CD101的抗体及其用途

发明领域

本公开涉及使用抑制CD101的表达和/或活性的抑制剂治疗疾病的方法，特别是用于治疗癌症、炎症或感染性疾病、自身免疫病或内分泌疾病的方法。本公开还提供了特异性结合CD101抗体，以及这些抗体的用途。

技术背景

国家癌症中心发布了最新一期的全国癌症统计数据，癌症已经成为严重威胁中国人群健康的主要公共卫生问题之一，恶性肿瘤死亡占居民全部死因的23.91％，并且其发病率和死亡率均呈持续上升态势。近年来，免疫治疗研究最为耀眼，细胞程序死亡受体1(PD-1)及其配体(PD-L1)抑制剂已被FDA批准应用于单独或联合一线治疗。这些方法使某些类型的晚期患者的生存率明显提升。但最大的缺陷是患者对αPD-1单抗治疗的应答率较低，尤其是对肺癌患者的有效率不足20-30％。

CD101是一种人类白细胞表面抗原，为1021个氨基酸组成的跨膜蛋白。在活化T细胞表面、树突细胞、朗格汉斯细胞等表面均存在CD101分子的表达。CD101具有抑制T细胞活化和增殖的作用，在癌症及慢性感染的患者中的T细胞处于分化终末不可逆时期，这也就意味着CD101是T细胞衰竭的最后一环。CD101能够抑制IL2RA在活化的T细胞上的表达及IL-2的分泌，同时可以通过刺激树突细胞分泌IL10抑制T细胞增殖中发挥作用。

CD101与许多疾病的病情进展紧密关联，如急性肺损伤(ALI)、炎症性肠病(IBD)、1型糖尿病(T1D)等。ALI是一种致命但治疗药物缺乏的疾病，伴有严重的中性粒细胞炎症。动物实验表明过敏性CD101+嗜酸性粒细胞可以加剧LPS诱导的中性粒细胞炎症，加重肺损伤，说明CD101是ALI潜在的治疗靶点。CD101在肠道中的上皮内淋巴细胞(IEL)和调节性T细胞(Treg)上被检测到，提示CD101参与了IBD和T1D的发生与进展。另有研究表明，CD101

发明概述

本公开提供了使用抑制CD101的表达和/或活性的抑制剂治疗疾病的方法，特别是治疗癌症、炎症或感染性疾病、自身免疫病或内分泌疾病的方法。本公开还提供了特异性结合CD101的抗体，以及编码所述抗体的核酸、包含所述核酸的载体和包含所述核酸或所述载体的宿主细胞。还公开了包含抗体的药物组合物，以及所述抗体和药物组合物的用途。

相应地，在一个方面，本公开提供了治疗受试者中的疾病的方法，其包括向受试者施用抑制CD101的表达和/或活性的抑制剂，其中疾病选自癌症，炎症或感染性疾病，自身免疫病或内分泌疾病。

在本公开的方法的一些实施方案中，癌症选自血液系统癌症和实体瘤，任选地血液系统癌症选自白血病、真性红细胞增多症、淋巴瘤、多发性骨髓瘤、华氏巨球蛋白血症或重链病，任选地实体瘤选自肺癌、黑色素瘤、卵巢癌、胰腺导管腺癌、肝癌、结直肠癌、胶质母细胞瘤或前列腺癌。在一些实施方案中，癌症是非小细胞肺癌(NSCLC)。在一些实施方案中，受试者对PD-1轴抑制剂的治疗不响应。

在本公开的方法的一些实施方案中，炎症或感染性疾病选自急性肺损伤、炎症性肠病和HIV感染。

在本公开的方法的一些实施方案中，自身免疫病或内分泌疾病选自类风湿性关节炎和I型糖尿病。

在又一方面，本公开提供了抑制CD101的表达和/或活性的抑制剂，其用于治疗受试者中的癌症，炎症或感染性疾病，自身免疫病或内分泌疾病。

在又一方面，本公开提供了抑制CD101的表达和/或活性的抑制剂在制备用于治疗受试者中的癌症，炎症或感染性疾病，自身免疫病或内分泌疾病的药物中的用途。

在上述方面的一些实施方案中，抑制CD101的表达和/或活性的抑制剂为特异性结合CD101的抗体或其抗原结合片段。

在一些实施方案中，特异性结合CD101的抗体或其抗原结合片段包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，其中

(i)VH包含分别具有如SEQ ID NO:1-3所示的氨基酸序列的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3，并且VL包含分别具有如SEQ ID NO:5、氨基酸QMS和SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3；或

(ii)VH包含分别具有如SEQ ID NO:8-10所示的氨基酸序列的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3，并且VL包含分别具有如SEQ ID NO:12、氨基酸AAT和SEQ ID NO:13所示的氨基酸序列的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3。

在一些实施方案中，

(i)VH包含与SEQ ID NO:4具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的氨基酸序列，并且VL包含与SEQ ID NO:7具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的氨基酸序列；或

(ii)VH包含与SEQ ID NO:11具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的氨基酸序列，并且VL包含与SEQ ID NO:14具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的氨基酸序列。

在一些实施方案中，

(i)VH包含如SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列，并且VL包含如SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列；或

(ii)VH包含如SEQ ID NO:11所示的氨基酸序列，并且VL包含如SEQ ID NO:14所示的氨基酸序列。

在一些实施方案中，VH包含与选自SEQ ID NO:15-18中任一项所示氨基酸序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的氨基酸序列，并且VL包含与选自SEQ ID NO:19-21中任一项所示氨基酸序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的氨基酸序列。

在一些实施方案中，VH包含如SEQ ID NO:15-18中任一项所示的氨基酸序列，并且VL包含如SEQ ID NO:19-21中任一项所示的氨基酸序列。

在优选的实施方案中，

(i)VH包含如SEQ ID NO:15所示的氨基酸序列，且VL包含如SEQ ID NO:19所示的氨基酸序列；

(ii)VH包含如SEQ ID NO:15所示的氨基酸序列，且VL包含如SEQ ID NO:20所示的氨基酸序列；或

(iii)VH包含如SEQ ID NO:17所示的氨基酸序列，且VL包含如SEQ ID NO:19所示的氨基酸序列；或

(iv)VH包含如SEQ ID NO:17所示的氨基酸序列，且VL包含如SEQ ID NO:20所示的氨基酸序列。

在上述方面的一些实施方案中，抗体可以选自IgG、IgA、IgM、IgE和IgD同种型，例如IgG1、IgG2、IgG3和IgG4亚型。

在一些实施方案中，抗体可以选自鼠源抗体、嵌合抗体、人源化抗体和全人抗体。

在一些实施方案中，抗原结合片段可以选自Fab、Fab′、F(ab′)

在一些实施方案中，抗体可以为双特异性抗体或多特异性抗体。

在上述方面的一些实施方案中，方法进一步包括向受试者施用第二治疗剂，或者抑制CD101的表达和/或活性的抑制剂进一步与第二治疗剂联用，或者药物进一步包含第二治疗剂，其中第二治疗剂选自抗体、化学治疗剂和小分子药物。

在一些实施方案中，第二治疗剂选自抗生素衍生物、铂类络合物、紫杉醇类、喜树碱、抗代谢物、叶酸类似物、嘌呤类似物、嘧啶类似物、抗增殖/抗有丝分裂剂、烷化剂、DNA损伤剂、抗雌激素剂、抗雄激素剂、芳香酶抑制剂、激素、皮质类固醇、氮芥衍生物、类固醇和组合、抗血小板药物、抗迁移剂、抗分泌剂、抗肾上腺素、生长因子抑制剂、成纤维细胞生长因子抑制剂、血管紧张素受体阻滞剂，一氧化氮供体、细胞周期抑制剂、拓扑异构酶抑制剂、生长因子信号转导激酶抑制剂、功能障碍诱导剂、毒素、纤维蛋白溶解剂、免疫抑制剂、环三聚氰胺和三聚氰胺、苔藓抑素、卡利他汀、抗血管生成剂、金属蛋白酶-1组织抑制剂、金属蛋白酶-组织抑制剂-2、纤溶酶原激活物抑制剂-1、纤溶酶原激活物抑制剂-2、软骨衍生抑制剂、血小板因子4、硫酸鱼精蛋白、硫酸化几丁质衍生物(由大闸蟹壳制备)、硫酸化多糖肽聚糖复合物(sp-pg)、星形孢菌素、基质代谢调节剂、抗体、细胞因子、治疗性放疗剂及其组合。

