一种作为免疫调节剂的吲哚类化合物及其制备方法和用途

技术领域

本发明属于生物医药领域，具体而言涉及一种小分子吲哚类化合物，其可以作为免疫调节剂、制备方法及其用途。

背景技术

CD73，又称胞外-5′-核苷酸酶(e5NT)，是由NT5E基因编码的膜蛋白，分子量为70KD。CD73高表达于许多免疫细胞、癌细胞的表面，是导致肿瘤微环境免疫抑制的重要因素，与多种实体瘤的不良预后密切相关。CD73的一个功能是酶功能，参与嘌呤核苷酸的补救合成途径，水解单磷酸腺苷(AMP)生成腺苷。CD73通过葡糖基磷脂酰肌醇(GPI)锚定在多种细胞膜的表面，形成Open型与Closed型两种同源二聚体。当CD73处于Closed型时，其含有的锌离子与AMP的磷酸基结合，在His118等氨基酸的参与下，将AMP水解为腺苷。在缺氧肿瘤微环境中，细胞的死亡导致肿瘤细胞外产生高水平的三磷酸腺苷(ATP)。ATP进一步被CD39催化水解生成AMP，AMP最终被CD73水解为腺苷。生成的腺苷通过激活G蛋白偶联受体的四种亚型之一来控制多种生理反应。由于其作为腺苷的主要细胞外来源的作用，CD73已成为组织内稳态和免疫、炎症、疼痛、缺血、组织纤维化和癌症相关的病理生理反应的重要调节因子，并成为炎症、慢性疼痛、缺氧和癌症治疗的理想靶点。CD73催化产生的腺苷主要通过以下几个方面发挥免疫抑制作用：1)肿瘤细胞外高水平的腺苷与其受体结合，这一作用减弱了细胞毒T淋巴细胞(CTL)、自然杀伤(NK)细胞、巨噬细胞、树突状细胞等免疫细胞的反应；2)增强调节性T细胞(Treg)的抑制能力、巨噬细胞M2的分化以及骨髓来源的抑制性细胞(MDSC)的增殖。抑制CD73的活性能够降低肿瘤微环境中腺苷的含量，阻断腺苷介导的免疫抑制。CD73的另一个功能是非酶功能，参与细胞跨膜信号转导、细胞粘附及迁移等生理功能。因此，CD73抑制剂能够用于制备CD73水平或活性过高引起的相关疾病的治疗和/或诊断药物，如癌症、感染性疾病、自身免疫性疾病、神经退行性疾病的治疗和/或诊断药物。

发明内容

根据本发明的一个方面，本发明的一个目的在于提供一类由通式(I)所示的化合物、其立体异构体、互变异构体、氘代衍生物或药学上可接受的盐：

其中，X1和X2各自独立地为N或C；

Y1和Y2各自独立地为链接键、-CH

R1和R2各自独立地为氢、氘、卤素、氰基、羧基、羟基、C

R3和R4各自独立地为氢、C

R5选自氢、C

优选地，R1和R2各自独立地为氢、氘、卤素、氰基、羧基、羟基、C

优选地，R1和R2各自独立地为氢、氘、卤素、氰基、羧基、羟基、甲基、乙基、丙基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、苯基、萘基、环丙基、环丁基、环戊基、环己基、取代或未取代的四氢吡咯、取代或未取代的四氢呋喃、取代或未取代的四氢吡啶、取代或未取代的四氢吡喃、取代或未取代的苯基亚甲基、取代或未取代的苯基亚乙基、取代或未取代的苯基亚丙基，其中所述“取代”是指含有1至3个选自氰基、羧基、羟基、甲基、乙基、丙基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、三氟甲基的取代基，所述Ra和Rb各自独立地选自氢、甲基、乙基、丙基、羧基、羧基取代的亚甲基、羧基取代的亚乙基、羧基取代的亚丙基。

优选地，R3和R4各自独立地为氢、C

优选地，R3和R4各自独立地为氢、甲基、乙基、丙基、苯基、甲基取代的苯基、甲氧基取代的苯基、三氟甲基取代的苯基、三氟甲氧基取代的苯基。

优选地，R5选自氢、C

优选地，R5选自氢、甲基、乙基、丙基、

优选地X1为N，X2为C。

优选地，根据本发明的所述由通式(I)所示的化合物、其立体异构体、互变异构体、氘代衍生物或药学上可接受的盐选自以下化合物中：

根据本发明的另一个方面，本发明的另一个目的在于提供一类由通式(I)所示的化合物、其立体异构体、互变异构体、氘代衍生物或药学上可接受的盐的制备方法，所述方法选自以下的路线一或路线二：

