCTTCCTCGCCCGCCGTAATAAATAGACACCCCCTCCACACCCTCTTTCCCCAACCTCGTGTTGTTCGGAGCGCACACACACACAACCAGATCTCCCCCAAATCCACCCGTCGGCACCTCCGCTTCAAGGTACGCCGCTCGTCCTCCCCCCCCCCCCCTCTCTACCTTCTCTAGATCGGCGTTCCGGTCCATGGTTAGGGCCCGGTAGTTCTACTTCTGTTCATGTTTGTGTTAGATCCGTGTTTGTGTTAGATCCGTGCTGCTAGCGTTCGTACACGGATGCGACCTGTACGTCAGACACGTTCTGATTGCTAACTTGCCAGTGTTTCTCTTTGGGGAATCCTGGGATGGCTCTAGCCGTTCCGCAGACGGGATCGATTTCATGATTTTTTTTTGTTTCGTTGCATAGGGTTTGGTTTGCCCTTTTCCTTTATTTCAATATATGCCGTGCACTTGTTTGTCGGGTCATCTTTTCATGCTTTTTTTTGTCTTGGTTGTGATGATGTGGTCTGGTTGGGCGGTCGTTCTAGATCGGAGTAGAATTAATTCTGTTTCAAACTACCTGGTGGATTTATTAATTTTGGATCTGTATGTGTGTGCCATACATATTCATAGTTACGAATTGAAGATGATGGATGGAAATATCGATCTAGGATAGGTATACATGTTGATGCGGGTTTTACTGATGCATATACAGAGATGCTTTTTGTTCGCTTGGTTGTGATGATGTGGTGTGGTTGGGCGGTCGTTCATTCGTTCTAGATCGGAGTAGAATACTGTTTCAAACTACCTGGTGTATTTATTAATTTTGGAACTGTATGTGTGTGTCATACATCTTCATAGTTACGAGTTTAAGATGGATGGAAATATCGATCTAGGATAGGTATACATGTTGATGTGGGTTTTACTGATGCATATACATGATGGCATATGCAGCATCTATTCATATGCTCTAACCTTGAGTACCTATCTATTATAATAAACAAGTATGTTTTATAATTATTTTGATCTTGATATACTTGGATGATGGCATATGCAGCAGCTATATGTGGATTTTTTTAGCCCTGCCTTCATACGCTATTTATTTGCTTGGTACTGTTTCTTTTGTCGATGCTCACCCTGTTGTTTGGTGTTACTTCGCCCATCACAAGTTTGTACAAAAAAGCTGAACGAGAAACGTAAAATGATATAAATATCAATATATTAAATTAGATTTTGCATAAAAAACAGACTACATAATACTGTAAAACACAACATATCCAGTCACTATGGCGGCCGCATTAGGCACCCCAGGCTTTACACTTTATGCTTCCGGCTCGTATAATGTGTGGATTTTGAGTTAGGATCCGTCGAGATTTTCAGGAGCTAAGGAAGCTAAAATGGAGAAAAAAATCACTGGATATACCACCGTTGATATATCCCAATGGCATCGTAAAGAACATTTTGAGGCATTTCAGTCAGTTGCTCAATGTACCTATAACCAGACCGTTCAGCTGGATATTACGGCCTTTTTAAAGACCGTAAAGAAAAATAAGCACAAGTTTTATCCGGCCTTTATTCACATTCTTGCCCGCCTGATGAATGCTCATCCGGAATTCCGTATGGCAATGAAAGACGGTGAGCTGGTGATATGGGATAGTGTTCACCCTTGTTACACCGTTTTCCATGAGCAAACTGAAACGTTTTCATCGCTCTGGAGTGAATACCACGACGATTTCCGGCAGTTTCTACACATATATTCGCAAGATGTGGCGTGTTACGGTGAAAACCTGGCCTATTTCCCTAAAGGGTTTATTGAGAATATGTTTTTCGTCTCAGCCAATCCCTGGGTGAGTTTCACCAGTTTTGATTTAAACGTGGCCAATATGGACAACTTCTTCGCCCCCGTTTTCACCATGGGCAAATATTATACGCAAGGCGACAAGGTGCTGATGCCGCTGGCGATTCAGGTTCATCATGCCGTTTGTGATGGCTTCCATGTCGGCAGAATGCTTAATGAATTACAACAGTACTGCGATGAGTGGCAGGGCGGGGCGTAAACGCGTGGATCCGGCTTACTAAAAGCCAGATAACAGTATGCGTATTTGCGCGCTGATTTTTGCGGTATAAGAATATATACTGATATGTATACCCGAAGTATGTCAAAAAGAGGTATGCTATGAAGCAGCGTATTACAGTGACAGTTGACAGCGACAGCTATCAGTTGCTCAAGGCATATATGATGTCAATATCTCCGGTCTGGTAAGCACAACCATGCAGAATGAAGCCCGTCGTCTGCGTGCCGAACGCTGGAAAGCGGAAAATCAGGAAGGGATGGCTGAGGTCGCCCGGTTTATTGAAATGAACGGCTCTTTTGCTGACGAGAACAGGGGCTGGTGAAATGCAGTTTAAGGTTTACACCTATAAAAGAGAGAGCCGTTATCGTCTGTTTGTGGATGTACAGAGTGATATTATTGACACGCCCGGGCGACGGATGGTGATCCCCCTGGCCAGTGCACGTCTGCTGTCAGATAAAGTCTCCCGTGAACTTTACCCGGTGGTGCATATCGGGGATGAAAGCTGGCGCATGATGACCACCGATATGGCCAGTGTGCCGGTCTCCGTTATCGGGGAAGAAGTGGCTGATCTCAGCCACCGCGAAAATGACATCAAAAACGCCATTAACCTGATGTTCTGGGGAATATAAATGTCAGGCTCCCTTATACACAGCCAGTCTGCAGGTCGACCATAGTGACTGGATATGTTGTGTTTTACAGTATTATGTAGTCTGTTTTTTATGCAAAATCTAATTTAATATATTGATATTTATATCATTTTACGTTTCTCGTTCAGCTTTCTTGTACAAAGTGGTGATGGGGGATCCACTAGTTCTAGAATTCGATTGAGTCAAGCAGGATCGTTCAAACATTTGGCAATAAAGTTTCTTAAGATTGAATCCTGTTGCCGGTCTTGCGATGATTATCATATAATTTCTGTTGAATTACGTTAAGCATGTAATAATTAACATGTAATGCATGACGTTATTTATGAGATGGGTTTTTATGATTAGAGTCCCGCAATTATACATTTAATACGCGATAGAAAACAAAATATAGCGCGCAAACTAGGATAAATTATCGCGCGCGGTGTCATCTATGTTACTAGATCGACCGGCATGCAAGCTGATATCAATCACTAGTGAATTCTAGAGCGGCCGCCACCGCGGTGGAGCTCCAGCTTTTGTTCCCTTTAGTGAGGGTTAATTGCGCGCTTGGCGTAATCATGGTCATAGCTGTTTCCTGTGTGAAATTGTTATCCGCTCACAATTCCACACAACATACGAGCCGGAAGCATAAAGTGTAAAGCCTGGGGTGCCTAATGAGTGAGCTAACTCACATTAATTGCGTTGCGCTCACTGCCCGCTTTCCAGTCGGGAAACCTGTCGTGCCAGCTGCATTAATGAATCGGCCAACGCGCGGGGAGAGGCGGTTTGCGTATTGGGCGCTCTTCCGCTTCCTCGCTCACTGACTCGCTGCGCTCGGTCGTTCGGCTGCGGCGAGCGGTATCAGCTCACTCAAAGGCGGTAATACGGTTATCCACAGAATCAGGGGATAACGCAGGAAAGAACATGAAGGCCTTGACAGGATATATTGGCGGGTAAACTAAGTCGCTGTATGTGTTTGTTTGAGATCTCATGTGAGCAAAAGGCCAGCAAAAGGCCAGGAACCGTAAAAAGGCCGCGTTGCTGGCGTTTTTCCATAGGCTCCGCCCCCCTGACGAGCATCACAAAAATCGACGCTCAAGTCAGAGGTGGCGAAACCCGACAGGACTATAAAGATACCAGGCGTTTCCCCCTGGAAGCTCCCTCGTGCGCTCTCCTGTTCCGACCCTGCCGCTTACCGGATACCTGTCCGCCTTTCTCCCTTCGGGAAGCGTGGCGCTTTCTCATAGCTCACGCTGTAGGTATCTCAGTTCGGTGTAGGTCGTTCGCTCCAAGCTGGGCTGTGTGCACGAACCCCCCGTTCAGCCCGACCGCTGCGCCTTATCCGGTAACTATCGTCTTGAGTCCAACCCGGTAAGACACGACTTATCGCCACTGGCAGCAGCCACTGGTAACAGGATTAGCAGAGCGAGGTATGTAGGCGGTGCTACAGAGTTCTTGAAGTGGTGGCCTAACTACGGCTACACTAGAAGAACAGTATTTGGTATCTGCGCTCTGCTGAAGCCAGTTACCTTCGGAAGAAGAGTTGGTAGCTCTTGATCCGGCAAACAAACCACCGCTGGTAGCGGTGGTTTTTTTGTTTGCAAGCAGCAGATTACGCGCAGAAAAAAAGGATCTCAAGAAGATCCTTTGATCTTTTCTACGGGGTCTGACGCTCAGTGGAACGAAAACTCACGTTAAGGGATTTTGGTCATGAGATTATCAAAAAGGATCTTCACCTAGATCCTTTTAAATTAAAAATGAAGTTTTAAATCAATCTAAAGTATATATGTGTAACATTGGTCTAGTGATTAGAAAAACTCATCGAGCATCAAATGAAACTGCAATTTATTCATATCAGGATTATCAATACCATATTTTTGAAAAAGCCGTTTCTGTAATGAAGGAGAAAACTCACCGAGGCAGTTCCATAGGATGGCAAGATCCTGGTATCGGTCTGCGATTCCGACTCGTCCAACATCAATACAACCTATTAATTTCCCCTCGTCAAAAATAAGGTTATCAAGTGAGAAATCACCATGAGTGACGACTGAATCCGGTGAGAATGGCAAAAGTTTATGCATTTCTTTCCAGACTTGTTCAACAGGCCAGCCATTACGCTCGTCATCAAAATCACTCGCATCAACCAAACCGTTATTCATTCGTGATTGCGCCTGAGCGAGACGAAATACGCGATCGCTGTTAAAAGGACAATTACAAACAGGAATCGAATGCAACCGGCGCAGGAACACTGCCAGCGCATCAACAATATTTTCACCTGAATCAGGATATTCTTCTAATACCTGGAATGCTGTTTTCCCTGGGATCGCAGTGGTGAGTAACCATGCATCATCAGGAGTACGGATAAAATGCTTGATGGTCGGAAGAGGCATAAATTCCGTCAGCCAGTTTAGTCTGACCATCTCATCTGTAACAACATTGGCAACGCTACCTTTGCCATGTTTCAGAAACAACTCTGGCGCATCGGGCTTCCCATACAATCGGTAGATTGTCGCACCTGATTGCCCGACATTATCGCGAGCCCATTTATACCCATATAAATCAGCATCCATGTTGGAATTTAATCGCGGCCTTGAGCAAGACGTTTCCCGTTGAATATGGCTCATAACACCCCTTGTATTACTGTTTATGTAAGCAGACAGTTTTATTGTTCATGATGATATATTTTTATCTTGTGCAATGTAACATCAGAGATTTTGAGACACAACGTGGCTTTGTTGAATAAATCGAACTTTTGCTGAGTTGAAGGATCAGATCACGCATCTTCCCGACAACGCAGACCGTTCCGTGGCAAAGCAAAAGTTCAAAATCACCAACTGGTCCACCTACAACAAAGCTCTCATCAACCGTGGCTCCCTCACTTTCTGGCTGGATGATGGGGCGATTCAGGCGATCCCCATCCAACAGCCCGCCGTCGAGCGGGCT。

