七甲基碳菁染料-交联四环胺螯合剂偶联物、复合物及其用途

技术领域

本发明涉及七甲基碳菁染料-交联四环胺螯合剂偶联物技术领域，尤其是七甲基碳菁染料 -交联四环胺螯合剂偶联物、复合物及其用途。

背景技术

目前，现有技术中只有有限数量的诊断或治疗性放射性药物可用于肿瘤成像或癌症治疗。 成像只需极低浓度的放射性药物，例如用正电子发射断层扫描(PET)检测正电子发射体。 体内放射治疗是一种将放射源置于受试者体内进行癌症治疗的方法。体内放射治疗可能是全 身性的，即随血液进入全身组织来进行治疗，通过放射性金属附近的细胞所受到的辐射来杀 死癌细胞。放射性金属可以通过螯合或与多种螯合化合物络合，并与靶向配体偶合来传递。

目前，用于此类靶向放射治疗的放射性核素复合物主要是诊断性的，治疗应用有限。其 中，放射性核素复合物包括各种抗体、蛋白质和一些较小的化合物，特别是能够针对某些类 型癌症的多肽。将放射性核素和放射性金属用于肿瘤成像或向靶向癌症药物添加成像功能的 例子包括某些染料偶合物，即近红外(NIR)七甲基碳菁染料(HMCD)偶联物。这些被描述用于 靶向癌症药物治疗和成像，例如在“WO 2016106324”和“US 10307489”中，并且包括双偶 联染料-药物螯合剂偶联物，其中染料与a)抗癌药物吉西他滨以及b)成像基团偶合；一个 这样的成像基团是

已知放射性金属复合物的问题可能是体内(例如血液和/或血清)缺乏稳定性，这可能导 致性能不足，特别是在试图检测小的继发性肿瘤或转移时，成像性能和/或成像质量差(例如低 信号强度、高噪声、低信号/噪声比和/或分辨率)，以及低疗效和不必要的高辐射暴露，以及 相关的副作用和对非癌组织和器官的损伤。

铜放射性金属的具体问题包括由螯合剂或放射性金属或其组合介导的体内生物分布差和 /或稳定性差，这可能是由于铜从螯合剂离解和/或非靶组织结合引起的。一些螯合物会在非靶 组织如肝脏、肾脏或其他器官中滞留。

放射性化学物质的其它问题可能包括以下一个或多个：缺乏对一种或多种癌症治疗的适 用性、敏感性不足、对癌细胞的选择性不足、肿瘤与非癌组织之间随时间变化的对比度不足、 生物分布不足、肿瘤靶向性不足、组织和/或肿瘤穿透性不足，在肿瘤组织中分布不均匀，肿 瘤堆积率不足，在肿瘤中滞留不足，给药后从血液中清除缓慢，组织和器官的放射性照射不 高，重要器官如肾脏、肝脏、心脏等的清除率低,非目标组织或器官，特别是包囊组织，如 器官和致密组织，包括肿瘤组织，特别是钙化的肿瘤组织，在身体和器官包括心、肝、肺和 肾中缓慢建立稳态分布，在一个或多个器官包括肾和/或肝中持续存在放射性，与一种或多种 放射性金属没有形成稳定的复合物或难以形成稳定的复合物，复合物形成率低，与一种或多 种放射性金属的标记效率低，在水溶液中的溶解度不够，在水溶液中的稳定性低，在生理pH 值下的稳定性低，体内稳定性低，放射性金属与复合物的解离率高，尤其是体内解离率高， 肿瘤特异性靶向性慢，器官蓄积性高(如。如肾、脾、肝、心)，清除慢(如从血液、肝、 肾等器官中清除)，合成困难或成本高。

技术人员已尝试将各种靶向配体、螯合剂和放射性组合物用于成像、放疗或两者兼用， 包括将相同靶向配体配对的治疗方法。然而，靶向配体对其受体的亲和力已被发现强烈依赖 于所用的螯合剂和放射性金属，因此它们的疗效是不可预测的。类似的不可预测性适用于放 射性金属络合物的稳定性，因为保留放射性金属可能受到靶向配体、螯合剂或其组合的影响， 以及它们与所需放射性金属组合物的影响。

放疗往往比单纯的成像应用更具挑战性，因此通过放疗进行治疗的选择更为有限。需要 精心地将合适的放射性核素与合适的螯合剂和合适的靶向配体相结合，以提供所需的特性， 包括亲和力、稳定性和药代动力学。特定的放射性金属可能以特定的不同百分比发射一种或 多种类型的粒子或辐射物，对于合适的靶向，需要将载体与给定的放射性金属进行仔细地协 调，以保持复合物稳定，足以有效地破坏目标癌症，但到达目标位置时不会对身体其他部位 及其器官和组织造成附带辐射损伤。

有些疗法可以在一定程度上同时提供治疗和诊断成像，但为了提高每一种治疗方法的性 能，通常采用诊断试剂。“真正的”治疗诊断试剂是相同的配对，即具有相同的载体用于治疗 诊断放射性金属以摧毁肿瘤，并且采用成像放射性金属进行诊断和/或引导治疗。然而，螯合 剂和放射性金属都会影响重要的性能特征和药代动力学，因此，给定的载体可能无法为所需 的放射性金属组合提供具有合适特征、稳定性和有效性的相同配对。作为替代方案，如果结 合亲和力不存在临床显著差异，则可使用非相同配对来调整特征。

因此，能够提供诊断治疗功能的药剂或试剂往往缺乏真正的诊断功能或其他理想的特征， 即能够同时提供足够的治疗效果和足够高的成像灵敏度，并具有相似的药代动力学，以及可 避免的一般药代动力学，对癌细胞具有很强的毒性，但对非癌细胞的毒性很低。

放射性化学物质的一个具体问题是在某些器官(例如但不限于肾脏、肝脏等)中观察到 的强烈且持续的放射性定位，这影响了受影响器官区域的肿瘤可视性并限制了治疗潜力，如 肾或肝肿瘤和该区域的肿瘤定位。因此，有利于降低肾脏放射性水平，但不降低靶组织中的 放射性水平。放射性核素复合物也可能遇到肾脏近端小管的重吸收和/或放射性代谢物在细胞 中，特别是在肾细胞或其他器官细胞中不利的长时间滞留，这可能导致不希望的持续放射性。

因此，急需要提出一种七甲基碳菁染料-交联四环胺螯合剂偶联物，以适合体内应用的放 射治疗，包括有效性、稳定性和充分的肿瘤穿透性；以提供改善成像、改善治疗或两者兼而 有之的治疗诊断放射性药物。

发明内容

针对上述问题，本发明的目的在于提供七甲基碳菁染料-交联四环胺螯合剂偶联物、复 合物及其用途，本发明采用的技术方案如下：

七甲基碳菁染料-交联四环胺螯合剂偶联物，包括交联剂基团L和交联四环胺(CTC)螯合 剂残基R偶合的七甲碳菁染料(HMCD)基团，其分子式如FI所示：

其中，交联剂基团L由零个或一人或多个氨基酸残基组成；所述交联四环胺(CTC)螯合 剂残基R为CB-TE2A或DiAmSar或其衍生物组成的基团；所述交联四环胺(CTC)螯合剂残 基R与

一种采用七甲基碳菁染料-交联四环胺螯合剂偶联物的复合物，所述交联四环胺(CTC)螯 合剂残基R为CB-TE2A；所述交联剂基团L为连接DZ-1和螯合剂的赖氨酸残基；所述复合 物的分子式如FII所示：

一种采用七甲基碳菁染料-交联四环胺螯合剂偶联物的复合物，所述交联四环胺(CTC)螯 合剂残基R为DiAmSar；所述交联剂基团L为连接DZ-1和螯合剂的赖氨酸残基；所述复合 物的分子式如FIII所示：