路线一

该路线以6-甲氧基吲哚衍生物为原料，经过N-烷基化、吲哚-3-位烷基化、脱甲基、曼尼希反应、O-烷基化完成；其中，L为离去基团卤素、磺酸基。各个反应步骤均为本领域技术常规合成方法，本领域技术人员可以根据目标产物的结构适当修改现有技术的路线获得本路线的具体实审方案。

路线二

该路线以5-甲氧基吲哚衍生物为原料，经过N-烷基化、吲哚-3-位烷基化、脱甲基、曼尼希反应、O-烷基化完成，其中，L为离去基团卤素、磺酸基。各个反应步骤均为本领域技术常规合成方法，本领域技术人员可以根据目标产物的结构适当修改现有技术的路线获得本路线的具体实审方案。

根据本发明的另一个方面，本发明提供了由通式(I)所示的化合物、其立体异构体、互变异构体、氘代衍生物或药学上可接受的盐作为CD73抑制剂的用途。

根据本发明的另一个方面，本发明提供了一种药物组合物，所述药物组合物包括治疗有效量的根据本发明的由通式(I)所示的化合物、其立体异构体、互变异构体、氘代衍生物或药学上可接受的盐作为活性成分，以及药学上可接受的辅料。

根据本发明的另一个方面，本发明提供了由通式(I)所示的化合物、其立体异构体、互变异构体、氘代衍生物或药学上可接受的盐或者根据本发明的所述药物组合物在制备治疗与CD73抑制相关的癌症、自身免疫性疾病、病毒或细菌感染性疾病的药物中的用途。

具体实施方式

以下，将详细地描述本发明。在进行描述之前，应当理解的是，在本说明书和所附的权利要求书中使用的术语不应解释为限制于一般含义和字典含义，而应当在允许发明人适当定义术语以进行最佳解释的原则的基础上，根据与本发明的技术方面相应的含义和概念进行解释。因此，这里提出的描述仅仅是出于举例说明目的的优选实例，并非意图限制本发明的范围，从而应当理解的是，在不偏离本发明的精神和范围的情况下，可以由其获得其他等价方式或改进方式。

在本文中，所有以数值范围或百分比范围形式界定的特征或条件仅是为了简洁及方便。据此，数值范围或百分比范围的描述应视为已涵盖且具体公开所有可能的次级范围及范围内的个别数值，特别是整数数值。举例而言，“1至8”的范围描述应视为已经具体公开如1至7、2至8、2至6、3至6、4至8、3至8等等所有次级范围，特别是由所有整数数值所界定的次级范围，且应视为已经具体公开范围内如1、2、3、4、5、6、7、8等个别数值。除非另有指明，否则前述解释方法适用于本发明全文的所有内容，不论范围广泛与否。

若数量或其他数值或参数是以范围、较佳范围或一系列上限与下限表示，则其应理解成是本文已特定公开了由任一对该范围的上限或较佳值与该范围的下限或较佳值构成的所有范围，不论这些范围是否有分别公开。此外，本文中若提到数值的范围时，除非另有说明，否则该范围应包括其端点以及范围内的所有整数与分数。

在本文中，在可实现发明目的的前提下，数值应理解成具有该数值有效位数的精确度。举例来说，数字40.0则应理解成涵盖从39.50至40.49的范围。

在本文中，对于使用马库什群组(Markush group)或选项式用语以描述本发明特征或实例的情形，本领域技术人员应了解马库什群组或选项列表内所有要素的次级群组或任何个别要素亦可用于描述本发明。举例而言，若X描述成“选自于由X1、X2及X3所组成的群组”，亦表示已经完全描述出X为X1的主张与X为X1及/或X2的主张。再者，对于使用马库什群组或选项式用语以描述本发明的特征或实例的情况，本领域技术人员应了解马库什群组或选项列表内所有要素的次级群组或个别要素的任何组合亦可用于描述本发明。据此，举例而言，若X描述成“选自于由X1、X2及X3所组成的群组”，且Y描述成“选自于由Y1、Y2及Y3所组成的群组”，则表示已经完全描述出X为X1或X2或X3而Y为Y1或Y2或Y3的主张。

以下实施例仅是作为本发明的实施方案的例子列举，并不对本发明构成任何限制，本领域技术人员可以理解在不偏离本发明的实质和构思的范围内的修改均落入本发明的保护范围。除非特别说明，以下实施例中使用的试剂和仪器均为市售可得产品。

