抗CD103抗体

相关申请

本申请要求2020年4月30日提交的美国临时申请序列号62/704,258的优先权权益，所述临时申请以全文引用的方式并入本文中。

发明领域

本发明涉及抗CD103抗体，以及这些抗体在疾病的诊断、预后、监测以及治疗中的用途。

发明背景

CD103(整合素αE)为在固有层T细胞、上皮树突细胞、固有层源性树突细胞的亚群以及外周淋巴细胞的小子集上表达的I型膜蛋白。T

免疫检查点蛋白的鉴定和了解以及其在免疫反应中的作用代表癌症疗法的突破点。有了这个发现，工作就集中于阻断免疫检查点路径，以求活化被认为在刺激有用抗肿瘤反应中无效的定向于癌细胞的T细胞。2011年，美国食品和药物管理局(FDA)批准伊匹单抗(Ipilimumab)用于治疗转移性黑素瘤，伊匹单抗是一种结合至CTLA-4并且在功能上将其阻断的抗体。紧跟在伊匹单抗之后，还批准了靶向程序化细胞死亡-1(PD-1)受体的抗体以及其存在于许多癌细胞上的配体程序化死亡-配体1(PD-L1)。这些检查点抑制剂已引起癌症疗法的革命。

尽管显著临床益处是归因于靶向免疫检查点路径的免疫疗法，但大多数癌症患者未能对检查点抑制剂作出反应。特别地，研究表明在患者中检查点抑制可能不充足，从而展示有限的功能T细胞向肿瘤环境中的浸润。此外，虽然T细胞可在肿瘤团块周围的组织中累积，但它们自身可能不与肿瘤细胞相互作用。

尽管它们能够产生T细胞特异性趋化因子并且呈递抗原以及共刺激或抑制信号，但使肿瘤相关抗原呈递细胞呈现最佳姿态以形成抗肿瘤效应子免疫性。组织驻留树突细胞由两个功能特化子集组成：参与CD8

在癌症患者中所报道的CD103

发明内容

在第一方面中，本发明提供了包含以下指定的结构和功能特征的抗CD103抗体和其抗原结合片段。

在各种实施方案中，本发明提供了一种结合至人CD103的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含：

a.重链可变区CDR1，所述重链可变区CDR1包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列或因1、2或3个保守取代而不同于SEQ ID NO:1的氨基酸序列，

b.重链可变区CDR2，所述重链可变区CDR2包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列或因1、2或3个保守取代而不同于SEQ ID NO:2的氨基酸序列，

c.重链可变区CDR3，所述重链可变区CDR3包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列或因1、2或3个保守取代而不同于SEQ ID NO:3的氨基酸序列，

d.轻链可变区CDR1，所述轻链可变区CDR1包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列或因1、2或3个保守取代而不同于SEQ ID NO:4的氨基酸序列，

e.轻链可变区CDR2，所述轻链可变区CDR2包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列或因1、2或3个保守取代而不同于SEQ ID NO:5的氨基酸序列，以及

f.轻链可变区CDR3，所述轻链可变区CDR3包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列或因1、2或3个保守取代而不同于SEQ ID NO:6的氨基酸序列；

或

g.重链可变区CDR1，所述重链可变区CDR1包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列或因1、2或3个保守取代而不同于SEQ ID NO:9的氨基酸序列，

h.重链可变区CDR2，所述重链可变区CDR2包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列或因1、2或3个保守取代而不同于SEQ ID NO:10的氨基酸序列，

i.重链可变区CDR3，所述重链可变区CDR3包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列或因1、2或3个保守取代而不同于SEQ ID NO:11的氨基酸序列，

j.轻链可变区CDR1，所述轻链可变区CDR1包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列或因1、2或3个保守取代而不同于SEQ ID NO:12的氨基酸序列，

k.轻链可变区CDR2，所述轻链可变区CDR2包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列或因1、2或3个保守取代而不同于SEQ ID NO:13的氨基酸序列，以及

l.轻链可变区CDR3，所述轻链可变区CDR3包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列或因1、2或3个保守取代而不同于SEQ ID NO:14的氨基酸序列；

或

m.重链可变区CDR1，所述重链可变区CDR1包含SEQ ID NO:17的氨基酸序列或因1、2或3个保守取代而不同于SEQ ID NO:17的氨基酸序列，

n.重链可变区CDR2，所述重链可变区CDR2包含SEQ ID NO:18的氨基酸序列或因1、2或3个保守取代而不同于SEQ ID NO:18的氨基酸序列，

o.重链可变区CDR3，所述重链可变区CDR3包含SEQ ID NO:19的氨基酸序列或因1、2或3个保守取代而不同于SEQ ID NO:19的氨基酸序列，

p.轻链可变区CDR1，所述轻链可变区CDR1包含SEQ ID NO:20的氨基酸序列或因1、2或3个保守取代而不同于SEQ ID NO:20的氨基酸序列，

q.轻链可变区CDR2，所述轻链可变区CDR2包含SEQ ID NO:21的氨基酸序列或因1、2或3个保守取代而不同于SEQ ID NO:21的氨基酸序列，以及

r.轻链可变区CDR3，所述轻链可变区CDR3包含SEQ ID NO:22的氨基酸序列或因1、2或3个保守取代而不同于SEQ ID NO:22的氨基酸序列；

或

s.重链可变区CDR1，所述重链可变区CDR1包含SEQ ID NO:25的氨基酸序列或因1、2或3个保守取代而不同于SEQ ID NO:25的氨基酸序列，

t.重链可变区CDR2，所述重链可变区CDR2包含SEQ ID NO:26的氨基酸序列或因1、2或3个保守取代而不同于SEQ ID NO:26的氨基酸序列，

u.重链可变区CDR3，所述重链可变区CDR3包含SEQ ID NO:27的氨基酸序列或因1、2或3个保守取代而不同于SEQ ID NO:27的氨基酸序列，

v.轻链可变区CDR1，所述轻链可变区CDR1包含SEQ ID NO:28的氨基酸序列或因1、2或3个保守取代而不同于SEQ ID NO:28的氨基酸序列，

w.轻链可变区CDR2，所述轻链可变区CDR2包含SEQ ID NO:29的氨基酸序列或因1、2或3个保守取代而不同于SEQ ID NO:29的氨基酸序列，以及

x.轻链可变区CDR3，所述轻链可变区CDR3包含SEQ ID NO:30的氨基酸序列或因1、2或3个保守取代而不同于SEQ ID NO:30的氨基酸序列；

或

y.重链可变区CDR1，所述重链可变区CDR1包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列或因1、2或3个保守取代而不同于SEQ ID NO:33的氨基酸序列，

z.重链可变区CDR2，所述重链可变区CDR2包含SEQ ID NO:34的氨基酸序列或因1、2或3个保守取代而不同于SEQ ID NO:34的氨基酸序列，

aa.重链可变区CDR3，所述重链可变区CDR3包含SEQ ID NO:35的氨基酸序列或因1、2或3个保守取代而不同于SEQ ID NO:35的氨基酸序列，

bb.轻链可变区CDR1，所述轻链可变区CDR1包含SEQ ID NO:36的氨基酸序列或因1、2或3个保守取代而不同于SEQ ID NO:36的氨基酸序列，

cc.轻链可变区CDR2，所述轻链可变区CDR2包含SEQ ID NO:37的氨基酸序列或因1、2或3个保守取代而不同于SEQ ID NO:37的氨基酸序列，以及

dd.轻链可变区CDR3，所述轻链可变区CDR3包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列或因1、2或3个保守取代而不同于SEQ ID NO:38的氨基酸序列。

在一个实施方案中，本发明提供了一种结合至人CD103的抗体，所述抗体包含：

a.包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列的重链可变区CDR1，

b.包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列的重链可变区CDR2，

c.包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列的重链可变区CDR3，

d.包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列的轻链可变区CDR1，

e.包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列的轻链可变区CDR2，以及

f.包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列的轻链可变区CDR3。

在一个实施方案中，本发明提供了一种结合至人CD103的抗体，所述抗体包含：

a.包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列的重链可变区CDR1，

b.包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列的重链可变区CDR2，

c.包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列的重链可变区CDR3，

d.包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列的轻链可变区CDR1，

e.包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列的轻链可变区CDR2，以及

f.包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列的轻链可变区CDR3。

在一个实施方案中，本发明提供了一种结合至人CD103的抗体，所述抗体包含：

a.包含SEQ ID NO:17的氨基酸序列的重链可变区CDR1，

b.包含SEQ ID NO:18的氨基酸序列的重链可变区CDR2，

c.包含SEQ ID NO:19的氨基酸序列的重链可变区CDR3，

d.包含SEQ ID NO:20的氨基酸序列的轻链可变区CDR1，

e.包含SEQ ID NO:21的氨基酸序列的轻链可变区CDR2，以及

f.包含SEQ ID NO:22的氨基酸序列的轻链可变区CDR3。

在一个实施方案中，本发明提供了一种结合至人CD103的抗体，所述抗体包含：

a.包含SEQ ID NO:25的氨基酸序列的重链可变区CDR1，

b.包含SEQ ID NO:26的氨基酸序列的重链可变区CDR2，

c.包含SEQ ID NO:27的氨基酸序列的重链可变区CDR3，

d.包含SEQ ID NO:28的氨基酸序列的轻链可变区CDR1，

e.包含SEQ ID NO:29的氨基酸序列的轻链可变区CDR2，以及

f.包含SEQ ID NO:30的氨基酸序列的轻链可变区CDR3。

在一个实施方案中，本发明提供了一种结合至人CD103的抗体，所述抗体包含：

a.包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列的重链可变区CDR1，

b.包含SEQ ID NO:34的氨基酸序列的重链可变区CDR2，

c.包含SEQ ID NO:35的氨基酸序列的重链可变区CDR3，

d.包含SEQ ID NO:36的氨基酸序列的轻链可变区CDR1，

e.包含SEQ ID NO:37的氨基酸序列的轻链可变区CDR2，以及

f.包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列的轻链可变区CDR3。

在一个实施方案中，本发明提供了一种结合至人CD103的抗体，所述抗体包含：

a.重链可变区CDR1，所述重链可变区CDR1包含因1个保守取代而不同于SEQ IDNO:1的氨基酸序列，

b.重链可变区CDR2，所述重链可变区CDR2包含因1个保守取代而不同于SEQ IDNO:2的氨基酸序列，

c.重链可变区CDR3，所述重链可变区CDR3包含因1个保守取代而不同于SEQ IDNO:3的氨基酸序列，

d.轻链可变区CDR1，所述轻链可变区CDR1包含因1个保守取代而不同于SEQ IDNO:4的氨基酸序列，

e.轻链可变区CDR2，所述轻链可变区CDR2包含因1个保守取代而不同于SEQ IDNO:5的氨基酸序列，以及

f.轻链可变区CDR3，所述轻链可变区CDR3包含因1个保守取代而不同于SEQ IDNO:6的氨基酸序列。

在一个实施方案中，本发明提供了一种结合至人CD103的抗体，所述抗体包含：

a.重链可变区CDR1，所述重链可变区CDR1包含因1个保守取代而不同于SEQ IDNO:9的氨基酸序列，

b.重链可变区CDR2，所述重链可变区CDR2包含因1个保守取代而不同于SEQ IDNO:10的氨基酸序列，

c.重链可变区CDR3，所述重链可变区CDR3包含因1个保守取代而不同于SEQ IDNO:11的氨基酸序列，

d.轻链可变区CDR1，所述轻链可变区CDR1包含因1个保守取代而不同于SEQ IDNO:12的氨基酸序列，

e.轻链可变区CDR2，所述轻链可变区CDR2包含因1个保守取代而不同于SEQ IDNO:13的氨基酸序列，以及

f.轻链可变区CDR3，所述轻链可变区CDR3包含因1个保守取代而不同于SEQ IDNO:14的氨基酸序列。

在一个实施方案中，本发明提供了一种结合至人CD103的抗体，所述抗体包含：

a.重链可变区CDR1，所述重链可变区CDR1包含因1个保守取代而不同于SEQ IDNO:17的氨基酸序列，

b.重链可变区CDR2，所述重链可变区CDR2包含因1个保守取代而不同于SEQ IDNO:18的氨基酸序列，

c.重链可变区CDR3，所述重链可变区CDR3包含因1个保守取代而不同于SEQ IDNO:19的氨基酸序列，

d.轻链可变区CDR1，所述轻链可变区CDR1包含因1个保守取代而不同于SEQ IDNO:20的氨基酸序列，

e.轻链可变区CDR2，所述轻链可变区CDR2包含因1个保守取代而不同于SEQ IDNO:21的氨基酸序列，以及

f.轻链可变区CDR3，所述轻链可变区CDR3包含因1个保守取代而不同于SEQ IDNO:22的氨基酸序列。

在一个实施方案中，本发明提供了一种结合至人CD103的抗体，所述抗体包含：

a.重链可变区CDR1，所述重链可变区CDR1包含因1个保守取代而不同于SEQ IDNO:25的氨基酸序列，

b.重链可变区CDR2，所述重链可变区CDR2包含因1个保守取代而不同于SEQ IDNO:26的氨基酸序列，

c.重链可变区CDR3，所述重链可变区CDR3包含因1个保守取代而不同于SEQ IDNO:27的氨基酸序列，

d.轻链可变区CDR1，所述轻链可变区CDR1包含因1个保守取代而不同于SEQ IDNO:28的氨基酸序列，

e.轻链可变区CDR2，所述轻链可变区CDR2包含因1个保守取代而不同于SEQ IDNO:29的氨基酸序列，以及

f.轻链可变区CDR3，所述轻链可变区CDR3包含因1个保守取代而不同于SEQ IDNO:30的氨基酸序列。

在一个实施方案中，本发明提供了一种结合至人CD103的抗体，所述抗体包含：

a.重链可变区CDR1，所述重链可变区CDR1包含因1个保守取代而不同于SEQ IDNO:33的氨基酸序列，

b.重链可变区CDR2，所述重链可变区CDR2包含因1个保守取代而不同于SEQ IDNO:34的氨基酸序列，

c.重链可变区CDR3，所述重链可变区CDR3包含因1个保守取代而不同于SEQ IDNO:35的氨基酸序列，

d.轻链可变区CDR1，所述轻链可变区CDR1包含因1个保守取代而不同于SEQ IDNO:36的氨基酸序列，

e.轻链可变区CDR2，所述轻链可变区CDR2包含因1个保守取代而不同于SEQ IDNO:37的氨基酸序列，以及

f.轻链可变区CDR3，所述轻链可变区CDR3包含因1个保守取代而不同于SEQ IDNO:38的氨基酸序列。

在一个实施方案中，本发明提供了一种结合至人CD103的抗体，所述抗体包含：

a.重链可变区CDR1，所述重链可变区CDR1包含因2个保守取代而不同于SEQ IDNO:1的氨基酸序列，

b.重链可变区CDR2，所述重链可变区CDR2包含因2个保守取代而不同于SEQ IDNO:2的氨基酸序列，

c.重链可变区CDR3，所述重链可变区CDR3包含因2个保守取代而不同于SEQ IDNO:3的氨基酸序列，

d.轻链可变区CDR1，所述轻链可变区CDR1包含因2个保守取代而不同于SEQ IDNO:4的氨基酸序列，

e.轻链可变区CDR2，所述轻链可变区CDR2包含因2个保守取代而不同于SEQ IDNO:5的氨基酸序列，以及

f.轻链可变区CDR3，所述轻链可变区CDR3包含因2个保守取代而不同于SEQ IDNO:6的氨基酸序列。

在一个实施方案中，本发明提供了一种结合至人CD103的抗体，所述抗体包含：

a.重链可变区CDR1，所述重链可变区CDR1包含因2个保守取代而不同于SEQ IDNO:9的氨基酸序列，

b.重链可变区CDR2，所述重链可变区CDR2包含因2个保守取代而不同于SEQ IDNO:10的氨基酸序列，

c.重链可变区CDR3，所述重链可变区CDR3包含因2个保守取代而不同于SEQ IDNO:11的氨基酸序列，

d.轻链可变区CDR1，所述轻链可变区CDR1包含因2个保守取代而不同于SEQ IDNO:12的氨基酸序列，

e.轻链可变区CDR2，所述轻链可变区CDR2包含因2个保守取代而不同于SEQ IDNO:13的氨基酸序列，以及

f.轻链可变区CDR3，所述轻链可变区CDR3包含因2个保守取代而不同于SEQ IDNO:14的氨基酸序列。

在一个实施方案中，本发明提供了一种结合至人CD103的抗体，所述抗体包含：

a.重链可变区CDR1，所述重链可变区CDR1包含因2个保守取代而不同于SEQ IDNO:17的氨基酸序列，

b.重链可变区CDR2，所述重链可变区CDR2包含因2个保守取代而不同于SEQ IDNO:18的氨基酸序列，

c.重链可变区CDR3，所述重链可变区CDR3包含因2个保守取代而不同于SEQ IDNO:19的氨基酸序列，

d.轻链可变区CDR1，所述轻链可变区CDR1包含因2个保守取代而不同于SEQ IDNO:20的氨基酸序列，

e.轻链可变区CDR2，所述轻链可变区CDR2包含因2个保守取代而不同于SEQ IDNO:21的氨基酸序列，以及

f.轻链可变区CDR3，所述轻链可变区CDR3包含因2个保守取代而不同于SEQ IDNO:22的氨基酸序列。

在一个实施方案中，本发明提供了一种结合至人CD103的抗体，所述抗体包含：

a.重链可变区CDR1，所述重链可变区CDR1包含因2个保守取代而不同于SEQ IDNO:25的氨基酸序列，

b.重链可变区CDR2，所述重链可变区CDR2包含因2个保守取代而不同于SEQ IDNO:26的氨基酸序列，

c.重链可变区CDR3，所述重链可变区CDR3包含因2个保守取代而不同于SEQ IDNO:27的氨基酸序列，

d.轻链可变区CDR1，所述轻链可变区CDR1包含因2个保守取代而不同于SEQ IDNO:28的氨基酸序列，

e.轻链可变区CDR2，所述轻链可变区CDR2包含因2个保守取代而不同于SEQ IDNO:29的氨基酸序列，以及

f.轻链可变区CDR3，所述轻链可变区CDR3包含因2个保守取代而不同于SEQ IDNO:30的氨基酸序列。

在一个实施方案中，本发明提供了一种结合至人CD103的抗体，所述抗体包含：

a.重链可变区CDR1，所述重链可变区CDR1包含因2个保守取代而不同于SEQ IDNO:33的氨基酸序列，

b.重链可变区CDR2，所述重链可变区CDR2包含因2个保守取代而不同于SEQ IDNO:34的氨基酸序列，

c.重链可变区CDR3，所述重链可变区CDR3包含因2个保守取代而不同于SEQ IDNO:35的氨基酸序列，

d.轻链可变区CDR1，所述轻链可变区CDR1包含因2个保守取代而不同于SEQ IDNO:36的氨基酸序列，

e.轻链可变区CDR2，所述轻链可变区CDR2包含因2个保守取代而不同于SEQ IDNO:37的氨基酸序列，以及

f.轻链可变区CDR3，所述轻链可变区CDR3包含因2个保守取代而不同于SEQ IDNO:38的氨基酸序列。

在一个实施方案中，本发明提供了一种结合至人CD103的抗体，所述抗体包含：

a.重链可变区CDR1，所述重链可变区CDR1包含因3个保守取代而不同于SEQ IDNO:1的氨基酸序列，

b.重链可变区CDR2，所述重链可变区CDR2包含因3个保守取代而不同于SEQ IDNO:2的氨基酸序列，

c.重链可变区CDR3，所述重链可变区CDR3包含因3个保守取代而不同于SEQ IDNO:3的氨基酸序列，

d.轻链可变区CDR1，所述轻链可变区CDR1包含因3个保守取代而不同于SEQ IDNO:4的氨基酸序列，

e.轻链可变区CDR2，所述轻链可变区CDR2包含因3个保守取代而不同于SEQ IDNO:5的氨基酸序列，以及

f.轻链可变区CDR3，所述轻链可变区CDR3包含因3个保守取代而不同于SEQ IDNO:6的氨基酸序列。

在一个实施方案中，本发明提供了一种结合至人CD103的抗体，所述抗体包含：

a.重链可变区CDR1，所述重链可变区CDR1包含因3个保守取代而不同于SEQ IDNO:9的氨基酸序列，

b.重链可变区CDR2，所述重链可变区CDR2包含因3个保守取代而不同于SEQ IDNO:10的氨基酸序列，

c.重链可变区CDR3，所述重链可变区CDR3包含因3个保守取代而不同于SEQ IDNO:11的氨基酸序列，

d.轻链可变区CDR1，所述轻链可变区CDR1包含因3个保守取代而不同于SEQ IDNO:12的氨基酸序列，

e.轻链可变区CDR2，所述轻链可变区CDR2包含因3个保守取代而不同于SEQ IDNO:13的氨基酸序列，以及

f.轻链可变区CDR3，所述轻链可变区CDR3包含因3个保守取代而不同于SEQ IDNO:14的氨基酸序列。

在一个实施方案中，本发明提供了一种结合至人CD103的抗体，所述抗体包含：

a.重链可变区CDR1，所述重链可变区CDR1包含因3个保守取代而不同于SEQ IDNO:17的氨基酸序列，

b.重链可变区CDR2，所述重链可变区CDR2包含因3个保守取代而不同于SEQ IDNO:18的氨基酸序列，

c.重链可变区CDR3，所述重链可变区CDR3包含因3个保守取代而不同于SEQ IDNO:19的氨基酸序列，

d.轻链可变区CDR1，所述轻链可变区CDR1包含因3个保守取代而不同于SEQ IDNO:20的氨基酸序列，

e.轻链可变区CDR2，所述轻链可变区CDR2包含因3个保守取代而不同于SEQ IDNO:21的氨基酸序列，以及

f.轻链可变区CDR3，所述轻链可变区CDR3包含因3个保守取代而不同于SEQ IDNO:22的氨基酸序列。

在一个实施方案中，本发明提供了一种结合至人CD103的抗体，所述抗体包含：

a.重链可变区CDR1，所述重链可变区CDR1包含因3个保守取代而不同于SEQ IDNO:25的氨基酸序列，

b.重链可变区CDR2，所述重链可变区CDR2包含因3个保守取代而不同于SEQ IDNO:26的氨基酸序列，

c.重链可变区CDR3，所述重链可变区CDR3包含因3个保守取代而不同于SEQ IDNO:27的氨基酸序列，

d.轻链可变区CDR1，所述轻链可变区CDR1包含因3个保守取代而不同于SEQ IDNO:28的氨基酸序列，

e.轻链可变区CDR2，所述轻链可变区CDR2包含因3个保守取代而不同于SEQ IDNO:29的氨基酸序列，以及

f.轻链可变区CDR3，所述轻链可变区CDR3包含因3个保守取代而不同于SEQ IDNO:30的氨基酸序列。

在一个实施方案中，本发明提供了一种结合至人CD103的抗体，所述抗体包含：

a.重链可变区CDR1，所述重链可变区CDR1包含因3个保守取代而不同于SEQ IDNO:33的氨基酸序列，

b.重链可变区CDR2，所述重链可变区CDR2包含因3个保守取代而不同于SEQ IDNO:34的氨基酸序列，

c.重链可变区CDR3，所述重链可变区CDR3包含因3个保守取代而不同于SEQ IDNO:35的氨基酸序列，

d.轻链可变区CDR1，所述轻链可变区CDR1包含因3个保守取代而不同于SEQ IDNO:36的氨基酸序列，

e.轻链可变区CDR2，所述轻链可变区CDR2包含因3个保守取代而不同于SEQ IDNO:37的氨基酸序列，以及

f.轻链可变区CDR3，所述轻链可变区CDR3包含因3个保守取代而不同于SEQ IDNO:38的氨基酸序列。

在各种其他实施方案中，本发明提供了一种结合至人CD103的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含：

a.包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列的抗体或抗原结合片段的重链以及包含SEQ IDNO:8的氨基酸序列的抗体或抗原结合片段的轻链；或

b.包含SEQ ID NO:15的氨基酸序列的抗体或抗原结合片段的重链以及包含SEQID NO:16的氨基酸序列的抗体或抗原结合片段的轻链；或

c.包含SEQ ID NO:23的氨基酸序列的抗体或抗原结合片段的重链以及包含SEQID NO:24的氨基酸序列的抗体或抗原结合片段的轻链；或

d.包含SEQ ID NO:31的氨基酸序列的抗体或抗原结合片段的重链以及包含SEQID NO:32的氨基酸序列的抗体或抗原结合片段的轻链；或

e.包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列的抗体或抗原结合片段的重链以及包含SEQID NO:40的氨基酸序列的抗体或抗原结合片段的轻链；

或在各情况下，序列与给定SEQ ID NO具有至少95％(并且更优选97％或99％)序列相似性或同一性，并且此类序列中的任何差异限于不为所述SEQ ID NO内的CDR序列的一部分的氨基酸。

在一个实施方案中，本发明提供了一种结合至人CD103的抗体，所述抗体包含：包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列的抗体的重链以及包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列的抗体的轻链。

在一个实施方案中，本发明提供了一种结合至人CD103的抗体，所述抗体包含：包含SEQ ID NO:15的氨基酸序列的抗体的重链以及包含SEQ ID NO:16的氨基酸序列的抗体的轻链。

在一个实施方案中，本发明提供了一种结合至人CD103的抗体，所述抗体包含：包含SEQ ID NO:23的氨基酸序列的抗体的重链以及包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的抗体的轻链。

在一个实施方案中，本发明提供了一种结合至人CD103的抗体，所述抗体包含：包含SEQ ID NO:31的氨基酸序列的抗体的重链以及包含SEQ ID NO:32的氨基酸序列的抗体的轻链。

在一个实施方案中，本发明提供了一种结合至人CD103的抗体，所述抗体包含：包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列的抗体的重链以及包含SEQ ID NO:40的氨基酸序列的抗体的轻链。

在一个实施方案中，本发明提供了一种结合至人CD103的抗体，所述抗体包含：抗体的重链，所述重链包含与SEQ ID NO:7具有至少95％(并且更优选97％或最优选99％)序列同一性的氨基酸序列，并且此类序列中的任何差异限于不为SEQ ID NO:7内的CDR序列的一部分的氨基酸；以及抗体的轻链，所述轻链包含与SEQ ID NO:8具有至少95％(并且更优选97％或最优选99％)序列同一性的氨基酸序列，并且此类序列中的任何差异限于不为SEQID NO:8内的CDR序列的一部分的氨基酸。

在一个实施方案中，本发明提供了一种结合至人CD103的抗体，所述抗体包含：抗体的重链，所述重链包含与SEQ ID NO:15具有至少95％(并且更优选97％或最优选99％)序列同一性的氨基酸序列，并且此类序列中的任何差异限于不为SEQ ID NO:15内的CDR序列的一部分的氨基酸；以及抗体的轻链，所述轻链包含与SEQ ID NO:16具有至少95％(并且更优选97％或最优选99％)序列同一性的氨基酸序列，并且此类序列中的任何差异限于不为SEQ ID NO:16内的CDR序列的一部分的氨基酸。

在一个实施方案中，本发明提供了一种结合至人CD103的抗体，所述抗体包含：抗体的重链，所述重链包含与SEQ ID NO:23具有至少95％(并且更优选97％或最优选99％)序列同一性的氨基酸序列，并且此类序列中的任何差异限于不为SEQ ID NO:23内的CDR序列的一部分的氨基酸；以及抗体的轻链，所述轻链包含与SEQ ID NO:24具有至少95％(并且更优选97％或最优选99％)序列同一性的氨基酸序列，并且此类序列中的任何差异限于不为SEQ ID NO:24内的CDR序列的一部分的氨基酸。

在一个实施方案中，本发明提供了一种结合至人CD103的抗体，所述抗体包含：抗体的重链，所述重链包含与SEQ ID NO:31具有至少95％(并且更优选97％或最优选99％)序列同一性的氨基酸序列，并且此类序列中的任何差异限于不为SEQ ID NO:31内的CDR序列的一部分的氨基酸；以及抗体的轻链，所述轻链包含与SEQ ID NO:32具有至少95％(并且更优选97％或最优选99％)序列同一性的氨基酸序列，并且此类序列中的任何差异限于不为SEQ ID NO:32内的CDR序列的一部分的氨基酸。

