5-氮杂-4’-硫代-2’-脱氧胞苷的多晶型物

相关申请的交叉引用

本申请要求于2020年7月23日提交的美国申请第63/055,754号的权益，所述美国申请的内容特此通过引用整体并入本文。

背景技术

地西他滨(Decitabine)(也称为

5-氮杂-4'-硫代-2'-脱氧胞苷(“氮杂-T-dCyd”)是地西他滨的硫代取代衍生物，美国国家癌症研究所(NCI)对其进行了早期临床评估。这种DNMT1抑制剂最近由于细胞中的高DNMT去除率和抑制活性、胞苷脱氨酶降解率降低以及与具有5-氮杂胞苷主链的常规化合物相比产生的毒性副产物相对较少而引起了注意。与地西他滨一样，氮杂-T-dCyd可以以各种形式和结晶结构制备。

美国专利第5,591,722号涉及2'-脱氧-4'-硫核糖核苷和可用于治疗病毒性疾病的中间体，并且描述了涵盖5-氮杂胞苷化合物的通式。美国专利公开第2006/0014949号报告了地西他滨的多晶型物。Thottassery等人(癌症化疗与药理学(Cancer ChemotherPharmacol),2014)报告了氮杂-T-dCyd。临床试验NCT04167917报告了预计2025年完成的氮杂-T-dCyd在MDS和AML中的I期试验。尽管有这些进展，氮杂-T-dCyd的多晶型物迄今仍然难以捉摸。

发明内容

根据本发明的目的，如本文例示和广泛描述的，在一实施例中，本发明涉及氮杂-T-dCyd的结晶多晶型物，其可用于例如治疗癌症例如，MDS和白血病。

因此，公开了5-氮杂-4'-硫代-2'-脱氧胞苷的结晶多晶型物，其中所述结晶多晶型物具有粉末X射线衍射图，所述粉末X射线衍射图含有约8°、约13°、约15°、约17°、约19°、约22°、约23°、约26°、约28°、约29°、约31°、约33°和约37°2θ处的峰。

还公开了5-氮杂-4'-硫代-2'-脱氧胞苷的结晶多晶型物，其中所述结晶多晶型物具有粉末X射线衍射图，所述粉末X射线衍射图含有约6°、约12°、约13°、约14°、约16°、约18°、约20°、约21°、约22°、约26°、约27°、约29°、约30°、约33°、约35°、约36°、约39°和约41°2θ处的峰。

还公开了由结晶多晶型物组成的氮杂-T-dCyd化合物，所述结晶多晶型物具有粉末X射线衍射图，所述粉末X射线衍射图含有约8°、约13°、约15°、约17°、约19°、约22°、约23°、约26°、约28°、约29°、约31°、约33°和约37°2θ处的峰。

还公开了由结晶多晶型物组成的氮杂-T-dCyd化合物，所述结晶多晶型物具有粉末X射线衍射图，所述粉末X射线衍射图含有约6°、约12°、约13°、约14°、约16°、约18°、约20°、约21°、约22°、约26°、约27°、约29°、约30°、约33°、约35°、约36°、约39°和约41°2θ处的峰。

还公开了氮杂-T-dCyd的结晶多晶型物，其中所述结晶多晶型物是形式A或形式F。

还公开了药物组合物，其包括治疗有效量的所公开的结晶多晶型物和药学上可接受的载体。

还公开了治疗有需要的受试者的癌症的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的所公开的结晶多晶型物，由此治疗受试者的癌症。癌症的实例包含但不限于骨髓增生异常综合征和白血病。

还公开了制备所公开的结晶多晶型物或所公开的组合物的方法。

还公开了制备所公开的结晶多晶型物的方法，所述方法包括使氮杂-T-dCyd经受以下中的一种或多种：溶剂平衡、蒸发结晶、抗溶剂添加、热循环结晶、超声处理和蒸气扩散到溶液中。

还公开了试剂盒，所述试剂盒包括所公开的结晶多晶型物，以及以下中的一种或多种：(a)至少一种化疗剂；(b)用于施用与治疗癌症有关的组合物的说明书；以及(c)用于治疗癌症的说明书。

尽管可以以特定的法定类别，如系统法定类别来描述和要求保护本发明的实施例，但是这仅是为了方便起见，并且本领域的技术人员将理解，可以以任何法定类别来描述和要求保护本发明的每个实施例。除非另有明确说明，否则不旨在将本文中所阐述的任何方法或实施例解释为要求以特定顺序执行其步骤。因此，在方法权利要求在权利要求书或说明书中未具体陈述步骤被限制为特定顺序的情况下，在任何方面，绝不旨在推断顺序。这适用于任何可能的用于解释的非表达基础，包含关于步骤安排或操作流程的逻辑的事项、从语法组织或标点得到的普通含义或在说明书中描述的实施例的数量或类型。

附图说明

本文所描述的附图仅仅是出于对所选实施例而不是所有可能的实施方案的说明性目的，并且不旨在限制本公开的范围。

图1示出了氮杂-T-dCyd起始材料(SM：尚未经受特定结晶条件的氮杂-T-dCyd)的代表性HT-XRPD和HR-XRPD图。

图2示出了氮杂-T-dCyd形式A的代表性模拟XRPD和HR-XRPD。

图3示出了氮杂-T-dCyd起始材料(SM)的代表性TGMS分析。

图4示出了氮杂-T-dCyd起始材料(SM)的代表性DSC迹线。

图5示出了第二循环DSC后氮杂-T-dCyd形式A的代表性模拟XRPD和HT-XRPD。

图6报告了氮杂-T-dCyd起始材料(SM)的循环DSC。

图7A和图7B示出了氮杂-T-dCyd起始材料(SM)的LCMS的代表性结果。具体地，图7A示出了氮杂-T-dCyd起始材料(SM)的代表性LC色谱图。图7B示出了来自液相色谱法的氮杂-T-dCyd的代表性MS谱。

图8A-C示出了在水中形成溶液后氮杂-T-dCyd起始材料(SM)的LCMS的代表性结果。具体地，图8A示出了在水中调配的氮杂-T-dCyd的LC色谱图。图8B示出了在3.8分钟洗脱的杂质的MS谱。图8C示出了在4.4分钟洗脱的氮杂-T-dCyd的MS谱。

图9示出了展示氮杂-T-dCyd在各种溶液中的化学稳定性的代表性数据。

图10示出了展示氮杂-T-dCyd在各种溶液中随时间推移的化学稳定性的代表性数据。

图11示出了氮杂-T-dCyd的形式A的代表性XRPD图。

图12示出了氮杂-T-dCyd和氮杂-T-dCyd起始材料(SM)的形式A、B、A+C1、A+C2、A+D1和A+D2的代表性XRPD图。

图13A-C示出了形式A的代表性化学分析。具体地，图13A示出了形式A的TGMS分析。图13B示出了形式A的DSC分析。图13C示出了形式A的LCMS分析。

图14示出了氮杂-T-dCyd和氮杂-T-dCyd起始材料(SM)的形式E、F、G1、G2、H、I、J、F+K和L的代表性XRPD图。

图15A-C示出了形式F的代表性化学分析。具体地，图15A示出了形式F的TGMS分析。图15B示出了形式F的DSC分析。图15C示出了形式F的LCMS分析。

图16示出了氮杂-T-dCyd的形式F的代表性XRPD图。

图17和18示出了当向雌性NOD-SCID小鼠施用氮杂-T-dCyd起始材料(SM)时，表示肿瘤大小的体内荧光素酶活性数据。

图19示出了当用氮杂-T-dCyd起始材料(SM)处理血癌细胞(Mv4-11)时的半数最大抑制浓度(IC

图20示出了在pH 1.2下形式A和形式B的溶解速率曲线。

图21示出了在pH 5.0下形式A和形式B的溶解速率曲线。

图22示出了在pH 6.5下形式A和形式B的溶解速率曲线。

图23示出了当用形式A或SM处理K562细胞系时的IC

图24示出了当用形式A或SM处理HL-60细胞系时的IC

本发明的另外的优点将部分地在下面的描述中阐述，并且部分地将从描述中显而易见，或者可以通过本发明的实践而获知。本发明的优点将借助于所附权利要求中特别指出的要素和组合来实现和获得。应当理解，前述一般性描述和以下详细描述都仅是示例性和解释性的，并且不限制所要求保护的本发明。

具体实施方式

通过参考以下本发明的详细描述和其中所包含的实例可以更容易地理解本发明。下面的描述在本质上仅仅是示例性的并且不旨在限制本公开、应用或用途。

尽管可以以特定的法定类别，如系统法定类别来描述和要求保护本发明的实施例，但是这仅是为了方便起见，并且本领域的技术人员将理解，可以以任何法定类别来描述和要求保护本发明的每个实施例。除非另有明确说明，否则不旨在将本文中所阐述的任何方法或实施例解释为要求以特定顺序执行其步骤。因此，在方法权利要求在权利要求书或说明书中未具体陈述步骤被限制为特定顺序的情况下，在任何方面，绝不旨在推断顺序。这适用于任何可能的用于解释的非表达基础，包含关于步骤安排或操作流程的逻辑的事项、从语法组织或标点得到的普通含义或在说明书中描述的实施例的数量或类型。

贯穿本申请，引用了各种出版物。这些出版物的公开内容特此通过引用整体并入本申请中，以更全面地描述本发明所属领域的现状。对于文献中含有的在文献所依赖的句子中讨论的材料，所公开的参考文献也单独且具体地通过引用并入本文。本文中的任何内容均不应被视为承认本发明因现有发明而无权先于此类出版物。进一步地，本文所提供的出版物日期可以与可能需要独立确认的实际出版物日期不同。

A.定义

在说明书和所附权利要求中所用的单数形式“一个/种(a/an)”以及“所述”包含复数指示物，除非上下文另外清楚地指明。因此，例如，提及“官能团”、“烷基”或“残基”包含两种或更多种此类官能团、烷基或残基等的混合物。

如说明书和权利要求书所使用的，术语“包括(comprising)”可能包含“由…组成”和“基本上由…组成”的实施例。

在本文中，范围可以表示为从“约”一个特定值和/或至“约”另一个特定值。当表达此类范围时，另一个实施例包含从一个特定值和/或到另一个特定值。类似地，当通过使用先行词“约”将值表达为近似值时，应理解，特定值形成另一个实施例。应进一步理解，每个范围的端点相对于另一端点，以及独立于另一端点都是显著的。还应理解，本文公开了许多值，并且每个值在本文中还被公开为“约”为除了所述值本身之外的所述特定值。例如，如果公开值“10”，则还公开“约10”。还应当理解，还公开了两个特定单位之间的每个单位。例如，如果公开了10和15，那么还公开了11、12、13和14。

如本文中所使用的，术语“约”和“为或约为”意指所讨论的量或值可以为与指定的某个其它值近似或约相同的值。通常应理解，如本文所使用的，除非另外指示或推断，否则标称值指示±10％的变化。所述术语旨在传达：类似的值促进权利要求书中所叙述的等同结果或效果。也就是说，应当理解，量、大小、调配物、参数和其它数量和特性不是并且不必是精确的，而是根据需要可以是近似的和/或更大或更小，从而反映公差、转换因子、舍入、测量误差等，以及本领域的技术人员已知的其它因素。通常，量、大小、调配物、参数或其它数量或特性是“约”或“近似的”，无论是否明确如此陈述。应当理解，在定量值之前使用“约”的情况下，除非另外具体陈述，否则参数还包含特定的定量值本身。

在说明书和结论性权利要求书中对组合物中的特定元素或组分的重量份的提及表示所述组合物或制品中的元素或组分与任何其它元素或组分之间的重量关系，对此表达为重量份。因此，在含有2重量份的组分X与5重量份的组分Y的化合物中，X和Y以2:5的重量比存在，并且不管化合物中是否还含有其它组分都以此类比率存在。