实施例PF-2001：

1-((2,2'-二甲基-[1,1'-二苯基]-3-基)甲基)-6-甲氧基-1H-吲哚

氮气保护条件下，3-溴-2-甲基苯甲醇(MW＝201，201g，1.0mol)、2-甲基苯硼酸(MW＝136，136g，1.0mol)、碳酸钠(MW＝106，212g，2.0mol)分散于1,4-二氧六环(2000mL)中，加入去离子(500mL)，加入PdCl

将PF-200101(MW＝212，212g，1.0mol)分散于二氯甲烷(2500mL)中，加入氯化亚砜(MW＝119，143g，1.2mol)，室温反应3小时。反应混合物水洗涤两次(3000mL×2)，以无水硫酸镁干燥，抽滤，滤饼以二氯甲烷洗涤两次(100mL×2)。合并二氯甲烷相，浓缩至干，得化合物PF-200102(MW＝230，219g)，产率95％。MS(ESI,m/z):231.1[M+H]

0-5℃条件下，6-甲氧基吲哚(MW＝147，14.7g，0.1mol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(200mL)中，分批加入60％氢化钠(MW＝24，6.0g，0.15mol)，反应30分钟，滴入PF-200102(MW＝230，25.3g，0.11mol)。0-25℃继续反应6小时。缓慢加入水(400mL)，以二氯甲烷萃取(300mL×2)。二氯甲烷相以饱和碳酸钠水溶液洗涤两次(0.5mol/L，300mL×2)，以无水硫酸镁干燥，抽滤，滤饼以二氯甲烷洗涤两次(100mL×2)。合并二氯甲烷相，浓缩至干，得化合物PF-2001(MW＝341，25g)，产率74％。MS(ESI,m/z)：342.1[M+H]

实施例PF-2002：

3-苄基-1-((2,2'-二甲基-[1,1'-二苯基]-3-基)甲基)-6-甲氧基-1H-吲哚

0-5℃条件下，将三乙基硅烷(MW＝116，34.8g，0.3mol)溶于二氯甲烷(300mL)中，加入PF-2001(MW＝341，34.1g，0.1mol)，加入苯甲醛(MW＝106，11.7g，0.11mol)，加入三氟乙酸(MW＝114，17.1g，0.15mol)。加入完毕，25℃继续反应2小时。缓慢加入甲醇(300mL)，析出固体。加热回流，使固体溶解，溶液冷却至25℃，析出固体。抽滤，固体以甲醇(150mL×2)洗涤，得白色固体PF-2002(MW＝431，36g)，产率84％。MS(ESI,m/z)：432.2[M+H]

实施例PF-2003：

1-苄基-3-((2,2'-二甲基-[1,1'-二苯基]-3-基)甲基)-5-甲氧基-1H-吲哚

0-5℃条件下，将PF-200101(MW＝212，21.2g，0.1mol)溶于二氯甲烷(300mL)中，缓慢加入氯铬酸吡啶盐PCC(MW＝216，21.6g，0.1mol)。加入完毕，0-5℃继续反应2小时。抽滤，固体以二氯甲烷(150mL×2)洗涤，二氯甲烷相以3N盐酸(100mL×6)洗涤，以水(100mL×3)洗涤，以无水硫酸镁干燥，抽滤，滤饼以二氯甲烷洗涤两次(100mL×2)。合并二氯甲烷相，浓缩至干，得黑色固体PF-200301(MW＝210，15g)，产率71％。MS(ESI,m/z)：211.2[M+H]

0-5℃条件下，将三乙基硅烷(MW＝116，34.8g，0.3mol)溶于二氯甲烷(300mL)中，加入1-苄基-5-甲氧基-1H-吲哚(MW＝237，23.7g，0.1mol)，加入PF-200301(MW＝210，21.0g，0.1mol)，加入三氟乙酸(MW＝114，17.1g，0.15mol)。加入完毕，25℃继续反应2小时。缓慢加入甲醇(300mL)，析出固体。加热回流，使固体溶解，溶液冷却至25℃，析出固体。抽滤，固体以甲醇(150mL×2)洗涤，得白色固体PF-2003(MW＝431，33g)，产率77％。MS(ESI,m/z)：432.2[M+H]

