一种去除新生牛血清内毒素的工艺

技术领域

本发明涉及生物领域，具体为一种去除新生牛血清内毒素的工艺。

背景技术

丰富的细胞生长必须的营养成份，常用于动物细胞的体外培养，具有极为重要的功能。它提供对维持细胞指数生长的激素，基础培养基中没有或量很少的营养物，以及主要的低分子营养物。它还能够提供结合蛋白，能识别维生素、脂类、金属和其他激素等，能结合或调变它们所结合的物质活力。

牛血清是细胞培养中用量最大的天然培养基，含有内毒素是革兰氏阴性菌的菌体中存在的毒性物质的总称，是多种革兰氏阴性菌的细胞壁成分，由菌体裂解后释出，又称之为“热原”。其化学成分有磷脂多糖-蛋白质复合物，其毒性成分主要为类脂质A。内毒素位于细胞壁的最外层、覆盖于细胞壁的黏肽上。各种细菌的内毒素大都具有一定的毒性，可引起发热、微循环障碍、内毒素休克及播散性血管内凝血等。因此，含有内毒素的血清不能用于疫苗的生产，只有去除内毒素、保留血清中的营养成分，才可以使这类血清用于疫苗生产，从而变废为宝，得到充分利用。

发明内容

本发明的目的在于提供一种去除新生牛血清内毒素的工艺，以解决上述背景技术中提出的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种去除新生牛血清内毒素的工艺，包括如下步骤：

S1：取新生牛血清，且该新生牛血清为小公牛喂食过初乳4-14天且含大量脂类、内毒素和血红蛋白超标的血清；

S2：对新生牛血清预滤处理，预滤处理得到预滤上清液；

S3：向预滤上清液中加入活性炭进行吸附，活性炭的质量分数为上清液质量的0.5-2％，待吸附50-90min后，进行中滤处理；

S4：中滤处理后加入内毒素吸附材料进行吸附处理，并在吸附处理进行后滤处理，后滤处理后即得到去除了内毒素的新生牛血清。

优选的，S2中预滤处理具体包括步骤：S21：滤除牛血清中纤维蛋白并得滤除液；S22：将滤除液经超滤柱分离成大分子复合物与游离分子；S23：向大分子复合物内加入免疫球蛋白、脂蛋白并聚合成絮状沉淀；S24：将该絮状沉淀经离心、澄清过滤得预滤液，并将该预滤液与游离分子合并得到预滤上清液。

优选的，述S3中中滤处理是通过将处理液离心后得上清液，并将该上清液经粗滤膜过滤。

优选的，S3中活性炭为活性炭颗粒和/或粉末，通过将活性炭颗粒和/或粉末加入血清并柔和搅拌至均匀，经中滤处理去除活性炭并获得中滤处理原料。

优选的，S4中内毒素吸附材料为壳聚糖微球、甘氨酸经偶联反应而成。

优选的，S4中后滤处理包括使用0.8μm滤膜、0.65μm滤膜、0.45μm滤膜、0.1μm滤膜依次逐级过滤，从而获得去除了内毒素的新生牛血清。

优选的，活性炭颗粒和/或粉末加入血清并柔和搅拌至均匀是在搅拌设备中进行，搅拌设备包括搅拌箱、机架、第一搅拌结构与第二搅拌结构，搅拌箱固定在机架端部，搅拌箱内部上、下两侧分别装设有第一搅拌结构、第二搅拌结构；所述第一搅拌结构包括滑轨、齿板、齿轮与第一搅拌杆，滑轨固定在搅拌箱顶壁，滑轨内侧设有弹簧，滑轨上滑接有齿板；所述齿轮通过支架装设于齿板下侧且与齿板啮合，齿轮端部连接有第一搅拌杆，且第一搅拌杆可在齿轮、齿板相互啮合时摆动。