除非具体地相反地指出，否则组分的重量百分比(wt.％)基于包含所述组分的调配物或组合物的总重量。

如本文所使用的，“EC

如本文所使用的，术语“任选的”或“任选地”意指随后描述的事件或情形可以或可以不发生，并且所述描述包含所述事件或情形发生的情况以及所述事件或情形不发生的情况。

5-氮杂-4'-硫代-2'-脱氧胞苷(也称为NTX-301)是指经修饰的胞苷核苷，其中核苷的糖部分上的环氧被硫替代。氮杂-T-dCyd具有以下结构：

除非另有说明，术语“氮杂-T-dCyd”包含化合物本身并且还包含其药学上可接受的盐。

氮杂-T-dCyd的结晶多晶型物是指核苷的各种晶体结构。在一些实施例中，氮杂-T-dCyd的结晶多晶型物是指形式A、形式B、形式C1、形式C2、形式D1、形式D2、形式E、形式F、形式G1、形式G2、形式H、形式1或形式J，如在包含实例的本说明书中进一步描述的。在特定实施例中，结晶多晶型物是形式A或形式F。

如本文所使用的，术语“基本上类似”是指粉末X射线衍射图与本文所描绘的那些粉末X射线衍射图不相同但共享大部分主峰，其落在实验误差的限度内。例如，在各个方面，基本上类似的粉末X射线衍射图可以与本文所公开的粉末X射线衍射图共享至少3个峰、至少4个峰、至少5个峰、至少6个峰、至少7个、至少8个峰、至少9个峰、至少10个峰或多于10个峰。

术语“多晶型物形式A”或“形式A”是指展现与图11所示的X射线粉末衍射图基本上相同的X射线粉末衍射图的氮杂-T-dCyd的结晶形式。在一实施例中，形式A具有XRPD图，所述XRPD图具有约8°、约13°、约15°、约17°、约19°、约22°、约23°、约26°、约28°、约29°、约31°、约33°和约37°2θ处的峰。在另一个实施例中，形式A具有XRPD图，所述XRPD图具有7.7°±0.3°、13.02°±0.3°、15.34°±0.3°、16.78°±0.3°、18.62°±0.3°、19.42°±0.3°、21.94°±0.3°、22.90°±0.3°、25.70°±0.3°、26.64°±0.3°、27.86°±0.3°、28.63°±0.3°、29.45°±0.3°、31.42°±0.3°、32.70°±0.3°、34.72°±0.3°、35.97°±0.3°和37.46°±0.3°2θ处的峰。在特定实施例中，形式A具有XRPD图，所述XRPD图具有7.7°、13.02°、15.34°、16.78°、18.62°、19.42°、21.94°、22.90°、25.70°、27.86°、28.70°、31.42°、32.70°和37.46°2θ处的峰。

术语“多晶型物形式B”或“形式B”是指展现与图12所示的X射线粉末衍射图基本上相同的X射线粉末衍射图的氮杂-T-dCyd的结晶形式。

术语“多晶型物形式C1”或“形式C1”是指出现在与形式A的混合物中并且展现与图12所示的X射线粉末衍射图基本上相同的X射线粉末衍射图的氮杂-T-dCyd的结晶形式。

术语“多晶型物形式C2”或“形式C2”是指出现在与形式A的混合物中并且展现与图12所示的X射线粉末衍射图基本上相同的X射线粉末衍射图的氮杂-T-dCyd的结晶形式。

术语“多晶型物形式D1”或“形式D1”是指出现在与形式A的混合物中并且展现与图12所示的X射线粉末衍射图基本上相同的X射线粉末衍射图的氮杂-T-dCyd的结晶形式。

术语“多晶型物形式D2”或“形式D2”是指展现与图12所示的X射线粉末衍射图基本上相同的X射线粉末衍射图的氮杂-T-dCyd的结晶形式。

术语“多晶型物形式E”或“形式E”是指展现与图14所示的X射线粉末衍射图基本上相同的X射线粉末衍射图的氮杂-T-dCyd的结晶形式。

术语“多晶型物形式F”或“形式F”是指展现与图16所示的X射线粉末衍射图基本上相同的X射线粉末衍射图的氮杂-T-dCyd的结晶形式。在一实施例中，形式F具有XRPD图，所述XRPD图具有约6°、约12°、约13°、约14°、约16°、约18°、约20°、约21°、约22°、约26°、约27°、约29°、约30°、约33°、约35°、约36°、约39°和约41°2θ处的峰。在一实施例中，形式F具有XRPD图，所述XRPD图具有6.06°±0.3°、12.10°±0.3°、13.02°±0.3°、14.38°±0.3°、15.94°±0.3°、17.50°±0.3°、19.62°±0.3°、21.18°±0.3°、22.34°±0.3°、26.18°±0.3°、27.42°±0.3°、28.50°±0.3°、29.90°±0.3°、32.66°±0.3°、35.02°±0.3°、36.30°±0.3°、38.94°±0.3°和41.06°±0.3°2θ处的峰。在特定实施例中，形式F具有XRPD图，所述XRPD图具有6.06°、12.10°、13.02°、14.38°、15.94°、17.50°、19.62°、21.18°、22.34°、26.18°、27.42°、28.50°、29.90°、32.66°、35.02°、36.30°、38.94°和41.06°2θ处的峰。

术语“多晶型物形式G1”或“形式G1”是指展现与图14所示的X射线粉末衍射图基本上相同的X射线粉末衍射图的氮杂-T-dCyd的结晶形式。

术语“多晶型物形式G2”或“形式G2”是指展现与图14所示的X射线粉末衍射图基本上相同的X射线粉末衍射图的氮杂-T-dCyd的结晶形式。

术语“多晶型物形式H”或“形式H”是指展现与图14所示的X射线粉末衍射图基本上相同的X射线粉末衍射图的氮杂-T-dCyd的结晶形式。

术语“多晶型物形式I”或“形式I”是指展现与图14所示的X射线粉末衍射图基本上相同的X射线粉末衍射图的氮杂-T-dCyd的结晶形式。

术语“多晶型物形式J”或“形式J”是指展现与图14所示的X射线粉末衍射图基本上相同的X射线粉末衍射图的氮杂-T-dCyd的结晶形式。

术语“多晶型物形式K”或“形式K”是指展现与图14所示的X射线粉末衍射图基本上相同的X射线粉末衍射图的氮杂-T-dCyd的结晶形式。

术语“多晶型物形式L”或“形式L”是指展现与图14所示的X射线粉末衍射图基本上相同的X射线粉末衍射图的氮杂-T-dCyd的结晶形式。

如本文所使用的，术语“受试者”可以是脊椎动物，如哺乳动物、鱼、鸟、爬行动物或两栖动物。因此，本文公开的方法的受试者可以是人、非人灵长类动物、马、猪、兔、狗、绵羊、山羊、牛、猫、豚鼠或啮齿动物。所述术语不指示特定年龄或性别。因此，旨在涵盖成人及新生的受试者以及胎儿，无论是男性还是女性。在一个实施例中，所述受试者是哺乳动物。在另外的实施例中，哺乳动物是人。在一个实施例中，受试者患有血癌。在一个实施例中，受试者是可以接受氮杂-T-dCyd组合物施用的动物。

如本文所使用的，术语“治疗”是指对患者的医疗管理，旨在治愈、改善、稳定或预防疾病、病理学病状或病症。此术语包含积极治疗，即特别针对疾病、病理学病状或病症的改善的治疗，并且还包含病因治疗，即针对相关疾病、病理学病状或病症的病因的去除的治疗。另外，此术语包含姑息性治疗，即设计用于缓解症状而非治愈疾病、病理学病状或病症的治疗；预防性治疗，即旨在最小化或部分或完全抑制相关疾病、病理学病状或病症的发展的治疗；以及支持性治疗，即用于补充针对相关疾病、病理学病状或病症的改善的另一种特异性疗法的治疗。在各个实施例中，所述术语涵盖对包含哺乳动物(例如，人)在内的受试者的任何治疗，并且包含：(i)预防疾病在可能倾向于患有疾病但尚未被诊断为患有疾病的受试者身上发生；(ii)抑制疾病，即，阻止其发展；或(iii)减轻疾病，即，使疾病消退。在一个实施例中，所述受试者是哺乳动物，如灵长类动物，并且在另外的实施例中，所述受试者是人。术语“受试者”还包含家养动物(例如，猫、狗等)、家畜(例如，牛、马、猪、绵羊、山羊等)以及实验室动物(例如，小鼠、兔、大鼠、豚鼠、果蝇等)。

如本文所使用的，术语“预防(prevent)”或“预防(preventing)”是指妨碍、防止、避免、预先阻止、停止或阻碍某些事情发生，尤其是通过提前动作。应当理解，在本文使用降低、抑制或预防的情况下，除非另外明确指明，否则还明确公开了其它两个词语的使用。

如本文所使用的，术语“经诊断”意指已经经历由技术人员，例如医师，进行的身体检查，并且发现患有可以通过本文公开的化合物、组合物或方法诊断或治疗的病状。

如本文所使用的，术语“施用(administering)”和“施用(administration)”是指向受试者提供药物制剂的任何方法。此类方法是本领域的技术人员熟知的，并且包含但不限于口服施用、透皮施用、通过吸入施用、鼻腔施用、局部施用、阴道内施用、眼部施用、耳内施用、脑内施用、直肠施用、舌下施用、口腔施用以及肠胃外施用，包含可注射的，如静脉内施用、动脉内施用、肌内施用和皮下施用。施用可以是连续的或间歇的。在各个实施例中，可以治疗性地施用制剂；即，施用制剂以治疗现有疾病或病状。在另外的各个实施例中，可以预防性地施用制剂；即，施用制剂以预防疾病或病状。

如本文所使用的，术语“有效量(effective amount和amount effective)”是指足以实现期望结果或对不期望病状起作用的量。例如，如本文所使用的，术语“治疗有效量”是指足以实现治疗效果的氮杂-T-dCyd的结晶多晶型物的量。任何特定患者的具体治疗有效剂量水平将取决于多种因素，包含所治疗的病症和病症的严重程度；所采用的特定组合物；患者的年龄、体重、总体健康状况、性别和饮食；所采用的特定化合物的施用时间、施用途径、排泄率；治疗的持续时间；与所采用的特定化合物组合或同时使用的药物以及医学领域熟知的类似因素。例如，以比实现期望治疗效果所需的剂量水平低的剂量水平开始使用化合物并且逐渐增加剂量直到期望效果得以实现完全处于本领域的技术范围内。如果需要，出于施用的目的，有效日剂量可以分成多个剂量。因此，单剂量组合物可以含有此类量或其约数以构成日剂量。在有任何禁忌症的情况下，可以由个别医师调整剂量。剂量可以变化，并且可以以每天一次或多次剂量施用来进行施用，持续一天或数天。可以在文献中找到针对给定类别的药物产品的适当剂量的指导。在特定实施例中，治疗有效量介于约30mg/m