在一个实施方案中，本发明提供了一种结合至人CD103的抗体，所述抗体包含：抗体的重链，所述重链包含与SEQ ID NO:39具有至少95％(并且更优选97％或最优选99％)序列同一性的氨基酸序列，并且此类序列中的任何差异限于不为SEQ ID NO:39内的CDR序列的一部分的氨基酸；以及抗体的轻链，所述轻链包含与SEQ ID NO:40具有至少95％(并且更优选97％或最优选99％)序列同一性的氨基酸序列，并且此类序列中的任何差异限于不为SEQ ID NO:40内的CDR序列的一部分的氨基酸。

在此情形下，“序列相似性”是基于同一性程度与保守变化的程度的组合。“序列相似性”的百分比为相同的或保守变化的氨基酸或核苷酸的百分比，即“序列相似性”＝序列同一性百分比)+保守变化百分比)。因此，出于本发明的目的，“保守变化”和“同一性”被视为更广义的术语“相似性”的种类。因此，无论何时使用术语序列“相似性”，它均涵盖序列“同一性”和“保守变化”。根据某些实施方案，不管保守变化并且序列相似性百分比指序列同一性百分比。在某些实施方案中，所提到的序列同一性百分比容许的序列变化全部或几乎全部为保守变化；换句话说，当序列具90％同一性时，剩余10％全部或几乎全部为保守变化。在此背景下，术语“几乎全部”是指至少75％的所容许序列变化为保守变化，更优选至少85％，更优选至少90％，并且最优选至少95％。在抗体重链和/或轻链的某些实施方案中，所容许的序列变化在构架区内，而不在CDR中。

在以上实施方案中的任一者中，抗体或其抗原结合片段可为分离的，如所述术语在本文中所定义。

在以上实施方案中的任一者中，抗体或其抗原结合片段为重组抗体，如所述术语在本文中所定义。

在以上实施方案中的任一者中，抗体或其抗原结合片段为全长抗体，如所述术语在本文中所定义。

本发明的抗体或抗原结合片段可从多种物种获得。举例来说，本发明的抗体可包含为兔、小鼠、大鼠、豚鼠、鸡、山羊、绵羊、驴子、人、美洲驼或骆驼序列或此类序列的组合(所谓的嵌合抗体)的免疫球蛋白序列。最优选地，抗体或抗原结合片段为人抗体或抗原结合片段。最优选地，抗体或抗原结合片段为人源化抗体或抗原结合片段。

术语抗体包括保留结合抗原的能力的抗原结合部分，即“抗原结合位点”(例如片段、子序列、互补决定区(CDR))，包括(i)Fab片段，由V

在以上实施方案中的任一者中，抗体或其抗原结合片段为包含两个重链和两个轻链的人抗体或人源化抗体。在一个实施方案中，抗体为IgG。在优选实施方案中，抗体为IgG1、IgG2或IgG4，并且优选为人IgG1、IgG2或IgG4。

在一个实施方案中，本发明的抗CD103抗体包含如以上所述具有两个轻链和两个重链的全长抗体结构，其中每个轻链包含人κ轻链或人λ轻链恒定结构域；并且每个重链包含人IgG1恒定区。

在一个实施方案中，本发明的抗CD103抗体包含如以上所述具有两个轻链和两个重链的全长抗体结构，其中每个轻链包含人κ轻链或人λ轻链恒定结构域；并且每个重链包含人IgG2恒定区。

在一个实施方案中，本发明的抗CD103抗体包含如以上所述具有两个轻链和两个重链的全长抗体结构，其中每个轻链包含人κ轻链或人λ轻链恒定结构域；并且每个重链包含人IgG4恒定区。

在某些实施方案中，本发明的抗CD103抗体可缀合至至少一种用于体内成像研究的诊断标记。在某些实施方案中，本发明的抗CD103抗体的抗原结合片段可缀合至至少一种用于体内成像研究的诊断标记。在某些实施方案中，本发明的抗CD103抗体可缀合至至少一种治疗剂。在某些实施方案中，本发明的抗CD103抗体的抗原结合片段可缀合至至少一种治疗剂。在一个实施方案中，治疗剂为第二抗体或其片段。在一个实施方案中，治疗剂为第二抗体。在一个实施方案中，治疗剂为免疫调节剂。在一个实施方案中，治疗剂为激素。在一个实施方案中，治疗剂为细胞毒性剂。在一个实施方案中，治疗剂为酶。在一个实施方案中，治疗剂为放射性核素。在一个实施方案中，治疗剂为缀合至至少一种免疫调节剂的第二抗体。在一个实施方案中，治疗剂为缀合至至少一种酶的第二抗体。在一个实施方案中，治疗剂为缀合至至少一种放射性标记的第二抗体。在一个实施方案中，治疗剂为缀合至至少一种激素的第二抗体。在一个实施方案中，治疗剂为缀合至至少一种反义寡核苷酸的第二抗体。在一个实施方案中，治疗剂为缀合至至少一种细胞毒性剂的第二抗体。在一个实施方案中，治疗剂为缀合至它们的组合的第二抗体。在一个实施方案中，治疗剂为第二抗体或其片段、免疫调节剂、激素、细胞毒性剂、酶、放射性核素或缀合至至少一种免疫调节剂、酶、放射性标记、激素、反义寡核苷酸或细胞毒性剂的第二抗体中的任一者的组合。在另一实施方案中，诊断标记为适用于PET成像的诊断标记。在另一实施方案中，诊断标记为适用于单光子发射计算机断层扫描(SPECT)成像的诊断标记。在另一实施方案中，诊断标记为适用于MRI的诊断标记。在另一实施方案中，诊断标记为适用于光学成像的诊断标记。在另一实施方案中，诊断标记为适用于(光)声成像等的诊断标记，诸如

本发明还提供了编码本发明的抗CD103抗体或抗原结合片段中的任一者的分离的核酸。

本发明还提供了包含本发明的一种或多种核酸的表达载体。表达载体为包含宿主细胞中靶核酸转录所必需的调控元件的DNA分子。典型地，将靶核酸置于某些调控元件的控制下，所述调控元件包括组成或诱导型启动子、组织特异性调控元件以及增强子元件。当调节元件控制基因的表达时，此类靶核酸被认为“可操作地连接至”调控元件。

这些分离的核酸和包含它们的表达载体可用于在重组宿主细胞中表达本发明的抗体或其抗原结合片段。因此，本发明还提供了包含本发明的表达载体的宿主细胞。

本发明还提供了一种包含本发明的抗CD103抗体或抗原结合片段中的任一者的容器或注射装置。

本发明还提供了一种产生本发明的抗CD103抗体或抗原结合片段的方法，所述方法包括：在有利于编码本发明的抗体(或其抗原结合片段)的重链和/或轻链的多核苷酸的表达的条件下培养包含所述多核苷酸的宿主细胞；以及任选地，从宿主细胞和/或培养基回收抗体或抗原结合片段。在一个实施方案中，编码重链的多核苷酸和编码轻链的多核苷酸位于单个载体中。在另一实施方案中，编码重链的多核苷酸和编码轻链的多核苷酸位于不同载体中。

在另一个方面中，本发明涉及使组织或其他生物试样成像的方法。这些方法包括使生物试样与抗CD103抗体接触，以及检测抗体与存在于生物试样中的CD103的结合的存在或量。因此，将抗CD103抗体用作显像剂。

在一个相关方面中，本发明涉及用于产生包含抗CD103抗体和诊断标记的显像剂的方法。这些方法包括形成抗CD103抗体与诊断标记之间的共价缔合。或者，这些方法包括形成抗CD103抗体与诊断标记之间的非共价缔合。在放射性标记的情况下，可使用包含用于固定放射性金属的第一官能团和用于共价连接至抗体的第二官能团的双官能螯合剂来螯合同位素。此类螯合剂的实例包括但不限于DOTA、NOTA、TRITA、TETA、TACN、轮环藤宁(cyclen)、环拉胺(cyclam)、1,4,7,10-四氮杂环十三烷(homocyclen)、EDTA、DTPA、DOTP以及NOTMP。螯合剂的官能化型式提供了提供可选自由以下组成的组的末端功能部分的键联化学：受保护或未受保护的硫氢基部分、受保护或未受保护的胺部分、受保护或未受保护的羟基部分、伯胺反应性部分、硫氢基反应性部分、光反应性部分、羧基反应性部分、精氨酸反应性部分以及羰基反应性部分。螯合剂的官能化型式提供了提供末端功能部分(即受保护的硫氢基部分)的键联化学。螯合剂的官能化型式提供了提供末端功能部分(即未受保护的硫氢基部分)的键联化学。螯合剂的官能化型式提供了提供末端功能部分(即受保护的胺部分)的键联化学。螯合剂的官能化型式提供了提供末端功能部分(即未受保护的胺部分)的键联化学。螯合剂的官能化型式提供了提供末端功能部分(即受保护的羟基部分)的键联化学。螯合剂的官能化型式提供了提供末端功能部分(即未受保护的羟基部分)的键联化学。螯合剂的官能化型式提供了提供末端功能部分(即胺反应性部分)的键联化学。螯合剂的官能化型式提供了提供末端功能部分(即硫氢基反应性部分)的键联化学。螯合剂的官能化型式提供了提供末端功能部分(即光反应性部分)的键联化学。螯合剂的官能化型式提供了提供末端功能部分(即羧基反应性部分)的键联化学。螯合剂的官能化型式提供了提供末端功能部分(即精氨酸反应性部分)的键联化学。螯合剂的官能化型式提供了提供末端功能部分(即羰基反应性部分)的键联化学。还涵盖直接标记方法，其中还原剂将二硫键转化为游离硫醇，游离硫醇结合至放射性标记。

在各种实施方案中，诊断标记可选自由以下组成的组：酶、核酸、荧光团、生物素、亲和素、链霉亲和素、地高辛(digoxigenin)、麦芽糖、寡聚组氨酸、2,4-二硝基苯、苯基砷酸酯、金属、肽标签、荧光或着色微球、荧光粒子以及着色乳胶粒子。此列表不意在具限制性。在各种实施方案中，诊断标记为酶。在各种实施方案中，诊断标记为核酸。在各种实施方案中，诊断标记为荧光团。在各种实施方案中，诊断标记为生物素。在各种实施方案中，诊断标记为亲和素。在各种实施方案中，诊断标记为链霉亲和素。在各种实施方案中，诊断标记为地高辛。在各种实施方案中，诊断标记为麦芽糖。在各种实施方案中，诊断标记为寡聚组氨酸。在各种实施方案中，诊断标记为2,4-二硝基苯。在各种实施方案中，诊断标记为苯基砷酸酯。在各种实施方案中，诊断标记为金属。在各种实施方案中，诊断标记为肽标签。在各种实施方案中，诊断标记为荧光微球。在各种实施方案中，诊断标记为着色微球。在各种实施方案中，诊断标记为荧光粒子。在各种实施方案中，诊断标记为着色乳胶粒子。此类标记可借助于交联剂缀合至抗体，所述交联剂含有马来酰亚胺、烷基卤化物、芳基卤化物、α-卤代酰基、活化芳基、吡啶基二硫化物、羰基、羧基、硫醇、硫酯、二硫化物、N-羟基-琥珀酰亚胺或环状硫代内酯等。

在某些实施方案中，生物试样为活体内的组织，并且方法为体内成像方法。在某些实施方案中，生物试样为活体内的组织，并且方法为诸如PET成像等体内成像方法。在某些实施方案中，生物试样为活体内的组织，并且方法为体内成像方法单光子发射计算机断层扫描(SPECT)成像。在某些实施方案中，生物试样为活体内的组织，并且方法为体内成像方法MRI。在这些方法中，抗CD103抗体为根据所采用的成像方法的要求可检测标记的。本文中描述了适合的诊断标记，并且包括但不限于

在各种实施方案中，用作显像剂的抗CD103抗体阻断CD103结合至其同源受体E-钙粘蛋白。在各种实施方案中，用作显像剂的抗CD103抗体不阻断CD103结合至其同源受体E-钙粘蛋白。在各种实施方案中，用作显像剂的抗CD103抗体部分阻断CD103结合至其同源受体E-钙粘蛋白。这些类型的抗CD103抗体中的每一者的实例描述于下文中。

在各种实施方案中，使组织或其他生物试样成像的方法使用本发明的抗体作为显像剂。

在各种实施方案中，使组织或其他生物试样成像的方法使用本发明的抗体的抗原结合片段作为显像剂。

在各种实施方案中，使组织或其他生物试样成像的方法使用抗体或其抗原结合片段作为显像剂，所述抗体或其抗原结合片段包含：

a.重链可变区CDR1，所述重链可变区CDR1包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列或因1、2或3个保守取代而不同于SEQ ID NO:1的氨基酸序列，

b.重链可变区CDR2，所述重链可变区CDR2包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列或因1、2或3个保守取代而不同于SEQ ID NO:2的氨基酸序列，

c.重链可变区CDR3，所述重链可变区CDR3包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列或因1、2或3个保守取代而不同于SEQ ID NO:3的氨基酸序列，

d.轻链可变区CDR1，所述轻链可变区CDR1包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列或因1、2或3个保守取代而不同于SEQ ID NO:4的氨基酸序列，

e.轻链可变区CDR2，所述轻链可变区CDR2包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列或因1、2或3个保守取代而不同于SEQ ID NO:5的氨基酸序列，以及

f.轻链可变区CDR3，所述轻链可变区CDR3包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列或因1、2或3个保守取代而不同于SEQ ID NO:6的氨基酸序列；

或

g.重链可变区CDR1，所述重链可变区CDR1包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列或因1、2或3个保守取代而不同于SEQ ID NO:9的氨基酸序列，

h.重链可变区CDR2，所述重链可变区CDR2包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列或因1、2或3个保守取代而不同于SEQ ID NO:10的氨基酸序列，

i.重链可变区CDR3，所述重链可变区CDR3包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列或因1、2或3个保守取代而不同于SEQ ID NO:11的氨基酸序列，

j.轻链可变区CDR1，所述轻链可变区CDR1包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列或因1、2或3个保守取代而不同于SEQ ID NO:12的氨基酸序列，

k.轻链可变区CDR2，所述轻链可变区CDR2包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列或因1、2或3个保守取代而不同于SEQ ID NO:13的氨基酸序列，以及

l.轻链可变区CDR3，所述轻链可变区CDR3包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列或因1、2或3个保守取代而不同于SEQ ID NO:14的氨基酸序列；

或

m.重链可变区CDR1，所述重链可变区CDR1包含SEQ ID NO:17的氨基酸序列或因1、2或3个保守取代而不同于SEQ ID NO:17的氨基酸序列，

n.重链可变区CDR2，所述重链可变区CDR2包含SEQ ID NO:18的氨基酸序列或因1、2或3个保守取代而不同于SEQ ID NO:18的氨基酸序列，

o.重链可变区CDR3，所述重链可变区CDR3包含SEQ ID NO:19的氨基酸序列或因1、2或3个保守取代而不同于SEQ ID NO:19的氨基酸序列，

p.轻链可变区CDR1，所述轻链可变区CDR1包含SEQ ID NO:20的氨基酸序列或因1、2或3个保守取代而不同于SEQ ID NO:20的氨基酸序列，

q.轻链可变区CDR2，所述轻链可变区CDR2包含SEQ ID NO:21的氨基酸序列或因1、2或3个保守取代而不同于SEQ ID NO:21的氨基酸序列，以及

r.轻链可变区CDR3，所述轻链可变区CDR3包含SEQ ID NO:22的氨基酸序列或因1、2或3个保守取代而不同于SEQ ID NO:22的氨基酸序列；

或

s.重链可变区CDR1，所述重链可变区CDR1包含SEQ ID NO:25的氨基酸序列或因1、2或3个保守取代而不同于SEQ ID NO:25的氨基酸序列，

t.重链可变区CDR2，所述重链可变区CDR2包含SEQ ID NO:26的氨基酸序列或因1、2或3个保守取代而不同于SEQ ID NO:26的氨基酸序列，

u.重链可变区CDR3，所述重链可变区CDR3包含SEQ ID NO:27的氨基酸序列或因1、2或3个保守取代而不同于SEQ ID NO:27的氨基酸序列，

v.轻链可变区CDR1，所述轻链可变区CDR1包含SEQ ID NO:28的氨基酸序列或因1、2或3个保守取代而不同于SEQ ID NO:28的氨基酸序列，

w.轻链可变区CDR2，所述轻链可变区CDR2包含SEQ ID NO:29的氨基酸序列或因1、2或3个保守取代而不同于SEQ ID NO:29的氨基酸序列，以及

x.轻链可变区CDR3，所述轻链可变区CDR3包含SEQ ID NO:30的氨基酸序列或因1、2或3个保守取代而不同于SEQ ID NO:30的氨基酸序列；

或

y.重链可变区CDR1，所述重链可变区CDR1包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列或因1、2或3个保守取代而不同于SEQ ID NO:33的氨基酸序列，

z.重链可变区CDR2，所述重链可变区CDR2包含SEQ ID NO:34的氨基酸序列或因1、2或3个保守取代而不同于SEQ ID NO:34的氨基酸序列，

aa.重链可变区CDR3，所述重链可变区CDR3包含SEQ ID NO:35的氨基酸序列或因1、2或3个保守取代而不同于SEQ ID NO:35的氨基酸序列，

bb.轻链可变区CDR1，所述轻链可变区CDR1包含SEQ ID NO:36的氨基酸序列或因1、2或3个保守取代而不同于SEQ ID NO:36的氨基酸序列，

cc.轻链可变区CDR2，所述轻链可变区CDR2包含SEQ ID NO:37的氨基酸序列或因1、2或3个保守取代而不同于SEQ ID NO:37的氨基酸序列，以及

dd.轻链可变区CDR3，所述轻链可变区CDR3包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列或因1、2或3个保守取代而不同于SEQ ID NO:38的氨基酸序列。

在各种其他实施方案中，使组织或其他生物试样成像的方法使用抗体或其抗原结合片段作为显像剂，所述抗体或其抗原结合片段包含：

a.包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列的抗体或抗原结合片段的重链以及包含SEQ IDNO:8的氨基酸序列的抗体或抗原结合片段的轻链；或

b.包含SEQ ID NO:15的氨基酸序列的抗体或抗原结合片段的重链以及包含SEQID NO:16的氨基酸序列的抗体或抗原结合片段的轻链；或

c.包含SEQ ID NO:23的氨基酸序列的抗体或抗原结合片段的重链以及包含SEQID NO:24的氨基酸序列的抗体或抗原结合片段的轻链；或

d.包含SEQ ID NO:31的氨基酸序列的抗体或抗原结合片段的重链以及包含SEQID NO:32的氨基酸序列的抗体或抗原结合片段的轻链；或

e.包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列的抗体或抗原结合片段的重链以及包含SEQID NO:40的氨基酸序列的抗体或抗原结合片段的轻链；

或在各情况下，序列与给定SEQ ID NO具有至少95％(并且更优选97％或99％)序列相似性或同一性，并且此类序列中的任何差异限于不为所述SEQ ID NO内的CDR序列的一部分的氨基酸。

在另一个方面中，本发明涉及使用本发明的抗CD103抗体作为治疗剂的方法。在一个相关方面中，本发明涉及本发明的抗CD103抗体在药剂的制造中的用途。在另一相关方面中，本发明涉及使用本发明的抗CD103抗体来抑制CD103信号传导的方法。在另一相关方面中，本发明涉及使用本发明的抗CD103抗体来阻断CD103结合至E-钙粘蛋白的方法。

在一个实施方案中，所述方法是用于治疗有需要的个体的CD103信号传导介导的疾患，并且所述方法包括向个体施用有效量的本发明的抗CD103抗体，其中所述抗CD103抗体任选偶联至细胞毒性剂。

在一个实施方案中，所述方法是用于治疗有需要的个体的CD103信号传导介导的疾患，并且所述方法包括向个体施用有效量的本发明的抗CD103抗体的抗原结合片段，其中所述抗CD103抗体任选偶联至细胞毒性剂。

在一个实施方案中，所述方法是用于预防有需要的个体的CD103信号传导介导的疾患，并且所述方法包括向个体施用有效量的本发明的抗CD103抗体或其抗原结合片段，其中所述抗CD103抗体任选偶联至细胞毒性剂。

在一个实施方案中，所述方法是用于预防有需要的个体的CD103信号传导介导的疾患，并且所述方法包括向个体施用有效量的本发明的抗CD103抗体的抗原结合片段，其中所述抗CD103抗体任选偶联至细胞毒性剂。

在另一实施方案中，所述方法是用于抑制细胞中的CD103信号传导，并且所述方法包括使细胞与本发明的抗CD103抗体或其抗原结合片段接触。

在另一实施方案中，所述方法是用于抑制CD103结合至存在于细胞上的E-钙粘蛋白，并且所述方法包括使细胞与本发明的抗CD103抗体或其抗原结合片段接触。

在另一实施方案中，所述方法是用于耗尽个体中表达CD103的细胞，并且所述方法包括向个体施用有效量的本发明的抗CD103抗体或其抗原结合片段，其中所述抗CD103抗体任选偶联至细胞毒性剂。

在另一实施方案中，所述方法为用于治疗或预防有需要的个体的选自由以下组成的组的疾病的方法：毛细胞白血病、HCLv、肠内和肠外淋巴瘤、肠道病相关T细胞淋巴瘤(EATL)、成T淋巴细胞性白血病/淋巴瘤(T-ALL)、T细胞前淋巴球性白血病(T-PLL)、成人T细胞白血病/淋巴瘤(ATLL)、蕈样霉菌病(MF)、间变性大细胞淋巴瘤ALCL、皮肤T细胞淋巴瘤(CTCL)、塞扎里综合征(Sezary Syndrome，SS)、阿尔茨海默氏病(Alzheimer’s disease)、帕金森氏病(Parkinson’s disease)、多发性硬化、IgM多发性神经病变、重症肌无力、特应性皮炎、过敏反应、哮喘、全身性发炎反应综合征(SIRS)、败血病、败血性休克、动脉粥样硬化、乳糜泻、皮肌炎、硬皮病、间质性膀胱炎、移植排斥、移植物抗宿主疾病、艾卡迪-古特雷斯综合征(Aicardi-Goutieres Syndrome)、郝-吉二氏早老综合征(Hutchison Guilfordprogeria syndrome)、辛-梅二氏综合征(Singleton-Merten Syndrome)、蛋白酶体相关自体炎性综合征、SAVI(婴儿期发病的STING相关血管病变)、CANDLE(慢性非典型性嗜中性粒细胞皮肤病伴脂肪代谢障碍和体温升高)综合征、冻疮样红斑狼疮、全身性红斑狼疮、类风湿性关节炎、青年类风湿性关节炎、韦格纳氏病(Wegener’s disease)、炎性肠道疾病(例如溃疡性结肠炎、克罗恩氏病(Crohn’s disease))、特发性血小板减少性紫癜、血栓性血小板减少性紫癜、自体免疫血小板减少症、多发性硬化、银屑病、IgA肾病变、IgM多发性神经病变、肾小球性肾炎、自体免疫心肌炎、重症肌无力、血管炎、1型糖尿病、2型糖尿病、舍格伦综合征(Sjorgen’s syndrome)、X-连锁网状色素异常症、多肌炎、脊椎软骨发育不良以及年龄相关性黄斑变性，并且所述方法包括向个体施用有效量的本发明的抗CD103抗体或其抗原结合片段，其中所述抗CD103抗体任选偶联至细胞毒性剂。

在另一实施方案中，所述方法为用于治疗有需要的个体的选自由以下组成的组的疾病的方法：毛细胞白血病、HCLv、肠内和肠外淋巴瘤、肠道病相关T细胞淋巴瘤(EATL)、成T淋巴细胞性白血病/淋巴瘤(T-ALL)、T细胞前淋巴球性白血病(T-PLL)、成人T细胞白血病/淋巴瘤(ATLL)、蕈样霉菌病(MF)、间变性大细胞淋巴瘤ALCL、皮肤T细胞淋巴瘤(CTCL)、塞扎里综合征(SS)、阿尔茨海默氏病、帕金森氏病、多发性硬化、IgM多发性神经病变、重症肌无力、特应性皮炎、过敏反应、哮喘、全身性发炎反应综合征(SIRS)、败血病、败血性休克、动脉粥样硬化、乳糜泻、皮肌炎、硬皮病、间质性膀胱炎、移植排斥、移植物抗宿主疾病、艾卡迪-古特雷斯综合征、郝-吉二氏早老综合征、辛-梅二氏综合征、蛋白酶体相关自体炎性综合征、SAVI(婴儿期发病的STING相关血管病变)、CANDLE(慢性非典型性嗜中性粒细胞皮肤病伴脂肪代谢障碍和体温升高)综合征、冻疮样红斑狼疮、全身性红斑狼疮、类风湿性关节炎、青年类风湿性关节炎、韦格纳氏病、炎性肠道疾病(例如溃疡性结肠炎、克罗恩氏病)、特发性血小板减少性紫癜、血栓性血小板减少性紫癜、自体免疫血小板减少症、多发性硬化、银屑病、IgA肾病变、IgM多发性神经病变、肾小球性肾炎、自体免疫心肌炎、重症肌无力、血管炎、1型糖尿病、2型糖尿病、舍格伦综合征、X-连锁网状色素异常症、多肌炎、脊椎软骨发育不良以及年龄相关性黄斑变性，并且所述方法包括向个体施用有效量的本发明的抗CD103抗体，其中所述抗CD103抗体任选偶联至细胞毒性剂。

在另一实施方案中，所述方法为用于预防有需要的个体的选自由以下组成的组的疾病的方法：毛细胞白血病、HCLv、肠内和肠外淋巴瘤、肠道病相关T细胞淋巴瘤(EATL)、成T淋巴细胞性白血病/淋巴瘤(T-ALL)、T细胞前淋巴球性白血病(T-PLL)、成人T细胞白血病/淋巴瘤(ATLL)、蕈样霉菌病(MF)、间变性大细胞淋巴瘤ALCL、皮肤T细胞淋巴瘤(CTCL)、塞扎里综合征(SS)、阿尔茨海默氏病、帕金森氏病、多发性硬化、IgM多发性神经病变、重症肌无力、特应性皮炎、过敏反应、哮喘、全身性发炎反应综合征(SIRS)、败血病、败血性休克、动脉粥样硬化、乳糜泻、皮肌炎、硬皮病、间质性膀胱炎、移植排斥、移植物抗宿主疾病、艾卡迪-古特雷斯综合征、郝-吉二氏早老综合征、辛-梅二氏综合征、蛋白酶体相关自体炎性综合征、SAVI(婴儿期发病的STING相关血管病变)、CANDLE(慢性非典型性嗜中性粒细胞皮肤病伴脂肪代谢障碍和体温升高)综合征、冻疮样红斑狼疮、全身性红斑狼疮、类风湿性关节炎、青年类风湿性关节炎、韦格纳氏病、炎性肠道疾病(例如溃疡性结肠炎、克罗恩氏病)、特发性血小板减少性紫癜、血栓性血小板减少性紫癜、自体免疫血小板减少症、多发性硬化、银屑病、IgA肾病变、IgM多发性神经病变、肾小球性肾炎、自体免疫心肌炎、重症肌无力、血管炎、1型糖尿病、2型糖尿病、舍格伦综合征、X-连锁网状色素异常症、多肌炎、脊椎软骨发育不良以及年龄相关性黄斑变性，并且所述方法包括向个体施用有效量的本发明的抗CD103抗体，其中所述抗CD103抗体任选偶联至细胞毒性剂。