一种七甲基碳菁染料-交联四环胺螯合剂偶联物的用途，采用一种或多种复合物作为赋形 剂以形成药物制剂。

一种七甲基碳菁染料-交联四环胺螯合剂偶联物的用途，采用一种或多种复合物作为试 剂，以给药形式对复合物进行重组。

一种七甲基碳菁染料-交联四环胺螯合剂偶联物的用途，采用分子式为FI的七甲基碳菁 染料-交联四环胺螯合剂偶联物进行成像。

进一步地，采用正电子发射层析成像或单光子发射计算机断层扫描进行成像，以检测

与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

(1)本发明巧妙地采用七甲基碳菁染料-交联四环胺螯合剂偶联物及复合物，其进一步 改进的成像和/或肿瘤检测、改进的肿瘤、癌症、转移灶和癌前病变的治疗方法、改进的图像 引导治疗以及改进的肿瘤、尤其是实体肿瘤的穿刺效果；

(2)本发明的复合物允许治疗很少或没有治疗选择的恶性肿瘤，尤其是小圆细胞肿瘤， 包括诸如尤文氏肉瘤(EWS)、神经母细胞瘤、小细胞肺癌、梅克尔细胞肿瘤和激素疑难前 列腺癌(HRPC)等肿瘤。

具体实施方式

为使本申请的目的、技术方案和优点更为清楚，下面结合实施例对本发明作进一步说明， 本发明的实施方式包括但不限于下列实施例。基于本申请中的实施例，本领域普通技术人员 在没有做出创造性劳动的前提下所获得的所有其他实施例，都属于本申请保护的范围。

实施例

本实施例涉及涉及近红外(NIR)七甲碳菁染料(HMCD)与螯合剂-放射性金属复合物的 偶联物，包括此类复合物的放射性药物配方及其用途，例如，在癌症内部放疗和/或成像中的 应用。具体而言，在实施例中，提供的是与可选交联剂L(DZ-L-(L)-CTC)合成的DZ-1- 交联四环胺(CTC)偶联物，其中CTC螯合剂与铜64(

在本实施例中，DZ-l-(L)-CTC-

铜-64(

使用作为β发射体的

在实施例中，提供了用于图像引导放疗的方法，其中这些复合物提供癌症放疗、癌症的 放射成像或两者兼有。同时，这些复合物被认为在肿瘤靶向、肿瘤缩小和/或杀灭癌细胞方面 足够有效，从而形成真正的治疗方法，即用一种(而不是一对)治疗剂便可同时提供诊断和治 疗，这是由于放射成像如PET具有高灵敏度。此外，染料的荧光可用于平行荧光监测。

在实施方案中，提供了选自CB-TE2A、DiAmSar或其衍生物组别的交联四环胺(CTC)螯 合剂的放射性金属复合物，选择性地通过交联剂如赖氨酸交联剂(见下文所示的分子式FI、FII 和FIII)与七甲胺碳菁染料(HMCD)DZ-1进行偶联而成，包含这些复合物的配方和用于配制这 些复合物的配方(例如在试管或组合中进行配制)，以及这些配方或复合物用于癌症放射治疗 的用途。本发明还涉及配制偶联物和复合物的方法，包括复合物的药物配方、使用偶联物、 复合物或药物配方的方法、对癌细胞、组织、肿瘤和/或其转移的成像和/或放疗的方法、用于 成像和/或放疗的配方组合等方法。此外，本发明包括用于体内复合物的非侵入性成像，特别 是PET或SPECT成像的组合物和相关方法。这些复合物可用于癌细胞和组织(包括实体瘤)的放射治疗。这些复合物，包括偶联以及由此产生的复合物，可能具有各种优点，其中包括 提高稳定性、降低毒性和/或增加对肿瘤的渗透性。

在实施例中，与DZ-1偶联的螯合剂是交联四环胺(CTC)，包括CB-TE2A和DiAmSar或其 衍生物。在不受理论约束的情况下，我们认为环胺，特别是交联环胺，当以偶联物形式存在 时，可能有助于其与铜-64产生的复合物具有更好的稳定性。稳定性的改善(例如在血清中)似乎并不为非交联环胺螯合剂如DOTA的偶联物所共有。

CB-TE2A是一种大环螯合剂，也称为1,4,8,11-四氮杂双环[6.6.2]十六烷-4,11-二乙酸，其 化学分子式为C

DiAmSar是一种大环螯合剂，也称为1,8-二氨基-3,6,10,13,16,19-六氮双环[65656]-二十碳 烷，其分子式为C14H34N8·5H2O(CAS#91002-72-1)。

螯合剂可通过其羧基残基末端，或合适的交联剂如赖氨酸残基直接与DZ-1进行偶联。另 外，其他合适的交联体可以包括烷基交联体，例如但不限于C2到C15，例如C2、C3、C4、C5 或更长的交联体，以及不同链长的聚乙二醇交联体，例如(PEG)n，其中n＝l-24，例如n＝2-24。 其他合适的交联体可包括氨基酸或多肽，例如一种或多种氨基酸多肽，例如多达2、3、4、5 或更多氨基酸连在一起。氨基酸在多肽中作为交联剂或作为其一种或多种成分使用。此类氨 基酸可选自丙氨酸(ala)、精氨酸(arg)、天冬酰胺(asn)、天冬氨酸(asp)、半胱氨酸(cys)、 谷氨酰胺(gin)、谷氨酸(glu)、甘氨酸(gly)、组氨酸(his)、异亮氨酸(ile)、亮氨酸 (leu)、赖氨酸(lys)、蛋氨酸(met)、苯丙氨酸(phe)、脯氨酸(pro)、丝氨酸(ser)、 苏氨酸(thr)中的一种或多种，色氨酸(trp)、酪氨酸(tyr)、缬氨酸(val)或其修饰物 或衍生物。氨基酸可以是脂肪族(例如丙氨酸、甘氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、脯氨酸、缬氨 酸)、芳香族(苯丙氨酸、色氨酸、酪氨酸)、酸性(天冬氨酸、谷氨酸)、碱性(精氨酸、组 氨酸、赖氨酸)或羟基(丝氨酸、苏氨酸)、含硫(半胱氨酸、蛋氨酸或酰胺(天冬酰胺、谷 氨酰胺)。优选的氨基酸可包括赖氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、半胱氨酸，优选的多肽可包括包 含赖氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、半胱氨酸中的一种或多种的肽。

下面列出了示例性染料交联体-螯合剂化合物，其中R是如本文所述的螯合剂，且n是1-20 (例如1-10或1-5，例如1、2、3、4或5)：

在实施方案中，提供了一种DZ1-(L)-CTC放射性金属复合物，该复合物包含七甲碳菁染 料(HMCD)基团，选择性地通过本文所述的交联体与CTC螯合残基R偶联，其中R选自CB-TE2A、DiAmSar或其衍生物组别，用于与

适于形成此类复合物的说明性DZ-1-(L)-CTC偶联物，如下分子式FI所示：

其中，交联剂基团L包含赖氨酸的任选交联体；所述交联四环胺(CTC)螯合剂残基R为 CB-TE2A或DiAmSar。

在实施例中，提供了一种DZ1-赖氨酸-CB-TE2A放射性金属复合物，用于与

在实施例中，提供了一种DZ1-Lys-DiAmSar偶联物，用于与

本实施例的复合物可提供一个或多个优点，包括形成具有较高稳定性的放射性金属复合 物，包括在血清中。此外，这些复合物可以提供一种有效的癌症治疗，即使是实体瘤也具有 低毒性和良好的肿瘤穿透性。特别是，这些复合物被认为能够提供真正的治疗试剂，在提供 高灵敏度成像的同时，能够提供两种高效放疗，从而允许在没有必要施用匹配的治疗配对的 情况下进行图像引导治疗。这些复合物还可提供以下一个或多个优点：通过PET或SPECT 探针和/或任选的近红外荧光(NIRF)进行更准确的定量分析，肿瘤与非癌组织的对比度较强， 灵敏度较高高，这对癌细胞，特别是在体内的选择性更好，在身体和器官(包括心脏、肝脏、 肺和肾脏)中快速稳态分布，肿瘤靶向性快，肿瘤组织中分布均匀，包括肾脏和/或肝脏在内 的一个或多个器官缺乏持续的放射性。此外，这些复合物可有利地更容易形成和/或成本更低， 可很容易地用用放射性金属进行标记，可以与一种或多种放射性金属形成稳定的复合物，可 具有较高的复合物形成率、高的放射性化学产率、具有一种或多种放射性金属的良好标记效 率、在水溶液中的良好溶解性，以及在水溶液中的高稳定性，在约7.4(例如7.2-7.6)的生理 pH下的高稳定性，体内的高稳定性，放射性金属与复合物的解离率低，特别是体内解离率低， 良好的生物分布，复合物对癌症组织的充分靶向性，快速的癌症特异性靶向，对于肿瘤和/或 转移瘤有充分的靶向性，对较大的肿瘤有足够的靶向性，器官蓄积率低(如肾脏、脾脏、肝 脏、心脏)，组织和器官没有或减少放射性暴露，给药后从重要或敏感器官(如从血液、肝脏、 肾脏和其他器官)的清除率快，充分穿透组织和肿瘤，充分穿透包封组织，例如器官，包括 致密组织，包括肿瘤组织，尤其是钙化肿瘤组织，改善和/或延长在肿瘤中的滞留时间。

