一种用于提取软骨细胞的组织过滤方法

技术领域

本发明涉及医疗器械的应用领域，具体地，涉及一种用于提取软骨细胞的组织过滤方法。

背景技术

随着我国交通、体育事业的飞速发展和老龄化社会进程的加快迈进，关节软骨创伤、劳损、退行性病变的发生率逐年增加。软骨组织是一种无淋巴、无血管、无神经的结缔组织，因此软骨的再生和修复能力极其有限，一旦缺损几乎无法愈合。目前临床上治疗软骨损伤主要靠药物控制和移植手术，软骨组织工程是近年来的研究热点。自体软骨细胞是软骨细胞移植术的重要细胞来源和软骨组织工程最理想的种子细胞。

软骨组织主要由软骨细胞和细胞外基质(Ⅱ型胶原蛋白和聚糖蛋白)组成，软骨细胞是软骨组织中唯一的细胞类型，它埋藏在致密的糖蛋白软骨基质中，必须经过一系列酶消化，才能获得少量细胞。原代软骨细胞的提取步骤如下：

(1)将获取的软骨组织放入100mm无菌培养皿中，用含有1％PS的PBS浸润；

(2)用解剖刀将软骨组织切成1～2mm3的小块，用含有1％PS的PBS洗3次；

(3)去除PBS，加入0.25％胰蛋白酶37℃消化30min，1000rpm离心10min；

(4)去除上清液，加入0.2％胶原酶37℃消化5min，1000rpm离心10min；

(5)去除上清液，加入0.2％胶原酶37℃消化30min，1000rpm离心10min；

(6)去除上清液，加入0.2％胶原酶37℃消化90min，600g离心8min；

(7)弃上清，用F12培养基重悬细胞团，180g离心1min以去除未消化的残余软骨基质；

(8)收集上清液转移至培养瓶中，添加培养液，放入37℃、体积分数5％CO2培养箱中培养。

然而，在提取原代软骨细胞过程中，有多个步骤需要通过离心进行上清液的去除和收集，步骤繁琐，花费时间长，并且在转移至离心管的过程中容易导致污染。因此，急需一种可以用于消化软骨细胞并过滤软骨组织的装置以便省去多步离心，简化步骤和节约时间。

公开号为CN210916102U的发明专利公开了一种用于胎盘组织细胞消化过滤收集装置，其包括过滤器、收集器，过滤器设有手柄，搭设在收集器上方，收集器设有收集手柄，过滤器底面设有滤网，过滤器顶部设有顶盖，顶盖设有顶盖手柄。

这种用于胎盘组织细胞消化过滤收集装置虽然也可用于提取消化过滤软骨细胞，但由于过滤手柄的存在，过滤器只能搭设在收集器上方，过滤器内的组织不能更好地与消化液接触进行消化，会降低消化效果。而且该装置较为复杂，不便于操作，在收集和去除上清液的过程中，需要用手握住过滤手柄将过滤器取出，这样会增加细胞污染的风险，此外此装置的制作成本也较高。

发明内容

本发明的目的是提供一种成本低、操作方便且不易发生污染的用于提取软骨细胞的组织过滤方法。

为了实现上述目的，本发明提供一种用于提取软骨细胞的组织过滤方法，该方法在组织过滤装置中进行，所述组织过滤装置包括管状部、滤网和夹持部，所述滤网设置在所述管状部的一端并且覆盖位于所述管状部的一端的开口，所述夹持部设置在所述管状部的另一端的内壁上，所述夹持部设置为便于使用者使用相应的夹具夹持固定，

该方法包括：

(A1)将所述组织过滤装置置于无菌培养皿；

(A2)将待过滤分离的软骨组织转移至所述组织过滤装置中；

(A3)用夹持机构夹住所述组织过滤装置的夹持部以将所述组织过滤装置提起后转移至另一无菌培养皿中。

进一步地，在所述组织过滤装置中，所述夹持部为弧形连接筋，所述弧形连接筋的两端彼此间隔地连接于所述管状部的另一端的内壁。

进一步地，在所述组织过滤装置中，所述管状部为圆形管状部、方形管状部或者矩形管状部。

进一步地，在所述组织过滤装置中，所述夹持部为板状结构，所述板状结构所述管状部的另一端的内壁朝向所述管状部的中心轴线延伸。

进一步地，在所述组织过滤装置中，所述板状结构的上表面和下表面上一一对应地形成有夹持凹槽。

进一步地，在所述组织过滤装置中，所述滤网由尼龙制成。

进一步地，在所述组织过滤装置中，所述管状部与所述夹持部由塑料一体成型。

进一步地，在所述组织过滤装置中，所述滤网粘接或者热熔连接于所述管状部的一端。

进一步地，在所述组织过滤装置中，所述滤网的网格空隙小于1mm

在提取软骨细胞过程中，使用者可以使用相应的夹具(例如镊子)夹持本发明的组织过滤装置的夹持部，然后将本发明的组织过滤装置放入到相应的培养皿中或者将本发明的组织过滤装置从相应的培养皿取出，整个软骨细胞提取过程中没有用手接触本发明的组织过滤装置，从而本发明的组织过滤装置具有不易发生污染的优点，同时，本发明的组织过滤装置可以直接放置在相应的消化软骨组织的培养皿中，使得软骨组织可以更好地与消化液接触，增强消化效果，此外，本发明的组织过滤装置还具有结构简单、成本低和操作方便的优点。

本发明的其它特征和优点将在随后的具体实施方式部分予以详细说明。

附图说明

附图是用来提供对本发明的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与下面的具体实施方式一起用于解释本发明，但并不构成对本发明的限制。在附图中：