在各种实施方案中，这些方法使用本发明的抗体。

在各种实施方案中，这些方法使用本发明的抗体的抗原结合片段。

在各种实施方案中，这些方法使用抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含：

a.重链可变区CDR1，所述重链可变区CDR1包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列或因1、2或3个保守取代而不同于SEQ ID NO:1的氨基酸序列，

b.重链可变区CDR2，所述重链可变区CDR2包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列或因1、2或3个保守取代而不同于SEQ ID NO:2的氨基酸序列，

c.重链可变区CDR3，所述重链可变区CDR3包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列或因1、2或3个保守取代而不同于SEQ ID NO:3的氨基酸序列，

d.轻链可变区CDR1，所述轻链可变区CDR1包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列或因1、2或3个保守取代而不同于SEQ ID NO:4的氨基酸序列，

e.轻链可变区CDR2，所述轻链可变区CDR2包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列或因1、2或3个保守取代而不同于SEQ ID NO:5的氨基酸序列，以及

f.轻链可变区CDR3，所述轻链可变区CDR3包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列或因1、2或3个保守取代而不同于SEQ ID NO:6的氨基酸序列；

或

g.重链可变区CDR1，所述重链可变区CDR1包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列或因1、2或3个保守取代而不同于SEQ ID NO:9的氨基酸序列，

h.重链可变区CDR2，所述重链可变区CDR2包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列或因1、2或3个保守取代而不同于SEQ ID NO:10的氨基酸序列，

i.重链可变区CDR3，所述重链可变区CDR3包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列或因1、2或3个保守取代而不同于SEQ ID NO:11的氨基酸序列，

j.轻链可变区CDR1，所述轻链可变区CDR1包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列或因1、2或3个保守取代而不同于SEQ ID NO:12的氨基酸序列，

k.轻链可变区CDR2，所述轻链可变区CDR2包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列或因1、2或3个保守取代而不同于SEQ ID NO:13的氨基酸序列，以及

l.轻链可变区CDR3，所述轻链可变区CDR3包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列或因1、2或3个保守取代而不同于SEQ ID NO:14的氨基酸序列；

或

m.重链可变区CDR1，所述重链可变区CDR1包含SEQ ID NO:17的氨基酸序列或因1、2或3个保守取代而不同于SEQ ID NO:17的氨基酸序列，

n.重链可变区CDR2，所述重链可变区CDR2包含SEQ ID NO:18的氨基酸序列或因1、2或3个保守取代而不同于SEQ ID NO:18的氨基酸序列，

o.重链可变区CDR3，所述重链可变区CDR3包含SEQ ID NO:19的氨基酸序列或因1、2或3个保守取代而不同于SEQ ID NO:19的氨基酸序列，

p.轻链可变区CDR1，所述轻链可变区CDR1包含SEQ ID NO:20的氨基酸序列或因1、2或3个保守取代而不同于SEQ ID NO:20的氨基酸序列，

q.轻链可变区CDR2，所述轻链可变区CDR2包含SEQ ID NO:21的氨基酸序列或因1、2或3个保守取代而不同于SEQ ID NO:21的氨基酸序列，以及

r.轻链可变区CDR3，所述轻链可变区CDR3包含SEQ ID NO:22的氨基酸序列或因1、2或3个保守取代而不同于SEQ ID NO:22的氨基酸序列；

或

s.重链可变区CDR1，所述重链可变区CDR1包含SEQ ID NO:25的氨基酸序列或因1、2或3个保守取代而不同于SEQ ID NO:25的氨基酸序列，

t.重链可变区CDR2，所述重链可变区CDR2包含SEQ ID NO:26的氨基酸序列或因1、2或3个保守取代而不同于SEQ ID NO:26的氨基酸序列，

u.重链可变区CDR3，所述重链可变区CDR3包含SEQ ID NO:27的氨基酸序列或因1、2或3个保守取代而不同于SEQ ID NO:27的氨基酸序列，

v.轻链可变区CDR1，所述轻链可变区CDR1包含SEQ ID NO:28的氨基酸序列或因1、2或3个保守取代而不同于SEQ ID NO:28的氨基酸序列，

w.轻链可变区CDR2，所述轻链可变区CDR2包含SEQ ID NO:29的氨基酸序列或因1、2或3个保守取代而不同于SEQ ID NO:29的氨基酸序列，以及

x.轻链可变区CDR3，所述轻链可变区CDR3包含SEQ ID NO:30的氨基酸序列或因1、2或3个保守取代而不同于SEQ ID NO:30的氨基酸序列；

或

y.重链可变区CDR1，所述重链可变区CDR1包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列或因1、2或3个保守取代而不同于SEQ ID NO:33的氨基酸序列，

z.重链可变区CDR2，所述重链可变区CDR2包含SEQ ID NO:34的氨基酸序列或因1、2或3个保守取代而不同于SEQ ID NO:34的氨基酸序列，

aa.重链可变区CDR3，所述重链可变区CDR3包含SEQ ID NO:35的氨基酸序列或因1、2或3个保守取代而不同于SEQ ID NO:35的氨基酸序列，

bb.轻链可变区CDR1，所述轻链可变区CDR1包含SEQ ID NO:36的氨基酸序列或因1、2或3个保守取代而不同于SEQ ID NO:36的氨基酸序列，

cc.轻链可变区CDR2，所述轻链可变区CDR2包含SEQ ID NO:37的氨基酸序列或因1、2或3个保守取代而不同于SEQ ID NO:37的氨基酸序列，以及

dd.轻链可变区CDR3，所述轻链可变区CDR3包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列或因1、2或3个保守取代而不同于SEQ ID NO:38的氨基酸序列。

应了解，本发明能够具有除所描述的那些实施方案外的实施方案，并且以各种方式实践和执行。另外，应了解，本文以及摘要中所采用的措辞和术语是用于描述目的并且不应被认为具限制性。因而，本领域技术人员将了解，本公开所基于的概念可容易地用作设计用于执行本发明的若干目的的其他结构、方法以及系统的基础。因此，重要的是，权利要求被认为包括此类等效结构，只要它们不背离本发明的精神和范围即可。

附图说明

图1：抗hCD103 mAb与CHO.K1-hCD103/hβ7、CHO.K1-rhCD103/rhβ7以及CHO.K1-hα4/hβ7的细胞ELISA结合数据。

图2：不同hCD103 VL和VH序列的系统进化树。

图3：hCD103.01A、hCD103.05A、hCD103.06A、Fab.hCD103.01.C1、Fab.hCD103.05.C1以及Fab.hCD103.06.C1与CHO.K1.hCD103/hβ7、CHO.K1以及重组人CD103/β7的CELISA结合数据。

图4：AF647-hCD103.01A、AF647-hCD103.05A、AF647-hCD103.06A、AF647-Fab.hCD103.01.C1、AF647-Fab.hCD103.05.C1以及AF647-Fab.hCD103.06.C1分别与CHO.K1.hCD103/hβ7的细胞结合。

图5：对照抗体或抗hCD103 mAb情况下CD8和CD103的肿瘤消化物的代表性染色。

图6：抗hCD103 mAb候选物与CD3+细胞(总T细胞群体)、CD3+CD103+CD8+细胞(T细胞亚群)以及CD33+细胞(骨髓样群体)的结合。N＝10种不同肿瘤消化物。

图7：对照试剂或抗hCD103 Fab情况下CD8和CD103的肿瘤消化物的染色。顶部两行显示亲本Fab(非标记)情况下的染色以及第二抗Fab试剂情况下的检测，而底部两行显示AF647缀合的Fab情况下的染色以及直接读出的结果。

图8：将CD103+CD8+T细胞与我们的CD103 mAb或商业CD103 mAb(克隆BerACT-8，BDbioscience)一起预孵育并且随后与其荧光标记对应物一起孵育以研究mAb之间亲和力和竞争的差异。使用流式细胞术确定荧光标记的mAb的结合百分比。最大结合设定为100％。

图9：在存在抗hCD103 mAb和对照的情况下CD103+T细胞与重组E-钙粘蛋白的结合。将抗体与细胞一起预孵育，然后与重组E-钙粘蛋白(左侧一组柱形图，处理前)一起孵育或首先将细胞与重组E-钙粘蛋白一起孵育，然后添加mAb(右侧一组柱形图，处理)。

图10：Df缀合和亲本抗hCD103 mAb(候选物hCD103.01A和hCD103.05A)或Fab片段(候选物Fab.hCD103.01.C1和Fab.hCD103.05.C1)与CHO.K1-hCD103/hβ7的结合。

图11：不同

图12：

图13A-E：

图14：注射后6天带有CHO.K1-hCD103/hβ7或CHO.K1 WT的小鼠(n＝3)中

图15：注射后24小时带有CHO.K1-hCD103/hβ7(n＝2)或CHO.K1WT的小鼠(n＝3)中

具体实施方式

大多数(如果不是所有)形式的癌症免疫疗法依赖于针对优先或选择性地在癌细胞中表达并且经由细胞表面的主要组织相容性分子(MHC)呈递的抗原诱导基于T细胞的免疫反应。此作用模式或许大部分通过具有高肿瘤突变负荷(TMB)的患者对用阻断程序化死亡-1(PD-1)或其配体(PD-L1)的单克隆抗体治疗的敏锐反应来例示。在努力使有前景的免疫疗法扩展至更多患者的过程中，现已对许多类型的癌症启动了超过2000次(组合)免疫疗法试验。考虑治疗选择如此多，迫切需要可引导药物开发、治疗判定以及评估治疗效果的生物标记物。

成功免疫疗法的标志为肿瘤团块内T细胞(肿瘤浸润性淋巴细胞；TIL)的活性和数目增加。因此，肿瘤病变中的TIL“载荷”代表用于支持免疫疗法患者的选择和监测的有吸引力的生物标记物。不幸的是，存在广谱的TIL，并且并非肿瘤内的每个T细胞均参与抗癌免疫反应。近年来，整合素亚基CD103成为TIL的标记物，用于预示对上皮恶性肿瘤的益处，包括食管癌、黑素瘤、肺癌、乳腺癌、膀胱癌以及所有妇科癌症。重要的是，CD103

目前用于评估TIL载荷的标准是通过对组织活组织切片的免疫组织化学(IHC)来进行。然而，存在若干已知与基于活组织切片的技术相关的障碍，诸如病变的不良可及性、患者的负担、病变内和病变之间的肿瘤异质性以及取样误差。另外，使用当前的技术，难以/不可能跟踪肿瘤病变中随时间推移的T细胞浸润。为克服这些障碍并且获得关于患者的所有肿瘤病变和毒性敏感器官中的TIL载荷的信息，可应用非侵入性全身成像技术。正电子发射断层扫描(PET)为允许肿瘤特征(诸如激素和生长因子受体的表达)的重复、非侵入性临床评估的分子成像技术。PET的特征为高空间分辨率、敏感度以及定量成像信号的可能性。PET可实现肿瘤中CD103

除诊断/预后靶标外，CD103还代表多种疾病中的治疗靶标。举例来说，CD103在包括T细胞、肠道上皮内淋巴细胞以及固有层淋巴细胞的若干淋巴细胞子集中表达。CD103与E-钙粘蛋白之间的相互作用使得淋巴细胞附着于上皮细胞。虽然E-钙粘蛋白在上皮细胞中组成性地表达，但CD103的表达是在体外炎性刺激后在T细胞中被诱导。在涉及CD8+和Th9细胞扩增的病症(诸如炎性肠道疾病)中以及同种异体移植排斥中CD103的阻断具有特别相关性。CD103还由树突细胞表达并且在各种T细胞类型上表达，包括这些细胞的恶性形式。另外，肿瘤相关CD103+CD8 T细胞可具有致耐受性表型，并且CD103+DC显示免疫调节分子的表达并且产生免疫抑制因子，诸如IL-10、TGF-β、IL-35以及吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)，从而引起T细胞无力和凋亡以及Treg的诱导。

因此，结合至CD103并且妨碍其在CD103与E-钙粘蛋白之间的相互作用的分子为用于疾病的候选药物。同样地，结合至CD103的分子可例如用作抗体-药物缀合物的一部分，以出于治疗目的耗尽表达CD103的细胞。

定义

为了可以更容易地理解本发明，某些技术和科学术语具体定义如下。除非此文件中别处特别定义，否则本文中所用的所有其他技术和科学术语具有本发明所属领域技术人员通常所理解的含义。

除非上下文另外明确指示，否则如本文，包括随附权利要求书中所用，诸如“一种”、“一个”以及“所述”等词语的单数形式包括其对应复数参考物。

“施用”和“治疗”在其应用于动物、人、实验受试者、细胞、组织、器官或生物流体时，是指使外源性药物、治疗剂、诊断剂或组合物与动物、人、受试者、细胞、组织、器官或生物流体接触。细胞的处理涵盖使试剂与细胞接触，以及使试剂与流体接触，其中流体与细胞接触。“施用”和“处理”还意指将例如细胞用试剂、诊断剂、结合化合物或用另一细胞进行体外和离体处理。

“治疗(treat/treating)”意指在内部或外部向具有一种或多种疾病症状或疑似患有治疗剂(诸如含有本发明的抗体或抗原结合片段中的任一者的组合物)具有治疗活性的疾病的受试者或患者施用所述剂。典型地，以通过诱导所治疗的受试者或群体的一种或多种疾病症状的消退或抑制其进展达到任何临床可测量程度而有效缓解一种或多种此类症状的量施用所述剂。治疗剂有效缓解任何特定疾病症状的量可根据诸如疾病病况、患者的年龄和体重以及药物在受试者中引发所需反应的能力等因素改变。可通过典型地由医师或其他熟练健康护理提供者用于评估所述症状的严重程度或进展状态的任何临床测量来评估疾病症状是否已缓解。

蛋白质的“重组表达”意指外源性基因在宿主有机体中转录和翻译以产生在本文中称为“重组蛋白”的蛋白质。

如本文所用的术语“正电子发射断层扫描(PET)”是指医学领域中用于帮助诊断疾病的核成像技术。PET允许医师通过产生用其他成像技术不可获得的人体的许多功能的图片而立即对整个患者进行检查。在此方面，PET显示身体如何工作(生理学或功能)而不是简单地它看起来如何的图象。PET成像的应用包括在肿瘤学、心脏病学以及神经病学领域的那些应用。在PET中，将在本文中称为放射性药物的短寿命正电子发射同位素注入患者体内。当向患者施用这些放射性制剂时，它们根据与其稳定对应物相关的生理路径在体内分布。

如本文所用的术语“SPECT”是指“单光子发射计算机断层扫描，单光子发射计算机断层扫描为使用γ射线的核医学断层扫描成像技术。它非常类似于使用γ照相机的常规核医学平面成像并且能够提供真实3D信息。此信息典型地以穿过患者的横截面片子的形式呈现，但可自由地改换格式或按需要进行操纵。基本技术需要通常通过注射至血流中将γ发射同位素(称为放射性核素)递送至患者体内。

出于本说明书或权利要求书的目的，术语“可检测标记”意指间接或直接连接至根据本公开的抗体或其抗原结合片段的标记分子，其中标记分子有助于其中并有它的抗体的检测。因此，“可检测标记”与“标记分子”按同义使用。

如本文所用的术语“显像剂”是指一种标记部分，所述标记部分可用于指示标记和与其连接者在动物或人受试者的细胞或组织或体外条件下在细胞或组织中的位置。虽然剂可包括提供可检测信号(诸如荧光、发光、放射性)的那些剂或可通过诸如MRI成像等方法检测，但在本公开的探针和使用方法的情形下，术语“显像剂”具体地说是指通过诸如PET或SPECT成像技术可检测的标记，诸如但不限于

术语“生物试样”是指来自有机体(例如人患者)或有机体中或来自有机体的组分(例如细胞)的组织、体液或其他样品。样品可为任何生物组织或流体的样品。试样可为“临床样品”，临床样品为来源于患者的样品。此类试样包括但不限于痰液、血液、血细胞(例如白细胞)、羊水、血浆、骨髓以及组织或细针活组织切片样品、尿液、腹膜液以及胸膜液，或来自这些试样的细胞。生物试样还可包括出于组织学目的取得的组织或组织切片(诸如冷冻或石蜡包埋的切片)。生物试样还可称为“患者样品”。

在某些实施方案中，生物试样可为生物内或从生物移除的肿瘤。如本文所用的术语“肿瘤”是指所有赘生性细胞的恶性或良性的生长和增殖，以及所有癌前和癌性细胞和组织。术语“癌症”和“癌性”是指或描述哺乳动物中典型地以无秩序细胞生长为特征的生理条件。具体来说，本公开的探针和组合物大多数有利于肝脏(肝细胞癌)的癌细胞并且尤其是带有磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3膜结合蛋白的表位的此类细胞的检测。

抗CD103抗体和其抗原结合片段

本发明提供了结合人CD103的抗体以及此类抗体的用途。本发明提供了结合人CD103的抗原结合片段以及此类片段的用途。在一些实施方案中，抗CD103抗体为分离的。

抗体是否特异性结合于多肽序列(例如人CD103)可使用本领域已知的任何分析来确定。本领域已知用于确定结合亲和力的分析的实例包括表面等离子共振(例如BIACORE)或类似技术(例如KinExa或OCTET)。

如本文所用，术语“抗体”是指展现所需生物活性的任何形式的抗体。术语抗体包括保留结合抗原的能力的抗原结合部分，即“抗原结合位点”(例如片段、子序列、互补决定区(CDR))，包括(i)Fab片段，由V

本发明包括抗CD103抗原结合片段和其使用方法。

如本文所用，在IgG的情况下，“全长抗体”为包含两个重链和两个轻链的二价分子。每个重链包含V

如本文所用，除非另外指出，否则“抗体片段”或“抗原结合片段”是指抗体的抗原结合片段，即保留特异性结合于全长抗体所结合的抗原的能力的抗体片段，例如保留一个或多个CDR区的片段。抗原结合片段的实例包括但不限于Fab、Fab'、F(ab')

本发明包括抗CD103 Fab片段和其使用方法。“Fab片段”包含一个轻链以及一个重链的C

本发明包括抗CD103抗体和其包含Fc区的抗原结合片段以及其使用方法。“Fc”区含有包含抗体的C

本发明包括抗CD103 Fab'片段和其使用方法。“Fab'片段”含有一个轻链和一个重链的部分或片段，所述重链的部分或片段含有V

本发明包括抗CD103 F(ab’)

本发明包括抗CD103 Fv片段和其使用方法。“Fv区”包含来自重链与轻链的可变区，但缺乏恒定区。

本发明包括抗CD103 scFv片段和其使用方法。术语“单链Fv”或“scFv”抗体是指包含抗体的V

本发明包括抗CD103结构域抗体和其使用方法。“结构域抗体”为仅含有重链的可变区或轻链的可变区的免疫功能免疫球蛋白片段。在一些情况下，用肽接头将两个或更多个V

本发明包括抗CD103二价抗体和其使用方法。“二价抗体”包含两个抗原结合位点。在一些情况下，两个结合位点具有相同的抗原特异性。然而，二价抗体可为双特异性的(参见下文)。

本发明包括抗CD103双抗体和其使用方法。如本文所用，术语“双抗体”是指具有两个抗原结合位点的小抗体片段，所述片段在相同多肽链(V

典型地，当结合活性以摩尔表示时，以某方式修饰的本发明的抗体或抗原结合片段保留其至少10％的所述活性(当与亲本抗体相比时)。优选地，本发明的抗体或抗原结合片段保留作为亲本抗体的CD103结合亲和力的至少20％、50％、70％、80％、90％、95％或100％或更多。还预期本发明的抗体或抗原结合片段可包括基本上不改变其生物活性的保守或非保守氨基酸取代(称为抗体的“保守变体”或“功能保守变体”)。

本发明包括分离的抗CD103抗体和其抗原结合片段以及其使用方法。在本文中，术语“分离”不意在指此类生物分子完全不存在或指存在水、缓冲液或盐或指包括抗体或片段的药物制剂的组分。“分离”的抗体、抗原结合片段、核酸等为已从天然环境的一种或多种组分鉴定并且分离和/或回收的抗体、抗原结合片段、核酸等。在优选实施方案中，将抗体、抗原结合片段、核酸等纯化至75重量％或更多，更优选纯化至90重量％或更多，更优选纯化至95重量％或更多，并且更优选纯化至98重量％或更多。因此，“分离”的生物分子至少部分不含来自产生它们的细胞或细胞培养物的其他生物分子。此类生物分子包括核酸、蛋白质、脂质、碳水化合物或其他材料，诸如细胞碎屑和生长培养基。分离的抗体或抗原结合片段还可至少部分不含来自宿主细胞的表达系统组分(诸如生物分子)或不含其生长培养基。

本发明包括抗CD103嵌合抗体(例如人恒定结构域/小鼠可变结构域)和其使用方法。如本文所用，“嵌合抗体”为具有来自第一抗体的可变结构域和来自第二抗体的恒定结构域的抗体，其中第一和第二抗体来自不同物种。(美国专利号4,816,567；以及Morrison等,(1984)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 81:6851-6855)。典型地，可变结构域获自来自实验动物的抗体(“亲本抗体”)，诸如啮齿动物，并且恒定结构域序列获自人抗体，使得与亲本(例如小鼠)抗体相比，所得嵌合抗体不太可能会在人受试者中引发有害免疫反应。

本发明包括抗CD103人源化抗体和其抗原结合片段(例如已人源化的大鼠或小鼠抗体)以及其使用方法。如本文所用，术语“人源化抗体”是指含有来自人与非人(例如小鼠或大鼠)抗体的序列的抗体形式。一般来说，人源化抗体将包含基本上至少一个并且典型地两个可变结构域，其中所有或基本上所有高变环均对应于非人免疫球蛋白的高变环，并且所有或基本上所有构架(FR)区均为人免疫球蛋白序列的构架区。人源化抗体可任选包含人免疫球蛋白恒定区(Fc)的至少一部分。关于人源化抗体的更多细节参见例如Jones等,Nature,321:522-525(1986)；Reichmann等,Nature,332:323-329(1988)；Presta,Curr.Op.Struct.Biol.,2:593-596(1992)；以及Clark,Immunol.Today 21:397-402(2000)。

一般来说，基础抗体结构单元包含四聚体。每个四聚体包括两对相同的多肽链，每对具有一个“轻”链(约25kDa)和一个“重”链(约50-70kDa)。每个链的氨基端部分包括主要负责抗原识别的约100至110或更多个氨基酸的可变区。重链的羧基端部分可确定主要负责效应功能的恒定区。典型地，人轻链归类为κ和λ轻链。此外，人重链典型地归类为μ、δ、γ、α或ε，并且将抗体的同型分别定义为IgM、IgD、IgG、IgA以及IgE。在轻链和重链内，可变区和恒定区通过约12或更多个氨基酸的“J”区连接，并且重链还包括约多10个氨基酸的“D”区。大体上参见

每个轻/重链对的可变区形成抗体结合位点。因此，一般来说，完整抗体具有两个结合位点。除在双官能或双特异性抗体中外，两个结合位点通常为相同的。

典型地，重链与轻链的可变结构域包含位于相对保守的构架区(FR)内的三个高变区，也称为互补决定区(CDR)。CDR通常根据构架区对齐，使得能够结合至特异性表位。一般来说，从N端到C端，轻链与重链可变结构域均包含FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3以及FR4。氨基酸向每个结构域的分配通常根据

如本文所用，术语“高变区”是指抗体或其抗原结合片段中负责抗原结合的氨基酸残基。高变区包含来自“互补决定区”或“CDR”的氨基酸残基(即轻链可变结构域中的CDRL1、CDRL2和CDRL3以及重链可变结构域中的CDRH1、CDRH2和CDRH3)。参见Kabat等(1991)Sequences of Proteins of Immunological Interest,第5版Public Health Service,National Institutes of Health,Bethesda,Md.(通过序列定义抗体的CDR区)；还参见Chothia和Lesk(1987)J.Mol.Biol.196:901-917(通过结构定义抗体的CDR区)。如本文所用，术语“构架”或“FR”残基是指除本文中定义为CDR残基的高变区残基外的那些可变结构域残基。

“分离的核酸分子”或“分离的多核苷酸”意指不与分离的多核苷酸天然地存在于其中的多核苷酸的全部或一部分相关联或与不与其天然相关的多核苷酸相关的基因组、mRNA、cDNA或合成来源的DNA或RNA或它们的一些组合。出于本公开的目的，应了解“包含特定核苷酸序列的核酸分子”不涵盖完整染色体。“包含”指定核酸序列的分离的核酸分子除指定序列外还可包括多达十种或甚至多达二十种或更多其他蛋白质或其部分或片段的编码序列，或可包括可操作地连接的调控序列，所述调控序列控制所列举的核酸序列的编码区的表达，和/或可包括载体序列。

短语“控制序列”是指可操作地连接的编码序列在特定宿主有机体中表达所必需的DNA序列。适合于原核生物的控制序列例如包括启动子，任选操纵子序列，以及核糖体结合位点。真核细胞已知使用启动子、聚腺苷酸化信号以及增强子。

当将核酸或多核苷酸置于与另一核酸序列的功能关系中时，核酸或多核苷酸为“可操作地连接”的。举例来说，如果表述为参与多肽的分泌的前蛋白，那么前序列或分泌前导子的DNA可操作地连接至多肽的DNA；如果启动子或增强子影响序列的转录，那么它可操作地连接至编码序列；或如果核糖体结合位点经过定位以便有助于翻译，那么它可操作地连接至编码序列。通常但不总是，“可操作地连接”意味着连接的DNA序列为连续的，并且在分泌前导子的情况下，连续并且位于阅读相中。然而，增强子不必为连续的。在方便的限制位点通过连结实现连接。如果此类位点不存在，那么根据常规作法使用合成寡核苷酸衔接子或接头。

如本文所用，表述“细胞”、“细胞系”以及“细胞培养物”可互换使用并且所有此类命名均包括后代。因此，词语“转化体”和“转化的细胞”包括原代受试者细胞以及由其衍生的培养物，不考虑转移次数。还应了解，归因于故意或偶然的突变，并非所有后代均将具有恰好相同的DNA含量。包括具有与在最初转化的细胞中筛选时相同的功能或生物活性的突变体后代。在预期使用不同命名的情况下，它由上下文将为清楚的。

如本文所用，“生殖系序列”是指未重排免疫球蛋白DNA序列的序列。可使用任何适合的来源的未重排免疫球蛋白序列。举例来说，可从美国国家卫生研究所国家关节和肌肉骨骼和皮肤疾病研究所(National Institute of Arthritis and Musculoskeletal andSkin Diseases of the United States National Institutes of Health)的网站上的JOINSOLVER生殖系数据库获得人生殖系序列。举例来说，可如Giudicelli等(2005)NucleicAcids Res.33:D256-D261中所描述获得小鼠生殖系序列。

结合亲和力

举例来说但不限于，本文所公开的抗体可如通过表面等离子共振(例如BIACORE)或类似技术(例如KinExa或生物层干涉术(OCTET))所确定以10x10

制备抗体和其抗原结合片段的方法

因此，本发明包括用于制备本发明的抗CD103抗体或其抗原结合片段的方法，所述方法包括在有利于此类抗体或片段表达的条件下培养表达抗体或片段的杂交瘤细胞，以及任选地，从杂交瘤和/或生长培养基(例如细胞培养基)分离抗体或片段。

本文所公开的抗CD103抗体还可重组产生(例如在大肠杆菌(E.coli)/T7表达系统、哺乳动物细胞表达系统或较低等真核生物表达系统中)。在此实施方案中，可将编码本发明的抗体免疫球蛋白分子(例如V

存在若干本领域已知用于产生重组抗体的方法。美国专利号4,816,567中公开了用于重组制备抗体的方法的一个实例。

可通过用于将多核苷酸引入宿主细胞中的任何已知方法进行转化。用于将异源多核苷酸引入哺乳动物细胞中的方法为本领域熟知的并且包括右旋糖酐介导的转染、磷酸钙沉淀、聚凝胺介导的转染、原生质体融合、电穿孔、将一种或多种多核苷酸封装于脂质体中、生物弹射击注射以及将DNA直接微量注射至核中。此外，可通过病毒载体将核酸分子引入哺乳动物细胞中。转化细胞的方法为本领域熟知的。参见例如美国专利号4,399,216；4,912,040；4,740,461以及4,959,455。

因此，本发明包括用于制备本发明的抗CD103抗体或其抗原结合片段或其免疫球蛋白链的重组方法，所述重组方法包括引入编码抗体或片段的一个或多个免疫球蛋白链(例如重免疫球蛋白链和/或轻免疫球蛋白链)的多核苷酸；在有利于此类表达的条件下培养宿主细胞(例如CHO或毕赤酵母属(Pichia)或巴斯德毕赤氏酵母(Pichia pastoris))，以及任选地，从宿主细胞和/或宿主细胞生长的培养基分离抗体或片段或链。