优选的，第二搅拌结构为转动连接于搅拌箱内部下侧的第二搅拌杆，搅拌箱外侧设有驱动第二搅拌杆以及第一搅拌杆运转的驱动结构，且驱动结构包括第一转动杆、第二转动杆、第三转动杆与转动柱，第一转动杆装设于机架上且与第二搅拌杆传动连接，第一转动杆上装设有第一斜齿轮，机架底侧设有驱动第一转动杆的手柄；所述第二转动杆两端分别设有第一带轮以及与第一斜齿轮啮合的第二斜齿轮，第三转动杆一端设有与第一带轮通过皮带联动的第二带轮，第三转动杆穿过搅拌箱的端部连接有第三斜齿轮，且第三斜齿轮与转动柱啮合传动，转动柱顶端转动连接于搅拌箱顶壁，转动柱上装设有与齿板抵触的凸轮。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：

本发明可显著降低以往在新生牛血清生产过程中作为废弃物的高内毒素含量牛血清中内毒素的含量，增加新生牛血清生产的效率和附加值；而且采用预滤处理、中滤处理以及后滤处理配合内毒素吸附材料，能更好的去除新生牛血清中的内毒素。

附图说明

图1为本发明实施例2的工艺流程图；

图2为本发明的实施例3中搅拌设备的结构示意图。

图中：1、搅拌箱；2、机架；3、滑轨；4、齿板；5、齿轮；6、第一搅拌杆；7、第二搅拌杆；8、第一转动杆；9、第二转动杆；10、第三转动杆；11、转动柱；12、第一带轮；13、第二带轮；14、凸轮。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

在本发明的描述中，需要说明的是，术语“竖直”、“上”、“下”、“水平”等指示的方位或位置关系为基于附图所示的方位或位置关系，仅是为了便于描述本发明和简化描述，而不是指示或暗示所指的装置或元件必须具有特定的方位、以特定的方位构造和操作，因此不能理解为对本发明的限制。

在本发明的描述中，还需要说明的是，除非另有明确的规定和限定，术语“设置”、“安装”、“相连”、“连接”应做广义理解，例如，可以是固定连接，也可以是可拆卸连接，或一体地连接；可以是机械连接，也可以是电连接；可以是直接相连，也可以通过中间媒介间接相连，可以是两个元件内部的连通。对于本领域的普通技术人员而言，可以根据具体情况理解上述术语在本发明中的具体含义。

实施例1：本发明提供一种技术方案：一种去除新生牛血清内毒素的工艺，包括如下步骤：

S1：取新生牛血清，且该新生牛血清为小公牛喂食过初乳4-14天且含大量脂类、内毒素和血红蛋白超标的血清；

S2：对新生牛血清预滤处理，预滤处理得到预滤上清液；

S3：向预滤上清液中加入活性炭进行吸附，活性炭的质量分数为上清液质量的0.5-2％，待吸附50-90min后，进行中滤处理；

S4：中滤处理后进行后滤处理，后滤处理后即得到去除了内毒素的新生牛血清。

在本实施例中，S2中预滤处理具体包括步骤：S21：滤除牛血清中纤维蛋白并得滤除液；S22：将滤除液经超滤柱分离成大分子复合物与游离分子；S23：向大分子复合物内加入免疫球蛋白、脂蛋白并聚合成絮状沉淀；S24：将该絮状沉淀经离心、澄清过滤得预滤液，并将该预滤液与游离分子合并得到预滤上清液。

