一种人血浆中沙格列汀含量的检测方法

技术领域

本发明涉及药物检测技术领域，具体为一种人血浆中沙格列汀含量的检测方法。

背景技术

随着我国经济的发展，人们的生活水平也在逐步提高，饮食条件则随之提高，糖尿病被称为富贵病之一，糖尿病的发病率也在逐年升高，全国约有1.14亿的糖尿病患者，糖尿病又分为两种，分别为Ⅰ型和Ⅱ型，其中Ⅱ型糖尿病约占90％以上，沙格列汀为二肽基肽酶-4的抑制剂，用于Ⅱ型糖尿病的治疗，单药治疗级配合其他降酶药物可显著改善糖化血红蛋白、空腹血糖级餐后血糖水平；沙格列汀能够有效改善老年糖尿病患者的心肌酶水平及肝肾功能，对与伴非酒精性脂肪肝的糖尿病患者也有很好的疗效。

在临床治疗过程中通常需要对患者血浆中沙格列汀的含量进行检测，因此需要一种人血浆中沙格列汀含量的检测方法对上述问题做出改善。

发明内容

本发明的目的在于提供一种人血浆中沙格列汀含量的检测方法，以解决上述背景技术中提出的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种人血浆中沙格列汀含量的检测方法，包括以下步骤：

S1，仪器与试剂、样本选择；

S2，溶液配制；

S3，人血浆样品处理；

S4，标准曲线样品制备。

优选的，所述步骤S1仪器与试剂、样本选择中，仪器包括高效液相色谱仪、分析天平、自动调配四元泵、高速离心机、真空干燥箱，试剂包括乙酸乙酯、二氯甲烷、水、缓冲液、乙腈、三氟乙酸，样本为人血浆样品。

优选的，所述步骤S2溶液配制：将乙酸乙酯、二氯甲烷按照体积比4:1混合制备成提取剂；将乙腈、三氟乙酸、水按照体积比82:18:0.1配制成流动相。

优选的，所述S3中人血浆样品处理的具体步骤包括如下：

1)实验人员将待检测用人血浆样品置于离心管中；

2)向离心管中加入内标溶液，之后再加入缓冲液；

3)使用涡旋混合器对离心管进行快速涡旋；

4)向离心管中加入步骤S2中配制的提取剂；

5)启动涡旋混合器对离心管进行快速涡旋混合，之后静置；

6)将离心管放置在高速离心机内进行离心处理；

7)使用胶头滴管吸取有机层另一个离心管内，并将离心管放置在真空干燥箱内真空干燥；

8)加入流动相液，之后快速震荡30s，保证所有的残渣完全溶解,之后以使用高速离心机进行离心，得到待测样品；

9)使用胶头滴管吸取上清液，滴加至试样瓶中，采用LC-MS/MS法测定待测样品中沙格列汀的含量，。

优选的，所述S3，人血浆样品处理中步骤3)快速涡旋时间为5s，涡旋转速为3000rpm。

优选的，所述S3，人血浆样品处理中步骤5)涡旋时间为2min，静置时间为1.5min。

优选的，所述S3，人血浆样品处理中步骤6)与步骤8)中高速离心机均以15000r/min的速度高速离心5min。

优选的，所述S3，人血浆样品处理中步骤7)中真空干燥机设定温度为44℃，烘干至离心管内部全干。

优选的，所述S3，人血浆样品处理中步骤9)中色谱及质谱条件为Eclipse plusC18柱，4.6X100mm，600bar，柱温：40℃，进样体积：5μL。

优选的，所述S4，标准曲线样品制备中取沙格列汀以乙腈溶液,溶解后定容，配制成浓度为1.00mg/mL的储备液，以乙腈：水体积比为3:1逐级稀释，得到混合标准系列工作溶液，使用人空白血浆稀释该工作溶液，制成标准曲线样品，以上述条件检测，并根据检测结果绘制相应的沙格列汀标准曲线。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：

本发明中，通过设置的整体步骤使得本方案的检测结果更加准确，进而使得本方案能够满足实际需求。

具体实施方式

下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例,基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