实施例PF-2004：

3-((2,2'-二甲基-[1,1'-二苯基]-3-基)甲基)-6-甲氧基-1-(2-甲基苄基)-1H-吲哚

0-5℃条件下，将三乙基硅烷(MW＝116，34.8g，0.3mol)溶于二氯甲烷(300mL)中，加入1-(2-甲基苄基)-6-甲氧基-1H-吲哚(MW＝251，25.1g，0.1mol)，加入PF-200301(MW＝210，21.0g，0.1mol)，加入三氟乙酸(MW＝114，17.1g，0.15mol)。加入完毕，25℃继续反应2小时。缓慢加入甲醇(300mL)，析出固体。加热回流，使固体溶解，溶液冷却至25℃，析出固体。抽滤，固体以甲醇(150mL×2)洗涤，得白色固体PF-2004(MW＝445，35g)，产率79％。MS(ESI,m/z)：446.2[M+H]

实施例PF-2005：

1-苄基-5-甲氧基-3-((2-甲基-4'-(三氟甲氧基)-[1,1'-二苯基]-3-基)甲基)-1H-吲哚

0-5℃条件下，将PF-200501(MW＝282，28.2g，0.1mol)溶于二氯甲烷(300mL)中，缓慢加入氯铬酸吡啶盐PCC(MW＝216，21.6g，0.1mol)。加入完毕，0-5℃继续反应2小时。抽滤，固体以二氯甲烷(150mL×2)洗涤，二氯甲烷相以3N盐酸(100mL×6)洗涤，以水(100mL×3)洗涤，以无水硫酸镁干燥，抽滤，滤饼以二氯甲烷洗涤两次(100mL×2)。合并二氯甲烷相，浓缩至干，得黑色固体PF-200502(MW＝280，23g)，产率82％。MS(ESI,m/z)：281.1[M+H]

0-5℃条件下，将三乙基硅烷(MW＝116，34.8g，0.3mol)溶于二氯甲烷(300mL)中，加入1-苄基-5-甲氧基-1H-吲哚(MW＝237，23.7g，0.1mol)，加入PF-200502(MW＝280，28.0g，0.1mol)，加入三氟乙酸(MW＝114，17.1g，0.15mol)。加入完毕，25℃继续反应2小时。缓慢加入甲醇(300mL)，析出固体。加热回流，使固体溶解，溶液冷却至25℃，析出固体。抽滤，固体以甲醇(150mL×2)洗涤，得白色固体PF-2005(MW＝501，29g)，产率58％。MS(ESI,m/z)：502.2[M+H]

实施例PF-2006：

5-甲氧基-3-((2-甲基-4'-(三氟甲氧基)-[1,1'-二苯基]-3-基)甲基)-1-(2-甲基苄基)-1H-吲哚

0-5℃条件下，将三乙基硅烷(MW＝116，34.8g，0.3mol)溶于二氯甲烷(300mL)中，加入1-(2-甲基苄基)-5-甲氧基-1H-吲哚(MW＝251，25.1g，0.1mol)，加入PF-200502(MW＝280，28.0g，0.1mol)，加入三氟乙酸(MW＝114，17.1g，0.15mol)。加入完毕，25℃继续反应2小时。缓慢加入甲醇(300mL)，析出固体。加热回流，使固体溶解，溶液冷却至25℃，析出固体。抽滤，固体以甲醇(150mL×2)洗涤，得白色固体PF-2006(MW＝515，35g)，产率68％。MS(ESI,m/z)：516.2[M+H]

实施例PF-2007：

1-苄基-5-甲氧基-3-(2-甲基苄基)-1H-吲哚

0-5℃条件下，将三乙基硅烷(MW＝116，34.8g，0.3mol)溶于二氯甲烷(300mL)中，加入1-苄基-5-甲氧基-1H-吲哚(MW＝237，23.7g，0.1mol)，加入2-甲基苯甲醛(MW＝120，12.0g，0.1mol)，加入三氟乙酸(MW＝114，17.1g，0.15mol)。加入完毕，25℃继续反应2小时。缓慢加入甲醇(300mL)，析出固体。加热回流，使固体溶解，溶液冷却至25℃，析出固体。抽滤，固体以甲醇(150mL×2)洗涤，得白色固体PF-2007(MW＝341，24g)，产率70％。MS(ESI,m/z)：342.2[M+H]

实施例PF-2008：

6-甲氧基-1-((2-甲基-4'-(三氟甲氧基)-[1,1'-二苯基]-3-基)甲基)-1H-吲哚

25℃条件下，将PF-200501(MW＝282，28.2g，0.1mol)分散于二氯甲烷(250mL)中，加入氯化亚砜(MW＝119，14.3g，0.12mol)，25℃反应3小时。反应混合物水洗涤两次(300mL×2)，以无水硫酸镁干燥，抽滤，滤饼以二氯甲烷洗涤两次(100mL×2)。合并二氯甲烷相，浓缩至干，得化合物PF-200801(MW＝300，28g)，产率93％。MS(ESI,m/z):301.1[M+H]