在另一方面，本公开提供了特异性结合CD101的抗体或其抗原结合片段，其包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，其中

(i)VH包含分别具有如SEQ ID NO:1-3所示的氨基酸序列的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3，并且VL包含分别具有如SEQ ID NO:5、氨基酸QMS和SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3；或

(ii)VH包含分别具有如SEQ ID NO:8-10所示的氨基酸序列的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3，并且VL包含分别具有如SEQ ID NO:12、氨基酸AAT和SEQ ID NO:13所示的氨基酸序列的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3。

在本公开的抗体或其抗原结合片段的一些实施方案中，

(i)VH包含与SEQ ID NO:4具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的氨基酸序列，并且VL包含与SEQ ID NO:7具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的氨基酸序列；或

(ii)VH包含与SEQ ID NO:11具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的氨基酸序列，并且VL包含与SEQ ID NO:14具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的氨基酸序列。

在一些实施方案中，

(i)VH包含如SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列，并且VL包含如SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列；或

(ii)VH包含如SEQ ID NO:11所示的氨基酸序列，并且VL包含如SEQ ID NO:14所示的氨基酸序列。

在本公开的抗体或其抗原结合片段的一些实施方案中，VH包含与选自SEQ ID NO:15-18中任一项所示氨基酸序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的氨基酸序列，并且VL包含与选自SEQ ID NO:19-21中任一项所示氨基酸序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的氨基酸序列。

在一些实施方案中，VH包含如SEQ ID NO:15-18中任一项所示的氨基酸序列，并且VL包含如SEQ ID NO:19-21中任一项所示的氨基酸序列。

在优选的实施方案中，

(i)VH包含如SEQ ID NO:15所示的氨基酸序列，且VL包含如SEQ ID NO:19所示的氨基酸序列；或

(ii)VH包含如SEQ ID NO:15所示的氨基酸序列，且VL包含如SEQ ID NO:20所示的氨基酸序列；或

(iii)VH包含如SEQ ID NO:17所示的氨基酸序列，且VL包含如SEQ ID NO:19所示的氨基酸序列；或

(iv)VH包含如SEQ ID NO:17所示的氨基酸序列，且VL包含如SEQ ID NO:20所示的氨基酸序列。

在本公开的抗体或其抗原结合片段的一些实施方案中，抗体可以选自IgG、IgA、IgM、IgE和IgD同种型，例如IgG1、IgG2、IgG3和IgG4亚型。

在一些实施方案中，抗体可以选自鼠源抗体、嵌合抗体、人源化抗体和全人抗体。

在一些实施方案中，抗原结合片段可以选自Fab、Fab′、F(ab′)

在一些实施方案中，抗体可以为双特异性抗体或多特异性抗体。

在另一方面，本公开提供了核酸，其包含编码本公开的抗体或其抗原结合片段的核苷酸序列。

在又一方面，本公开提供了载体，其包含编码本公开的抗体或其抗原结合片段的核苷酸序列。

在又一方面，本公开提供了宿主细胞，其包含本公开的核酸或本公开的载体。

在又一方面，本公开提供了药物组合物，其包含本公开的抗体或其抗原结合片段，以及药学上可接受的载体或赋形剂。

在本公开的药物组合物的一些实施方案中，药物组合物进一步包含第二治疗剂。在一些实施方案中，第二治疗剂可以选自抗体、化学治疗剂和小分子药物。在一些实施方案中，第二治疗剂可以选自抗生素衍生物、铂类络合物、紫杉醇类、喜树碱、抗代谢物、叶酸类似物、嘌呤类似物、嘧啶类似物、抗增殖/抗有丝分裂剂、烷化剂、DNA损伤剂、抗雌激素剂、抗雄激素剂、芳香酶抑制剂、激素、皮质类固醇、氮芥衍生物、类固醇和组合、抗血小板药物、抗迁移剂、抗分泌剂、抗肾上腺素、生长因子抑制剂、成纤维细胞生长因子抑制剂、血管紧张素受体阻滞剂，一氧化氮供体、细胞周期抑制剂、拓扑异构酶抑制剂、生长因子信号转导激酶抑制剂、功能障碍诱导剂、毒素、纤维蛋白溶解剂、免疫抑制剂、环三聚氰胺和三聚氰胺、苔藓抑素、卡利他汀、抗血管生成剂、金属蛋白酶-1组织抑制剂、金属蛋白酶-组织抑制剂-2、纤溶酶原激活物抑制剂-1、纤溶酶原激活物抑制剂-2、软骨衍生抑制剂、血小板因子4、硫酸鱼精蛋白、硫酸化几丁质衍生物(由大闸蟹壳制备)、硫酸化多糖肽聚糖复合物(sp-pg)、星形孢菌素、基质代谢调节剂、抗体、细胞因子、治疗性放疗剂及其组合。

附图说明

可通过参考描述了利用本发明原理的示例性实施方案的以下详细描述和附图来获得对本发明的特征和优点的理解，在附图中：

图1A和图1B显示了制备CHO-S-CD101和293F-CD101表达细胞株的FACS结果。NC(阴性对照)为PBS，对照细胞为CHO-S(图1A)和293F(图1B)。

图2显示了小鼠免疫过程中对小鼠血清样品进行FACS检测的结果。NC(阴性对照)为PBS。

图3显示了pcDNA3.4-IgG1和pcDNA3.4-IgKc表达载体的结构示意图。

图4显示了嵌合抗体的FACS检测结果。PC(阳性对照)为1:1000稀释的阳性血清，NC(阴性对照)为PBS。

图5显示了纯化嵌合抗体的FACS检测结果。

图6显示了人源化抗体的FACS检测结果。

图7显示了人源化纯化抗体的SDS-PAGE检测结果，其中泳道M为蛋白marker，左图泳道1为hu.CA1抗体，泳道2为hu.CA2抗体，右图泳道1为19-A11-H3-B11嵌合抗体(CA1)，泳道2为hu.CA3抗体，泳道3为hu.CA4抗体。

图8显示了人源化纯化抗体的FACS检测结果。对照为19-A11-H3-B11嵌合抗体(CA1)。

图9显示了人源化纯化抗体的FACS检测结果和EC50值。对照为19-A11-H3-B11嵌合抗体(CA1)。

图10显示了制备CD101过表达的稳定Jurkat细胞株的FACS结果。

图11A-图11J显示了不同浓度和作用时间条件下的CD101嵌合抗体(CA1，图11A-图11B)和人源化抗体(hu.CA1-hu.CA4，图11C-图11J)均对CD101有显著的亲和力和抑制作用。

图12显示了1600ng/ml的嵌合抗体(CA1)和人源化抗体(hu.CA1-hu.CA4)处理过表达CD101的慢病毒转染的Jurkat细胞8小时后IL-2的表达。其中“正常细胞”为未经转染的正常Jurkat细胞，“慢病毒阴性对照”和“慢病毒过表达CD101”分别对应经阴性对照慢病毒PMT290和人CD101过表达慢病毒PSE5799感染的稳定Jurkat细胞。