特定元素同位素的放射化学产率是指放射化学分离的产率，以原来存在的活性的分数或 百分比表示。又称回收率。在辐射化学中，每eV吸收能量的辐射所转化的物种数：用符号G 表示，即G值。放射化学产率可按普通技术人员所能理解的方式确定。

除了与CTC螯合剂和

本实施了的复合物可以提供更高的肿瘤聚集率和/或快速的血液清除。在动物体内的分布 可显示其器官中有利的时间依赖性清除效果，同时在肿瘤中的特异性积聚(例如小鼠的异种 移植肿瘤，详见实施例6)。

如本文所述的复合物可提供改进的肿瘤吸收的百分比和/或速度，例如复合物FI、FII或 FIII(20微克/公斤)的注射剂量(ID)的百分比和在时间点(例如在4、8、16和/或24小时)的肿瘤 与血液之比来衡量，这对普通技术人员来说是显而易见的。

如本文所述的复合物可提供增加的剂量选择和更少的积累和/或改善器官的清除效果，包 括肾脏，肝脏和心脏中的一个或多个器官。肾脏等器官通常是放疗中的剂量限制性器官。吸 收剂量可以被测量，这对于本领域普通技术人员来说将是显而易见的，例如，约15格雷(Gy)或更小，如10、5、2、1格雷或更小。

如本文所述的复合物可向器官和/或软组织(例如肾、脾、肝)和/或血液毒性(例如血小 板减少症、中性粒细胞减少症)提供减少的吸收剂量。

如本文所述的复合物可以在较低的放射性量提供更好的抗癌效果。例如，可能需要小于 50μCi，又如小于20,20,5或2μCi。

如本文所述的复合物能够以足以治疗癌症和/或显著减少肿瘤体积(例如至少减少10,20, 30,40,50,60,70,80,90或100％)的剂量下保证降低毒性；从而降低LD50和/或器官毒性， 例如减少肾、脾、肝、骨髓、脑、心脏或肺毒性，和/或复合物可避免或改善治疗期间和治疗 后经常发生的体重减轻。

如本文所述的复合物可在足以治疗癌症和/或显著减少肿瘤体积的剂量下提供较低的毒 性，同时改善疼痛评分、骨痛评分和中位生存中的一种或多种。

如本文所述的复合物可以在减少的总剂量下提供足够的抗癌/抗肿瘤作用，例如小于250 kBq/kg，又如小于200,150,50和25kBq/kg。

如本文所述的复合物可以提供足够的疗效来治疗癌症和/或显著减少肿瘤体积，同时避 免一种或多种副作用，例如疼痛、头晕、恶心、对消化道的影响、胃痛、便秘、腹泻、脱发。

本文所述的复合物被认为对尤文氏肉瘤(EWS)治疗特别有效。EWS是一种恶性的骨和骨 外位置的小圆细胞肿瘤，有肺、肝、脑的转移瘤小圆细胞肿瘤。EWS的典型特征是标志性的 染色体t(11；22)易位和EWS-FL1融合，该肿瘤通常发生在年轻人(平均年龄15岁)中间， 一般对放疗和综合化疗有效。然而，当EWS扩散或复发时，尝试治疗大多不成功。

在实施例中，本文所述复合物可施与被诊断患有EWS和/或呈现与EWS相关的一个或多个 基因变异的受试者，用于成像、治疗或两者兼有，包括图像引导治疗。

但不仅限于此，EWS的典型基因变异包括几种可能的互换染色体易位之一，产生编码尤 文氏肉瘤断裂点区域1(EWSR1)的基因与编码E-二十六(ETS)转录因子家族成员的基因之间的 融合，其他的基因变异也存在，其中的一些变异在下文中进行说明。大约85～90％的病例可 能带有t(ll；22)(q24；ql2)的染色体易位，可导致EWSR1与编码弗林德氏白血病毒整合1(FL2)2 的基因融合。在大约四分之一的病例中，唯一可检测到的基因变异是染色体易位，由此产生 的融合蛋白可能负责基因转化。其他基因的突变包括但不限于STAG2和TP53。虽然绝大多数 的尤文氏肉瘤都含有EWS的融合蛋白，但约有1％的肿瘤带有牵连FUS或TAF15的染色体易位， 它们和EWS一样是RNA结合蛋白，其共同的结构是由一个内在紊乱的、低复杂度的、类似朊 病毒的富含SYGQ的N端激活区组成，然后是三个不同长度的富含精氨酸和甘氨酸(RGG)的 重复序列。RGG1和RGG2由一个87个氨基酸组成的RNA识别基团分开，RGG2和RGG3由一个 锌指结构区域分开。EWSR1不仅可以与编码ETS家族成员的基因共存，还可以与广泛的非ETS 基因共存，生成与多种软组织肿瘤发病机制有关的融合蛋白。这些包括但不限于 EWSR1-NFATC2、EWSR1-POUF1、EWSR1-PATZ1、EWSR1-SMARCA和EWSR1-SP3，它们可以引起罕 见的、未分化的圆细胞肿瘤，或者类似尤文氏肉瘤或被认为是尤文氏肉瘤。其他EWSR 1-非 ETS融合引起定义明确的实体肿瘤，包括但不限于DSRCT(EWSR1-WT1)、肌样脂肪肉瘤 (EWSR1-DDIT3)、清细胞肉瘤(EWSR1-ATF1)和骨外肌样软骨肉瘤(EWSRI-NR4A3)。不相关的染 色体易位，产生非FET-非ETS基因融合BCOR-CCNB329和CIC-DUX4,30可能会引起与尤文氏 肉瘤形态特征相似的肿瘤。这些肿瘤最初被归类为尤文氏肉瘤，但它们的发病机制和生物学 特性现在被认为与尤文氏肉瘤明显不同。例如，在ETS的27个成员中，至少有5个成员可与 EWS结合产生尤文氏肉瘤，这些成员包括但不限于FLⅡ、2ERG、32FEV、33ETV1、34和 E1AF35；在85～90％的病例中可发现FLⅡ。ETS因子也可能与多种癌症的发展有关，包括B 细胞前急性淋巴细胞白血病和前列腺癌。该家族的所有成员都有一个DNA结合域，可以识别 共识的核心5'-GGAA/T-3，DNA座，通常被称为ETS结合座。FLⅡ有两个ETS结合域，由FL Ⅱ特异性(FLS)序列分开。5r ETS域和FLS序列形成N端反激活域，其效力大大低于EWS N 端反激活域，在融合蛋白中被其取代。例如，在染色体易位后，FLU中含有3'ETS结合域的 部分与EWS融合后可能会发生构象变化，这可能使它比野生型FLI激活出更广泛的基因种类 EWS的典型基因变异包括几种可能的互换染色体易位，产生编码尤文氏肉瘤断裂点区 域1(EWSR1)的基因与编码E-26(ETS)转录因子家族成员的基因之间的融合。约85～90％的病 例带有染色体易位t(ll；22)(q24；ql2)，导致EWSR1与编码弗林德氏白血病病毒整合1(FLI1)2 的基因融合。在大约四分之一的病例中，唯一可检测到的基因变异是染色体易位，由此产生 的融合蛋白可能负责基因转化。其他基因的突变包括但不限于STAG2和TP53。

