一种陈皮陈化年份的鉴定方法

技术领域：

本发明涉及陈皮分析检测技术领域，具体涉及一种陈皮陈化年份的鉴定方法。

背景技术：

陈皮(Pericarpium Citri Reticulatae)是芸香科植物橘(Citrus reticulateBlanco)及其栽培变种的干燥成熟果皮，是广东道地药材，位居“广东三宝”之首。《绍兴本草》曾报道“唯橘皮以陈久者佳”，中医理论也认为随着陈皮贮藏年限的增加，其药用价值更高。由于高年份的陈皮价格高昂，导致不法商人以次充好，利用新陈皮做旧冒充老陈皮，扰乱了陈皮市场，阻碍了陈皮产业发展。因此，对陈皮的贮存年限进行判别和鉴定，具有重要的实际应用价值和意义。

陈皮存放过程中，在氧气、光照与微生物的作用下，陈皮内在化学成分发生变化。国内外已有针对不同年份陈皮的化学成分变化主要针对挥发油及黄酮类药效成分的研究较多，试图通过目标物的绝对定量确定陈皮年份。但是，陈皮样品由于其产地、种类、保存方式的不同，相同陈化年份的陈皮中化学成分含量差异较大，使用绝对定量方法无法准确评价陈皮年份。急需建立一种能够准确鉴定陈皮陈化年份的检测方法。

发明内容：

本发明的目的是提供一种陈皮陈化年份的鉴定方法，解决了因相同陈化年份的陈皮中化学成分含量差异较大导致绝对定量方法无法准确鉴定陈皮年份的难题。

本发明是通过以下技术方案予以实现的：

一种陈皮陈化年份的鉴定方法，用高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱对陈皮的甲醇提取溶液进行全扫描分析，从一级总离子色谱图中提取精确离子m/z:375.1438，得到5-羟基-2-(3-羟基-4,5-二甲氧基苯基)-7,8-二甲氧基-4H-1-苯并吡喃-4-酮及其同分异构体(C

A

该方法具体包括以下步骤：

S1：称取定量陈皮样品于锥形瓶中，加入50-80wt％甲醇，称重，超声提取30min，加入50-80wt％甲醇补重，滤膜过滤，装瓶；

S2：采用高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱对步骤S1得到的溶液进行全扫描分析，从一级总离子色谱图中提取精确离子m/z:375.1438，得到5-羟基-2-(3-羟基-4,5-二甲氧基苯基)-7,8-二甲氧基-4H-1-苯并吡喃-4-酮及其同分异构体共6个色谱峰，记录这6个色谱峰的峰面积的转化规律，构建陈化年份的计算公式，如下：

Y＝(S-0.022)/0.117，对陈皮年份进行鉴定；其中，Y为陈化年份，S为转化因子，，

A

发明人发现，5-羟基-2-(3-羟基-4,5-二甲氧基苯基)-7,8-二甲氧基-4H-1-苯并吡喃-4-酮(K1)及其5个同分异构体(K2-K6)中，K1、K2、K3含量随着陈化年份的增加逐渐降低，K4、K5、K6含量随着陈化年份的增加逐渐升高。3对同分异构体的相对含量随陈化时间的增加发生规律性的变化。增加成分含量与降低成分含量的比值(转化因子(S)：

所述的高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱中色谱条件：采用Agilent RRHD C

优选地，流动相梯度为：0～5min:10％B；5～20min:10-25％B；20～30min:25-40％B；30～40min:40-70％B；40～42min:70-95％B；42～47min:95％B；47.1～50min:10％B。

质谱条件：Agilent Dual AJS ESI离子源，正离子扫描；干燥气(N

所述陈皮的陈化方式为自然陈化。

本发明的有益效果如下：

(1)本发明发现了6个同分异构体可用于不同陈化年份陈皮鉴定的化合物；

(2)本发明明确了6个共3对同分异构体在陈化过程中的转化规律，建立了转化因子与年份的线性关系模型，可用于鉴定不同陈化年份陈皮；

(3)本方法采用同一样品转化产物与原型化合物峰面积的比值进行计算，降低了因生物样品的个体差异以及因操作引起的误差，同时不需要计算化合物在样品中的绝对含量，方法准确快速。

总之，本发明发现了陈皮中5-羟基-2-(3-羟基-4,5-二甲氧基苯基)-7,8-二甲氧基-4H-1-苯并吡喃-4-酮的3对同分异构体的相对含量随陈化时间的增加发生规律性的变化，采用高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱对陈皮的甲醇提取溶液进行全扫描分析，从一级总离子色谱图中提取精确离子m/z:375.1438，得到5-羟基-2-(3-羟基-4,5-二甲氧基苯基)-7,8-二甲氧基-4H-1-苯并吡喃-4-酮及其同分异构体共6个色谱峰，通过先后出现的这6个色谱峰的峰面积的转化规律构建与陈化年份的线性关系模型，从而构建陈化年份计算方法，可用于鉴定不同陈化年份陈皮，降低了因生物样品的个体差异以及因操作引起的误差，方法准确快速，克服了同样陈化年份的陈皮中化学成分含量差异较大导致绝对定量方法无法准确评价陈皮年份的难题。

附图说明：

图1是陈皮的甲醇提取溶液5-羟基-2-(3-羟基-4,5-二甲氧基苯基)-7,8-二甲氧基-4H-1-苯并吡喃-4-酮及其同分异构体的提取离子色谱图；

图2是转化因子与陈化年份的关系图。

具体实施方式：

以下是对本发明的进一步说明，而不是对本发明的限制。

(1)仪器和试剂

高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱：Agilent 1290-6540B(美国安捷伦公司)，赛多利斯TP-114电子天平(美国Sartorious公司)。

甲醇(分析纯，广州化学试剂厂)，甲酸、乙腈(色谱纯，美国默克公司)，水为二次蒸馏水。

(2)陈皮样品的前处理

称取0.2g粉碎、过筛的陈皮样品于锥形瓶中，加入70％甲醇，称重，超声提取30min，70％甲醇补重，滤膜过滤，装瓶；

(3)高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱仪器方法

色谱条件：色谱柱Agilent RRHD C

质谱条件：Agilent Dual AJS ESI离子源，正离子扫描；干燥气(N

采用以上条件对2014年到2021年的12份陈皮样品进行全扫描分析，从一级总离子色谱图中提取精确离子m/z:375.1438，得到5-羟基-2-(3-羟基-4,5-二甲氧基苯基)-7,8-二甲氧基-4H-1-苯并吡喃-4-酮(K1)及其同分异构体(K2-K6)共6个色谱峰(图1)，记录这6个色谱峰的峰面积的转化规律，构建陈化年份的计算公式，如下：

Y＝(S-0.022)/0.117，对陈皮年份进行鉴定；其中，Y为陈化年份，S为转化因子，

A

目标物峰面积与计算的陈化年份见表1。从结果可知，除10号样品外，通过建立的模型计算预测的陈化年份与实际陈化年份的差值均在±1的范围内，证明了该方法对陈皮年份鉴定的准确性。

表1不同年份陈皮样品陈化年份预测结果

以上仅是本发明的优选实施方式，应当指出的是，上述优选实施方式不应视为对本发明的限制，本发明的保护范围应当以权利要求所限定的范围为准。对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明的精神和范围内，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。