0-5℃条件下，6-甲氧基吲哚(MW＝147，14.7g，0.1mol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(200mL)中，分批加入60％氢化钠(MW＝24，6.0g，0.15mol)，反应30分钟，滴入PF-200801(MW＝300，33.0g，0.11mol)。0-25℃继续反应6小时。缓慢加入水(400mL)，以二氯甲烷萃取(300mL×2)。二氯甲烷相以饱和碳酸钠水溶液洗涤两次(300mL×2)，以无水硫酸镁干燥，抽滤，滤饼以二氯甲烷洗涤两次(100mL×2)。合并二氯甲烷相，浓缩至干，得化合物PF-2008(MW＝411，29g)，产率71％。MS(ESI,m/z)：412.1[M+H]

实施例PF-2009：

3-苄基-6-甲氧基-1-(2-甲氧基苄基)-1H-吲哚

0-5℃条件下，将三乙基硅烷(MW＝116，34.8g，0.3mol)溶于二氯甲烷(300mL)中，加入1-(2-甲基苄基)-6-甲氧基-1H-吲哚(MW＝251，25.1g，0.1mol)，加入苯甲醛(MW＝106，10.6g，0.1mol)，加入三氟乙酸(MW＝114，17.1g，0.15mol)。加入完毕，25℃继续反应2小时。缓慢加入甲醇(300mL)，析出固体。加热回流，使固体溶解，溶液冷却至25℃，析出固体。抽滤，固体以甲醇(150mL×2)洗涤，得白色固体PF-2009(MW＝341，27g)，产率80％。MS(ESI,m/z)：342.2[M+H]

实施例PF-2010：

1-苄基-3-(3-溴-2-甲基苄基)-6-甲氧基-1H-吲哚

0-5℃条件下，将三乙基硅烷(MW＝116，34.8g，0.3mol)溶于二氯甲烷(300mL)中，加入1-苄基-6-甲氧基-1H-吲哚(MW＝237，23.7g，0.1mol)，加入3-溴-2-甲基苯甲醛(MW＝198，19.8g，0.1mol)，加入三氟乙酸(MW＝114，17.1g，0.15mol)。加入完毕，25℃继续反应2小时。缓慢加入甲醇(300mL)，析出固体。加热回流，使固体溶解，溶液冷却至25℃，析出固体。抽滤，固体以甲醇(150mL×2)洗涤，得白色固体PF-2010(MW＝419，30g)，产率72％。MS(ESI,m/z)：419.1[M+H]

实施例PF-2011：

3-(3-溴-2-甲基苄基)-5-甲氧基-1-(2-甲基苄基)-1H-吲哚

0-5℃条件下，将三乙基硅烷(MW＝116，34.8g，0.3mol)溶于二氯甲烷(300mL)中，加入1-(2-甲基苄基)-5-甲氧基-1H-吲哚(MW＝251，25.1g，0.1mol)，加入3-溴-2-甲基苯甲醛(MW＝198，19.8g，0.1mol)，加入三氟乙酸(MW＝114，17.1g，0.15mol)。加入完毕，25℃继续反应2小时。缓慢加入甲醇(300mL)，析出固体。加热回流，使固体溶解，溶液冷却至25℃，析出固体。抽滤，固体以甲醇(150mL×2)洗涤，得白色固体PF-2010(MW＝433，29g)，产率67％。MS(ESI,m/z)：434.1[M+H]

实施例PF-2012：

1-((2,2'-二甲基-[1,1'-二苯基]-3-基)甲基)-5-甲氧基-1H-吲哚

0-5℃条件下，5-甲氧基吲哚(MW＝147，14.7g，0.1mol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(200mL)中，分批加入60％氢化钠(MW＝24，6.0g，0.15mol)，反应30分钟，滴入PF-200102(MW＝230，25.3g，0.11mol)。0-25℃继续反应6小时。缓慢加入水(400mL)，以二氯甲烷萃取(300mL×2)。二氯甲烷相以饱和碳酸钠水溶液洗涤两次(300mL×2)，以无水硫酸镁干燥，抽滤，滤饼以二氯甲烷洗涤两次(100mL×2)。合并二氯甲烷相，浓缩至干，得化合物PF-2012(MW＝341，25g)，产率73％。MS(ESI,m/z)：342.1[M+H]

