一株金黄杆菌及其促进山药组培种苗生长的应用

技术领域

本发明属于农业微生物领域，具体涉及一株有效促进山药组培种苗生长的金黄杆菌(Chryseobacterium aahli CS-LD15)及其应用。

背景技术

Chryseobacterium aahli是拟杆菌门金黄杆菌属下一种革兰氏阴性菌，目前，尚无中国专利对该菌株进行过报道，其功能特征及在农业领域内的应用研究十分缺乏，对植物生长影响的研究也尚未开展。

山药为薯蓣科植物薯蓣的地下块茎，含有维生素、蛋白质、淀粉、游离氨基酸等多种营养成分，以及多糖、多酚类化合物、皂苷、尿囊素等多种功能性活性成分，具有抗氧化、降血脂、调节肠道菌群、增强机体免疫等多种生理作用，广泛应用于功能性食品、保健品和药品等行业。山药在我国种植面积较广，品种多样。但山药在种植过程中往往通过芦头及零余子进行无性繁殖，长期的营养繁殖及病毒侵染等易造成种性退化，阻碍了山药产业的可持续发展。加之，山药繁殖育苗过程中还存在占地面积大、劳动强度大等问题，使得通过组织培养技术进行山药种苗的培育需求激增。

山药组培苗虽然方便、节省人力物力但其移栽后田间易出现存活率偏低，叶片数、叶片长宽等生长指标不够理想等问题，影响育苗质量。因此，本发明专利利用从健康山药植株根系中筛选到的功能型微生物金黄杆菌，研究了其对山药组培种苗生长的影响，为山药组培种苗的工厂化培育技术提供技术保障，最终为山药产业的可持续发展提供支持。

发明内容

本发明的目的在于针对生产实践中的实际问题和需求，提供一株有效促进山药生长的金黄杆菌。

本发明的另一目的是提供该植物促生菌的应用。

本发明的目的可通过以下技术方案实现：

一株金黄杆菌CS-LD15，所述金黄杆菌CS-LD15的分类命名为金黄杆菌(Chryseobacterium aahli)，该菌株于2023年2月20日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保存编号为CGMCC NO.26596。

本发明所述的金黄杆菌CS-LD15在促进山药组培苗生长中的应用。

本发明所述的金黄杆菌CS-LD15制备的菌剂。

作为本发明的一种优选，所述的菌剂通过以下方法制备得到：将所述的金黄杆菌CS-LD15单菌落接种于LB液体培养基中，置于30℃、170r min

作为本发明的进一步优选，所述的金黄杆菌CS-LD15单菌落为将所述的金黄杆菌CS-LD15甘油菌种在1/10TSB固体培养基上划线活化，置于30℃培养箱中过夜培养长出的菌落。

本发明所述的菌剂在制备山药育苗添加剂中的应用。

一种促进山药苗生长的方法，向移栽后的山药苗育苗基质中接入发酵后的功能微生物菌剂，其接种比例为10％(100ml/g基质干重)，共浇菌两次，每次间隔10天。

作为本发明的一种优选，在温室完成两次浇菌后继续培养一段时间，将所有盆栽移至田间大棚再进行一次浇菌处理。

本发明所述的金黄杆菌CS-LD15在山药组培苗移栽驯化过程中的应用。

本发明所述的菌剂在山药组培苗移栽驯化过程中的应用。

本发明所述的应用效果如下：

本发明首次筛选到一株能够促进山药种苗生长的金黄杆菌CS-LD15。与添加清水对照相比，在向每g基质(干重)中添加2×10

附图说明

图1菌株照片及其分类发育树图

图2第一次接种不同菌株处理对温室内山药组培苗生长(叶片长宽、叶际凹陷深、宽)的影响注：小写英文字母为不同功能菌株处理之间差异(p＝0.05)。(下同)

生物材料保藏信息

CS-LD15，分类命名Chryseobacterium aahli，该菌株于2023年2月20日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，保存编号为CGMCC NO.26596。

具体实施方式

以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。

若无特别说明，以下实施例中所用原料如下：

菌种：所述的金黄杆菌由南京农业大学资源与环境科学学院土壤微生物与有机肥团队于健康山药植株根际土壤筛选得到而保存，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏日期为2023年2月20日，保存编号为CGMCCNO.26596。