图13显示在接种肿瘤模型小鼠中，给药PBS、CD101抗体和PD-1抗体组小鼠的体重随时间的变化。

图14显示在接种肿瘤模型小鼠中，给药PBS、CD101抗体和PD-1抗体组小鼠的肿瘤体积随时间的变化。**P<0.01，***P<0.0001。

图15显示在接种肿瘤模型小鼠中，在D18从给药PBS、CD101抗体和PD-1抗体组小鼠摘除的肿瘤照片。

图16显示在接种肿瘤模型小鼠中，在D18从给药PBS、CD101抗体和PD-1抗体组小鼠摘除的肿瘤的重量。

图17显示在接种肿瘤模型小鼠中，在D18从给药PBS、CD101抗体和PD-1抗体组小鼠摘除的脏器的脏器系数。

发明详述

本公开提供了使用抑制CD101的表达和/或活性的抑制剂治疗疾病的方法，特别是治疗癌症(例如血液系统癌症和实体瘤，其中血液系统癌症例如白血病、真性红细胞增多症、淋巴瘤、多发性骨髓瘤、华氏巨球蛋白血症或重链病；实体瘤例如肺癌如非小细胞肺癌(NSCLC)、黑色素瘤、卵巢癌、胰腺导管腺癌、肝癌、结直肠癌、胶质母细胞瘤或前列腺癌)、炎症或感染性疾病(例如急性肺损伤、炎症性肠病或HIV感染)、自身免疫病或内分泌疾病(例如类风湿性关节炎或I型糖尿病)的方法。本公开还提供了具有CD101高亲和力的抗体或其抗原结合片段，可以用于治疗患有与CD101表达和/或活性相关的疾病，例如癌症、炎症或感染性疾病、自身免疫病或内分泌疾病。

本文描述的任何方面或实施方案可以与本文公开的任何其他方面或实施方案组合。虽然已经结合本公开的详细描述描述了本公开，但是前面的描述旨在说明而不是限制本公开的范围，本公开的范围由所附权利要求的范围限定。其他方面、优点和修改在以下权利要求的范围内。本文提及的专利和科学文献建立了本领域技术人员可获得的知识。本文引用的所有专利和公开或未公开的专利申请通过引用并入本文。本文引用的所有其他公开的参考文献、词典、文件、手稿和科学文献在此通过引用并入本文。从包括实施方案和权利要求的以下详细描述中，本公开的其他特征和优点将是显而易见的。

为了更容易理解本公开，首先在下面定义某些术语。在整个说明书中阐述了对以下术语和其他术语的附加定义。

除非另有限定，否则本文所使用的全部技术和科学术语的含义与本领域普通技术人员通常所理解的含义相同。

应当注意，如本文中及所附权利要求书中使用的，单数形式“一个”、“一种”和“该/所述”包括复数提及物，除非上下文另有明确规定。因此，术语“一个”、“一种”、“一个/种或多个/种”和“至少一个/种”可以互换使用。

在本文中及所附权利要求书中使用术语“包含”、“包括”、“含有”和“具有”时，其不排除其他元素，且可以互换使用。为了本发明的目的，术语“由……组成”被认为是术语“包含”的优选实施方案。

本公开提供了治疗受试者中的疾病的方法，其包括向受试者施用抑制CD101的表达和/或活性的抑制剂，其中疾病选自癌症，炎症或感染性疾病，自身免疫病或内分泌疾病。

在本公开的方法的一些实施方案中，癌症选自血液系统癌症和实体瘤，任选地血液系统癌症选自白血病、真性红细胞增多症、淋巴瘤、多发性骨髓瘤、华氏巨球蛋白血症或重链病，任选地实体瘤选自肺癌、黑色素瘤、卵巢癌、胰腺导管腺癌、肝癌、结直肠癌、胶质母细胞瘤或前列腺癌。在一些实施方案中，癌症是非小细胞肺癌(NSCLC)。在一些实施方案中，受试者对PD-1轴抑制剂的治疗不响应。

如本文所用，“治疗”是指获得有益或期望的结果(包括临床结果)的方法。出于本发明的目的，有益的或期望的临床结果包括但不限于以下的一项或多项：减轻由疾病引起的一种或多种症状、降低疾病的程度、稳定疾病(例如，防止或延迟疾病的恶化)、防止或延迟疾病的传播、防止或延迟疾病的复发、延迟或减缓疾病的进展、改善疾病状态、提供疾病的缓解(部分或完全)、减少治疗疾病所需的一种或多种其他药物的剂量、延缓疾病的进展、提高或改善生活质量、体重增加和/或延长生存期。本发明的方法设想了治疗的这些方面中的任一个或多个方面。

在某些实施方案中，治疗可以在已经出现一种或多种症状之后给予。在其他实施方案中，治疗可以在没有症状的情况下给予。例如，治疗可以在症状发作之前给予易感个体，或者可以用另一种损伤剂进行治疗(例如，根据症状史，根据遗传或其他易感因素、疾病疗法或它们的任何组合)。还可以在症状已经消退之后继续治疗，例如，以预防或延迟它们的复发。

在本公开的方法的一些实施方案中，炎症或感染性疾病选自急性肺损伤、炎症性肠病和HIV感染。

在本公开的方法的一些实施方案中，自身免疫病或内分泌疾病选自类风湿性关节炎和I型糖尿病。

在一些实施方案中，疾病可以为癌症(例如血液系统癌症和实体瘤，其中任选地血液系统癌症选自白血病(例如急性白血病(急性淋巴细胞白血病、急性髓细胞白血病(包括成髓细胞、早幼粒细胞、骨髓单核细胞、单核细胞和红白血病))和慢性白血病(慢性粒细胞白血病和慢性淋巴细胞白血病))、真性红细胞增多症、淋巴瘤(例如霍奇金病和非霍奇金病)、多发性骨髓瘤、华氏巨球蛋白血症或重链病；任选地实体瘤选自肉瘤和癌，例如纤维肉瘤、粘液肉瘤、脂肪肉瘤、软骨肉瘤、成骨肉瘤、脊索瘤、血管肉瘤、内皮肉瘤、淋巴管肉瘤、淋巴管内皮瘤平滑肌肉瘤、滑膜瘤、间皮瘤、尤文氏瘤、平滑肌肉瘤、横纹肌肉瘤、结肠癌、胰腺癌、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、鳞状细胞癌、基底细胞癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳头状癌、乳头状腺癌、囊腺癌、髓样癌、支气管癌、肾细胞癌、肝癌、胆管癌、绒毛膜癌、精原细胞瘤、胚胎癌、威尔姆瘤、宫颈癌、睾丸肿瘤、肺癌(例如非小细胞肺癌(NSCLC)和小细胞肺癌(SCLC))、膀胱癌、上皮癌、胶质瘤、星形细胞瘤、髓母细胞瘤、颅咽管瘤、室管膜瘤、松果体瘤、血管母细胞瘤、听神经瘤、少突胶质细胞瘤、脑血管瘤、黑色素瘤、神经母细胞瘤和视网膜母细胞瘤等)、炎症或感染性疾病(例如急性肺损伤、炎症性肠病或HIV感染)和/或自身免疫病或内分泌疾病(例如类风湿性关节炎或I型糖尿病)。

在上述方面的一些实施方案中，抑制CD101的表达和/或活性的抑制剂为特异性结合CD101的抗体或其抗原结合片段。

在一些实施方案中，特异性结合CD101的抗体或其抗原结合片段包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，并且在另一方面，本公开提供了包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)的特异性结合CD101的抗体或其抗原结合片段，其中

(i)VH包含分别具有如SEQ ID NO:1-3所示的氨基酸序列的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3，并且VL包含分别具有如SEQ ID NO:5、氨基酸QMS和SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3；或