本文所述的复合物可用于成功治疗其他癌症的类型包括其他小细胞圆形肿瘤，包括但不 限于神经母细胞瘤，特别是儿童神经母细胞瘤、小细胞肺癌、默克尔细胞瘤，尤其是皮肤的 默克尔细胞瘤，神经内分泌分化型HRPC(NE-HRPC)。

从技术上讲，铜-64(

在实施方案中，本文所述的放射治疗可通过将此类治疗与正电子发射断层扫描(PET)或 SPECT配对和/或提供图像引导治疗来进行改进。另外，本文所述的复合物可仅用于成像或仅 用于治疗。PET检测正电子发射体如

在实施例中，放射治疗可在体内进行，即可在受试者体内提供放射源用于癌症治疗。内 部放射治疗可以全身性地进行，因此治疗在血液中传播到全身的组织中，以靶向方式通过靠 近放射性金属的细胞所受到的辐射杀死癌细胞。在实施例中，治疗可通过全身或局部/特定部 位给药，例如用于全身给药的口服或静脉注射，或通过局部注射或沉积，例如通过在可触及 肿瘤的近距离放射治疗中使用种子，这对于普通技术人员来说将是显而易见的。利用所提供 的稳定复合物，可将放射性金属以靶向方式递送至肿瘤和转移灶。

在实施例中，一种或多种放射性金属复合物可在协调的施用方案中施用。

在实施例中，可在一个或多个治疗时间间隔之前和/或期间进行成像，以提供图像引导治 疗。给药量、浓度、持续时间和给药形式将相应地调整，这对普通技术人员来说是显而易见 的。例如，成像可允许定位疑似肿瘤，例如在基因检测显示出基因变异和易感性之后，例如， 针对特定类型的癌症、肿瘤或肿瘤组别，例如，但不限于EWS。在肿瘤或癌症定位后，可以 是全身性的(例如通过IV或口服等系统性给药)或局限于肿瘤部位及其周围的局部给药(例 如通过局部注射)进行治疗。另外，成像和治疗可以在同一步中执行。或者，在治疗前和治 疗过程中，可以进行一次或多次成像，以监测肿瘤的发展和治疗后缩小。

在不希望受到理论约束的情况下，据信DZ-1-(L)-CTC偶联物与

如本文所述的复合物可在检测期间提供优质的成像，包括例如PET，尤其是更好的信噪 比、更强的信号和更好的分辨率中的一种或多种。

如本文所述的复合物可适用于各种大小的肿瘤，其效果包括肿瘤缩小，并可特别有效地 破坏体积小于例如约5至约0.1cm3或更小、例如约5cm3或更小、约4cm3或更小的小肿 瘤或转移瘤，约3cm3或更小、约2cm3或更小、约1cm3或更小、约0.5cm3或更小、约 0.1cm3或更小。在没有其他说明的情况下，肿瘤体积通常适用于体重约为140至200lb(例 如约170lb)的人类患者。在非人类受试者中，肿瘤体积的减少或增加取决于体重。优点可 包括显著减少或去除转移瘤、较高的吸收剂量和/或较低的组织穿透范围。

如本文所述的复合物，由于增加了稳定性和/或改善了肿瘤穿透性，也可特别有效地破 坏体积超过如约5cm

如本文所述的复合物可适用于各种大小的肿瘤，其效果包括肿瘤缩小。其优点可能包括 显著减少或去除转移瘤、较高的吸收剂量和/或较低的组织穿透范围。

在实施例中，正电子发射断层扫描(PET)可用于通过检测放射性金属衰变而产生的伽马 光子来提供目标组织内放射性金属分布的数据。高空间分辨率的普通PET扫描仪可以直观地 绘制放射性金属的衰变过程，从而提供反映了放射性金属复合物给药后体内的分布图像。这 种图像提供了解剖和功能信息，以帮助医疗诊断，并协助跟踪进展和调整放疗。

在实施例中，本文所指的癌症包括癌前和癌细胞或组织、肿瘤及其转移瘤、原发性和继 发性肿瘤。本文所述的偶联物和方法可特别适用于脑癌、脑肿瘤及其转移瘤。在不希望受理 论约束的情况下，据信CB-TE2A、DiAmSar或其衍生物与所述的DZ1和

在实施例中，经复合物治疗的癌症包括：脑癌、前列腺癌、肺癌、非小细胞肺癌(NSCLC)、 小细胞肺癌(SCLC)、胰腺癌、肾癌、淋巴瘤、结直肠癌、皮肤癌、肝癌和乳腺癌、鳞状细胞 癌肺癌、肛癌、头颈部上皮性肿瘤、骨癌、宫颈癌、皮肤癌、黑色素瘤、造血细胞癌、淋巴 瘤和骨髓瘤，或其任何一种转移瘤，包括但不限于发生在脑、骨骼或其他器官发生的转移瘤、 脑肿瘤或其转移瘤、脑肿瘤以及其脑、骨、肺或其他器官转移瘤、骨肿瘤或其脑、骨、肺或 其他转移瘤、前列腺肿瘤或其脑、骨、肺或其他转移瘤、前列腺肿瘤及其脑、骨、肺或其他 转移瘤、肺肿瘤及其脑、骨、肺或其他转移瘤等。

在实施例中，癌症可以是中枢神经系统(CNS)或脑瘤，或其转移瘤，包括：听神经瘤、 星形细胞瘤、脊索瘤、CNS淋巴瘤、颅咽管瘤、胶质瘤、胶质母细胞瘤、髓母细胞瘤、脑膜瘤、少突胶质细胞瘤、垂体瘤、原始神经外胚层瘤，神经鞘瘤、脑干胶质瘤、室管膜瘤、青 少年毛细胞型星形细胞瘤、视神经胶质瘤、松果体肿瘤、横纹肌瘤、成人低级(WHOⅠ或Ⅱ级)胶质瘤/毛细血管瘤、浸润性上树胶质瘤、再生胶质瘤/胶质母细胞瘤、成人颅内附睾瘤、成 人髓母细胞瘤、原发性中枢神经系统淋巴瘤、原发性脊髓肿瘤、局限性脑转移瘤、广泛性脑 转移瘤、脑膜上转移瘤和转移性脊柱肿瘤。

在实施例中，癌症可能是非小细胞肺癌，其选自鳞状细胞癌、腺癌(粘液囊腺癌)、大细 胞肺癌、横纹肌样癌、肉瘤样癌、类癌、涎腺样癌、腺鳞癌、乳头状腺癌、，巨细胞癌。另外， 该癌可能是小细胞肺癌，包括合并的小细胞癌。或者，该癌可能是非肺癌，包括肉瘤、淋巴 瘤、未成熟畸胎瘤和黑色素瘤。

在实施例中，提供包含放射性金属复合物或用于形成此类复合物的药物配方。该药物配 方可用于人类或兽类，且包含本发明的一种或多种偶联物或复合物(或其盐、溶剂化物、代 谢物或衍生物)与一种或多种医药上可接受的载体和/或一种或多种赋形剂和/或一种或多种 活性物质。一种或多种载体、赋形剂和/或活性剂可被选择，以便与制剂的其它成分相容，并 且对其接受者没有不适当的有害性。这样的载体在本领域中是已知的，并且对于本领域普通 技术人员来说这是很容易选择的。

在实施例中，化合物和药物配方的给药途径包括但不限于：口服(例如丸剂状)、静脉注 射(即注入受试者静脉中)、间质注射(即插入体内空间)、腹腔注射、皮下注射或肌肉注射， 和/或通过近距离放射治疗(将放射性植入物或种子直接插入受影响的组织，例如插入肿瘤部 位或其附近)。给药可以是全身性的(例如通过血液循环)或局部性的(例如定位到身体的特 定器官或其部分)。在一些实施例中，本发明的药物配方包含医药上可接受的赋形剂，该赋形 剂适于使该化合物或混合物可经由上述给药途径施用。