普通育苗基质：是用进口泥炭和椰糠为主要原料，并添加天然矿物质和腐殖酸有机肥以及生物发酵和无害化处理后所制得的普通育苗基质，该基质由江苏兴农基质科技有限公司生产提供，也可通过购买方式获得。

实施例1、功能菌株的分离及鉴定

称取5g健康山药植株的根际土壤，置于装有45ml无菌水的三角瓶内(瓶内含有4-6颗玻璃珠)，30℃、170r min

通过筛选最终获得一株金黄杆菌命名为CS-LD15，菌株在TSB固体培养基上生长较快，菌体呈短杆状，色黄。菌株16s rDNA序列构建的系统发育树分析表明，菌株CS-LD15位于Chryseobacterium aahli分支上，将CS-LD15归类为Chryseobacterium aahli，将其保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保存编号为CGMCC NO.26596，其他处理菌株也为同时筛选出来分别为CT-KT9、CT-LH25。

固体培养基配方：TSB培养基，即胰蛋白胨大豆肉汤培养基(1L)：胰蛋白胨大豆肉汤30g，去离子水定容至1L，20g琼脂粉，115℃灭菌30min。

1/10TSB培养基是将TSB培养基用清水进行10被稀释制得。

液体培养基配方：LB培养基(1L)：蛋白胨10g、酵母粉5g、NaCl 10g，去离子水定容至1L，115℃灭菌30min。

实施例2、功能菌株的液体扩繁培养

将从健康山药植株根际土壤中分离得到的金黄杆菌CS-LD15甘油管从-80℃冰箱中取出置于冰上，用无菌接种环在甘油管内的冰渣上蘸一下，随后在1/10TSB固体培养基上划线活化，置于30℃培养箱中过夜培养，待菌落长出以后，将单菌落接种于LB液体培养基中，置于30℃、170r min

实施例3、功能菌在山药组培种苗培育上的促生试验

准备上述的普通育苗基质以及塑料盆，每盆装取基质350g备用，供试组培苗为在组培室生根培养基上培养60d左右，后在温室中打开组培瓶盖炼苗3天，待基质与组培苗完全准备完成后，将涨势相似以及根系完好的组培苗根部培养基清理干净，并在无菌水中冲洗根系，将组培苗移栽至装好基质的塑料盆中，待移栽完毕后，浇水至塑料盆中，且保证盆中水分含量保持在65％-70％之间。

上述移栽至塑料盆中的山药苗共设置T1(CK)、T2(CT-KT9)、T3(CT-LH25)和T4(CS-LD15)四个处理，在移栽后的山药苗稳定生长10天后，接入发酵后的功能微生物菌剂，其接种比例为10％。共浇菌两次，每次间隔10天。每次浇菌完成后十天针对山药的一些生长指标进行测定，同时进行第二次浇菌。在温室完成两次浇菌后继续培养一段时间，将所有盆栽移至田间大棚再进行一次浇菌处理，后续测定山药的各种生长指标(均测定山药从上至下第三片新叶)。由图2可知，第一次浇菌完成培育10天后，相比对照处理，浇金黄杆菌(Chryseobacterium aahli CS-LD15)T4处理对山药各项生长指标均有显著的差异，由表1和表2可知，第二次浇菌完成培育10天后，添加山药功能菌剂T4处理各项指标均显著高于对照处理，其中T2、T3处理叶片长、宽，叶基凹陷深、宽相比CK也有增加但无差异,山药苗移至田间大棚浇菌处理后，添加山药功能菌T4处理的山药苗叶片长度、叶片宽度均显著高于空白对照。经过三次浇菌处理后山药苗生长指标的测定，我们发现在基质中浇山药功能菌剂处理T4山药的各项生长指标均显著优于CK处理。该结果对本发明山药功能菌T4(CS-LD15)在山药组培苗在基质中移栽驯化具有重要的指导意义。

表1第二次接种不同菌株处理对温室内山药组培苗生长(叶片长宽、叶际凹陷深、宽)的影响

表2第三次次接种不同菌株处理对温室内山药组培苗生长(叶片长宽、叶际凹陷深、宽)的影响