(ii)VH包含分别具有如SEQ ID NO:8-10所示的氨基酸序列的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3，并且VL包含分别具有如SEQ ID NO:12、氨基酸AAT和SEQ ID NO:13所示的氨基酸序列的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3。

如本公开所用，术语“抗体”是指免疫球蛋白分子，其具有特异性结合特定抗原的能力。抗体通常在每条重链和轻链中包含可变区和恒定区。抗体重链和轻链的可变区包含与抗原相互作用的结合结构域。抗体的恒定区可介导免疫球蛋白与宿主组织或因子的结合，所述宿主组织或因子包括免疫系统的各种细胞(如效应细胞)和补体系统的组分。因此，大多数抗体具有重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，它们共同形成与抗原结合的抗体部分。

“重链可变区”(VH)或“轻链可变区”(VL)由间插三个“互补决定区”(CDR)的“框架”(FR)区组成。框架区用于调整CDR，以用于特异性结合抗原表位。CDR包含抗体中主要负责抗原结合的氨基酸残基。从氨基末端到羧基末端，VH和VL结构域都包含以下FR区和CDR区：FR1，CDR1，FR2，CDR2，FR3，CDR3和FR4。VH结构域的CDR 1、2和3在本文中也分别称为CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3；VL结构域的CDR 1、2和3在本文中也分别称为CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3。

每个VH和VL结构域的氨基酸分配按照CDR的任何常规定义。常规定义包括Kabat定义(Kabat,Sequences of Proteins of Immunological Interest(National Institutesof Health,Bethesda,MD,1987和1991))；Chothia定义(Chothia&Lesk,J.Mol.Biol.196：901-917,1987；Chothia等人,Nature 342：878-883,1989)；Chothia和Kabat CDR的复合；Oxford Molecular的抗体建模软件所使用的AbM定义；以及Martin等人的CONTACT定义(www.bioinfo.org.uk/abs)。Kabat提供了广泛使用的编号惯例(Kabat编号系统)，其中不同重链之间或不同轻链之间的对应残基被赋予相同的编号。本公开可以使用根据这些编号系统中的任一种定义的CDR。在一些实施方案中，使用Kabat定义的CDR。在一些实施方案中，使用Chothia定义的CDR。在一些实施方案中，使用Chothia和Kabat复合定义的CDR。在一些实施方案中，使用AbM定义的CDR。在一些实施方案中，使用CONTACT定义的CDR。

如本公开所用，术语“结合”或“特异性结合”是指两种分子之间的非随机结合反应，例如在抗体和其靶抗原之间的非随机结合反应。抗体的结合特异性可以基于亲和力和/或亲合力来确定。亲和力通常由抗原与抗体解离的平衡常数(KD)表示，是抗原决定簇和抗体的抗原结合位点之间的结合强度的量度：KD值越小，抗原决定簇和抗体之间的结合强度越强。或者，亲和力也可以表示为亲和力常数(KA)，其为1/KD。

在一些实施方案中，

(i)VH包含与SEQ ID NO:4具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的氨基酸序列，并且VL包含与SEQ ID NO:7具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的氨基酸序列；或

(ii)VH包含与SEQ ID NO:11具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的氨基酸序列，并且VL包含与SEQ ID NO:14具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的氨基酸序列。

在一些实施方案中，

(i)VH包含如SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列，并且VL包含如SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列；或

(ii)VH包含如SEQ ID NO:11所示的氨基酸序列，并且VL包含如SEQ ID NO:14所示的氨基酸序列。

在一些实施方案中，VH包含与选自SEQ ID NO:15-18中任一项所示氨基酸序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的氨基酸序列，并且VL包含与选自SEQ ID NO:19-21中任一项所示氨基酸序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的氨基酸序列。

在一些实施方案中，VH包含如SEQ ID NO:15-18中任一项所示的氨基酸序列，并且VL包含如SEQ ID NO:19-21中任一项所示的氨基酸序列。

在优选的实施方案中，

(i)VH包含如SEQ ID NO:15所示的氨基酸序列，且VL包含如SEQ ID NO:19所示的氨基酸序列；或

(ii)VH包含如SEQ ID NO:15所示的氨基酸序列，且VL包含如SEQ ID NO:20所示的氨基酸序列；或

(iii)VH包含如SEQ ID NO:17所示的氨基酸序列，且VL包含如SEQ ID NO:19所示的氨基酸序列；或

(iv)VH包含如SEQ ID NO:17所示的氨基酸序列，且VL包含如SEQ ID NO:20所示的氨基酸序列。

如本文所用，“序列同一性”是指任何给定的查询序列和主题序列之间的同一性程度。本领域的技术人员将容易理解如何确定两个多肽(例如未经修饰的肽和肽变体)的同一性。例如，可以在对齐两条序列使它们的同一性达到最高水平之后再计算同一性，例如可以引入空位。计算同一性的另一个方法可以通过公开的算法实施。此类数学算法的非限制性实例包括Myers和Miller(1988)CABIOS 4:11-17的算法、Smith等(1981)Adv.Appl.Math.2:482的局部同源性算法、Needleman和Wunsch(1970)J.Mol.Biol.48:443-453的同源性比对算法、Pearson和Lipman(1988)Proc.Natl.Acad.Sci.85:2444-2448的用于搜索同源性的方法和Karlin和Altschul(1990)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 87:2264的算法的修改形式，记载于Karlin和Altschul(1993)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90:5873-5877的算法。通过使用基于此类数学算法的程序，可以实施用于测定序列同一性的序列比较(即比对)。程序可以由计算机适当执行。此类程序的实例包括但不限于PC/Gene程序的CLUSTAL、ALIGN程序(2.0版本)和Wisconsin遗传学软件包的GAP、BESTFIT、BLAST、FASTA和TFASTA。可以例如通过使用初始参数实施使用这些程序的比对。

此外，在确定两条氨基酸序列之间的序列同一性的程度时，技术人员可以考虑所谓的“保守性”氨基酸取代，其通常可以描述为氨基酸残基被替换为具有类似化学结构的另一种氨基酸残基的氨基酸取代，其对多肽的功能、活性或其他生物学性质几乎没有影响或基本上没有影响。这种保守性氨基酸取代在本领域中是众所周知的。

这种保守性取代优选地是以下组(a)到(e)中的一个氨基酸被同组中的另一个氨基酸残基取代的取代：(a)小的脂肪族、非极性或弱极性残基：Ala、Ser、Thr、Pro和Gly；(b)极性、带负电的残基及其(不带电的)酰胺：Asp、Asn、Glu和Gln；(c)极性、带正电的残基：His、Arg和Lys；(d)大的脂肪族、非极性残基：Met、Leu、He、Val和Cys；以及(e)芳香族残基：Phe、Tyr和Trp。

特别优选的保守性取代如下：Ala到Gly或到Ser；Arg到Lys；Asn到Gln或到His；Asp到Glu；Cys到Ser；Gln到Asn；Glu到Asp；Gly到Ala或到Pro；His到Asn或到Gln；Ile到Leu或到Val；Leu到Ile或到Val；Lys到Arg、到Gln或到Glu；Met到Leu、到Tyr或到Ile；Phe到Met、到Leu或到Tyr；Ser到Thr；Thr到Ser；Trp到Tyr；Tyr到Trp；和/或Phe到Val、到Ile或到Leu。

在一些实施方案中，本公开的抗体及其抗原结合片段包括变体，变体可以包含一种或多种氨基酸修饰。在单个变体中可以包含取代、缺失、插入、添加或其任何组合，只要变体可以特异性结合抗原。制备变体的方法和技术是本领域技术人员公知的。

在一些实施方案中，本公开的抗体包含免疫球蛋白Fc区或其部分。例如，在一些实施方案中，本公开的抗体包含CH2和/或CH3区。在一些实施方案中，所述抗体包含铰链区、CH2和CH3区。

