热炎宁在制备治疗奥密克戎无症状感染药物中的应用

技术领域：

本发明涉及一种中药组合物的用途，尤其是涉及一种热炎宁在制备治疗奥密克戎无症状感染药物中的应用。

背景技术：

SARS-CoV-2的抗病毒药物可分为两类:抗Spike蛋白的单克隆抗体和干扰病毒复制的小分子。由于Spike蛋白的高突变性，现有的大多数已批准的单克隆抗体失去了对SARS-CoV-2Omicron的中和活性。目前针对SARS-CoV-2保守的RdRp或Mpro的小分子抗病毒药物已获得批准或紧急使用授权(EUA)，并正在临床试验中。瑞德西韦和莫努匹韦是SARS-CoV-2的RdRp抑制剂，而尼马瑞韦/利托那韦(Paxlovid)靶向Mpro。此前的临床研究表明，在Covid-19轻至中度、未接种疫苗、未住院的高危成人中，早期使用上述抗病毒药物可降低住院或死亡的风险。然而，这些试验均排除了接种过SARS-CoV-2疫苗的患者；因此，这些研究结果可能不适用于疫苗接种率高的地区。目前，针对Omicron变种的有效药物十分有限。

发明内容：

本发明的目的在于提供一种热炎宁在制备治疗奥密克戎无症状感染药物中的应用，其克服了现有技术中针对Omicron变种的有效药物十分有限的问题，本发明能够在较短的时间内提高无症状感染者的开放阅读框(ORF)或核衣壳蛋白(N)基因的循环阈值(Ct值)。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案为：

热炎宁在制备治疗奥密克戎无症状感染药物中的应用。

热炎宁在制备提高无症状感染者的开放阅读框(ORF)或核衣壳蛋白(N)基因的循环阈值(Ct)值药物中的应用。

热炎宁采用蒲公英、虎杖、北败酱和半枝莲的水提取物制得，蒲公英、虎杖、北败酱和半枝莲的重量比为1～3:1～3:1～3:1。

热炎宁通过以下制备方法制备得到：以上四味，加水煎煮二次，第一次2小时，第二次1小时,煎液滤过，滤液减压浓缩至适量，合并浓缩液，离心，滤过，加入甜菊素1.5g与羟苯乙酯0.5g，加热至沸，制成1000ml，即得。

热炎宁的用量为：第一天起给予中药组合物合剂20ml，每日4次，连续7天。

与现有技术相比，本发明具有的优点和效果如下：

1、本发明能够在较短的时间内提高无症状感染者的开放阅读框(ORF)或核衣壳蛋白(N)基因的循环阈值(Ct值)。是一种安全有效的治疗无症状和轻症奥密克戎感染的疗法，可加速病毒清除，促进疾病康复。

2、本发明的中药组合物可以用于治疗无症状感染SARS-CoV-2奥密克戎感染患者。通过RT-PCR检测SARS-CoV-2的开放阅读框(ORF)或核衣壳蛋白(N)基因的循环阈值(Ct值)作为半定量病毒载量进行分析。并且通过临床试验检测无症状感染者核酸转阴率，核酸转阴时间和住院时间，以及无症状患者的新发症状，病毒载量。综合评价热炎宁合剂对于治疗无症状感染SARS-CoV-2奥密克戎患者的治疗作用。结果显示RYN提高了核酸转阴率，缩短了核酸转阴时间和住院时间，减少了无症状患者的新发症状，降低了病毒载量。研究期间未报告严重不良事件。综上所述，说明该中药组合物具有显著的治疗效果。

附图说明：

图1为本发明的流程图；

图2为核算转阴率-KM分析图；

图3为核酸的转阴率图；(A)两组3天内核酸转阴率比较，(B)两组7天内核酸转阴率比较；

图4为出院率-KM分析图；

图5为无症状感染者住院期间的新发症状图；

图6为观察过程中SARS-CoV-2病毒载量循环阈值(Ct)的变化；(A)ORF基因Ct值，(B)N基因Ct值；

图7为亚组患者SARS-CoV-2病毒载量循环阈值(Ct)的变化；(A-B)无症状和轻度感染者的ORF/N基因Ct值，(C-D)接种疫苗和未接种疫苗者的ORF/N基因Ct值。

具体实施方式：

本发明包括热炎宁在制备治疗奥密克戎无症状感染药物中的应用，特别是能够在较短的时间内提高无症状感染者的开放阅读框(ORF)或核衣壳蛋白(N)基因的循环阈值(Ct值)。热炎宁是由蒲公英(372份)、虎杖(372份)、北败酱(372份)、半枝莲(186份)四味药材组成。热炎宁通过以下制备方法制备得到：以上四味，加水煎煮二次，第一次2小时，第二次1小时,煎液滤过，滤液减压浓缩至适量，合并浓缩液，离心，滤过，加入甜菊素1.5g与羟苯乙酯0.5g，加热至沸，制成1000ml，即得。