如本文所使用的，“剂型”意指在适合施用于受试者的介质、载体、媒剂或装置中的药理学活性材料。剂型可以包括本发明所公开的化合物、所公开的制备方法的产物、或其盐、溶剂化物或多晶型物与药学上可接受的赋形剂，如防腐剂、缓冲剂、盐水或磷酸盐缓冲盐水的组合。剂型可以使用常规的药物制造和配混技术制备。剂型可以包括无机或有机缓冲剂(例如，磷酸盐、碳酸盐、乙酸盐或柠檬酸盐的钠盐或钾盐)和pH调节剂(例如，盐酸、氢氧化钠或氢氧化钾、柠檬酸盐或乙酸盐、氨基酸及其盐)、抗氧化剂(例如，抗坏血酸、α-生育酚)、表面活性剂(例如，聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯80、聚氧乙烯9-10壬基苯酚、脱氧胆酸钠)、溶液和/或冷冻/冻干稳定剂(例如，蔗糖、乳糖、甘露醇、海藻糖)、渗透调节剂(例如，盐或糖)、抗菌剂(例如，苯甲酸、苯酚、庆大霉素)、消泡剂(例如，聚二甲基硅氧烷)、防腐剂(例如，硫柳汞(thimerosal)、2-苯氧乙醇、EDTA)、聚合物稳定剂和粘度调节剂(例如，聚乙烯吡咯烷酮、泊洛沙姆488、羧甲基纤维素)和助溶剂(例如，甘油、聚乙二醇、乙醇)。被调配用于可注射用途的剂型可以将所公开的化合物、所公开的制备方法的产物或其盐、溶剂化物或多晶型物与防腐剂一起悬浮于注射用无菌盐水溶液中。

如本文所使用的，“试剂盒”意指构成试剂盒的至少两种组件的集合。这些组件一起构成了用于给定目的的功能单元。单独的成员组件可以物理地包装在一起或分开包装。例如，包括用于使用试剂盒的说明书的试剂盒可以在具有其它单独成员组件的情况下物理地包含或不包含说明书。相反，说明书可以作为单独成员组件以纸质形式或可以在计算机可读存储器装置上供应或从互联网网站下载的电子形式供应，或作为记录的演示文稿供应。

如本文所使用的，“说明书”意指描述与试剂盒有关的相关材料或方法的文档。这些材料可以包含以下的任何组合：背景信息、组分列表及其可用性信息(购买信息等)、使用试剂盒的简要或详细方案、故障排除、参考文献、技术支持和任何其它相关文件。说明书可以与试剂盒一起供应或作为单独成员组件以纸质形式或可以在计算机可读存储器装置上供应或从互联网网站下载的电子形式供应，或作为记录的演示文稿供应。说明书可以包括一个或多个文档，并且意在包含未来的更新。

如本文所使用的，术语“癌症”包含瘤形成和发育不良。癌症可以是血癌或实体癌。术语“血癌”包含血细胞的瘤形成和发育不良。在一些实施例中，所述血癌选自由以下组成的组：非霍奇金氏淋巴瘤(non-Hodgkin's lymphoma)、霍奇金氏淋巴瘤(Hodgkin'slymphoma)、多发性骨髓瘤、白血病、淋巴瘤、骨髓增生异常综合征、急性淋巴细胞白血病、急性骨髓性白血病、慢性淋巴细胞白血病、慢性骨髓性白血病和孤立性骨髓瘤。术语“实体癌”包含组织或器官的瘤形成和发育不良。在一些实施例中，癌症可以是以下中的一种或多种：胃癌、肾癌、卵巢癌、宫颈癌、子宫癌、前列腺癌、肺癌、结肠癌、乳腺癌、黑色素瘤和胰腺癌。

如本文所使用的术语“治疗剂”包含任何合成或天然存在的生物活性化合物或物质组合物，当施用于生物体(人或非人动物)时，所述合成或天然存在的生物活性化合物或物质组合物通过局部和/或全身作用诱导期望的药理学、免疫原性和/或生理效应。所述术语因此涵盖传统上被视为包含如蛋白质、肽、激素、核酸、基因构建体等分子的药物、疫苗和生物药物的那些化合物或化学品。治疗剂的实例描述于熟知的参考文献中，如《默克索引(Merck Index)》(第14版)、《医师案头参考(Physicians'Desk Reference)》(第64版)和《治疗学的药理学基础(The Pharmacological Basis of Therapeutics)》(第12版)，并且它们包含但不限于药物；维生素类；矿物质补充剂；用于治疗、预防、诊断、治愈或缓解疾病或疾患的物质；影响身体结构或功能的物质，或前药，其在被置于生理环境后变得具有生物活性或更具活性。例如，术语“治疗剂”包含用于所有主要治疗领域的化合物或组合物，包含但不限于佐剂；如抗生素和抗病毒剂等抗感染药；镇痛药和镇痛药组合、减食欲药、抗炎剂、抗癫痫药、局部和全身麻醉药、催眠药、镇静剂、抗精神病剂、精神抑制剂、抗抑郁药、抗焦虑药、拮抗剂、神经元阻断剂、抗胆碱能药和拟胆碱剂、抗毒蕈碱剂和毒蕈碱剂、抗肾上腺素能药、抗心律失常药、抗高血压剂、激素和营养素、抗关节炎剂、抗哮喘药、抗惊厥药、抗组胺药、抗呕吐剂、抗肿瘤药、止痒药、解热药；镇痉药、心血管制剂(包含钙通道阻滞剂、β-阻滞剂、β-激动剂和抗心律失常药)、抗高血压药、利尿药、血管扩张药；中枢神经系统剌激剂；咳嗽和感冒制剂；去充血剂；诊断；激素；骨生长刺激剂和骨吸收抑制剂；免疫抑制剂；肌肉松弛剂；精神刺激剂；镇静剂；安定药；蛋白质、肽和其片段(无论是天然存在的、化学合成的还是重组产生的)；以及核酸分子(两个或更多个核苷酸(核糖核苷酸(RNA)或脱氧核糖核苷酸(DNA))的聚合物形式，包含双链和单链分子、基因构建体、表达载体、反义分子等)、小分子(例如，多柔比星)和其它生物活性大分子，例如蛋白质和酶。药剂可以是用于医疗(包含兽医)应用和农业(如植物)以及其它领域的生物活性剂。术语“治疗剂”还包含但不限于药物；维生素类；矿物质补充剂；用于治疗、预防、诊断、治愈或缓解疾病或疾患的物质；或影响身体结构或功能的物质；或前药，其在被置于预定的生理环境后变得具有生物活性或更具活性。

如本文所使用的，术语“化疗剂”是指具有抗癌特性的化合物和组合物。在一实施例中，化疗剂与氮杂-T-dCyd的结晶多晶型物组合。在一实施例中，所述化疗剂选自由以下组成的组：烷化剂、抗代谢物剂、抗赘生物抗生素剂、有丝分裂抑制剂和mTOR抑制剂。在特定实施例中，所述抗赘生物抗生素剂选自由以下组成的组：多柔比星(doxorubicin)、米托蒽醌(mitoxantrone)、博来霉素(bleomycin)、柔红霉素(daunorubicin)、表柔比星(epirubicin)、伊达比星(idarubicin)、普卡霉素(plicamycin)、丝裂霉素(mitomycin)、喷司他丁(pentostatin)和戊柔比星(valrubicin)或其药学上可接受的盐。在特定实施例中，所述抗代谢物剂选自由以下组成的组：吉西他滨(gemcitabine)、5-氟尿嘧啶、卡培他滨(capectiabine)、羟基脲、巯嘌呤、培美曲塞(pemetrexed)、氟达拉滨(fludarabine)、奈拉滨(nelarabine)、克拉屈滨(cladribine)、氯法拉滨(clofarabine)、阿糖胞苷(cytarabine)、地西他滨(decitabine)、普拉曲沙(pralatrexate)、氟尿苷、甲氨蝶呤和硫鸟嘌呤或其药学上可接受的盐。在特定实施例中，所述烷化剂药剂选自由以下组成的组：卡铂(carboplatin)、顺铂(cisplatin)、环磷酰胺(cyclophosphamide)、苯丁酸氮芥(chlorambucil)、美法仑(melphalan)、卡莫司汀(carmustine)、白消安(busulfan)、洛莫司丁(lomustine)、达卡巴嗪(dacarbazine)、奥沙利铂(oxaliplatin)、异环磷酰胺(ifosfamide)、氮芥、替莫唑胺(temozolomide)、噻替哌(thiotepa)、苯达莫司汀(bendamustine)和链脲佐菌素或其药学上可接受的盐。在特定实施例中，所述有丝分裂抑制剂选自由以下组成的组：伊立替康(irinotecan)、拓扑替康(topotecan)、鲁比替康(rubitecan)、卡巴他赛(cabazitaxel)、多西他赛(docetaxel)、紫杉醇、依托泊苷(etopside)、长春新碱(vincristine)、伊沙匹隆(exabepilone)、长春瑞滨(vinorelbine)、长春碱(vinblastine)和替尼泊苷(teniposide)或其药学上可接受的盐。在特定实施例中，所述mTOR抑制剂选自由以下组成的组：依维莫司(everolimus)、西罗莫司(sirolimus)和替西罗莫司(temsirolimus)或其药学上可接受的盐。

术语“药学上可接受的”描述了不是生物学上或在其它方面不期望的材料，即不会引起不可接受水平的不期望的生物效应或以有害方式相互作用的材料。

如本文所使用的术语“衍生物”是指一种化合物，其结构衍生自母体化合物(例如，本文所公开的化合物)的结构，并且其结构与本文公开的结构十分类似，并且基于这种类似性，本领域的技术人员预期所述化合物表现出与所要求保护的化合物相同或类似的活性和效用，或作为前体诱导与所要求保护的化合物相同或类似的活性和效用。示例性衍生物包含盐、酯和酰胺、酯或酰胺的盐和母体化合物的N-氧化物。

如本文所使用的，术语“活性成分”是指治疗剂，并且包含用于预防、诊断、缓解、治疗或治愈疾病或病症的除食物以外的任何物质。Stedman的《医学词典(MedicalDictionary)》,第25版(1990)。所述物质可以口服；注射到肌肉、皮肤、血管或体腔中；或局部应用。Mosby的《医疗、护理和专职医疗词典(Medical,Nursing&Allied HealthDictionary)》,第5版(1998)。所述药剂可以包含以下中的至少一项中公开的任何物质：《默克索引》,第14版(2006)；Pei-Show Juo,《生物医学与分子生物学简明词典(ConciseDictionary of Biomedicine and Molecular Biology)》,(1996)；《美国药典词典(U.S.Pharmacopeia Dictionary)》,2000版；《医师案头参考》,2010版；《橙皮书：具有治疗等效性评估的经批准药物产品(Orange Book:Approved Drug Products withTherapeutic Equivalence Evaluations)》(2013年4月)；以及《批准的动物和兽药产品(绿皮书)(Approved Animal&Veterinary Drug Products(Green Book)》(2013年1月)。术语活性成分包含例如处方药和非处方药活性药物成分(例如，小分子、大环化合物、肽等)、维生素、保健品、补充剂(例如，饮食、营养和草药)、化妆品和生物制剂。

术语“药学上可接受的载体”是指无菌水溶液或非水溶液、分散体、悬浮液或乳液，以及用于在即将使用之前重构成无菌可注射溶液或分散体的无菌粉末。合适的水性和非水性载体、稀释剂、溶剂或媒剂的实例包含但不限于水、乙醇、多元醇(如甘油、丙二醇、聚乙二醇等)、羧甲基纤维素及其合适的混合物、植物油(如橄榄油)和如油酸乙酯等可注射有机酯。可以例如通过使用如卵磷脂等包衣材料，在分散体的情况下通过维持所需粒度以及通过使用表面活性剂来维持适当的流动性。这些组合物还可以含有佐剂，如防腐剂、润湿剂、乳化剂以及分散剂。可以通过包含如对羟基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、山梨酸等各种抗细菌剂和抗真菌剂来确保防止微生物的作用。还可以令人期望的是包含如糖、氯化钠等等渗剂。可注射药物形式的延长吸收可以通过包含如单硬脂酸铝和明胶等延迟吸收的药剂来实现。可以通过在如聚乳酸-聚乙交酯、聚(原酸酯)和聚(酸酐)等可生物降解的聚合物中形成药物的微胶囊基质来制备可注射储库型(depot)形式。根据药物与聚合物的比率以及所采用的特定的性质，可以对药物释放的速率进行控制。储库型可注射调配物还通过将药物截留在与身体组织相容的脂质体或微乳液中来制备。可注射调配物可以例如通过滤过细菌截留过滤器，或通过掺入呈无菌固体组合物形式的灭菌剂来灭菌，这些无菌固体组合物可以在即将使用前溶解或分散于无菌水或其它无菌可注射介质中。合适的惰性载体可以包含如乳糖等糖。在特定实施例中，至少95重量％的活性成分颗粒的有效粒度处于0.01到10微米的范围内。