在实施方案中，可以将活性成分与常规的、药学上可接受的赋形剂或载体相掺合或复配。 给药方式，媒介物，赋形剂或载体通常应相对于活性剂基本上是惰性的，本领域普通技术人 员应了解这一点。这类方法、载体、赋形剂和载体的示例性是在，例如《雷明顿：药物科学 与实践》(2020)，ISBN-10：0128200073或《药物赋形剂手册》第九版(2020)，ISBN-10： 0857113755中描述的，其公开内容通过引用并入本文。赋形剂必须是“可接受的”，即与制 剂的其他成分相容且对接受者无害。

在实施例中，药物制剂可通过制药领域中任何公知的方法方便地以剂量单位提供。一般 而言，此类制备方法包括将制剂以适当形式呈递，例如形成水悬浮液。该剂型可任选地包含 一种或多种用于制剂的辅助剂或附属药物成分，例如混合物、缓冲剂和增溶剂。

根据本发明的一个实施例，药物制剂的肠外剂型(即绕过胃肠道的剂型)包括但不限于 准备注射的溶液、准备溶解或悬浮在医药上可接受的注射载体中的干燥产品，注射用悬浮液 和乳剂。此外，还可以制备控释肠外剂型，用于对患者给药，包括但不限于给药

在实施例中，可用于提供本发明化合物的肠外剂型的合适载体包括但不限于：无菌水； 注射用水USP；生理盐水溶液；葡萄糖溶液；水载体如但不限于氯化钠注射液、林格氏注射 液、葡萄糖注射液，葡萄糖和氯化钠注射液和乳酸林格氏注射液；水溶性载体如但不限于乙 醇、聚乙二醇和丙二醇；以及非水性载体如但不限于玉米油、棉籽油、花生油、芝麻油、油 酸乙酯、肉豆蔻酸异丙酯和苯甲酸苄酯。改动或修改本文公示的发明化合物之医药上可接受 盐的溶解度之化合物亦可并入本发明之肠外剂型中，包括常规及控释肠外剂型。。

在实施例中，用于肠外给药的制剂包括水性和非水性无菌注射溶液，其还包含额外的试 剂，如抗氧化剂、缓冲剂、抑菌剂和溶质，使制剂与目标接受者的血液等渗。该制剂可包括 水性和非水性无菌悬浮液，其包含悬浮剂和增稠剂。

在实施例中，可注射制剂，例如，无菌可注射含水或含油悬浮液可根据已知技术使用合 适的分散剂或润湿剂和悬浮剂配制。无菌注射制剂也可以是在无毒的母体可接受的稀释剂或 溶剂中的无菌注射溶液、悬浮液或乳液，例如，作为1，3-丁二醇中的溶液。可采用能接受 的载体和溶剂包括水、林格溶液、U.S.P.和等渗氯化钠溶液。另外，无菌固定油通常用作溶 剂或悬浮介质。为此，可以使用任何温和的固定油，包括合成单甘油三酯或双甘油三酯。此 外，脂肪酸如油酸用于制备注射剂。

在实施例中，适合口服给药的形式包括通过技术公认的程序制备的片剂、锭剂、胶囊、 酏剂、悬浮剂、含药糖浆、晶片或类似物。这种治疗上有用的组合物或制剂中活性化合物的 量是这样的，即会得到合适的剂量。糖浆制剂一般包括化合物或盐在液体载体如乙醇、甘油 或水中的悬浮液或溶液，并加入调味剂或着色剂。

在实施例中，用于口服给药的固体剂型包括胶囊、片剂、丸剂、粉剂和颗粒。在这种固 体剂型中，活性化合物与至少一种惰性物质混合，和/或a)填充剂或填充剂，例如淀粉、乳 糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和硅酸，b)粘合剂，例如羧甲基纤维素、藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯胶，c)保湿剂，例如甘油，d)崩解剂，如琼脂、碳酸钙、马铃薯 或木薯淀粉、海藻酸、某些硅酸盐和碳酸钠，e)溶液缓凝剂，如石蜡，f)吸收促进剂，如 季铵化合物，g)润湿剂，例如，十六醇和单硬脂酸甘油酯，h)吸收剂，例如高岭土和膨润 土，以及i)润滑剂，例如滑石粉、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、十二烷基硫酸钠及 其混合物。在服用胶囊、片剂和丸剂的情况下，剂型还可以包含缓冲剂。

在实施例中，类似类型的固体组合物可以采用乳糖或奶糖以及高分子量聚乙二醇等赋形 剂作为软质和硬质明胶胶囊的填充物。片剂、制剂、胶囊、丸剂和颗粒剂的固体剂型可以用 涂层和外壳如肠道涂层和药物配方技术中熟知的其它涂层来制备。它们可以选择性地含有不 透明剂，并且还可以具有这样的组成，即它们仅或优先在肠道的某一部分，选择性地以延迟 的方式释放活性成分。可使用的嵌入成分的实例包括聚合物质和蜡。类似类型的固体组合物 也可采用诸如乳糖或奶糖以及高分子量聚乙二醇等赋形剂作为软填充和硬填充明胶胶囊中的 填料。

在实施例中，活性化合物-偶联物或复合物可与一种或多种赋形剂如上所述呈微囊化形 式。片剂、制剂、胶囊、丸剂和颗粒剂的固体剂型可以用涂层和外壳如肠溶涂层、控释涂层 和药物配制技术中众所周知的其他涂层来制备。在这种固体剂型中，活性化合物可与至少一 种惰性稀释剂如蔗糖、乳糖和淀粉混合。这样的剂型还可以像通常的做法一样，此类剂型还 可包含除惰性稀释剂以外的附加物质，例如压片润滑剂和其他压片助剂，例如硬脂酸镁和微 晶纤维素。在制备胶囊、片剂和丸剂的情况下，剂型还可以包含缓冲剂。它们可以选择地包 含乳浊剂，并且还可以具有这样的组成，即它们仅或优先在肠道的某一部分，选择性地以延 迟的方式释放活性成分。可使用的嵌入成分的实例包括聚合物质和蜡。

在实施方案中，活性化合物、偶联物或复合物能以盐的形式存在，这可能特别适合用于 治疗癌症。本发明的盐类可根据给药途径、涉及的盐类和所治疗的癌症，以多种形式给患者 施用。例如，盐的水性组合物或悬浮液可通过注射给药，或通过注射或手术植入在所需部位 以药物基质的形式施用。例如，用于施用基质的特定技术可取决于所涉及基质的形状和尺寸。 在一些实施例中，将盐基本均匀地引入肿瘤中，以尽量减少肿瘤中冷(未治疗)区域的发生。 在某些实施例中，将盐与医药上可接受的载体组合施用。”医药上可接受之载体”是指可包含 于本发明组合物中且不会对患者造成重大不良毒理作用的赋形剂。如本领域普通技术人员将 明显看到的那样，可提供多种药学上可接受的载体或赋形剂，并可与本盐组合。

根据本发明的一个实施例，活性化合物偶联物或复合物的有效量、毒性和治疗效果可通 过标准制药程序在细胞培养物或实验动物中确定，例如，用于测定LD50(对50％人群的致死 剂量)和ED50(对50％人群的治疗有效剂量)。剂量可根据所用剂型和所用给药途径而变化。 毒性和治疗效果之间的剂量比是治疗指数，可表示为LD50/ED50之比。在一些实施例中，组 合物和方法表现出大的治疗指数。治疗有效剂量可通过细胞培养分析初步估算。此外，可在 动物模型中调配剂量以实现循环血浆浓度范围，该范围包括在细胞培养中或在适当的动物模 型中测定的IC50(即实现对症状的半最大抑制的本发明化合物的浓度)。例如，可以用高效 液相色谱法测定血浆中的浓度。任何特定剂量的影响都可以通过适当的生物测定进行监测。 剂量可由医生确定，并根据需要进行调整，以适应观察到的治疗效果。

