一种硫酸阿米卡星注射液的质量检测方法

技术领域

本发明属于药物质量控制技术领域，具体涉及一种硫酸阿米卡星注射液的质量检测方法。

背景技术

硫酸阿米卡星注射液是一种广谱抗生素，主要用于治疗严重的细菌感染，包括败血症、感染性休克、中枢神经系统感染、肾功能衰竭等。硫酸阿米卡星的主要成分阿米卡星，能够抑制细菌的蛋白质合成，从而破坏细菌的细胞壁，达到杀菌效果。这种药物对某些对其他抗生素耐药的细菌具有高效、低毒的特性，尤其对肠杆菌、绿脓杆菌等具有强大的抗菌作用。

硫酸阿米卡星注射液通常含有杂质A、杂质B、杂质E、杂质F、杂质H，具体结构式如下：

杂质A：

杂质B：

杂质E：

杂质F：

杂质H：

为了保证硫酸阿米卡星注射液的药品治疗，在生产过程中对于硫酸阿米卡星注射液有必要进行质量检测。《中国药典》中规定了对于硫酸阿米卡星注射液的质量检测方法，其中包括对杂质A、杂质E和杂质F的检测。由于杂质B具有与杂质A、杂质E和杂质F非常相似的官能团，因此，可以推测杂质B也可能具有与杂质A、杂质E和杂质F相似的毒性。然而，实际应用发现，《中国药典》中公开的方法并不能够对杂质B进行很好的分离，这对于全面控制硫酸阿米卡星注射液的治疗不利。因此，本领域亟需开发新的硫酸阿米卡星注射液的检测方法，实现对杂质B的分离和检测。

发明内容

针对现有技术的问题，本发明提供一种硫酸阿米卡星注射液的质量检测方法。

一种硫酸阿米卡星注射液的质量检测方法，包括如下步骤：

步骤1，稀释硫酸阿米卡星注射液，得到供试品溶液；

步骤2，采用HPLC检测所述供试品溶液，得到HPLC图谱；

其中，色谱条件为：

流动相的选择为：以磷酸盐缓冲液、磷酸溶液和乙腈按照体积比946:(10-100):(45-50)配制成流动相A，所述流动相A使用所述磷酸溶液调节pH为3.90-4.10；以磷酸盐缓冲液和乙腈按照体积比900:(95-100)配制成流动相B；

色谱柱为C18柱。

优选的，所述流动相的选择为：以磷酸盐缓冲液、磷酸溶液和乙腈按照体积比946:100: 50配制成流动相A，所述流动相A使用所述磷酸溶液调节pH为4.0；以磷酸盐缓冲液和乙腈按照体积比900:100配制成流动相B。

优选的，所述流动相A中，磷酸盐缓冲液的配制方法为： 0.15-0.25mol/L磷酸二氢钾溶液，用0.15-0.25mol/L磷酸溶液调节pH值至3.0，并加入18-20倍量的水进行稀释；

所述流动相B中，磷酸盐缓冲液的配制方法为：0.15-0.25mol/L磷酸二氢钾溶液，用0.15-0.25mol/L磷酸溶液调节pH值至3.0，并加入稀释16-18倍量的水进行稀释。

优选的，所述流动相A中，磷酸盐缓冲液的配制方法为：0.2mol/L磷酸二氢钾溶液，用0.2mol/L磷酸溶液调节pH值至3.0，并加入稀释19.57倍量的水进行稀释；

所述流动相B中，磷酸盐缓冲液的配制方法为：0.2mol/L磷酸二氢钾溶液，用0.2mol/L磷酸溶液调节pH值至3.0，并加入稀释17倍量的水进行稀释。

优选的，所述流动相A中，还包括浓度为1.7-1.9 g/L的辛烷磺酸钠和19-21g/L的硫酸钠；

所述流动相B中，还包括浓度为1.7-1.9 g/L的辛烷磺酸钠和19-21 g/L的硫酸钠。

优选的，所述流动相A中，还包括浓度为1.807 g/L的辛烷磺酸钠和20.08 g/L的硫酸钠；

所述流动相B中，还包括浓度为1.8 g/L的辛烷磺酸钠和20 g/L的硫酸钠。

优选的，所述色谱柱选自Spursil柱，4.6mm×250mm，5μm。

优选的，所述色谱条件还包括：洗脱方式为线性梯度洗脱，洗脱梯度为：0-30 min，50%-50% 流动相A；30-60 min，50%-0% 流动相A；60-70 min， 0%-0% 流动相A；70-71 min，0%-50% 流动相A；71-100 min， 50%-50% 流动相A。