热炎宁可以用于治疗无症状感染SARS-CoV-2奥密克戎感染患者。通过RT-PCR检测SARS-CoV-2的开放阅读框(ORF)或核衣壳蛋白(N)基因的循环阈值(Ct值)作为半定量病毒载量进行分析。并且通过临床试验检测无症状感染者核酸转阴率，核酸转阴时间和住院时间，以及无症状患者的新发症状，病毒载量。综合评价热炎宁合剂(RYN)对于治疗无症状感染SARS-CoV-2奥密克戎患者的治疗作用。结果显示RYN提高了核酸转阴率，缩短了核酸转阴时间和住院时间，减少了无症状患者的新发症状，降低了病毒载量。

热炎宁的用量为：第一天起给予中药组合物合剂20ml，每日4次，连续7天。

实验例：

1研究方法

1.1研究概览

本研究采用前瞻性随机对照研究方法，从中国上海新国际博览中心方舱医院招募COVID-19无症状感染患者。研究方案根据良好的临床实践和赫尔辛基宣言设计。研究方案经九江市中医院医学伦理委员会批准(批号：JJSZYYY20220403)。该方案已在中国临床试验注册网站(www.chictr.org/cn/，ChiCTR2200060292)注册。所有患者均获得书面知情同意。

1.2研究设计

本研究是一项前瞻性、开放标签、随机对照试验。研究人员连续登记受试者。连续的数字由一位不参与试验的统计学家准备。根据SPSS软件生成的随机数字表，将符合条件的患者按1:1的比例随机分为干预组(RYN+标准护理)和对照组(标准护理)。不对研究者和患者隐瞒治疗药物。所有参与者均按照《新型冠状病毒肺炎诊疗方案(试行九版)》接受标准治疗(身体状况监测、抗病毒、抗菌、对症治疗、基础疾病治疗)。

干预组患者自入组第一天起额外给予RYN合剂(20ml，每日4次)，连续7天。治疗7天后，继续标准护理至出院。其他伴随药物应在研究中详细记录。所有患者在住院期间接受随访，7天内出院则最多随访7天。如果患者因病情恶化需要转院进一步治疗或出院，则视为完成研究。

在入组的第一天调查人口统计学、临床和流行病学特征。通过收集有关临床症状、合并症、伴随用药、疫苗接种史、临床结局和不良事件的数据，对符合条件的患者进行研究。

从入院第3天起每天采集咽拭子标本进行实时聚合酶链反应(RT-PCR)分析，直至核酸转阴。采用RT-PCR检测SARS-CoV-2的开放阅读框(ORF)或核衣壳蛋白(N)基因的循环阈值(Ct值)作为半定量病毒载量进行分析。

1.3研究对象

于2022年4月15日至5月12日在上海新国际博览中心方舱医院招募无症状患者。纳入标准如下:1)符合COVID-19无症状染诊断标准；2)患者年龄18～80岁，男女不限；3)自愿提供知情同意。

排除标准包括:1)临床分型为普通型、重症型、危重型；2)其他严重原发性呼吸系统疾病，如肺癌、严重支气管扩张、间质性肺病患者；3)严重的全身性疾病(如恶性肿瘤、自身免疫性疾病、血液、代谢和内分泌疾病)和涉及重要器官(心、脑、肝、肾)的状况，可能影响疗效评估；4)孕妇、哺乳期妇女；5)精神障碍；6)3个月内参加其他临床试验；7)过敏体质或对临床试验药物及常规西药过敏史。

1.4研究药物

试验用物RYN由蒲公英、虎杖、败酱草和半枝莲组成。RYN(批号220222)由清华德人西安幸福制药有限公司生产。该产品于2005年上市，经国家药品监督管理局批准(批准文号:Z20050493)。根据《中国药典》(2020年版)，1000ml的RYN取自372g蒲公英、372g虎杖、372g败酱草、186g半枝莲。利用指纹图谱进行药材质量控制和成分鉴定。结果表明，青苷的主要成分为绿原酸、咖啡酸、白藜芦醇苷、木犀草素和大黄素。

1.5研究终点

本试验的主要结果是核酸的阴性转阴时间和第3天和第7天的核酸转阴率。

次要结果包括住院时间、无症状感染者的新发症状、观察期间疾病进展的比、RT-PCR检测的Ct值。

Ct值与病毒载量成反比，即Ct值越高，mRNA表达越低。在未检测到Ct值的样本中，为了统计目的，自动将Ct值设置为45。记录所有可能或不可能与研究药物相关的不良事件。

核酸转阴定义为连续两次N基因和ORF基因Ct值≥35，核酸检测间隔至少24小时。

出院标准如下:(1)体温恢复正常3天以上；(2)呼吸道症状明显改善；(3)核酸转化阴性。

1.6统计方法

对于连续变量，分别采用独立样本t检验和Mann-Whitney检验分析正态分布和非正态分布数据。正态分布数据用均数±标准差(mean±SD)表示。非正态分布数据用带四分位差(IQR)的中位数表示。分类变量采用频次和百分比(％)表示，采用卡方检验或Fisher精确检验进行分析。事件发生时间以中位数和95％置信区间(CI)表示，并采用Kaplan-Meier进行分析。观察期间SARS-CoV-2病毒载量的变化采用局部回归(loess)方法进行归一化。使用R软件(版本4.1.3)进行统计分析。P<0.05为差异有统计学意义(双侧检验)。