除非另有明确说明，否则不旨在将本文中所阐述的任何方法解释为要求以特定顺序执行其步骤。因此，在方法权利要求实际上不叙述其步骤所遵循的顺序或者在权利要求书或说明书中没有另外具体地说明步骤被限制为特定顺序的情况下，绝不旨在任何方面推断顺序。这适用于任何可能的用于解释的非表达基础，包含：相对于步骤安排或操作流程的逻辑问题；由语法组织或标点符号得出的简单含义；以及说明书中所描述的实施例的数目或类型。

公开了用于制备本发明组合物的组分以及在本文公开的方法内使用的组合物本身。本文公开了这些和其它材料，并且应理解，当公开了这些材料的组合、子集、相互作用、组等时，虽然无法明确公开对这些化合物的每种各种单独和集体组合和排列的具体参考，但是每一种都在本文中具体考虑和描述。例如，如果公开并讨论了特定化合物，并且讨论了可以对包含所述化合物的多个分子进行的许多修饰，则除非具体地相反地指明，否则具体地考虑了所述化合物的每种组合和排列以及可能的修饰。因此，如果公开一类分子A、B和C以及一类分子D、E和F，并公开了组合分子A-D的实例，则即使未单独叙述每种组合，也单独地且共同地考虑了每种组合，从而意味着视为公开了组合A-E、A-F、B-D、B-E、B-F、C-D、C-E和C-F。同样，还公开了这些的任何子集或组合。因此，例如，认为公开了子组A-E、B-F和C-E。此概念适用于本申请的所有实施例，包含但不限于制备和使用本发明的组合物的方法中的步骤。因此，如果存在可以执行的各种另外的步骤，则应理解，这些另外的步骤中的每个步骤可以与本发明的方法的任何具体实施例或实施例组合一起执行。

应理解，本文公开的组合物具有某些功能。本文公开了用于执行所公开功能的某些结构要求，并且应理解，存在可以执行与所公开结构相关的同一功能的多种结构，并且这些结构通常将实现同一结果。

B.结晶多晶型物

在一实施例中，公开了5-氮杂-4'-硫代-2'-脱氧胞苷的结晶多晶型物，其中所述结晶多晶型物具有粉末X射线衍射图，所述粉末X射线衍射图含有约8°、约13°、约15°、约17°、约19°、约22°、约23°、约26°、约28°、约29°、约31°、约33°和约37°2θ处的峰。在另外的实施例中，所述结晶多晶型物的X射线粉末衍射图与图11所示的所述X射线粉末衍射图基本上类似或相同。

在一实施例中，还公开了5-氮杂-4'-硫代-2'-脱氧胞苷的结晶多晶型物，其中所述结晶多晶型物具有粉末X射线衍射图，所述粉末X射线衍射图含有约6°、约12°、约13°、约14°、约16°、约18°、约20°、约21°、约22°、约26°、约27°、约29°、约30°、约33°、约35°、约36°、约39°和约41°2θ处的峰。在另外的实施例中，所述结晶多晶型物的X射线粉末衍射图与图16所示的所述X射线粉末衍射图基本上类似或相同。

在一实施例中，本公开提供了由结晶多晶型物组成的氮杂-T-dCyd化合物，所述结晶多晶型物具有X射线粉末衍射图，所述X粉末射线衍射图含有约8°、约13°、约15°、约17°、约19°、约22°、约23°、约26°、约28°、约29°、约31°、约33°和约37°2θ处的峰。在另外的实施例中，所述结晶多晶型物的X射线粉末衍射图与图11所示的所述X射线粉末衍射图基本上类似或相同。

在一实施例中，本公开提供了由结晶多晶型物组成的氮杂-T-dCyd化合物，所述结晶多晶型物具有X射线粉末衍射图，所述X射线粉末衍射图含有约6°、约12°、约13°、约14°、约16°、约18°、约20°、约21°、约22°、约26°、约27°、约29°、约30°、约33°、约35°、约36°、约39°和约41°2θ处的峰。在另外的实施例中，所述结晶多晶型物的X射线粉末衍射图与图16所示的所述X射线粉末衍射图基本上类似或相同。

在各个实施例中，结晶多晶型物与药学上可接受的载体一起存在于药物组合物中。

C.制备结晶多晶型物的方法

在一实施例中，公开了制备所公开的结晶多晶型物的方法，所述方法包括使氮杂-T-dCyd经受以下中的一种或多种：溶剂平衡、蒸发结晶、抗溶剂添加、热循环结晶、超声处理和蒸气扩散到溶液中。在另外的实施例中，所述结晶多晶型物具有粉末X射线衍射图，所述粉末X射线衍射图含有约8°、约13°、约15°、约17°、约19°、约22°、约23°、约26°、约28°、约29°、约31°、约33°和约37°2θ处的峰。在另外的实施例中，所述结晶多晶型物具有粉末X射线衍射图，所述粉末X射线衍射图含有约6°、约12°、约13°、约14°、约16°、约18°、约20°、约21°、约22°、约26°、约27°、约29°、约30°、约33°、约35°、约36°、约39°和约41°2θ处的峰。

在一实施例中，所述方法包括以下中的一种且仅一种：溶剂平衡、蒸发结晶、抗溶剂添加、热循环结晶、超声处理和蒸气扩散到溶液中。在一实施例中，所述方法包括以下中的恰好两种：溶剂平衡、蒸发结晶、抗溶剂添加、热循环结晶、超声处理和蒸气扩散到溶液中。在一实施例中，所述方法包括以下中的多于两种：溶剂平衡、蒸发结晶、抗溶剂添加、热循环结晶、超声处理和蒸气扩散到溶液中。

D.药物组合物

本公开提供了包括氮杂-T-dCyd的结晶多晶型物的组合物。此类组合物包含药物组合物，所述药物组合物包括治疗有效量的氮杂-T-dCyd的结晶多晶型物和药学上可接受的载体。通常，所有已知或批准量的结晶氮杂-T-dCyd都可以用于所述组合物中。在一实施例中，结晶氮杂-T-dCyd呈形式A或形式F并且以约30mg/m

在一实施例中，公开了药物组合物，其包括有效量的：(a)结晶多晶型物，所述结晶多晶型物具有粉末X射线衍射图，所述粉末X射线衍射图含有约8°、约13°、约15°、约17°、约19°、约22°、约23°、约26°、约28°、约29°、约31°、约33°和约37°2θ处的峰；或(b)结晶多晶型物，所述结晶多晶型物具有粉末X射线衍射图，所述粉末X射线衍射图含有约6°、约12°、约13°、约14°、约16°、约18°、约20°、约21°、约22°、约26°、约27°、约29°、约30°、约33°、约35°、约36°、约39°和约41°2θ处的峰以及药学上可接受的载体。在另外的实施例中，所述结晶多晶型物具有粉末X射线衍射图，所述粉末X射线衍射图含有约8°、约13°、约15°、约17°、约19°、约22°、约23°、约26°、约28°、约29°、约31°、约33°和约37°2θ处的峰。在仍另外的实施例中，所述结晶多晶型物具有粉末X射线衍射图，所述粉末X射线衍射图含有约6°、约12°、约13°、约14°、约16°、约18°、约20°、约21°、约22°、约26°、约27°、约29°、约30°、约33°、约35°、约36°、约39°和约41°2θ处的峰。

在一实施例中，有效量为约35mg/m

在一实施例中，组合物进一步包括化疗剂。化疗剂的实例包含但不限于烷化剂、抗代谢物剂、抗赘生物抗生素剂、有丝分裂抑制剂和mTOR抑制剂。

在一实施例中，组合物进一步包括烷化剂。烷化剂的实例包含但不限于卡铂、顺铂、环磷酰胺、苯丁酸氮芥、美法仑、卡莫司汀、白消安、洛莫司丁、达卡巴嗪、奥沙利铂、异环磷酰胺、氮芥、替莫唑胺、噻替哌、苯达莫司汀和链脲菌素或其药学上可接受的盐。

在一实施例中，组合物进一步包括抗代谢物剂。抗代谢物剂的实例包含但不限于吉西他滨、5-氟尿嘧啶、卡培他滨、羟基脲、巯嘌呤、培美曲塞、氟达拉滨、奈拉滨、克拉屈滨、氯法拉滨、阿糖胞苷、地西他滨、普拉曲沙、氟尿苷、甲氨蝶呤和硫鸟嘌呤或其药学上可接受的盐。

在一实施例中，组合物进一步包括抗赘生物抗生素剂。抗赘生物抗生素剂的实例包含但不限于多柔比星、米托蒽醌、博来霉素、柔红霉素、表柔比星、伊达比星、普卡霉素、丝裂霉素、喷司他丁和戊柔比星或其药学上可接受的盐。

在一实施例中，组合物进一步包括有丝分裂抑制剂。有丝分裂抑制剂的实例包含但不限于伊立替康、拓扑替康、鲁比替康、卡巴他赛、多西他赛、紫杉醇、依托泊苷、长春新碱、伊沙匹隆、长春瑞滨、长春碱和替尼泊苷或其药学上可接受的盐。

在一实施例中，组合物进一步包括mTOR抑制剂。mTOR抑制剂的实例包含但不限于依维莫司、西罗莫司和替西罗莫司或其药学上可接受的盐。

在一实施例中，包括氮杂-T-dCyd结晶多晶型物的组合物被调配用于全身或局部施用。考虑了用于口服、局部、静脉内或肌肉内施用的调配物。在特定实施例中，氮杂-T-dCyd的结晶多晶型物被调配用于口服施用。

在一实施例中，药物组合物包括由结晶多晶型物组成的活性成分，所述结晶多晶型物具有粉末X射线衍射图，所述粉末X射线衍射图含有约8°、约13°、约15°、约17°、约19°、约22°、约23°、约26°、约28°、约29°、约31°、约33°和约37°2θ处的峰。

在一实施例中，药物组合物包括由结晶多晶型物组成的活性成分，所述结晶多晶型物具有粉末X射线衍射图，所述粉末X射线衍射图含有约6°、约12°、约13°、约14°、约16°、约18°、约20°、约21°、约22°、约26°、约27°、约29°、约30°、约33°、约35°、约36°、约39°和约41°2θ处的峰。

在一实施例中，药物组合物包括结晶多晶型物，所述结晶多晶型物具有粉末X射线衍射图，所述粉末X射线衍射图含有约8°、约13°、约15°、约17°、约19°、约22°、约23°、约26°、约28°、约29°、约31°、约33°和约37°2θ处的峰，但不包括氮杂-T-dCyd的其它结晶多晶型物。

在一实施例中，药物组合物包括结晶多晶型物，所述结晶多晶型物具有粉末X射线衍射图，所述粉末X射线衍射图含有约6°、约12°、约13°、约14°、约16°、约18°、约20°、约21°、约22°、约26°、约27°、约29°、约30°、约33°、约35°、约36°、约39°和约41°2θ处的峰，但不包括氮杂-T-dCyd的其它结晶多晶型物。