pBract214:HvFRF1载体SEQ ID NO.29，attB臂的序列为：ACAAGTTTGTACAAAAAAGCAGGCTTCACC、CACCCAGCTTTCTTGTACAAAGTGGT；

HvFRF1基因序列的序列为：

atgccggaggtgatgtccacgccacagcaacccacagccatgatgagatttgacactcttgaggatgctgagaaacactacaaactgtatgcgaggcagaaaggttttggagtaaggtattgtttccgaaaaaggtcagaggctagtggtgaactgataagagcatcacttgtctgccatagagctgggttgaagatcaagaggaaagtagacacccaaaacccgcaacctattgcccctgagaggagtaggaatacaactgaaagaacaaactgcccagcccgtatgtttgtgaagcgaagagataatgcctgggttgtaacagaaataaatgacaaccataaccaccctctcataaagaaatggtcgctgacaggatacctacgatcacatagacatatccctgaagaagaacaacagtttgtgaagttgcttcattcgtgcaatctagaaccttctagacagatgcagttgttgacagagttgcatggccaacgtgaagccattggttacactgacaaagacttggcaaatttgctagcaaagttccgggctgagcacaaatacactgatatgcaggacacgattgagtacttcaaaagcagtcaacagcttgataaagactttttttacaagtacaagcttgatgatgaaaataaggtccaatgcatttactggattgatggttcagcgagaagggcttacaagtttttcagtgattgtgtctcttttgacacaacatacttgaccaatatatacaagatgccttgtgcccgtttattggtataa