在实施例中，本文所述的药物制剂的剂量可由医生确定，并根据需要进行调整，以适应 观察到的治疗效果。关于治疗的持续时间和频率，熟练的临床医生通常会对受试者进行监测， 以确定治疗效果，并确定是否增加或减少剂量、增加或减少给药频率、中止治疗、恢复治疗， 或者对治疗方案做其他改变。剂量计划/方案可以改变，例如，每周一次、每天一次或特定预 定间隔，这取决于许多临床因素，例如受试者对每种活性化合物的敏感性。

在实施例中，可向患者施用一次包含放射性金属复合物的组合物的有效剂量。或者，可 对患者重复施用包含放射性金属复合物的组合物的有效剂量。放射性金属复合物可以在一段 时间内施用，例如在5到60分钟的时间内，又如大约30分钟。如果有必要，可以定期重复 给药，例如每小时、每天、每两周或每周一次，例如在适当的时间间隔内，例如大约6,12, 24,48或72小时。在某些情况下，在最初的治疗方案后，可以减少治疗的频率。例如，初 次给药后，可以每周、每月、六个月或一年或更长时间重复给药一次。

在实施例中，药物配方中活性化合物、偶联物或复合物的量取决于重量、摩尔或体积。 在一些实施例中，药物配方包含至少0.0001％,0.1％,0.5％1％,2％,3％,4％,5％或10％的活 性物质。在一些实施例中，药物配方包含0.01％-99％的活性，例如0.05％-90％,0.1％-85％, 0.5％-80％,1％-75％,2％-70％,3％-65％,4％-60％或5％-50％的活性。

如本文所述的组合物的剂量可由医生确定，并根据需要进行调整，以适应观察到的治疗 效果。关于治疗的持续时间和频率，熟练的临床医生通常会对受试者进行监测，以确定治疗 治疗效果，并确定是否增加或减少剂量、增加或减少给药频率、中止治疗、恢复治疗，或者 对治疗方案做其他改变。给药计划可以根据一些临床因素而定，如受试者对本发明化合物的 敏感度，从每周一次到每天一次不等。

在实施例中，除了治疗需要治疗的受试者中的癌症(癌前或癌细胞和肿瘤)外，还需对 此类癌症进行识别、成像和/或定位。该方法可包括提供放射性金属复合物；将该复合物施用 于受试者；以及选择地执行成像，例如PET成像，以检测释放的发射体。这允许直观地跟踪 肿瘤生长和/或收缩，例如确认或个性化优化剂量，和/或确定肿瘤和/或转移瘤的位置。在各 种实施例中，可以例如在给药后约6到48小时内执行成像。成像可与正常组织/细胞进行比 较，以确定癌症/肿瘤组织与正常组织中不同的摄取率。

在实施例中，可在肿瘤或正常细胞或组织中进行原位药代动力学和药效学分析。该方法 可包括提供所述复合物；将其与癌细胞、肿瘤或正常细胞或组织接触；对癌细胞、肿瘤或正 常细胞或组织成像，随后进行药代动力学和/或药效学分析，例如确定信号(包括放射性和/ 或近红外荧光及其变化)，在一段时间内的一个或多个时间点随时间变化，例如给药前后，以 及给药后的一个或多个时间点。

在实施例中，提供了一种用于提供或制备包含放射性金属复合物的放射性药物制剂的药 物配方组合。一般而言，含有放射性药物制剂的非放射性金属成分的小瓶，通常为灭菌的、 验证产品的形式，在使用前添加适当的放射性物质或稀释适当的放射性物质。一种或多种药 物配方组合组分可以任选缓冲溶液的形式提供，或可提供用于溶解在任选的缓冲溶液中的方 式。例如，药物配方组合可以是单剂量或多剂量小瓶，并且放射性药物制剂可能需要额外的 步骤，例如但不限于煮沸、加热、过滤和/或缓冲。从药物配方组合中提取的放射性药物制剂 通常在制备后立即使用，例如在6-24小时内，如在制备后约12小时内。

药物配方组合还包括常规药物配方组合组件，例如用于注射组合物的针头、一个或多个 用于混合组合物组件的小瓶等，这对于普通技术人员来说是显而易见的。此外，在药物配方 组合中包括说明书，作为插入物或标签，说明成分的数量、成分的混合指南和给药方案。

药物配方中采用复合物的浓度和/或施用给患者或受试者的量可以变化，这取决于多种因 素，例如，包括所用的特定复合物和/或药物上可接受的载体、所治疗的特定疾病，疾病的程 度，病人的年龄大小和体重等等。通常，复合物可用于所述药物配方中，并且组合物可给患 者提供最初较低水平的辐射剂量，所述辐射剂量可增加直至达到所需的治疗效果。一般而言， 复合物可用于包含水载体的药物配方中，以提供绝对放射性浓度，其范围在约4mbq/ml(约 0.1mci/ml)或更小到约370mbq/ml(约10mci/ml)，以及其中范围的所有组合和子组合。在 实施例中，药物配方中络合物的浓度可为约37MBq/ml(约1mCi/ml)至约370MBq/ml(约 10mCi/ml)。此外，组合物可向患者施用剂量，其范围在约1KSv(约1x105Rem)到约74KSv (约7.4MRem)，以及其中范围的所有组合和子组合。在实施例中，可向患者施用所述组合 物以提供约7.4KSv(约7.4x105 Rem)至约74KSv(约7.4MRem)的辐射剂量。这些量在 本文中称为有效量或治疗有效量。在实施例中，医药上可接受的载体还应包含增稠剂。

增稠剂是指各种一般亲水性材料中的任何一种，当其并入本组合物中时，可作为粘度调 节剂、乳化剂和/或增溶剂、悬浮剂和/或增强剂。可适于在本放射性药物配方中使用的增稠 剂包括，例如明胶、淀粉、树胶、果胶、酪蛋白和藻胶，包括卡拉胶、褐藻胶和琼脂、半合 成纤维素衍生物、聚乙烯醇和羧乙烯基化物、膨润土、硅酸盐和胶体二氧化硅。其他增稠剂 对普通技术人员来说是显而易见的。

增稠剂的浓度可在每毫升药物配方约0.1毫克(mg)到约500毫克(mg)的范围内。在某些实施例中，增稠剂的浓度可为约1至约400mg/ml，例如约5至约300mg/ml，例如约 10至约200mg/ml，例如约20至约100mg/ml，或例如约25至约50mg/ml。可从复合物、 医药上可接受之载体及任选增稠剂制备的组合物包括如悬浮液、乳液及分散液。在一些实施 例中，可以将复合物配制并作为悬浮液施用于患者。

悬浮液可能是指液体中细微分散的胶体颗粒的混合物、分散体或乳液。例如，可通过将 络合物与惰性固体载体材料结合来获得悬浮液。可适于用作本发明组合物中的惰性固体载体 的颗粒载体材料包括，如衍生自碳的材料，包括通常称为炭黑(油烟)和/或活性炭的那些形 式的碳，以及细粉末氧化物、硅藻土，硅藻土。在一些实施例中，支撑材料包含炭黑或活性 炭。颗粒载体材料的颗粒的大小可以变化且取决于如所使用的特定载体材料、复合物、增稠 剂等，并且可以包括大小范围为，例如从约0.1微米(mm)到约50mm的颗粒，例如，颗粒 大小可以从约0.5到约25mm，例如，从大约1毫米到大约10毫米，例如从大约2毫米到大 约5毫米。

复合物的治疗有效活性的递送可通过施用包含该复合物的治疗有效活性或剂量的药物配 方来获得，即根据本文所述的方法，以足以引起所需治疗或成像效果的浓度进行递送。有效 治疗活性可以是有效治疗癌症的活性，例如抑制或减缓癌症或癌前组织的生长，或降低癌症 或癌前细胞的存活率。治疗有效剂量因病人而异，并取决于病人的病情和给药途径。根据受 试者的体重、性别、年龄和病史的不同而变化。影响有效剂量的其他因素可包括但不限于患 者病情的严重程度、正在治疗的疾病或紊乱、复合物的稳定性，以及(若适用)与复合物一 起施用的任何额外抗肿瘤治疗剂。确定疗效和剂量的方法是普通技术人员已知的。