实施例PF-2013：

1-苄基-3-((2,2'-二甲基-[1,1'-二苯基]-3-基)甲基)-1H-吲哚-5-醇

0-5℃条件下，将PF-2003(MW＝431，43.1g，0.1mol)溶于二氯甲烷(400mL)中，加入三溴化硼(MW＝248，27.3g，0.11mol)。0-5℃继续反应2小时。缓慢加入甲醇(100mL)，搅拌30分钟，加入饱和碳酸氢钠水溶液(400mL)，分液，二氯甲烷相以饱和食盐水(150mL×2)洗涤，二氯甲烷相以无水硫酸镁干燥，抽滤，浓缩至干，得褐色固体PF-2013(MW＝417，40g)，产率96％。MS(ESI,m/z)：416.2[M-H]

实施例PF-2014：

1-苄基-3-((2,2'-二甲基-[1,1'-二苯基]-3-基)甲基)-6-((二甲基氨基)甲基)-1H-吲哚-5-醇

0-5℃条件下，将PF-2013(MW＝417，41.7g，0.1mol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(200mL)中，加入二甲胺水溶液(40％，MW＝45，13.5g，0.12mol)，滴入甲醛水溶液(37％，MW＝30，9.7g，0.12mol)。滴加完毕，转移至25℃继续反应4小时。缓慢加入水(1000mL)，析出褐色固体，抽滤，烘干，得褐色固体PF-2014(MW＝474，36g)，产率76％。MS(ESI,m/z)：475.2[M+H]

实施例PF-2015：

3-(((1-苄基-3-((2,2'-二甲基-[1,1'-二苯基]-3-基)甲基)-6-((二甲基氨基)甲基)-1H-吲哚-5-基)羟基)甲基)苯腈

25℃条件下，将PF-2014(MW＝474，4.74g，0.01mol)溶于1,4-二氧六环(50mL)中，加入叔丁醇钾(MW＝112，1.23g，0.011mol)，加入间氰基溴苄(MW＝195，2.34g，0.012mol)。加料完毕，转移至90℃继续反应12小时。缓慢加入水(250mL)，析出白色固体，抽滤，烘干，得白色固体PF-2015(MW＝589，3.20g)，产率54％。MS(ESI,m/z)：590.2[M+H]

实施例PF-2016：

1-苄基-5-甲氧基-3-((2-甲基-[1,1'-二苯基]-3-基)甲基)-1H-吲哚

0-5℃条件下，将三乙基硅烷(MW＝116，34.8g，0.3mol)溶于二氯甲烷(300mL)中，加入1-苄基-5-甲氧基-1H-吲哚(MW＝237，23.7g，0.1mol)，加入3-苯基-2-甲基苯甲醛(MW＝196，19.6g，0.1mol)，加入三氟乙酸(MW＝114，17.1g，0.15mol)。加入完毕，25℃继续反应2小时。缓慢加入甲醇(300mL)，析出固体。加热回流，使固体溶解，溶液冷却至25℃，析出固体。抽滤，固体以甲醇(150mL×2)洗涤，得白色固体PF-2016(MW＝417，36g)，产率86％。MS(ESI,m/z)：418.2[M+H]

实施例PF-2017：

1-苄基-3-((2-甲基-[1,1'-二苯基]-3-基)甲基)-1H-吲哚-5-醇

0-5℃条件下，将PF-2016(MW＝417，41.7g，0.1mol)溶于二氯甲烷(400mL)中，加入三溴化硼(MW＝248，27.3g，0.11mol)。0-5℃继续反应2小时。缓慢加入甲醇(100mL)，搅拌30分钟，加入饱和碳酸氢钠水溶液(400mL)，分液，二氯甲烷相以饱和食盐水(150mL×2)洗涤，二氯甲烷相以无水硫酸镁干燥，抽滤，浓缩至干，得褐色固体PF-2017(MW＝403，38g)，产率94％。MS(ESI,m/z)：402.2[M-H]

实施例PF-2018：

1-苄基-6-((二甲基氨基)甲基)-3-((2-二甲基-[1,1'-二苯基]-3-基)甲基)-1H-吲哚-5-醇

0-5℃条件下，将PF-2017(MW＝403，40.3g，0.1mol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(200mL)中，加入二甲胺水溶液(40％，MW＝45，13.5g，0.12mol)，滴入甲醛水溶液(37％，MW＝30，9.7g，0.12mol)。滴加完毕，转移至25℃继续反应4小时。缓慢加入水(1000mL)，析出褐色固体，抽滤，烘干，得褐色固体PF-2018(MW＝460，36g)，产率76％。MS(ESI,m/z)：461.2[M+H]