本发明提供一种技术方案：

一种人血浆中沙格列汀含量的检测方法，包括以下步骤：

S1，仪器与试剂、样本选择；

S2，溶液配制；

S3，人血浆样品处理；

S4，标准曲线样品制备。

实施例1：仪器与试剂、样本选择中，仪器包括高效液相色谱仪、分析天平、自动调配四元泵、高速离心机、真空干燥箱，试剂包括乙酸乙酯、二氯甲烷、水、缓冲液、乙腈、三氟乙酸，样本为人血浆样品，将乙酸乙酯、二氯甲烷按照体积比4:1混合制备成提取剂；将乙腈、三氟乙酸、水按照体积比82:18:0.1配制成流动相，实验人员将待检测用人血浆样品置于离心管中；向离心管中加入内标溶液，之后再加入缓冲液；使用涡旋混合器对离心管进行快速涡旋5s，涡旋转速为3000rpm；向离心管中加入步骤S2中配制的提取剂；启动涡旋混合器对离心管进行快速涡旋混合涡旋时间为2min，静置1.5min；将离心管放置在高速离心机内进行离心处理；使用胶头滴管吸取有机层另一个离心管内，并将离心管放置在真空干燥箱内，真空干燥机设定温度为44℃，烘干至离心管内部全干；加入流动相液，之后快速震荡30s，保证所有的残渣完全溶解,之后以使用高速离心机进行离心，得到待测样品；使用胶头滴管吸取上清液，滴加至试样瓶中，采用LC-MS/MS法测定待测样品中沙格列汀的含量，色谱及质谱条件为Eclipse plusC18柱，4.6X100mm，600bar，柱温：40℃，进样体积：5μL；取沙格列汀以乙腈溶液,溶解后定容，配制成浓度为1.00mg/mL的储备液，以乙腈：水体积比为3:1逐级稀释，得到混合标准系列工作溶液，使用人空白血浆稀释该工作溶液，制成标准曲线样品，以上述条件检测，并根据检测结果绘制相应的沙格列汀标准曲线。

实施例2：仪器与试剂、样本选择中，仪器包括高效液相色谱仪、分析天平、自动调配四元泵、高速离心机、真空干燥箱，试剂包括乙酸乙酯、二氯甲烷、水、缓冲液、乙腈、三氟乙酸，样本为人血浆样品，将乙酸乙酯、二氯甲烷按照体积比2:1混合制备成提取剂；将乙腈、三氟乙酸、水按照体积比80:20:0.1配制成流动相，实验人员将待检测用人血浆样品置于离心管中；向离心管中加入内标溶液，之后再加入缓冲液；使用涡旋混合器对离心管进行快速涡旋3s，涡旋转速为2000rpm；向离心管中加入步骤S2中配制的提取剂；启动涡旋混合器对离心管进行快速涡旋混合涡旋时间为0.5min，静置0.5min；将离心管放置在高速离心机内进行离心处理；使用胶头滴管吸取有机层另一个离心管内，并将离心管放置在真空干燥箱内，真空干燥机设定温度为50℃，烘干至离心管内部半干；加入流动相液，之后快速震荡10s，保证所有的残渣部分溶解,之后以使用高速离心机进行离心，得到待测样品；使用胶头滴管吸取上清液，滴加至试样瓶中，采用LC-MS/MS法测定待测样品中沙格列汀的含量，色谱及质谱条件为Eclipse plusC18柱，4.6X100mm，600bar，柱温：40℃，进样体积：5μL；取沙格列汀以乙腈溶液,溶解后定容，配制成浓度为1.00mg/mL的储备液，以乙腈：水体积比为3:1逐级稀释，得到混合标准系列工作溶液，使用人空白血浆稀释该工作溶液，制成标准曲线样品，以上述条件检测，并根据检测结果绘制相应的沙格列汀标准曲线。

实施例3：仪器与试剂、样本选择中，仪器包括高效液相色谱仪、分析天平、自动调配四元泵、高速离心机、真空干燥箱，试剂包括乙酸乙酯、二氯甲烷、水、缓冲液、乙腈、三氟乙酸，样本为人血浆样品，将乙酸乙酯、二氯甲烷按照体积比4:1混合制备成提取剂；将乙腈、三氟乙酸、水按照体积比82:18:0.1配制成流动相，实验人员将待检测用人血浆样品置于离心管中；向离心管中加入内标溶液，之后再加入缓冲液；使用涡旋混合器对离心管进行快速涡旋5s，涡旋转速为3000rpm；向离心管中加入步骤S2中配制的提取剂；启动涡旋混合器对离心管进行快速涡旋混合涡旋时间为2min，静置1.5min；将离心管放置在高速离心机内进行离心处理；使用胶头滴管吸取有机层另一个离心管内，并将离心管放置在真空干燥箱内，真空干燥机设定温度为10℃，烘干至离心管内部全干；加入流动相液，之后快速震荡30s，保证所有的残渣完全溶解,之后以使用高速离心机进行离心，得到待测样品；使用胶头滴管吸取上清液，滴加至试样瓶中，采用LC-MS/MS法测定待测样品中沙格列汀的含量，色谱及质谱条件为Eclipse plusC18柱，4.6X100mm，600bar，柱温：42℃，进样体积：3μL；取沙格列汀以乙腈溶液,溶解后定容，配制成浓度为1.00mg/mL的储备液，以乙腈：水体积比为3:1逐级稀释，得到混合标准系列工作溶液，使用人空白血浆稀释该工作溶液，制成标准曲线样品，以上述条件检测，并根据检测结果绘制相应的沙格列汀标准曲线。

综上所述，将实施例1、2和3中的结果与实施例1中的结果可得实施例1中的操作方法测得的结果更为准确，可满足实际需求。

尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。