优选的，所述色谱条件还包括：流速为每分钟1.3-1.5ml；柱温为35-40℃；检测波长为200nm；进样体积10-20μl。

优选的，所述供试品溶液通过采用流动相A稀释硫酸阿米卡星注射液得到。

本发明对现有技术中硫酸阿米卡星注射液的HPLC检测条件进行了优化，最终发现通过优化流动相的pH，能够将杂质B从硫酸阿米卡星注射液中分离出来，实现准确的检测。本发明完善了硫酸阿米卡星注射液的质量检测方法，有利于保障硫酸阿米卡星注射液的产品质量，具有很好的应用前景。

显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。

以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。

附图说明

图1为实施例1中得到的硫酸阿米卡星注射液HPLC图谱。

图2为实施例1中得到的硫酸阿米卡星注射液HPLC图谱的局部放大图。

图3为对比例1中得到的硫酸阿米卡星注射液HPLC图谱。

图4为对比例2中得到的硫酸阿米卡星注射液HPLC图谱。

具体实施方式

以下实施例和实验例中，所用的试剂和原料均为市售品。

实施例1 硫酸阿米卡星注射液的质量检测方法

本实施例的检测方法包括如下步骤：

步骤1，采用流动相A稀释硫酸阿米卡星注射液，得到供试品溶液；每1ml供试品溶液中含有5.0mg硫酸阿米卡星注射液；

步骤2，采用HPLC检测所述供试品溶液，得到HPLC图谱；

其中，色谱条件为：

用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（Spursil柱，4.6mm×250mm，5μm）；取辛烷磺酸钠1.8g和无水硫酸钠20.0g，加pH3.0的0.2mol/L磷酸盐缓冲液（配制方法为：0.2mol/L磷酸二氢钾溶液，用0.2mol/L磷酸溶液调节pH值至3.0）46ml和水900ml溶解，加乙腈50ml，混匀，作为流动相A（使用100ml 0.2mol/L磷酸溶液调整流动相A pH为4.0）；取辛烷磺酸钠1.8g和无水硫酸钠20.0g，加pH3.0的0.2mol/L磷酸盐缓冲液（配制方法同上）50ml和水850ml溶解，加乙腈100ml，混匀，作为流动相B，按下表进行线性梯度洗脱；流速为每分钟1.3ml；柱温为40℃；检测波长为200nm；进样体积10μl。

表1 洗脱梯度

检测得到的HPLC图谱如图1、2所示，对各杂质谱峰指认如下：

表2 谱峰指认

可以看到，本实施例成功地分离了杂质B，分离度为2.0以上（高于药典对分离度大于1.5的要求）从而能够实现杂质B的检测。

实施例2硫酸阿米卡星注射液的质量检测方法

本实施例的色谱条件与实施例1基本相同，区别在于：采用浓度为2mol/L的磷酸溶液调节pH，磷酸溶液用量为10ml。

对比例1

本对比例提供《中国药典》公开的检测方法，相比于实施例1，主要区别在于流动相A的pH不同，具体如下：

步骤1，采用流动相A稀释硫酸阿米卡星注射液，得到供试品溶液；每1ml供试品溶液中含有5.0mg硫酸阿米卡星注射液；

步骤2，采用HPLC检测所述供试品溶液，得到HPLC图谱；

其中，色谱条件为：

用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（Spursil柱，4.6mm×250mm，5μm或效能相当的色谱柱）；取辛烷磺酸钠1.8g和无水硫酸钠20.0g，加pH3.0的0.2mol/L磷酸盐缓冲液（配制方法为：0.2mol/L磷酸二氢钾溶液，用0.2mol/L磷酸溶液调节pH值至3.0）50ml和水900ml溶解，加乙腈50ml，混匀，作为流动相A（经检测，流动相A pH为4.53）；取辛烷磺酸钠1.8g和无水硫酸钠20.0g，加pH3.0的0.2mol/L磷酸盐缓冲液（配制方法同上）50ml和水850ml溶解，加乙腈100ml，混匀，作为流动相B，按实施例1的表1进行线性梯度洗脱；流速为每分钟1.3ml；柱温为40℃；检测波长为200nm；进样体积10μl。

本对比例检测得到的HPLC图谱如图3所示，可以看到，杂质B的谱峰无法顺利分离。

对比例2

本对比例提供在《中国药典》公开的检测方法（对比例1）基础上，尝试调节流动相比例的实验组，具体条件和检测结果如下：

本对比例调整流动相A的组成比例，具体的，取辛烷磺酸钠1.8g和无水硫酸钠20.0g，加pH3.0的0.2mol/L磷酸盐缓冲液（0.2mol/L磷酸二氢钾溶液，用0.2mol/L磷酸溶液调节pH值至3.0）50ml和水900ml溶解，加乙腈46ml，混匀，作为流动相A。

调整流动相比例后，色谱图结果如图4所示，杂质B不能分离。从HPLC图谱可以看到，通过调节流动相A组成比例的手段，无法实现对杂质B的分离。

综上所述，本发明通过对流动相pH的条件优化，成功地从硫酸阿米卡星注射液中分离出了杂质B，从而实现了杂质B的准确检测，具有很好的应用前景。