实施例PF-2019：

3-(((1-苄基-6-((二甲基氨基)甲基)-3-((2-甲基-[1,1'-二苯基]-3-基)甲基)-1H-吲哚-5-基)羟基)甲基)苯腈

25℃条件下，将PF-2018(MW＝460，4.60g，0.01mol)溶于1,4-二氧六环(50mL)中，加入叔丁醇钾(MW＝112，1.23g，0.011mol)，加入间氰基溴苄(MW＝195，2.34g，0.012mol)。加料完毕，转移至90℃继续反应12小时。缓慢加入水(250mL)，析出白色固体，抽滤，烘干，得白色固体PF-2019(MW＝575，2.63g)，产率46％。MS(ESI,m/z)：576.2[M+H]

实施例PF-2020：

1-苄基-3-((2-甲基-4'-(三氟甲氧基)-[1,1'-二苯基]-3-基)甲基)-1H-吲哚-5-醇

0-5℃条件下，将PF-2005(MW＝501，50.1g，0.1mol)溶于二氯甲烷(400mL)中，加入三溴化硼(MW＝248，27.3g，0.11mol)。0-5℃继续反应2小时。缓慢加入甲醇(100mL)，搅拌30分钟，加入饱和碳酸氢钠水溶液(400mL)，分液，二氯甲烷相以饱和食盐水(150mL×2)洗涤，二氯甲烷相以无水硫酸镁干燥，抽滤，浓缩至干，得褐色固体PF-2020(MW＝487，36g)，产率74％。MS(ESI,m/z)：486.2[M-H]

实施例PF-2021：

((1-苄基-5-羟基-3-((2-甲基-4'-(三氟甲氧基)-[1,1'-二苯基]-3-基)甲基)-1H-吲哚-6-基)甲基)-L-脯氨酸

0-5℃条件下，将PF-2020(MW＝487，48.7g，0.1mol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(200mL)中，加入L-脯氨酸(MW＝115，13.8g，0.12mol)，滴入甲醛水溶液(37％，MW＝30，9.7g，0.12mol)。滴加完毕，转移至25℃继续反应4小时。缓慢加入水(1000mL)，析出白色固体，抽滤，烘干，得白色固体PF-2021(MW＝614，39g)，产率64％。MS(ESI,m/z)：613.2[M-H]

实施例PF-2022：

甲基((1-苄基-5-羟基-3-((2-甲基-4'-(三氟甲氧基)-[1,1'-二苯基]-3-基)甲基)-1H-吲哚-6-基)甲基)-L-脯氨酸

0-5℃条件下，将PF-2021(MW＝614，6.14g，0.01mol)分散于甲醇(60mL)中，加入氯化亚砜(MW＝119，2.38g，0.02mol)。滴加完毕，将反应混合物加热至40℃，继续反应6小时。浓缩至干，得白色固体。将白色固体溶于乙酸乙酯(60mL)，以饱和碳酸氢钠水溶液(60mL×3)洗涤。乙酸乙酯相以无水硫酸镁干燥，抽滤，浓缩至干，得化合物PF-2022(MW＝628，4.30g)，产率68％。MS(ESI,m/z):629.2[M+H]

实施例PF-2023：

甲基((1-苄基-3-((2-甲氧基-4'-(三氟甲氧基)-[1,1'-二苯基]-3-基)甲基)-5-((4-(三氟甲氧基)苄基)羟基)-1H-吲哚-6-基)甲基)-L-脯氨酸

25℃条件下，将PF-2022(MW＝628，6.28g，0.01mol)溶于1,4-二氧六环(50mL)中，加入叔丁醇钾(MW＝112，1.23g，0.011mol)，加入对三氟甲基氯苄(MW＝195，2.34g，0.012mol)。加料完毕，转移至90℃继续反应12小时。缓慢加入水(250mL)，析出白色固体，抽滤，烘干，得白色固体PF-2023(MW＝786，4.36g)，产率55％。MS(ESI,m/z)：787.2[M+H]

实施例PF-2024：

(R)-((1-((1-苄基-3-((2-甲基-4'-(三氟甲氧基)-[1,1'-二苯基]-3-基)甲基)-5-((4-(三氟甲氧基)苄基)羟基)-1H-吲哚-6-基)甲基)四氢吡咯-2-基)-λ