SEQ ID NO.29具体序列为：

TTTTTATCCCCGGAAGCCTGTGGATAGAGGGTAGTTATCCACGTGAAACCGCTAATGCCCCGCAAAGCCTTGATTCACGGGGCTTTCCGGCCCGCTCCAAAAACTATCCACGTGAAATCGCTAATCAGGGTACGTGAAATCGCTAATCGGAGTACGTGAAATCGCTAATAAGGTCACGTGAAATCGCTAATCAAAAAGGCACGTGAGAACGCTAATAGCCCTTTCAGATCAACAGCTTGCAAACACCCCTCGCTCCGGCAAGTAGTTACAGCAAGTAGTATGTTCAATTAGCTTTTCAATTATGAATATATATATCAATTATTGGTCGCCCTTGGCTTGTGGACAATGCGCTACGCGCACCGGCTCCGCCCGTGGACAACCGCAAGCGGTTGCCCACCGTCGAGCGCCAGCGCCTTTGCCCACAACCCGGCGGCCGGCCGCAACAGATCGTTTTATAAATTTTTTTTTTTGAAAAAGAAAAAGCCCGAAAGGCGGCAACCTCTCGGGCTTCTGGATTTCCGATCCCCGGAATTAGATCTTGGCAGGATATATTGTGGTGTAACGTATCACAAGTTTGTACAAAAAAGCAGGCTCCGCGGCCGCCCCCTTCACCTAGACTCGACGCGTCCTAGAGATCCGTCAACATGGTGGAGCACGACACTCTCGTCTACTCCAAGAATATCAAAGATACAGTCTCAGAAGACCAAAGGGCTATTGAGACTTTTCAACAAAGGGTAATATCGGGAAACCTCCTCGGATTCCATTGCCCAGCTATCTGTCACTTCATCAAAAGGACAGTAGAAAAGGAAGGTGGCACCTACAAATGCCATCATTGCGATAAAGGAAAGGCTATCGTTCAAGATGCCTCTGCCGACAGTGGTCCCAAAGATGGACCCCCACCCACGAGGAGCATCGTGGAAAAAGAAGACGTTCCAACCACGTCTTCAAAGCAAGTGGATTGATGTGATATCTCCACTGACGTAAGGGATGACGCACAATCCCACTATCCTTCGCAAGACCCTTCCTCTATATAAGGAAGTTCATTTCATTTGGAGAGGACGACCCCGATATGAAAAAGCCTGAACTCACCGCGACGTCTGTCGAGAAGTTTCTGATCGAAAAGTTCGACAGCGTCTCCGACCTGATGCAGCTCTCGGAGGGCGAAGAATCTCGTGCTTTCAGCTTCGATGTAGGAGGGCGTGGATATGTCCTGCGGGTAAATAGCTGCGCCGATGGTTTCTACAAAGATCGTTATGTTTATCGGCACTTTGCATCGGCCGCGCTCCCGATTCCGGAAGTGCTTGACATTGGGGAATTCAGCGAGAGCCTGACCTATTGCATCTCCCGCCGTGCACAGGGTGTCACGTTGCAAGACCTGCCTGAAACCGAACTGCCCGCTGTTCTGCAGGTAAATTTCTAGTTTTTCTCCTTCATTTTCTTGGTTAGGACCCTTTTCTCTTTTTATTTTTTTGAGCTTTGATCTTTCTTTAAACTGATCTATTTTTTAATTGATTGGTTATGGTGTAAATATTACATAGCTTTAACTGATAATCTGATTACTTTATTTCGTGTGTCTATGATGATGATGATAACTGCAGCCGGTCGCGGAGGCCATGGATGCGATCGCTGCGGCCGATCTTAGCCAGACGAGCGGGTTCGGCCCATTCGGACCGCAAGGAATCGGTCAATACACTACATGGCGTGATTTCATATGCGCGATTGCTGATCCCCATGTGTATCACTGGCAAACTGTGATGGACGACACCGTCAGTGCGTCCGTCGCGCAGGCTCTCGATGAGCTGATGCTTTGGGCCGAGGACTGCCCCGAAGTCCGGCACCTCGTGCACGCGGATTTCGGCTCCAACAATGTCCTGACGGACAATGGCCGCATAACAGCGGTCATTGACTGGAGCGAGGCGATGTTCGGGGATTCCCAATACGAGGTCGCCAACATCTTCTTCTGGAGGCCGTGGTTGGCTTGTATGGAGCAGCAGACGCGCTACTTCGAGCGGAGGCATCCGGAGCTTGCAGGATCGCCGCGGCTCCGGGCGTATATGCTCCGCATTGGTCTTGACCAACTCTATCAGAGCTTGGTTGACGGCAATTTCGATGATGCAGCTTGGGCGCAGGGTCGATGCGACGCAATCGTCCGATCCGGAGCCGGGACTGTCGGGCGTACACAAATCGCCCGCAGAAGCGCGGCCGTCTGGACCGATGGCTGTGTAGAAGTACTCGCCGATAGTGGAAACCGACGCCCCAGCACTCGTCCGAGGGCAAAGGAATAGAGTAGATGCCGACCGGGATCCGGAGAGCTCGAATTTCCCCGATCGTTCAAACATTTGGCAATAAAGTTTCTTAAGATTGAATCCTGTTGCCGGTCTTGCGATGATTATCATATAATTTCTGTTGAATTACGTTAAGCATGTAATAATTAACATGTAATGCATGACGTTATTTATGAGATGGGTTTTTATGATTAGAGTCCCGCAATTATACATTTAATACGCGATAGAAAACAAAATATAGCGCGCAAACTAGGATAAATTATCGCGCGCGGTGTCATCTATGTTACTAGATCGGGAATTCATCGATGATATCAGATCAAGGGTGGGCGCGCCGAACCAGCTTTCTTGTACAAAGTGGTGATCCCCCTCGAGGTCGACGGTATCGATAAGCTTGATATCGAATTCCGTGCAGCGTGACCCGGTCGTGCCCCTCTCTAGAGATAATGAGCATTGCATGTCTAAGTTATAAAAAATTACCACATATTTTTTTTGTCACACTTGTTTGAAGTGCAGTTTATCTATCTTTATACATATATTTAAACTTTACTCTACGAATAATATAATCTATAGTACTACAATAATATCAGTGTTTTAGAGAATCATATAAATGAACAGTTAGACATGGTCTAAAGGACAATTGAGTATTTTGACAACAGGACTCTACAGTTTTATCTTTTTAGTGTGCATGTGTTCTCCTTTTTTTTTGCAAATAGCTTCACCTATATAATACTTCATCCATTTTATTAGTACATCCATTTAGGGTTTAGGGTTAATGGTTTTTATAGACTAATTTTTTTAGTACATCTATTTTATTCTATTTTAGCCTCTAAATTAAGAAAACTAAAACTCTATTTTAGTTTTTTTATTTAATAATTTAGATATAAAATAGAATAAAATAAAGTGACTAAAAATTAAACAAATACCCTTTAAGAAATTAAAAAAACTAAGGAAACATTTTTCTTGTTTCGAGTAGATAATGCCAGCCTGTTAAACGCCGTCGACGAGTCTAACGGACACCAACCAGCGAACCAGCAGCGTCGCGTCGGGCCAAGCGAAGCAGACGGCACGGCATCTCTGTCGCTGCCTCTGGACCCCTCTCGAGAGTTCCGCTCCACCGTTGGACTTGCTCCGCTGTCGGCATCCAGAAATTGCGTGTCGGACGGCAGACGTGAGCCGGCACGGCAGGCGGCCTCCTCCTCCTCTCACGGCACCGGCAGCTACGGGGGATTCCTTTCCCACCGCTCCTTCGCTTTCCCTTCCTCGCCCGCCGTAATAAATAGACACCCCCTCCACACCCTCTTTCCCCAACCTCGTGTTGTTCGGAGCGCACACACACACAACCAGATCTCCCCCAAATCCACCCGTCGGCACCTCCGCTTCAAGGTACGCCGCTCGTCCTCCCCCCCCCCCCCTCTCTACCTTCTCTAGATCGGCGTTCCGGTCCATGGTTAGGGCCCGGTAGTTCTACTTCTGTTCATGTTTGTGTTAGATCCGTGTTTGTGTTAGATCCGTGCTGCTAGCGTTCGTACACGGATGCGACCTGTACGTCAGACACGTTCTGATTGCTAACTTGCCAGTGTTTCTCTTTGGGGAATCCTGGGATGGCTCTAGCCGTTCCGCAGACGGGATCGATTTCATGATTTTTTTTTGTTTCGTTGCATAGGGTTTGGTTTGCCCTTTTCCTTTATTTCAATATATGCCGTGCACTTGTTTGTCGGGTCATCTTTTCATGCTTTTTTTTGTCTTGGTTGTGATGATGTGGTCTGGTTGGGCGGTCGTTCTAGATCGGAGTAGAATTAATTCTGTTTCAAACTACCTGGTGGATTTATTAATTTTGGATCTGTATGTGTGTGCCATACATATTCATAGTTACGAATTGAAGATGATGGATGGAAATATCGATCTAGGATAGGTATACATGTTGATGCGGGTTTTACTGATGCATATACAGAGATGCTTTTTGTTCGCTTGGTTGTGATGATGTGGTGTGGTTGGGCGGTCGTTCATTCGTTCTAGATCGGAGTAGAATACTGTTTCAAACTACCTGGTGTATTTATTAATTTTGGAACTGTATGTGTGTGTCATACATCTTCATAGTTACGAGTTTAAGATGGATGGAAATATCGATCTAGGATAGGTATACATGTTGATGTGGGTTTTACTGATGCATATACATGATGGCATATGCAGCATCTATTCATATGCTCTAACCTTGAGTACCTATCTATTATAATAAACAAGTATGTTTTATAATTATTTTGATCTTGATATACTTGGATGATGGCATATGCAGCAGCTATATGTGGATTTTTTTAGCCCTGCCTTCATACGCTATTTATTTGCTTGGTACTGTTTCTTTTGTCGATGCTCACCCTGTTGTTTGGTGTTACTTCGCCCATCACAAGTTTGTACAAAAAAGCAGGCTTCACCatgccggaggtgatgtccacgccacagcaacccacagccatgatgagatttgacactcttgaggatgctgagaaacactacaaactgtatgcgaggcagaaaggttttggagtaaggtattgtttccgaaaaaggtcagaggctagtggtgaactgataagagcatcacttgtctgccatagagctgggttgaagatcaagaggaaagtagacacccaaaacccgcaacctattgcccctgagaggagtaggaatacaactgaaagaacaaactgcccagcccgtatgtttgtgaagcgaagagataatgcctgggttgtaacagaaataaatgacaaccataaccaccctctcataaagaaatggtcgctgacaggatacctacgatcacatagacatatccctgaagaagaacaacagtttgtgaagttgcttcattcgtgcaatctagaaccttctagacagatgcagttgttgacagagttgcatggccaacgtgaagccattggttacactgacaaagacttggcaaatttgctagcaaagttccgggctgagcacaaatacactgatatgcaggacacgattgagtacttcaaaagcagtcaacagcttgataaagactttttttacaagtacaagcttgatgatgaaaataaggtccaatgcatttactggattgatggttcagcgagaagggcttacaagtttttcagtgattgtgtctcttttgacacaacatacttgaccaatatatacaagatgccttgtgcccgtttattggtataaCACCCAGCTTTCTTGTACAAAGTGGTGATGGGGGATCCACTAGTTCTAGAATTCGATTGAGTCAAGCAGGATCGTTCAAACATTTGGCAATAAAGTTTCTTAAGATTGAATCCTGTTGCCGGTCTTGCGATGATTATCATATAATTTCTGTTGAATTACGTTAAGCATGTAATAATTAACATGTAATGCATGACGTTATTTATGAGATGGGTTTTTATGATTAGAGTCCCGCAATTATACATTTAATACGCGATAGAAAACAAAATATAGCGCGCAAACTAGGATAAATTATCGCGCGCGGTGTCATCTATGTTACTAGATCGACCGGCATGCAAGCTGATATCAATCACTAGTGAATTCTAGAGCGGCCGCCACCGCGGTGGAGCTCCAGCTTTTGTTCCCTTTAGTGAGGGTTAATTGCGCGCTTGGCGTAATCATGGTCATAGCTGTTTCCTGTGTGAAATTGTTATCCGCTCACAATTCCACACAACATACGAGCCGGAAGCATAAAGTGTAAAGCCTGGGGTGCCTAATGAGTGAGCTAACTCACATTAATTGCGTTGCGCTCACTGCCCGCTTTCCAGTCGGGAAACCTGTCGTGCCAGCTGCATTAATGAATCGGCCAACGCGCGGGGAGAGGCGGTTTGCGTATTGGGCGCTCTTCCGCTTCCTCGCTCACTGACTCGCTGCGCTCGGTCGTTCGGCTGCGGCGAGCGGTATCAGCTCACTCAAAGGCGGTAATACGGTTATCCACAGAATCAGGGGATAACGCAGGAAAGAACATGAAGGCCTTGACAGGATATATTGGCGGGTAAACTAAGTCGCTGTATGTGTTTGTTTGAGATCTCATGTGAGCAAAAGGCCAGCAAAAGGCCAGGAACCGTAAAAAGGCCGCGTTGCTGGCGTTTTTCCATAGGCTCCGCCCCCCTGACGAGCATCACAAAAATCGACGCTCAAGTCAGAGGTGGCGAAACCCGACAGGACTATAAAGATACCAGGCGTTTCCCCCTGGAAGCTCCCTCGTGCGCTCTCCTGTTCCGACCCTGCCGCTTACCGGATACCTGTCCGCCTTTCTCCCTTCGGGAAGCGTGGCGCTTTCTCATAGCTCACGCTGTAGGTATCTCAGTTCGGTGTAGGTCGTTCGCTCCAAGCTGGGCTGTGTGCACGAACCCCCCGTTCAGCCCGACCGCTGCGCCTTATCCGGTAACTATCGTCTTGAGTCCAACCCGGTAAGACACGACTTATCGCCACTGGCAGCAGCCACTGGTAACAGGATTAGCAGAGCGAGGTATGTAGGCGGTGCTACAGAGTTCTTGAAGTGGTGGCCTAACTACGGCTACACTAGAAGAACAGTATTTGGTATCTGCGCTCTGCTGAAGCCAGTTACCTTCGGAAGAAGAGTTGGTAGCTCTTGATCCGGCAAACAAACCACCGCTGGTAGCGGTGGTTTTTTTGTTTGCAAGCAGCAGATTACGCGCAGAAAAAAAGGATCTCAAGAAGATCCTTTGATCTTTTCTACGGGGTCTGACGCTCAGTGGAACGAAAACTCACGTTAAGGGATTTTGGTCATGAGATTATCAAAAAGGATCTTCACCTAGATCCTTTTAAATTAAAAATGAAGTTTTAAATCAATCTAAAGTATATATGTGTAACATTGGTCTAGTGATTAGAAAAACTCATCGAGCATCAAATGAAACTGCAATTTATTCATATCAGGATTATCAATACCATATTTTTGAAAAAGCCGTTTCTGTAATGAAGGAGAAAACTCACCGAGGCAGTTCCATAGGATGGCAAGATCCTGGTATCGGTCTGCGATTCCGACTCGTCCAACATCAATACAACCTATTAATTTCCCCTCGTCAAAAATAAGGTTATCAAGTGAGAAATCACCATGAGTGACGACTGAATCCGGTGAGAATGGCAAAAGTTTATGCATTTCTTTCCAGACTTGTTCAACAGGCCAGCCATTACGCTCGTCATCAAAATCACTCGCATCAACCAAACCGTTATTCATTCGTGATTGCGCCTGAGCGAGACGAAATACGCGATCGCTGTTAAAAGGACAATTACAAACAGGAATCGAATGCAACCGGCGCAGGAACACTGCCAGCGCATCAACAATATTTTCACCTGAATCAGGATATTCTTCTAATACCTGGAATGCTGTTTTCCCTGGGATCGCAGTGGTGAGTAACCATGCATCATCAGGAGTACGGATAAAATGCTTGATGGTCGGAAGAGGCATAAATTCCGTCAGCCAGTTTAGTCTGACCATCTCATCTGTAACAACATTGGCAACGCTACCTTTGCCATGTTTCAGAAACAACTCTGGCGCATCGGGCTTCCCATACAATCGGTAGATTGTCGCACCTGATTGCCCGACATTATCGCGAGCCCATTTATACCCATATAAATCAGCATCCATGTTGGAATTTAATCGCGGCCTTGAGCAAGACGTTTCCCGTTGAATATGGCTCATAACACCCCTTGTATTACTGTTTATGTAAGCAGACAGTTTTATTGTTCATGATGATATATTTTTATCTTGTGCAATGTAACATCAGAGATTTTGAGACACAACGTGGCTTTGTTGAATAAATCGAACTTTTGCTGAGTTGAAGGATCAGATCACGCATCTTCCCGACAACGCAGACCGTTCCGTGGCAAAGCAAAAGTTCAAAATCACCAACTGGTCCACCTACAACAAAGCTCTCATCAACCGTGGCTCCCTCACTTTCTGGCTGGATGATGGGGCGATTCAGGCGATCCCCATCCAACAGCCCGCCGTCGAGCGGGCT。

在上述实施例中，对各个实施例的描述都各有侧重，某个实施例中没有详述或记载的部分，可以参见其它实施例的相关描述。

二、应用实施例：

应用例

本发明应用例提供一种大麦HvFRF1基因，该大麦HvFRF1基因的核苷酸序列如SEQID NO.1所示。该大麦HvFRF1基因为从大麦中克隆得到的基因。

本发明应用例还提供一种所述的大麦HvFRF1基因编码的蛋白，所述蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

本发明应用例还提供一种根据所述大麦HvFRF1基因通过同源重组构建的拟南芥过表达载体super1300:HvFRF1。

本发明应用例还提供一种根据所述大麦HvFRF1基因通过Gateway方法构建的大麦过表达载体pBract214:HvFRF1。

本发明应用例还提供一种大麦HvFRF1基因在获取具有抗旱性拟南芥株系上的应用。

本发明应用例还提供一种大麦HvFRF1基因在获取具有抗旱性大麦株系上的应用。

本发明应用例还提供一种大麦HvFRF1基因受干旱胁迫诱导下在大麦根系中组织表达上的应用。

以上所述，仅为本发明较优的具体的实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，都应涵盖在本发明的保护范围之内。