在一些实施方案中，抗体可以选自IgG、IgA、IgM、IgE和IgD同种型，例如IgG1、IgG2、IgG3和IgG4亚型。在一些实施方案中，抗体可以选自鼠源抗体、嵌合抗体、人源化抗体和全人抗体。在一些实施方案中，抗原结合片段可以选自Fab、Fab′、F(ab′)

本公开所用的术语“抗体”应以其最广泛的意义来理解，并且包括单克隆抗体(包含全长单克隆抗体)、多克隆抗体、抗体片段和包含至少两个抗原结合区的多特异性抗体(例如，双特异性抗体)。抗体可含有另外的修饰，例如非天然存在的氨基酸、Fc区中的突变、以及糖基化位点的突变。抗体还包括翻译后修饰的抗体、含有抗体的抗原决定簇的融合蛋白以及含有对抗原识别位点的任何其他修饰的免疫球蛋白分子，只要这些抗体表现出预期的生物活性即可。

在一些实施方案中，抗体包括嵌合抗体，如鼠源性抗体的人源化形式。此类人源化抗体可以通过已知技术制备，并且在将抗体施用于人时提供降低免疫原性的优点。在一个实施方案中，人源化抗体包含鼠源性抗体的可变区(或仅其抗原结合位点)和衍生自人抗体的恒定区。替代地，人源化抗体片段可以包含鼠源性抗体的抗原结合位点和衍生自人抗体的可变区片段(缺乏抗原结合位点)。用于产生嵌合抗体和进一步经工程化改造的抗体的程序包括描述在以下中的那些程序：Riechmann等人，(Nature 332:323,1988)；Liu等人，(PNAS 84:3439,1987)；Larrick等人，(Bio/Technology 7:934,1989)；以及Winter和Harris(TIPS 14:139,May,1993)。

可以使用通过基因工程方法产生的抗体(如嵌合和人源化抗体)，其包含人和非人部分二者，可以使用标准重组DNA技术来制造。可以使用本领域已知的标准DNA技术，通过基因工程来产生此类嵌合和人源化抗体。

如本公开所用，术语抗体的“抗原结合片段”是指保持特异性结合抗原(例如CD101)能力的一种或多种抗体片段。已经表明，抗体的抗原结合功能可以由全长抗体的片段来执行。抗原结合片段的实例包括(i)Fab片段，其为由VH、VL、CH1和CL结构域组成的单价片段；(ii)F(ab′)

这些抗原结合片段可以使用本领域技术人员已知的常规技术获得，并且以与完整抗体相同的方式筛选片段的效用。

在一方面，本公开提供了核酸，其包含编码本公开的抗体或其抗原结合片段的核苷酸序列。

术语“核酸”、“核苷酸”、“核苷酸序列”可互换使用，是指基本上由核苷酸(如脱氧核糖核苷酸和/或核糖核苷酸)组成的任何长度的寡聚物和聚合物。核酸可以包含嘌呤和/或嘧啶碱基和/或其他天然(例如黄嘌呤、肌苷、次黄嘌呤)，化学或生物化学修饰(例如甲基化)，非天然或衍生的核苷酸碱基。核酸的骨架可以包含通常存在于RNA或DNA中的糖和磷酸基团，和/或一种或多种经修饰或取代的糖和/或一种或多种经修饰或取代的磷酸基团。可以引入磷酸基团或糖的修饰以改善稳定性、对酶促降解的抗性，或一些其他有用的特性。“核酸”可以是例如双链的，部分双链的或单链的。当是单链时，核酸可以是有义链或反义链。“核酸”可以是环形或线形的。如本文所用，术语“核酸”涵盖DNA和RNA，包括基因组、pre-mRNA、mRNA、cDNA、包含载体的重组或合成核酸。出于本文所述用途的目的，应理解，可以通过本领域可用的任何方法修饰多核苷酸。

本领域技术人员将理解，由于遗传密码的简并性，许多不同的多核苷酸和核酸可以编码相同的多肽。另外，应当理解，技术人员可以使用常规技术进行不影响本文所述多核苷酸编码的多肽序列的核苷酸取代，以反映要在其中表达多肽的任何具体宿主生物体的密码子使用。

在又一方面，本公开提供了包含本公开的核酸的载体。

本文所用“载体”是指可以将核苷酸插入其中的一种核酸运载工具。而当载体能使插入的核苷酸编码的蛋白获得表达时，该载体称为表达载体。载体可以通过转化、转导或者转染等方法导入宿主细胞，继而使其携带的遗传物质元件在宿主细胞内获得表达。载体是本领域技术人员公认的，包括但不限于：(1)质粒；(2)噬菌粒；(3)柯斯质粒；(4)人工染色体，如酵母人工染色体、细菌人工染色体或P1来源的人工染色体；(5)噬菌体如λ噬菌体或M13噬菌体；及(6)动物病毒，如逆转录酶病毒、腺病毒、腺相关病毒、慢病毒、孢疹病毒、痘病毒、杆状病毒。一种载体可以含有多种控制表达的元件，包括但不局限于，启动子序列、转录起始序列、增强子序列、选择元件及报告基因；此外，载体还可以含有复制起始位点。

重组表达载体可以是任何合适的重组表达载体。合适的载体包括被设计用于繁殖和扩增或用于表达或两者的载体，例如质粒和病毒。例如，载体可以选自pUC系列(Fermentas Life Sciences,Glen Burnie,Md.)、pBluescript系列(Stratagene,LaJolla,CA)、pET系列(Novagen,Madison,Wis.)、pGEX系列(Pharmacia Biotech，Uppsala，瑞典)和pEX系列(Clontech，Palo Alto，Calif.)。也可以使用噬菌体载体，例如λGT10、λGT11、λZapII(Stratagene)、λEMBL4和λNM1149。可用于本公开的植物表达载体的实例包括pBI01、pBI101.2、pBI101.3、pBI121和pBIN19(Clontech)。可用于本公开的动物表达载体的实例包括pcDNA、pEUK-Cl、pMAM和pMAMneo(Clontech)。

在另一方面，本公开提供了包含本公开的核酸或本公开的载体的宿主细胞。

如本文所用，术语“宿主细胞”是指已引入表达载体的细胞。任何细胞都可以用作本公开的核酸或载体的宿主细胞。在一些实施方案中，细胞可以是原核细胞、真菌细胞、酵母细胞或高等真核细胞如哺乳动物细胞。合适的原核细胞包括但不限于真细菌，例如革兰氏阴性或革兰氏阳性生物体，例如肠杆菌科(Enterobactehaceae)，例如埃希氏杆菌属(Escherichia)，例如大肠杆菌(E.coli)；肠杆菌属(Enterobacter)；欧文氏菌属(Erwinia)；克雷伯氏菌属(Klebsiella)；变形杆菌(Proteus)；沙门氏菌属(Salmonella)，例如鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium)；沙雷氏菌属(Serratia)，例如粘质沙雷氏菌(Serratia marcescans)；和志贺氏菌属(Shigella)；芽孢杆菌属(Bacilli)，例如枯草芽孢杆菌(B.subtilis)和地衣芽孢杆菌(B.licheniformis)；假单胞菌(Pseudomonas)，如铜绿假单胞菌(P.aeruginosa)；和链霉菌(Streptomyces)。在一些实施方案中，细胞是人细胞。在一些实施方案中，细胞是免疫细胞。在一些实施方案中，宿主细胞包括例如CHO细胞，例如CHO-S细胞和CHO-K1细胞，或HEK293细胞，例如HEK293A、HEK293T和HEK293FS。