实施例1：DZ-1-(L)-CTC螯合剂偶联放射性金属复合物的合成

DZ-1染料及其衍生物的合成已在前面进行了描述，例如在US 10307489中描述过，现将 其全部并入本文，并可如下文实施例1a中详细描述的那样进行操作。然后，如实施例1b所 述，偶联物可与放射性金属络合。可使用以下化学品和试剂。

CTC螯合剂CB-TE2A和DiAmSar可从Macrocyclics公司(德克萨斯州普莱诺)购买。本文提及的所有其他化学品，可以从各种标准来源购买，例如VWR国际公司(Radnor，PA) 或赛默飞世尔科学公司(Waltham，MA)，这对于普通技术人员来说是显而易见的。去离子 超纯水(18.2MQ)可用于制备溶液，该溶液可从密理博公司(美国马萨诸塞州比勒里卡)的Milli-Q直接超纯水系统获得。分析反相(RP)高效液相色谱(HPLC)可在安捷伦系统上进行，例如使用1260无限二极管阵列检测器，以及使用阿波罗C18 RP柱(5μm，150x4.6 mm) 进行操作。例如，流动相可以从60％溶剂A(例如，在80％水中的0.1％三氟乙酸)和40％溶剂 B(例如，在80％乙腈水溶液中的0.1％三氟乙酸)在例如约30分钟的时间段内以约1ml/min的流速在例如约254nm和约780nm处监测下变为100％溶剂B。电喷雾电离质谱(ESI-MS) 分析可用于表征合成的化合物，例如在Thermo TSQ Fortis Triple Quadrupole质谱仪系统上进行。

DZ-1可以合成，例如如下所述，它直接与CTC偶联，或者，可以使用交联剂将DZ-1与CTC(例如赖氨酸交联剂)结合，例如形成DZ-1-Lys-CB-TE2A，，另外，DZ-1可直接与 一个CTC结合。所得的DZ-1-(L)-CTC偶联物无论是否有交联剂L，都可用来进行

下面所示的方案1说明了形成DZ-1-(L)-CTC偶联物合成的第一步，显示了染料化合物4 的合成，在此也称为“DZ-1”；对于普通技术人员来说，其它合成路线将是显而易见的。

方案1，化合物4(DZ-1)的合成:

化合物1a的合成(比较上述方案1)：可将2,3,3-三甲基吲哚(5g，31.4mmol)和1,4-丁烷磺酸内酯(5.1g，37.7mmol)的混合物在氩气下于120℃搅拌加热5小时。将所得的反 应混合物冷却至室温(例如约20℃)，并可以将固体溶解在足够体积的溶剂中，例如和有机 溶剂，例如约50毫升甲醇。可将约200毫升的乙醚加入到甲醇溶液中进行沉淀，并收集沉 淀物，用足够体积和足够次数的乙酸乙酯(例如15毫升，三次)进行洗涤，并干燥，例如在 真空下干燥，以得到所需的产物6.8g(产率73％)，为白色固体。

化合物1b的合成(比较上述方案1)：向6-溴己酸(2.5g，13.0mmol)中添加2，3， 3-三甲基吲哚啉(2.5g，15.7mmol)。将反应混合物在充分升高的温度下搅拌加热，例如在 保护气体(例如氩气)下，在约110℃加热8小时。所得暗红色固体可溶解于50ml甲醇中。 可添加150ml乙醚。将沉淀物过滤并用乙醚(例如15ml，三次)洗涤足够的次数，然后用 丙酮(例如15ml，三次)洗涤足够的次数。所得产物为白色固体(2.7g，58％)。

化合物3的合成(比较上述方案1)：向1a(2g，6.78mmol)和化合物2(3g，8.36mmol)在乙醇(100ml)中的混合物中添加醋酸钠(0.28g，3.39mmol)，所得混合物可在足够的温度和持续时间下加热，例如在约60℃加热约18小时。可过滤沉淀物并用冷乙醇充分洗涤(例如20ml，三次)。产品可在真空下干燥，得到所需的深蓝色固体产品3(2.1g，产率58％)。 质谱(ESI)525.19[M+H]+。

化合物4的合成，这是一种七甲碳菁染料，在此也称为DZ-1(比较上面的方案1)：向1b(0.67g，1.9mmol)和化合物3(1.0g，1.9mmol)在EtOH(20ml)中的混合物中， 可添加醋酸钠(156mg，1.9mmol)，所得溶液可加热至回流足够的时间，例如3小时。然 后可将混合物进行沉淀，如将100毫升冰水倒入药物配方组合中。可将固体过滤并从甲醇- 水中结晶，得到所需的深绿色固体物4(0.99g，产率74％)。质谱(ESI)705.31[M+H]+。

下面的方案2显示了与合适的交联剂基团偶合的染料的合成偶合，这里是DZ-1-Lys：

DZ-1-Lys的合成(比较上述方案2)：将DZ-1 4(200mg，0.28mmol)溶于5ml无水二氯甲烷中。可添加氯甲酸乙酯(ClCOOC2H5)(46mg，0.42mmol)和三乙胺(57mg，0.57 mmol)。可将混合物搅拌足够时间(例如约2小时)，然后可添加足够体积(例如2ml DMF)的N-α-Boc-Lys 5(70mg，0.28mmol)，并再搅拌足够时间(例如室温(RT)下约2小时)。 粗材料可在冷二乙醚(40ml)中沉淀。离心足够的时间和转速(例如，在约3500rpm下约5 分钟)，能够回收可纯化的固体，例如，通过C18-RP硅胶色谱法在碳酸氢氨水溶液(20mM)中用乙腈洗脱，得到所需产品DZ-1-(N-α-Boc)-Lys，其为深绿色固体109mg(42％)。DZ-1- (N-α-Boc)-Lys可溶解于三氟乙酸(95％)5ml中，且可充分搅拌该混合物，例如在环境温 度下搅拌约3小时，例如在室温下(约20℃)下搅拌。可添加足量的乙醚，例如40ml。可 将悬浮液离心足够时间以实现分离，从而实现倾析乙醚。可将产品干燥，例如在高真空下放 置足够的时间，例如过夜。所得产品6可用于下述步骤而无需进一步纯化。

实施例2：DZ-l-L-CTC偶联物的合成

下面的方案3说明了合成DZ-l-L-CTC的一种选择，这里是DZ-1-赖氨酸-CB-TE2A8：

DZ-1-(L)-CTC，此处为DZ-l-赖氨酸-CB-TE2A 8的合成和放射性标记(比较方案3)。 可将适当形式的四氯化碳(此处为CB-TE2A)，例如其盐之一，如盐酸盐，与适当数量的二 异丙基碳二亚胺(DIC)和二异丙基乙胺(DIEA)，或三乙胺(Et

以下方案4说明了制备

放射性标记和制备

实施例3：不含交联剂的DZ-l-CTC偶联物的合成

以下方案5说明了不含交联剂的DZ1-CTC的合成，这里是DZ-1-DiAmSar：

DZ-l-DiAmSar的合成(比较方案5)：将适量的DZ-14(例如约50mg，0.071mmol)、二异丙基碳二亚胺(DIC)(例如约13.5mg，0.11mmol)以及羟基苯并三唑(HOBt)(例如约11.5mg，0.085mmol)的混合物溶解于适宜量的DMF(例如约2ml DMF)中。将该混合物 搅拌充分使其完全溶解和混合，例如约30分钟，然后添加CTC(此处为DiAmSar·5H2O 10(29mg，0.071mmol))，并搅拌充分使其反应，例如在室温下搅拌约5小时。可在适当体积 的介质中和在适当的低温下使产物沉淀，例如冷的二乙醚(例如约40ml)。将沉淀物分离，例 如在适当的高转速下以适当的时间离心，例如在大约3500rpm下离心约5分钟。沉淀的粗产 物可通过合适的方法，例如通过C18-RP半制备色谱法进行纯化，所得DZ-1-DiAmSar 11，呈 深绿色固体。