在特定实施例中，所述组合物包括任何方便的药物介质。例如，水、乙二醇、油、醇、调味剂、防腐剂、着色剂等可以用于形成口服液体制剂，如悬浮液、酏剂和溶液；而如淀粉、糖、微晶纤维素、稀释剂、制粒剂、润滑剂、粘合剂、崩解剂等载体可以用于形成口服固体制剂，如粉末、胶囊和片剂。因为易于施用，片剂和胶囊是优选的口服剂量单位，由此采用固体药物载体。任选地，可以通过标准的水性或非水性技术来对片剂进行包衣。

E.使用结晶多晶型物和含有所述结晶多晶型物的组合物的方法

本发明的结晶多晶型物和药物组合物可用于治疗或控制癌症，如血癌(例如，非霍奇金氏淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤、多发性骨髓瘤、白血病、淋巴瘤、骨髓增生异常综合征、急性淋巴细胞白血病、急性骨髓性白血病、慢性淋巴细胞白血病、慢性骨髓性白血病和孤立性骨髓瘤)和实体瘤(例如，胃癌、肾癌、卵巢癌、宫颈癌、子宫癌、前列腺癌、肺癌、结肠癌、乳腺癌、黑色素瘤和胰腺癌)。

为了治疗或控制癌症，将结晶多晶型物和包括所述结晶多晶型物的药物组合物施用于有需要的受试者，如脊椎动物，例如哺乳动物、鱼、鸟、爬行动物或两栖动物。受试者可以是人、非人灵长类动物、马、猪、兔、狗、绵羊、山羊、牛、猫、豚鼠或啮齿动物。所述术语不指示特定年龄或性别。因此，旨在涵盖成人及新生的受试者以及胎儿，无论是男性还是女性。受试者优选地是哺乳动物，如人。在施用结晶多晶型物或组合物之前，可以诊断受试者需要治疗癌症，例如血癌或实体瘤。

结晶多晶型物或组合物可以根据任何方法施用于受试者。此类方法是本领域的技术人员熟知的，并且包含但不限于口服施用、透皮施用、通过吸入施用、鼻腔施用、局部施用、阴道内施用、眼部施用、耳内施用、脑内施用、直肠施用、舌下施用、口腔施用以及肠胃外施用，包含可注射，如静脉内施用、动脉内施用、肌内施用和皮下施用。施用可以是连续的或间歇的。可以治疗性地施用制剂；即，施用制剂以治疗现有疾病或病状。也可以预防性地施用制剂；即，施用以用于预防癌症，如血癌或实体瘤。

结晶多晶型物的治疗有效量或剂量可以在宽限值内变化。调整此类剂量以适应每种特定情况下的个体需要，所述特定情况包含所施用的具体化合物、施用途径、所治疗的病状以及所治疗的患者。通常，在对体重大约70Kg或更多的成年人进行口服或肠胃外施用的情况下，约10mg到约10,000mg、优选地约200mg到约1,000mg的日剂量应该是适当的，但是可能超过上限。日剂量可以作为单个剂量或以分剂量的形式施用，或者对于肠胃外施用作为连续输注施用。单个剂量组合物可以含有化合物或组合物的此类量或其约数以组成每日剂量。在有任何禁忌症的情况下，可以由个别医师调整剂量。剂量可以变化，并且可以以每天一次或多次剂量施用来进行施用，持续一天或数天。

1.治疗方法

本文所公开的结晶多晶型物可用于治疗或控制癌症，如血癌(例如，非霍奇金氏淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤、多发性骨髓瘤、白血病、淋巴瘤、骨髓增生异常综合征、急性淋巴细胞白血病、急性骨髓性白血病、慢性淋巴细胞白血病、慢性骨髓性白血病和孤立性骨髓瘤)和实体瘤(例如，胃癌、肾癌、卵巢癌、宫颈癌、子宫癌、前列腺癌、肺癌、结肠癌、乳腺癌、黑色素瘤和胰腺癌)。因此，提供了一种方法，所述方法包括向受试者施用治疗有效量的所公开的结晶多晶型物，或包括所公开的结晶多晶型物的组合物。在另外的方面，所述方法可以是用于治疗癌症的方法。

a.治疗癌症

本公开提供了使用氮杂-T-dCyd组合物治疗如癌症等疾病的多种方法。在一实施例中，将氮杂-T-dCyd的结晶多晶型物施用于受试者以治疗血癌，其中受试者需要此类治疗。所述组合物可以治疗多种血癌并且在一些实施例中，所述血癌选自由以下组成的组：非霍奇金氏淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤、多发性骨髓瘤、白血病、淋巴瘤、骨髓增生异常综合征、急性淋巴细胞白血病、急性骨髓性白血病、慢性淋巴细胞白血病、慢性骨髓性白血病和孤立性骨髓瘤。在具体实施例中，治疗有效量的氮杂-T-dCyd结晶多晶型物与另外的化疗剂一起施用，如烷化剂、抗代谢物剂、抗赘生物抗生素剂、有丝分裂抑制剂或mTOR抑制剂。

因此，在一实施例中，公开了治疗有需要的受试者的癌症的方法，所述方法包括向受试者施用有效量的结晶多晶型物，所述结晶多晶型物具有粉末X射线衍射图，所述粉末X射线衍射图含有约8°、约13°、约15°、约17°、约19°、约22°、约23°、约26°、约28°、约29°、约31°、约33°和约37°2θ处的峰。

在一实施例中，公开了治疗有需要的受试者的癌症的方法，所述方法包括向受试者施用有效量的结晶多晶型物，所述结晶多晶型物具有粉末X射线衍射图，所述粉末X射线衍射图含有约6°、约12°、约13°、约14°、约16°、约18°、约20°、约21°、约22°、约26°、约27°、约29°、约30°、约33°、约35°、约36°、约39°和约41°2θ处的峰。

在一实施例中，公开了治疗有需要的受试者的癌症的方法，所述方法包括向受试者施用有效量的由结晶多晶型物组成的氮杂-T-dCyd化合物，所述结晶多晶型物具有粉末X射线衍射图，所述粉末X射线衍射图含有约8°、约13°、约15°、约17°、约19°、约22°、约23°、约26°、约28°、约29°、约31°、约33°和约37°2θ处的峰。

在一实施例中，公开了治疗有需要的受试者的癌症的方法，所述方法包括向受试者施用有效量的由结晶多晶型物组成的氮杂-T-dCyd化合物，所述结晶多晶型物具有粉末X射线衍射图，所述粉末X射线衍射图含有约6°、约12°、约13°、约14°、约16°、约18°、约20°、约21°、约22°、约26°、约27°、约29°、约30°、约33°、约35°、约36°、约39°和约41°2θ处的峰。

在一实施例中，癌症是血癌。血癌的实例包含但不限于非霍奇金氏淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤、多发性骨髓瘤、白血病、淋巴瘤、骨髓增生异常综合征、急性淋巴细胞白血病、急性骨髓性白血病、慢性淋巴细胞白血病、慢性骨髓性白血病和孤立性骨髓瘤。

在一实施例中，所述癌症是实体瘤。实体瘤的实例包含但不限于胃癌、肾癌、卵巢癌、宫颈癌、子宫癌、前列腺癌、肺癌、结肠癌、乳腺癌、黑色素瘤和胰腺癌。

在一实施例中，所述有效量是治疗有效量。在另外的实施例中，有效量为约35mg/m

在一实施例中，结晶多晶型物存在于药物组合物中。

在一实施例中，所述方法进一步包括向所述受试者施用化疗剂。

在一实施例中，有效量以单剂量施用。在另外的实施例中，有效量通过多个剂量施用。

在一实施例中，所述方法进一步包括鉴定受试者需要治疗血癌。在另外的实施例中，受试者在施用步骤之前已经被诊断为需要治疗癌症。

在一实施例中，施用是重复施用。在另外的实施例中，施用持续约4天至约6天、约4天至约5天、或约5天至约6天的时间段。在仍另外的实施例中，施用持续约5天的时间段。

在一实施例中，施用通过治疗周期进行。在另外的实施例中，每个治疗周期包含施用所述有效量的所述化合物，持续约4天至约6天的时间段。

在一实施例中，施用通过包括多个治疗周期和多个休息期的疗程进行。在另外的实施例中，每个治疗周期包含施用所述有效量的所述化合物，持续约4天至约6天的时间段。在仍另外的实施例中，每个治疗周期包含施用所述有效量的所述化合物，持续约5天的时间段。在又另外的实施例中，每个休息期包含停止施用所述化合物，持续约1天至约10天的时间段。

在一实施例中，施用通过包括以下的疗程进行：第一治疗周期，所述第一治疗周期包含施用所述有效量的所述结晶多晶型物，持续约4天至约6天的时间段；第一休息期，所述第一休息期包含停止施用所述结晶多晶型物，持续约1天至约3天的时间段；第二治疗周期，所述第二治疗周期包含施用所述有效量的所述结晶多晶型物，持续约4天至约6天的时间段；以及第二休息期，所述第二休息期包含停止施用所述结晶多晶型物，持续至少约8天的时间段。在另外的实施例中，有效量以单剂量施用。在仍另外的实施例中，有效量通过多个剂量施用。在又另外的实施例中，所述有效量在一些天通过单剂量施用，而在其它天通过多剂量施用。

在一实施例中，施用通过包括以下的疗程进行：第一治疗周期，所述第一治疗周期包含施用所述有效量的所述结晶多晶型物，持续约5天的时间段；第一休息期，所述第一休息期包含停止施用所述结晶多晶型物，持续约2天的时间段；第二治疗周期，所述第二治疗周期包含施用所述有效量的所述结晶多晶型物，持续约5天的时间段；以及第二休息期，所述第二休息期包含停止施用所述结晶多晶型物，持续至少约9天的时间段。

在一实施例中，受试者被诊断为患有血癌，其中可以在施用氮杂-T-dCyd的结晶多晶型物之前进行诊断。在一实施例中，氮杂-T-dCyd的结晶多晶型物以单剂量或多个剂量施用。在具体实施例中，氮杂-T-dCyd的结晶多晶型物通过重复施用来施用，如在治疗周期中。在特定实施例中，氮杂-T-dCyd在约4天至约6天的过程中施用。在特定实施例中，通过包括以下的疗程施用氮杂-T-dCyd的结晶多晶型物：第一治疗周期，所述第一治疗周期包括在约4天至约6天的过程中施用所述有效量的所述结晶多晶型物；约1至约3天的第一休息期，在此期间不施用结晶多晶型物；第二治疗周期，所述第二治疗周期包括在约4天至约6天的过程中施用所述有效量的所述结晶多晶型物；以及至少约8天的第二休息期，在此期间不施用结晶多晶型物。在仍另外的实施例中，通过包括以下的疗程施用氮杂-T-dCyd的结晶多晶型物：第一治疗周期，所述第一治疗周期包括在约5天的过程中施用所述有效量的所述结晶多晶型物；约2天的第一休息期，在此期间不施用结晶多晶型物；第二治疗周期，所述第二治疗周期包括在约5天的过程中施用所述有效量的所述结晶多晶型物；以及至少约9天的第二休息期，在此期间不施用结晶多晶型物。

2.化合物和组合物的用途

在一实施例中，本发明涉及所公开的组合物的用途。在另外的实施例中，用途涉及制造用于治疗受试者的血癌的药物。

在一实施例中，用途涉及用于制备用作药物的所公开的药物组合物的方法。

在一实施例中，用途涉及用于制备所公开的药物组合物的方法，其中将药学上可接受的载体与治疗有效量的化合物紧密混合。

在各个实施例中，用途涉及治疗受试者的血癌。在一个实施例中，用途的特征在于，所述受试者是人。在一个实施例中，用途的特征在于，所述血癌是非霍奇金氏淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤、多发性骨髓瘤、白血病、淋巴瘤、骨髓增生异常综合征、急性淋巴细胞白血病、急性骨髓性白血病、慢性淋巴细胞白血病、慢性骨髓性白血病或孤立性骨髓瘤。