在又一方面，本公开提供了药物组合物，其包含本公开的抗体或其抗原结合片段，以及药学上可接受的载体或赋形剂。

术语“药学上可接受”是指载体或佐剂与组合物的其他成分相容并且对其接受者没有大量毒害，和/或这些载体或佐剂被批准或可用于包含在对人类肠胃外给药的药物组合物中。

在一些实施方案中，与本公开的组合物一起使用的载体或赋形剂包括但不限于马来酸、酒石酸、乳酸、柠檬酸、乙酸、碳酸氢钠、磷酸钠、组氨酸、甘氨酸、氯化钠、氯化钾、氯化钙、氯化锌、水、右旋糖、N-甲基吡咯烷酮、二甲亚砜、N,N-二甲基乙酰胺、乙醇、丙二醇、聚乙二醇、二甘醇单乙醚和表面活性剂聚氧乙烯-脱水山梨糖醇单油酸酯。

在上述方面的一些实施方案中，本公开的方法进一步包括向受试者施用第二治疗剂，或者抑制CD101的表达和/或活性的抑制剂进一步与第二治疗剂联用，或者本公开的药物或药物组合物进一步包含第二治疗剂，其中第二治疗剂选自抗体、化学治疗剂和小分子药物。

如本文所用，“施用”是指将抗体或组合物引入到受试者中，并且包括并行或顺序引入抗体或组合物。“施用”可以指例如治疗、药代动力学、诊断、研究、安慰剂和实验方法。“施用”还涵盖体外和离体治疗。通过任何合适的途径将组合物或药剂引入到受试者中，用于施用本公开的抗体或组合物的合适方法的实例包括口服、皮内、皮下、肌肉内、骨内、腹膜内和静脉内注射，以及全身施用或局部施用至靶位点附近，但不限于此。施用包括自我施用和他人施用。可以通过任何合适的途径进行施用。合适的施用途径允许组合物或药剂进行其预期功能。例如，如果合适的途径是静脉内，则通过将抗体或组合物引入到受试者的静脉中来施用组合物。

在本公开的某些实施方案中，本公开的抗体或组合物与用于施用的装置包装在一起或储存在用于施用的装置中。用于可注射制剂的装置包括但不限于注射口，自动注射器，注射泵和注射笔。用于雾化或粉末制剂的装置包括但不限于吸入器，吹入器，抽吸器等。因此，本公开包括包含本公开的抗体或组合物的施用装置，用于治疗或预防本文所述的一种或多种病症。

预期所施用的“受试者”包括但不限于人(即任何年龄组的男性或女性，例如儿童受试者(例如婴儿、少儿、青少年)或成人受试者(例如青年、中年人、或老年人))和/或其他非人动物，例如哺乳动物(例如灵长类)。

在一些实施方案中，第二治疗剂可以选自抗生素衍生物，例如更生霉素、柔红霉素、多柔比星、伊达比星、蒽环类、米托蒽醌、博来霉素、普卡霉素(光神霉素)和丝裂霉素、和放线菌素；铂类络合物，例如顺铂、奥铂和卡铂、丙卡巴肼、羟基脲、米托坦和氨基谷氨酰胺；紫杉醇类，例如紫杉醇和多西紫杉醇；喜树碱，包括合成的类似拓扑替康；抗代谢物，例如氟尿嘧啶、5-FU、氟尿苷、卡培他滨和阿糖胞苷、干扰素α-2b、谷氨酸、普卡霉素、巯基嘌呤和6-硫鸟嘌呤；叶酸类似物，例如去甲蝶呤、甲氨蝶呤、蝶蝶呤和三甲氨蝶呤；嘌呤类似物，例如氟达拉滨、6-巯基嘌呤、硫胺嘧啶和硫鸟嘌呤；嘧啶类似物，例如安西他滨、阿扎胞苷、6-氮杂尿苷、卡莫氟、阿糖胞苷、双脱氧尿苷、多西氟尿苷、依西他滨和氟尿苷；抗增殖/抗有丝分裂剂，例如天然产物如长春花生物碱(长春碱、长春新碱)、诺考达唑、埃坡霉素、长春瑞滨和表鬼臼毒素(依托泊苷、替尼泊苷)、氮芥环磷酰胺和类似物(美法仑、苯丁酸氮芥、六甲基三聚氰胺和噻替哌)、烷基亚硝基脲(卡莫司汀)和类似物、链脲佐菌素和三氮烯(达卡巴嗪)；烷化剂，例如噻替派和环磷酰胺；DNA损伤剂，例如放线菌素、安吖啶、白消安、卡铂、苯丁酸氮芥、异磷酰胺、美法仑、氯乙胺、丝裂霉素、米托蒽醌、亚硝脲、丙卡巴肼、泰索帝、替尼泊苷、依托泊苷和三亚乙基硫代磷酰胺；抗雌激素剂，例如他莫昔芬、雷洛昔芬、屈洛昔芬、4-羟基他莫昔芬、曲昔芬、keoxifene、LY117018、奥纳普利司酮和托瑞米芬、抗雄激素剂，例如氟他胺、尼鲁米特、比卡鲁胺、亮丙罗得和戈舍瑞林；芳香酶抑制剂，例如氨基谷胱甘肽、醋酸甲地孕酮、依西美坦、福美坦、法屈唑、伏罗唑、来曲唑和阿那曲唑；激素，例如甲羟孕酮、磷酸雌莫司汀钠、炔雌醇、雌二醇、醋酸甲地孕酮、甲基睾酮、二乙基己烯雌酚二磷酸、氯三茴香烯和睾内酯；皮质类固醇，例如可的松、地塞米松、氢化可的松、甲基强的松龙、强的松和强的松龙；氮芥衍生物，例如美法林、苯丁酸氮芥、甲氯乙胺(氮芥)和噻替哌；类固醇和组合，例如贝他米松磷酸钠；抗血小板药物；抗迁移剂；抗分泌剂(breveldin)；抗肾上腺素，如氨基谷氨酰胺、米托坦和三氯司坦；生长因子抑制剂、成纤维细胞生长因子抑制剂、血管紧张素受体阻滞剂，一氧化氮供体；细胞周期抑制剂、拓扑异构酶抑制剂(多柔比星、柔红霉素、更生霉素、依尼泊苷、表柔比星、依托泊苷、伊达比星、伊立替康、米托蒽醌、拓扑替康和伊立替康)；生长因子信号转导激酶抑制剂；功能障碍诱导剂；毒素，例如霍乱毒素、蓖麻毒素、假单胞菌外毒素、百日咳博德特氏菌腺苷酸环化酶毒素、白喉毒素和半胱天冬酶激活剂；纤维蛋白溶解剂，例如组织纤溶酶原激活剂、链激酶、尿激酶、阿司匹林、双嘧达莫、噻氯匹定和氯吡格雷；免疫抑制剂他克莫司、西罗莫司、硫唑嘌呤和霉酚酸酯；环三聚氰胺和三聚氰胺，包括阿尔维他明、三亚甲基三聚氰胺、三亚乙基磷酰胺、三亚乙基硫代磷酰胺和三亚甲基三聚氰胺；苔藓抑素；卡利他汀；抗血管生成剂，例如类视黄酸及其衍生物、2-甲氧基雌二醇、苏拉明、角鲨胺；金属蛋白酶-1组织抑制剂、金属蛋白酶-组织抑制剂-2、纤溶酶原激活物抑制剂-1、纤溶酶原激活物抑制剂-2、软骨衍生抑制剂、血小板因子4、硫酸鱼精蛋白(clupeine)、硫酸化几丁质衍生物(由大闸蟹壳制备)、硫酸化多糖肽聚糖复合物(sp-pg)、星形孢菌素、基质代谢调节剂，包括脯氨酸类似物((l-azetidine-2-carboxyacid(LACA))、顺羟脯氨酸、d,I-3,4-脱氢脯氨酸、硫代脯氨酸、a,o′-联吡啶、β-氨基丙腈富马酸酯、4-丙基-5-(4-吡啶基)-2(3h)-恶唑酮、米托蒽醌、肝素、干扰素、胰凝乳蛋白酶抑制剂、β-环糊精、十四硫酸盐、埃彭霉素、烟曲霉素、硫代苹果酸金钠、d-青霉胺、β-1-抗胶原酶血清、α-2-抗纤溶酶、比生群、洛苄利特二钠、n-2-羧基苯基-4-氯邻苯二甲酸二钠或“CCA”、沙利度胺、血管抑制类固醇、羧基氨基咪唑和金属蛋白酶抑制剂，如BB-94；其他抗血管生成剂包括抗体，优选针对这些血管生成生长因子的单克隆抗体：β-FGF、α-FGF、FGF-5、VEGF同种型、VEGF-C、HGF/SF和Ang-1/Ang-2；以及PI3K抑制剂；PI3Ky抑制剂；PI3Kp抑制剂；PI3Ka抑制剂；pan-PI3K抑制剂；SYK抑制剂；以下酶或蛋白的抑制剂：Abl、活化的CDC激酶(ACK)、腺苷A2B受体(A2B)、凋亡信号调节激酶(ASK)、Auroa激酶、布鲁顿酪氨酸激酶(BTK))、BET-溴结构域(BRD)、c-Kit、c-Met、CDK激活激酶(CAK)、钙调蛋白依赖性蛋白激酶(CaMK)、细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK)、酪蛋白激酶(CK)、盘状结构域受体(DDR)、表皮生长因子受体(EGFR),粘着斑激酶(FAK)、Flt-3、FYN、糖原合酶激酶(GSK)、HCK、组蛋白去乙酰化酶(HDAC)、IKK如IKKBe、异柠檬酸盐脱氢酶(IDH)、Janus激酶(JAK)、KDR、淋巴细胞特异性蛋白酪氨酸激酶(LCK)、赖氨酰氧化酶蛋白、赖氨酰氧化酶样蛋白(LOXL)、LYN、基质金属蛋白酶(MMP)、MEK、有丝分裂原-活化蛋白激酶(MAPK)、NEK9、NPM-ALK、p38激酶、血小板衍生生长因子(PDGF)、磷酸化酶激酶(PK)、polo样激酶(PLK)、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、蛋白激酶(PK)、PYK、脾酪氨酸激酶(SYK)、丝氨酸/苏氨酸激酶TPL2、丝氨酸/苏氨酸激酶STK、信号转导和转录(STAT)、SRC、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(TBK)，例如TBK1、TIE、酪氨酸激酶(TK)、血管内皮生长因子受体(VEGFR)；抗纤维化剂；氮芥烷化剂；ASK抑制剂；BTK抑制剂；DDR抑制剂；HDAC抑制剂；JAK抑制剂抑制；LOXL抑制剂；LOXL2抑制剂；MMP抑制剂；其他，例如二卡巴肼、天冬酰胺酶、米托坦、硫酸长春新碱、硫酸长春碱和依托泊苷；依达曲沙；去氧麻黄碱；去甲高辛；二嗪酮；二甲双胍；醋酸艾立替铵；埃坡霉素；胃泌素；硝酸镓；羟基脲；香菇多糖；亚叶酸；氯尼达胺；美登素，例如美登素和安丝霉素；米托胍；米托蒽醌；莫匹达莫；硝化钠；喷司他丁；现象；吡柔比星；洛索蒽醌；氟嘧啶；亚叶酸；鬼臼酸；2-乙基酰肼；丙卡巴肼；多糖-K(PSK)；雷佐生；根瘤菌素；西佐非兰；螺锗；肌松酸；三嗪酮；2,2′,2"-三氯三苯胺；氨基甲酸乙酯；长春地辛；达卡巴嗪；甘露莫司汀；米托溴醇；米托内酯；哌泊溴；半胞嘧啶；阿拉伯糖苷(“Ara-C”)；环磷酰胺；硫代哌唑；苯丁酸氮芥；吉西他滨

