含积雪草提取物、银耳提取物、木糖醇和脱水木糖醇的组合物在制备抗氧化剂的应用

技术领域：

本发明涉及化妆品技术领域，尤其涉及含积雪草提取物、银耳提取物、木糖醇和脱水木糖醇的组合物在制备抗氧化剂的应用。

背景技术：

人体在正常的生理代谢过程中，受光照、粉尘、辐射、紫外线、空气污染、油炸食物及压力等影响会产生大量活性氧自由基(ROS)。在一定条件下，自由基可导致DNA碱基的损伤、DNA链的断裂等反应。如羟基自由基通过氢抽提、加成和电子转移等引起DNA碱基损伤，超氧阴离子自由基与NO反应产生的ONOO

人体对自由基的清除通常是一个平衡的状态，抗氧化酶以及非酶类代谢系统能维持机体自由基产生和消除的动态平衡。抗氧化酶系统主要由超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化酶(GSH-Px)等酶类物质构成，使体内的活性氧自由基变成活性较低的物质，削弱它们对肌体的攻击力。当ROS的积聚量无法与人体清除自由基的能力抵消的时候，平衡就会被打破。随着年龄的不断增长，人体自身酶的活性会降低，修复自由基的能力下降。所以，我们需要借助吸收更多的酶和抗氧化物来增强对自由基的防御能力，修补自由基对身体造成的损伤，即抗氧化。

积雪草提取物含有大量三萜类化合物，例如积雪草苷、羟基积雪草苷、积雪草酸和羟基积雪草酸等。通过上调抗氧化酶活性，降低基质金属蛋白酶9表达、促进成纤维细胞消除ROS，从而达到抗氧化的功效；

银耳提取物的主要有效成分为银耳多糖，具有很好抗氧化性和抗敏的作用。银耳提取物在化妆品通常作为保湿剂使用，被称为“植物透明质酸”。可以降低细胞内ROS含量，显著增加过氧化氢酶、超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶等抗氧化物质的活性，对-OH、DPPH和O

木糖醇是一种天然的糖醇类物质，源自于芬兰的天然野生白桦树皮，有很好的生物稳定性，由于其分子较大，不易渗透皮肤，并且能够吸附空气中的水分，因此能够增加皮肤的含水量，改善干燥缺水问题，同时还能够减少水分流失，通常被用作保湿剂。

发明内容：

本发明的目的是提供含积雪草提取物、银耳提取物、木糖醇和脱水木糖醇的组合物在制备抗氧化剂的应用。

本发明是通过以下技术方案予以实现的：

含积雪草提取物、银耳提取物、木糖醇和脱水木糖醇的组合物在制备抗氧化剂的应用，按总质量百分比为100％计，所述组合物包括如下组分：木糖醇5-10％，脱水木糖醇20-30％，积雪草提取物2-6％，银耳提取物40-50％，水余量。

优选的，按总质量百分比为100％计，所述组合物，包括如下组分：木糖醇5-8％，脱水木糖醇23-30％，积雪草提取物3-6％，银耳提取物44-49％，水余量。

最优选的，按总质量百分比为100％计，所述组合物，包括如下组分：木糖醇5％，脱水木糖醇30％，积雪草提取物6％，银耳提取物44％，水余量。

木糖醇没有明显的抗氧化性，但申请人意外发现在积雪草提取物、银耳提取物中加入木糖醇、脱水木糖醇后，其组合物的抗氧化活性显著增加。申请人发现积雪草提取物、银耳提取物、木糖醇和脱水木糖醇以一定的比例混合后在抗氧化方面产生协同增效作用，能够强效清除DPPH自由基、羟基自由基、超氧阴离子自由基，提高可以使体内的活性氧自由基活性变低的超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化酶(GSH-Px)等酶类物质的活性。

上述组合物的制备方法，包括以下步骤：

1)将积雪草和水充分混匀，40MPa、250℃下提取得到积雪草提取物；

2)将木糖醇、脱水木糖醇、银耳提取物充分混匀，转入高压微射流均质机中，进行均质，得到混合液；再加入步骤1)得到的积雪草提取物溶液，开启搅拌，充分混匀；混匀后再次转入高压微射流均质机中，循环进行5次以上均质，过滤，得到组合物。

优选的，所述高压微射流均质机采用Y形交互型均质腔，操作压力为1000-1500bar。

本发明还保护所述组合物在制备护肤品的应用。所述组合物的添加量为0.2wt％-3wt％；所述护肤品为精华液、防晒乳、面膜、润肤膏霜、洁面乳、化妆水、润肤乳液中的一种。