在另外的实施例中，用途涉及制造用于治疗受试者的血癌的药物。在一个实施例中，用途的特征在于，所述血癌是非霍奇金氏淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤、多发性骨髓瘤、白血病、淋巴瘤、骨髓增生异常综合征、急性淋巴细胞白血病、急性骨髓性白血病、慢性淋巴细胞白血病、慢性骨髓性白血病或孤立性骨髓瘤。

3.药物的制造

在一实施例中，本发明涉及一种用于制造用于治疗患有血癌的人类受试者的血癌的药物的方法，所述方法包括将治疗有效量的所公开的化合物与药学上可接受的载体或稀释剂组合。

关于这些应用，本方法包含向人施用治疗有效量的组合物。在本发明的上下文中施用于人的剂量应该足以在合理的时间范围内影响人的治疗应答。本领域的技术人员将认识到，剂量将取决于多种因素，所述因素包含人的病状和人的体重。

在典型治疗中施用的本公开的组合物的每日剂量总量，对于小鼠，优选地介于约10mg/kg体重与约1000mg/kg体重之间，并且对于人，介于约100mg/kg体重与约500mg/kg体重之间并且更优选地介于200mg/kg体重与约400mg/kg体重之间。此总量通常但不是必须以一系列较小剂量在约每天一次到约每天三次持续约24个月的时段内，并且优选地在每天两次持续约12个月的时段内施用。

剂量的大小也将通过施用途径、定时和频率以及可能伴随组合物施用的任何不利副作用和期望的生理作用的存在、性质和程度来确定。本领域的技术人员将理解，各种病状或疾病状态，具体地慢性病状或疾病状态，可能需要涉及多次施用的延长治疗。

因此，在一实施例中，本发明涉及药物的制造，所述制造包括将所公开的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物或多晶型物与药学上可接受的载体或稀释剂组合。

4.试剂盒

在一实施例中，公开了试剂盒，所述试剂盒包括有效量的所公开的结晶多晶型物和以下中的一种或多种：(a)至少一种化疗剂；(b)用于施用与治疗癌症有关的组合物的说明书；以及(c)用于治疗癌症的说明书。在另外的实施例中，所述结晶多晶型物具有粉末X射线衍射图，所述粉末X射线衍射图含有约8°、约13°、约15°、约17°、约19°、约22°、约23°、约26°、约28°、约29°、约31°、约33°和约37°2θ处的峰。在仍另外的实施例中，所述结晶多晶型物具有粉末X射线衍射图，所述粉末X射线衍射图含有约6°、约12°、约13°、约14°、约16°、约18°、约20°、约21°、约22°、约26°、约27°、约29°、约30°、约33°、约35°、约36°、约39°和约41°2θ处的峰。

在一实施例中，药剂是化疗剂。化疗剂的实例包含但不限于烷化剂、抗代谢物剂、抗赘生物抗生素剂、有丝分裂抑制剂和mTor抑制剂。

在一实施例中，化疗剂是烷化剂。烷化剂的实例包含但不限于卡铂、顺铂、环磷酰胺、苯丁酸氮芥、美法仑、卡莫司汀、白消安、洛莫司丁、达卡巴嗪、奥沙利铂、异环磷酰胺、氮芥、替莫唑胺、噻替哌、苯达莫司汀和链脲菌素或其药学上可接受的盐。

在一实施例中，化疗剂是抗代谢物剂。抗代谢物剂的实例包含但不限于吉西他滨、5-氟尿嘧啶、卡培他滨、羟基脲、巯嘌呤、培美曲塞、氟达拉滨、奈拉滨、克拉屈滨、氯法拉滨、阿糖胞苷、地西他滨、普拉曲沙、氟尿苷、甲氨蝶呤和硫鸟嘌呤或其药学上可接受的盐。

在一实施例中，化疗剂是抗赘生物抗生素剂。抗赘生物抗生素剂的实例包含但不限于多柔比星、米托蒽醌、博来霉素、柔红霉素、更生霉素(dactinomycin)、表柔比星、伊达比星、普卡霉素、丝裂霉素、喷司他丁和戊柔比星或其药学上可接受的盐。

在一实施例中，化疗剂是有丝分裂抑制剂。有丝分裂抑制剂的实例包含但不限于伊立替康、拓扑替康、鲁比替康、卡巴他赛、多西他赛、紫杉醇、依托泊苷、长春新碱、伊沙匹隆、长春瑞滨、长春碱和替尼泊苷或其药学上可接受的盐。

在一实施例中，化疗剂是mTor抑制剂。mTor抑制剂的实例包含但不限于依维莫司、西罗莫司和替西罗莫司或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物或多晶型物。

在各个实施例中，所述结晶多晶型物与所述药剂共同包装。在各个另外的实施例中，所述结晶多晶型物与所述药剂共同调配。

在各个另外的实施例中，所述结晶多晶型物与所述药剂依次施用。在各个另外的实施例中，所述结晶多晶型物与所述药剂同时施用。

在各个实施例中，不受控制的细胞增殖的病症是癌症。在各个另外的实施例中，癌症是血癌。

提出以下实例以便向所属领域的普通技术人员提供如何制备和评估本文所要求保护的化合物、组合物、制品、装置和/或方法的完整公开和描述，并且旨在单纯作为示例而非意图限制本公开。已努力确保关于数字(例如量、温度等)的准确性，但是应考虑一些误差和偏差。除非另外指明，否则份数为重量份数，温度是以℃为单位或处于环境温度下，并且压力处于或接近大气压。

F.实例

1.制备方法

a.抗溶剂添加

通过将10种不同的溶剂与10种抗溶剂组合来进行抗溶剂结晶实验。抗溶剂结晶实验通过反向添加进行，其中将氮杂-T-dCyd于所选溶剂中的少量近饱和溶液添加到20mL的抗溶剂中，然后将其剧烈搅拌。

将未发生沉淀的样品在5℃下放置3天以诱导沉淀。将沉淀的固体与母液分离，并且在手套箱(20％ RH)中干燥过夜后和在真空(10mbar)下干燥过夜后通过HT-XRPD进行分析。所有固体都暴露于加速老化条件(2天，25℃/60％ RH)并且通过HT-XRPD重新分析。

b.蒸发结晶

对于溶剂混合物的蒸发结晶实验，由结晶起始材料制备新溶液。将溶液转移到小瓶(无盖)中并置于手套箱条件下(20％ RH/室温)以允许溶剂缓慢蒸发，持续3天，然后在室温下抽真空(10mbar)直到所有溶剂蒸发为止。将具有NMP(实验ID ECP43和ECP44)的样品在50℃的真空下进一步干燥。通过HT-XRPD分析获得的固体。随后，将固体在25℃/60％ RH下放置两天(AAC)，并且通过XRPD重新分析。

c.溶剂平衡

溶剂平衡实验在29种溶剂中进行。向约20mg氮杂-T-dCyd中分小步添加溶剂，直到获得稀薄的悬浮液为止。通过将悬浮液在5℃下连续搅拌5天，并且在25℃下连续搅拌1天以达到平衡。

平衡时间(室温下1天和5℃下5天)后，通过离心分离固体。在96孔板上收集和采集固体的一部分，并且在手套箱中干燥(室温下相对湿度为20％)过夜。将剩余的固体在真空下(室温和10mbar)干燥过夜，然后在96孔板上采集。通过HT-XRPD对所有固体进行分析。随后，所有固体都暴露于加速老化条件两天(AAC，25℃/60％ RH)并且通过HT-XRPD重新分析。

d.超声处理

超声处理实验从结晶氮杂-T-dCyd开始。在1.8mL小瓶中称取约20mg API并且添加5-10μL溶剂直到获得糊状物为止。将糊状物在超声波浴(飞世尔科技公司(FisherScientific)，FB15051)中于室温下超声处理10分钟。采集固体并通过HT-XRPD进行分析，并且在真空干燥(10mbar/室温过夜)后重新分析。随后，所有固体都暴露于加速老化条件(25℃/60％ RH)两天并且通过HT-XRPD重新分析。

e.热循环结晶

热循环结晶实验在20种有机溶剂和溶剂混合物中进行。向约25mg氮杂-T-dCyd中添加小等份的溶剂(混合物)，直到在室温下获得稀薄的悬浮液为止。随后，将混合物置于Crystal16

在温度曲线之后，通过离心将固体与溶液分离，一部分在室温下在手套箱(20％RH)中干燥，并且一部分在深真空(10mbar)下干燥，然后采集并通过HT-XRPD进行分析。还蒸发液相并且通过HT-XRPD对回收的固体进行分析。然后将所有固体都暴露于加速老化条件(25℃/60％ RH下2天)，随后进行HT-XRPD重新分析。

f.蒸气扩散

蒸气扩散到溶液中的实验在室温下进行。在1.8mL玻璃小瓶或40mL小瓶中的溶剂中制备氮杂-T-dCyd的近饱和溶液。将含有饱和溶液的开口小瓶放入含有2-5mL抗溶剂的封闭较大的小瓶中。一周后检查样品的固体形成。将固体在手套箱(20％ RH)中干燥后和在真空(10mbar)下干燥后通过HT-XRPD进行分析。如果没有沉淀发生，则在真空下蒸发溶剂并且通过HT-XRPD对所得固体进行分析。随后，所有固体都暴露在加速老化条件下(2天，25℃/60％ RH)并且通过HT-XRPD重新分析。

2.分析方法

a.HT-XRPD

使用Ardena SSR T2高通量XRPD装置获得XRPD图。将板安装在布鲁克(Bruker)通用区域检测器衍射系统(GADDS)上，所述系统配备有对强度和几何变化进行校正的

数据收集是在室温下使用1.5°与41.5°之间的

XRPD分析期间使用的载体材料对X射线是透明的，并且对背景的影响很小。

b.HR-XRPD

HR-XRPD数据是在D8 Advance衍射仪上使用Cu Kα1辐射

c.TGMS分析

通过TGA确定由晶体的溶剂或水分损失引起的质量损失。在TGA/DSC 3+STARe系统(瑞士梅特勒-托利多股份有限公司(Mettler-Toledo GmbH,Switzerland))中加热期间监测样品重量，产生重量与温度曲线和热流热谱图。将TGA/DSC 3+用铟和铝校准温度。将样品(约2mg)称重到100μL铝坩埚中并密封。将密封件打针孔，并且将坩埚在TGA中以10℃/分钟的加热速率从25℃加热到300℃。将干燥N

通过Omnistar GSD 301T2质谱仪(德国普发真空股份有限公司(Pfeiffer VacuumGmbH,Germany))对从TGA样品中逸出的气体进行分析。此MS是四极质谱仪，其对0-200amu范围内的质量进行分析。

d.DSC分析

热事件(即，熔化、再结晶)是从DSC热谱图中获得的，用热通量DSC3+STARe系统(瑞士梅特勒-托利多股份有限公司)记录。将DSC3+使用一小块铟(m.p.＝156.6℃；δHf＝28.45J/g)和锌(m.p.＝419.6℃；δHf＝107.5J/g)校准温度和焓。将样品(约2mg)密封在标准的40μL铝盘中，打针孔并且在DSC中以10℃/分钟的加热速率从25℃加热到300℃。在测量期间，使用50毫升/分钟流速的干燥N

在标准的40μL铝盘中测量循环DSC实验，打针孔并且在DSC中从25℃加热到可变温度，然后冷却回25℃。加热和冷却速率为10℃/分钟。在测量期间，使用50毫升/分钟流速的干燥N2气体吹扫DSC设备。之后回收样品并且通过HT-XRPD进行分析。

e.LCMS

LCMS实验在具有二极管阵列UV检测器和MSD XT单四极杆质量检测器的安捷伦(Agilent)1290系列机器上进行。流动相A和B分别是含10mM乙酸铵的水和乙腈。柱是WatersXBridge HILIC(150×4.6mm；3.5μm，pn.186004441)。检测在244nm处，其中带宽为4nm，UV光谱为200-400nm。以100-800m/z、500毫秒扫描时间的正扫描模式进行光谱法。流速为0.8毫升/分钟。运行时间为10分钟。40℃下的注射体积为5μL，其中自动进样器温度为8℃。

3.实例1：起始材料的表征

制备大约4.0g氮杂-T-dCyd，并且通过X射线粉末衍射(XRPD)、差示扫描量热法(DSC)、热重分析/质谱法(TGMS)分析和液相色谱法/质谱法(LCMS)进行分析。起始材料(SM)表示尚未经受特定结晶条件的氮杂-T-dCyd。图1示出了分别在上部图和下部图中的高通量XRPD(HT-XRPD)和高分辨率XRPD(HR-XRPD)。起始材料含有适用于单晶结构分析的晶体。起始材料在非中心对称单斜晶系P2

表1.