实施例

本发明通过下述实施例进一步阐明，但任何实施例或其组合不应当理解为对本发明的范围或实施方式的限制。本发明的范围由所附权利要求书限定，结合本说明书和本领域一般常识，本领域普通技术人员可以清楚地明白权利要求书所限定的范围。在不偏离本发明的精神和范围的前提下，本领域技术人员可以对本发明的技术方案进行任何修改或改变，这种修改和改变也包含在本发明的范围内。

实施例1：纯化抗体的制备及检测

1.CHO-S-CD101和293F-CD101表达细胞株制备

根据CD101的序列信息，经密码子优化后，合成CD101的编码序列(Genbank登录号：NM_004258.6)，将其亚克隆至慢病毒表达载体Lenti-CMV-puro以制备目的基因过表达载体。使用构建的过表达慢病毒载体制备慢病毒，感染CHO-S和293F细胞(Thermo Fisher：FreeStyle

2.小鼠免疫及检测

使用CHO-S-CD101细胞通过腹腔注射对10只6周龄雌性Balb/c小鼠(SPF级，标记为172-181号)进行免疫。其中分别于第0、49和63天通过腹腔注射进行3次免疫。免疫后，对小鼠进行眼眶采血10μL，离心获得血清，将血清按照1:1000稀释，采用FACS检测免疫效价。根据FACS检测结果(图2)，挑选免疫效价检测较好的174和180号小鼠进行冲击免疫和杂交瘤融合。

3.杂交瘤融合及筛选

对小鼠进行冲击免疫3天后，处死小鼠，并在无菌条件下获得小鼠脾脏以制备B细胞单细胞悬液。以1:1的比例将B细胞单细胞悬液与非分泌性SP2/0骨髓瘤细胞(中国科学院上海细胞库，目录号：TCM42)混合，使用BTX细胞电融合仪进行细胞融合。将融合后的细胞在完全培养基(DMEM，20％ FBS和HAT)中培养约10天，随后将培养基更换为HT培养基。继续培养2天后，取上清进行特异性抗体的检测。

具体来说，将取出的培养基上清与CHO-S-CD101细胞孵育通过FACS进行鉴定，选择FACS结合强的克隆进行流式复检，然后将FACS结合强的克隆进行亚克隆。亚克隆结束后通过FACS进行鉴定，重复多轮直至单克隆形成。

FACS检测按照标准方案进行。简而言之，将3×10

根据FACS检测结果，选择19-A11-H3-B11、2-F12-F8-B9和25-D1-G2-C9(将其分别重新编号为A1-A3)三个克隆进一步进行杂交瘤测序。

4.杂交瘤测序

按照标准方案提取杂交瘤细胞的总RNA并逆转录为cDNA样品。使用杂交瘤测序引物采用PCR法对抗体的重链和轻链可变区进行扩增，然后进行TA克隆，将PCR获得的片段亚克隆至T载体中，挑取克隆进行测序。杂交瘤测序结果如下表1中所示，其中A1与A3序列相同。

表1.A1-A3抗体的CDR序列、VH序列和VL序列

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实施例2：嵌合抗体的制备和检测

1.嵌合抗体表达载体构建和验证

将根据杂交瘤测序获得的抗体重链可变区亚克隆至pcDNA3.4-IgG1表达载体，轻链可变区亚克隆至pcDNA3.4-IgKc表达载体(载体示意图如图3所示)。将构建好的重链和轻链表达载体瞬时共转染293F细胞(无血清培养)，收集上清进行FACS检测。FACS方法如实施例1中所述，其中PC(阳性对照)为1:1000稀释的阳性血清(100μL/孔)，NC(阴性对照)为PBS。结果显示(图4)，构建的2个嵌合抗体均能够特异性结合CD101。

2.嵌合抗体的表达纯化

将2mL/孔PBS加入至6孔板，然后分别加入40μg pcDNA3.1-IgG1和80μg pcDNA3.1-IgKc表达载体，用移液枪上下吹打充分混匀后，加入360μL LVTransm转染试剂，立即用移液枪上下吹打充分混匀后在室温下静置10分钟。将DNA/LVTransm复合物加入到100mL 293F细胞(细胞密度为1×10