还可通过美国专利号6,331,415中所列的方法中的任一者来合成抗CD103抗体。

作为宿主用于表达本文公开的抗体或片段或免疫球蛋白链的真核和原核宿主细胞(包括哺乳动物细胞)为本领域熟知并且包括可购自美国典型培养物保藏中心(AmericanType Culture Collection，ATCC)的许多永生化细胞系。这些细胞系尤其包括中国仓鼠卵巢(CHO)细胞、NSO、SP2细胞、HeLa细胞、幼仓鼠肾(BHK)细胞、猴肾细胞(COS)、人肝细胞癌细胞(例如Hep G2)、A549细胞、3T3细胞、HEK-293细胞以及许多其他细胞系。哺乳动物宿主细胞包括人细胞、小鼠细胞、大鼠细胞、狗细胞、猴细胞、猪细胞、山羊细胞、牛细胞、马细胞以及仓鼠细胞。通过确定哪些细胞系具有高表达水平来选择特定优选的细胞系。可使用的其他细胞系为昆虫细胞系(诸如Sf9细胞)、两栖动物细胞、细菌细胞、植物细胞以及真菌细胞。真菌细胞包括酵母和丝状真菌细胞，包括例如巴斯德毕赤酵母、芬兰毕赤酵母(Pichiafinlandica)、喜海藻糖毕赤酵母(Pichia trehalophila)、考拉姆毕赤酵母(Pichiakoclamae)、膜醭毕赤酵母(Pichia membranaefaciens)、微小毕赤酵母(Pichia minuta)(微小绪方酵母(Ogataea minuta)、林氏毕赤酵母(Pichia lindneri))、仙人掌毕赤酵母(Pichia opuntiae)、耐热毕赤酵母(Pichia thermotolerans)、柳毕赤酵母(Pichiasalictaria)、顾氏毕赤酵母(Pichia guercuum)、皮杰普氏毕赤酵母(Pichia pijperi)、树干毕赤酵母(Pichia stiptis)、甲醇毕赤酵母(Pichia methanolica)、毕赤酵母属(Pichiasp.)、酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)、糖酵母属(Saccharomyces sp.)、多形汉逊酵母(Hansenula polymorpha)、克鲁维酵母属(Kluyveromyces sp.)、乳酸克鲁维酵母(Kluyveromyces lactis)、白色念珠菌(Candida albicans)、构巢曲霉(Aspergillusnidulans)、黑曲霉(Aspergillus niger)、米曲霉(Aspergillus oryzae)、里氏木霉(Trichoderma reesei)、金小孢子菌(chrysosporium lucknowense)、镰刀菌属(Fusariumsp.)、禾镰刀菌(Fusarium gramineum)、片镰刀菌(Fusarium venenatum)、小立碗藓(Physcomitrella patens)以及粗糙脉胞霉(Neurospora crassa)。毕赤酵母属、任何糖酵母属、多形汉逊酵母、任何克鲁维酵母属、白色念珠菌、任何曲霉属、里氏木霉、金小孢子菌、任何镰刀菌属、解脂耶氏酵母(Yarrowia lipolytica)以及粗糙脉胞霉。当将编码重链或抗原结合部分或其片段和/或轻链或其抗原结合片段的重组表达载体引入哺乳动物宿主细胞中时，通过将宿主细胞培养足以允许抗体或片段或链在宿主细胞中表达或分泌至宿主细胞生长的培养基中的时间来产生抗体。

可使用标准蛋白质纯化方法从培养基回收抗体和其抗原结合片段以及免疫球蛋白链。另外，本发明的抗体和其抗原结合片段以及免疫球蛋白链(或由其产生的其他部分)从制备细胞系表达可使用许多已知技术来增强。举例来说，谷氨酰胺合成酶基因表达系统(GS系统)为在某些条件下增强表达的常用方法。与欧洲专利号0216846、0256055以及0323997和0338841结合整体或部分地论述GS系统。因此，在本发明的一个实施方案中，哺乳动物宿主细胞(例如CHO)缺乏谷氨酰胺合成酶基因，并且在培养基中不存在谷氨酰胺的情况下生长，然而其中，编码免疫球蛋白链的多核苷酸包含谷氨酰胺合成酶基因，这弥补了宿主细胞中所述基因的缺乏。

本发明包括用于纯化本发明的抗CD103抗体或其抗原结合片段的方法，所述方法包括将包含抗体或片段的样品引入纯化培养基(例如阳离子交换培养基、阴离子交换培养基、疏水性交换培养基、亲和力纯化培养基(例如蛋白质-A、蛋白质-G、蛋白质-A/G、蛋白质-L))以及从所述样品的未结合至培养基的流穿级分收集纯化的抗体或片段；或弃去流穿级分并且从培养基洗脱结合的抗体或片段并且收集洗脱物。在本发明的一个实施方案中，培养基位于施加样品的柱子中。在本发明的一个实施方案中，在抗体或片段在宿主细胞中的重组表达之后进行纯化方法，例如其中首先将宿主细胞溶解并且任选地，对溶解产物进行纯化以去除不溶性材料，然后在培养基上纯化。

一般来说，特定细胞系或转基因动物中产生的糖蛋白将具有作为所述细胞系或转基因动物中产生的糖蛋白的特征的糖基化模式。因此，抗体的特定糖基化模式将取决于用于产生抗体的特定细胞系或转基因动物。然而，由本文所提供的核酸分子编码或包含本文所提供的氨基酸序列的所有抗体构成本发明，与抗体可能具有的糖基化模式无关。类似地，在特定实施方案中，具有仅包含非海藻糖基化N-聚糖的糖基化模式的抗体可为有利的，因为这些抗体已显示在体外与体内均典型地展现比其海藻糖基化对应物更有效的功效(参见例如Shinkawa等,J.Biol.Chem.278:3466-3473(2003)；美国专利号6,946,292和7,214,775)。这些具有非海藻糖基化N-聚糖的抗体不可能为免疫原性的，因为其碳水化合物结构为存在于人血清IgG中的群体的正常组分。

本发明还包括本文所公开的抗CD103抗体的抗CD103抗原结合片段。抗体片段包括F(ab)

可根据重链的恒定结构域的氨基酸序列将免疫球蛋白分配至不同类别。在一些实施方案中，可将不同恒定结构域连接至来源于本文所提供的CDR的人源化V

在一个实施方案中，抗体或抗原结合片段包含重链恒定区，例如人恒定区，诸如γ1、γ2、γ3或γ4人重链恒定区或其变体。在另一实施方案中，抗体或抗原结合片段包含轻链恒定区，例如人轻链恒定区，诸如λ或κ人轻链区域或其变体。举例来说但不限于，人重链恒定区可为γ4并且人轻链恒定区可为κ。在一个替代实施方案中，抗体的Fc区为具有Ser228Pro突变的γ4(Schuurman,J等,Mol.Immunol.38:1-8,2001)。

在一个实施方案中，抗体或抗原结合片段包含IgG1亚型的重链恒定区。在一个实施方案中，抗体或抗原结合片段包含IgG2亚型的重链恒定区。在一个实施方案中，抗体或抗原结合片段包含IgG4亚型的重链恒定区。

抗体工程化

还包括其中抗CD103抗体和其抗原结合片段为工程化抗体以包括对抗体的可变结构域内的构架残基的修饰例如从而改善抗体或片段的特性的实施方案。典型地，进行此类构架修饰以降低抗体或片段的免疫原性。这通常通过将亲本(例如啮齿动物)抗体或片段中的可变结构域中的非CDR残基(即构架残基)用来自要使用抗体的物种的免疫谱的类似残基(例如在人治疗剂情况下的人残基)置换来实现。此类抗体或片段称为“人源化”抗体或片段。在一些情况下，需要增加亲和力，或改变工程化(例如人源化)抗体的特异性。一种方法为使一个或多个构架残基突变为对应生殖系序列。更具体来说，已经历体细胞突变的抗体或片段可含有不同于衍生出抗体的生殖系序列的构架残基。可通过将抗体或片段构架序列与衍生出抗体或片段的生殖系序列进行比较来鉴定此类残基。另一方法为在工程化(例如人源化)抗体的一个或多个位置恢复为原始亲本(例如啮齿动物)残基，以例如恢复在置换构架残基过程中可能已损失的结合亲和力。(参见例如美国专利号5,693,762、美国专利号5,585,089以及美国专利号5,530,101)。

在某些实施方案中，对抗CD103抗体和其抗原结合片段进行工程化(例如人源化)以在构架和/或CDR中包括修饰从而改善其特性。此类工程化改变可为基于分子模型化的。可构建亲本(非人)抗体序列的可变区的分子模型以理解抗体的结构特征并且用于鉴定抗体上可与抗原相互作用的潜在区域。常规CDR是基于免疫球蛋白序列的比对和可变区的鉴定。Kabat等,(1991)

另一类型的构架修饰涉及使构架区内或甚至一个或多个CDR区内的一个或多个残基突变，以移除T细胞表位，从而降低抗体的潜在免疫原性。此方法也被称为“去免疫”并且进一步详细描述于美国专利号7,125,689中。

在特定实施方案中，将需要使含有暴露的侧链的某些氨基酸变成另一氨基酸残基，以使最终抗体具有更大化学稳定性，从而避免去酰胺化或异构化。天冬酰胺的去酰胺化可发生在NG、DG、NG、NS、NA、NT、QG或QS序列上并且使得形成异天冬氨酸残基，异天冬氨酸残基将扭折引入多肽链中并且降低其稳定性(异天冬氨酸效应)。异构化可发生在DG、DS、DA或DT序列处。在某些实施方案中，本公开的抗体不含去酰胺化或天冬酰胺异构位点。

举例来说，可使天冬酰胺(Asn)残基变成Gln或Ala以降低在任何Asn-Gly序列处特别是在CDR内形成异天冬氨酸的可能性。类似问题可发生在Asp-Gly序列处。Reissner和Aswad(2003)Cell.Mol.Life Sci.60:1281。异天冬氨酸形成可削弱或完全消除抗体与其靶抗原的结合。参见Presta(2005)J.Allergy Clin.Immunol.116:731，第734页。在一个实施方案中，使天冬酰胺变成谷氨酰胺(Gln)。可能还需要改变天冬酰胺(Asn)或谷氨酰胺(Gln)残基附近的氨基酸以降低去酰胺化的可能性，当天冬酰胺或谷氨酰胺附近出现小氨基酸时以更大速率发生去酰胺化。参见Bischoff和Kolbe(1994)J.Chromatog.662:261。此外，可使CDR中的任何甲硫氨酸残基(典型地溶剂暴露Met)变成Lys、Leu、Ala或Phe或其他氨基酸，以降低甲硫氨酸硫将氧化的可能性，所述氧化可降低抗原-结合亲和力并且还在最终抗体制剂中促成分子异质性。同上。另外，为了预防或最小化潜在的易断裂的Asn-Pro肽键的断裂，可能需要使在CDR中发现的任何Asn-Pro组合变成Gln-Pro、Ala-Pro或Asn-Ala。随后对具有此类取代的抗体进行筛选，以确保所述取代不会使抗体对CD103的亲和力或特异性或其他所需生物活性降低至不可接受的水平。

表2.示例性稳定化CDR变体

另一类型的构架修饰涉及使构架区内的一个或多个残基突变以防止聚集。抗体发生聚集的风险可使用空间聚集倾向来评估，参见Chennamsetty,N等(2010)J.Phys.Chem.114,6614-6624。所述方法需要计算每个原子的溶剂可及面积(SAA)。然后将分子聚集得分计算为所有原子得分的总和。对于给定半径和尺寸的分子，这为其总体聚集倾向的近似指示。将具有高聚集得分的残基用具有较低得分的残基(例如更亲水的氨基酸)置换。

Fc区的抗体工程化

还可对本文所公开的抗体(例如人源化抗体)和其抗原结合片段进行工程化以在Fc区内包括修饰，典型地从而改变抗体的一种或多种特性，诸如血清半衰期、补体结合、Fc受体结合和/或效应功能(例如抗原依赖性细胞毒性)。此外，可对本文所公开的抗体和其抗原结合片段进行化学修饰(例如可使一个或多个化学部分连接至抗体)或进行修饰从而改变其糖基化，又从而改变抗体或片段的一种或多种特性。以下进一步详细描述这些实施方案中的每一者。Fc区中残基的编号为Kabat的EU索引的编号。

本文所公开的抗体和其抗原结合片段还包括具有修饰(或阻断)的Fc区以提供改变的效应功能的抗体和片段。参见例如美国专利号5,624,821；WO2003/086310；WO2005/120571；WO2006/0057702。可使用此类修饰来增强或抑制免疫系统的各种反应，在诊断和治疗中可能具有有益效应。Fc区的改变包括氨基酸改变(取代、缺失以及插入)、糖基化或去糖基化以及添加多个Fc区。对Fc的改变还可改变治疗性抗体中的抗体的半衰期，从而使得能够更不频繁地投用并且因此增加方便性并且减少材料的使用。参见Presta(2005)J.Allergy Clin.Immunol.116:731,第734-35页。

在一个实施方案中，本发明的抗体或抗原结合片段为IgG4同型抗体或片段，所述IgG4同型抗体或片段在重链恒定区的铰链区中对应于位置228的位置包含丝氨酸至脯氨酸突变(S228P；EU索引；SEQ ID NO:66)。此突变已被报道消除铰链区中重链间二硫键的异质性(Angal等(1993).Mol.Immunol.30:105-108；位置241是基于Kabat编号系统)。

在本发明的一个实施方案中，对CH1的铰链区进行修饰，使得铰链区中半胱氨酸残基的数目增加或减少。美国专利号5,677,425中进一步描述了此方法。改变CH1的铰链区中半胱氨酸残基的数目，以例如有助于轻链和重链的组装或增加或降低抗体的稳定性。

在另一实施方案中，使本发明的抗体或抗原结合片段的Fc铰链区突变，以缩短抗体或片段的生物半衰期。更具体地说，将一个或多个氨基酸突变引入Fc-铰链片段的CH2-CH3结构域界面区中，使得相对于天然Fc-铰链结构域SpA结合，抗体或片段具有受损的葡萄球菌蛋白质A(SpA)结合。美国专利号6,165,745中进一步详细描述了此方法。

在另一实施方案中，对本发明的抗体或抗原结合片段进行修饰，以增加其生物半衰期。各种方法均为可能的。举例来说，可如美国专利号6,277,375中所描述引入以下突变中的一者或多者：T252L、T254S、T256F。或者，为了增加生物半衰期，可如美国专利号5,869,046和6,121,022中所描述在CH1或CL区内改变抗体，以含有从IgG的Fc区的CH2结构域的两个环取得的挽救受体结合表位。

在其他实施方案中，通过将至少一个氨基酸残基用不同氨基酸残基置换来改变Fc区，以改变抗体或抗原结合片段的一种或多种效应功能。举例来说，可将选自氨基酸残基234、235、236、237、297、318、320以及322的一个或多个氨基酸用不同氨基酸残基置换，使得抗体对效应子配体具有改变的亲和力并且保留亲本抗体的抗原结合能力。亲和力改变的效应子配体可为例如Fc受体或补体的C1组分。美国专利号5,624,821和5,648,260中进一步详细描述了此方法。

在另一个实例中，可将选自氨基酸残基329、331以及322的一个或多个氨基酸用不同氨基酸残基置换，使得抗体具有改变的C1q结合和/或降低或消除的补体依赖性细胞毒性(CDC)。美国专利号6,194,551中进一步详细描述了此方法。

在另一个实例中，改变氨基酸位置231和239内的一个或多个氨基酸残基，从而改变抗体固定补体的能力。PCT公布WO 94/29351中进一步描述了此方法。

本发明的蛋白质(所述蛋白质优选为抗体并且最优选为IgG抗体或其片段)可具有改变(例如相对于未修饰的抗体)的FcγR结合特性(结合特性的实例包括但不限于结合特异性、平衡解离常数(K

Fc区对其配体的亲和力和结合特性可通过本领域已知用于确定Fc-FcγR相互作用(即Fc区对FcγR的特异性结合)的多种体外分析方法(基于生物化学或免疫的分析)来确定，所述体外分析方法包括但不限于平衡法(例如酶联免疫吸收分析(ELISA)或放射免疫分析(RIA))或动力学(例如

在某些实施方案中，本发明的蛋白质结合至一种或多种人FcγR。在某些实施方案中，本发明的蛋白质以比具有野生型人IgG1重链恒定结构域(SEQ ID NO:119)Fc区的等效蛋白质小至少10倍、优选至少30倍并且更优选至少100倍的亲和力结合至选自由以下组成的组的一种或多种人FcγR：FcγRI、FcγRIIB、FcγRIIC、FcγRIIIA-F158以及FcγRIIIA-V158。在某些实施方案中，本发明的蛋白质以比具有野生型人IgG1重链恒定结构域(SEQ IDNO:119)Fc区的等效蛋白质小至少10倍、优选至少30倍并且更优选至少100倍的亲和力结合人FcγRI。在某些实施方案中，本发明的蛋白质以比具有野生型人IgG1重链恒定结构域(SEQ ID NO:119)Fc区的等效蛋白质小至少10倍、优选至少30倍并且更优选至少100倍的亲和力结合人FcγRIIB。在某些实施方案中，本发明的蛋白质以比具有野生型人IgG1重链恒定结构域(SEQ ID NO:119)Fc区的等效蛋白质小至少10倍、优选至少30倍并且更优选至少100倍的亲和力结合人FcγRIIC。在某些实施方案中，本发明的蛋白质以比具有野生型人IgG1重链恒定结构域(SEQ ID NO:119)Fc区的等效蛋白质小至少10倍、优选至少30倍并且更优选至少100倍的亲和力结合人FcγRIIIA-F158。在某些实施方案中，本发明的蛋白质以比具有野生型人IgG1重链恒定结构域(SEQ ID NO:119)Fc区的等效蛋白质小至少10倍、优选至少30倍并且更优选至少100倍的亲和力结合人FcγRIIIA-V158。在某些实施方案中，本发明的蛋白质以比具有野生型人IgG4重链恒定结构域(SEQ ID NO:66)Fc区的等效蛋白质小至少10倍、优选至少30倍并且更优选至少100倍的亲和力结合至选自由以下组成的组的一种或多种人FcγR：FcγRI、FcγRIIB、FcγRIIC、FcγRIIIA-F158以及FcγRIIIA-V158。在某些实施方案中，本发明的蛋白质以比具有野生型人IgG4重链恒定结构域(SEQ ID NO:66)Fc区的等效蛋白质小至少10倍、优选至少30倍并且更优选至少100倍的亲和力结合人FcγRI。在某些实施方案中，本发明的蛋白质以比具有野生型人IgG4重链恒定结构域(SEQ IDNO:66)Fc区的等效蛋白质小至少10倍、优选至少30倍并且更优选至少100倍的亲和力结合人FcγRIIB。在某些实施方案中，本发明的蛋白质以比具有野生型人IgG4重链恒定结构域(SEQ ID NO:66)Fc区的等效蛋白质小至少10倍、优选至少30倍并且更优选至少100倍的亲和力结合人FcγRIIC。在某些实施方案中，本发明的蛋白质以比具有野生型人IgG4重链恒定结构域(SEQ ID NO:66)Fc区的等效蛋白质小至少10倍、优选至少30倍并且更优选至少100倍的亲和力结合人FcγRIIIA-F158。在某些实施方案中，本发明的蛋白质以比具有野生型人IgG4重链恒定结构域(SEQ ID NO:66)Fc区的等效蛋白质小至少10倍、优选至少30倍并且更优选至少100倍的亲和力结合人FcγRIIIA-V158。

在各种实施方案中，本发明的蛋白质包含免疫球蛋白Fc区，所述免疫球蛋白Fc区包含免疫球蛋白C2区和免疫球蛋白C3区以及免疫球蛋白铰链区。举例来说，免疫球蛋白Fc区可为IgG Fc区、IgE Fc区或IgA Fc区。在某些优选实施方案中，蛋白质包含两个免疫球蛋白Fc区，每个免疫球蛋白Fc区包含免疫球蛋白C2区和免疫球蛋白C3区以及免疫球蛋白铰链区，其中免疫球蛋白Fc区中的一者的铰链区结合至另一免疫球蛋白Fc区的铰链区以形成二聚Fc结构。最优选地，此类蛋白质为人IgG蛋白或人源化IgG蛋白。

在某些实施方案中，本发明的蛋白质包含突变IgG4 Fc区，并且优选地蛋白质为包含两个突变IgG4 Fc区以形成二聚Fc结构的IgG。举例来说，突变IgG4 Fc区可包含表3中列举的突变或突变组合中的一者。此表中提到的恒定区的编号系统为如Kabat等(1991,NIH出版91-3242,National Technical Information Service,Springfield,VA)中所阐述的EU索引的编号系统。在表中，第一个字母和数字表示未修饰的氨基酸和其位置并且第二个字母表示在所述位置的取代的氨基酸。对于包括超过一个突变的组合的那些条目，组合中的每个突变用“/”隔开。缺失由“Δ指示。

表3：

在某些实施方案中，本发明的蛋白质包含突变IgG1 Fc区，并且优选地蛋白质为包含两个突变IgG1 Fc区以形成二聚Fc结构的IgG。举例来说，突变IgG1 Fc区可包含表4中列举的突变中的一者。此表中提到的恒定区的编号系统为如Kabat等(1991,NIH出版91-3242,National Technical Information Service,Springfield,VA)中所阐述的EU索引的编号系统。在表中，第一个字母和数字表示未修饰的氨基酸和其位置并且第二个字母表示在所述位置的取代的氨基酸。

表4：

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在某些实施方案中，突变IgG1 Fc区可包含表5中列举的突变组合中的一者。此表中提到的恒定区的编号系统为如Kabat等(1991,NIH出版91-3242,National TechnicalInformation Service,Springfield,VA)中所阐述的EU索引的编号系统。在表中，第一个字母和数字表示未修饰的氨基酸和其位置并且第二个字母表示在所述位置的取代的氨基酸。对于超过一个突变的组合中的每一者，组合中的每个突变用“/”隔开并且缺失由“Δ”指示。

表5：

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在某些实施方案中，本发明的蛋白质包含野生型或突变IgG2 Fc区，并且优选地蛋白质为包含两个野生型或突变IgG2 Fc区以形成二聚Fc结构的IgG。突变IgG2 Fc区可包含表6中列举的突变或突变组合中的一者。此表中提到的恒定区的编号系统为如Kabat等(1991,NIH出版91-3242,National Technical Information Service,Springfield,VA)中所阐述的EU索引的编号系统。在表中，第一个字母和数字表示未修饰的氨基酸和其位置并且第二个字母表示在所述位置的取代的氨基酸。对于包括超过一个突变的组合的那些条目，组合中的每个突变用“/”隔开。

表6：

具有修饰的糖基化的抗体的制备

在另一个实施方案中，本发明的抗体或抗原结合片段包含特定糖基化模式。举例来说，可制备非海藻糖基化或去糖基化抗体或片段(即，抗体分别缺乏海藻糖或糖基化)。可改变抗体或片段的糖基化模式，以例如增加抗体或片段对CD103抗原的亲和力或亲合力。此类修饰可通过例如改变抗体或片段序列内的糖基化位点中的一者或多者来实现。举例来说，可进行一个或多个氨基酸取代，使得移除可变区构架糖基化位点中的一者或多者从而消除所述位点的糖基化。此类去糖基化可增加抗体或片段对抗原的亲和力或亲合力。参见例如美国专利号5,714,350和6,350,861。

本文所公开的抗体和抗原结合片段还可包括在已进行基因工程化以产生具有哺乳动物样或人样糖基化模式的糖蛋白的较低等真核生物宿主细胞，特别是真菌宿主细胞，诸如酵母和丝状真菌中产生的那些抗体和抗原结合片段(参见例如Choi等,(2003)Proc.Natl.Acad.Sci.100:5022-5027；Hamilton等,(2003)Science 301:1244-1246；Hamilton等,(2006)Science 313:1441-1443；Nett等,Yeast 28(3):237-52(2011)；Hamilton等,Curr Opin Biotechnol.18(5):387-92(2007))。这些基因修饰的宿主细胞优于当前使用的哺乳动物细胞系的一个特定优点为能够控制细胞中产生的糖蛋白的糖基化型态，使得可产生其中特定N-聚糖结构占主导的糖蛋白组合物(参见例如美国专利号7,029,872和美国专利号7,449,308)。已使用这些基因修饰的宿主细胞产生了主要具有特定N-聚糖结构的抗体(参见例如Li等,(2006)Nat.Biotechnol.24:210-215)。

在特定实施方案中，本文所公开的抗体和其抗原结合片段还包括在较低等真核宿主细胞中产生的并且包含海藻糖基化和非海藻糖基化杂合和复合N-聚糖的那些抗体和其抗原结合片段，所述N-聚糖包括二等分和多触角物质，包括但不限于诸如以下N-聚糖：GlcNAc

在特定实施方案中，本文所提供的抗体和其抗原结合片段可包含具有至少一种选自由以下组成的组的杂合N-聚糖的抗体或片段：GlcNAcMan

在特定实施方案中，本文所提供的抗体和其抗原结合片段包含具有至少一种选自由以下组成的组的复合N-聚糖的抗体和片段：GlcNAcMan

在特定实施方案中，N-聚糖为海藻糖基化的。一般来说，海藻糖与N-聚糖还原端的GlcNAcα1,3-键联，与N-聚糖还原端的GlcNAcα1,6-键联，与N-聚糖非还原端的Galα1,2-键联，与N-聚糖非还原端的GlcNacα1,3-键联，或与N-聚糖非还原端的GlcNAcα1,4-键联。

因此，在以上糖蛋白组合物的特定方面中，糖型呈α1,3-键联或α1,6-键联海藻糖形式以产生选自由以下组成的组的糖型：Man

在其他方面中，抗体(例如人源化抗体)或其抗原结合片段包含高甘露糖N-聚糖，包括但不限于Man

在以上其他方面中，复合N-聚糖还包括海藻糖基化和非海藻糖基化二等分和多触角物质。

如本文所用，术语“N-聚糖”和“糖型”可互换使用并且指N-键联寡糖，例如通过天冬酰胺-N-乙酰葡糖胺键联连接至多肽的天冬酰胺残基的N-键联寡糖。N-键联糖蛋白含有连接至蛋白质中的天冬酰胺残基的酰胺氮的N-乙酰葡糖胺残基。存在于糖蛋白上的主导糖为葡萄糖、半乳糖、甘露糖、海藻糖、N-乙酰半乳糖胺(GalNAc)、N-乙酰葡糖胺(GlcNAc)以及唾液酸(例如N-乙酰基-神经氨酸(NANA))。糖基团的加工在ER的管腔中与翻译同时进行并且对于N-键联糖蛋白来说在翻译后在高尔基氏体中继续进行。

N-聚糖具有Man

就复合N-聚糖来说，术语“G-2”、“G-1”、“G0”、“G1”、“G2”、“A1”以及“A2”含义如下。“G-2”是指可表征为Man3GlcNAc2的N-聚糖结构；术语“G-1”是指可表征为GlcNAcMan3GlcNAc2的N-聚糖结构；术语“G0”是指可表征为GlcNAc2Man3GlcNAc2的N-聚糖结构；术语“G1”是指可表征为GalGlcNAc2Man3GlcNAc2的N-聚糖结构；术语“G2”是指可表征为Gal2GlcNAc2Man3GlcNAc2的N-聚糖结构；术语“A1”是指可表征为NANAGal2GlcNAc2Man3GlcNAc2的N-聚糖结构；并且术语“A2”是指可表征为NANA2Gal2GlcNAc2Man3GlcNAc2的N-聚糖结构。除非另外指出，否则术语G-2”、“G-1”、“G0”、“G1”、“G2”、“A1”以及“A2”是指在N-聚糖的还原端缺乏连接至GlcNAc残基的海藻糖的N-聚糖物质。当所述术语包括“F”时，“F”表明N-聚糖物质在N-聚糖还原端的GlcNAc残基上含有海藻糖残基。举例来说，G0F、G1F、G2F、A1F以及A2F全部表明N-聚糖还包括在N-聚糖的还原端连接至GlcNAc残基的海藻糖残基。较低等真核生物(诸如酵母和丝状真菌)通常不产生会产生海藻糖的N-聚糖。