2 结果

2.1 基线统计

2022年4月14日至5月12日期间，共有5759名患者接受了审查，2929名患者因不符合纳排标准或拒绝参与而被排除。因此，将2830例患者随机(1:1)分为干预组(RYN+标准护理)和对照组(标准护理)。在本次试验中，干预组有65例退出，对照组有27例退出。最后，对干预组1350例患者和对照组1388例患者进行分析。研究流程图如图1所示。

表1总结了基线人口统计学和临床特征。2830例患者中，无症状感染者2263例(80.0％)，轻度感染者567例(20.0％)。入组患者中位年龄为46岁(IQR 33-56岁)，男性58.9％，女性41.1％。最小患者18岁，最大患者80岁。18-44岁的成人患者比例最高。入院时最常见的症状为咳嗽(17.9％)、咳痰(11.2％)、疲劳(7.7％)、发热(5.0％)和肌肉酸痛(4.7％)。高血压(12.4％)和糖尿病(3.7％)是基线时最常见的合并症。157例(5.5％)患者接受了抗生素治疗，35例(1.2％)接受了抗病毒治疗，2例(0.1％)接受了皮质类固醇治疗。大多数患者接种了疫苗，2104例(74.3％)接种了两剂或两剂以上的疫苗。除密切接触史和抗病毒治疗史外，两组患者的基线人口学和临床特征差异无统计学意义(P>0.05)。

表1基线资料和临床特征.

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2.2主要结果

干预组核酸转阴时间的中位数为7天(IQR:4,10)，对照组核酸转阴时间的中位数为8天(IQR:6,10.75)。Kaplan-Meier分析显示，接受RYN治疗的患者核酸转阴率较高(P<0.0001)(图2)。到第3天，干预组81例(6.0％)，对照组46例(3.3％)核酸转阴。到第7天，干预组有727例(53.9％)患者核酸检测阴性，而对照组只有520例(37.5％)。

干预组无症状感染和轻度感染患者的核酸转阴率显著高于对照组(P<0.05)(图3)。

2.3次要结果

观察期间无疾病进展病例。干预组的中位住院时间为8天(IQR:5,11)，对照组中位住院时间为9天(IQR:7,11)。Kaplan-Meier分析显示，接受RYN治疗的患者出院率更高(P<0.0001)(图4)。

在2263例入院时呈现无症状的患者中，其中干预组有325例，对照组有452例在观察期间出现临床症状。干预组患者新发症状的比例，例如发热(2.4％vs.4.5％，P＝0.008)、咳嗽(14.3％vs.17.9％，P＝0.038)、咳痰(6.7％vs.9.7％，P＝0.014)，均明显低于对照组(图5)。

用loess法绘制各时间点SARS-CoV-2ORF基因和N基因的病毒载量Ct值，做成趋势线。如图6所示，患者的Ct值持续增加，至第9天后趋于平稳。Ct值达到40后，平滑曲线变平稳。RYN干预组ORF/N基因的Ct值高于对照组(图6A)。

如图7所示，无症状感染的Ct值高于有症状的感染者。在无症状感染患者中，接受RYN治疗患者的Ct值更高，且更快达到核酸转阴标准(图7A,B)。从图7C,D可以看出，接种疫苗感染者的Ct值高于未接种者。此外，RYN治疗促进了核酸转阴，特别是对于未接种疫苗的患者。

2.4安全性分析

在观察过程中，共观察到303例单次不良事件(AE)，其中干预组150例，对照组153例，被评估为轻度不良事件。最常见的不良事件是腹泻(2.2％)、胃痛(2.6％)、焦虑(1.9％)和便秘(1.2％)。在所有不良事件中，腹泻被评估为可能与RYN治疗相关，而其他被评估为与药物无关。两组AE发生率无统计学差异(表2)。

表2不良事件

3讨论

在这项前瞻性、开放标签、随机对照试验中，我们提供了RYN治疗SARS-CoV-2奥密克戎感染的临床证据，表明RYN是一种安全的治疗方法，与病毒快速清除和疾病恢复有关。其中，与标准护理相比，RYN提高了核酸转阴率，缩短了转阴时间和住院时间，减少了无症状患者的新发症状，降低了病毒载量。对于入院时无症状感染的患者，RYN可抑制无症状感染向轻症的进展。此外，RYN在COVID-19患者中具有良好的安全性，没有报告严重的副作用。这些发现都表明，RYN是一种很有前途的治疗SARS-CoV-2Omicron变种的药物。

从本研究的数据来看，感染者的整体疫苗接种率达到78％，近一半(45.6％)的患者接受了加强针。结合以往对血液样本和真实世界的研究，所有的证据都表明，Omicron产生了免疫逃逸，无论是通过既往感染还是接种疫苗。

综上所述，RYN是一种安全有效的治疗无症状和轻症奥密克戎感染的疗法，可加速病毒清除，促进疾病康复。