对纯化的嵌合抗体进行FACS免疫效价检测(图5)。结果显示，2个嵌合抗体(CA1和CA2)均能够特异性结合CD101。在以下实施例中，以CA1抗体(对应于19-A11-H3-B11)为例进行抗体人源化设计。

实施例3：人源化抗体构建及检测

1.抗体人源化设计

根据获得的鼠源抗体重链和轻链可变区的氨基酸序列信息进行人源化设计，保留原始抗体的CDR区序列不变，根据种系比对(germline alignment)的结果以及抗体结构模拟的结果，针对重链和轻链分别选择不同的人源抗体模板，并在人源化之后的框架区进行回复突变，设计候选的人源化抗体序列(表2)。

表2.人源化抗体序列

2.人源化抗体基因合成及表达载体构建

将上述设计的人源化抗体的重链和轻链分别进行基因合成，将重链亚克隆至pcDNA3.4-IgG1表达载体，并将轻链亚克隆至pcDNA3.4-IgKc表达载体(载体示意图如图3所示)。载体经测序验证无误后，制备去内毒素质粒。

3.人源化抗体的表达及FACS检测

将包含经设计的重链或轻链序列的人源化抗体表达载体两两组合，按照标准方案瞬时转染293F细胞。具体而言，将2mL/孔PBS加入至6孔板，然后分别加入2μg pcDNA3.4-IgG1和2μg pcDNA3.4-IgKc表达载体，用移液枪上下吹打充分混匀后，加入12μL LVTransm转染试剂，立即用移液枪上下吹打充分混匀后在室温下静置10分钟。将DNA/LVTransm复合物加入到3mL 293F细胞中，轻轻晃动充分混匀。将细胞置于37℃、5％ CO

FACS检测按照标准方案进行。简而言之，将3×10

4.人源化抗体的表达纯化及亲和力检测

参考实施例2中抗体表达纯化的方案，将选择的抗体重链/轻链组合对应的pcDNA3.4-IgG1和pcDNA3.4-IgKc表达载体利用LVTransm转染试剂转染至293F细胞中。培养细胞后进行离心以收集培养基上清，使用Protein A亲和柱纯化抗体，使用Nanodrop测定纯化抗体浓度，同时利用SDS-PAGE变性电泳进行检测。SDS-PAGE检测结果示于图7。

将100μL纯化的hu.CA1-hu.CA4(10μg/ml，3倍稀释7个点)与293F-CD101细胞孵育后，以纯化的原始鼠源抗体VH和VL构建的人鼠嵌合抗体CA1作为对照，通过FACS(参考本实施例中所述的FACS检测方案)检测纯化人源化抗体的亲和力。

结果显示(图8和9)，人源化抗体和嵌合抗体亲和力一致。

实施例4：嵌合抗体和人源化抗体对CD101的抑制作用

1.制备CD101过表达的稳定Jurkat细胞株

使用阴性对照慢病毒PMT290和人CD101过表达慢病毒PSE5799(Sango Biotech，220715)感染Jurkat细胞(中国科学院细胞库：CSTR:19375.09.3101HUMTCHU123)并使用嘌呤霉素筛选稳定细胞株。将制备的细胞株分别与CD8a单克隆抗体(PerCP-eFluor 710抗小鼠CD8a，eBioscience，46-0086-42，100μg)、CD101单克隆抗体(PE抗人CD101(BB27)，Biolegend，331012，100μg)、CD366单克隆抗体(PE/Cyanine7抗人CD366(Tim-3)，Biolegend，345014，100μg)和CD160单克隆抗体(APC抗人CD160，Biolegend，341208，100μg)孵育，采用流式细胞荧光分选术(FACS)检测目的基因的表达。如图10所示，结果表明，已成功制备CD101过表达的稳定Jurkat细胞株。

2.嵌合抗体和人源化抗体抑制CD101

将如上所述制备的含CD101靶点的稳定Jurkat细胞株以1.5

表3.流式细胞检测抗体信息

根据上述方法，在待测嵌合抗体和人源化抗体抑制目的抗原的功能实验中，分别检测了待测抗体干预3小时和8小时的效果，检测结果如图11A-11J所示。结果显示，嵌合抗体和人源化抗体干预3小时和8小时后，不同浓度的待测抗体对CD101均有明显的抑制效果。其中在干预3小时时(图11A、11C、11E、11G和11I)，1600ng/ml的不同待测抗体对于CD101的抑制效果可以达到80％左右，同时会降低CD366(TIM3)的表达。TIM3是公认的T细胞耗竭的生物标志物之一。在嵌合抗体和人源化抗体干预8小时后1600ng/ml的待测抗体对于CD101的抑制效果可以达到90％以上，并且可以显著降低耗竭型CD8

由上述结果可知，不同浓度和作用时间条件下的CD101嵌合抗体和人源化抗体均对CD101有显著的亲和力和抑制作用。在后续实验中，以浓度1600ng/ml作用8小时为例检测嵌合抗体和人源化抗体对免疫细胞功能的作用。

实施例5：嵌合抗体和人源化抗体对免疫细胞功能的作用

将如上所述制备的含CD101靶点的稳定Jurkat细胞株以1.5

作为检测指标，IL-2的表达水平可以反映T细胞的激活状态。在许多癌症中T细胞的功能受到抑制，表现为IL-2的表达水平降低。因此，检测IL-2的表达水平可以帮助评估患者的免疫状态，以及免疫治疗的效果，IL-2表达水平上升指示T细胞功能的恢复。IL-2通过刺激T细胞和NK细胞的增殖和活化，增强了宿主的抗肿瘤免疫反应。

检测结果如图12所示，嵌合抗体(CA1)和人源化抗体(hu.CA1-hu.CA4)组的IL-2表达水平均高于慢病毒过表达CD101组，且其中人源化抗体hu.CA4的效果最佳。

实施例6：嵌合抗体和人源化抗体在小鼠体内抑制肿瘤生长

材料和方法

实验采用的5周龄雌性SPF级C57BL/6J小鼠购自广东斯嘉景达生物科技有限公司，经健康检查合格后再进行检疫观察3-7天后用于实验。动物在饲养期间可以自由饮水进食。动物饲养和管理按照广东省中医药科学院的标准操作规程(SOP)和广东省实验动物管理条例规定执行，且所有涉及动物使用和福利的操作和活动在操作前均获得机构动物伦理委员会批准。

以给药开始时间为第0天(D0)。在给药开始前第7天(D-7)给小鼠接种肿瘤(LLC细胞(小鼠Lewis肺癌细胞)，国家生物医学实验细胞资源库，1101MOU-PUMC000673，5x10

结果

实验期间所有动物无死亡，且精神状态、行为活动、饮食和饮水无异常。小鼠体重记录结果如图13所示，CD101抗体实验组小鼠体重与PBS对照组没有显著性差异，说明CD101抗体未对小鼠产生毒副作用，具有良好的安全性。

肿瘤实时测量结果如图14所示。结果显示，与PBS对照组相比，以100μg/只剂量给药的CD101抗体组自第12天起呈现显著抑制肿瘤生长的效果，并且比以200μg/只剂量给药的PD-1抗体具有更明显的抑制效果。

D18取材的肿瘤照片和称重结果分别如图15和图16所示。结果显示，与PBS对照组相比，CD101抗体(给药剂量100μg/只)显著抑制肿瘤生长，且抑制效果优于PD-1抗体(给药剂量200μg/只)。

脏器系数结果如图17所示。结果显示，CD101抗体未对脏器系数产生明显影响，说明CD101对脏器没有明显毒副作用，具有良好的安全性。