就多触角N-聚糖来说，术语“多触角N-聚糖”是指还包含以下的N-聚糖：包含N-聚糖的1,6臂或1,3臂的非还原端的甘露糖残基上的GlcNAc残基，或包含N-聚糖的1,6臂和1,3臂的非还原端的甘露糖残基中的每一者上的GlcNAc残基。因此，多触角N-聚糖可由式GlcNAc(2-4)Man3GlcNAc2、Gal(1-4)GlcNAc(2-4)Man3GlcNAc2或NANA(1-4)Gal(1-4)GlcNAc(2-4)Man3GlcNAc2表征。术语“1-4”是指1、2、3或4个残基。

就二等分N-聚糖来说，术语“二等分N-聚糖”是指其中GlcNAc残基连接至N-聚糖还原端的甘露糖残基的N-聚糖。二等分N-聚糖可由式GlcNAc3Man3GlcNAc2表征，其中每个甘露糖残基在其非还原端连接至GlcNAc残基。相比之下，当多触角N-聚糖表征为GlcNAc3Man3GlcNAc2时，所述式子表明两个GlcNAc残基连接至在N-聚糖的两个臂中的一者的非还原端的甘露糖残基，并且一个GlcNAc残基连接至在N-聚糖的另一臂的非还原端的甘露糖残基。

在某些实施方案中，本发明的蛋白质包含去糖基化Fc区。举例来说，IgG1 Fc区可通过缺失或取代残基N297而去糖基化。

抗体物理性质

本文所公开的抗体和其抗原结合片段可还在轻链或重链免疫球蛋白可变区中含有一个或多个糖基化位点。此类糖基化位点可使得抗体或片段的免疫原性增加或因改变抗原结合而改变抗体的pK(Marshall等(1972)Annu Rev Biochem 41:673-702；Gala和Morrison(2004)J Immunol 172:5489-94；Wallick等(1988)J Exp Med 168:1099-109；Spiro(2002)Glycobiology 12:43R-56R；Parekh等(1985)Nature 316:452-7；Mimura等(2000)Mol Immunol 37:697-706)。已知在含有N-X-S/T序列的基序处发生糖基化。

每个抗体或抗原结合片段将具有独特的等电点(pI)，所述等电点通常属于6与9.5之间的pH值范围内。IgG1抗体的pI典型地属于7-9.5的pH值范围内并且IgG4抗体的pI典型地属于6-8的pH值范围内。

每个抗体或抗原结合片段将具有特征解链温度，并且解链温度越高指示体内总稳定性越大(Krishnamurthy R和Manning MC(2002)Curr Pharm Biotechnol

在另一个实施方案中，选择不会快速降解的抗体和其抗原结合片段。抗体或片段的降解可使用毛细管电泳(CE)和MALDI-MS(Alexander AJ和Hughes DE(1995)Anal Chem

在另一个实施方案中，选择具有最小聚集效应的抗体和其抗原结合片段，聚集效应可导致触发不想要的免疫反应和/或改变或不利的药代动力学特性。通常，聚集25％或更少、20％或更少、15％或更少、10％或更少或5％或更少的抗体和片段为可接受的。聚集可通过若干技术来测量，包括尺寸排阻柱(SEC)、高效液相色谱(HPLC)以及光散射。

抗体缀合物

本文所公开的抗CD103抗体还可缀合至化学部分。本文所公开的抗CD103抗原结合片段还可缀合至化学部分。化学部分可尤其为聚合物。化学部分可尤其为放射性核苷酸。化学部分可尤其为细胞毒性因子。在特定实施方案中，化学部分为增加抗体或片段在受试者体内的半衰期的聚合物。适合的聚合物包括但不限于亲水性聚合物。此类亲水性聚合物可包括但不限于聚乙二醇(PEG)(例如分子量为2kDa、5kDa、10kDa、12kDa、20kDa、30kDa或40kDa的PEG)。此类亲水性聚合物可包括但不限于右旋糖酐。此类亲水性聚合物可包括但不限于单甲氧基聚乙二醇(mPEG)。Lee等,(1999)(Bioconj.Chem.10:973-981)公开了PEG缀合的单链抗体。Wen等(2001)(Bioconj.Chem.12:545-553)公开了使抗体与连接至放射性金属螯合剂(二乙三胺五乙酸(DTPA))的PEG缀合。

本文所公开的抗体和其抗原结合片段还可与诸如以下的标记缀合：

本文所公开的抗体还可为聚乙二醇化的，以例如增加其生物(例如血清)半衰期。本文所公开的抗原结合片段还可为聚乙二醇化的。为使抗体或片段聚乙二醇化，典型地在其中一个或多个PEG基团变得连接至抗体或抗体片段的条件下，使抗体或片段与反应形式的聚乙二醇(PEG)(诸如PEG的反应性酯或醛衍生物)反应。在特定实施方案中，经由与反应性PEG分子(或类似反应性水溶性聚合物)的酰化反应或烷基化反应进行聚乙二醇化。如本文所用，术语“聚乙二醇”旨在涵盖已用于衍生其他蛋白质的PEG形式中的任一者，诸如单(C1-C10)烷氧基-聚乙二醇或芳氧基-聚乙二醇或聚乙二醇-马来酰亚胺。在某些实施方案中，要聚乙二醇化的抗体或片段为去糖基化抗体或片段。用于使蛋白质聚乙二醇化的方法为本领域已知的并且可应用于本发明的抗体。参见例如EP 0 154 316和EP 0 401 384。

本文所公开的抗体还可与荧光标记缀合。本文所公开的抗体还可与化学发光标记缀合。本文所公开的抗原结合片段还可与荧光标记缀合。本文所公开的抗原结合片段还可与化学发光标记缀合。这包括荧光团(诸如稀土螯合物、荧光素以及其衍生物)、罗丹明和其衍生物、异硫氰酸酯、藻红素、藻蓝素、别藻蓝素、邻苯二甲醛、荧光胺、

本发明的抗体还可缀合至细胞毒性剂。本发明的抗体的抗原结合片段还可缀合至细胞毒性剂。本发明的抗体和其抗原结合片段还可缀合至细胞毒性剂，诸如澳瑞他汀F(auristatin F)、帕西他赛(paclitaxel)、多西他赛(docetaxel)、长春新碱、CC-1065、SN-38、拓扑替康(topotecan)、吗啉基多柔比星(morpholino doxorubicin)、溶胞菌素(lysoxin)、氰基吗啉基多柔比星、多拉司他汀-10(Dolastatin-10)、棘霉素、康普瑞汀(combretatstatin)、卡奇霉素(chalicheamicin)、美登素(maytansine)、DM-1、纺锤菌素、白喉毒素、绿脓杆菌(Pseudomonas aeruginosa)外毒素A链、篦麻毒素A链、相思豆毒素A链、蒴莲根毒素A链、α-八叠球菌素、油桐(Aleurites fordii)蛋白和化合物(例如脂肪酸)、石竹素蛋白、美洲商陆(Phytoiacca americana)蛋白PAPI、PAPII以及PAP-S、苦瓜(momordicacharantia)抑制剂、麻风树毒素、巴豆毒素、肥皂草(saponaria officinalis)抑制剂、丝林霉素、局限曲菌素、酚霉素以及伊诺霉素(enomycin)。此列表不意在具限制性。本发明的抗体可缀合至澳瑞他汀F。本发明的抗体可缀合至帕西他赛。本发明的抗体可缀合至多西他赛。本发明的抗体可缀合至长春新碱。本发明的抗体可缀合至CC-1065。本发明的抗体可缀合至SN-38。本发明的抗体可缀合至拓扑替康。本发明的抗体可缀合至吗啉基多柔比星。本发明的抗体可缀合至溶胞菌素。本发明的抗体可缀合至氰基吗啉基多柔比星。本发明的抗体可缀合至多拉司他汀-10。本发明的抗体可缀合至棘霉素。本发明的抗体可缀合至康普瑞汀。本发明的抗体可缀合至卡奇霉素。本发明的抗体可缀合至美登素。本发明的抗体可缀合至DM-1。本发明的抗体可缀合至纺锤菌素。本发明的抗体可缀合至白喉毒素。本发明的抗体可缀合至绿脓杆菌外毒素A链。本发明的抗体可缀合至篦麻毒素A链。本发明的抗体可缀合至相思豆毒素A链。本发明的抗体可缀合至蒴莲根毒素A链。本发明的抗体可缀合至α-八叠球菌素。本发明的抗体可缀合至油桐蛋白和化合物(例如脂肪酸)。本发明的抗体可缀合至石竹素蛋白。本发明的抗体可缀合至美洲商陆蛋白PAPI。本发明的抗体可缀合至美洲商陆蛋白PAPII。本发明的抗体可缀合至美洲商陆蛋白PAP-S。本发明的抗体可缀合至苦瓜抑制剂。本发明的抗体可缀合至麻风树毒素。本发明的抗体可缀合至巴豆毒素。本发明的抗体可缀合至肥皂草抑制剂。本发明的抗体可缀合至丝林霉素。本发明的抗体可缀合至局限曲菌素。本发明的抗体可缀合至酚霉素。本发明的抗体可缀合至伊诺霉素。本发明的抗体的抗原结合片段可缀合至澳瑞他汀F。本发明的抗体的抗原结合片段可缀合至帕西他赛。本发明的抗体的抗原结合片段可缀合至多西他赛。本发明的抗体的抗原结合片段可缀合至长春新碱。本发明的抗体的抗原结合片段可缀合至CC-1065。本发明的抗体的抗原结合片段可缀合至SN-38。本发明的抗体的抗原结合片段可缀合至拓扑替康。本发明的抗体的抗原结合片段可缀合至吗啉基多柔比星。本发明的抗体可缀合至溶胞菌素。本发明的抗体的抗原结合片段可缀合至氰基吗啉基多柔比星。本发明的抗体的抗原结合片段可缀合至多拉司他汀-10。本发明的抗体的抗原结合片段可缀合至棘霉素。本发明的抗体的抗原结合片段可缀合至康普瑞汀。本发明的抗体的抗原结合片段可缀合至卡奇霉素。本发明的抗体的抗原结合片段可缀合至美登素。本发明的抗体的抗原结合片段可缀合至DM-1。本发明的抗体的抗原结合片段可缀合至纺锤菌素。本发明的抗体的抗原结合片段可缀合至白喉毒素。本发明的抗体的抗原结合片段可缀合至绿脓杆菌外毒素A链。本发明的抗体可缀合至篦麻毒素A链。本发明的抗体的抗原结合片段可缀合至相思豆毒素A链。本发明的抗体的抗原结合片段可缀合至蒴莲根毒素A链。本发明的抗体的抗原结合片段可缀合至α-八叠球菌素。本发明的抗体的抗原结合片段可缀合至油桐蛋白和化合物(例如脂肪酸)。本发明的抗体的抗原结合片段可缀合至石竹素蛋白。本发明的抗体的抗原结合片段可缀合至美洲商陆蛋白PAPI。本发明的抗体的抗原结合片段可缀合至美洲商陆蛋白PAPII。本发明的抗体的抗原结合片段可缀合至美洲商陆蛋白PAP-S。本发明的抗体的抗原结合片段可缀合至苦瓜抑制剂。本发明的抗体的抗原结合片段可缀合至麻风树毒素。本发明的抗体的抗原结合片段可缀合至巴豆毒素。本发明的抗体的抗原结合片段可缀合至肥皂草抑制剂。本发明的抗体的抗原结合片段可缀合至丝林霉素。本发明的抗体的抗原结合片段可缀合至局限曲菌素。本发明的抗体的抗原结合片段可缀合至酚霉素。本发明的抗体的抗原结合片段可缀合至伊诺霉素。

本发明的抗体还可缀合至抗癌剂。本发明的抗体还可缀合至抗癌剂，诸如诸如埃罗替尼(erlotinib)(

本发明的抗体的抗原结合片段还可缀合至抗癌剂。本发明的抗体的抗原结合片段还可缀合至抗癌剂，诸如诸如埃罗替尼(

本文的抗体和抗原结合片段可使用顺磁性螯合物、微粒、超顺磁性粒子进行可检测标记；合并至超声气泡、微粒、微球、乳液等中。

金属螯合剂为具有一个或多个极性基团的分子，所述一个或多个极性基团充当顺磁性金属的配体并且与其复合。适合的螯合剂为本领域已知的并且包括具有亚甲基膦酸基团、亚甲基碳酸羟胺酸基团、羧基亚乙基基团或羧基亚甲基基团的酸。螯合剂的实例包括但不限于二亚乙基三胺五乙酸(DTPA)、1,4,7,10-四氮杂环-十四烷-1,4,7,10-四乙酸(DOTA)、1-取代的1,4,7-三羧基甲基-1,4,7,10-四氮杂环十二烷(DO3A)、乙二胺四乙酸(EDTA)以及1,4,8,11-四氮杂环十四烷-1,4,8,11-四乙酸(TETA)。其他螯合配体为亚乙基双-(2-羟基-苯基甘氨酸)(EHPG)和其衍生物，包括5-C1-EHPG、5Br-EHPG、5-Me-EHPG、5t-Bu-EHPG以及5sec-Bu-EHPG；苯并二亚乙基三胺五乙酸(苯并-DTPA)和其衍生物，包括二苯并-DTPA、苯基-DTPA、二苯基-DTPA、苯甲基-DTPA以及二苯甲基DTPA；双-2(羟基苯甲基)-亚乙基-二胺二乙酸(HBED)和其衍生物；含有至少3个碳原子、更优选至少6个碳原子以及至少两个杂原子(O和/或N)的大环化合物类别，所述大环化合物可由一个环或在杂环元素处连接在一起的两个或三个环组成，例如苯并-DOTA、二苯并-DOTA以及苯并-NOTA(其中NOTA为1,4,7-三氮杂环壬烷N,N′,N″-三乙酸)、苯并-TETA、苯并-DOTMA(其中DOTMA为1,4,7,10-四氮杂环十四烷-1,4,7,10-四(甲基四乙酸))以及苯并-TETMA(其中TETMA为1,4,8,11-四氮杂环十四烷-1,4,8,11-(甲基四乙酸))；1,3-亚丙基-二胺四乙酸(PDTA)和三亚乙基四胺六乙酸(TTHA)的衍生物；1,5,10-N,N′,N″-三(2,3-二羟基苯甲酰基)-三儿茶酚酯(LICAM)的衍生物；以及1,3,5-N,N′,N″-三(2,3-二羟基苯甲酰基)氨基甲基苯(MECAM)。WO 98/18496、WO 86/06605、WO 91/03200、WO 95/28179、WO 96/23526、WO 97/36619、PCT/US98/01473、PCT/US98/20182以及美国专利号4,899,755、美国专利号5,474,756、美国专利号5,846,519以及美国专利号6,143,274中描述了本发明涵盖的代表性螯合剂和螯合基团的实例，所有这些专利以引用的方式并入本文中。

可使用本领域已知用于使本发明的抗体和其抗原结合片段缀合至各种部分的任何方法，包括Hunter等,(1962)Nature 144:945；David等,(1974)Biochemistry 13:1014；Pain等,(1981)J.Immunol.Meth.40:219；以及Nygren,J.,(1982)Histochem.andCytochem.30:407描述的那些方法。用于缀合抗体和片段的方法为本领域中常规的并且非常熟知的方法。

化学交联剂可基于以下各项来归类：

1.官能团和化学特异性；

2.交联桥的长度和组成；

3.交联基团类似(同双官能)还是不同(异双官能)；

4.基团发生化学反应还是光化学反应；

5.试剂是否可裂解；以及

6.试剂可为放射性标记的还是用另一标记标记的。

抗体和标记上可使用交联剂靶向的反应性基团包括伯胺、羰基、碳水化合物以及羧酸。此外，可使用诸如光反应性苯基叠氮化合物等交联剂对许多反应性基团进行非选择性偶联。关于适合的试剂，参见Pierce 2003-2004Applications Handbook and Catalog#1600926，所述参考文献以引用的方式并入本文中。

必须考虑许多因素来确定最佳交联剂与靶标摩尔比。根据应用，缀合程度为一个重要因素。举例来说，当制备免疫原缀合物时，通常需要高程度的缀合以增加抗原的免疫原性。然而，当缀合至抗体或酶时，低至中缀合程度可为最佳的，以确保蛋白质的生物活性被保留。考虑蛋白质表面的反应性基团的数目同样重要。如果存在许多靶标基团，那么可使用较低的交联剂与蛋白质比率。对于有限的潜在靶标数目，可能需要较高的交联剂与蛋白质比率。对于小分子量蛋白质来说，这转化成每克有更多交联剂。

还可通过在相互作用之前和之后进行交联研究对与特定相互作用相关的蛋白质构象变化进行分析。通过使用不同臂长的交联剂并且分析缀合的成功来进行比较。当蛋白质构象改变时，可能需要使用具有不同反应性基团和/或间隔臂的交联剂，使得受阻的氨基酸变得可用于交联。

具有不同长度的连接反应性末端的间隔臂或桥的交联剂为可获得的。桥的最明显属性是它能够处理要连接的部分的空间考虑因素。因为空间效应指示用于交联的潜在反应位点之间的距离，可针对相互作用考虑不同长度的桥。在分子内交联研究中常常使用较短的间隔臂，而分子间交联偏好使用含有较长间隔臂的交联剂。

在某些情况下，交联剂中包括聚合物部分(例如聚乙二醇(“PEG”)均聚物、聚丙二醇均聚物、其他烷基-聚氧化乙烯、双聚氧化乙烯以及聚(氧化烯)的共聚物或阻断共聚物)可为有利的。参见例如美国专利5,643,575、5,672,662、5,705,153、5,730,990、5,902,588以及5,932,462；以及Topchieva等,Bioconjug.Chem.6:380-8,1995)。举例来说，美国专利5,672,662公开了包含PEG聚合物部分和单个酯键的双官能交联剂。在水中，此类分子被认为提供约10至25分钟的半衰期。

设计交联剂涉及选择要使用的功能部分。功能部分的选择完全取决于要交联的物质上可获得的靶位点。一些物质(例如蛋白质)可存在许多可用于靶向的位点(例如赖氨酸ε-氨基、半胱氨酸巯基、谷氨酸羧基等)，并且可根据经验来进行特定功能部分的选择，以最佳地保留所关注的生物学性质(例如抗体的结合亲和力、酶的催化活性等)。

通过胺基团偶联

典型地使用亚氨酸酯和N-羟基琥珀酰亚胺(“NHS”)酯作为胺特异性功能部分。NHS酯在与伯胺或仲胺反应后产生稳定产物。在生理pH值下偶联为高效的，并且NHS-酯交联剂与其亚氨酸酯对应物相比在溶液中更稳定。通常在一步或两步反应中使用同双官能NHS-酯缀合来交联含胺蛋白质。伯胺为NHS-酯的原则靶标。存在于蛋白质N端的可及α-胺基团与NHS-酯反应以形成酰胺。然而，因为蛋白质上的α-胺并不总是可获得的，所以与氨基酸的侧链反应变得重要。虽然五种氨基酸在其侧链中具有氮，但仅赖氨酸的ε-氨基显著与NHS-酯反应。当NHS-酯交联剂与伯胺反应时形成共价酰胺键，从而释放N-羟基琥珀酰亚胺。

通过巯基偶联

典型使用马来酰亚胺、烷基以及芳基卤化物、α-卤代酰基以及吡啶基二硫化物作为硫氢基特异性功能部分。当反应混合物的pH值保持在pH 6.5与7.5之间时，马来酰亚胺基对巯基具特异性。在pH 7下，马来酰亚胺与硫氢基的反应比与胺快1000倍。马来酰亚胺不与酪氨酸、组氨酸或甲硫氨酸反应。当游离硫氢基不以充足量存在时，它们常常可通过还原可获得的二硫键来产生。

通过羧基偶联

碳二酰亚胺使羧基偶联至伯胺或酰肼，从而使得形成酰胺或腙键。碳二酰亚胺不同于其他缀合反应，因为碳二酰亚胺与正在偶联的分子之间未形成交联桥；相反地，可获得的羧基与可获得的胺基团之间形成肽键。可靶向蛋白质的羧基端以及谷氨酸和天冬氨酸侧链。在存在过量交联剂的情况下，可发生聚合，因为蛋白质含有羧基与胺两者。未形成交联桥，并且酰胺键与肽键相同，因此在不破坏蛋白质的情况下不可能逆转交联。

非选择性标记

光亲和力试剂为化学惰性的化合物，但当暴露于紫外线或可见光时变为反应性的。芳基叠氮化物为光亲和力试剂，所述光亲和力试剂在250-460nm之间的波长下光解，从而形成反应性芳基氮烯。芳基氮烯非选择性地反应以形成共价键。还原剂必须小心使用，因为它们可还原叠氮基。

羰基特异性交联剂

在pH 5-7下，羰基(醛和酮)与胺和酰肼反应。与酰肼的反应比与胺更快，使得这可用于位点特异性交联。羰基不轻易存在于蛋白质中；然而，使用偏高磺酸钠将糖部分轻度氧化将使邻近的羟基转化为醛或酮。

实验和诊断用途

可使用本文所公开的抗CD103抗体作为亲和力纯化剂。可使用本文所公开的抗CD103抗原结合片段作为亲和力纯化剂。在此方法中，使用本领域熟知的方法，将抗CD103抗体和其抗原结合片段固定于固相(诸如交联葡聚糖凝胶、玻璃或琼脂糖树脂或滤纸)上。使固定的抗体或片段与含有要纯化的CD103蛋白(或其片段)的样品接触，并且此后将支撑物用适合的溶剂洗涤，所述溶剂将移除样品中除CD103蛋白外的基本上所有材料，CD103蛋白结合至固定的抗体或片段。最后，将支撑物用洗脱所结合的CD103(例如蛋白质A)的溶剂洗涤。此类固定的抗体和片段形成本发明的一部分。

还提供了用于产生第二抗体的抗原，所述第二抗体例如可用于进行蛋白质印迹法和本文论述的其他免疫分析。

抗CD103抗体(例如人源化抗体)和其抗原结合片段还可用于针对CD103蛋白的诊断分析，例如检测其在特定细胞、组织或血清(例如髓样细胞，诸如单核细胞、巨噬细胞、嗜中性粒细胞、嗜碱性粒细胞、嗜酸性粒细胞以及树突细胞)中的表达。此类诊断方法可用于各种疾病诊断。

本发明包括合并有使用本文所公开的抗CD103抗体或其抗原结合片段的ELISA分析(酶联免疫吸附分析)。

举例来说，此类方法包括以下步骤：

(a)用抗CD103抗体或其抗原结合片段涂布基板(例如微量滴定板孔的表面，例如塑料板)；

(b)向基板施加要测试CD103的存在的样品；

(c)将板洗涤，使得样品中未结合的材料被移除；

(d)施加也对CD103抗原具特异性的可检测标记的抗体(例如酶联抗体)；

(e)将基板洗涤，从而移除未结合的标记的抗体；

(f)如果标记的抗体为酶联的，那么施加通过酶转化成荧光信号的化学品；以及

(g)检测标记的抗体的存在。

检测到与基板缔合的标记指示存在CD103蛋白。

在另一个实施方案中，将标记的抗体或其抗原结合片段用过氧化物酶标记，过氧化物酶与ABTS(例如2,2'-连氮基-双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸))或3,3',5,5'-四甲基联苯胺反应以产生颜色变化，颜色变化为可检测的。或者，将标记的抗体或片段用可检测放射性同位素(例如

可将本发明的抗CD103抗体或其抗原结合片段用于蛋白质印迹法或免疫蛋白印迹程序中。此类程序形成本发明的一部分并且包括例如：

(1)任选使用本领域已知的方法(例如半干印迹法或罐印迹法)将来自要测试CD103的存在的样品(例如来自样品中的蛋白质的PAGE或SDS-PAGE电泳分离)的蛋白质转移至膜或其他固体基板上；使要测试所结合的CD103或其片段的存在的膜或其他固体基板与本发明的抗CD103抗体或其抗原结合片段接触。

(2)将膜洗涤一次或多次以移除未结合的抗CD103抗体或片段和其他未结合的物质；以及

(3)检测所结合的抗CD103抗体或片段。

此类膜可采取硝基纤维素或乙烯基(例如聚偏二氟乙烯(PVDF))膜的形式，要在非变性PAGE(聚丙烯酰胺凝胶电泳)凝胶或SDS-PAGE(十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳)凝胶中测试CD103的存在的蛋白质已被转移至所述膜(例如在凝胶中进行电泳分离之后)。在使膜与抗CD103抗体或片段接触之前，任选例如用脱脂奶粉等将膜阻断，以便结合膜上的非特异性蛋白结合位点。

检测到所结合的抗体或片段表明膜或基板上和样品中存在CD103蛋白。可通过使抗体或片段与可检测标记的第二抗体(抗免疫球蛋白抗体)结合并且然后检测第二抗体的存在来检测所结合的抗体或片段。

还可使用本文所公开的抗CD103抗体和其抗原结合片段进行免疫组织化学分析。此类方法形成本发明的一部分并且包括例如,

(1)使要测试CD103蛋白的存在的细胞(例如含有髓样细胞，诸如单核细胞、巨噬细胞、嗜中性粒细胞、嗜碱性粒细胞、嗜酸性粒细胞以及树突细胞的样品)与本发明的抗CD103抗体或其抗原结合片段接触；以及

(2)检测细胞上或细胞中的抗体或片段。

如果抗体或片段本身为可检测标记的，那么它们可直接检测。或者，抗体或片段可由被检测的可检测标记的第二抗体结合。

还可使用本文所公开的某些抗CD103抗体和其抗原结合片段进行体内肿瘤成像。此类方法可包括将放射性标记的抗CD103抗体或其抗原结合片段注射至要测试与CD103表达相关(例如其例如在肿瘤细胞表面上表达CD103)的肿瘤的存在的患者体内，随后进行患者身体的核成像，以检测例如在包含高浓度的结合至肿瘤的抗体或片段的基因座处标记的抗体或片段的存在。检测到所述基因座指示存在CD103

成像技术包括SPECT成像(单光子发射计算机断层扫描)或PET成像(正电子发射断层扫描)。标记包括例如碘-123(

药物组合物以及施用和治疗用途

本发明的抗体可抑制CD103信号传导，并且因此，在本发明的一个方面中，本文公开的某些抗体为用于治疗或预防某些疾患和疾病的候选物。本发明提供了用于治疗其中疾患或疾病的过程可受CD103信号传导影响的疾患和疾病的方法。所述方法包括向需要此类治疗的受试者施用治疗有效量的本发明的抗体。

整合素家族异二聚体在T细胞活化、归巢以及效应功能的递送中发挥多种并且冗余的作用。CD103整合素异二聚体最初通过其在脊椎动物肠道粘膜中的T细胞上的表达来鉴定，其中它由>95％的肠道上皮内淋巴细胞(i IEL)和约40％的固有层淋巴细胞以高水平表达。CD103识别上皮细胞特异性配体E-钙粘蛋白。在正常小鼠和人中，驻留在肠道上皮内的CD8+T细胞表达高水平的CD103，并且CD103在上皮内淋巴细胞、肿瘤浸润性淋巴细胞以及某些树突细胞中广泛表达。先前研究已证实，CD103经由与其在肿瘤细胞上的配体E-钙粘蛋白相互作用触发溶胞性颗粒极化和胞吐作用，从而在由肿瘤特异性浸润淋巴细胞引起的细胞溶解中发挥重要作用。此外，CD103与E-钙粘蛋白连结促进T细胞附着至肿瘤细胞并且在活化的细胞毒性T细胞中诱导共刺激。这些发现表明CD103可为用于增强肿瘤免疫的靶标。