将起始材料的HR-XRPD图与单晶形式A的模拟图HR-XRPD图进行比较并且示出于图2。形式A具有7.7°、13.02°、15.34°、16.78°、18.62°、19.42°、21.94°、22.90°、25.70°、27.86°、28.70°、31.42°、32.70°和37.46°2θ处的峰。基于此比较，起始材料经计算包括约70％的形式A和约30％的其它结晶形式的氮杂-T-dCyd。

起始材料在25-300℃(10℃/分钟)之间的TGMS分析表明，在100-170℃之间质量损失为11.7％，这最有可能是因为有机溶剂(图3)。在质量损失的同时，热流信号示出了两个吸热事件，其中中间有放热事件。由于熔化和开始分解，观察到在195℃左右的第三个吸热事件。

起始材料在25-300℃(10℃/分钟)之间的DSC分析与TGMS分析期间观察到的热流信号一致，并且示出在131℃和162℃下的两个吸热事件以及在141℃下的放热事件。观察到在196.4℃下T

从XRPD和单晶结构分析中发现，起始材料由结晶相的混合物组成。为了进一步研究热事件的性质，对起始材料进行了两次循环DSC实验。将一份样品加热到170℃并且冷却回室温。通过XRPD对所获得的固体进行分析并且与形式A的模拟图相匹配(图5)。在第二个循环DSC实验中，将起始材料加热到170℃，冷却到25℃，然后加热到300℃(图6)。在冷却期间没有观察到热事件，并且在第二个加热循环中仅观察到在194℃下的吸热熔化事件，证实了形式A的熔化温度。

氮杂-T-dCyd的化学纯度通过LCMS分析评估。分析证实了化学纯度为99.8％(面积％)(图7A和图7B)。MS谱(正扫描模式)示出了可以属于物种[2M+H]

氮杂-T-dCyd在4.4分钟时从柱中洗脱，并且m/z为489.3[2M+H]

确定了氮杂-T-dCyd的化学稳定性。氮杂-T-dCyd在1,4-二噁烷、乙腈(ACN)、异丙醇(IPA)和甲基乙基酮中制备。将每种溶液分成3个小瓶，并且在室温下温育24小时，在50℃下温育1小时，或在80℃下温育1小时。在温育时间开始和之后通过HPLC对溶液进行分析。

结果以图形方式呈现于图9。在T

在5℃下进行了另外的稳定性测试。在水、乙腈、乙醇(EtOH)和异丙醇中制备起始材料的悬浮液。在3天内以规则间隔通过HPLC对悬浮液的母液和水溶液进行分析。

结果以图形方式呈现于图10。氮杂-T-dCyd的纯度以面积％对时间作图。数据点是从同一溶液的单个测量中获得的。氮杂-T-dCyd在乙醇和IPA中保持稳定70小时，而在乙腈和水中，氮杂-T-dCyd纯度随时间推移分别下降到84％和78％。

还在72小时后评估悬浮液的固相的纯度。从四种溶剂中回收的固体具有约99％(面积％)的纯度。参见表2。因此，在5℃下温育70小时后，氮杂-T-dCyd在固相中表现出化学稳定性。

表2.

4.实例2：无定形材料的生产

通过氮杂-T-dCyd的冷冻干燥溶液，尝试从用于多晶型物筛选的起始材料产生无定形材料。为了获得有机溶剂中的氮杂-T-dCyd溶液用于冷冻干燥实验，将氮杂-T-dCyd添加到水、水/1,4-二噁烷(50/50)、水/THF(50/50)和水/叔丁醇(50/50％(v/v))中。冷冻干燥氮杂-T-dCyd溶液导致含有杂质的不良结晶材料。

5.实例3：溶解度研究

氮杂-T-dCyd的热力学溶解度根据摇瓶法测定。在25种纯溶剂中制备结晶氮杂-T-dCyd的悬浮液。将小等份的溶剂添加到氮杂-T-dCyd中，直到获得稀薄的悬浮液为止。随后，在连续搅拌下将样品在室温下平衡24小时。平衡后，过滤一小等份母液并且通过HPLC进行分析。根据氮杂-T-dCyd的校准曲线确定溶质的浓度。根据美国药典的分类(USP29)，氮杂-T-dCyd在室温下的溶解度值列于表3中。氮杂-T-dCyd可溶于如DMF和DMA等高沸点溶剂。通常，氮杂-T-dCyd在极性溶剂中微溶或非常微溶，并且在非极性溶剂中几乎不溶。

表3.

6.实例4：多晶型物筛选

通过将6种不同的结晶技术与一系列纯有机溶剂和溶剂混合物组合来进行多晶型物筛选。考虑到氮杂-T-dCyd在溶液中的热稳定性差以及氮杂-T-dCyd在水和酮中的稳定性有限，选择筛选实验的条件使得：(1)实验以结晶起始材料开始；(2)化合物在溶液中停留有限时间(<5天)；(3)避免高温(<50℃)；(4)固体氮杂-T-dCyd在干燥条件下(相对湿度约20％)在手套箱中处理以尽可能避免吸收水分；(5)避免水，并且限制酮的使用；并且(6)使应力条件温和以评估所获得的固体的物理稳定性。

应用以下结晶技术：

溶剂平衡实验.溶剂平衡实验在两个温度下进行：室温1天并且5℃5天。用不同溶剂中的结晶起始材料制备氮杂-T-dCyd的悬浮液，并且平衡时间结束后，将固体与母液分离。

蒸发结晶实验.使用从在室温下进行的溶剂平衡实验和从溶剂混合物中回收的过滤母液建立蒸发结晶实验。在环境条件下缓慢蒸发溶剂，随后在50℃下在真空(10mbar)下进一步干燥。

抗溶剂实验.使用10种溶剂和抗溶剂的组合通过反向添加进行抗溶剂实验：将少量高度浓缩的氮杂-T-dCyd溶液添加到20mL抗溶剂中(一个步骤)。

热循环实验.通过在室温下在不同溶剂和溶剂混合物中制备氮杂-T-dCyd悬浮液来进行热循环实验。使所得悬浮液经受5与50℃之间的温度曲线。

超声处理实验.通过在存在少量溶剂的情况下对结晶起始材料进行超声处理来进行超声处理实验。

蒸气扩散到溶液中实验.蒸气扩散到溶液中实验是作为缓慢的抗溶剂结晶方法进行的。将饱和的氮杂-T-dCyd溶液在室温下暴露于抗溶剂蒸气中一周。

在室温和20％相对湿度下在手套箱中干燥过夜后并且在室温下在真空(10mbar)下干燥过夜后，通过HT-XRPD对所有所获得的固体进行分析。如果回收母液，则蒸发母液(ML)并且通过HT-XRPD对回收的固体进行分析。随后，所有固体都暴露于加速老化条件(25℃/60％ RH)两天并且然后通过HT-XRPD重新分析。

形式A是从筛选实验中回收的最丰富的结晶相。这种形式是从所有结晶方法和各种溶剂和溶剂混合物中发现的。从溶剂平衡实验中观察到，形式A从氮杂-T-dCyd微溶或非常微溶的溶剂中获得作为纯相。

在一些固体中，除了形式A的XRPD图之外，还检测到已在接收到的起始材料中观察到的峰的存在并且在上文进行了描述。接收到的氮杂-T-dCyd批次含有70％的形式A和30％的其它结晶相。XRPD图中16.0°、17.6°、24.8°、26.3°和34.1°2θ处出现的峰最清楚地突出了30％的其它相的存在。通过评估从多晶型物筛选实验中回收的固体，尝试对此类杂质峰进行分配和分类。起始材料、形式A、形式B、形式A+C1、形式A+C2、形式A+D1和形式A+D2的XRPD图概览示出于图11。

在26.3°2θ处的峰属于形式B。在16.0°2θ处观察到的峰表示形式C1，并且在16.0和17.6°2θ处的峰归属于形式C2。在24.8°2θ处观察到的峰归属于形式D1，并且在24.8和34.1°2θ处的峰归属于形式D2。基于此分配，一些固体被分类为形式A+D1/D2、A+C1/C2或A+B+D2。

通过DMA和DMF中的溶剂平衡(在室温下和在5℃下)并且还从DMSO/2-乙基-1-己醇(50/50)中的热循环实验获得形式B作为纯相。形式B在物理上不稳定，并且在25℃、60％相对湿度下储存后会转化为形式A。

C类和D类从未作为纯结晶相观察到，但总是与形式A混合。在大多数情况下，这些混合物在25℃、60％相对湿度下储存后会转化为形式A。

从基于溶液的结晶方法中发现了新型形式，其中不存在形式A的晶种。这些新型形式被分类为形式E、F、G1、G2、H、I、J、K。形式E是通过在DMA/氯仿中添加抗溶剂或从DMA/TBME(80/20)中蒸发结晶获得的。形式E在25℃、60％相对湿度下储存后会转化为形式A。

形式F是通过在各种溶剂中的蒸气扩散或蒸发结晶获得的。形式F物理上稳定。形式F的峰是6.06°、12.10°、13.02°、14.38°、15.94°、17.50°、19.62°、21.18°、22.34°、26.18°、27.42°、28.50°、29.90°、32.66°、35.02°、36.30°、38.94°和41.06°2θ。

形式G1和G2具有类似的XRPD图，其中一些峰在两种形式之间转换。形式G1是从抗溶剂添加或超声处理获得的。形式G2是使用DMA/EtOH从蒸发结晶获得的。形式G1和形式G2在25℃、60％相对湿度下储存后会转化为形式A。

形式H从在若干种溶剂混合物中的蒸发结晶获得。这种形式不稳定。当从NMP获得时，形式H转化为形式F。当从其它溶剂获得时，形式H转化为形式A。

形式I是由DMSO/IPA从蒸发结晶获得的。形式I在25℃、60％相对湿度下储存后会转化为形式A。

形式J是使用DMF作为溶剂和THF作为抗溶剂从蒸气扩散到溶液中获得的。形式J在25℃、60％相对湿度下储存后会转化为形式A。

在从DMF中蒸发结晶后，观察到形式K与形式F的混合物。形式K在25℃、60％相对湿度下储存后会转化为形式F。

在25℃和65％相对湿度下储存后，在固体中观察到形式L。

这些新型形式中每种新型形式的XRPD图示出于图12。

7.实例5：氮杂-T-DCYD的新型形式的表征

通过TGMS和LCMS进一步表征筛选中识别的每种独特形式。形式A和F似乎是无水的，而其它形式是溶剂化的。表4汇总了氮杂-T-dCyd的所描述形式的结晶条件(AAC表示在25℃，60％相对湿度下的存储)。表5汇总了各种氮杂-T-dCyd形式的特性(AAC表示在25℃，60％相对湿度下的存储)。

表4.