本发明具有如下有益效果：

1)本发明组合物中积雪草提取物、银耳提取物、木糖醇和脱水木糖醇四者在抗氧化方面具有协同增效作用，能协同高效清除DPPH自由基、羟基自由基、超氧阴离子自由基，并能提高超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化酶(GSH-Px)的活性，使体内的活性氧自由基变成活性较低的物质，延缓肌肤老化；降低MMPs的表达和活性，从而减少皮肤胶原蛋白和透明质酸的降解，减少基质金属蛋白酶1表达，从而抑制胶原降解；还可以通过逆转H

2)本发明组合物成分来源于天然植物，接近自然，更适合人体的吸收和代谢，减少了对人体的不良影响。

附图说明：

图1是实验1中超氧阴离子自由基清除率图；

图2是实验2中羟基自由基清除率图。

具体实施方式：

为了使本发明的目的、技术方案和有益技术效果更加清晰，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解的是，本说明书中描述的实施例仅仅是为了解释本发明，并非为了限定本发明，实施例的参数、比例等可因地制宜做出选择而对结果并无实质性影响。

以下实施例各组分如无特殊说明，均为使用常规方法制备或市购。

实施例1

一种抗氧化的组合物，由以下成分均匀混合而成：木糖醇0.68g、脱水木糖醇2.56g、积雪草提取物0.48g，银耳提取物4.50g，水1.78g。

实施例2

一种抗氧化的组合物，由以下成分均匀混合而成：木糖醇0.77g、脱水木糖醇2.39g、积雪草提取物0.31g，银耳提取物4.82g，水1.71g。

实施例3

一种抗氧化的组合物，由以下成分均匀混合而成：木糖醇0.50g、脱水木糖醇3.00g、积雪草提取物0.60g，银耳提取物4.40g，水1.50g。

对比例1

一种抗氧化的组合物，由以下成分均匀混合而成：木糖醇0.50g、脱水木糖醇3.00g，水6.50g。

对比例2

一种抗氧化的组合物，由以下成分均匀混合而成：积雪草提取物0.60g、水9.40g。

对比例3

一种抗氧化的组合物，由以下成分均匀混合而成：银耳提取物4.40g，水5.60g。

对比例4

一种抗氧化的组合物，由以下成分均匀混合而成：木糖醇0.50g、脱水木糖醇3.00g、积雪草提取物0.60g，水5.90g。

对比例5

一种抗氧化的组合物，由以下成分均匀混合而成：木糖醇0.50g、脱水木糖醇3.00g、银耳提取物4.40g，水2.1g。

对比例6

一种抗氧化的组合物，由以下成分均匀混合而成：积雪草提取物0.60g、银耳提取物4.40g，水5.00g。

对比例7

一种抗氧化的组合物，由以下成分均匀混合而成：木糖醇0.42g、脱水木糖醇1.83g、积雪草提取物0.70g，银耳提取物5.40g，水1.65g。

实验1超氧阴离子自由基清除实验

实验原理：超氧阴离子自由基是一种与人体密切相关的有害自由基，它们攻击生物大分子，使其交链或断裂，引起细胞结构和功能的破坏。邻苯三酚在碱性条件下迅速自氧化并产生超氧阴离子自由基0

测试样品：实验组为实施例1-3以及对比例1-7的组合物添加到普通精华液外用基质(蓖麻油0.10g、甘油1.50g、对羟基苯乙酮0.10g、霍霍巴油0.70g、黄原胶0.02g、EDTA二钠0.01g、柠檬酸0.03g和水7.54g混合)中制备成的抗氧化精华，添加量为3.0wt％；阳性对照组为维生素C。

实验方法：在10ml的比色管中分别加入4ml(0.05mol/L)pH8.2的Tris-HCl缓冲液，置于25℃水浴中预热20min，然后加入25℃水浴中预热20min的样品液1ml，再加入在25℃水浴中预热20min的0.2mmol/L邻苯三酚溶液1ml，混匀后在25℃水浴中反应4min，立即用浓HCl两滴终止反应，并在325nm处测定吸光度。每管做三个重复，取平均值A