在各种实施方案中，本发明的抗体阻断与E-钙粘蛋白的结合；用于耗尽CD103+细胞；耗尽CD103+CD8+效应细胞；和/或用于耗尽组织驻留记忆T细胞(T

本发明还提供了一种治疗CD103信号传导介导的疾患的方法，所述方法包括向有需要的患者施用有效量的本发明的一种或多种抗体。在一些实施方案中，CD103信号传导介导的疾患为自体免疫、炎性或神经退行性疾患或癌症(参见Rayburn,E.R.等,Mol CellPharmacol.2009；1(1):29-43以及Urbanska,A.M.等,Cell Biochem Biophys.2015Jul；72(3):757-69)。

同种异体移植排斥中的CD103

移植肾切除试样的FACS分析表明，浸润经历排斥事件的同种异体移植物的大CD8效应子子集表达高水平的CD103。有趣的是，在慢性同种异体移植肾病变情形下，在经历排斥事件的肾脏同种异体移植物中CD103+CD8+效应子最丰富。重要的是，在外周淋巴样区室(即，外周血淋巴细胞)中CD103+CD8+效应子不存在，并且因此通过常规免疫监测方法不可检测。然而，从伴随有临床排斥的肾脏同种异体移植接受者的尿液分离的细胞表达CD103mRNA，这与在排斥事件期间CD103+CD8+效应子的小管内定位相符合。以上提到的临床观测与CD103在促进CD8效应子群体破坏移植上皮区室中的主要作用一致，并且支持CD103表达为CD8介导的移植上皮元件破坏所需的假设。如本文所描述的本发明的抗体可用于处理同种异体移植排斥。如本文所描述的本发明的抗体可用于预防同种异体移植排斥。如本文所描述的本发明的抗原结合片段可用于处理同种异体移植排斥。如本文所描述的本发明的抗原结合片段可用于预防同种异体移植排斥。

组织驻留记忆T细胞

长久以来已知皮肤慢性炎症(尤其银屑病和FDE)在先前患病的部位频繁发生复发。因此，已提出免疫记忆与突然发作性反应性和慢性炎性病症有关。关于T

最初发作的银屑病病变常常随后在先前消退的位点复发，并且已提出局部驻留记忆T细胞在其发展和突然发作中起作用。银屑病病变中的CD8

炎性肠道疾病和CD103

一种越来越被认可为驱动肠道炎症和自体免疫的重要病理过程为继发于调控T细胞(Treg)汇集物中的定性或定量缺陷的免疫体内平衡损失。Treg可基于其发育来源广义地分成两组：胸腺Treg(tTreg)或周围诱导的Treg(pTreg)。T细胞可在存在转化生长因子β(TGF-β)的情况下通过T细胞受体(TCR)共刺激转化为表达Foxp3的CD4+CD25+Treg。14在存在TGF-β、IL-2以及视黄酸(RA)的情况下，当原初CD4+T细胞遇到抗原时，肠道相关淋巴组织(GALT)中的pTreg转化增强。15 16CD103+DC受肠道微环境影响从而产生或活化TGF-β并且提供RA促使此情况发生。17 18在不存在CD103表达的情况下，DC未能诱导Treg发育并且产生促炎性细胞因子。在UC患者中，已报道结肠CD4

CD103+淋巴组织增生性病症

在B细胞淋巴组织增生性病症(BC-LPD)，包括B细胞慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、套细胞淋巴瘤(MCL)以及毛细胞白血病(HCL)的诊断中，流式细胞术免疫表型分型为重要的。在低级B细胞淋巴组织增生过程的诊断评估中，证实CD103阳性指示对毛细胞白血病(HCL)或其变体形式HCLv的诊断。

除这些B细胞病症外，CD103阳性还为T细胞赘瘤的子集中的特征。在代表当前世界卫生组织T细胞赘瘤类别内的大多数实体的184个案例的一项研究中，46％的胃肠道淋巴瘤、40％的成人T细胞白血病/淋巴瘤以及6.9％的其他赘瘤展现CD103阳性。同样地，母细胞性类浆细胞树突细胞赘瘤(BPDCN)表达CD103。

如本文所描述的本发明的抗体可用于治疗淋巴组织增生性病症。如本文所描述的本发明的抗原结合片段可用于治疗淋巴组织增生性病症。可使用本发明的抗体治疗的表达CD103的淋巴组织增生性病症包括但不限于毛细胞白血病、HCLv、肠内和肠外淋巴瘤、肠道病相关T细胞淋巴瘤(EATL)、成T淋巴细胞性白血病/淋巴瘤(T-ALL)、T细胞前淋巴球性白血病(T-PLL)、成人T细胞白血病/淋巴瘤(ATLL)、蕈样霉菌病(MF)、间变性大细胞淋巴瘤ALCL、皮肤T细胞淋巴瘤(CTCL)以及母细胞性类浆细胞树突细胞赘瘤。

肿瘤发生中的CD103

已报导在CTLA-4和IL-10的表达增加并且IFN-γ、TNF-α以及颗粒酶的表达降低的情况下，肿瘤相关CD103+CD8 T细胞具有致耐受性表型。此外，CD103已被描述为CD4+调控细胞的标记物并且存在于致耐受性DC上。减少小鼠中的CD103+CD8 T细胞的抗CD103抗体直接靶向CD103据报道在B16黑素瘤和MC38 CRC模型中提供治疗作用。如本文所描述的本发明的抗体可用于治疗肿瘤发生。如本文所描述的本发明的抗体可用于预防肿瘤发生。如本文所描述的本发明的抗原结合片段可用于治疗肿瘤发生。如本文所描述的本发明的抗原结合片段可用于预防肿瘤发生。如本文所描述的本发明的抗体可用于缓和肿瘤发生的进展。

本发明的CD103抗体的治疗应用

本发明提供了本发明的一种或多种抗体用于抑制细胞中的CD103信号传导的用途。

本发明提供了本发明的一种或多种抗体用于抑制CD103结合至E-钙粘蛋白和表达E-钙粘蛋白的细胞的用途。

本发明还提供了本发明的一种或多种抗体用于治疗CD103介导的疾患的用途。

本发明提供了本发明的一种或多种抗体用于耗尽表达CD103的细胞的用途。

本发明还提供了本发明的一种或多种抗体在用于前述用途中的一者的药剂的制造中的用途。

如本文所描述的本发明的抗体可用于治疗多种疾病，其中CD103信号传导的调节可提供治疗益处。在一些方面中，本发明的化合物抑制CD103信号传导，并且可用于治疗选自由以下组成的组的疾病：特应性皮炎、过敏反应、哮喘、全身性发炎反应综合征(SIRS)、败血病、败血性休克、动脉粥样硬化、乳糜泻、皮肌炎、硬皮病、间质性膀胱炎、移植排斥、移植物抗宿主疾病、艾卡迪-古特雷斯综合征、郝-吉二氏早老综合征、辛-梅二氏综合征、蛋白酶体相关自体炎性综合征、SAVI(婴儿期发病的STING相关血管病变)、CANDLE(慢性非典型性嗜中性粒细胞皮肤病伴脂肪代谢障碍和体温升高)综合征、冻疮样红斑狼疮、全身性红斑狼疮、类风湿性关节炎、青年类风湿性关节炎、韦格纳氏病、炎性肠道疾病(例如溃疡性结肠炎、克罗恩氏病)、特发性血小板减少性紫癜、血栓性血小板减少性紫癜、自体免疫血小板减少症、多发性硬化、银屑病、IgA肾病变、IgM多发性神经病变、肾小球性肾炎、自体免疫心肌炎、重症肌无力、血管炎、1型糖尿病、2型糖尿病、舍格伦综合征、X-连锁网状色素异常症、多肌炎、脊椎软骨发育不良、年龄相关性黄斑变性、阿尔茨海默氏病以及帕金森氏病。在一些实施方案中，本发明的化合物可用于治疗艾卡迪-古特雷斯综合征、X-连锁网状色素异常症、皮肌炎、全身性红斑狼疮、类风湿性关节炎、多发性硬化或I型或II型糖尿病。如本文所描述的本发明的抗体优选用于治疗炎性肠道疾病。如本文所描述的本发明的抗体优选用于治疗银屑病。

本发明提供了一种治疗受试者的自体免疫疾病的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用治疗有效量的本发明的一种或多种抗体。在一些实施方案中，自体免疫疾病可为I型干扰素病变(例如艾卡迪-古特雷斯综合征、舍格伦综合征、辛-梅二氏综合征、蛋白酶体相关自体炎性综合征、SAVI(婴儿期发病的STING相关血管病变)、CANDLE综合征、冻疮样红斑狼疮、全身性红斑狼疮、脊椎软骨发育不良)、类风湿性关节炎、青年类风湿性关节炎、特发性血小板减少性紫癜、自体免疫心肌炎、血栓性血小板减少性紫癜、自体免疫血小板减少症、银屑病、1型糖尿病或2型糖尿病。

本发明提供了一种治疗受试者的炎性疾病的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用治疗有效量的本发明的一种或多种抗体。举例来说，炎性疾病可选自由以下组成的组：特应性皮炎、过敏反应、哮喘、全身性发炎反应综合征(SIRS)、败血病、败血性休克、动脉粥样硬化、乳糜泻、皮肌炎、硬皮病、间质性膀胱炎、移植排斥、移植物抗宿主疾病、艾卡迪-古特雷斯综合征、郝-吉二氏早老综合征、辛-梅二氏综合征、蛋白酶体相关自体炎性综合征、SAVI(婴儿期发病的STING相关血管病变)、CANDLE(慢性非典型性嗜中性粒细胞皮肤病伴脂肪代谢障碍和体温升高)综合征、冻疮样红斑狼疮、全身性红斑狼疮、类风湿性关节炎、青年类风湿性关节炎、韦格纳氏病、炎性肠道疾病(例如溃疡性结肠炎、克罗恩氏病)、特发性血小板减少性紫癜、血栓性血小板减少性紫癜、自体免疫血小板减少症、多发性硬化、银屑病、IgA肾病变、IgM多发性神经病变、肾小球性肾炎、自体免疫心肌炎、重症肌无力、血管炎、1型糖尿病、2型糖尿病、舍格伦综合征、X-连锁网状色素异常症、多肌炎、脊椎软骨发育不良、年龄相关性黄斑变性、阿尔茨海默氏病以及帕金森氏病。在一些实施方案中，本发明的化合物可用于治疗艾卡迪-古特雷斯综合征、X-连锁网状色素异常症、皮肌炎、全身性红斑狼疮、类风湿性关节炎、多发性硬化或I型或II型糖尿病。

本发明还提供了一种治疗受试者的神经退行性疾病的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用治疗有效量的本发明的一种或多种抗体。举例来说，神经退行性疾病可为阿尔茨海默氏病、帕金森氏病、多发性硬化、IgM多发性神经病变或重症肌无力。

本发明还提供了一种治疗表达CD103的恶性肿瘤的方法。举例来说，恶性肿瘤可为T细胞和B细胞淋巴瘤，并且特别是毛细胞白血病、HCLv、肠内和肠外淋巴瘤、肠道病相关T细胞淋巴瘤(EATL)、成T淋巴细胞性白血病/淋巴瘤(T-ALL)、T细胞前淋巴球性白血病(T-PLL)、成人T细胞白血病/淋巴瘤(ATLL)、蕈样霉菌病(MF)、间变性大细胞淋巴瘤ALCL、皮肤T细胞淋巴瘤(CTCL)、塞扎里综合征(SS)。

为制备本发明的抗CD103抗体和抗原结合片段的药物或无菌组合物，将抗体或其抗原结合片段与药学上可接受的载体或赋形剂混合。参见例如Remington'sPharmaceutical Sciences和U.S.Phar macopeia:National Formulary,Mack PublishingCompany,Easton,PA(1984)。

治疗剂和诊断剂的制剂可通过与呈例如以下的形式可接受的载体、赋形剂或稳定剂混合来制备：冻干粉末、浆料、水溶液或悬浮液(参见例如Hardman等(2001)Goodman andGilman’s The Pharmac ological Basis of Therapeutics,McGraw-Hill,New York,NY；Gennaro(2000)Remington:The Science and Practice of Pharma cy,Lippincott,Williams,and Wilkins,New York,NY；Avis等(编)(1993)Pharmaceutical Dosage Forms:Parenteral Medications,Marcel Dekker,NY；Lieberman等(编)(1990)PharmaceuticalDosage Forms:Tablets,Marcel Dekker,NY；Lieberman等(编)(1990)PharmaceuticalDosage Forms:Disperse Systems,Marcel Dekker,NY；Weiner和Kotkoskie(2000)Excipient Toxicity and Safety,Marcel Dekker,Inc.,New York,NY)。

单独或与另一治疗剂组合施用的本发明的抗体的毒性和治疗功效可在细胞培养物或实验动物中通过例如用于确定LD

在另一个实施方案中，根据Physicians'Desk Reference 2003(ThomsonHealthcare；第57版(2002年11月1日))与本发明的抗CD103抗体或其抗原结合片段结合向受试者施用另一治疗剂。

施用模式可改变。施用途径包括经口、经直肠、经粘膜、经肠道、肠胃外；肌肉内、皮下、真皮内、髓内、鞘内、直接心室内、静脉内、腹膜内、鼻内、眼内、吸入、吹入、表面、经皮肤、经真皮或动脉内。

在特定实施方案中，可通过侵入性途径(诸如通过注射)施用本发明的抗CD103抗体或其抗原结合片段。在本发明的其他实施方案中，静脉内、皮下、肌肉内、动脉内、瘤内或通过吸入、气溶胶递送施用抗CD103抗体或其抗原结合片段或其药物组合物。通过非侵入性途径(例如经口；例如以丸剂、胶囊或片剂形式)施用也在本发明范围内。

本发明提供了一种容器(例如塑料或玻璃小瓶，例如具有盖子或色谱柱、空心针头或注射器筒)，所述容器包含本发明的抗体或抗原结合片段中的任一者或其药物组合物。本发明还提供了一种包含本发明的抗体或抗原结合片段中的任一者或其药物组合物的注射装置。注射装置为经由肠胃外途径(例如肌肉内、皮下或静脉内)将物质引入患者体内的装置。举例来说，注射装置可为注射器(例如预填充有药物组合物，诸如自动注射器)，所述注射器例如包括用于容纳要注射的流体(例如抗体或片段或其药物组合物)的筒或桶、用于刺入皮肤和/或血管以注射流体的针头；以及用于将流体从筒中推出并且使其穿过针眼的活塞。在本发明的一个实施方案中，包含本发明的抗体或其抗原结合片段或其药物组合物的注射装置为静脉内(IV)注射装置。此类装置包括在套管或套管针/针头中的抗体或片段或其药物组合物，所述套管或套管针/针头可与管子连接，所述管子可与用于容纳通过套管或套管针/针头引入患者体内的流体(例如盐水；或包含NaCl、乳酸钠、KCl、CaCl

本文所公开的药物组合物还可用无针皮下注射装置施用；诸如美国专利号6,620,135；6,096,002；5,399,163；5,383,851；5,312,335；5,064,413；4,941,880；4,790,824或4,596,556中所公开的装置。此类包含药物组合物的无针装置也是本发明的一部分。本文所公开的药物组合物还可通过输注施用。用于施用药物组合物的熟知植入物和模块的实例包括中以下参考文献中所公开的那些植入物和模块：美国专利号4,487,603，所述专利公开了一种用于以控制速率分配药物的可植入微量输注泵；美国专利号4,447,233，所述专利公开了一种用于以精确输注速率递送药物的药物输注泵；美国专利号4,447,224，所述专利公开了一种用于连续药物递送的可变流速可植入输注设备；美国专利号4,439,196，所述专利公开了一种具有多腔室区室的渗透性药物递送系统。许多其他此类植入物、递送系统以及模块为本领域技术人员熟知的并且包含本发明的药物组合物的那些此类植入物、递送系统以及模块在本发明范围内。

或者，可以局部而非全身方式例如经由将抗体或片段直接注射至肿瘤中来施用本发明的抗CD103抗体或抗原结合片段。此外，可在靶向药物递送系统中(例如在涂有靶向例如肿瘤的组织特异性抗体的脂质体中)施用抗体或片段。脂质体将被靶向并且由受影响的组织选择性地吸收。此类方法和脂质体为本发明的一部分。

施用方案取决于若干因素，包括治疗性抗体或抗原结合片段的血清或组织转换率、症状的水平、治疗性抗体的免疫原性以及生物基质中靶细胞的可及性。优选地，施用方案递送充足的治疗性抗体或片段以实现目标疾病病况的改善，同时又使不希望的副作用最小化。因此，递送的生物剂的量部分取决于特定治疗性抗体以及正在治疗的疾患的严重程度。选择治疗性抗体或片段的适当剂量的指导为可获得的(参见例如Wawrzynczak(1996)Antibody Therapy,Bios Scientific Pub.Ltd,Oxfordshire,UK；Kresina(编)(1991)Monoclonal Antibodies,Cytokines and Arthritis,Marcel Dekker,New York,NY；Bach(编)(1993)Monoclonal Antibodies and Peptide Therapy in Autoimmune Diseases,Marcel Dekker,New York,NY；Baert等(2003)New Engl.J.Med.348:601-608；Milgrom等(1999)New Engl.J.Med.341:1966-1973；Slamon等(2001)New Engl.J.Med.344:783-792；Beniaminovitz等(2000)New Engl.J.Med.342:613-619；Ghosh等(2003)NewEngl.J.Med.348:24-32；Lipsky等(2000)New Engl.J.Med.343:1594-1602)。

适当剂量的确定由临床医师例如使用本领域中已知或疑似影响治疗的参数或因素来进行。通常，剂量以略小于最佳剂量的量开始并且此后按小的增量增加，直到相对于任何消极副作用实现所需或最佳作用。重要的诊断度量包括例如炎症的症状或产生的炎性细胞因子的水平。一般来说，希望将使用的生物剂来源于与被靶向进行治疗的动物相同的物种，从而使对试剂的任何免疫反应最小化。在人受试者的情况下，例如人源化和完全人抗体可为所需的。

本文所公开的抗体或其抗原结合片段可由连续输注或由例如每天、每周1-7次、每周、每两周、每月、每两月、每季、每半年、每年等施用的剂量提供。剂量可例如静脉内、皮下、经表面、经口、经鼻、经直肠、肌肉内、大脑内、脊柱内或通过吸入提供。总周剂量通常为每千克体重至少0.05μg，更通常至少0.2μg/kg、0.5μg/kg、1μg/kg、10μg/kg、100μg/kg、0.25mg/kg、1.0mg/kg、2.0mg/kg、5.0mg/mL、10mg/kg、25mg/kg、50mg/kg或更多(参见例如Yang等(2003)New Engl.J.Med.349:427-434；Herold等(2002)New Engl.J.Med.346:1692-1698；Liu等(1999)J.Neurol.Neurosurg.Psych.67:451-456；Portielji等(20003)CancerImmunol.Immunother.52:151-144)。还可提供剂量以在受试者的血清中实现抗CD103抗体的预定目标浓度，诸如0.1、0.3、1、3、10、30、100、300μg/mL或更多。在其他实施方案中，以每个受试者10、20、50、80、100、200、500、1000或2500mg按每周、每两周、“每4周”、每月、每两月或每季例如皮下或静脉内施用本发明的抗CD103抗体。

如本文所用，术语“有效量”是指当向细胞、组织或受试者单独或与另一治疗剂组合施用时，本发明的抗CD103或其抗原结合片段有效引起疾病(例如癌症或癌症的进展)的一种或多种症状的可测量改善的量。有效剂量还指抗体或片段足以使得症状至少部分改善(例如肿瘤收缩或消除、缺乏肿瘤生长、增加存活时间)的量。当应用于单独施用的个别活性成分时，有效剂量是指单独所述成分。当应用于组合时，有效剂量是指活性成分产生治疗作用的组合量，无论是组合、连续还是同时施用。治疗剂的有效量将使得诊断度量或参数改善至少10％；通常至少20％；优选至少约30％；更优选至少40％，并且最优选至少50％。有效量还可使得使用主观度量来评估疾病严重程度的情况下的主观度量得到改善。

药盒

还提供了药盒，所述药盒包含一种或多种组分，所述一种或多种组分如本文所论述包括但不限于抗CD103抗体或抗原结合片段，所述一种或多种组分与一种或多种其他组分结合，所述一种或多种其他组分如本文所论述包括但不限于药学上可接受的载体和/或治疗剂。抗体或片段和/或治疗剂可被配制成纯组合物或与药学上可接受的载体组合于药物组合物中。

在一个实施方案中，药盒包括一个容器中(例如无菌玻璃或塑料小瓶中)的本发明的抗CD103抗体或其抗原结合片段或其药物组合物和/或另一容器中(例如无菌玻璃或塑料小瓶中)的治疗剂和其药物组合物。

在另一实施方案中，药盒包含单个共用容器中的本发明的组合，所述本发明的组合包括任选与任选一起配制成药物组合物的一种或多种治疗剂组合的本发明的抗CD103抗体或其抗原结合片段以及药学上可接受的载体。

如果药盒包括用于向受试者肠胃外施用的药物组合物，那么药盒可包括用于进行此类施用的装置。举例来说，药盒可包括一个或多个皮下针头或如上文所论述的其他注射装置。

药盒可包括包装插页，所述包装插页包括关于药盒中的药物组合物和剂型的消息。通常，此类信息帮助患者和医师有效并且安全地使用封装的药物组合物和剂型。举例来说，插页中可提供以下关于本发明的组合的信息：药代动力学、药效动力学、临床研究、功效参数、适应症和使用、禁忌、警告、预防措施、有害反应、过量、适当的剂量和施用、如何供应、适当的储存条件、参考文献、制造商/销售商信息以及专利信息。

检测试剂盒

还提供了诊断或检测试剂以及用于多种检测分析(包括例如免疫分析，诸如ELISA(夹心或竞争模式))的包含一种或多种此类试剂的试剂盒。试剂盒的组分可预先附着至固体载体，或可当使用药盒时施加于固体载体的表面。在本发明的一些实施方案中，使产生信号的构件可预先与本发明的抗体或片段缔合或可能需要在使用之前与一种或多种组分(例如缓冲液、抗体-酶缀合物、酶底物等)组合。试剂盒还可包括其他试剂，例如用于减少与固相表面的非特异性结合的阻断试剂、洗涤试剂、酶底物等。固相表面可呈管、珠粒、微量滴定板、微球或适合于固定蛋白质、肽或多肽的其他材料的形式。在特定方面中，催化形成化学发光或生色产物或减少化学发光或生色底物的酶为产生信号的构件的组分。此类酶为本领域熟知的。试剂盒可包含本文所描述的捕获剂和检测试剂中的任一者。任选地，试剂盒还可包括用于执行本发明的方法的说明书。

本文所公开的检测试剂盒还可被制备成包含本文所公开的抗体、肽、抗原结合片段或多核苷酸中的至少一者以及用于使用组合物作为检测试剂的说明书。用于此类试剂盒的容器可典型地包括至少一个小瓶、试管、烧瓶、瓶、注射器或其他适合的容器，所述一种或多种检测组合物中的一者或多者可被放置并且优选地适当等分至所述容器中。本文所公开的试剂盒还将典型地包括用于严密封闭地容纳一个或多个小瓶用于商业销售的构件，诸如一个或多个所需小瓶被维持在其中的注射或吹塑成型的塑料容器。在放射性标记、生色、荧光生成或其他类型的可检测标记或检测构件包括在试剂盒内的情况下，可将标记剂提供于与检测或治疗剂组合物本身相同的容器中，或可替代地放置于第二不同容器构件中，此第二组合物可被放置并且适当地等分至所述第二不同容器构件中。或者，检测试剂和标记可被制备成位于单个容器构件中，并且在大多数情况下，试剂盒还将典型地包括用于严密封闭地容纳一个或多个小瓶用于商业销售和/或方便包装和递送的构件。

一般方法

Sambrook,Fritsch以及Maniatis(1982&1989第2版,2001第3版)MolecularCloning,A Laboratory Manual,Cold Spring Harbor Laboratory Press,Cold SpringHarbor,NY；Sambrook和Russell(2001)Molecular Cloning,第3版,Cold Spring HarborLaboratory Press,Cold Spring Harbor,NY；Wu(1993)Recombinant DNA,第217卷,Academic Press,San Diego,CA)描述了分子生物学中的标准方法。Ausbel等(2001)Current Protocols in Molecular Biology,第1-4卷,John Wiley and Sons,Inc.NewYork,NY中也呈现了标准方法，所述参考文献描述了在细菌细胞中克隆以及DNA诱变(第1卷)、在哺乳动物细胞和酵母中克隆(第2卷)、糖缀合物和蛋白质表达(第3卷)以及生物信息学(第4卷)。

已描述用于蛋白质纯化的方法，包括免疫沉淀、色谱法、电泳、离心以及结晶(Coligan等(2000)Current Protocols in Protein Science,第1卷,John Wiley andSons,Inc.,New York)。已描述化学分析、化学修饰、翻译后修饰、融合蛋白的制备、蛋白质的糖基化(参见例如Coligan等(2000)Current Protocols in Protein Science,第2卷,John Wiley and Sons,Inc.,New York；Ausubel等(2001)Current Protocols inMolecular Biology,第3卷,John Wiley and Sons,Inc.,NY,NY,第16.0.5-16.22.17页；Sigma-Aldrich,Co.(2001)Products for Life Science Research,St.Louis,MO；第45-89页；Amersham Pharmacia Biotech(2001)BioDirectory,Piscataway,N.J.,第384-391页)。已描述多克隆和单克隆抗体的制备、纯化以及片段化(Coligan等(2001)Current Protcolsin Immunology,第1卷,John Wiley and Sons,Inc.,New York；Harlow和Lane(1999)UsingAntibodies,Cold Spring Harbor Laboratory Press,Cold Spring Harbor,NY；Harlow和Lane,同上)。用于表征配体/受体相互作用的标准技术为可获得的(参见例如Coligan等(2001)Current Protocols in Immunology,第4卷,John Wiley,Inc.,New York)。

可制备单克隆、多克隆以及人源化抗体(参见例如Sheperd和Dean(编)(2000)Monoclonal Antibodies,Oxford Univ.Press,New York,NY；Kontermann和Dubel(编)(2001)Antibody Engineering,Springer-Verlag,New York；Harlow和Lane(1988)Antibodies A Laboratory Manual,Cold Spring Harbor Laboratory Press,ColdSpring Harbor,NY,第139-243页；Carpenter等(2000)J.Immunol.165:6205；He等(1998)J.Immunol.160:1029；Tang等(1999)J.Biol.Chem.274:27371-27378；Baca等(1997)J.Biol.Chem.272:10678-10684；Chothia等(1989)Nature 342:877-883；Foote和Winter(1992)J.Mol.Biol.224:487-499；美国专利号6,329,511)。

人源化的替代方案为使用在转基因小鼠中在噬菌体或人抗体文库上展示的人抗体文库(Vaughan等(1996)Nature Biotechnol.14:309-314；Barbas(1995)NatureMedicine 1:837-839；Mendez等(1997)Nature Genetics 15:146-156；Hoogenboom和Chames(2000)Immunol.Today 21:371-377；Barbas等(2001)Phage Display:A LaboratoryManual,Cold Spring Harbor Laboratory Press,Cold Spring Harbor,New York；Kay等(1996)Phage Display of Peptides and Proteins:A Laboratory Manual,AcademicPress,San Diego,CA；de Bruin等(1999)Nature Biotechnol.17:397-399)。

已描述单链抗体和双抗体(参见例如Malecki等(2002)Proc.Natl.Acad.Sci.USA99:213-218；Conrath等(2001)J.Biol.Chem.276:7346-7350；Desmyter等(2001)J.Biol.Chem.276:26285-26290；Hudson和Kortt(1999)J.Immunol.Methods231:177-189；以及美国专利号4,946,778)。已提供双功能抗体(参见例如Mack等(1995)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 92:7021-7025；Carter(2001)J.Immunol.Methods 248:7-15；Volkel等(2001)Protein Engineering 14:815-823；Segal等(2001)J.Immunol.Methods248:1-6；Brennan等(1985)Science 229:81-83；Raso等(1997)J.Biol.Chem.272:27623；Morrison(1985)Science229:1202-1207；Traunecker等(1991)EMBO J.10:3655-3659；以及美国专利号5,932,448、5,532,210以及6,129,914)。