表5.

从在室温下在TFE中进行的溶剂平衡实验获得的形式A用于分析表征。TGMS结果示出了在30–190℃的温度范围内释放约0.7％的残留溶剂(图12A)。由于熔化和分解，观察到在205℃下在DSC迹线中的吸热事件(图12B)。LCMS分析证实了形式A的完整性，其中纯度为100％(面积％)(图12C)。

使用DMF/乙腈(80/20，v/v)从蒸发结晶实验中获得的形式F用于表征。TGMS结果示出在30与140℃之间有1.1％的小损失，这很可能是由于残留溶剂(图15A)。由于熔化和分解，DSC迹线示出在170℃左右的一个吸热事件(图15B)。LCMS分析证实了API的完整性，其中纯度为100％(面积％)(图15C)。

形式A具有比形式F更高的熔化温度，并且可以被认为是热力学更稳定的形式。形式A和形式F都是无水的。

形式B、C2、D2、E、G1、G2、H、I、J和K在25℃、60％相对湿度下储存两天后，各自溶剂化并转化为形式A。

进一步表征了在室温下在DMA中从溶剂平衡实验获得的形式B。TGMS结果示出了加热时的逐渐质量损失，其中在30与170℃之间质量损失25.0％。由于加热时的逐渐质量损失，分解开始的温度尚不清楚。形式B可能是可以用不同的溶剂形成的非化学计量溶剂化物。LCMS分析示出固体纯度为97.3％氮杂-T-dCyd并且存在2.7％(面积％)的杂质。

形式C2表示在与其它形式的混合物的XRPD图中观察到的两个另外的峰。TGMS分析示出了在30–160℃的温度范围内质量损失为0.7％。热流信号示出了190℃左右仅有一个吸热事件，这可能与形式A的熔化和分解有关。由于在与形式A的混合物中，形式C2仅以痕量存在，因此关于形式C2的研究不确定，因此此形式的性质仍不清楚。然而，它似乎是氮杂-T-dCyd的真正(伪)多晶型物，因为整个固体样品的化学纯度为100％(面积％)。

形式D2表示在与形式A的混合物的XRPD图中观察到的两个另外的峰。形式A+D2的TGMS分析示出了形式D2很可能是溶剂化形式。在90与170℃之间观察到5.1％的质量损失。所述结果对于释放的溶剂不确定。对所述形式的混合物的LCMS分析证实了氮杂-T-dCyd的完整性，其中化学纯度为100％(面积％)。

通过TGMS和LCMS对从使用DMA的蒸发结晶实验获得的形式E进行进一步分析。TGMS结果示出DMA的质量损失为25.8％，这对应于1摩尔当量的溶剂。溶剂在90与160℃之间以逐步方式释放，表明形式E是单DMA溶剂化物。去溶剂化后，记录200℃下的吸热事件，这很可能对应于形式A的熔化。化合物的完整性通过LCMS分析得到证实。

G类是溶剂化物的同构类。通过TGMS和LCMS进一步表征形式G1和G2。LCMS分析证实了化合物完整性(面积％为100％)。从使用NMP和环己烷的抗溶剂添加实验中获得的形式G1用于表征。TGMS结果示出在90与160℃之间以逐步方式的质量损失27.5％。27.5％的质量损失对应于每个氮杂-T-dCyd分子约1个NMP分子，因此形式G1可以是单NMP溶剂化物。由于溶剂损失，DSC信号记录了110和150℃左右的两个吸热事件以及200℃下的第三个吸热事件，这可以对应于形式A的熔化。形式G2是通过DMA/乙醇80/20(v/v)从蒸发结晶获得的。在70与120℃之间通过TGMS观察到的14.6％的质量损失对应于0.5摩尔当量的DMA。这表明形式G2可以是半DMA溶剂化物。在DSC信号中，由于溶剂损失，观察到在80和90℃左右的两个吸热事件，并且由于熔化和分解，观察到在195℃左右的第三个吸热事件。

通过NMP/THF(80/20，v/v)从蒸发结晶获得的形式H用于表征形式H。通过TGMS分析观察到的逐渐质量损失在30与180℃之间为15.3％，对应于约0.5摩尔当量的NMP。同时，观察到在130℃左右的广泛的吸热事件。在使用不同溶剂的实验中观察到形式H，因此很可能是非化学计量溶剂化物，其可以在其晶体结构中并入不同的溶剂分子。在220℃左右，由于分解，观察到在DSC迹线中的第二个广泛的吸热事件。根据TGMS数据，不清楚溶剂损失在哪里结束并且热分解从哪里开始；所述事件可能部分重叠。为了获得干燥样品，固体必须在50℃下在真空下干燥24小时。这可能影响了纯度，因为LCMS数据表明所述固体的纯度为82％(面积％)。

形式I是通过DMSO/IPA(80/20，v/v)从蒸发结晶获得的。TGMS数据示出在30与170℃之间14.7％的逐渐质量损失。14.7％的质量损失对应于约0.5摩尔当量的DMSO。形式I可以是半DMSO溶剂化物。由于质量损失，DSC迹线示出在70℃和110℃下的两个广泛的吸热事件以及由于熔化和分解过程在190℃左右的第三个吸热事件。

使用DMF和THF通过蒸气扩散到溶液中沉淀形式J，并且进一步表征。TGMS数据示出THF在120与170℃之间以逐步方式的7.6％的质量损失。质量损失对应于约0.3摩尔当量的THF，因此形式J很可能是非化学计量溶剂化物。由于溶剂损失，DSC迹线记录了在120和150℃下的两个吸热事件，并且记录了在200℃下的第三个吸热事件，与形式A的熔化/分解事件相匹配。

在与形式F的混合物中观察到形式K一次，并且是通过从DMF溶液中蒸发获得的。进一步表征混合物。TGMS分析示出在30与160℃之间有6.3％的质量损失，这可能是由于DMF的损失。质量损失伴随着110℃左右的小吸热事件。观察到在180和195℃下的两个大吸热事件。195℃下的吸热可能是由于形式A的熔化和分解。由于形式K处于与形式F(非溶剂化形式)的混合物中，因此形式K很可能是溶剂化形式。

形式L是不良结晶固体，其仅在25℃、60％相对湿度下和非常低的产率下储存后才观察到。在TGMS分析中，在30与170℃之间观察到2.8％的质量损失，随后发生分解。DSC迹线中缺少热事件可能是由于用于分析的样品量少。不确定质量损失是否由于困在晶体结构中的溶剂或是否由于它是残留溶剂。无法进行进一步表征，因此形式L的性质仍不清楚。

尝试从氮杂-T-dCyd于乙腈的溶液中生长单晶而获得的晶体似乎是乙腈溶剂化物。在筛选实验中的任何筛选实验中没有观察到此相。溶剂化物在单斜晶系P2

8.实例6：氮杂-T-DCYD的药代动力学特性

氮杂T-dCyd(起始材料；SM；氮杂-T-dCyd尚未经受特定结晶条件)的药代动力学特性研究如下。

将氮杂-T-dCyd起始材料(SM)施用于分成四组的六只雌性NOD-SCID小鼠。第1组是媒剂对照组。在第2组中，每天一次施用2.0mg/kg的氮杂-T-dCyd起始材料(SM)，并且在第3组中，每天两次施用1.0mg/kg的氮杂-T-dCyd起始材料(SM)。在第2组和第3组中，以上述量施用氮杂-T-dCyd起始材料(SM)5天，随后2天作为休息期，并且再次施用另外5天，随后9天作为另一个休息期。重复此循环。在第4组中，每天一次施用1.0mg/kg氮杂-T-dCyd起始材料(SM)，持续五天，随后2天作为休息期，并且重复此循环。使用荧光剂测量小鼠体内的肿瘤大小，并且获得结果，如图17所示。

如图17所示，第1组(媒剂对照组)的肿瘤大小增加。另外，证实了在第2组中肿瘤大小的增加被最大程度地抑制。相比之下，虽然预计第3组中SM的AUC与第2组中SM的AUC相同，但观察到在施用40天后肿瘤大小急剧增加。由上发现氮杂-T-dCyd是Cmax依赖性的，而不是AUC依赖性的。

另外，如展示了第43天的结果的图18所示，第2组(2.0mg/kg，每天一次)的肿瘤大小显著小于第1组(1.0mg/kg，每天两次)。

此外，在用氮杂-T-dCyd起始材料(SM)处理血癌细胞(Mv4-11)后1小时、2小时和4小时测量半数最大抑制浓度(IC

因此，上述数据表明，本公开中具有良好溶解曲线的结晶多晶型物如形式A或形式F优于氮杂-T-dCyd起始材料(SM)和具有较差溶解曲线的其它结晶多晶型物。另外，出于同样的原因，上述数据表明，本公开的结晶多晶型物如形式A或形式F示出比氮杂-T-dCyd起始材料(SM)或其它结晶多晶型物改善的PK曲线。

9.实例7：形式A和形式B在不同PH点的溶解速率曲线

测量形式A和形式B在pH 1.2、pH 6.5和pH 5.0下的溶解速率，并且列于表6和图20-22中。

表6.

-SGF：模拟胃肠液

-FaSSIF：禁食状态模拟肠液

-FeSSIF：进食状态模拟肠液

如表6和图20-22所示，在pH 1.2(胃和大肠的pH条件)下，形式A和形式F示出类似的溶解速率，而形式A与形式F相比示出更一致的溶解速率曲线。在pH 6.5和pH 5(阑尾和小肠的pH条件)下，形式F示出比形式A更高的溶解速率。

以上表明，形式A可以制备成各种药物形式，其目标是在约pH 1.2(例如，胃或大肠)下释放药物的活性成分。另外，以上表明，形式F可以以各种药物形式制备，其目标是在约pH 5.0到6.5(例如，小肠)下释放药物的活性成分。

10.实例8：氮杂-T-DC

氮杂T-dCyd(起始材料；SM；氮杂-T-dCyd尚未经受特定结晶条件)、形式A和形式F的药代动力学特性研究如下。

氮杂-T-dCyd起始材料(SM)、形式A和形式F中的每一种以胶囊形式制备，其中每一种与微晶纤维素以8:92(w/w)混合，并且可以以2mg/kg的SM、形式A或形式F向大鼠施用。以2mg/kg剂量向两只雄性SD大鼠(即，总共六只雄性SD大鼠)施用SM胶囊、形式A胶囊和形式F胶囊中的每一种。在施用胶囊后0.25、0.5、1、2、4、6、8和24小时测量受试SD大鼠各SM、形式A和形式F的血浆浓度，如表7-9所示。

表7.

表8.

表9.

另外，获得药代动力学参数，如下表10-12所示。

表10.

表11

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表12

如上所示，与SM相比，形式A和形式F均示出更大的C

11.实例9：氮杂-T-DCYD起始材料和形式A的半数最大抑制浓度(IC

将K562和HL-60细胞系在37℃、95％空气和5％ CO

如图23和图24所示，形式A示出比SM低约5％的IC

前述对实施例的描述是出于展示和描述的目的提供的。其并不旨在是详尽的或限制本公开内容。特定实施例的单独要素或特征通常不限于所述特定实施例，但在可适用的情况下是可互换的，并且可以用于所选实施例中，即使没有具体地示出或描述。相同情况也可以以许多方式进行改变。此类变化不会被视为脱离本公开，并且所有此类修改旨在包含于本公开的范围内。