在本实施例中，S3中活性炭为活性炭颗粒和/或粉末，通过将活性炭颗粒和/或粉末加入血清并柔和搅拌至均匀，经中滤处理去除活性炭并获得中滤处理原料。

在本实施例中，S3中中滤处理是通过将处理液离心后得上清液，并将该上清液经粗滤膜过滤。

在本实施例中，S4中后滤处理包括使用0.8μm滤膜、0.65μm滤膜、0.45μm滤膜、0.1μm滤膜依次逐级过滤，从而获得去除了内毒素的新生牛血清。

实施例2：请参阅图1，本发明提供一种技术方案：一种去除新生牛血清内毒素的工艺，包括如下步骤：

S1：取新生牛血清，且该新生牛血清为小公牛喂食过初乳4-14天且含大量脂类、内毒素和血红蛋白超标的血清；

S2：对新生牛血清预滤处理，预滤处理得到预滤上清液；

S3：向预滤上清液中加入活性炭进行吸附，活性炭的质量分数为上清液质量的0.5-2％，待吸附50-90min后，进行中滤处理；

S4：中滤处理后加入内毒素吸附材料进行吸附处理，并在吸附处理进行后滤处理，后滤处理后即得到去除了内毒素的新生牛血清。

在本实施例中，S2中预滤处理具体包括步骤：S21：滤除牛血清中纤维蛋白并得滤除液；S22：将滤除液经超滤柱分离成大分子复合物与游离分子；S23：向大分子复合物内加入免疫球蛋白、脂蛋白并聚合成絮状沉淀；S24：将该絮状沉淀经离心、澄清过滤得预滤液，并将该预滤液与游离分子合并得到预滤上清液。

在本实施例中，S3中活性炭为活性炭颗粒和/或粉末，通过将活性炭颗粒和/或粉末加入血清并柔和搅拌至均匀，经中滤处理去除活性炭并获得中滤处理原料。

在本实施例中，S3中中滤处理是通过将处理液离心后得上清液，并将该上清液经粗滤膜过滤。

在本实施例中，S4中内毒素吸附材料为壳聚糖微球、甘氨酸经偶联反应而成。

在本实施例中，S4中后滤处理包括使用0.8μm滤膜、0.65μm滤膜、0.45μm滤膜、0.1μm滤膜依次逐级过滤，从而获得去除了内毒素的新生牛血清。

实施例3：请参阅图2，在本实施例中，上述活性炭颗粒和/或粉末加入血清并柔和搅拌至均匀是在搅拌设备中进行，搅拌设备包括搅拌箱1、机架2、第一搅拌结构与第二搅拌结构，搅拌箱1固定在机架2端部，搅拌箱1内部上、下两侧分别装设有第一搅拌结构、第二搅拌结构；所述第一搅拌结构包括滑轨3、齿板4、齿轮5与第一搅拌杆6，滑轨3固定在搅拌箱1顶壁，滑轨3内侧设有弹簧，滑轨3上滑接有齿板4；所述齿轮5通过支架装设于齿板4下侧且与齿板4啮合，齿轮5端部连接有第一搅拌杆6，且第一搅拌杆6可在齿轮5、齿板4相互啮合时摆动。

在本实施例中，第二搅拌结构为转动连接于搅拌箱1内部下侧的第二搅拌杆7，搅拌箱1外侧设有驱动第二搅拌杆7以及第一搅拌杆6运转的驱动结构，且驱动结构包括第一转动杆8、第二转动杆9、第三转动杆10与转动柱11，第一转动杆8装设于机架2上且与第二搅拌杆7传动连接，第一转动杆8上装设有第一斜齿轮，机架2底侧设有驱动第一转动杆8的手柄；所述第二转动杆9两端分别设有第一带轮12以及与第一斜齿轮啮合的第二斜齿轮，第三转动杆10一端设有与第一带轮12通过皮带联动的第二带轮13，第三转动杆10穿过搅拌箱1的端部连接有第三斜齿轮，且第三斜齿轮与转动柱11啮合传动，转动柱11顶端转动连接于搅拌箱1顶壁，转动柱11上装设有与齿板4抵触的凸轮14。

在本实施例中，通过手柄带动第一转动杆8，使第一转动杆8带动第二搅拌杆7以及第二转动杆9，通过第二转动杆9联动第三转动杆10，从而使第三转动杆10端部的凸轮14抵触于齿板4，使齿板4移动并与齿轮5啮合，进而使齿轮5带动第一搅拌杆6摆动，通过摆动的第一搅拌杆6以及转动的第二搅拌杆7实现更好的活性炭颗粒和/或粉末搅拌效果。

尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。