25℃条件下，将PF-2023(MW＝786，0.786g，0.001mol)溶于甲醇(10mL)中，加入氢氧化钠(MW＝40，0.044g，0.0011mol)，加入水(MW＝18，1.8g，0.10mol)。加料完毕，转移至70℃继续反应12小时。以6N盐酸调节pH＝6.5，浓缩至干，得白色固体。白色固体水洗(5mL×2)，抽滤，烘干，得化合物PF-2024(MW＝772，0.693g)，产率55％。MS(ESI,m/z)：771.2[M-H]

实施例PF-2025：

N-((1-苄基-3-((2,2'-二甲基-[1,1'-二苯基]-3-基)甲基)-5-羟基-1H-吲哚-6-基)甲基)-N-肌氨酸

0-5℃条件下，将PF-2013(MW＝417，41.7g，0.1mol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(200mL)中，加入肌氨酸(MW＝89，10.7g，0.12mol)，滴入甲醛水溶液(37％，MW＝30，9.7g，0.12mol)。滴加完毕，转移至25℃继续反应4小时。缓慢加入水(1000mL)，析出灰色固体，抽滤，烘干，得灰色固体PF-2025(MW＝518，33g)，产率76％。MS(ESI,m/z)：517.2[M-H]

实施例PF-2026：

N-((1-苄基-3-((2,2'-二甲基-[1,1'-二苯基]-3-基)甲基)-5-((4-(三氟甲基)苄基)羟基)-1H-吲哚-6-基)甲基)-N-肌氨酸

25℃条件下，将PF-2025(MW＝518，0.518g，0.001mol)溶于1,4-二氧六环(10mL)中，加入叔丁醇钾(MW＝112，0.246g，0.0022mol)，加入对三氟甲基氯苄(MW＝195，0.468g，0.0024mol)。加料完毕，转移至90℃继续反应12小时。反应液冷却至25℃，加入氢氧化钠(MW＝40，0.044g，0.0011mol)，加入水(MW＝18，1.8g，0.10mol)。加料完毕，转移至70℃继续反应12小时。以6N盐酸调节pH＝6.5，浓缩至干，得白色固体。白色固体以水洗涤(5mL×2)，以甲醇洗涤(5mL×2)，抽滤，烘干，得化合物PF-2026(MW＝676，0.096g)，产率14％。MS(ESI,m/z)：675.2[M-H]

测试实施例CD73抑制能力研究

胞外-5′-核苷酸酶/CD73购买自R&D systems(产品目录号5795-EN-010)；孔雀石绿磷酸盐检测试剂盒购买自R&D systems(产品目录号DY996)；AMP购买自西格玛(SKU包装尺寸，A2252-5g)；BioTek多功能酶标仪(SynergyHTX)用于OD值测量。

AMP储备液的制备：将0.0350g AMP(MW＝365.24)溶解于3mL二甲基亚砜中(难以溶解于水中)，以制备32mM AMP。用缓冲液将10μL AMP(MW＝365.24)储备液(32mM)稀释至1000μL的总体积。稀释溶液中AMP的摩尔浓度为320μM(0.32mM)。

CD73储备液的制备：每管CD73的质量(每管1.1μL)为500ng。将1000μL缓冲液添加到上述离心管中。将100μL混合物添加到另一个试管中，并添加900μL缓冲液。将10μL CD73溶液添加到96孔板中。每孔CD73的最终质量为0.5ng。

1.将空白缓冲液、二甲基亚砜和待测化合物添加到相应的孔中，以获得所需的最终浓度。最终反应体积为100μL。用90μL二甲基亚砜(5mM)稀释10μL待测化合物(50mM的二甲基亚砜溶液)。用990μL缓冲液稀释10μL该溶液，获得50μM待测化合物。继续稀释，以获得计算IC50所需的待测化合物的不同浓度。

2.将0.50ng CD73加入10μL缓冲液中。

3.将混合物在室温下培养20分钟。

4.向每个孔中添加10μL AMP溶液(320μM)，最终浓度为29μM。

5.混合物在室温下培养20分钟。

6.每孔加孔雀石绿试剂A 10μL。

7.混合物在室温下培养10分钟。

8.每孔加孔雀石绿试剂B10μL。

9.混合物在室温下培养20-60分钟。

10.在OD620读取信号。

本发明实施例化合物的生物化学分析结果如表1所示。

表1实施例化合物的生物化学IC

以上所述，仅为本发明的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，可轻易想到变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围之内。因此，本发明的保护范围应所述以权利要求的保护范围为准。