图1是根据本发明的具体实施方式的用于提取软骨细胞的组织过滤装置的立体图；

图2是图1中的用于提取软骨细胞的组织过滤装置的俯视图。

附图标记说明

1、管状部 2、滤网

3、夹持部

具体实施方式

以下结合附图对本发明的具体实施方式进行详细说明。应当理解的是，此处所描述的具体实施方式仅用于说明和解释本发明，并不用于限制本发明。

本发明提供一种用于提取软骨细胞的组织过滤方法，该方法在组织过滤装置中进行，具体地，如图1和图2所示，组织过滤装置包括管状部1、滤网2和夹持部3，滤网2设置在管状部1的一端并且覆盖位于管状部1的一端的开口，夹持部3设置在管状部1的另一端的内壁上，夹持部3设置为便于使用者使用相应的夹具(例如镊子)夹持固定。

在提取软骨细胞过程中，使用者可以使用相应的夹具(例如镊子)夹持本发明的组织过滤装置的夹持部3，然后将本发明的组织过滤装置放入到相应的培养皿中或者将本发明的组织过滤装置从相应的培养皿取出，整个软骨细胞提取过程中没有用手接触本发明的组织过滤装置，从而本发明的组织过滤装置具有不易发生污染的优点，同时，本发明的组织过滤装置可以直接放置在对应的消化软骨组织的培养皿中，使得软骨组织可以更好地与消化液接触，增强消化效果，此外，本发明的组织过滤装置还具有结构简单、成本低和操作方便的优点。

在本发明的用于提取软骨细胞的组织过滤装置中，具体地，如图1和图2所示，夹持部3为弧形连接筋，弧形连接筋的两端彼此间隔地连接于管状部1的另一端的内壁，从而使用者可以使用镊子夹持固定弧形连接筋来操作使用本发明的用于提取软骨细胞的组织过滤装置。

需要说明的是，夹持部3的具体结构形式并不仅限于以上具体形式，例如，夹持部3可以为板状结构(图中未显示)，板状结构从管状部1的另一端的内壁朝向管状部1的中心轴线延伸，板状结构的上表面和下表面上一一对应地形成有夹持凹槽(图中未显示)，从而使用者可以使用相应的夹具夹持板状结构上的夹持凹槽来操作使用本发明的用于提取软骨细胞的组织过滤装置。

需要说明的是，管状部1的具体结构形式可以根据消化软骨细胞用的培养皿的具体形状确定，例如，管状部1可以为圆形管状部、方形管状部或者矩形管状部，在附图的实施例中，管状部1为圆形管状部，这样当本发明的组织过滤装置放入到相应的圆形的培养皿中时，软骨组织与消化液之间的接触面积可以最大化。

需要说明的是，管状部1的具体大小可以根据消化软骨细胞用的培养皿的具体大小确定，只要管状部1可以放入到相应的培养皿中即可。例如，当培养皿是60mm培养皿时，管状部1的外径小于60mm，高度小于15mm。

在本发明的用于提取软骨细胞的组织过滤装置中，具体地，滤网2由尼龙制成，管状部1与夹持部3由塑料(例如聚丙烯)一体成型，滤网2粘接或者热熔连接于管状部1的一端，滤网2的网格空隙小于1mm

需要说明的是，管状部1、滤网2和夹持部3的具体材质均可以根据需要设置，这些均属于本发明的技术构思范围之内。当管状部1与夹持部3由塑料(例如聚丙烯)一体成型时，本发明的用于提取软骨细胞的组织过滤装置可以作为一次性无菌器械，单独包装一次性使用，管状部1与夹持部3也可以由不锈钢等其他材料制成，以便于重复利用。

以下将具体描述使用本发明的用于提取软骨细胞的组织过滤装置提取软骨细胞的过程：

(1)将获取的软骨组织放入100mm的第一个无菌培养皿中，用含有1％PS的PBS浸润，用解剖刀将软骨组织切成1～2mm

(2)将无菌的本发明的组织过滤装置取出放置于第二个含有1％PS的PBS的无菌培养皿内，将上述预处理后的软骨组织转移至本发明的组织过滤装置内，一手用无菌镊子夹住夹持部3将本发明的组织过滤装置提起，另一只手用移液枪吸去第二个培养皿内PBS，完成后再将内含软骨组织的本发明的组织过滤装置放回第二个培养皿内，用1％PS的PBS洗3次；

(3)操作同上，用镊子夹取本发明的组织过滤装置，去除PBS，加入0.25％胰蛋白酶37℃消化30min；

(4)用镊子夹取本发明的组织过滤装置，去除消化液，加入0.2％胶原酶37℃消化5min；

(5)用镊子夹取本发明的组织过滤装置，去除消化液，加入0.2％胶原酶37℃消化30min；

(6)用镊子夹取本发明的组织过滤装置，去除消化液，加入0.2％胶原酶37℃消化90min；

(7)用镊子夹取本发明的组织过滤装置，弃之，收集消化液，600g离心8min；

(8)弃上清，用F12培养基重悬细胞团，180g离心1min以去除未消化的残余软骨基质；

(9)收集上清液转移至培养瓶中，添加培养液，放入37℃、体积分数5％CO2培养箱中培养。

以上结合附图详细描述了本发明的优选实施方式，但是，本发明并不限于上述实施方式中的具体细节，在本发明的技术构思范围内，可以对本发明的技术方案进行多种简单变型，这些简单变型均属于本发明的保护范围。

另外需要说明的是，在上述具体实施方式中所描述的各个具体技术特征，在不矛盾的情况下，可以通过任何合适的方式进行组合，为了避免不必要的重复，本发明对各种可能的组合方式不再另行说明。

此外，本发明的各种不同的实施方式之间也可以进行任意组合，只要其不违背本发明的思想，其同样应当视为本发明所公开的内容。