清除率＝{[(A

A

从图1可以看出，实施例1-3的组合物浓度在3.0wt％时的超氧阴离子自由基清除率达到88％以上，说明本发明的组合物有很好的清除超氧阴离子的效果。使用对比例1、对比例2和对比例3的组合物后，超氧阴离子自由基清除率分别为6.3％、21.5％和26.8％，三者的清除率总和远小于实施例3。使用对比例1和对比例6的植物提取组合物后，超氧阴离子自由基清除率分别为6.3％和47.2％，两者的清除率总和小于实施例3。使用对比例2和对比例5的植物提取组合物后，超氧阴离子自由基清除率分别为21.5％和26.3％，两者的清除率总和小于实施例3。使用对比例3和对比例4的植物提取组合物后，超氧阴离子自由基清除率分别为26.8％和22.3％，两者的清除率总和小于实施例3。以上对比说明积雪草提取物、银耳提取物木糖醇和脱水木糖醇四种成分在清除超氧阴离子自由基方面具有协同增效作用，且和维生素C对超氧阴离子自由基的清除活性在同一数量级水平。

实验2羟基自由基清除实验

实验原理：Fenton反应产生羟自由基:H

测试样品：与实验1的测试样品相同。

实验方法：在10mL比色管中依次先加入1ml 10mmol/L的FeSO

清除率＝[1-(A

A

从图2可以看出，实施例1-3的组合物浓度在3.0wt％时的羟基自由基清除率达到91％以上，说明本发明的组合物有很好的清除羟基自由基的效果。使用对比例1、对比例2和对比例3的组合物后，羟基自由基清除率分别为3.1％、18.9％和25.4％，三者的清除率总和远小于实施例3。使用对比例1和对比例6的植物提取组合物后，羟基自由基清除率分别为3.1％和59.6％，两者的清除率总和小于实施例3。使用对比例2和对比例5的植物提取组合物后，羟基自由基清除率分别为18.9％和31.8％，两者的清除率总和小于实施例3。使用对比例3和对比例4的植物提取组合物后，羟基自由基清除率分别为25.4％和19.2％，两者的清除率总和小于实施例3。以上对比说明积雪草提取物、银耳提取物、木糖醇和脱水木糖醇四种成分对清除羟基自由基具有协同增效作用，效果显著，且和维生素C的对羟基自由基的清除活性在同一数量级水平。

实验3SOD、GSH-Px酶活性变化测定

测试样品：实施例1-3、对比例1-7的组合物。

实验方法：SPF级雄性小鼠4周龄80只，体质量16-20g，小鼠饲养环境温度为22-24℃，湿度为40-50％，每日明暗交替各12h。小鼠自由摄食饮水，适应两周后随机分为12组：空白对照组、阴性对照组、实验组(10组)，每组8只。分组后，空白对照组每天按体质量腹腔注射0.01mL/g生理盐水，其他组小鼠每天按体质量腹腔注射同体积0.01mL/g D-半乳糖。同时，实验组小鼠每天分别灌胃0.01mL/g同体积检测样品(均稀释至100mg/ml)，阴性对照组和空白对照组灌胃同体积生理盐水，连续8周。

取小鼠血液样本离心(4℃、5000g)分离血清，按试剂盒说明书操作步骤测定血清中的SOD、GSH-Px活性(试剂盒均购自南京建成生物工程研究所有限公司)。具体测试结果如表1。其中酶活性变化值＝实验组酶活-阴性对照组酶活

表1SOD、GSH-Px酶活性测定及变化值

从表1可以看出，本发明的组合物实施例1-3的SOD活性变化值达到33以上，GSH-Px活性变化值达到42以上，表明组合物能显著提高SOD、GSH-Px的酶活性。使用对比例1、对比例2和对比例3组合物的小鼠体内SOD酶活性变化值分别为0.1、5.5和14.6，三者总和远小于实施例3；GSH-Px酶活性变化值分别为0.0、8.3和19.1，三者总和远小于实施例3。使用对比例1、对比例6组合物的小鼠体内SOD酶活性变化值分别为0.1、和17.6，GSH-Px酶活性变化值分别为0.0、28.4，两者的酶活性变化值总和小于实施例3。使用对比例2、对比例5组合物的小鼠体内SOD酶活性变化值分别为5.5、和13.2，GSH-Px酶活性变化值分别为8.3、22.6，两者的酶活性变化值总和小于实施例3。使用对比例3、对比例4组合物的小鼠体内SOD酶活性变化值分别为14.6、和5.8，GSH-Px酶活性变化值分别为19.1、5.7，两者的酶活性变化值总和小于实施例3。

以上对比说明积雪草提取物、银耳提取物、木糖醇和脱水木糖醇四种成分在提高超氧化物歧化酶以及谷胱甘肽过氧化酶活性方面具有协同增效作用，效果显著。