还提供了双特异性抗体(参见例如Azzoni等(1998)J.Immunol.161:3493；Kita等(1999)J.Immunol.162:6901；Merchant等(2000)J.Biol.Chem.74:9115；Pandey等(2000)J.Biol.Chem.275:38633；Zheng等(2001)J.Biol Chem.276:12999；Propst等(2000)J.Immunol.165:2214；Long(1999)Ann.Rev.Immunol.17:875)。

抗原的纯化不为产生抗体所必需的。可将动物用带有所关注的抗原的细胞免疫。然后可从免疫的动物分离脾细胞，并且可使脾细胞与骨髓瘤细胞系融合以产生杂交瘤(参见例如Meyaard等(1997)Immun ity 7:283-290；Wright等(2000)Immunity 13:233-242；Preston等,同上；Kaithamana等(1999)J.Immunol.163:5157-5164)。

可使抗体缀合至例如小药物分子、酶、脂质体、聚乙二醇(PEG)。抗体可用于治疗、诊断、试剂盒或其他目的，并且包括偶联至例如染料、放射性同位素、酶或金属(例如胶态金)的抗体(参见例如Le Doussal等(1991)J.Immunol.146:169-175；Gibellini等(1998)J.Immunol.160:3891-3898；Hsing和Bishop(1999)J.Immunol.162:2804-2811；Everts等(2002)J.Immunol.168:883-889)。

用于流式细胞术的方法(包括荧光活化细胞分选(FACS))为可获得的(参见例如Owens等(1994)Flow Cytometry Principles for Clinical Laboratory Practice,JohnWiley and Sons,Hoboken,NJ；Givan(2001)Flow Cytometry,第2版；Wiley-Liss,Hoboken,NJ；Shapiro(2003)Practical Flow Cytometry,John Wiley and Sons,Hoboken,NJ)。用作例如诊断试剂的适合于修饰核酸(包括核酸引物和探针)、多肽以及抗体的荧光试剂为可获得的(Molecular Probes(2003)Catalogue,Molecular Probes,Inc.,Eugene,OR；Sigma-Aldrich(2003)Catalogue,St.Louis,MO)。

已描述免疫系统的组织学的标准方法(参见例如Muller-Harmelink(编)(1986)Human Thymus:Histopathology and Pathology,Springer Verlag,New York,NY；Hiatt等(2000)Color Atlas of Histology,Lippincott,Williams,and Wilkins,Phila,PA；Louis等(2002)Basic Histology:Text and Atlas,McGraw-Hill,New York,NY)。

用于确定例如抗原片段、前导序列、蛋白质折叠、功能结构域、糖基化位点以及序列比对的软件包和数据库为可获得的(参见例如GenBank,Vector

实施例

以下实施例用以说明本发明。这些实施例决不旨在限制本发明的范围。

实施例1：试剂

表1中提供了用于以下实施例的试剂和抗体的细节：

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实施例2：原材料和细胞系

从美国典型培养物保藏中心(ATCC)获得中国仓鼠卵巢(CHO)-K1细胞和人腺癌细胞系MCF7。对细胞进行隔离，直到对微生物污染和霉浆菌属进行筛查并且证实为阴性。使CHO-K1细胞在DMEM/F12(Gibco)、1％PenStrep(Gibco)、5％NCBS(Biowest)中生长并且在37℃下在具有5％CO

从美国典型培养物保藏中心(ATCC)获得人非小细胞肺癌细胞系A549。对细胞进行隔离，直到对微生物污染和霉浆菌属进行筛查并且证实为阴性。使细胞在DMEM/F-12、GlutaMAX

如下产生CD103阳性T细胞。经由在知情同意之后对健康志愿者的血沉棕黄层的Ficoll-Paque密度梯度离心(Ficoll-Paque PLUS,GE Healthcare Life Sciences,Marlborough,MA,USA)来分离人外周血单核细胞(PBMC)(Sanquin)。接下来，使用MagniSort

从经历肿瘤细胞减灭手术的卵巢癌患者获得新鲜肿瘤材料。使用解剖刀切割约1mm

收获来自免疫活性Balb/c和C57/BL6小鼠的脾脏以及来自Balb/c小鼠的胸腺，随后将组织在具有活塞的70μm筛上切碎。使用红血细胞溶解缓冲液(Biolegend)移除红血细胞。将细胞制成球粒、洗涤以及冷冻保存，直到进一步使用。

实施例3：单克隆抗体的产生

为产生人CD103抗体，将小鼠用编码人CD103(整合素α-E)和人整合素β-7的全长开放阅读框的cDNA质粒构建体进行免疫。pCI-neo和pcDNA3.1(+)为基于定制合成的并且从GeneArt/ThermoFisher(Regensburg,Germany)获得。在Envigo(Horst,The Netherlands)使用Helios基因枪(BioRad,Hercules,CA,USA)和DNA涂布的金子弹(BioRad)遵循制造商的说明书通过基因枪免疫对小鼠进行免疫。简单来说，将1μm金粒子用pCI-neo-hCD103和pcDNA3.1(+)-hβ7cDNA以及小鼠Flt3L和小鼠GM-CSF(两者均来自Aldevron)的商业表达载体以1:1:1:1比率进行涂布。使用总共50μg的质粒DNA来涂布25mg的金粒子。具体地说，用基因枪在耳中对7-8周龄雌性BALB/c小鼠(Harlan)进行免疫，两个耳朵均接受3个施用循环。

使用CHO-K1.hCD103/hβ7稳定细胞系通过细胞ELISA(“CELIS A”)对抗体效价进行评估。将细胞以8x10

为了选择产生抗hCD103抗体的B细胞，设计并且开发优先结合表达优选与猴CD103具有交叉反应性的特异性结合于hCD103的抗体的B细胞的选择策略。因为食蟹猴CD103序列未知，所以使用恒河猴CD103进行交叉反应性研究。将来自hCD103/hβ7免疫小鼠的脾细胞和淋巴细胞与接种至T25培养烧瓶中并且在30戈瑞(Gray)下照射的hCD103阴性MCF-7一起孵育。1小时之后，通过前后移动烧瓶轻轻移除未结合的细胞。然后将含有未结合的细胞的培养基转移至含有照射过的CHO-K1.hα4/hβ7细胞(瞬时转染)的新的T25烧瓶。将此程序在冰上再重复一次，以对hβ7反应性B细胞进行负选择。接下来，将含有未结合的B细胞的培养基与用30戈瑞照射的CHO-K1.hCD103/hβ7细胞一起孵育。在冰上孵育1.5小时之后，使用培养基用多个洗涤步骤移除未结合的细胞。随后，在含有CHO-K1.hCD103/hβ7细胞的T25烧瓶中，使用胰蛋白酶-EDTA(Sigma)收获结合的淋巴细胞。在96孔平底组织培养板中在最终体积为200μl的培养基中，将选择的B细胞与10％(v/v)T细胞上清液和50,000个照射(25戈瑞)过的EL-4B5饲养细胞混合。在第四天，更新细胞培养基。在第八天，如下文所描述通过细胞ELISA针对hCD103/hβ7反应性对上清液进行筛查。将CHO-K1.hCD103/hβ7、CHO.K1.rhCD103/rhβ7(瞬时转染)以及CHO-K1.hα4/hβ7(瞬时转染)接种于96孔平底组织培养板中的培养基(补充有10％胎牛血清(Hyclone)和80U Pen/Strep(Gibco)的DMEM-F12(Gibco))中，并且在37℃、5％CO2以及95％湿度下培养，直到它们汇合。随后，移除培养基并且在37℃、5％CO

遵循公布的程序(Steenbakkers等(1992)Mol.Biol.Rep.19:125)在具有微小偏差的情况下通过微电融合对来自对hα4/hβ7不具或具极低反应性的hCD103/hβ7反应性上清液的B细胞克隆进行永生化。简单来说，将B细胞与10

将所选稳定杂交瘤在不含血清的培养基中培养7天；收获上清液并且使用MabSelect Sure蛋白质A树脂根据制造商的说明书(GE Healthcare)对抗体进行纯化。使用分光光度法定量抗体浓度。通过SEC-HPLC评估抗体单体性(monomericity)。使用杂交瘤培养物的上清液对杂交瘤进行同型分型。简而言之，使用小鼠单克隆抗体同型分型试剂盒(Biorad)基于将山羊-抗小鼠抗体条带固定至共同小鼠同型和轻链中的每一者的试纸条(dipstick)来进行同型分型。回收的抗体全部被鉴定为小鼠IgG1。通过在LakePharma(CA,USA)对小鼠IgG 1杂交瘤材料的可变区进行测序来阐明抗体序列，使用以下方法：提取杂交瘤细胞的总RNA，这允许cDNA合成。进行cDNA末端(RACE)的快速扩增，从而允许在TOPO(Thermo Fisher Scientific)载体中对阳性片段进行克隆。对TOPO克隆进行测序并且使用VBASE2对序列进行注释。

mAb发现系列产生了6种不同的mAb候选物，所述6种不同的mAb候选物对整合素异二聚体hCD103/hβ7的人CD103(整合素α-E)结构域显示特异性结合。从杂交瘤产生6种所选候选物并且纯化。图1呈现纯化的抗hCD103 mAb与CHO.K1-hCD103/hβ7、CHO.K1-rhCD103/rhβ7以及CHO.K1-hα4/hβ7的细胞结合数据。通过针对整合素人CD103、整合素人α-4以及整合素人β-7的商业mAb证实转染的CHO-K1细胞系对整合素异二聚体的表达。对所选杂交瘤进行测序并且使用Discovery Studio构建系统进化树(图2)，表明所有VH和VL序列均为独特的，具有不同相似度。如图所示，抗体展现与hCD103结合，但不与hβ7结合。各种候选物与恒河猴CD103/rhβ7的结合为不同的。

实施例4：抗hCD103 Fab片段的产生

通过ImmunoPrecise(Oss,the Netherlands)产生抗hCD103 Fab候选物。合成编码候选物hCD103.01A、hCD103.05A以及hCD103.06A的VH和VL结构域的DNA序列的合成载体，并且随后分别克隆至ImmunoPrecise的人IgG1-Fab-K载体和人κ轻链载体中，随后进行HEK293细胞的转染。使用CaptureSelect IgG-CH1亲和力基质通过不含的内毒素纯化对来自所收获的清液的Fab片段进行纯化。使用分光光度法定量Fab浓度并且通过SDS-PAGE和HP-SEC评估Fab纯度。通过LAL分析确定内毒素水平。

实施例5：mAb和Fab的荧光标记

使Fab和mAb与6倍摩尔过量的Alexa Fluor 647-NHS(Thermo Scientific)缀合。简而言之，使用Zeba 7K MWCO离心柱将mAb/Fab再缓冲至0.2M碳酸氢钠pH 8.3。添加6倍摩尔过量的Alexa Fluor 647-NHS(来自于DMSO中的10mg/mL储备液)。允许反应在黑暗中在室温下持续1h。使用Zeba 7K MWCO离心柱移除未反应的Alexa Fluor-NHS。使用分光光度法分别在280nm和650nm下测量抗体和AF647浓度。使用双检测器系统(280nm和650nm)通过HP-SEC确定残余的未反应AF647的量。观测到标记率为每种mAb+/-4种染料和每种Fab+/-2-3种染料。

实施例6：对表达人CD103/β7的CHO细胞的免疫反应性

如先前所描述通过CELISA针对与CHO.K1-hCD103/hβ7的细胞结合对非标记mAb和Fab进行分析。接下来，还使用流式细胞术进行细胞结合实验，以确定AF647标记的mAb/Fab在CHO.K1-hCD103/hβ7和CHO.K1上的结合型态。将1x10

图3呈现细胞ELISA中各种非标记mAb/Fab的结合数据。hCD103.01mAb/Fab和hCD103.05 mAb有效结合至CHO.K1.hCD103/β7与重组hCD103/β7两者，hCD103.05 Fab略少地结合至CHO.K1.hCD103/β7与重组hCD103/β7两者并且hCD103.06 mAb/Fab弱/极少结合至重组hCD103/β7(Acro Biosystems)，而hCD103.06 mAb强结合至CHO.K1.hCD103/hβ7。

图4呈现流式细胞术中各种AF647标记的mAb/Fab的结合数据。在非转染CHO.K1上未观测到mAb和Fab试剂的剂量依赖性结合(数据未显示)。

实施例7：对重组人CD103/β7的免疫反应性

使用重组hCD103/hβ7Fc-蛋白(Acro-Biosystems)涂布的96孔MaxiSorp平底板通过ELISA评估对人CD103/β7的免疫反应性。在37℃下，将蛋白质涂布的96孔板在无蛋白阻断缓冲液(Pierce)中阻断1.5小时。将板洗涤并且在室温下在含0.1％吐温-20的PBS中与mAb/Fab一起孵育1小时。接下来，将板用PBS-T洗涤并且在室温下在含0.1％吐温-20的PBS中与山羊-抗小鼠IgG-HRP缀合物(Southern Biotech)(对于mAb)和山羊-抗人Fab-HRP缀合物(Jackson Immuno Research)(对于Fab片段)一起孵育1小时。随后，将孔用PBS-T洗涤三次并且在存在TMB稳定色原(Invitrogen)的情况下目视观察抗hCD103免疫反应性。用0.5MH2SO4停止反应并且在450和610nm下读取吸光度。

实施例8：流式细胞术分析

在肿瘤消化物中的抗CD103 mAb和Fab片段的结合分析中，将样品分成多个等分试样并且使用活/死标记物和针对人CD3、CD8α、CD33以及CD103的商业抗体或针对CD3、CD8α、CD33的商业抗体以及我们的抗CD103 mAb或Fab加上第二检测试剂进行染色。在抗CD103与鼠CD103阳性T细胞的结合分析中，将脾脏和胸腺单细胞悬浮液分成多个等分试样并且使用活/死标记物和针对鼠CD8和CD103的商业抗体进行染色。将其他等分试样用相关同型对照染色或作为荧光减一对照(“FMO”对照为用所有荧光团减去一种荧光团进行染色的细胞；相关同型对照含有直接标记的非特异性同型抗体或非特异性同型抗体与第二检测试剂的组合)。使用流式细胞术确定荧光标记的mAb的结合百分比。最大结合设定为100％。在BDFACSVerse(BD Biosciences)上进行测量。用FlowJo v10(Tree Star)进行数据分析并且以平均荧光强度(MFI)表示表面受体水平。

使用离体人肿瘤消化物，针对常规地用于流式细胞术中的基准商业抗CD103 mAb(BD bioscience)对抗CD103 mAb进行评估，对CD3+CD8+T细胞设门。抗CD103 mAb以与关于商业抗CD103 mAb所观测相同的频率容易地鉴定CD103+CD8+T细胞亚群(图5)。在这些消化物中未检测到与CD4+T细胞或CD33+(骨髓样)细胞的结合。对于克隆01A，在十个独立患者中mAb与CD103+CD8+T细胞亚群的结合为最高的，而克隆03A显示最低结合(图6)。另外，对于Fab.hCD103.01.C1，来自抗体克隆01A、05A以及06A的重组Fab片段分别显示与CD103+CD8+T细胞亚群的最强结合，而Fab.hCD103.06.C1在人肿瘤消化物中显示最低结合(图7)，这与mAb结合数据相符合。

为了评估mAb之间的亲和力和竞争的差异，在4℃下将CD103+CD8+T细胞与我们的抗CD103 mAb或商业抗CD103 mAb在FACS培养基中一起预孵育1小时，并且随后在4℃下与其荧光标记的对应物一起孵育1小时。使用流式细胞术确定荧光标记的mAb的结合百分比。最大结合设定为100％。

使用流式细胞术来确定CD103 mAb克隆是否与鼠CD103+T细胞交叉反应。使用商业抗小鼠CD103 mAb针对CD103的表达对小鼠脾脏和胸腺进行检验。约一半的CD8细胞为CD103阳性。然而，抗人CD103 mAb克隆未显示特异性结合至鼠CD103(数据未显示)。竞争分析表明，在我们的实验组中，除了克隆03A和06A，大多数的mAb的结合抑制商业CD103 mAb的结合并且反之亦然，指示结合至CD103上的相同区域(图8)。然而，观测到结合特征的差异。在竞争分析中，克隆01A和02A阻断大多数其他mAb克隆的结合，而克隆03A、05A、06A以及07A则未阻断，表明结合表位不同。另外，在用相同克隆饱和之后，荧光标记的05A、06A以及07A显示结合，指示结合亲和力较低。

使用先前描述的方案来确定抗CD103 mAb和Fab片段的内化和解离以及CD103的膜转化。简单来说，将CHO.K1-hCD103/hβ7细胞或CD103阳性T细胞在冰上用抗CD103 mAb和Fab片段(20μg/mL最终浓度)染色。在染色之后；1)将细胞用冰冷的FACS缓冲液洗涤，并且在4℃下与在FACS培养基中1:50稀释的第二抗体一起孵育1小时以测量表面表达。2)将细胞用冰冷的FACS缓冲液洗涤，在37℃下在培养基中孵育4小时并且随后在4℃下与第二抗体一起孵育1小时以测量非内化CD103-抗体复合物，因为第二抗体仅结合至表面结合的CD103 mAb或Fab片段。3)将细胞用冰冷的FACS缓冲液洗涤，在37℃下在培养基中孵育4小时并且随后再依次与CD103 mAb或Fab片段和第二抗体一起孵育以测量非内化、再次出现的受体以及可能的从头合成的受体。在每种处理条件下测量双份样品，并且针对背景荧光和第二抗体的非特异性结合进行校正。在BD FACSVerse或BD Accuri C6(BD Biosciences)上进行测量。用FlowJo v10(Tree Star)进行数据分析并且以平均荧光强度(MFI)表示表面受体表达。在37℃下孵育四小时使得不同量的剩余mAb和Fab片段结合在细胞表面。降低可指示内化的mAb和Fab片段。然而，使用直接标记的mAb和Fab片段进行相同的实验证实，细胞表面的剩余mAb或Fab片段减少是归因于解离。值得注意的是，通过与mAb或Fab片段一起孵育，CD103表面表达水平仅轻微改变(数据未显示)。

实施例9：CD103+ T细胞附着分析

如下进行CD103+T细胞附着分析。在实验之前一天，在4℃下在含有1mM Ca

在使用A549野生型和E-钙粘蛋白敲出细胞的附着分析中，在实验之前一天，将肿瘤细胞(30,000个细胞/孔)接种于96孔板中。接下来，将CFSE标记的CD103+T细胞在冰上与10μg/mL抗体一起预孵育30分钟，随后在37℃下在接种肿瘤细胞的孔中孵育60分钟。

在孵育之后，通过将板翻转并且用DPBS洗涤来移除未结合的细胞。最后，使用含3.7％福尔马林的DPBS固定细胞。使用常规荧光显微镜(Invitrogen

如图9中所示，CD103 mAb克隆01A、02A、03A以及07A显示T细胞结合的最强抑制，而06A部分抑制与E-钙粘蛋白的结合。克隆05A为仅有的不妨碍CD103介导的T细胞附着的克隆。Fab.hCD103.01.C1、Fab.hCD103.05.C1以及Fab.hCD103.06.C1观测到类似效应(数据未显示)。A549肿瘤细胞中CDH1(E-钙粘蛋白)的CRISPR敲除使得CD103+T细胞附着减少，然而在E-钙粘蛋白野生型和E-钙粘蛋白敲除细胞中未观测到我们的CD103 mAb的明显效应。

实施例10：基于细胞的ELISA

在程序之前一天，将CD103/β7转染的CHO细胞(30,000个细胞/孔)接种于96孔板中。随后，将CD103 mAb、Fab片段以及同型对照的连续稀释液添加至96孔板的每个孔中并且在37℃下孵育1h。将孔用PBS洗涤并且在37℃下与兔抗小鼠/IgG-HRP(1:4000，Dako)或Fab特异性山羊抗人/IgG-HRP(1:4000；Sigma Aldrich)一起孵育1h。接下来，将孔用PBS洗涤并且添加TMB底物(KPL)。通过添加1M HCl溶液停止着色反应并且通过微板读数器(ThermoScientific)测量吸光度。

实施例11：

将hCD103.01A、hCD103.05A、Fab.hCD103.01.C1以及Fab.hCD103.05.C1与3倍或4倍摩尔过量的TFP-N-Suc-去铁胺-Fe(Df,ABX GmbH,Hamburg,Germany)一起孵育，并且使用临床级

两种Df缀合的CD103 mAb和Fab片段的CD103结合亲和力与其未修饰对应物类似(图10)。此外，在未进一步纯化的情况下，Df缀合的mAb与Fab片段两者均在>95％的放射化学纯度下实现500MBq

实施例12：动物研究

图13A展示

重新进行扫描并且使用AMIDE(1.0.4版,Stanford University,Stanford,CA,USA)进行体内定量。以平均标准化摄入值(SUV平均)的形式呈现MicroPET数据。假设组织密度为1g/ml，基于离体重量针对肿瘤绘出所关注的区域(ROI)。在血液汇集物测量中，在心脏的中心绘出了固定尺寸的范围，对于肝脏和脾脏，在器官的代表性部分中绘出了固定尺寸的椭圆形ROI。在最终扫描之后，将小鼠处死并且收集所关注的器官用于生物分布研究。在良好校准型LKB-1282-Compu-γ系统(LKB WALLAC)中对器官和所注射的示踪剂的标准物进行计数并且称重。在衰变校正之后，以每克组织所注射的剂量的百分比(％ID/g)表示离体组织活性。

CHO.K1-hCD103/hβ7中的CD103膜表达类似于TIL中的CD103表达(数据未显示)。带有CHO.K1-hCD103/hβ7肿瘤的小鼠的PET扫描表明，

实施例13：靶向CD103的放射性药物用于监测治疗的用途

在开始(免疫)疗法之前，单独或与低剂量CT扫描组合进行‘CD103 PET'扫描。对CD103放射性药物的摄入进行定量。可重复进行CD103 PET-CT扫描并且在(免疫)疗法期间每隔一段时间进行定量。使用基线摄入、治疗时摄入或治疗诱导的摄入相较于基线的变化来指导临床决策。这种临床决策可包括但不限于疗法的继续、疗法的中止或剂量调节。

实施例14：序列

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实施例15：参考文献

Khalil，D.N.，Smith，E.L.，Brentjens，R.J.&Wolchok，J.D.The future ofcancer treatment:immunomodulation，CARs and combination immunotherapy.Nat.Rev.Clin.Oncol.2016；13:273-290.

Rizvi，N.A.，Hellmann，M.D.，Snyder，A.，Kvistborg，P.，Makarov，V.，Havel，J.J.，Lee，W.，Yuan，J.，Wong，P.，Ho，T.S.，Miller，M.L.，Rekhtman，N.，Moreira，A.L.，Ibrahim，F.，Bruggeman，C.，Gasmi，B.，Zappasodi，R.，Maeda，Y.，Sander，C.，Garon，E.B.，Merghoub，T.，Wolchok，J.D.，Schumacher，T.N.&Chan，T.A.Mutational landscapedetermines sensitivity to PD-1 blockade in non-small cell lung cancer.Science2015；348:124-128.

McGranahan，N.，Furness，A.J.S.，Rosenthal，R.，Ramskov，S.，Lyngaa，R.，Saini，S.K.，Jamal-Hanjani，M.，Wilson，G.A.，Birkbak，N.J.，Hiley，C.T.，Watkins，T.B.K.，Shaft，S.，Murugaesu，N.，Mitter，R.，Akarca，A.U.，Linares，J.，Marafioti，T.，Henry，J.Y.，Van Allen，E.M.，Miao，D.，Schilling，B.，Schadendorf，D.，Garraway，L.A.，Makarov，V.，Rizvi，N.A.，Snyder，A.，Hellmann，M.D.，Merghoub，T.，Wolchok，J.D.，Shukla，S.A.，Wu，C.J.，Peggs，K.S.，Chan，T.A.，Hadrup，S.R.，Quezada，S.A.&Swanton，C.Clonal neoantigens elicit T cell immunoreactivity and sensitivity to immunecheckpoint blockade.Science 2016；351:1463-1469.

Le，D.T.，Durham，J.N.，Smith，K.N.，Wang，H.，Bartlett，B.R.，Aulakh，L.K.，Lu，S.，Kemberling，H.，Wilt，C.，Luber，B.S.，Wong，F.，Azad，N.S.，Rucki，A.A.，Laheru，D.，Donehower，R.，Zaheer，A.，Fisher，G.A.，Crocenzi，T.S.，Lee，J.J.，Greten，T.F.，Duffy，A.G.，Ciombor，K.K.，Eyring，A.D.，Lam，B.H.，Joe，A.，Kang，S.P.，Holdhoff，M.，Danilova，L.，Cope，L.，Meyer，C.，Zhou，S.，Goldberg，R.M.，Armstrong，D.K.，Bever，K.M.，Fader，A.N.，Taube，J.，Housseau，F.，Spetzler，D.，Xiao，N.，Pardoll，D.M.，Papadopoulos，N.，Kinzler，K.W.，Eshleman，J.R.，Vogelstein，B.，Anders，R.A.&Diaz，L.A.Mismatch-repairdeficiency predicts response of solid tumors to PD-1 blockade.Science 2017；doi:10.1126/science.aan6733.

Sharma，P.&Allison，J.P.The future of immune checkpoint therapy.Science2015；348:56-61.

Adams，J.L.，Smothers，J.，Srinivasan，R.&Hoos，A.Big opportunities forsmall molecules in immuno-oncology.Nat.Rev.Drug Discov.2015；14:603-22.

Topalian，S.L.，Drake，C.G.&Pardoll，D.M.Immune checkpoint blockade:Acommon denominator approach to cancer therapy.Cancer Cell 2015；27:450-61.

Postow，M.A.，Callahan，M.K.&Wolchok，J.D.Immune checkpoint blockade incancer therapy.J.Clin.Oncol.2015；33:1974-82.

Buchbinder，E.&Hodi，F.S.Cytotoxic T lymphocyte antigen-4 and immunecheckpoint blockade.J.Clin.Invest.2015；125:3377-83.

Mahoney，K.M.，Rennert，P.D.&Freeman，G.J.Combination cancerimmunotherapy and new immunomodulatory targets.Nat.Rev.Drug Discov.2015；14:561-584.

Lesterhuis，W.J.，Bosco，A.，Millward，M.J.，Small，M.，Nowak，A.K.&Lake，R.A.Dynamic versus static biomarkers in cancer immune checkpoint blockade:unravelling complexity.Nat.Rev.Drug Discov.2017；16:264-272.

Gnjatic，S.，Bronte，V.，Brunet，L.R.，Butler，M.O.，Disis，M L.，Galon，J.，Hakansson，L.G.，Hanks，B.A.，Karanikas，V.，Khleif，S.N.，Kirkwood，J.M.，Miller，L.D.，Schendel，D.J.，Tanneau，I.，Wigginton，J.M.&Butterfield，L.H.Identifying baselineimmune-related biomarkers to predict clinical outcome of immunotherapy.J.Immunother.Cancer 2017；5:44.

Nishino，M.，Ramaiya，N.H.，Hatabu，H.&Hodi，F.S.Monitoring immune-checkpoint blockade:response evaluation and biomarker development.Nat.Rev.Clin.Oncol.2017；doi:10.1038/nrclinonc.2017.88.

Djenidi，F.，Adam，J.，Goubar，A.，Durgeau，A.，Meurice，G.，de Montpréville，V.，Validire，P.，Besse，B.&Mami-Chouaib，F.CD8+CD103+tumor-infiltratinglymphocytes are tumor-specific tissue-resident memory T cells and aprognostic factor for survival in lung cancer patients.J.Immunol.2015；194:3475-3486.

Webb，J.R.，Milne，K.&Nelson，B.H.PD-1 and CD103 are widely coexpressedon prognostically favorable intraepithelial CD8 T cells in human ovariancancer.Cancer Immunol.Res.2015；3:926-935.