以下方案6说明了DZ-l-CTC(这里是DZ-1-DiAmSar)的放射性标记和

对于放射性标记，一般来说，可向DZ-1-(L)-CTC偶联物中添加适当的放射量和MBq/μg 比例的放射性金属，这对于普通技术人员来说是显而易见的。例如，其比例可达200MBq/μg (放射性金属：偶联物)，大约按4至100MBq/μg或约8至50MBq/μg，例如约20MBq/μg 的比例加入。例如，可将100MBq(2.7mCi)的

例如，可通过向0.1N乙酸铵(pH 5.5)缓冲液中的5μg DZ-1-(L)-CTC中添加约100MBq (2.7mCi)的

实施例4:DZ-l-(L)-CTC-

本文所述复合物的血清稳定性可按以下方法测定。将适量的例如50微居里本文所述的 DZ-1-(L)-CTC-

实施例5：检测

为了确定放射性金属复合物在体内的稳定性或缺乏稳定性，可进行凝胶电泳测定，以检 测分离和检测放射性核素发射的SOD或任何其他蛋白质，这对普通技术人员来说是显而易见 的。如果复合物是不稳定的，在解离时，

实施例6：用DZ-l-(L)-CTC-

在给有需要的受试者给药之前，本文所述的染料CTC复合物的特异性和肿瘤组织渗透 性都可以通过任何合适的常规方法来确定，包括如PET/CT成像、使用合适的动物模型等， 这对于普通技术人员来说是显而易见的。例如，哺乳动物模型，例如小鼠模型，特别是具有 感兴趣的癌症的异种移植哺乳动物模型，可用于通过成像，特别是PET成像来测试偶联物。 可以使用其他哺乳动物模型，这对于普通技术人员来说是显而易见的(例如大鼠、兔子、狗、 猴子等)。

小动物PET成像(即在小动物身上进行的PET成像)可按普通技术人员显而易见的方式 进行。PET(或microPET)可用于成像和/或治疗或两者兼有，以提供图像引导治疗。在不受 理论约束的情况下，相信由于其稳定性、清除率、有效性和有利的药代动力学的复合物能够 提供足够的肿瘤摄取率和器官清除率，以便进行成像和治疗。可根据成像/治疗调整剂量，也 可以一个剂量同时适用于成像和治疗。

DZ-1-(L)-CTC-

血液清除率和器官分布(例如，但不限于：肝脏、肾脏、血液、骨、骨髓、脑)可按以下方式确定。麻醉后(例如通过注射异氟烷2-3％)，例如一组5只小鼠，可以注射一种或多种

图像配准和分析可按以下方式进行。PET/CT图像可以按照标准协议进行处理，这对于普 通技术人员来说是显而易见的，例如按照制造商指南使用标准软件，例如使用ASIPro

如本文所述的

实施例7:DZl-(L)-CTC-

尤文氏肉瘤(EWS)细胞系和体内模型可用于测试对EWS的疗效，特别是对播散性或复发性EWS的疗效。

为了评估DZ1-(L)-CTC-

随后，皮下肿瘤大小约

或者，DZ1-(L)-CTC-

肿瘤特异性靶向可通过一种或多种方法来确定，例如：1)近红外荧光肿瘤成像以检测 肿瘤中DZ-1部分的积聚；2)SPECT/CT核成像在同一肿瘤中，和/或3)PET成像(见文所述的PET)。PET和SPECT成像可确定较高的清除率和更好的信噪比，并允许图像引导治疗。肿瘤大小可定期检测，例如每日或每周一次或两次，使用适当的方法，如使用卡尺、数字卡尺，并且肿瘤体积可按以下公式计算：体积＝1/2(长x宽x宽)。为了监测潜在毒性，可以测量体重。当肿瘤体积超过1500mm3或体重减轻超过原重量20％时，可对小鼠进行安乐死。 与DZ1-L-DOTA-

实施例8：前列腺癌的图像引导治疗

4–6周龄的雄性裸鼠可皮下接种人类前列腺癌细胞，例如C4-2B(也称为

可将小鼠保存适当长的时间，例如2周，以便肿瘤形成至约100mm3的体积。注射用探 针溶液将在无菌磷酸盐缓冲盐水(PBS)中制备(探针DZ-1-Lysine-CTC-

作为第一可选步骤，如本文所述的复合物可如本文所述施用以检测原发性肿瘤，和/或可 用于检测其任何残余转移瘤或继发性肿瘤，如通过手术切除原发性肿瘤后进行。

治疗和/或成像可以平行或随后对第一和/或一个或多个继发性肿瘤，或使用本文所述的 复合物的第一和/或一个或多个继发性肿瘤的转移，任选地对残余转移/肿瘤进行平行检测/ 成像，并任选地随后进行第一或进一步的肿瘤治疗，或者在已经进行第一肿瘤治疗的情况下， 进行第二或进一步的肿瘤治疗和/或通过成像进行图像引导的放疗/检测转移/继发性肿瘤。如 本文所述的复合物对于前列腺癌的成像、治疗和/或图像引导治疗尤其有利，包括改善的血清 稳定性、降低毒性和显著减少转移性骨肿瘤的形成。

实施例9：脑肿瘤(包括胶质母细胞瘤)的影像引导治疗

为确定肿瘤抑制效果和/或动物存活率和/或体重等，可基本上按照上文实例2所述进行实 验。例如，为了评估肿瘤抑制效果，裸鼠可皮下接种人脑癌细胞(例如神经母细胞瘤、星形 细胞瘤或胶质母细胞瘤细胞，可从ATCC公开获得，例如但不限于CRL-2271、CRL-2268、 CRL-7674和CRL-7514(神经母细胞瘤，人类)；HTB-12、HTB-13、HTB-14、HTB-17、CRL-7769， CRL-7903(星形细胞瘤，人)、HTB-15、HTB-16、CRL-2611、CRL-11543、CRL-11544(胶质母 细胞瘤，人类))。随后，皮下肿瘤大小为～100mm3的裸鼠可随机分为若干组(例如，每组n＝5只小鼠)。为了评估对动物生存的疗效，可通过在裸鼠颅内接种人类脑癌细胞(例如，ATCC 公开的神经母细胞瘤、星形细胞瘤或胶质母细胞瘤细胞)来确定治疗效果、疗效和毒性。接 种一周后，将受试小鼠随机分为若干组(例如，每组n＝5只小鼠)

用于注射的探针溶液可在无菌PBS缓冲液中制备。可通过静脉注射(通过尾静脉)给小 鼠注射成像探针(PBS体积，例如100–150μl)，用于采血、探针生物分布、荧光和PET成像，例如通过小鼠尾静脉，例如在吸入麻醉(氧气中含2％异氟醚)下使用注射器(如1/2ccU-100胰岛素注射器)注射。放射性剂量，也被称为探针，可以是DZ-1-(L)-CTC

一个或多个治疗给药(可选地在一个或多个成像步骤给药之前或之后)通常可按照上文 实施例5所述进行，并进行以下调整：注射用探针溶液可在无菌PBS缓冲液中制备。小鼠可 使用成像探针(PBS体积100–150μl)进行血液采集、探针生物分布、荧光和PET成像，例 如通过静脉注射，例如通过小鼠尾静脉，例如在麻醉(氧气中2％异氟醚)下使用注射器(例 如1/2cc U-100胰岛素注射器)注射。

在第一步中，接种在皮下空间中的脑瘤，可选择地在使用本文所述的

同样，在患有颅内脑肿瘤的动物中，可以用本文所述的

本文所述的复合物对于胶质母细胞瘤的成像、治疗和/或图像引导治疗尤其有利，包括例 如提高血清稳定性，同时保持穿过血-脑-屏障的能力以提高动物存活率

上述实施例仅为本发明的优选实施例，并非对本发明保护范围的限制，但凡采用本发明 的设计原理，以及在此基础上进行非创造性劳动而作出的变化，均应属于本发明的保护范围 之内。