H.-C.，Wagner，P.，Peper，J.K.，Schuster，H.，Pham，D.L.，Greif，K.，Beschorner，C.，Rammensee，H.-G.，/>

Workel，H.H.，Komdeur，F.L.，Wouters，M.C.A.，Plat，A.，Klip，H.G.，Eggink，F.A.，Wisman，G.B.A.，Arts，H.J.G.，Oonk，M.H.M.，Mourits，M.J.E.，Yigit，R.，Versluis，M.，Duiker，E.W.，Hollema，H.，de Bruyn，M.&Nijman，H.W.CD103 definesintraepithelial CD8+PD1+tumour-infiltrating lymphocytes of prognosticsignificance in endometrial adenocarcinoma.Eur.J.Cancer 2016；60:1-11.

Santoiemma，P.P.，Reyes，C.，Wang，L.-P.，McLane，M.W.，Feldman，M.D.，Tanyi，J.L.&Powell，D.J.Systematic evaluation of multiple immune markers revealsprognostic factors in ovarian cancer.Gynecol.Oncol.2016；143:120-127.

Komdeur，F.L.，Wouters，M.C.A.，Workel，H.H.，Tijans，A.M.，Terwindt，A.L.J.，Brunekreeft，K.L.，Plat，A.，Klip，H.G.，Eggink，F.A.，Leffers，N.，Helfrich，W.，Samplonius，D.F.，Bremer，E.，Wisman，G.B.A.，Daemen，T.，Duiker，E.W.，Hollema，H.，Nijman，H.W.&de Bruyn，M.CD103+intraepithelial T cells in high-grade serousovarian immune-related biomarkers to predict clinical outcome of immunotherapy.J.Immunother.Cancer 2017；5:44.

Nishino，M.，Ramaiya，N.H.，Hatabu，H.&Hodi，F.S.Monitoring immune-checkpoint blockade:response evaluation and biomarker development.Nat.Rev.Clin.Oncol.2017；doi:10.1038/nrclinonc.2017.88.

Djenidi，F.，Adam，J.，Goubar，A.，Durgeau，A.，Meurice，G.，de Montpréville，V.，Validire，P.，Besse，B.&Mami-Chouaib，F.CD8+CD103+tumor-infiltratinglymphocytes are tumor-specific tissue-resident memory T cells and aprognostic factor for survival in lung cancer patients.J.Immunol.2015；194:3475-3486.

Webb，J.R.，Milne，K.&Nelson，B.H.PD-1 and CD103 are widely coexpressedon prognostically favorable intraepithelial CD8 T cells in human ovariancancer.Cancer Immunol.Res.2015；3:926-935.

H.-C.，Wagner，P.，Peper，J.K.，Schuster，H.，Pham，D.L.，Greif，K.，Beschorner，C.，Rammensee，H.-G.，/>

Workel，H.H.，Komdeur，F.L.，Wouters，M.C.A.，Plat，A.，Klip，H.G.，Eggink，F.A，Wisman，G.B.A.，Arts，H.J.G.，Oonk，M.H.M.，Mourits，M.J.E.，Yigit，R.，Versluis，M.，Duiker，E.W.，Hollema，H.，de Bruyn，M.&Nijman，H.W.CD103 defines intraepithelialCD8+PD1+tumour-infiltrating lymphocytes of prognostic significance inendometrial adenocarcinoma.Eur.J.Cancer 2016；60:1-11.

Santoiemma，P.P.，Reyes，C.，Wang，L.-P.，McLane，M.W.，Feldman，M.D.，Tanyi，J.L.&Powell，D.J.Systematic evaluation of multiple immune markers revealsprognostic factors in ovarian cancer.Gynecol.Oncol.2016；143:120-127.

Komdeur，F.L.，Wouters，M.C.A.，Workel，H.H.，Tijans，A.M.，Terwindt，A.L.J.，Brunekreeft，K.L.，Plat，A.，Klip，H.G.，Eggink，F.A.，Leffers，N.，Helfrich，W.，Samplonius，D.F.，Bremer，E.，Wisman，G.B.A.，Daemen，T.，Duiker，E.W.，Hollema，H.，Nijman，H.W.&de Bruyn，M.CD103+intraepithelial T cells in high-grade serousovarian Tumor-Resident CD8+T Cells Are Associated with Improved Survival inImmunotherapy-

van Kruchten，M.，Hospers，G.A.P.，Glaudemans，A.W.J.M.，Hollema，H.，Arts，H.J.G.&Reyners，A.K.L.Positron emission tomography imaging of oestrogenreceptor-expression in endometrial stromal sarcoma supports oestrogenreceptor-targeted therapy:case report and review of theliterature.Eur.J.Cancer 2013；49:3850-5.

Talbot，J.N.，Gligorov，J.，Nataf，V.，Montravers，F.，Huchet，V.，Michaud，L.，Ohnona，J.，Balogova，S.，Cussenot，O.，

Grootjans，W.，de Geus-Oei，L.-F.，Troost，E.G.C.，Visser，E.P.，Oyen，W.J.G.&Bussink，J.PET in the management of locally advanced and metastaticNSCLC.Nat.Rev.Clin.Oncol.2015；12:395-407.

Houshmand，S.，Boursi，B.，Salavati，A.，Simone，C.B.&Alavi，A.Applicationsof Fluorodeoxyglucose PET/Computed tomography in the assessment andprediction of radiation therapy-related complications.PET Clin.2015；10:555-71.

Bernard-Gauthier，V.，Bailey，J.J.，Berke，S.&Schirrmacher，R.Recentadvances in the development and application of radiolabeled kinase inhibitorsfor PET imaging.Molecules 2015；20:22000-27.

Challapalli，A.&Aboagye，E.O.Positron emission tomography imaging oftumor cell metabolism and application to therapy responsemonitoring.Front.Oncol.2016；6:44.

Spick，C.，Herrmann，K.&Czernin，J.18F-FDG PET/CT and PET/MRI performequally well in vancer:Evidence from studies on more than 2,300patients.J.Nucl.Med.2016；57:420-30.

Bollineni，V.R.，Kramer，G.M.，Jansma，E.P.，Liu，Y.&Oyen，W.J.G.A systematicreview on[(18)F]FLT-PET uptake as a measure of treatment response in cancerpatients.Eur.J.Cancer 2016；55:81-97.

Eggink，F.A.，Van Gool，I.C.，Leary，A.，Pollock，P.M.，Crosbie，E.J.，Mileshkin，L.，Jordanova，E.S.，Adam，J.，Freeman-Mills，L.，Church，D.N.，Creutzberg，C.L.，De Bruyn，M.，Nijman，H.W.&Bosse，T.Immunological profiling of molecularlyclassified high-risk endometrial cancers identifies POLE-mutant andmicrosatellite unstable carcinomas as candidates for checkpointinhibition.Oncoimmunology 2017；6:e1264565.

F.A.Ran，P.D.Hsu，J.Wright，V.Agarwala，D.A.Scott，F.Zhang，Genomeengineering using the CRISPR-Cas9 system，Nat.Protoc.8,2281-2308(2013).

A.Kol，A.T.van Scheltinga，M.Pool，C.Gerdes，E.de Vries，S.de Jong，ADCCresponses and blocking of EGFR-mediated signaling and cell growth bycombining the anti-EGFR antibodies imgatuzumab and cetuximab in NSCLC cells.，Oncotarget 8，45432-45446(2017).

B.J.C.Quah，H.S.Warren，C.R.Parish，Monitoring lymphocyte proliferationin vitro and in vivo with the intracellular fluorescent dyecarboxyfluorescein diacetate succinimidyl ester.，Nat.Protoc.2，2049-2056(2007).

E.C.F.Dijkers，J.G.W.Kosterink，A.P.Rademaker，L.R.Perk，G.a M.S.vanDongen，J.Bart，J.R.de Jong，E.G.E.de Vries，M.N.Lub-de Hooge，Development andcharacterization of clinical-grade 89Zr-trastuzumab for HER2/neu immunoPETimaging.，J.Nucl.Med.50，974-981(2009).

F.A.Ran，P.D.Hsu，J.Wright，V.Agarwala，D.A.Scott，F.Zhang.Genomeengineering using the CRISPR-Cas9 system.Nat.Protoc.8:2281-2308(2013)

P.G.Steenbakkers，F.van Meel，W.Olijve.A new approach to the generationof human or murine antibody producing hybridomas.J Immunol Methods.152:69-77(1992).

本文引用的所有参考文献以引用的方式并入本文中，其程度如同每个个别出版物、数据库条目(例如基因库序列或GeneID条目)、专利申请或专利特定地并且个别地被指示以引用的方式并入本文中一般。申请人根据37C.F.R.§1.57(b)(1)预期此以引用的方式并入的陈述涉及每一个个别出版物、数据库条目(例如基因库序列或GeneID条目)、专利申请或专利，其中的每一者按照37C.F.R.§1.57(b)(2)清楚地鉴别，即使此类引用不与以引用的方式并入的专用陈述直接相邻。本说明书内包括以引用的方式并入的专用陈述(若有)不以任何方式削弱此以引用的方式并入的一般陈述。本文中对参考文献的引用预期不承认所述参考文献为相关现有技术，它也不构成关于这些出版物或文件的内容或日期的任何承认。在参考文献提供的所要求的术语的定义与本说明书中所提供的定义矛盾的情况下，应使用本说明书中提供的定义来解释所要求的发明。

虽然已足够详细地为本领域技术人员描述和例示本发明来进行和使用本发明，但在不背离本发明的精神和范围的情况下，各种替代、修改以及改进应为显而易见的。本文所提供的实施例代表优选实施方案，为示例性的，并且预期不对本发明的范围构成限制。本领域技术人员将想到其中的修改和其他用途。这些修改涵盖于本发明的精神范围内并且由权利要求书的范围限定。

本领域技术人员将容易清楚的是，可在不背离本发明的范围和精神的情况下对本文所公开的发明作出不同的替换和修改。

本说明书中提到的所有专利申请、专利、出版物以及其他参考文献指示本发明所属领域一般技术人员的水平并且各自以引用的方式并入本文中。本文引用的参考文献不被承认为所要求的发明的现有技术。

除非另外定义，否则本文中所用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域一般技术人员通常所理解相同的含义。在矛盾的情况下，将以本说明书(包括定义)为准。

除非本文另外指出或根据上下文明显矛盾，否则在说明书与权利要求书中使用冠词“一种”、“一个”以及“所述”应理解为涵盖单数与复数两者。除非另外指出，否则术语“包含”、“有”、如“具有化学式”中的“具有”、“包括”以及“含有”应被视为开放术语(即，意指“包括但不限于”)。另外，无论何时实施方案中使用“包含”或另一开放性术语，应了解，可使用中间术语“基本上由……组成”或封闭术语“由……组成”更窄地要求相同实施方案。

术语“约”、“大约”或“近似”当结合数值使用时意味着包括值的集合或范围。举例来说，“约X”包括X±20％、±10％、±5％、±2％、±1％、±0.5％、±0.2％或±0.1％的值范围，其中X为一个数值。在一个实施方案中，术语“约”是指比规定的值多或少10％的值范围。在另一实施方案中，术语“约”是指比规定的值多或少5％的值范围。在另一实施方案中，术语“约”是指比规定的值多或少1％的值范围。

除非本文中另外指出，否则叙述值的范围仅仅旨在充当个别地提到属于所述范围内的每个单独值的简写方法，并且每个单独值并入本说明书中，如同它在本文中被个别地列举一般。除非另外指明，否则本文所用的范围包括所述范围的两个限值。举例来说，术语“在X与Y之间”和“在X至Y范围内包括X和Y以及其间的整数。另一方面，当本公开中提到一系列个别值时，本公开中还考虑包括作为两个端点的两个个别值中的任一者的任何范围。举例来说，表述“约100mg、200mg或400mg的剂量”还可指“从100变化至200mg的剂量”、“从200变化至400mg的剂量”或“从100变化至400mg的剂量”。

本文说明性地描述的发明可在不存在本文未特定公开的任何一种元件或多种元件、一种限制或多种限制的情况下适当地进行实践。因此，举例来说，在本文的每种情况下，术语“包含”、“基本上由……组成”以及“由……组成”中的任一者可用另外两个术语中的任一者替换。已使用的术语和表述是用作说明术语而不是限制术语，并且在使用此类术语和表述时不意在排除所展示和描述的特征的任何等效物或其部分，但应认识到，在所要求的发明范围内各种修改均为可能的。因此，应了解，虽然已通过优选实施方案和任选特征具体公开了本发明，但本领域技术人员可对本文所公开的概念作出修改和变更，并且此类修改和变更被视为在如随附权利要求书所限定的本发明范围内。

序列表

<110> 艾杜罗生物科技欧洲控股有限责任公司(ADURO BIOTECH HOLDINGS, EUROPEB.V.)

格罗宁根大学(RIJKSUNIVERSITEIT GRONINGEN)

格罗宁根学术医院(ACADEMISCH ZIEKENHUIS GRONINGEN)

德布鲁因(DE BRUYN)等

<120> 抗CD103抗体

<130> ABE-0010-PCT

<150> US 62/704,258

<151> 2020-04-30

<160> 45

<170> BiSSAP 1.3.6

<210> 1

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 合成：hCD103.01A重链CDR1 (氨基酸序列)

<400> 1

Gly Asp Ser Ile Thr Ser Gly Tyr

1 5

<210> 2

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 合成：hCD103.01A重链CDR2 (氨基酸序列)

<400> 2

Ile Thr Tyr Ser Gly Ser Thr

1 5

<210> 3

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 合成：hCD103.01A重链CDR3 (氨基酸序列)

<400> 3

Thr Arg His Tyr Tyr Gly Ser Asp Ala Met Asp Tyr

1 5 10

<210> 4

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 合成：hCD103.01A轻链CDR1 (氨基酸序列)

<400> 4

Gln Asp Val Ser Ile Ala

1 5

<210> 5

<211> 3

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 合成：hCD103.01A轻链CDR2 (氨基酸序列)

<400> 5

Ser Ala Ser

1

<210> 6

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 合成：hCD103.01A轻链CDR3 (氨基酸序列)

<400> 6

Gln Gln His Tyr Ser Thr Pro Trp Thr

1 5

<210> 7

<211> 118

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 合成：hCD103.01A重链(氨基酸序列)

<400> 7

Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Ser Leu Val Lys Pro Ser Gln

1 5 1015

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Thr Gly Asp Ser Ile Thr Ser Gly

202530

Tyr Trp Asn Trp Ile Arg Lys Phe Pro Gly Asn Lys Leu Glu Tyr Met

354045

Gly Tyr Ile Thr Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys

505560

Ser Arg Ile Ser Ile Thr Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Tyr Tyr Leu

65707580

Gln Leu Asn Ser Val Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Thr

859095

Arg His Tyr Tyr Gly Ser Asp Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Ser Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 8

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 合成：hCD103.01A轻链(氨基酸序列)

<400> 8

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser His Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly

1 5 1015

Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Ile Ala

202530

Val Ala Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile

354045

Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly

505560

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Val Gln Ala

65707580

Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Ser Thr Pro Trp

859095

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 9

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 合成：hCD103.02A重链CDR1 (氨基酸序列)

<400> 9

Gly Asp Ser Ile Thr Ser Gly Tyr

1 5

<210> 10

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 合成：hCD103.02A重链CDR2 (氨基酸序列)

<400> 10

Ile Thr Tyr Ser Gly Ser Thr

1 5

<210> 11

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 合成：hCD103.02A重链CDR3 (氨基酸序列)

<400> 11

Ala Arg Gly Tyr Tyr Gly Ser Asp Ala Met Asp Tyr

1 5 10

<210> 12

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 合成：hCD103.02A轻链CDR1 (氨基酸序列)

<400> 12

Gln Asp Val Ser Thr Ala

1 5

<210> 13

<211> 3

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 合成：hCD103.02A轻链CDR2 (氨基酸序列)

<400> 13

Ser Ala Ser

1

<210> 14

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 合成：hCD103.02A轻链CDR3 (氨基酸序列)

<400> 14

Gln Gln His Tyr Ser Pro Pro Trp Thr

1 5

<210> 15

<211> 118

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 合成：hCD103.02A重链(氨基酸序列)

<400> 15

Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Ser Leu Val Lys Pro Ser Gln

1 5 1015

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Thr Gly Asp Ser Ile Thr Ser Gly

202530

Tyr Trp Asn Trp Ile Arg Lys Phe Pro Gly Asn Lys Leu Glu Tyr Met

354045

Gly Tyr Ile Thr Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys

505560

Ser Arg Ile Ser Ile Thr Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Tyr Tyr Leu

65707580

Gln Phe Asn Ser Val Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala

859095

Arg Gly Tyr Tyr Gly Ser Asp Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Ser Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 16

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 合成：hCD103.02A轻链(氨基酸序列)

<400> 16

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser His Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly

1 5 1015

Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala

202530

Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile

354045

Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly

505560

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Val Gln Ala

65707580

Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Ser Pro Pro Trp

859095

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 17

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 合成：hCD103.05A重链CDR1 (氨基酸序列)

<400> 17

Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr Asn

1 5

<210> 18

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 合成：hCD103.05A重链CDR2 (氨基酸序列)

<400> 18

Ile Asp Pro Tyr Tyr Gly Gly Thr

1 5

<210> 19

<211> 19

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 合成：hCD103.05A重链CDR3 (氨基酸序列)

<400> 19

Ala Arg Ser Phe Tyr Gly Tyr Asp Ala Gly Ser Pro Tyr Asn Tyr Ala

1 5 1015

Met Asp Tyr

<210> 20

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 合成：hCD103.05A轻链CDR1 (氨基酸序列)

<400> 20

Gln Asp Val Gly Thr Phe

1 5

<210> 21

<211> 3

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 合成：hCD103.05A轻链CDR2 (氨基酸序列)

<400> 21

Trp Ala Ser

1

<210> 22

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 合成：hCD103.05A轻链CDR3 (氨基酸序列)

<400> 22

His Gln Tyr Ser Ser Tyr Pro Tyr Thr

1 5

<210> 23

<211> 126

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 合成：hCD103.05A重链(氨基酸序列)

<400> 23

Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Glu Lys Pro Gly Ala

1 5 1015

Ser Ala Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr

202530

Asn Met Asn Trp Val Lys Gln Ser Asn Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile

354045

Gly Asn Ile Asp Pro Tyr Tyr Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe

505560

Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr

65707580

Met Gln Leu Lys Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys

859095

Ala Arg Ser Phe Tyr Gly Tyr Asp Ala Gly Ser Pro Tyr Asn Tyr Ala

100 105 110

Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Pro Val Thr Val Ser Pro

115 120 125

<210> 24

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 合成：hCD103.05A轻链(氨基酸序列)

<400> 24

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser His Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly

1 5 1015

Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Gly Thr Phe

202530

Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile

354045

Tyr Trp Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly

505560

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asn Val Gln Ser

65707580

Glu Asp Leu Ala Asp Tyr Phe Cys His Gln Tyr Ser Ser Tyr Pro Tyr

859095

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Gln Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 25

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 合成：hCD103.06A重链CDR1 (氨基酸序列)

<400> 25

Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Trp

1 5

<210> 26

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 合成：hCD103.06A重链CDR2 (氨基酸序列)

<400> 26

Ile Tyr Pro Gly Ser Gly Ser Thr

1 5

<210> 27

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 合成：hCD103.06A重链CDR3 (氨基酸序列)

<400> 27

Thr Arg Gly Val Tyr Asp Asn Pro Tyr Tyr Phe Asp Tyr

1 5 10

<210> 28

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 合成：hCD103.06A轻链CDR1 (氨基酸序列)

<400> 28

Asp His Ile Asn Asn Trp

1 5

<210> 29

<211> 3

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 合成：hCD103.06A轻链CDR2 (氨基酸序列)

<400> 29

Gly Ala Thr

1

<210> 30

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 合成：hCD103.06A轻链CDR3 (氨基酸序列)

<400> 30

Gln Gln Tyr Trp Ser Ile Pro Leu Thr

1 5

<210> 31

<211> 120

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 合成：hCD103.06A重链(氨基酸序列)

<400> 31

Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ser Glu Leu Val Arg Pro Gly Ala

1 5 1015

Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr

202530

Trp Met His Trp Val Lys Gln Arg His Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile

354045

Gly Asn Ile Tyr Pro Gly Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asp Glu Lys Phe

505560

Lys Ser Lys Gly Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Ser Ser Thr Ala Tyr

65707580

Met His Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys

859095

Thr Arg Gly Val Tyr Asp Asn Pro Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 32

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 合成：hCD103.06A轻链(氨基酸序列)

<400> 32

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Ser Ser Asn Leu Ser Val Ser Leu Gly

1 5 1015

Gly Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Asp His Ile Asn Asn Trp

202530

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Asn Ala Pro Arg Val Leu Ile

354045

Ser Gly Ala Thr Ser Leu Glu Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

505560

Ser Gly Ser Gly Lys Asp Tyr Thr Leu Ser Ile Thr Ser Leu Gln Thr

65707580

Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Trp Ser Ile Pro Leu

859095

Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys

100 105

<210> 33

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 合成：hCD103.07A重链CDR1 (氨基酸序列)

<400> 33

Gly Asp Ser Ile Thr Ser Gly Tyr

1 5

<210> 34

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 合成：hCD103.07A重链CDR2 (氨基酸序列)

<400> 34

Ile Thr Tyr Ser Gly Ser Thr

1 5

<210> 35

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 合成：hCD103.07A重链CDR3 (氨基酸序列)

<400> 35

Ala Arg Asn Tyr Tyr Gly Ser Ser Ser Met Asp Tyr

1 5 10

<210> 36

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 合成：hCD103.07A轻链CDR1 (氨基酸序列)

<400> 36

Gln Asn Val Gly Ser Asp

1 5

<210> 37

<211> 3

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 合成：hCD103.07A轻链CDR2 (氨基酸序列)

<400> 37

Ser Ala Ser

1

<210> 38

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 合成：hCD103.07A轻链CDR3 (氨基酸序列)

<400> 38

Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Ser Thr

1 5

<210> 39

<211> 118

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 合成：hCD103.07A重链(氨基酸序列)

<400> 39

Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Ser Leu Val Lys Pro Ser Gln

1 5 1015

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Thr Gly Asp Ser Ile Thr Ser Gly

202530

Tyr Trp Asn Trp Ile Arg Lys Phe Pro Gly Asn Lys Leu Glu Tyr Met

354045

Gly Tyr Ile Thr Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys

505560

Ser Arg Ile Ser Ile Thr Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Tyr Tyr Leu

65707580

Gln Leu Asn Ser Val Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala

859095

Arg Asn Tyr Tyr Gly Ser Ser Ser Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Ser Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 40

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 合成：hCD103.07A轻链(氨基酸序列)

<400> 40

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Gln Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Ala

1 5 1015

Asp Arg Val Ser Val Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asn Val Gly Ser Asp

202530

Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Ser Leu Ile

354045

Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly

505560

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asn Val Gln Ser

65707580

Glu Asp Leu Ala Glu Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Ser

859095

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 41

<211> 1179

<212> PRT

<213> 智人(Homo sapiens)

<220>

<223> 人整合素α-E (氨基酸序列)

<400> 41

Met Trp Leu Phe His Thr Leu Leu Cys Ile Ala Ser Leu Ala Leu Leu

1 5 1015

Ala Ala Phe Asn Val Asp Val Ala Arg Pro Trp Leu Thr Pro Lys Gly

202530

Gly Ala Pro Phe Val Leu Ser Ser Leu Leu His Gln Asp Pro Ser Thr

354045

Asn Gln Thr Trp Leu Leu Val Thr Ser Pro Arg Thr Lys Arg Thr Pro

505560

Gly Pro Leu His Arg Cys Ser Leu Val Gln Asp Glu Ile Leu Cys His

65707580

Pro Val Glu His Val Pro Ile Pro Lys Gly Arg His Arg Gly Val Thr

859095

Val Val Arg Ser His His Gly Val Leu Ile Cys Ile Gln Val Leu Val

100 105 110

Arg Arg Pro His Ser Leu Ser Ser Glu Leu Thr Gly Thr Cys Ser Leu

115 120 125

Leu Gly Pro Asp Leu Arg Pro Gln Ala Gln Ala Asn Phe Phe Asp Leu

130 135 140

Glu Asn Leu Leu Asp Pro Asp Ala Arg Val Asp Thr Gly Asp Cys Tyr

145 150 155 160

Ser Asn Lys Glu Gly Gly Gly Glu Asp Asp Val Asn Thr Ala Arg Gln

165 170 175

Arg Arg Ala Leu Glu Lys Glu Glu Glu Glu Asp Lys Glu Glu Glu Glu

180 185 190

Asp Glu Glu Glu Glu Glu Ala Gly Thr Glu Ile Ala Ile Ile Leu Asp

195 200 205

Gly Ser Gly Ser Ile Asp Pro Pro Asp Phe Gln Arg Ala Lys Asp Phe

210 215 220

Ile Ser Asn Met Met Arg Asn Phe Tyr Glu Lys Cys Phe Glu Cys Asn

225 230 235 240

Phe Ala Leu Val Gln Tyr Gly Gly Val Ile Gln Thr Glu Phe Asp Leu

245 250 255

Arg Asp Ser Gln Asp Val Met Ala Ser Leu Ala Arg Val Gln Asn Ile

260 265 270

Thr Gln Val Gly Ser Val Thr Lys Thr Ala Ser Ala Met Gln His Val

275 280 285

Leu Asp Ser Ile Phe Thr Ser Ser His Gly Ser Arg Arg Lys Ala Ser

290 295 300

Lys Val Met Val Val Leu Thr Asp Gly Gly Ile Phe Glu Asp Pro Leu

305 310 315 320

Asn Leu Thr Thr Val Ile Asn Ser Pro Lys Met Gln Gly Val Glu Arg

325 330 335

Phe Ala Ile Gly Val Gly Glu Glu Phe Lys Ser Ala Arg Thr Ala Arg

340 345 350

Glu Leu Asn Leu Ile Ala Ser Asp Pro Asp Glu Thr His Ala Phe Lys

355 360 365

Val Thr Asn Tyr Met Ala Leu Asp Gly Leu Leu Ser Lys Leu Arg Tyr

370 375 380

Asn Ile Ile Ser Met Glu Gly Thr Val Gly Asp Ala Leu His Tyr Gln

385 390 395 400

Leu Ala Gln Ile Gly Phe Ser Ala Gln Ile Leu Asp Glu Arg Gln Val

405 410 415

Leu Leu Gly Ala Val Gly Ala Phe Asp Trp Ser Gly Gly Ala Leu Leu

420 425 430

Tyr Asp Thr Arg Ser Arg Arg Gly Arg Phe Leu Asn Gln Thr Ala Ala

435 440 445

Ala Ala Ala Asp Ala Glu Ala Ala Gln Tyr Ser Tyr Leu Gly Tyr Ala

450 455 460

Val Ala Val Leu His Lys Thr Cys Ser Leu Ser Tyr Ile Ala Gly Ala

465 470 475 480

Pro Arg Tyr Lys His His Gly Ala Val Phe Glu Leu Gln Lys Glu Gly

485 490 495

Arg Glu Ala Ser Phe Leu Pro Val Leu Glu Gly Glu Gln Met Gly Ser

500 505 510

Tyr Phe Gly Ser Glu Leu Cys Pro Val Asp Ile Asp Met Asp Gly Ser

515 520 525

Thr Asp Phe Leu Leu Val Ala Ala Pro Phe Tyr His Val His Gly Glu

530 535 540

Glu Gly Arg Val Tyr Val Tyr Arg Leu Ser Glu Gln Asp Gly Ser Phe

545 550 555 560

Ser Leu Ala Arg Ile Leu Ser Gly His Pro Gly Phe Thr Asn Ala Arg

565 570 575

Phe Gly Phe Ala Met Ala Ala Met Gly Asp Leu Ser Gln Asp Lys Leu

580 585 590

Thr Asp Val Ala Ile Gly Ala Pro Leu Glu Gly Phe Gly Ala Asp Asp

595 600 605

Gly Ala Ser Phe Gly Ser Val Tyr Ile Tyr Asn Gly His Trp Asp Gly

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Thr Gly Ser Ile Gln Val Ser Ser Arg Glu Ala Asn Cys Arg Thr His

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Gln Ala Phe Met Arg Lys Asp Val Arg Asp Ile Leu Thr Pro Ile Gln

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